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4 - Estequiometría - 2024

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Unidad 3:

Estequiometría del crecimiento microbiano y


formación de productos
Comenzaremos con el estudio del crecimiento de microorganismos cuyo
cultivo se lleva a cabo en medio líquido, específicamente enfocados en el
aspecto estequiométrico del crecimiento microbiano.

El estudio de la “estequiometría del crecimiento microbiano”


permitirá:

1. Formular adecuadamente un medio de cultivo (ej. saber que


cantidad de C, N, S, etc, se necesita para producir determinada
cantidad de biomasa o de producto.

2. Calcular rendimientos teóricos y experimentales.

3. Realizar balances de materia y energía y comprobar la


consistencia de los datos experimentales.

4. Calcular cuanto calor se produce en la reacción.


2
En el biorreactor se produce el crecimiento
microbiano (formación de biomasa) y la producción
de los productos de la fermentación (metabolitos
microbianos).
Ecuación del crecimiento microbiano

Un bioproceso puede describirse en forma sencilla como


una reacción química.

En una reacción química común se tienen sustratos y productos.

Ej. aA +bB → c C + d D + calor


Sustratos Productos

La estequiometría expresa las relaciones cuantitativas entre las sustancias


que intervienen en una reacción química (reactivos y productos).
En un bioproceso, los sustratos son los nutrientes que el microorganismo
necesita para crecer (reproducirse) y mantenerse vivo.

El microorganismo requiere un medio de cultivo


que contenga:
➢Fuente de carbono y energía (FCE).
➢ Fuente de nitrógeno (FN). Los que serán los
➢ Oxígeno (si es aeróbico). sustratos de la
➢ Macronutrientes (P, S, K, Mg). reacción
➢Micronutrientes (Ca, Fe, Mn, Co, Cu, Zn, etc.).
➢ Factores de crecimiento (aa, vitaminas).
Como consecuencia del crecimiento celular se genera:

➢ Biomasa (lo representaremos con la letra X gbiom.seca/L).


➢ Productos ligados al metabolismo energético, como lo son Productos
el CO2 y H2O en un metabolismo puramente oxidativo. de la
➢ Compuesto orgánico en un metabolismo fermentativo reacción
(alcohol, ácido orgánico, etc).
Ecuación del crecimiento microbiano: Modelo de caja negra

A pesar de que existen miles de reacciones intracelulares, consideraremos


al microorganismo como una caja negra y solo tendremos en cuenta los
componentes que entran y salen de la célula.

Además, considerando únicamente aquellos componentes del medio de


cultivo que se encuentran en mayor cantidad y se consumen en forma
notoria, se puede escribir el siguiente esquema del crecimiento
microbiano:

Biomasa
rx
FCE rs
Esquema del Producto
crecimiento celular rp
rN Cel.
según el modelo de
caja negra. Fte de N CO2 + H2O

O2
Q
Biomasa
rx
FCE rs
Producto

rN Cel. rp

Fte de N
CO2 + H2O

O2
Q

En base al modelo de caja negra, el crecimiento microbiano aerobio


se puede representar mediante la siguiente reacción química para
procesos aerobios:

FCE + FN + O2 → Biomasa + producto + CO2 + H2O + calor

En esta ecuación no se incluyen compuestos como las vitaminas y minerales del


medio de cultivo, los que se agregan y consumen en tan pequeñas cantidades que
su contribución a la estequiometría es despreciable (aunque son importantes para el
crecimiento).
Debemos plantear la ecuación de crecimiento microbiano, obtenida a partir
del Modelo de Caja Negra, teniendo en cuenta las fórmulas moleculares de
los sustratos (nutrientes) y de los productos del metabolismo microbiano.

FCE + FN + O2 → Biomasa + producto + CO2 + H2O + calor

Ej. Para la FCE, productos, etc, se conoce la formula molecular:

Pero cual es la formula molecular para la biomasa……?


Se puede definir un
microorganismo
“estándar”, cuya
La composición elemental promedio de distintos composición es (en
microorganismos se mantiene prácticamente constante base seca):
y esta no se modifica mayormente durante el cultivo.

Tabla 1: composición elemental de bacteria, hongos y levaduras


(% en peso seco)
46,5 % p/p de C,
6,94 % p/p de H,
31% p/p de O,
10,85 % p/p de N
~ 5 % p/p de sales
(4,71 %).

Fórmula centesimal de
la biomasa standard:

Tomado de Principles of Fermentation Technology (Stanbury P. F. y C3,87H6,94 O1,937N0,775


col.)
Se conoce la formula molecular de todos los compuestos químicos
(sustratos, biomasa y productos) de la ecuación de crecimiento
microbiano.

FCE + FN + O2 → Biomasa + producto + CO2 + H2O + calor

Sin embargo:

Para facilitar el tratamiento matemático del crecimiento


microbiano, definimos el concepto de Carbono-mol o C-mol.

Esto ayudaría a simplificar el estudio a la hora de


realizar los correspondientes balances y calcular los
rendimientos.
Concepto de Carbono mol Carbono mol (C-mol): cantidad de un
compuesto químico que contiene un
C-mol de biomasa átomo gramo de C (12 g de carbono).

Fórmula centecimal: Fórmula mínima de un microorganismo


promedio:
C3,87H6,94 O1,937N0,775
(PM: 95 g/mol) -
C H1,79 O0,5 N0,2

Esta formula mínima representa el 95 % p/p de la biomasa (no incluye el 5 %


de sales).

1 C-mol de biomasa: cantidad de biomasa (g) que contiene 1 átomo gramo


de C.

El peso molecular de un C-mol de


12 + 1,79 + 16  0,5 + 14  0,2
biomasa estándar será = = 25,8 g
0,95
En la que está representada el ~ 95% p/p de
1 C-mol de biomasa = 25,8 g la biomasa, hay ~ un 5 % de sales que no se
considera.
C-mol de cualquier sustancia

De la misma manera se puede definir un C-mol de cualquier compuesto


carbonado.

Tabla 2: C-mol de diferentes compuestos orgánicos.

El C-mol es la formula molecular dividido por la cantidad de carbonos.


Ejemplo

Penicilina: C16H18N2O4S

a) ¿ Cuanto es el peso de 1 C-mol de penicilina?.

b) ¿Cuántos C-moles hay en 5 g de penicilina?.

Respuesta:

a) 1 C-mol: C H1,125N0,125O0,25S0,0625 PM: 20,875 g/c-mol

b) En 5 g de penicilina hay 0,235 C-moles.


Ecuación de crecimiento microbiano basada en 1 C-mol de FCE
Se puede escribir la ecuación de crecimiento microbiano utilizando las
fórmulas de un C-mol de cada compuesto y expresando todo en función de
1 C-mol de FCE, que simbolizamos con la letra S:

1 C-mol S (FCE) + a FN + b O2 → yx/s biomasa + yp/s P + yco2/s CO2


+ w H2O

CHa1Ob1Nc1 + a FN + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s


CO2 + w H2O + q

En esta ecuación se considera que se forma algún producto extracelular


como por ej, un alcohol, un ácido orgánico, etc.

Los coeficientes estequiométricos de la ecuación están referidos a


1 C-mol de FCE y están expresados en C-moles (o moles según el
compuesto):
Ejemplos
1. Escribir la ecuación del crecimiento microbiano, a partir de 1 C-mol de FCE, de un
microorganismos creciendo en aerobiosis en un medio con glucosa (FCE), sulfato de
amonio como FN (se puede escribir directamente como NH3) y demás nutrientes
necesarios.

Solución: A partir de la ecuación de crecimiento microbiano generalizada:

CHa1Ob1 + a FN + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w H2O + q

El crecimiento aeróbico del microorganismo en el medio mencionado y en base a


1C-mol de la FCE, se puede representar mediante la siguiente ecuación química:

CH2O + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yco2/s CO2 + w H2O + q

Provine del sulfato de amonio

Cuando las células se multiplican, una parte de la FCE se transforma en biomasa


y otra parte es oxidada a CO2, para generar energía (ATP).
2. Escribir la ecuación del crecimiento microbiano, a partir de 1 C-mol de FCE, de un
microorganismos creciendo en anaerobiosis en un medio con glucosa (FCE), sulfato de
amonio como FN (NH3) y demás nutrientes necesarios, en el que se forma un producto.

Solución: A partir de la ecuación de crecimiento microbiano generalizada:

CHa1Ob1 + a FN + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w H2O +


q

El crecimiento en anaerobiosis del microorganismo en el medio mencionado y en


base a 1C-mol de la FCE, se puede representar mediante la siguiente ecuación
química:

CHa1Ob1 + a NH3 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w H2O + q

Ej. Fermentación alcohólica, durante el catabolismo, una parte del


azúcar se oxida a CO2 y la otra se reduce a etanol.

Aún no conocemos los coeficientes estequiométricos ni de los reactivos ni de los


productos.
Cálculo de los coeficientes estequiométricos de la reacción

CHa1Ob1Nc1 + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s


CO2 + w H2O + q

Los coeficientes estequiométricos de la ecuación están referidos a 1 C-mol de FCE y


están expresados en C-moles (o moles según el compuesto):

a = moles de FN consumida/C-mol de FCE.

b = moles de O2 consumido/C-mol de FCE.

yx/s = C-moles de biomasa formada/C-mol de FCE

yp/s = C-moles de producto formado/C-mol de FCE

yCO2/s = moles de CO2 formado/C-mol de de FCE. Relacionada con la fracción del


azúcar que se oxidó para obtener ATP.

q = Kcal/c-mol de FCE (energia que se libera por cada C-mol de FCE).

Para calcular los coeficientes se deben medir todas las variables del cultivo:
biomasa (x), sustrato (s), consumo de oxígeno y producción de CO2, producto
(p),antes y después del cultivo.
1. Coeficientes estequiométricos de biomasa y productos

Coef. esteq. de biomasa Rendimiento de biomasa

yx/s = x/s = (xf – xo)/(so – sf) (c-molx/c-mols)

Yx/s = x/s = (Xf – Xo)/(So – Sf) (gx/gs).


yx/s - yp/s Son rendimientos
Siendo: experimentales: se definen como
x0 - xf = biomasa inicial y final (c-mol/L) la relación entre la biomasa o
s0 - s = sustrato inicial y final (c-mol/L) producto obtenido (x o p) y el
Xo , Xf , So, Sf = idem pero en g/L sustrato consumido (FCE).

Coef. esteq. de producto Rendimiento de producto)

yp/s = p/s = (pf – po)/(so – sf) (c-molx/c-mols)

Yp/s = P/S = (Pf – Po)/(So – Sf) (gx/gs). Los rendimientos tiene una
Siendo:
importancia sustancial en el
p0, pf, = producto inicial y final (c-mol/L). costo de operación de las
s0, sf = sustrato inicial y final (c-mol/L) plantas industriales.
Ejemplo Calcule los rendimientos experimentales (en gramos y en C-moles) en
base a los datos obtenidos de un cultivo en un medio con glucosa como
FCE y otros nutrientes:

Yx/s = x/s = (Xf – Xo)/(So – Sf) (gx/gs).

Si se coloca el doble del sustrato, se obtendrá casi el doble de biomasa, teniendo en


cuenta la relación estequiométrica para un cierto microorganismo en un medio dado.

Como se ve en los rendimientos no es posible transformar toda la FCE en biomasa, ya


que parte de esta debe oxidarse liberando productos ligados al metabolismo
energético como el CO2, para producir energía (ATP).
Ejemplo Calcule los rendimientos experimentales del cultivo anterior, en
presencia de diferentes FCE:

Distintos sustratos dan rendimientos


glicerol
diferentes porque, el microorganismo lo
(C3H8O3)
puede metabolizar de manera diferente.
2. Coeficientes estequiométricos de oxígeno (b)

¿Como se calculan los moles de O2 consumidos en el cultivo?:

Se debe medir la composición de los gases a la salida del reactor a ≠ t.


Tiempo O2 sal. CO2 sal.
(h) (%) (%)
0 20,84 0,13
1 20,78 0,19
2 20,63 0,29
3 20,46 0,52
4 20,22 0,62
5 19,99 0,96

Se mide ro2

F  0,79 T0  (%O2 )s (%O2 )e 


r02 = −   60   − 
Vmediio T  22,4 100 − (%O )
2 s − (%CO )
2 s 0,79 
(molo2/l.h)
Se representa ro2 en función del tiempo del

Producción de CO 2 y consumo de
cultivo 0,05

0,04

O 2 (mmol/l.h)
Tiempo O2 sal. CO2 sal. rO2 rCO2 0,03
(h) (%) (%) (mmol/l.h) (mmol/l.h)
0,02
0 20,84 0,13 3,5 3,2
0,01
1 20,78 0,19 4,9 4,7
0
2 20,63 0,29 9,0 7,2 0 2 4 6 8 10
3 20,46 0,52 12,9 13.0 Tiempo (h)
4 20,22 0,62 19,9 15,6
Velocidad de consumo de O2 (rO2 ) y
5 19,99 0,96 25,1 24,4 velocidad de formación de CO2 (rCO2).
Símbolos: rO2 (▲) y rCO2 (■).

Los moles totales de O2 consumido durante el cultivo se calculan como la integral de


la velocidad de consumo de O2 (ro2) en función del tiempo según:

tf
moles O2 total consumido =  rO 2  dt
t0
3. Coeficientes estequiométricos de CO2 (yCO2/s)

De la misma manera se calcula yCO2/s

Se debe medir la composición de los gases a la salida del reactor a ≠ t.

Luego se mide rco2

F  0,79 T0  (%CO2 )s (%CO2 )e 


rC 02 =−   60   − 
Vmediio T  22,4 100 − (% O )
2 s − (%CO )
2 s 0,79 

Los moles de CO2 producidos durante el cultivo se calculan como la integral de la


velocidad de producción de CO2 (rCo2) en función del tiempo según:

tf
moles CO2 total producido =  rCO 2  dt
t0
Coeficiente Respiratorio en cultivos aerobios

Este es un parámetro muy importante


ya que puede arrojar algún indicio
sobre el tipo de metabolismo que está

Producción de CO 2 y consumo de
0,05
realizando el microorganismo durante
0,04
el cultivo.

O 2 (mmol/l.h)
0,03

En un cultivo netamente aeróbico, el 0,02


cociente respiratorio (rco2 / ro2 )
0,01
durante el proceso debe mantenerse
cercano a 1. 0
0 2 4 6 8 10

Ej. durante la producción de levadura Tiempo (h)


de panadería, un valor de CR > 1
indica formación de etanol y por ende
Típico cultivo aerobio
disminución del rendimiento celular.
Ejercicio:
Una levadura crece en un medio con 20 g de glucosa y consume 9 g de O2 y 1,26 g de
NH3, formando 9,5 g de biomasa, 13,26 g CO2 y 7,5 g de agua. Plantear la ecuación de
crecimiento microbiano en base a 1 C-mol de glucosa y determinar todos los
coeficientes estequiométricos.
Datos: 20 g C6H12O6, 1,26 g NH3, 9 g O2 y se obtienen 9,5 g biomasa, 13,26 g CO2,
7,5 g H2O

Solución:
Dividir por el PM de cada compuesto para expresar en moles la ecuación.

0.111 C6H12O6 + 0,074 NH3 + 0,28 O2 -------- 0,37 CH1,8 O0,5N0,2 + 0,3 CO2 + 0,416 H2O

Expresar por mol de la FCE (dividir por 0,11 todos los coeficientes)

C6H12O6 + 0,66 NH3 + 2,54 O2 -------- 3,36 CH1,8 O0,5N0,2 + 2,72 CO2 + 3,78 H2O

Expresar en base a 1 C-mol de glucosa (se dividen todos los coeficientes por 6)

CH2O + 0,11 NH3 + 0,42 O2 -------- 0,56 CH1,79O0,5N0,2 + 0,45 CO2 + 0,63 H2O
Cual sería el rendimiento si en lugar de glucosa , se tuviera sacarosa?

C12H22O11 + H2O 2 C6H12O6


342 g 360 g

Factor = 342 / 360 = 0,95 gsac/ggluc

Rendimiento en base a glucosa:

yx/s = 0,56 cmolx/cmolgluc . (25,8/30) = Yx/s = 0,4816 gx/ggluc

Rendimiento en base a sacarosa:

Yx/s = 0,4816 gx/ggluc x 1/0,95 = 0,507 gx/gsac


4. Concepto de Grado de reducción

Grado de reducción (): son los electrones disponibles de un C-mol de un


compuesto que transfiere al oxígeno cuando se oxida (es una medida de
cuan reducido está un compuesto).

Tabla 3:  de 1 C-mol de distintos compuestos orgánicos y el calor de la reacción.

Comp. Reacción  q (Kcal/C-mol) q0 = q/

Metano CH4 + 2 O2 → CO2 + 2 H2O 8 213,4 26,7

Etanol CH3O0,5 + 3/2 O2 → CO2 + 3/2 H2O 6 163,8 27,3

Glucosa CH2O + O2 → CO2 + H2O 4 111,0 28

Ac.fórmico CH2O2 + ½ O2 → CO2 + H2O 2 61,0 30,5


Combustión de un C-mol de diferentes compuestos en condiciones estándar y pH 7
(adaptado de J.A.Roels).

Siendo:
Grado de reducción = 4.n. n = moles de oxígeno necesarios
para oxidar 1 C-mol del compuesto.
Cálculo de  para 1 C-mol de cualquier compuesto

Se debe plantear la ec. de oxidación a CO2, H2O.


Si el compuesto tiene N, ponemos del lado derecho de la ec. la fuente de N que se usó
en el medio de cultivo (ej decimos que lo oxidamos a NH3 si esa es la FN que pusimos
en el medio de cultivo) y es el nivel de referencia para el N.

CHaObNc + n O2 → g CO2 + w H2O + k NH3

“n” coeficiente del oxígeno =0 =0 =0 Fuente de nitrógeno


en la reacción de oxidación del medio de cultivo.

El valor de  (e-/Cmol) será:


Se debe balancear la ec. de oxidación y
NH3 = 4 n determinar el valor de “n”.
Luego se multiplica n por 4 (porque cada
mol de O2 toma 4 e-) y obtenemos los
Indica el nivel de referencia electrones que se transfirió al oxigeno, ese
elegido para el N. es el grado de reducción.

Debe quedar claro que el CO2, H2O no tienen electrones disponibles por lo tanto el 
= 0 , lo mismo para el NH3 porque se eligió como referencia.
Ecuación generalizada del  de cualquier compuesto (CHaObNc )
que se oxida a CO2, H2O y NH3

NH3 = 4 n = 4 + a - 2 b – 3 c mol de e- /C-mol

Siendo: a, b y c los átomos de H, O y N, respectivamente de la


formula de 1 c-mol del compuesto: CHaObNc.

Esta ecuación permite calcular el GR de un compuesto rapidamente, a


partir de su fórmula molecular de un C-mol, sin necesidad de plantear
la ecuación de oxidación cada vez que se necessite y realizar el balance
estequiométrico para determinar el valor de n para poder luego calcular
el GR.

¿Como se obtiene esta ecuaciòn del  ?


¿Como se obtiene la ecuaciòn del ?

A partir de la ecuación de oxidación de um compuesto químico cualquiera, se


realizan los balances elementales y se obtiene una expresión para calcular “n”:

CHaObNc + n O2 → g CO2 + w H2O + k NH3

Planteando los balances


elementales de H, C, O y N:

Haciendo los reemplazos correspondientes y despejando 2 n (del b. de


Oxig.), se obtiene la ecuación del  de cualquier compuesto (CHaObNc )
en función de su formula molecular de 1 C-mol.

NH3 = 4 n = 4 + a - 2 b – 3 c CHaObNc

Si en lugar de NH3 tenemos otra fuente de nitrógeno, entonces la ecuación


cambia y se debe plantear una nueva ecuación de oxidación con esta otra
FN como referencia.
En la Tabla 4 se presenta el cálculo del γ para diferentes compuestos orgánicos.

Tabla 4: Grado de reducción de diferentes compuestos orgánicos

En la Tabla 3 también se presentan los calores de combustión “q” para cada


reacción.

És decir, el calor liberado durante la combustión de 1 Cmol de dicho


compuesto (energía/ Cmol ) .
En la última columna puede observarse que el cociente entre el
calor de combustión de los diferentes compuestos (q) y el  , es
aproximadamente constante:

q0 = q (Kcal/C-mol) /  (mol de e- /C-mol) = 27,5 Kcal / mol de e- = cte.

El “calor de reacción por mol de e-” (q0) es constante para la oxidación


de una gran cantidad de compuestos.

Esto implica que el contenido energético de los compuestos


orgánicos está relacionado con el grado de reducción.

q =  . q0 Kcal/C-mols)

O sea γ es un buen indicio de la energía contenida en el compuesto.


Ejercicio:

Calcular el grado de reducción de la biomasa (considerando NH3 como


referencia para el nitrógeno).

Sabiendo la formula de la biomassa:

CH1,8O0,5N0,2

Aplicando la ecuación de grado de reducción:

NH3 = 4 n = 4 + a - 2 b – 3 c CHaObNc

Siendo: a = 1,8 - b = 0,5 - c = 0,2

NH3x = 4,19 mol de e- /C-mol


5. Balances de masa y energía
5.1. Balance elemental de carbono
A pesar de su complejidad, el crecimiento microbiano obedece a ley de
conservación de la materia. Todos los C, H, O, N, consumidos durante el
crecimiento se incorporan a las nuevas células o se liberan como productos.

CHa1Ob1 + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w


H2O + q

1 Cmol de FCE se utiliza como FC para la


1 = yx/s + yp/s + yco2/s (ec.1) producción de biomasa , para la producción
de producto y parte se libera como CO2.

yx/s representa la fracción de FCE que se utiliza como FC para la producción de


biomasa.
yp/s representa la fracción de FCE que se utiliza como FC para la producción de un
producto.
yCO2/s representa la fracción de FCE que se utiliza para la producción de CO2, es decir la
que se oxida y se usa como FE.

Los rendimientos se expresan en C-mol/Cmols, o en moles de CO2/C-mols


5.2. Balance elemental de nitrógeno

CHa1Ob1 + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w


H2O + q

a = yx/s . 0,2 + yp/s . C2 (ec.2)

a = moles NH3 consumidos/C-mol de FCE consumida.

Si el producto no tiene nitrógeno o no hay formación de otro producto, se obtiene:

Esta ecuación es válida cuando el


a = yx/s . 0,2 (ec.2 bis)
único destino de la FN sea la biomasa.

El número que precede al coeficiente ‘a’ depende de la cantidad de


nitrógenos que tenga la FN.
Si la fuente de nitrógeno fuese sulfato de amonio (NH4)2SO4

El término de la izquierda de la ec 2 se transforma en ‘2 a’.

CHa1Ob1 + a (NH4)2SO4 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s


CO2 + w H2O + q

balance de N: 2 a = yx/s . 0,2 + yp/s . C2

Si el producto no tiene nitrógeno o no hay formación de otro producto, se


obtiene:

2 a = yx/s . 0,2 Único destino de la FN es la biomasa.


Si la fuente de nitrógeno fuese urea (NH2CONH2 )

CHa1Ob1 + a NH2CONH2 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2


+ yco2/s CO2 + w H2O + q

En este caso se modifican los dos balances:

balance de C: 1 + a = yx/s + yp/s + yco2/s

balance de N: 2 a = yx/s . 0,2 + yp/s . c2

a = moles urea consumida/C-mol de FCE consumida

Si el producto no tiene nitrógeno o no hay formación de otro producto, se


obtiene:

2 a = yx/s . 0,2 Único destino de la FN es la biomasa.


Ejémplo:

Ecuación de crecimiento microbiano y balance de carbono en un proceso


aerobio en un medio con glucosa y amoniaco (o sulfato de amonio).

CHa1Ob1 + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 + w


H2O + q

CH2O + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yco2/s CO2 + w H2O + q

yco2/s relacionada con la fracción de la FCE


1 = yx/s + yco2/s que se oxidó para producir energía (para
obtener ATP).

yp/s = 0 (no se forma producto).

Cuando las células se multiplican, una parte de la FCE se transforma en


biomasa y otra parte es oxidada a CO2 y H2O, para generar energía (ATP).
5.2. Balance de grado de reducción

El número de electrones disponibles se conservan durante el metabolismo.


Aplicando este principio a la ecuación de crecimiento microbiano, se obtiene:

CHa1Ob1 + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CHa2Ob2Nc2 + yco2/s CO2 +


w H2O + q

nº de electrones a la izquierda = nº de electrones a la derecha

s + a NH3 - 4 . b = x . yx/s + p . yp/s

Debe recordarse que para H2O, CO2 y NH3 (referencia del N), el  = 0. Además
el  del O2 es – 4 (negativo porque el O recibe electrones).

Despejado y dividiendo por s

4b   En este balance, los rendimientos se expresan en


C‐mol/C‐mol, el coeficiente b en
+ y + yx p
=1
 
s
 s
x/s
s
p/s moles de oxígeno/C‐mols y los γ como moles de
electrones por C‐mols.
4b
+
 +
 p
=1
y y
  
x
x/s p/s
s s s

Fracción de e de la FCE Fracción de e de la


transferidos al O2. FCE retenida en el
Representa el catabolismo Fracción de e de producto.
de la FCE. la FCE retenida en
la biomasa.
Consistencia de datos experimentales

Las ecuaciones de balance de carbono y grado de reducción permiten


comprobar la consistencia de los datos experimentales y verificar si las
determinaciones han sido correctas.

En un cultivo microbiano, tanto el balance de carbono como el de grado de


reducción tienen que dar 1.

Dado que siempre hay un error asociado a las medidas experimentales, se


considera que hay consistencia de datos experimentales en el siguiente rango:

0,94 ≤ yx/s + yp/s + yco2/s ≤ 1,06 Valores inferiores o superiores a


estos límites de aceptabilidad
determinados estadísticamente
ponen en evidencia errores en las
Si hay un producto y no se lo está determinaciones experimentales.
midiendo los dos balances darán
valores mucho menores a 1.
Por lo tanto:

A partir de datos experimentales obtenidos del análisis de


muestras de un cultivo microbiano y haciendo uso de los
balances de carbono y energía se puede determinar:

➢ El rendimiento de producción de biomasa (Yx/s).


➢ Estimar si se produce algún producto y su rendimiento (Yp/s).
➢ La cantidad de biomasa a obtener con un cierto sustrato.
➢ El nitrógeno necesario para obtener esa cantidad de biomasa.
➢ Los coeficientes b, a, etc.
➢ Diseñar el medio de cultivo para obtener esa cantidad de
biomasa.
Ejemplo:

Se cultivó la levadura Candida utilis en un medio conteniendo glucosa,


SO4(NH4)2 y sales. La concentración inicial del microrganismo fue de 0,53 g/l
(X0) y la glucosa agregada al medio de 15,2 g/l (S0). Al cabo de 9,5 h se
consumió totalmente la glucosa (Sf = 0) y la biomasa alcanzó un valor de 6,07
g/l (Xf). El O2 total consumido fue de 0,123 mol/l y el CO2 producido fue de
0,179 mol/l. Se formó algún producto?.

Solución
CH2O + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yco2/s CO2 + w H2O

1ro) Pasar todo a C-mol Glucosa CH2O 30 gs/C-mols

Biomasa CH1,79O0,5N0,2 25,8 gx/C-molx

C-mols/L
2do) Calcular yx/s, yCO2/s , b

Los rendimientos deben


estar en unidades de C-
moles para que se pueda
aplicar la ec. de balance
de C.

3ro) Aplicar balance de carbono, considerando yp/s = 0

1 = yx/s + yp/s + yco2/s

La suma de ambos rendimientos es menor a 1, significa que se formó un


producto. El rendimiento del producto será:
Yp/s = 1 - yx/s – yCO2/s = 1 – 0,41 – 0,354 = 0,236 cmolp/cmols
4to) Corroborar aplicando el balance de grado de reducción

❖ Calcular el grado de reducción para biomasa y glucosa.

Recordando la ecuación generalizada: NH3 = 4 n = 4 + a - 2 b – 3 c CHaObNc

1 C-mol de biomasa: CH1,8O0,5N 0,2 NH3x = 4 + 1,8 – 2 . 0,5 – 3. 0,2 = 4,19

1 C-mol de Glucosa: CH2O s = 4 + 2 – 2 . 1 = 4

❖ Aplicar la ec. del balance de  (recordar que todos los rendimientos deben
estar expresados en C-moles para poder aplicar la ecuación):

4b  
+ y x
+ p
y =1
 
s s
x/s

s
p/s

La suma nuevamente es menor a 1, por lo tanto se corrobora que se formó


un producto. Y se calcula el valor de p = 5,43.
6. Balance energético: calor producido en un cultivo microbiano

Las células utilizan la energía química de manera bastante eficiente pero, es


inevitable el desprendimiento de calor.

CHa2Ob2Nc2 + a NH3 + b O2 → yx/s biom. + yp/s prod. + yco2/s CO2 + HR

HR = calor producido por cada c-mol de FCE consumida (asociado al metabolismo
celular).

El principio de conservación de la energía es aplicable a bioprocesos.


Realizando un balance de entalpía en la ecuación de crecimiento microbiano:

Hs = yx/s Hx + yp/s Hp + HR

Despejando HR = Hs - yx/s Hx - yp/s Hp (ec. 1)

Se pueden sacar de Tablas los valores de entalpía (H). O se pueden calcular recordando
que el contenido energético de los compuestos orgánicos está relacionado con su GR:

Hs = qs = s q0 - Hx = qx = x q0 - Hp = qp = p q0


Reemplazando (ec. 2)
en la ec. 1 HR = s q0 - yx/s x q0 - yp/s p q0
A partir del balance de grado de reducción 4b 
+ y x
+ p
y =1
 s s
x/s

s
p/s

Despejando 4 b y multiplicando
ambos miembros por qo:
4 b q0 = s q0 - yx/s x q0 - yp/s p q0

HR
Por analogía con la ec. 2 4 b q0 = HR

ΔHR (Kcal/C-mols) = 4. b (mol de e-./C-mols) * qo (27,5 Kcal/mol de e-)

El calor liberado en un proceso aeróbico (HR) se puede calcular “en


forma aproximada” conociendo el valor de b, sin necesidad de conocer
los calores de combustión de los compuestos.
En cultivos anaerobios: El calor de reacción (HR) se calcula
mediante el balance de entalpía:

HR = Hs - yx/s Hx - yp/s Hp

En un cultivo anaerobio hay también generación de calor,


menos pero hay.

Gran parte de la energía contenida en la FCE, queda


retenida en los productos reducidos liberados al medio.
ACTIVIDADES PRÁCTICAS

COLOQUIO 1:

Con estos conocimiento pueden


resolver problemas: 1 al 5 inclusive
7. Rendimientos máximos teóricos

De los balances de C y del  surgen los “rendimientos máximos


teóricos”. Permitirán predecir cual es el máximo rendimiento posible
en cualquier procesos industrial.

Como se obtienen esos rendimientos máximos teóricos?:

Rendimiento máximo teórico para la producción de biomasa

✓ Del balance de Carbono, se puede considerar que toda la FCE se usa solo
para formar biomasa. Es decir que no se forma producto, ni CO2 (lo cual es
una utopía porque estaríamos diciendo que nada de la FCE se destina para
energía).
Por lo tanto : 1 = yx/s + yp/s + yco2/s yx/smt = 1

(aunque esto sería algo imposible “Máximo rendimiento para biomasa”:


porque siempre se produce CO2 (nos dice que de 1 C-mol de FCE, no
ligado al metabolismo energético). se puede producir mas que 1 C-mol
de biomasa)
✓ Del balance de  , se puede considerar que todos los e- de la FCE
van a parar a la biomasa, que no se forma producto y no se
consume oxígeno.
Por lo tanto del balance de GR:

4b   yx/smt = s/x
+ y x
+ yp
=1
 s s
x/s
 s
p/s

“Máximo rendimiento para biomasa”.


Indica que depende del valor del GR de sustrato
porque el GR de biomasa = 4,2.

(Suposición: sin obtención de energía).

(aunque también es una utopía porque se considera que no hay consumo de


oxígeno, b=0, es decir que no hay producción de energía).
Surgen así dos rendimientos máximos teóricos

Cuál de los dos es válido?? yx/smt = s/x


yx/smt =1

De los dos rendimientos se usará aquel que sea menor de los dos,
según el valor del grado de reducción de la FCE (s).

a) Cuando: Ningún rendimiento


s < x  yx/s mt = s/x < 1 puede ser > 1 porque a
partir de 1 C-mol de S
b) Cuando: no podemos obtener
s > x  yx/smt = 1 mas que 1-C-mol de
biomasa.

Esta es una idealización, para que la reacción ocurra, se requiere energía,


por lo tanto hay que considerar que un parte de la FCE se utilizará para la
producción de energía.

Experimentalmente siempre se obtienen valores menores que estos máximos


teóricos.
Tabla 5: Rendimientos experimentales de cultivos aeróbicos
Roels y col. determinaron que los rendimientos de biomasa que ellos
obtuvieron de manera experimental (expresados en C-moles) en los
diferentes cultivos, correspondían al 60 % de los rendimientos máximos
teóricos.

En la práctica se considera entonces un rendimiento real del


60 % del máximo teórico para la producción de biomasa.

La fracción de la FCE que se oxida


yx/sreal = 0,6. yx/smt para obtener energía se considera del
40% en un proceso aerobio.

Esto nos dice que no encontraremos ningún microorganismo que de valores


de rendimientos de biomasa superiores al rendimiento real calculados por la
aproximación de Roels.

La aproximación de Roels es para predecir el rendimiento en biomasa


de microorganismos que crecen aeróbicamente y no producen otros
productos.
Ejemplo:

Determinar el rendimiento máximo teórico ( y luego el real) de biomasa, a


partir de glucosa (FCE) y sulfato de amonio (FN), en un proceso aeróbico:

Solución
CH2O + a NH3 + b O2 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yco2/s CO2 + w H2O
NH3s = 4 NH3x = 4,19

Como s < x yx/smt = s/x


yx/smt = s/x = 4 / 4,19 = 0,95 c-molx/c-mols

Rendimiento real: Según la estimación de Roels, se multiplica por 0,6 para considerar
que una parte de la FCE se utiliza para obtener energía, en un proceso aerobio.

yx/sreal = yx/smt . 0,6 = 0,57 c-molx/c-mols

Glucosa (C6H12O6): CH2O - PM: 30 gs/c-mols


Biomasa (CH1,79O0,5N0.5) - PM: 25,8 gx/C-molx

Ningún microorganismo puede dar un


Yx/sreal = 0,49 gx/gs
rendimiento superior a este.
Rendimiento máximo teórico para la producción de un producto

✓ Del balance de C, se puede considerar que toda la FCE se usa solo


para formar producto. Por lo tanto :

1 = yx/s + yp/s + yco2/s yp/smt = 1

✓ Del balance de  , se puede considerar que todos los e- de la FCE


van a parar al producto:

4b 
+ y x
+ p
y =1 yp/smt = s/p
 s s
x/s
 s
p/s

Cuál de los dos es válido??

De los dos rendimientos se usará aquel que sea menor, según el valor
del grado de reducción de la FCE (s).
Ejemplo:
Determinar el rendimiento máximo teórico para la producción de etanol, a
partir de glucosa (FCE) y sulfato de amonio (FN), en un proceso anaeróbico.

Productos del metabolismo energético


Solución

CH2O + a NH3 → yx/s CH1,79O0,5N0,2 + yp/s CH3O0,5 + yco2/s CO2 + w H2O

NH3 s = 4 NH3p = 6

Como s < p  yp/smt = s/p 4b  


+ x
y + p
y =1
 s
s
x/s
s
p/s

(Suposición: sin
yp/smt = s/p = 4/6 = 0,66 C-molp/C-mols formación de biomasa).

Glucosa (C6H12O6): CH2O - PM: 30 gs/c-mols


Etanol (C2H6O): CH3O0,5 - PM: 23 gp/C-molp

Yp/smt = 0,506 gp/gglucosa ~ 0,51 gp/gglucosa

Para la obtención de energia en este proceso fermentativo, una parte de la glucosa


es oxidada CO2 y otra es reducida a etanol.
Ningún proceso de producción de etanol puede dar un
rendimiento superior a este.

En la industria los rendimientos experimentales son del 87 al


93 % Yp/smt

Porque la levadura utiliza parte de la glucosa para crecer.

NO se muiliplica por 0,6 porque el producto ya esta


contemplado en la generación de energía.
RESUMEN

En este tema describimos el crecimiento microbiano y la producción de


producto en un bioproceso mediante una reacción química.

Vimos que un bioproceso puede expresarse en función de los reactivos


(nutrientes) y productos (biomasa, productos metabólicos, etc).

Pero no hemos dicho nada sobre la velocidad a la que ocurre esta


reacción.

En el próximo tema abordaremos conceptos de cinética


microbiana y determinaremos ej.:

▪ A qué velocidad crece el microorganismo, de qué factores


depende esta velocidad?.

▪ A qué velocidad se genera producto y se consume sustrato, etc.


Actividades:

Resolver el Coloquio 1
Bibliografía
Bjorn, K.; Colin, R. 2009. Biotecnología. Editorial Acribia, Zaragoza, España. Capítulo 3.

Crueger, W.; Crueger A. Biotecnología: Manual de microbiología industrial. Editorial Acribia, 1993.

Doran, P. M. Principios de Ingeniería de los Bioprocesos. Editorial Acribia S.A. Zaragosa, España, 1995
(Traducido 1998). Capítulo 4 y Capítulo 5.

Ertola R. J.; Yantorno O.; Mignone C. Microbiología Industrial. Organización de los Estados Americanos
(OEA). Washington DC., 1994.

Murray Moo - Young . Comprehensive Biotechnology . The Principles , Applications and Regulations of
Biotechnology in Industry , Agriculture and Medicine . Pergamon Press .New York , 1983 .

Pirt J. Principles of Microbe and Cell Cultivation. Blackwell Scientific Publications, 1975.

Scraag, A. Biotecnología para ingenieros: Sistemas biológicos en procesos tecnológicos. Noriega Editores, 1996.
Capítulo 10

Voguet, C; Cavalitto, S.; Mignone, C. Apuntes Curso de Posgrado: Aspectos Tecnológicos del Cultivo de
Microorganismos y Células Eucariotas. Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales
(CINDEFI), 2005.

Apuntes de cátedra.

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