UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

FACULTAD DE AGRONOMÍA

“FITOEXTRACCIÓN DE CADMIO EN SUELOS CONTAMINADOS

Y FERTILIZADOS CON FÓSFORO USANDO Helianthus annuus
ASOCIADO CON EL HONGO MICORRÍTICO Glomus intraradices”

TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE

INGENIERA AGRÓNOMA

EMILEE NAHOMI CALERO RIOS

LIMA-PERÚ
2024
____________________________________________________________________________________
La UNALM es la titular de los derechos patrimoniales de la presente investigación
(Art. 24. Reglamento de Propiedad Intelectual)
 UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA
LA MOLINA

FACULTAD DE AGRONOMÍA

“FITOEXTRACCIÓN DE CADMIO EN SUELOS CONTAMINADOS

Y FERTILIZADOS CON FÓSFORO USANDO Helianthus annuus
ASOCIADO CON EL HONGO MICORRÍTICO Glomus intraradices”

EMILEE NAHOMI CALERO RIOS

Tesis para optar el Título de:

INGENIERA AGRÓNOMA

Sustentada y aprobada ante el siguiente jurado:

Dr. Federico Alexis Dueñas Dávila Ing. Mg. Sc. Pedro Pablo Gutiérrez Vílchez
PRESIDENTE ASESOR

Dr. Oscar Oswaldo Loli Figueroa Dr. Sady Javier García Bendezú
MIEMBRO MIEMBRO

LIMA – PERÚ

2024
DEDICATORIA

A mi familia, quienes me impulsan a ser mejor

cada día.

A siete músicos por ser mi fuente de felicidad

 AGRADECIMIENTOS

A mis padres Gregorio y Dilma por su amor y apoyo incondicional.

A mis hermanos Nicolás, Tony y Naty por confiar en mí siempre.

A mi asesor, el Ing. Pedro Pablo Gutiérrez por ser guía de esta investigación e impulsarme
a ser una mejor profesional.

Al Lic. Omar Benites, por sus consejos y su valioso tiempo brindado para el análisis
estadístico.

A Jhack Baltazar por brindarme las facilidades de trabajo en el Laboratorio de Fertilidad de

Suelos “Sven Villagarcía Hermoza”.

A todas las personas que me ayudaron en la fase de campo del experimento.

A todos mis amigos que me dedicaron palabras de aliento para finalizar este trabajo.

Al Vicerrectorado de Investigación de la UNALM por la subvención brindada para hacer

realidad esta investigación.

A mi alma mater la Universidad Nacional Agraria La Molina, especialmente a la Facultad

de Agronomía, por formarme como una persona y como profesional de las ciencias agrarias.
 ÍNDICE GENERAL

I. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 1

II. REVISIÓN DE LITERATURA................................................................................ 2

2.1 MARCO TEÓRICO ........................................................................................... 2

2.1.1 Contaminación de suelos ........................................................................ 2

2.1.2 Contaminación por metales pesados ....................................................... 3

2.1.3 Cadmio .................................................................................................... 4

2.1.4 Fitorremediación de suelos ..................................................................... 8

2.1.5 Helianthus annuus ................................................................................ 10

2.1.6 Hongos Micorríticos Arbusculares ....................................................... 11

2.2 ANTECEDENTES ........................................................................................... 12

III. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................... 15

3.1 UBICACIÓN DEL CAMPO EXPERIMENTAL ............................................ 15

3.2 SUELO ............................................................................................................. 15

3.3 AGUA ............................................................................................................... 16

3.4 MATERIALES Y EQUIPOS ........................................................................... 16

3.4.1 Semillas ................................................................................................. 16

3.4.2 Micorrizas ............................................................................................. 16

3.4.3 Fertilizantes ........................................................................................... 16

3.4.4 Fuente de cadmio .................................................................................. 16

3.4.5 Ensayo experimental ............................................................................. 16

3.5 TRATAMIENTOS ........................................................................................... 17

3.6 METODOLOGÍA ............................................................................................. 18

3.6.1 Instalación de macetas .......................................................................... 18

3.6.2 Contaminación ...................................................................................... 19

3.6.3 Fertilización con fósforo ....................................................................... 19

 3.6.4 Inoculación de HMA ............................................................................ 19

3.6.5 Siembra ................................................................................................. 20

3.6.6 Riegos ................................................................................................... 20

3.6.7 Fertilización .......................................................................................... 20

3.6.8 Evaluación de variables biométricas ..................................................... 20

3.6.9 Medición de altura ................................................................................ 20

3.6.10 Medición del índice de estabilidad de la membrana (MSI) .................. 21

3.6.11 Cosecha ................................................................................................. 21

3.6.12 Digestión ácida ..................................................................................... 21

3.6.13 Diseño y tratamiento experimental ....................................................... 22

IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................. 23

4.1 PESO SECO TOTAL ....................................................................................... 24

4.2 CONCENTRACIÓN DE CADMIO EN LA INFLORESCENCIA ................. 25

4.3 CONCENTRACIÓN DE CADMIO EN EL TALLO ...................................... 27

4.4 CONCENTRACIÓN DE CADMIO EN LA RAÍZ ......................................... 29

4.5 EXTRACCIÓN TOTAL DE CADMIO ........................................................... 32

4.6 FACTOR DE TRANSLOCACIÓN (FT) ......................................................... 36

4.7 ÍNDICE DE ESTABILIDAD DE LA MEMBRANA ...................................... 38

V. CONCLUSIONES.................................................................................................... 43

VI. RECOMENDACIONES .......................................................................................... 44

VII. BIBLIOGRAFÍA...................................................................................................... 45

VIII. ANEXOS ................................................................................................................... 55

 ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1: Análisis de agua usado en el experimento ............................................................ 16

Tabla 2: Dosis de los tratamientos ....................................................................................... 18

Tabla 3: Contenido de cadmio en el fertilizante superfosfato triple.................................... 19

Tabla 4: Análisis de varianza de los factores de estudio micorrizas, cadmio y fósforo

para las variables concentración de cadmio en la inflorescencia, tallo y raíz; factor de
translocación; índice de estabilidad de la membrana, extracción total de cadmio y
altura. ................................................................................................................................... 23

GL: Grados de Libertad, *, significativo para el nivel del 5%; **, significativo para el
nivel de 1%; ***, significativo para el nivel de 0.5. ........................................................... 23
 ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1. Prueba de efectos principales para el peso seco total del girasol bajo efecto de
presencia y ausencia del HMA ............................................................................................ 24

Figura 2. Prueba de efectos principales para el peso seco total del girasol bajo efecto de
dos dosis de fósforo ............................................................................................................. 24

Figura 3. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio en la inflorescencia

del girasol bajo efecto de tres dosis de cadmio ................................................................... 25

Figura 4. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio en la inflorescencia

del girasol bajo efecto de dos dosis de fósforo .................................................................... 25

Figura 5. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en la concentración de cadmio en la

inflorescencia del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA ........................... 26

Figura 7. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio en el tallo del girasol
bajo efecto de dos dosis de fósforo...................................................................................... 27

Figura 8. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en la concentración de cadmio en el

tallo del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA ........................................... 28

Figura 9. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio en la raíz del girasol
bajo efecto de ausencia y presencia del HMA ..................................................................... 29

Figura 10. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio en la raíz del girasol
bajo efecto de tres dosis de cadmio ..................................................................................... 29

Figura 11. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en la concentración de cadmio en la

raíz del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA ............................................ 30

Figura 12. Prueba de efectos principales para la extracción total de cadmio del girasol
bajo efecto de ausencia y presencia del HMA ..................................................................... 33

Figura 13. Prueba de efectos principales para la extracción total de cadmio del girasol
bajo efecto de tres dosis de cadmio ..................................................................................... 33

Figura 14. Prueba de efectos principales para la extracción total de cadmio del girasol
bajo efecto de dos dosis de fósforo...................................................................................... 34
Figura 15. Efecto de las diferentes dosis de fósforo en la extracción total de cadmio del
girasol bajo efecto de ausencia y presencial HMA.............................................................. 34

Figura 16. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en la extracción total de cadmio en
del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA ................................................... 35

Figura 17. Prueba de efectos principales para el factor de translocación bajo el efecto de
tres dosis de cadmio ............................................................................................................. 37

Figura 18. Prueba de efectos principales para el índice de estabilidad de la membrana de

la hoja del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA ....................................... 39

Figura 19. Prueba de efectos principales para el índice de estabilidad de la membrana de

la hoja del girasol bajo efecto de dos dosis de fósforo ........................................................ 39

Figura 20. Prueba de efectos principales para el índice de estabilidad de la membrana de

la hoja bajo el efecto de tres dosis de cadmio...................................................................... 40

Figura 21. Efecto de las diferentes dosis de fósforo en el índice de estabilidad de la

membrana de la hoja bajo efecto de ausencia y presencia del HMA .................................. 40

Figura 22. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en el índice de estabilidad de la

membrana de la hoja bajo efecto de ausencia y presencia del HMA .................................. 41
 ÍNDICE DE ANEXOS

Anexo 1. Análisis de caracterización del suelo experimental ............................................. 55

Anexo 2. Análisis de concentración de cadmio en el suelo ................................................ 55
Anexo 3. Análisis de varianza para el peso seco total del girasol ....................................... 56
Anexo 4. Análisis de varianza para el contenido de cadmio en la inflorescencia ............... 56
Anexo 5. Análisis de varianza para el contenido de cadmio en el tallo .............................. 57
Anexo 6. Análisis de varianza para el contenido de cadmio en la raíz ............................... 57
Anexo 7. Análisis de varianza para la extracción total de cadmio por la planta ................. 58
Anexo 8. Análisis de varianza para el factor de translocación ............................................ 58
Anexo 9 Análisis de varianza para el índice de estabilidad de la membrana de la hoja ..... 59
Anexo 10. Porcentaje de colonización micorrízica en raíces de girasol inoculados con
Glomus intraradices con concentraciones distintas de Cd y P en el suelo.......................... 59
Anexo 11. Secado de suelo tamizado al aire libre ............................................................... 60
Anexo 12. Llenado de macetas con suelo............................................................................ 60
Anexo 13. Contaminación de suelo con cadmio en sus diferentes dosis ............................ 61
Anexo 14. Siembra de girasol en las macetas ..................................................................... 61
Anexo 15. Fertilización con superfostato triple en los tratamientos necesarios .................. 62
Anexo 16. Vista de los cotiledones del girasol a los 10 días después de la siembra ........... 62
Anexo 17. Riego diario de las macetas................................................................................ 63
Anexo 18. Etiquetado de macetas con códigos QR ............................................................. 63
Anexo 19. Plantas de girasoles a los 49 después de la siembra........................................... 64
Anexo 20. Planta de girasol a los 60 días después de la siembra ........................................ 64
Anexo 21. Plantas de girasol a los 78 días después de la siembra ...................................... 65
Anexo 22. Cosecha del girasol ............................................................................................ 65
Anexo 23. Pesado de discos foliares para la evaluación de Índice de la estabilidad de la
membrana ............................................................................................................................ 66
Anexo 24. Pesado del girasol en fresco ............................................................................... 66
Anexo 25. Lavado de raíces de girasol ................................................................................ 67
Anexo 26. Secado de raíces al aire libre .............................................................................. 67
Anexo 27. Pesado de raíces en seco .................................................................................... 68
Anexo 28. Triturado de materia seca ................................................................................... 68
Anexo 29. Pesado de muestra molida para la digestión ácida ............................................. 69
Anexo 30. Proceso de agregación de ácido nítrico perclórico a las muestras molidas ....... 69
Anexo 31. Cristalización de las muestras molidas de girasol después de la digestión
ácida .................................................................................................................................... 70
Anexo 32. Filtrado de las muestras cristalizadas ................................................................. 70
 RESUMEN

El estudio se llevó a cabo en el Laboratorio e Invernadero de Fertilidad del Suelo “Sven

Villagarcía Hermoza” de la Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima, Perú. Se
utilizaron macetas de 4 kg con suelo franco arenoso esterilizado. Las macetas se
contaminaron con tres niveles de cadmio (0, 15, 30 mg Cd kg-1) y se fertilizaron con dos
niveles de fósforo (0, 200 mg fósforo kg-1). Se sembró girasol, inoculando un grupo con el
hongo micorrícico Glomus intraradices y dejando otro sin inoculación. Se aplicó un diseño
experimental 2x2x3 con cinco repeticiones. Se evaluaron la altura de la planta, la
concentración de cadmio en raíz, tallo e inflorescencia, la extracción total de cadmio, el
factor de translocación y el índice de estabilidad de la membrana (MSI) a los 78 días de la
siembra. Los resultados obtenidos revelaron que no se encontraron diferencias significativas
en la interacción entre los tres factores de estudio. Se pudo observar que las dosis de cadmio
no afectaron negativamente al desarrollo vegetativo del girasol siendo la altura indiferente a
los tratamientos establecidos. En líneas generales, se observó un incremento en la
concentración de cadmio en la planta a medida que se aumentaba la dosis de este metal,
especialmente en la raíz. En la extracción total de Cd por el girasol, las plantas inoculadas
con micorrizas registraron un valor de 86.40 µg Cd/maceta, en comparación con las no
inoculadas con 51 µg Cd/maceta. El factor de translocación resultó menor que 1 y MSI no
mostró diferencias significativas. En conclusión, se puede afirmar que el girasol exhibe una
alta resistencia al cadmio, desempeñando un papel de fitoestabilizador al acumular la mayor
parte del contaminante en la raíz además su capacidad de extracción de este metal es
mejorada cuando se establece una simbiosis con micorrizas.

Palabras clave: cadmio, girasol, micorrizas, fósforo, fitoextracción.

 ABSTRACT

The study was conducted at the Soil Fertility Laboratory and Greenhouse "Sven Villagarcía
Hermoza" of the National Agrarian University La Molina, Lima, Peru. 4 kg pots with
sterilized sandy loam soil were used. The pots were contaminated with three levels of
cadmium (0, 15, 30 mg Cd kg-1) and fertilized with two levels of phosphorus (0, 200 mg
phosphorus kg-1). Sunflower was planted, inoculating one group with the mycorrhizal
fungus Glomus intraradices and leaving another group uninoculated. A 2x2x3 factorial
experimental design with five replicates was applied. Plant height, cadmium concentration
in root, stem, and inflorescence, total cadmium extraction, translocation factor, and
membrane stability index (MSI) were evaluated at 78 days after planting. The results
revealed no significant differences in the interaction among the three study factors. It was
observed that cadmium doses did not negatively affect sunflower's vegetative development,
with height being unaffected by the established treatments. Overall, there was an increase in
cadmium concentration in the plant as the metal dose increased, especially in the root. In
total Cd extraction by sunflower, plants inoculated with mycorrhizae recorded a value of
86.40 µg Cd/pot compared to uninoculated ones with 51 µg Cd/pot. The translocation factor
was less than 1, and MSI showed no significant differences. In conclusion, it can be stated
that sunflower exhibits high resistance to cadmium, playing a phytostabilizing role by
accumulating most of the contaminant in the root, and its metal extraction capacity is
enhanced when establishing a symbiosis with mycorrhizae.

Keywords: cadmium, sunflower, mycorrhizas, phosphorus, phytoextraction.

 I. INTRODUCCIÓN

La contaminación de suelos con metales pesados representa un desafío ambiental de gran

magnitud en todo el mundo. En los últimos años, se ha reportado un incremento en los
niveles de cadmio en los suelos agrícolas peruanos como resultado de una prolongada
fertilización fosfatada. Entre los metales pesados, el cadmio (Cd) se destaca por su toxicidad,
persistencia en el ambiente, movilidad y la capacidad de ser rápidamente absorbido por las
raíces de las plantas, transportándose a la parte aérea acumulándose en el producto
comercial, lo que plantea serios riesgos para la salud humana. La exposición crónica al
cadmio puede provocar una serie de problemas de salud, incluyendo daños renales, óseos y
pulmonares, así como la posibilidad de desarrollar cáncer.

En este contexto, la fitorremediación se ha posicionado como una estrategia efectiva y

sostenible para mitigar la contaminación por cadmio en el suelo. la fitorremediación se basa
en la utilización de plantas para eliminar o reducir la concentración de contaminantes en
suelos. Entre las plantas utilizadas con éxito en procesos de biorremediación, el girasol
(Helianthus annuus) ha demostrado una notable capacidad para acumular metales pesados
en sus tejidos, incluyendo el cadmio. Esto sumado a la presencia de simbiosis generada entre
los hongos micorrícicos y las raíces, puede potenciar la capacidad de las plantas para
absorber y acumular metales pesados.

El objetivo general de esta tesis es explorar el potencial de la fitorremediación de suelos

contaminados con cadmio y fertilizados con fósforo a través del uso del girasol (Helianthus
annuus) en asociación con el hongo micorrícico Glomus intraradices y como objetivos
específicos:

- Evaluar la tolerancia del girasol ante dosis crecientes de cadmio.

- Determinar la concentración de cadmio en la raíz, tallo e inflorescencia del girasol.
- Determinar la capacidad de translocación de cadmio del girasol de la raíz a órganos
aéreos a través del factor de translocación.
- Determinar la influencia de la asociación de la inoculación con el hongo micorrícico
Glomus intraradices sobre la capacidad de extracción de cadmio por el girasol.
- Evaluar el efecto de la fertilización fosfatada sobre la concentración de cadmio
disponible en la planta del girasol.

1
 II. REVISIÓN DE LITERATURA

2.1 MARCO TEÓRICO

2.1.1 Contaminación de suelos

El suelo es un componente del ambiente muy importante en el cual se desarrolla la vida, es

vulnerable, difícil y larga recuperación por lo que se considera un recurso no renovable (FAO,
2019). Provee esenciales funciones ambientales como el sustento de alimento para las
plantas, ser el hábitat de diversos organismos que transforman la materia orgánica y otros
factores que lo hacen ser esencial en el desarrollo de ecosistemas de los cuales forma parte
(Silva y Correa, 2009).

La agricultura hace un uso intensivo del suelo, empleando insumos como plaguicidas y
fertilizantes con el objetivo de obtener alimento y materia prima, situación, que conduce a
una degradación creciente por motivos de contaminación la cual puede llevar a una perdida
irrecuperable del mismo (Silva y Correa, 2009).

La contaminación en los suelos se refiere a la presencia de químicos o sustancias presentes

en una concentración más alta de lo normal y que conllevan a afectos adversos sobre los
organismos al que no está destinado (FAO y GTIS, 2015). La mayoría de los contaminantes
tienen origen antropogénico, algunos componentes minerales pueden aparecer naturalmente
en concentraciones altas (FAO, 2019) y su presencia puede producir desequilibrios en los
ciclos de los nutrientes y acidificación del suelo (FAO y GTIS, 2015). Este proceso de
degradación afecta a numerosos territorios, a escala mundial identificándola como la tercera
amenaza más importante a las funciones del suelo, de ahí el interés suscitado en las últimas
décadas, en conocer los tipos y fuentes de contaminación de suelos, así como procesos o
posibles soluciones que se pueden adoptar para prevenir, mitigar o remediar estos
procesos de contaminación (Jiménez, 2017).

2
2.1.2 Contaminación por metales pesados

El término “metales pesados” se refiere al grupo de metales y metaloides de masa

relativamente alta (> 4,5 g cm-3) como Pb, Cd, Cu, Hg, Sn y Zn, que pueden causar
problemas de toxicidad (FAO, 2019). Están presentes en el suelo como componentes
naturales, en la corteza terrestre, en forma de minerales, sales u otros compuestos. o como
consecuencia de actividades antropogénicas como la minería industrial, la eliminación de
desechos con alto contenido metálico; la aplicación de fertilizantes, estiércol, los lodos de
depuradora, los plaguicidas, la irrigación con aguas residuales,los residuos de combustión de
carbón; los derrames de petroquímicos y la deposición atmosférica de diferentes fuentes
(Prieto et al., 2009; Alloway, 2013).

Los metales pesados son el tipo de contaminantes más persistentes y complejos para
remediar en la naturaleza (Prieto et al., 2009). No pueden ser degradados o destruidos
fácilmente de forma natural o biológica ya que no tienen funciones metabólicas específicas
para los seres vivos (FAO, 2019).

Entre los metales pesados, Zn, Ni, Co y Cu son relativamente más tóxicos para las plantas,
causando efectos inmediatos como inhibición en el crecimiento y desarrollo de las plantas,
así como una disminución de la población microbiana del suelo cuando alcanzan niveles altos
no permitidos debido a su característica de bioacumulación (Martín, 2000).

El As, Cd, Pb, Cr y Hg son relativamente más tóxicos para los animales superiores y los
elementos más importantes atendiendo a la contaminación de la cadena alimentaria son As,
Cd, Hg, Pb y Se debido a que amenazan la salud y el bienestar delos seres humanos (FAO,
2019).

Los metales pesados que se han incorporado al suelo pueden seguir cuatro vías: i) Quedar
retenido en el suelo en fase acuosa u ocupando sitios de intercambio; ii) Ser adsorbido por
constituyentes inorgánicos del suelo; iii) Quedar asociado con la materia orgánica; iv) Ser
precipitado como sólido puro o mixto. Sin embargo, también pueden ser absorbidos por las
plantas, incorporándose así a las cadenas tróficas (Prieto et al., 2009).

3
2.1.3 Cadmio

a. Características generales

El cadmio es un elemento del Grupo II-B de la Tabla Periódica, situado entre el Zn y el Hg,
por lo tanto, posee características similares a éstos. Este metal es liberado al medio ambiente
en un 10 % bajo actividades naturales como la emisión de cadmio de las rocas madre, las
erupciones volcánicas, los incendios forestales, el polvo transportado por el viento y la
neblina marina. Las fuentes antropogénicas liberan al más del 90 % bajo el uso de
fertilizantes fosfatados, detergentes, combustión de combustibles fósiles, trabajos
metalúrgicos, desechos de la industria del cemento, lodos de depuración, desechos
municipales e industriales, minería, fundición y procesamiento de minerales (Cloquet et al.,
2006). Se calcula que cada año se liberan entre 25000 y 30000 toneladas de cadmio, de las
cuales, alrededor de la mitad proviene de las rocas y unas 4000 y 13000 toneladas como
consecuencia de actividades humanas comola minería y combustibles fósiles (Serrano et al.,
2008).

Por lo general, no encontramos al cadmio en el ambiente como un metal puro, es más

abundante en forma de óxidos complejos, sulfuros y carbonatos en el zinc, plomo y menas
de cobre (Pérez, 2012). Su compuesto natural más común es el CdS, es por eso, que se dice
que tiene una gran afinidad por el azufre. Adicionalmente lo podemos encontrar formando
compuestos como: CdO, CdCl2, Cd (OH)2 (Herrera, 2011).

Lamentablemente el Cd no se descompone en el medio ambiente. Se puede encontrar en

pequeñas partículas o adherido a ellas y por tal razón pueden viajar grandes distancias para
depositarse en el suelo y puede persistir por varios años debido a su poca degradación
microbiana y química. Esta propiedad unida a su alta movilidad, poder acumulativo y
toxicidad en niveles bajos hace considerarlo como una gran problemática (Hernández-
Baranda, 2019; Huaraca-Fernández, 2020). Por ello está clasificado en la séptima posición
entre 20 toxinas, debido a su alta solubilidad y naturaleza tóxica (Gramlich et al., 2018).

b. Cadmio en el suelo

El cadmio se presenta naturalmente en los suelos de forma divalente (Cd2+). Se encuentra

disponible en el agua intersticial y en las partículas de suelo que están fácilmente accesible
para los organismos receptores (Ferreira y Barbosa, 2019; Khan et al., 2017).

4
La biodisponibilidad del Cd en el suelo va a depender del pH, la cantidad de materia orgánica
y la CIC. Estos tres factores afectan la solubilidad de los compuestos y por ende la liberación
de Cd en la solución suelo, además interfieren en la captación del Cd por las plantas (Sarwar
et al., 2010).

El pH se relaciona de una manera lineal indirecta, a medida que disminuye pH quiere decir,
el suelo se vuelve ácido, aumenta la absorción de Cd por las plantas. En el caso contrario, al
incrementar el pH es adsorbido por los coloides del suelo y de esa manera siendo menos
disponible para la planta (Hernández-Baranda, 2020).

La materia orgánica del suelo es capaz de retener metales pesados por su alto contenido de
capacidad de intercambio catiónico, adicionalmente las enmiendas orgánicas en dosis altas
son capaces de aumentar el pH del suelo y en consecuencia disminuir la biodisponibilidad
de Cd del suelo (Shen et al., 2019).

Según He et al. (2015), señalan que la capacidad de intercambio catiónico representa un

factor significativo que afecta la movilidad del Cd en el suelo. Este elemento tiende a estar
firmemente ligado a las superficies de minerales de arcilla, óxidos de hierro, aluminio y
materia orgánica, lo que resulta en una reducción significativa de su capacidad de
movimiento en suelos ricos en materia orgánica y con una abundante presencia de partículas
de arcilla donde los metales pesados tienden a inmovilizarse, ya que quedan retenidos debido
a su adsorción al complejo coloidal del suelo.

El cadmio es un metal cuyos iones son absorbidos más fácilmente por las raíces de las
plantas, además de esta biodisponibilidad también presenta dos procesos: la actividad de
absorción y la capacidad de translocación, lo que lo hace mucho más preocupante (Clemens,
2006). Usualmente, las concentraciones de cadmio en el suelo están en un rango de 0.1 a 2.0
mg Cd kg−1 en suelos no contaminados y en su mayoría por debajo de 1 mg kg-1; sin
embargo, las actividades humanas como la minería, fertilización fosfatada, lodo de
depuradoras, etc. contribuyen a un significante incremento de Cd en los suelos (Del Ducca
et al., 2015).

Su presencia en el suelo puede alterar el consumo de otros minerales por la planta a través
de su comportamiento o por la reducción de la población de microbios del suelo (Benavides
et al., 2005).

5
c. Cadmio en la planta

El cadmio es un elemento no esencial que afecta negativamente el crecimiento y desarrollo

de plantas (Benavides et al., 2005). Es uno de los más peligrosos metales debido a su alta
movilidad y los efectos que comienzan a aparecer en las plantas con solo pequeñas
concentraciones (Barceló et al., 1986).

El ingreso del cadmio a la planta es en forma de Cd+2, la capa de células epidérmicas

especialmente los pelos radiculares, son las primeras y más activas en la absorción de Cd+2 (Nigam
et al., 2001; Seregin e Ivanov, 1997). A continuación, se proponen tres vías de entrada del
cadmio en la raíz (Song et al., 2017):

Primera ruta: En la membrana plasmática de las células epidérmicas de la raíz, el dióxido de

carbono (CO2) se disocia en iones de hidrógeno (H+) y bicarbonato (HCO3−) como parte del
proceso de respiración de la planta. Los iones de hidrógeno (H+) intercambian su lugar con
los iones de cadmio (Cd+2) presentes en el suelo, lo que resulta en la adsorción del metal en
la superficie de las células epidérmicas de la raíz. Este proceso de adsorción es rápido y no
requiere de energía, y precede a la posterior absorción de Cd2+ en la epidermis a través de la
vía del apoplasto.

Segunda ruta: Dado que el cadmio es considerado un elemento no esencial, se asume que las
plantas no tienen mecanismos específicos de entrada para él. El Cd ingresa a las células
vegetales a través de la vía simplasto con las proteínas transportadoras que normalmente se
utilizan para metales esenciales como el hierro (Fe+2), el zinc (Zn+2) y el calcio (Ca+2).

Tercera ruta: Para aumentar la disponibilidad de iones en el suelo de la rizosfera las raíces
secretan compuestos de baja masa molecular, como los ácidos mugineicos (MA), que forman
complejos con los iones de Cd2+. De esta manera, el Cd2+ ingresa a la capa de la epidermis
de la raíz en forma de quelatos mediante proteínas.

Una vez dentro su concentración no es la misma en las diferentes partes de la planta.

Generalmente la secuencia es: raíces > tallos > hojas> frutas> semillas (Herrera, 2011).

La presencia de cadmio en la planta produce síntomas visibles como la clorosis debido a la

disminución del contenido de clorofila A, clorofila B y carotenoides (De Andrade et al.,
2008). Según Van Assche y Clijsters (1990), dos posibles mecanismos pueden ser los
responsables de la disminución del pigmento de clorofila: La inhibición de la protoclorofilida
reductasa y de la enzima que divide el agua ubicada en el sitio oxidativo del fotosistema II

6
dentro de la cadena transportadora de electrones. Entre otros daños acentuados tenemos la
reducción del crecimiento, desbalance nutricional y estrés oxidativo por la poca actividad de
la ATPasa de la fracción de la membrana plasmática. Se puede deducir que la disminución
de la actividad de esta enzima es causada por la alteración de la fluidez de la membrana y la
composición de lípidos, o por la unión de Cd a grupos SH de las proteínas (Fodor et al.,
1995). Por otro lado, el Cd induce a la formación químicas de especies reactivas de oxígeno
como el peróxido de hidrógeno (H2O2), iones peróxido (O2-) e hidróxido (OH⁻) y radicales
libres que produce daño celular en los tejidos (Lagriffoul et al., 1998).

El cadmio (Cd) también provoca la inhibición de las metaloenzimas al reemplazar metales

con cargas o tamaños similares, como el zinc (Zn+2) y el magnesio (Mg+2). El Mg, que se
encuentra en la enzima RuBisCo, puede ser sustituido por Cd, lo que conduce a la
descomposición de la enzima en sus subunidades (Myśliwa-Kurdziel et al., 2004).

Entre los cultivos más tolerantes tenemos al: girasol (Helianthus annuus), pak choi (Brassica
chinensis L.), Mostaza de la India (Brassica juncea), Noccaea caerulescens (Thlaspi
caerulescnes), Arabidopsis thaliana, Arabis paniculata, Arabis gemmifera, N. goesingensis
(T. goesingense) y N. praecox (T. praecox) (Hernandez-Fernandez, 2020).

De Andrade et al. (2008), mostraron los efectos destructivos de los metales pesados en la
biomasa de Heliathus annuus. Además, reportaron que la toxicidad del Cd disminuía el peso
seco de la parte área del girasol en un 22%, mientras que la asociación de Helianthus con
micorrizas aliviaba el efecto toxico mostrando un incremento de 10% de peso fresco en
comparación con plantas no asociadas con hongos micorrícicos.

d. Cadmio en fertilizantes fosfatados

Una de las vías de incorporación del cadmio a los suelos agrícolas es la fertilización
fosfatada. La roca fosfórica, es la materia prima de todos los fertilizantes fosfáticos,
constituida principalmente por apatita, que, además de P, contiene Cd en cantidades que
varían entre 8 y 500 mg kg-1 (Mar y Okazaki, 2012). Entonces se puede decir que el Cd
permanece en una proporción importante en los fertilizantes industrialesy posteriormente son
aplicados al suelo junto con el fósforo (Herrera, 2011).

Gonçalves et al. (2008), en su investigación cuantificaron que el contenido de cadmio en los

fertilizantes fosfatados oscilaba entre el rango de 0.67 y 42.93 mg kg-1 siendo el fosfato
natural con el contenido más alto de Cd. En su investigación sobre biodisponibilidad de

7
cadmio en fertilizantes fosfatados encontró que el superfosfato triple contenía 25.92 mg Cd
kg-1. Adicionalmente, sin embargo, en la investigación de Campos (2005) encontró 50 mg
Cd kg-1 con el método 3051A y 80 mg Cd kg-1 con el método USEPA 3050B en el mismo
fertilizante.

Entre estos factores decisivos que determinan si una mayor disponibilidad y acumulación de
Cd en el suelo por plantas ocurrirá o no con el tiempo son la entrada neta de Cd y el cambio
en la solubilidad o disponibilidad del Cd agregado de los fertilizantes a lo largo del tiempo
(Lambert et al., 2007).

Mortvedt (1987), encontró niveles de Cd en cultivos entre 0.04 y 0.09 mg kg-1, después de un
largo período de fertilización fosfatada con superfosfato triple. Los contenidos de Cd
encontrados en la parte aérea y raíces de la avena negra fueron similares. Sin embargo,
también registró que la aplicación con fertilizante fosfatados con menos de 10 mg Cd kg-1,
no registran aumentos significativos en las concentraciones de cadmio a largo plazo.

A pesar de las evaluaciones que se ha tenido de la disponibilidad de cadmio en los

fertilizantes fosfatados, pocos exámenes han demostrado la transferencia eficaz del cadmio
proveniente del fertilizante a la planta, especialmente bajo condiciones de campo. En la
literatura no hay un consenso sobre como las aplicaciones continuas defertilizantes fosfatado
podría afectar la fitodisponiblidad del cadmio en los suelos. Sin embargo, investigaciones en
Australia y el Reino Unido afirman que las aplicaciones continuas a largo plazo, podrían
aumentar la concentración de cadmio en la superficie de los suelos (Lambert et al., 2007).

Actualmente la estrategia está orientada al uso de los fertilizantes fosfatados con bajas
concentraciones de este metal. Por esta razón, en lugares como Japón, Australia y algunos
países de Europa se han propuesto límites de tolerancia en la concentración de Cd de los
fertilizantes fosfatados que se comercializan. En Japón se acepta un máximo de 8 mg de Cd
para fertilizantes fosfatados, en Australia el valor es de 300 mg kg-1.

2.1.4 Fitorremediación de suelos

Debido al aumento significativo de contaminación por metales pesados en suelos agrícolas

se han propuesto varias metodologías para su remediación, dentro de estas se encuentra la
fitorremediacción, definido como el uso de plantas verdes para la eliminación de
contaminantes del medio ambiente o para hacerlos menos ofensivos (Salt et al., 1998). Esta
alternativa ha sido desarrollada como un costo efectivo y un método de remediación, que es

8
ecoamigable con el medioambiente (Do Nascimento y Xing, 2006). La fitorremediación de
suelos está dividida en las siguientes áreas: fitodegradación, rizofiltración, fitoestabilización,
fitovolatilización y fitoextración; siendo esta última el área más estudiada científica y
tecnológicamente en el paso de los años (Salt et al., 1998).

La fitoextracción se basa en el uso de las plantas para la extracción y translocación de los

metales a sus órganos cosechables. El objetivo es reducir la concentración de metales en los
suelos. Este proceso de extracción depende de la habilidad de selección de plantas para el
crecimiento y acumulación bajo condiciones climáticas específicas y características del suelo
del sitio que será estudiado además de la solubilidad del metal (Do Nascimento y Xing,
2006; Sheoran et al., 2016).

Los compuestos químicos que se pueden presentar en la rizósfera están claramente asociados
con el aumento de la absorción de metales del suelo y su translocación a los brotes. Los
ácidos orgánicos de bajo peso molecular son probablemente los exudados más importantes
en sistemas de fitoextracción. Es el principal factor relacionado con la movilización de
metales en el suelo y su acumulación en las plantas (Do Nascimento y Xing, 2006).

El éxito de la fitoextracción depende de la interacción entre el suelo, metales y plantas. La

concentración del contaminante en el suelo y la disponibilidad del metal para que sea tomado
por la raíz son muy importantes. Este último está influenciado por factores, como pH,
potencial redox, capacidad de intercambiocatiónico, tipo de suelo y textura del suelo. Sin
embargo, la baja biodisponibilidad delos metales pesados, baja biomasa de los acumuladores
naturales y la limitada translocación de los metales a las raíces limitan la eficiencia de la
fitoextracción (Sheoran et al., 2016).

a. Plantas fitoextractoras

Las características deseables para las especies de plantas exitosas para la fitoextracción son:

i) Rápido crecimiento y alta biomasa

ii) Sistema radicular extendido para abarcar largos volúmenes de suelo
iii) Buena tolerancia a altas concentraciones de metales en los tejidos
iv) Alto factor de translocación
i) Adaptabilidad a diferentes ambientes
ii) Fácil manejo agronómico (Song et al., 2017).

9
Las raíces de las plantas fitoextractoras cumplen un papel importante pues la cantidad
potencial de metal que ingresará a la planta va a depender de la profundidad que alcanza la
raíz y con esta también varía la densidad. La mayoría de las raíces están cerca de la superficie
del suelo. Mientras la profundidad aumenta la densidad de las raíces disminuye (Robinson
et al., 2003).

Generalmente es aceptado que la concentración de cadmio en las plantas sea entre 0.2 a 0.8
mg kg -1 y concentraciones toxicas están definidas desde 5-30 mg kg -1 (Mirecki et al., 2015).

2.1.5 Helianthus annuus

a. Capacidad fitorremediadora

El girasol (Helianthus annuus L.) es un fitoextractor potencial de cadmio, níquel, cobre,

zinc, cromo, plomo y radioisótopos. Es considerada una de las mejores opciones al momento
de realizar una remediación de suelo por su rápido crecimiento,producción de alta biomasa,
rápido crecimiento y a su capacidad de resistir altas concentraciones de metales pesados e
hidrocarburos que se acumulan en sus brotes y de esta manera logran desintoxicar el suelo
hasta cierto punto (Chauhan y Mathur, 2018; Shakoor, 2017).

Esta especie es usada en procesos de remediación debido a su facilidad de estabilizar los

metales pesados almacenándolos en sus raíces y tejidos foliares como hojas, tallos, flores y
semillas. Este proceso de acumulación se da por la presencia de grupos funcionales en los
exudados de la planta (Gómez, 2019).

Estudios realizados por Peña y Beltrán en el 2017, afirman que Helianthus annuus es una
planta hiperacumuladora de Cd y Zn con un coeficiente de fitoextracción y factor de
translocación mayor a 1. Las plantas hiperacumuladoras son aquellas que tienen la
capacidad de acumular metales y oligoelementos metaloides en una concentración que es
100 veces mayor que las plantas “normales” que crecen en el mismo medio (van der Ent et
al., 2013).

Es importante mantener a la planta del girasol en un buen desarrollo y crecimiento, para

que pueda acumular la mayor cantidad de metales pesados en su biomasa mostrando una
alta tolerancia en suelos con altos niveles, para ellos se le debe brindar los nutrientes
necesarios, así como los riegos pertinentes (Rostami y Azhdarpoor, 2019).

10
2.1.6 Hongos Micorríticos Arbusculares

Los hongos micorrícicos arbusculares (HMA) juegan un rol importante en el crecimiento y

desarrollo de la planta favoreciendo la absorción de agua y nutrientes, además del
desempeño de importantes funciones en el suelo y protección de la planta bajo condiciones
adversas de estrés bióticos o abiótico como la presencia de metales pesados en el suelo
(Ferreira y Barbosa, 2019).

Los HMA pueden tolerar altas concentraciones de metal en el suelo, por eso son importantes
en la biorremediación de áreas contaminadas. Su utilización para la acumulación de metales
pesados en la planta hospedante genera una protección contra el estrés por metales pesados
ya sea a través de la absorción limitada o la producción mejorada de biomoléculas (Amna et
al., 2015). Las plantas micorriticas confieren mayor tolerancia en estos ambientes
contaminados a través de mecanismos como la inmovilización y quelación de metales
pesados en las hifas (Brunetti et al., 2018).

a. Glomus intraradices

Uno de los géneros de hongos micorrícicos arbusculares más importantes es Glomus sp, el
cual es capaz de colonizar una gran variedad de especies hospedantes, incluyendo el girasol
(Herzig et al., 2014). Frecuentemente, especies que pertenecen a este género se encuentran
conectados simbióticamente con las raíces de las plantas que crecen en áreas metalíferas
debido a sus altas cantidades de esporulación que favorece su supervivencia en ambientes
perturbados (Kaur y Garg, 2018; Wei et al., 2015).

Se ha reportado que el uso de la especie Glomus intraradices ayuda al incremento del

contenido de clorofila de la planta asociada, esto debido al aumento del consumo de
nutrientes (Amna et al., 2015). Andrade et al. (2008) reportaron que plantas sin asociación
de micorrizas exhibían una disminución de 26 % en su contenido de clorofila mientras que
plantas con micorriza solo un decline de 12 %.

La presencia de metales pesados puede traer efectos negativos en la micorrización causando

inhibición de procesos como la germinación de esporas, esporulación, colonización de
raíces, ramificación de hifas y arbúsculas (Wang, 2017).

Según Chen et al. (2016), la colonización de Glomus intraradices en machos de Populus

deltoides se desarrolló satisfactoriamente en suelos con una cantidad de cadmio de 10 mg

11
kg-1. Mientras que Aghababaei et al. (2014), trabajaron con cantidades de cadmio en el suelo
de 20 mg kg-1 donde registró una disminución marcada del carbono de la biomasa microbiana
en la colonización de Glomus intraradices en Zea mays.

De acuerdo con Davies et al. (2001), la asociación de girasol con HMA mejora la
acumulación y la tolerancia de la planta a metales pesados, así como su vigor lo que condujo
a una mayor biomasa y mejor extracción de los metales. Llegando a la conclusión que la
asociación Glomus-girasol podría ser un excelente candidato para la extracción cuando se
trasplanta a campo.

De esta manera, el uso de microorganismos tiene la ventaja de tener un costo relativamente

bajo, representa una técnica efectiva de biorremediación comparado con otro método. Se
trata de un procedimiento natural y usualmente sin la presencia de productos tóxicos (Manjhi
et al., 2016).

2.2 ANTECEDENTES

Bonomelli et al. (2003) evaluaron órdenes de suelo como Inceptisols, Alfisols, Ultisols y
Andisols a los cuales se le agregó 30 mg P kg-1 empleando, superfosfato triple (SFT), que
tenía una concentración de 53.2 mg Cd por kg de fertilizante. Se mantuvo el suelo por 90
días a 25 °C y humedad de capacidad de campo. Se midió la concentración de Cd disponible
a los 1, 2, 7, 14, 21, 36, 49, 63, 77 y 90 días después de la incubación y se concluyó que la
aplicación de SFT en una dosis agronómica si afecta significativamente en la concentración
de Cd disponible en los suelos.

Dada (2019), inoculó dos especies de HMA: Glomus intraradices y Glomus mosseae en
semillas de malezas y encontró que el Amaranthus spinosus es capaz de translocar el cadmio
a la parte área de la planta mientras que las otras especies actúan como fitoestabilizadoras
en ausencia de micorrizas. En general, las plantas bajo inoculación de hongos se mostraron
como fitoextractoras de cadmio, resaltando el Amaranthus spinosus que bajo la influencia
de Glomus intraradices presentó el índice de movilidad de cadmio más alto.

Ordoñez et al. (2021), evaluaron el efecto de la inoculación con Rhizophagus irregularis y

la fertilización fosfatada en la comunidad local de HMA en yuca, y aplicaron tres niveles de
fertilización (0, 100.5, 201 kg ha-1 de fosfato diamónico) para suelos inoculados y para los

12
no inoculados, para un total de seis tratamientos. Los resultados muestran que las
comunidades de HFMA asociadas a plantas de yuca tienen en su mayoría especies del género
Claroideoglomus, Glomus, Rhizophagus, Acaulospora y Diversispora. Se detectaron que los
géneros Glomus y Acaulospora fueron los más afectados en la inoculación de Rhizophagus
irregularis y por la fertilización fosfatada disminuyendo así su porcentaje de abundancia
relativa del hongo.

Muñoz (2022) evaluó los niveles de cadmio en suelos los cuales han sido fertilizados con
fertilizantes fosfatados por muchos años en parcelas de mandarina, maracuyá, caña de
azúcar, palta y maíz. Se muestreó el suelo de dos profundidades (0-20 cm y 20-60 cm) en
los cinco cultivos para la caracterización y determinación de contenido de cadmio. Los
resultados mostraron que los suelos tienden a tener un pH básico el cual no es favorable para
una alta disponibilidad de cadmio el cual abunda más en suelos ácidos. Del mismo modo,
los suelos resultaron con un bajo contenido de materia orgánica por lo tanto la fijación
temporal del cadmio en el suelo era baja. Hubo una ligera superioridad de cantidad de cadmio
en la capa superficial de 0-20 cm. Los niveles más altos de cadmio en el suelo se hallaron en
las parcelas de mandarina y maíz, sobrepasando el límite máximo permisible según el plan
de estándares de calidad ambiental de Ministerio del Ambiente (1.4 mg kg-1) debido a que
estos suelos fueron los que recibieron una mayor fertilización fosfatada durante varios años
lo que concluye que al aumentarse el nivel de fertilización fosfatada en forma continua
podría aumentar ligeramente los niveles de cadmio.

Según la investigación de Suaña (2018), el cual tenía como objetivo determinar la capacidad
de absorción del girasol en suelos contaminados con cadmio al interior de un invernadero.
Se analizaron las hojas, tallos, raíces del girasol y también el suelo después del proceso de
fitorremediación. El suelo presentó un valor entre 21.76 a 24.36 mg Cd kg-1. Se encontró
que la cantidad de cadmio fue mayor en la raíz con un 1.80 mg Cd kg-1 mientras que en el
tallo se obtuvo 0.27 mg kg-1 y en la hoja 0.29 mg kg-1. Se concluye que la mayor absorción
de cadmio se produce a nivel radicular con una media de absorción de 5.72 %.

Lama (2018) llevó a cabo el experimento en el laboratorio de fertilidad de suelos en la

Universidad Nacional Agraria La Molina. La recolección de suelo fue de tres distritos de
Lima: El Olivar en San Isidro, Campo de Marte en Jesús María y Colmenares en Pueblo
Libre. Se colocaron en macetas y se realizó la siembra de los girasoles. El riego fue con dos
calidades de agua, una con 0 y otro con 250 mg Pb kg-1, además se inocularon con hongos

13
micorríticos arbusculares (HMA). Se cosechó en tres fechas diferentes (49, 71, 101 días
después de la siembra) y se evaluó la extracción de plomo en cada cosecha. Se concluyó que
la mejor eficiencia del girasol para la extracción de plomo es hasta los 71 con la inoculación
de HMA. Por lo tanto, se puede decir que el uso del girasol inoculado con HMA es una
opción fitorremediadora a largo plazo en los parques de Lima.

Clemente et al. (2021) probaron concentraciones de 0, 10, 15, 20, 25 mg Cd kg-1 de suelo y
evaluaron altura, producción de materia seca y concentración de Cd en raíz, tallo, hoja e
inflorescencia resultando que la concentración de cadmio en cualquier concentración no
afecta el crecimiento del girasol siendo el índice de tolerancia 1 lo que demostró que esta
planta es tolerante al Cd. Además, se encontró que mientras la dosis de Cd sea más alta, la
concentración del mismo aumenta en la planta. Se concluyó que el girasol se comporta como
un fitoestabilizador debido a que la raíz concentró más cadmio que la parte aérea lo que da
un factor de translocación menor a 1.

14
 III. MATERIALES Y METODOS

3.1 UBICACIÓN DEL CAMPO EXPERIMENTAL

La investigación se llevó a cabo en el Laboratorio e Invernadero de Fertilidad del Suelo

“Sven Villagarcía Hermoza” de la Universidad Nacional Agraria La Molina ubicada en el
departamento de Lima, provincia de Lima, distrito de La Molina:

• Latitud Sur: 12° 4’

• Longitud Oeste: 76° 56”
• Altitud: 243 m.s.n.m
• Departamento: Lima
• Provincia: Lima
• Distrito: La Molina

3.2 SUELO

Se utilizó aproximadamente 240 kg de suelo extraídos de la capa arable (20 cm de

profundidad) de campos agrícolas de la Universidad Nacional Agraria La Molina. Para
identificar el suelo, se realizó un análisis de caracterización y contenido de cadmio
preliminar (Anexo 1) en el Laboratorio de Suelos, Aguas, Plantas y Fertilizantes (LASPAF)
de la UNALM. Posteriormente se tamizó el suelo recolectado y esterilizó en autoclave a 200
°C para eliminar microorganismos del suelo que puedan afectar el desarrollo de las
micorrizas.

El análisis de caracterización efectuado en el LASPAF de la UNALM, el suelo muestra una

textura Franco Arcillo Arenoso; muy ligeramente salino (CE (1:1) =1.80 dS m-1), reacción
alcalina (pH(1:1) = 7.73), presencia de carbonatos de 6.26 %, con un alto contenido de P (35.8
mg kg-1) y un contenido medio de K (356 mg kg-1). La CIC fue baja (9.92 meq 100g-1 suelo)
y un bajo porcentaje de materia orgánica de 1.89 (Anexo 1). Como información adicional se
resalta que el suelo superficial de la zona, presenta una concentración total de Cd de 2.37
mg kg-1 (Anexo 2).

15
3.3 AGUA

Durante el experimento, se utilizó agua proveniente de Huachipa, la cual presentaba un pH

ligeramente alcalino y no mostraba problemas de salinidad. Los resultados del análisis no
indicaron alguna restricción para utilizarla como agua de riego (Tabla 3).

Tabla 1: Análisis de agua usado en el experimento

Muestra pH C.E Cd total (mg L-1)

Agua de Huachipa 7.14 0.87 0.006

3.4 MATERIALES Y EQUIPOS

3.4.1 Semillas

La variedad ornamental de semillas de Helianthus annuus usada fue Sunrich Golden

3.4.2 Micorrizas

Se usó el producto comercial Mycosym Triton®, con contenido activo de 200 IMP/mg (IMP
= esporas + hifas + fragmentos de raíces micorrizadas) el cual tiene como hongo micorrícico
a la especie Glomus intraradices.

3.4.3 Fertilizantes

Las fuentes inorgánicas empleadas en el experimento fueron las siguientes:

- Nitrato de amonio: 33 % N, 3 % P2O5

- Superfosfato triple de calcio: 46 % P2O5
- Sulfato de potasio: 50 % K2O, 18 % S

3.4.4 Fuente de cadmio

La fuente usada fue nitrato de cadmio tetrahidratado Cd(NO3)2 • 4 H2O al 99 % de pureza

3.4.5 Ensayo experimental

Los materiales usados en la etapa experimental de campo fueron los siguientes:

16
 - 60 macetas de 4 kg de capacidad
- Semillas de girasol
- Nitrato de cadmio
- 1 bolsa de hongos micorrícicos
- Guantes de látex
- Mesas de invernadero
- Wincha
- Mascarillas
- Estufa
- Baño María
- Conductivímetro
- Jarras de 1 L
- Balanza de precisión
- Bolsas de papel
- Bolsas de plástico con cierre hermético
- Rejas de protección
- Fertilizantes
- Sacabocado
- Tijera de podar
- Suelo
- Autoclave

Los materiales usados en la etapa de laboratorio fueron los siguientes:

- Matraces
- Ácido nítrico perclórico
- Agua desionizada
- Campana extractora
- Lentes de protección
- Máscara antigás

3.5 TRATAMIENTOS

Se contaron con doce tratamientos utilizando dos condiciones (suelo inoculado con HMA y
suelo no inoculado con HMA), dos dosis de fósforo (0, 200 mg P2O5 kg-1) y tres dosis de

17
cadmio (0, 15, 30 mg kg-1). Para cada tratamiento hubo cinco repeticiones lo que hace un
total de sesenta macetas que contenían 2 plantas de girasol, tomado uno una unidad
experimental.

Tabla 2: Dosis de los tratamientos

Fósforo Cadmio
HMA Tratamientos
(mg P2O5 kg-1) (mg Cd kg-1)

0 T1
0 15 T2
Presencia
30 T3

0 T4
200 15 T5

30 T6

0 T7

0 15 T8
Ausencia
30 T9

0 T10

200 15 T11

30 T12

3.6 METODOLOGÍA

3.6.1 Instalación de macetas

Luego de realizar la esterilización del suelo, se procedió a extenderlo en costales limpios con
el fin de permitir un secado uniforme al aire libre. Las macetas fueron lavadas y debidamente
etiquetadas.

Se taparon los orificios de la base con cinta masking tape para evitar una pérdida excesiva
de agua. Una vez que el suelo secó, se añadieron 4 kg a cada maceta, los cuales se pesaron
con precisión utilizando una balanza. Posteriormente, las macetas se colocaron en las mesas
de ensayo.

18
3.6.2 Contaminación

Para el proceso de contaminación del suelo se adicionó al tratamiento de 15 mg Cd kg-1 y 30

mg Cd kg-1 (166.3 mg y 332.7 mg de Cd(NO3)2.4H2O, respectivamente). Estas cantidades se
disolvieron en 250 ml de agua destilada y se agregaron a cada maceta correspondiente de
manera uniforme. Se permitió que el compuesto se estabilizara durante un período de 10 días
antes de proceder a la siembra.

En cuanto a las macetas restantes a las cuales le corresponde 0 mg kg-1 de cadmio, no se

realizó ninguna contaminación. Se le agregó la misma cantidad de agua inicial que en los
otros tratamientos.

3.6.3 Fertilización con fósforo

Se agregó al suelo una cantidad de 1.47 g de superfosfato triple por cada maceta a la cual le
corresponde el tratamiento con 200 mg P2O5 kg-1. Previamente se le realizó un análisis de
metales pesados para saber el contenido de cadmio que presentaba. La cantidad de Cd
encontrado en el superfosfato triple usado para la fertilización de las plantas de girasol fue
leída por espectrofotometría de absorción atómica se muestra en la Tabla 3.

Tabla 3: Contenido de cadmio en el fertilizante superfosfato triple

Cd total
Muestra
mg kg-1

Superfosfato triple 23.40

3.6.4 Inoculación de HMA

Para llevar a cabo la inoculación de HMA, se utilizó el producto comercial Mycosym

Triton®. La cantidad recomendada para agregar a cada maceta fue de 350 g, los cuales se
distribuyeron en la profundidad media de la maceta.

Para conocer el porcentaje de colonización de los hongos en las raíces de la planta de girasol
se realizó el método estándar usando azul de tripano en el Laboratorio de Microbiología de
Suelos de la Universidad Nacional Agraria La Molina. Los resultados se muestran en el
Anexo 9.

19
3.6.5 Siembra

La siembra del girasol se realizó diez días después de la contaminación de suelo. Cuatro
semillas fueron colocadas en cada maceta distribuidas uniformemente de manera superficial,
y fueron cubiertas con una capa fina de suelo para luego ser regadas cuidadosamente con
250 ml de agua para evitar que las semillas se hundan. El desahije se llevó a cabo dos
semanas después de la siembra, quedando dos plantas por maceta.

3.6.6 Riegos

Durante las primeras semanas posteriores a la siembra, las macetas recibieron un riego diario
de 250 ml de agua. Sin embargo, después de un mes, la cantidad de riego se incrementó a
500 ml por maceta. A medida que las plantas comenzaron a florecer, se aumentó la cantidad
de riego a 1 L de agua diariamente.

3.6.7 Fertilización

La primera fertilización con N y K2O se realizó a los 20 días después de siembra con 50 mg
kg-1 de cada elemento para cada maceta, la segunda fertilización fue 20 días después de la
primera con 50 mg kg-1 de para cada uno. A los 50 días después de la siembra se procedió a
fertilizar con nitrato de calcio con 40 mg kg-1 por maceta y la última fertilización fue con
nitrato de magnesio con 50 mg kg-1 a los 70 días después de la siembra.

3.6.8 Evaluación de variables biométricas

Para la recopilación de datos, se empleó un sistema de códigos QR vinculado a la aplicación

Fieldbook. Este sistema posibilitó la identificación individual de cada planta en su respectivo
tratamiento. Los códigos QR se escanearon de manera periódica, cada vez que era necesario
registrar información relacionada con las diversas variables biométricas

3.6.9 Medición de altura

En el proceso de registro de la altura de las plantas, se empleó una cinta métrica para llevar
a cabo las mediciones. En total, se realizaron tres mediciones. Las dos primeras consistieron
en medir la distancia desde el cuello de la planta hasta el brote apical, mientras que en la
tercera se registró la distancia desde el cuello de la planta hasta el extremo de la
inflorescencia. Estas mediciones se llevaron a cabo en los días 21, 35 y 77 después de la
siembra, respectivamente.

20
3.6.10 Medición del índice de estabilidad de la membrana (MSI)

Para este procedimiento se realizó según Das et al., (2018); se retiraron dos muestras de 1 g
de materia fresca de una hoja de la planta del girasol con un sacabocado para todos los
tratamientos para luego poner cada muestra en fiolas de 25 ml y agregarle 10 ml de agua
desionizada. Para las primeras muestras se procedió a introducir las fiolas en un equipo a
baño maría por 30 minutos a una temperatura de 40 °C (C1) y para las segundas muestras se
colocó a 10 min con una temperatura de 100 °C (C2), se dejó enfriar para luego medir la
conductividad eléctrica de todas las muestras con el potenciómetro. Una vez con estos datos
podemos hallar el índice de estabilidad de la membrana con la siguiente fórmula:

MSI = [1 – (C1/C2)] × 100

3.6.11 Cosecha

A los 78 después de la siembra se procedió a cortar el girasol en el cuello de planta separando

así la parte aérea de la raíz Se dividió en tallo, hojas, inflorescencia y raíz (previamente
lavadas) y se pesó cada una de estas.

Después del pesado en fresco, todas las muestras fueron lavadas con agua desionizada y se
llevaron a estufa por 72 horas a 75 °C para el pesado de materia seca. Una vez que todas las
muestras estaban completamente secas se pasó a la molienda, esta acción se hizo con una
trituradora a motor la cual se limpiaba cada vez que se cambiaba de muestra para evitar la
contaminación con otras, la molienda extraída fue depositado en bolsas ziploc etiquetadas.

3.6.12 Digestión ácida

Se pesó 1 g de muestra molida tanto de tallo, raíz e inflorescencia y se colocaron en matraces

con sus respectivas etiquetas. Luego se agregó a cada matraz 15 ml de mezcla de ácidos
nítrico y perclórico, esta acción se llevó a cabo en la campana extractora de gases y con el
equipo de protección personal. Los matraces fueron colocados en la plancha térmica a 175
°C por 8 horas hasta que el ácido se evaporó y la muestra cristalizó.

Después de que los matraces se hayan enfriado se agregó 25 ml de agua desionizada caliente
para disolver los cristales y se procedió a filtrar para que la alícuota no contenga impurezas,
el líquido fue recibido en tubos Corning para ser llevadas al laboratorio a ser analizadas por
el para determinar el contenido de cadmio y fósforo.

21
3.6.13 Diseño y tratamiento experimental

Los tratamientos se distribuyeron bajo un diseño experimental completamente al azar con

un arreglo factorial de 2*2*3 con cinco repeticiones dando un total de 60 unidades
experimentales. Se realizó el análisis de varianza de las variables estudiadas. Posteriormente,
se usó la prueba de Tukey con un nivel de significancia de 0.05 de probabilidad para los
efectos principales y de interacción. El análisis estadístico se realizó con el programa de
software R versión 4.3.0 (R Core Team, 2023)

Modelo aditivo lineal

Yijk =  +αi +βj + γk + (αβ)ij + (αγ)ik + (βγ)jk + (αβγ)ijk + εijk
Para:
i= 1, 2
j= 1,2
k= 1,2,3
Donde:
Yijk(l) = Variable respuesta al usar la i-ésima condición de micorrizas, la j-ésima
dosis de fósforo y la k-ésima dosis de cadmio.
= Es el efecto de la media general.
Αi = Es el efecto de la i-ésima condición de micorrizas
βj = Es el efecto de la j-ésima dosis de fósforo
γk = Es el efecto de la k-ésima dosis de cadmio.
(αβ)ij = Es el efecto de la interacción de la i-ésima condición de micorrizas y la j-
ésima dosis de fósforo.
(αγ)ik = Es el efecto de la interacción de la i-ésima condición de micorrizas y la k-
ésima dosis de cadmio.
(βγ)jk = Es el efecto de la interacción de la j-ésima dosis de fósforo y la késima
dosis de cadmio.
(αβγ)ijk = Es el efecto de la interacción de la i-ésima condición de micorrizas, la j-
ésima dosis de fósforo y la k-ésima dosis de cadmio.
Εijk = Efecto del error experimental.

22
 IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La aplicación de los tres factores de estudio (HMA, cadmio, fósforo) al cultivo de girasol para
el objetivo de remediación de suelos contaminados dio como resultado la siguiente significancia
para las variables estudiadas (Tabla 4). A continuación, se detalla los resultados:

Tabla 4: Análisis de varianza de los factores de estudio micorrizas, cadmio y fósforo para
las variables concentración de cadmio en la inflorescencia, tallo y raíz; factor de
translocación; índice de estabilidad de la membrana, extracción total de cadmio y altura.

Índice de
Inflores- Factor de Extracció Peso
Tallo Raíz estabilidad Altura
F.V GL cencia transloca- n total de seco
[Cd] [Cd] de la (cm)
[Cd] ción Cd (g)
membrana

HMA 1 N.S N.S *** N.S *** *** *** N.S

Cadmio 2 *** *** *** *** ** *** N.S N.S

Fósforo 1 ** ** N.S N.S *** *** *** N.S

HMAxCadmio 2 * *** *** N.S *** *** N.S N.S

HMAxfósforo 1 N.S N.S N.S N.S ** ** N.S N.S

Cadmioxfósforo 2 N.S N.S N.S N.S * * N.S N.S

HMAxCadmio 2 N.S N.S N.S

N.S N.S N.S N.S N.S
xfósforo

GL: Grados de Libertad, *, significativo para el nivel del 5%; **, significativo para el nivel de 1%; ***,
significativo para el nivel de 0.5.

23
4.1 PESO SECO TOTAL

En el ANVA de la variable peso seco total se halló que los factores HMA y fósforo son
significativos (Tabla 4).

Para el factor micorriza se realizó una comparación de medias obteniendo 70.5 g para el
tratamiento inoculado con hongos micorrícicos, mientras que el no inoculado 61.9 g (Figura
1).

Peso seco
72 a
70
68
66
gramos

64 b
62
60
58
56
Presencia Ausencia
HMA

Figura 1. Prueba de efectos principales para el peso seco total

del girasol bajo efecto de presencia y ausencia del HMA

Para el factor fósforo se halló 60.7 g para el tratamiento sin fertilización y 71.7 g con
fertilización (Figura 2)

Figura 2. Prueba de efectos principales para el peso seco total

del girasol bajo efecto de dos dosis de fósforo

24
4.2 CONCENTRACIÓN DE CADMIO EN LA INFLORESCENCIA

En el ANVA de la variable concentración de cadmio en la inflorescencia se halló que los

factores cadmio y fósforo son significativos al igual que el factor cadmio x HMA (Tabla 4).

Para el factor cadmio se realizó una comparación de medias para las tres dosis aplicadas al
suelo, para el tratamiento que no fue contaminado con Cd se obtuvo 0.09 mg kg-1 siendo el
valor más bajo. Para los suelos con 15 y 30 mg Cd kg-1 se obtuvo la concentración de 0.28
y 0.46 mg Cd kg-1, respectivamente en la inflorescencia siendo este último la mayor cantidad
de cadmio (Figura 3).

Concentración de Cd en la inflorescencia

0.50 a

0.40
[mg Cd kg-1]

b
0.30
0.20
c
0.10
0.00
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Figura 3. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio

en la inflorescencia del girasol bajo efecto de tres dosis de cadmio

Para la comparación de promedios del factor fósforo se observó que con el tratamiento 200
mg kg-1 se extrajo una concentración de 0.24 mg Cd kg-1, mientras que con el tratamiento
que no fue fertilizado con fósforo se halló 0.31 mg Cd kg-1 (Figura 4).

Concentración de Cd en la inflorescencia
0.35 a
0.3
b
0.25
[mg Cd kg-1]

0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 200
Dosis mg P kg-1

Figura 4. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio

en la inflorescencia del girasol bajo efecto de dos dosis de fósforo
25
Al hacer la comparación de promedios para ver el efecto que tiene interacción HMA x
cadmio se observa que, si existen diferencias significativas entre los tratamientos con
diferentes dosis de Cd tanto para las dos condiciones de inoculación. La menor
concentración se obtuvo cuando el girasol estuvo en suelos sin contaminar con los valores
de 0.11 y 0.07 mg Cd kg-1 para suelos con ausencia de micorrizas y con presencia de hongos,
respectivamente. En el caso de 15 mg Cd kg-1 agregados al suelo se encontró valores de 0.30
y 0.27 mg Cd kg-1 en el capítulo del girasol, siendo valores más altos significativamente que
en el tratamiento anterior. Para la dosis más alta de Cd con la cual se contaminó el suelo, se
observa que el promedio para la planta que no estuvo expuesta a las micorrizas es de 0.42
mg Cd kg-1 siendo significativamente igual al promedio de aquella planta que si tuvo
presencia de micorrizas con 0.51 mg Cd kg-1 en la inflorescencia.

Con estos resultados se puede notar que la concentración de Cd en la inflorescencia va a

depender de la cantidad de cadmio que se encuentra en el suelo, al tener disponible mayor
cantidad de Cd, la planta extraerá mayor cantidad acumulándola en su inflorescencia, caso
contrario, si el suelo donde se está desarrollando no tiene una cantidad significativa del metal
pesado, no se encontrará mucho en los tejidos de la planta (Figura 5).

0.60
a
0.50
a
0.40
[mg Cd kg-1]

b
0.30 b

0.20
c
0.10 c

0.00
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Ausencia Presencia

Figura 5. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en la concentración de cadmio en la

inflorescencia del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA

26
4.3 CONCENTRACIÓN DE CADMIO EN EL TALLO

Los resultados del análisis de varianza muestran que los factores cadmio y fósforo son
significativas al igual que la interacción cadmio x HMA y en menor intensidad la interacción
cadmio x fósforo (Tabla 4).

Para el análisis de promedios del factor cadmio se pudo observar que la concentración más
baja fue de 0.06 mg Cd kg-1 y se encontró en los tallos de los girasoles que crecieron en
suelos que no fueron contaminados con el metal, en el tratamiento de 15 mg Cd kg-1 en el
suelo, se reportó una concentración de 0.53 mg Cd kg-1 del metal en el tallo y el valor más
alto de Cd encontrado fue de 0.86 mg Cd kg-1 para los tallos de los girasoles que estuvieron
en aquellos suelos que fueron contaminados con 30 mg Cd kg-1 (Figura 6).

Concentración de Cd en el tallo

1.00 a
[mg Cd kg-1]

b
0.50
c
0.00
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Figura 6. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio

en el tallo del girasol bajo efecto de dos dosis de cadmio

Para la comparación de promedios del factor fósforo se observó que con el tratamiento 200
mg kg-1 una concentración de 0.41 mg Cd kg-1 en el tallo mientras que con el tratamiento
que no fue fertilizado con fósforo se halló 0.55 mg Cd kg-1 (Figura 7).

Concentración de Cd en el tallo
0.6 a
0.5 b
[mg Cd kg-1]

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 200
Dosis mg P kg-1

Figura 7. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio

en el tallo del girasol bajo efecto de dos dosis de fósforo
27
Con respecto a la prueba Tukey entre las dosis de cadmio bajo efectos de ausencia y
presencia del HMA se puede observar que si existe diferencias significativas. Los menores
promedios de cadmio en el tallo fueron 0.07 y 0.06 mg kg-1 y lo obtuvieron los tratamientos
con 0 mg Cd kg-1 en ausencia y presencia de micorrizas respectivamente. Para el caso de 15
mg Cd kg-1 en el suelo se halló 0.55 y 0.50 mg Cd kg-1 en el tallo de las plantas de girasol
sin micorrizas y con micorrizas, respectivamente. La mayor concentración de cadmio se
obtuvo en los tallos de las plantas que estuvieron bajo el efecto de 30 mg kg-1 de cadmio en
el suelo, quiere decir la mayor concentración dentro de los tratamientos aplicados, se obtuvo
una cantidad de 0.70 y 1.03 mg Cd kg-1 en el tallo para plantas que no fueron inoculados y
que si tuvieron presencia de micorrizas, respectivamente, en este caso no se encontraron
diferencia significativas para estos dos escenarios, sin embargo aquellas plantas que tenían
una simbiosis con el hongo Glomus intraradices tuvieron un promedio ligeramente mayor
que aquella que no fue inoculado.

Al igual que la concentración de cadmio en la inflorescencia, el comportamiento de la

cantidad del metal pesado en el tallo también es escalonado y va a depender de la cantidad
de Cd se encuentra en el suelo, mientras mayor sea la dosis de cadmio mayor será extracción
por la planta, acumulándose en el tallo. Sin embargo, se puede notar que la cantidad
encontrada en el tallo es bastante reducida con la cantidad de Cd que se encontraba en el
suelo (Figura 8).

Concentración de Cd en el tallo
1.20
a
1.00
[mg Cd kg-1]

0.80 b
b
0.60 b

0.40

0.20 c c
0.00
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Ausencia Presencia

Figura 8. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en la concentración

de cadmio en el tallo del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA

28
4.4 CONCENTRACIÓN DE CADMIO EN LA RAÍZ
A partir de análisis de varianza para la variable concentración de cadmio en la raíz se muestra
que resultaron significativos los factores micorrizas y cadmio y la interacción de las
micorrizas x cadmio (Tabla 4).

Para el factor HMA en sus dos condiciones se pudo notar que ante una presencia de
micorrizas en las raíces del girasol la concentración de cadmio es mayor es de 3.99 mg kg-1,
mayor que en aquellas plantas que no contaron con la simbiosis las cuales presentaron 2.7
mg Cd kg-1 (Figura 9).

Concentración de Cd en el raíz

6
[Cd mg kg-1]

a
4 b
2

0
Presencia Ausencia
HMA

Figura 9. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio

en la raíz del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA

Para el factor cadmio en sus tres diferentes dosis se encontraron que la mayor cantidad de
concentración del metal lo tuvieron las raíces que estuvieron bajo 30 mg Cd kg-1 en el suelo
con un valor de 5.7 mg kg-1, seguido del tratamiento con 15 mg Cd kg-1 con una
concentración de 4.15 mg Cd kg-1 y el valor más bajo, 0.18 mg Cd kg-1, se halló cuando el
suelo no contenía Cd (Figura 10).

Concentración de Cd en el raíz

a
6.00
5.00 b
[Cd mg kg-1]

4.00
3.00
2.00
1.00 c
0.00
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Figura 10. Prueba de efectos principales para el contenido de cadmio

en la raíz del girasol bajo efecto de tres dosis de cadmio

29
Para la interacción HMA x cadmio se realizó la prueba Tukey con un intervalo de confianza
del 95 %, se muestra que si existen diferencias significativas entre los tratamientos aplicados.
Los valores más bajos de contenido de Cd en la raíz fueron de 0.19 mg kg-1 y 0.16 mg kg-1
en ausencia y presencia de micorrizas respectivamente en suelos sin Cd. Bajo los
tratamientos que contenían 15 mg Cd kg-1 en el suelo se halló que con ausencia de micorrizas
la raíz de girasol contenía 3.52 mg Cd kg-1 y con presencia, 4.69 mg Cd kg-1, siendo mayor
significativamente. El mayor contenido de Cd, 7.02 mg Cd kg-1, se encontró en las raíces
que crecieron en el tratamiento con 30 mg Cd kg-1 bajo presencia de micorrizas. Los
resultados muestran que a medida que la cantidad de cadmio en el suelo es mayor, la
concentración en la raíz va aumentando, tanto para las raíces que presentaron micorrizas
como las que no. Pero claramente se observa que la mayor concentración del metal pesado
se encuentra en las raíces que sí estuvieron bajo el efecto de la simbiosis del hongo
micorrícico (Figura 11).

Concentración de Cd en la raíz

8
a
7
6
[Cd mg kg-1]

b bc
5
4 c
3
2
1 d d
0
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Ausencia Presencia

Figura 11. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en la concentración de cadmio

en la raíz del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA

Los resultados en conjunto de las concentraciones de cadmio en las tres partes de la planta
estudiadas tienen relación con lo hallado por Clemente et al. (2021), quienes hallaron que al
incrementar las dosis de Cd en suelo aumenta la concentración de Cd en el girasol
especialmente en la raíz, concentrando un 62.6% del total, siendo un porcentaje menor a lo
hallado en este estudio donde se muestra que la raíz concentró un 79.8% para aquellas plantas
que no estuvieron bajo la presencia de micorrizas y 87.1% para las inoculadas.

30
Según Lux et al. (2011) y Wang et al. (2015), el almacenamiento del Cd en la raíz, el cual
genera en la planta un comportamiento de fitoestabilizadora se puede explicar por tres
mecanismos:

• La quelación del cadmio en las vacuolas por fitoquelatinas y otros tioles en células
radiculares.
• Impregnación de la suberina en la pared celular en el desarrollo de la exodermis y
endodermis que causa una restricción del paso de cadmio a la estela.
• Inmovilización en la pared celular de las raíces a través de enlaces con exudados
extracelulares como los ácidos poligalacturónidos.

El movimiento de la Cd de la raíz a la parte área de la planta se controla a través de tres

procesos (Mendoza et al., 2011):

• Secuestro de metales en la raíz

• Transporte hacía la estela
• Liberación a la xilema

De acuerdo con De María et al. (2013), se plantea la idea de que el girasol cuenta con un
mecanismo que limita la transferencia de cadmio desde sus raíces hacia la parte aérea de la
planta. Esta restricción en la translocación de Cd tiene como resultado la prevención de la
toxicidad en los tejidos más activos desde un punto de vista fisiológico, lo que, a su vez,
explica por qué las concentraciones de Cd en las inflorescencias son significativamente más
bajas en comparación con otros órganos de la planta.

Además, Cornu et al. (2020) argumentan que las variedades de girasol que son capaces de
mantener una concentración más alta de Cd en sus raíces o incluso en sus tallos, en lugar de
en sus hojas e inflorescencias, tienen una mayor capacidad para evitar la toxicidad debido a
que este proceso no afecta negativamente al metabolismo de los carbohidratos.

Según el ANVA para la variable concentración de cadmio en la raíz no se encontraron

diferencias significativas en el factor fósforo y sus interacciones siendo un factor que no
afectó la cantidad de cadmio que se podía encontrar en este órgano de la planta (Tabla 4).

Esto se puede explicar con el estudio de Gonçalves (2008) en el cual encontró que el
superfosfato triple (SFT) presenta una baja biodisponibilidad de cadmio para las plantas de
Avena strigosa, a pesar de tener un alto contenido de Cd (25.92 mg kg-1) valor que se asemeja
31
a lo hallado en el fertilizante usado (Tabla 3). Los resultados del estudio indicaron que la
solubilidad del Cd en el SFT no fue suficiente para que este elemento estuviera disponible
para las plantas a diferencia de otros fertilizantes fosfatados con mayores contenidos de Cd,
como el fosfato natural que varía entre 30.91 a 42.60 mg Cd kg-1 y si aumenta la cantidad de
Cd acumulado en las plantas.

Otra investigación similar por Huang et al. (2004), examinaron el efecto de diferentes fuentes
de Cd, incluyendo superfosfato triple (SFT), roca fosfórica (RP) y CdCl2, en la acumulación
de Cd en la lechuga en una agricultura intensiva de 2 años consecutivos. Los resultados
mostraron que hubo un efecto en el primer año en la disponibilidad de Cd en el suelo para el
SFT, RP y CdCl2. Además, la respuesta de la lechuga al SFT fue mayor en al segundo año.
Sin embargo, no tuvo un efecto significativo en la acumulación de Cd en la lechuga, mientras
que la aplicación de CdCl2 obtuvo la mayor acumulación en el área foliar y en el suelo en el
periodo de dos años pasando de 0 a 1440 g ha-1.

Estos resultados nos indican que el contenido total de Cd en el fertilizante y su grado de

solubilidad en agua no son las únicas características determinantes de la biodisponibilidad
del Cd para las plantas que crecen en suelos fertilizados con estos materiales.

4.5 EXTRACCIÓN TOTAL DE CADMIO

Los resultados del análisis de varianza para la variable extracción total de cadmio por la
planta de girasol mostró diferencias significativas en los factores HMA, cadmio, fósforo, las
interacciones de HMA x cadmio y HMA x fósforo (Anexo 6).

Para el factor HMA se realizó una prueba de efectos principales por lo que se puede observar
que el mayor promedio de concentración de cadmio en la planta de girasol lo tuvo aquellas
que estuvieron en simbiosis con el hongo Glomus intraradices con 49.7 µg Cd/maceta de
Cd por maceta a diferencia de aquellas que no fueron inoculadas con las micorrizas con 33.2
µg. Estos resultados tienen relación con la concentración de cadmio hallado en las diferentes
partes de la planta y el peso seco total del girasol, en las cuales los mayores valores se
hallaron en los tratamientos con presencia de micorrizas (Figura 12).

32
 Extracción total de cadmio
60
a
50

[µg Cd/maceta]
40 b
30
20
10
0
Ausencia Presencia
HMA

Figura 12. Prueba de efectos principales para la extracción total de cadmio

del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA

Para el factor cadmio se realizó la misma prueba donde se encontró que para el tratamiento
no contaminado, la extracción total de la planta hallada fue de 6 µg Cd/maceta. En el caso
del tratamiento con 15 y 30 mg Cd kg-1 fue de 49.7 y 68.7 µg Cd/maceta respectivamente
(Figura 13). Estos resultados van de la mano con lo hallado en la concentración de Cd en la
raíz, tallo e inflorescencia del girasol en la cual en todas las partes mostraron la mayor
cantidad de cadmio en las aquellas plantas que se desarrollaron en el suelo contaminado con
mayor cantidad de cadmio.

Extracción total de cadmio

80.0 a
[µg Cd/maceta]

60.0 b

40.0

20.0
c
0.0
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Figura 13. Prueba de efectos principales para la extracción total de cadmio

del girasol bajo efecto de tres dosis de cadmio

Para factor fósforo se realizó la comparación de medias obteniendo que sin fertilización de
fósforo se extrajo 37.45 µg Cd/maceta mientras que con fertilización la extracción fue de
45.45 µg Cd/maceta (Figura 14). Este resultado guarda relación con lo hallado en el peso
seco del girasol, siendo mayor en suelos fertilizados por lo tanto a mayor biomasa mayor
cantidad de extracción total.

33
 Extracción total de cadmio
50 a

40 b

[µg Cd/maceta]
30

20

10

0
0 200
Dosis mg P kg-1

Figura 14. Prueba de efectos principales para la extracción total de cadmio

del girasol bajo efecto de dos dosis de fósforo

Para la interacción de los factores HMA x fósforo se obtuvo un comportamiento similar a lo

hallado en sus factores individuales, los tratamientos que estuvieron inoculados con
micorrizas mostraron los valores más altos de extracción de cadmio en el girasol siendo 42.6
g y 56.7 µg Cd/maceta sin y con fertilización, respectivamente. Los valores hallados para
los tratamientos con ausencia de micorrizas fueron 32.3 y 34.3 µg Cd/maceta para suelos
con 0 y 200 mg P2O5 kg-1, respectivamente (Figura 15).

Extracción total de cadmio

a
60
[µg Cd/maceta]

50 b
40 c c
30
20
10
0
0 200
Dosis mg P kg-1

Ausencia Presencia

Figura 15. Efecto de las diferentes dosis de fósforo en la extracción total

de cadmio del girasol bajo efecto de ausencia y presencial HMA

Para el análisis Tukey de medias de la interacción HMA x cadmio se encontró que los valores
más bajos de extracción fueron de 5.30 y 6.60 µg Cd/maceta tanto para el tratamiento con y
sin micorrizas en suelos no contaminados respectivamente. Para el nivel de 15 mg Cd kg-1
se encontraron diferencias significativas entre los tratamientos con ausencia y presencia de

34
micorrizas con valores de 42.10 y 57.20 µg Cd/maceta, respectivamente, mientras que para
el nivel de 30 mg Cd kg-1 se registraron diferencias significativas entre los valores 86.4 y 51
µg Cd/maceta para aquellos que estuvieron en simbiosis con el hongo micorrícico y los que
no respectivamente (Figura 16).

Extracción total de cadmio

100.00 a
80.00
b
60.00 bc
[g Cd]

c
40.00

20.00 d d
0.00
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Ausencia Presencia

Figura 16. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en la extracción total

de cadmio en del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA

Estos resultados concuerdan con Chen et al. (2018), en su estudio se obtuvo que la
colonización de micorrizas mejoraba notablemente la inmovilización de Cd en las raíces de
Lotus japonicus. Se indica que el Cd absorbido por las hifas extrarradicales se translocaron
a las estructuras fúngicas intrarradicales por lo que los arbúsculos acumularon grandes
cantidades de Cd, concentrando la mayor parte de este metal en la raíz a diferencias de las
células vegetales sin estructuras fúngicas de la planta.

Adicionalmente, Rask et al. (2019), determinaron que en niveles de Cd moderados se

estimula la colonización micorrícica, esto debido a que existe un efecto protector de los
hongos contra el metal, sin embargo, es importante resaltar que la combinación de la especie
de la planta y la colonización de la micorriza es la que determina la eficiencia de absorción
de Cd.

Esto resultado puede ser explicado a la interacción que ocurre entre la planta y el hongo
micorrícico Glomus intraradices. Según Aguirre et al. (2011), la parte más significativa de
las estructuras micorricicas arbusculares que desempeña un papel importante en la simbiosis,
extracción y tolerancia a metales pesados con los arbúsculos, vesículas e hifas.

35
Los arbúsculos se generan a partir de la ramificación dicotómica repetida de una hifa en el
interior de una célula vegetal, lo que facilita el intercambio de nutrientes. El hongo comienza
creciendo en el espacio intercelular de las células corticales, pero luego penetra en la pared
celular de la célula hospedera, desarrollándose de manera conjunta con ella. Conforme
ocurre este crecimiento, la membrana de la célula hospedera se pliega y rodea al hongo
formando un compartimiento apoplástico. Este pliegue impide el contacto directo entre el
citoplasma y la célula fúngica y el de la planta, lo que permite una zona de intercambio de
nutrientes altamente eficiente entre ambos organismos (Aguirre et al., 2011).

Las vesículas son el ensanchamiento terminal de las hifas, tienen forma ovoide y se
encuentran dentro o fuera de la raíz, y tienen como función principal el almacenamiento de
reservas de carbono y metales pesados (Aguirre et al., 2011).

Las hifas, son las estructuras colonizadoras, infectivas y las de absorción de nutrientes, van
ejerciendo de la raíz y se extienden en el suelo generan un micelio que expande el área
radicular mejorando la absorción de nutrientes y agua. Dentro de las hifas se van a producir
la glicoprotenía, glomalina, que tiene la capacidad de establecer enlaces con moléculas
toxicas como el cadmio, lo que permite que los metales se acumulen en la masa micelial sin
que ingrese a las células vegetales (Aguirre et al., 2011).

Por tal razón, se dice que las micorrizas son capaces de concentrar metales tanto de manera
activa como pasiva, superando niveles de concentración del entorno que los rodea. Esta
inmovilización es como bioacumulación e incluye quelación, intercambio iónico y
encapsulamiento (Aguirre et al., 2011).

Además, Amna et al. (2015), resaltan otras alternativas aparte de la presencia de micorrizas,
esto con la finalidad de incrementar la eficiencia de la fitorremediación como el uso de
agentes quelatantes, aplicación de biochar.

4.6 FACTOR DE TRANSLOCACIÓN (FT)

Respecto al factor de translocación el cual es definido como la relación entre la

concentración del contaminante en la parte aérea de la planta dividida por la concentración
en las raíces. Se realizó el ANVA encontrando diferencias significativas solo para el factor
cadmio (Tabla 4), para el cual se realizó una comparación de medias el cual nos muestra que
para los suelos que no estuvieron contaminados con Cd el factor de translocación es 1.05 lo

36
cual podría indicar que en presencia de una concentración baja o inexistente de cadmio se
promueve el transporte de cadmio hacia la parte superior de la planta y cuando ya existe
presencia del metal en el suelo el FT pasa a ser 0.25 tanto para suelos con 15 y 30 mg Cd kg-
1 (Figura 17).

Según Sidhu et al. (2018) cuando una especie de planta tiene un FT menor a 1 tiende a
acumular la mayor concentración del metal en la raíz lo cual tiene concordancia con lo
hallado en las variables estudiadas anteriormente donde la mayor cantidad de cadmio se
encontró en la raíz para las dosis más altas de Cd en el suelo.

Factor de translocación
Factor de translocación (FT)

1.2 a
1
0.8
0.6
0.4 b b
0.2
0
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Figura 17. Prueba de efectos principales para el factor de translocación

bajo el efecto de tres dosis de cadmio

Estos resultados coinciden con lo hallado por Munive et al. (2020) y Clemente et al. (2021)
donde el factor de translocación para el girasol fue de 0.75 y 0.62 respectivamente. Sin
embargo, difieren de los hallado por Peña y Beltrán (2017), quienes etiquetaron al girasol
como una hiperacumuladora al presentar un FT mayor que 1.

Debido a lo hallado en esta investigación podemos clasificar a la especie Helianthus annuus

como una planta fitoestabilizadora en concentraciones altas de Cd, siendo el factor de
translocación un indicador crítico para evaluar la capacidad de las plantas para la
acumulación de metales pesados (Yazdanbakhsh et al., 2020).

Por lo tanto, la fitoestabilización es una técnica de fitorremediación que se utiliza para

reducir la biodisponibilidad de los metales en el suelo, no es una tecnología de limpieza, sino
una forma de estabilizar los metales en el suelo para evitar su propagación y transferencia a
la cadena alimentaria (Nascimento et al., 2021).

37
4.7 ÍNDICE DE ESTABILIDAD DE LA MEMBRANA

La evaluación de la estabilidad de la membrana celular constituye un método eficiente y

sencillo para analizar la capacidad de tolerancia de diversos cultivos en situaciones de estrés
(Chaves y Gutiérrez, 2016). Cuando la planta se encuentra bajo condiciones de estrés se
produce un déficit hídrico y un desequilibrio iónico en las células vegetales afectando la
estructura y su funcionalidad de la membrana (Hernández et al., 2015). El incremento en la
pérdida de solutos genera que el valor del porcentaje del índice de la estabilidad de la
membrana sea menor por lo que es usado como un indicador de la estabilidad y como una
medida indirecta de la tolerancia a los metales pesados. Sin embargo, la relación de la
estabilidad de la membrana y el desarrollo vegetativo, así como el rendimiento varía entre
las especies (Chaves y Gutiérrez, 2016).

Los resultados del ANVA para la variable índice de estabilidad de membrana de la hoja del
girasol muestran significancia para los factores HMA, cadmio, fósforo, la interacción HMA
x cadmio y HMA x fósforo (Tabla 4).

Para el factor HMA se observa que aquellos girasoles que estuvieron inoculados mostraron
una mayor tolerancia al ambiente donde crecían por tal razón el MSI % es mayor (89.3 %)
que aquellos que tenían ausencia de micorrizas (78.8 %) (Figura 18).

El efecto de tolerancia de las plantas puede ser potenciado con el uso de microorganismos
del suelo, en este caso las micorrizas que se relacionan directamente con las raíces de las
plantas se destacan por su capacidad para reducir el estrés causado por la contaminación de
metales pesados en el suelo (Aguirre et al., 2011). El mecanismo de tolerancia a metales se
sustenta en la expresión génica de proteínas vinculadas a diversos procesos de transporte
celular, mostrando respuestas específicas a cada metal tanto en el micelio dentro como fuera
de las raíces; esta expresión génica se manifiesta como una reacción inicial al daño
ocasionado por especies reactivas de oxígeno (ROS), las cuales se generan en presencia de
metales pesados en la planta, esta defensa representa la primera contribución en la simbiosis
planta-hongo (Arriagada et al., 2010).

El girasol tiene una alta capacidad micotrófico con el género Glomus spp, por lo que se puede
explicar la simbiosis y el porcentaje de MSI mayor cuando se encuentra asociado (Castañon-
Silva, 2013).

38
 Índice de estabilidad de membrana de la hoja (MSI)

92
a
90
88
86
84
MSI (%)

82
80 b
78
76
74
72
Ausencia Presencia
HMA

Figura 18. Prueba de efectos principales para el índice de estabilidad de la membrana

de la hoja del girasol bajo efecto de ausencia y presencia del HMA

Para el factor fósforo, los resultados muestran para el tratamiento con 200 mg kg-1 de
fertilizante el MSI es de 87.95 % siendo mayor que el tratamiento sin fertilización el cual
mostró un valor de 80.15 % (Figura 19).

Índice de estabilidad de membrana de la hoja (MSI)

90
a
88
86
MSI (%)

84
82
b
80
78
76
0 200
Dosis de mg P kg-1

Figura 19. Prueba de efectos principales para el índice de estabilidad de la membrana de la

hoja del girasol bajo efecto de dos dosis de fósforo

39
Para el factor cadmio, se observó que con 0, 15 y 30 mg kg-1 de Cd en el suelo se mostró con
79.15 %, 84.4 % y 88.6 % de MSI, respectivamente (Figura 20).

Índice de estabilidad de membrana de la hoja

(MSI)

a
90
MSI (%)

ab
85
b
80
75
70
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Figura 20. Prueba de efectos principales para el índice de estabilidad

de la membrana de la hoja bajo el efecto de tres dosis de cadmio

Para la interacción HMA x fósforo, el valor más alto de obtuvo en el tratamiento fertilizado
e inoculado con micorrizas con 90.2 %, seguido del tratamiento sin P, pero con presencia de
micorrizas con 88.4 %. Los valores más bajos se obtuvieron en aquellas hojas de plantas que
no estuvieron en simbiosis con el hongo, siendo 71.9 % para suelos no fertilizados y 85.7 %
para suelos fertilizados. Este resultado se puede explicar gracias a la simbiosis benéfica del
hongo con el girasol, el cual coloniza la corteza de la raíz ayudando a la planta a tomar el
fósforo que fue agregado en la fertilización, de esta manera se obtiene un doble beneficio,
gracias al efecto de tolerancia que genera la simbiosis con Glomus intraradices más una
planta sin deficiencia de P (Valencia y Zúñiga, 2015) (Figura 21).

Índice de estabilidad de membrana de la hoja (MSI)

100 a a a
80 b
MSI (%)

60
40
20
0
0 200
Dosis de mg P kg-1

Ausencia Presencia

Figura 21. Efecto de las diferentes dosis de fósforo en el índice de estabilidad de la membrana
de la hoja bajo efecto de ausencia y presencia del HMA
40
En el análisis de Tukey de la interacción HMA x cadmio no se observan diferencias
significativas para aquellos girasoles que fueron inoculados con micorrizas respecto a las 3
diferentes dosis de cadmio (0, 15, 30 mg kg-1). En el caso de los girasoles que no contaban
con simbiosis de micorrizas, se obtuvieron los porcentajes más bajos significativamente para
suelos no contaminados, sin embargo, para el que estuvo expuesto a 15 y 30 mg Cd kg-1, no
se encontraron diferencias significativas con respecto al tratamiento con micorrizas (Figura
22). Estos resultados nos muestran el MSI para las plantas que estuvieron bajo condiciones
de suelo contaminado con metales pesados en dosis más altas no difieren de aquellas que
estaban expuesta a dosis menores o nulas, eso quiere decir que bajo la influencia del cadmio
en el suelo se pierde la capacidad de las micorrizas en generar mayor tolerancia en la
estabilidad de la membrana.

Índice de estabilidad de membrana de la hoja (MSI)

100 a ab ab
ab
b
80
c
MSI (%)

60

40

20

0
0 15 30
Dosis mg Cd kg-1 suelo

Ausencia Presencia

Figura 22. Efecto de las diferentes dosis de cadmio en el índice de estabilidad

de la membrana de la hoja bajo efecto de ausencia y presencia del HMA

Normalmente cuando la membrana plasmática se encuentra afectada por los metales pesados
se producen daños mediante varios mecanismos como:

• Oxidación y entrecruzamiento de proteínas (conteniendo grupos tiol).

• Inhibición de proteínas de membrana que son esenciales (como por ejemplo la H+-
ATPasa).
• Cambios en composición y fluidez de los lípidos de membrana, y cambios en la
permeabilidad. Por ejemplo, se sabe que el Cu y el Cd alteran la composición de los
lípidos de membrana y provocan la fuga de solutos de la célula (Navarro et al., 2007).

41
En este caso no se presentaron estos problemas debido a que el girasol es una especie
tolerante a la presencia de metales pesados. Entre los mecanismos de tolerancia que
involucra la membrana plasmática tenemos:

• Reducción de la captación o estimulación de las bombas de flujo de metales que

promueve la entrada al citosol.
• Reparación de la integridad de la membrana plasmática.
• Protección con proteínas de choque térmico, metalotioneinas, etc.
• Homeostasis de metal (Navarro et al., 2007).

A estas características son potenciadas por la inoculación de hongos micorrícicos en

condiciones de estrés, esto es debido a que la colonización produce cambios físicos,
bioquímicos y fisiológicos en las raíces lo que genera un mejor estado en la planta generando
una mejora nutricional además de incrementar de la disponibilidad de nutrientes como el
fósforo, zinc, cobre; mayor absorción de agua, favorece la adaptación del balance osmótico
e incrementan la conductividad hidráulica de las raíces (Porras-Soriano, 2009; Medina-
García, 2016).

42
 V. CONCLUSIONES

• El girasol exhibe una alta tolerancia al cadmio para las dosis de 15 y 30 mg kg-1, al no
verse afectado en su desarrollo vegetativo ni en la estabilidad de la membrana
plasmática de las células que conforman la hoja.

• La raíz concentró el cadmio en un 79.8 y 87.1 %, el tallo 12.7 y 12 % y la inflorescencia

7.55 y 5.9 % del total de la planta para los tratamientos con sin y con micorrizas,
respectivamente.

• El factor de translocación del girasol es menor que 1 clasificándola como una planta
fitoestabilizadora al acumular la mayor cantidad de Cd en sus raíces que en la parte
área en suelos contaminados.

• La inoculación con el hongo micorricíco arbuscular Glomus intraradices mejoró la

tolerancia de la planta y la extracción de Cd en suelos contaminados con cadmio.

• La aplicación del fósforo no afectó la capacidad de extracción de cadmio del girasol

ni su distribución en sus órganos.

43
 VI. RECOMENDACIONES

• Se recomienda realizar un estudio con cantidades mayores de 30 mg kg-1 de cadmio

para determinar el límite máximo de tolerancia del girasol ante el metal pesado.

• Se recomienda realizar un estudio centrándose en la influencia de la aplicación de

fósforo con la dinámica del cadmio en suelo y planta.

• Se aconseja tener cuidado con el muestreo de las raíces del girasol especialmente
cuando presentan la simbiosis micorrícica, debido a que, al ser muy delgadas se puede
perder biomasa cuando se retira de la maceta.

• Este estudio debe complementarse con el análisis de concentración de cadmio en el

suelo de cada tratamiento y hallar el factor de bioacumulación.

• Evaluar las características del suelo en la disponibilidad del Cd para la planta.

44
 VII. BIBLIOGRAFÍA

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54
 VIII. ANEXOS

Anexo 1. Análisis de caracterización del suelo experimental

Suma Suma
ANÁLISIS Clase
CIC CATIONES CAMBIABLES de de
MECÁNICO Textural
C.E. cationes bases
pH CaCO3 M.O. P K Arena Limo Arcilla Al+3
Muestra (1:1) Ca+2 Mg+2 K+ Na+
(1:1) % % ppm ppm + H+
dS/m
% % % meq/100g

Universidad
Nacional
7.73 1.80 6.26 1.89 35.8 356 54 26 20 Fr.Ar.A. 9.92 5.81 2.49 1.05 0.57 0.00 9.92 9.92
Agraria La
Molina

Anexo 2. Análisis de concentración de cadmio en el suelo

Cd total
Muestra
mg kg-1
Universidad Nacional
2.37
Agraria La Molina

55
 Anexo 3. Análisis de varianza para el peso seco total del girasol

Grados de Suma de Media

F.V F P(>F) Sig.
Libertad cuadrados cuadrática
Micorrizas 1 1,097.39 1,097.39 1,097.39 1,097.39 (***)
Cadmio 2 1,097.39 1,097.39 1,097.39 1,097.39
Fósforo 1 20.24 20.24 20.24 20.24 (***)
MicorrizasxCadmio 2 0.00004 0.00004 0.00004 0.00004
Micorrizasxfósforo 1 258.86 258.86 258.86 258.86
Cadmioxfósforo 2 129.43 129.43 129.43 129.43
MicorrizasxCadmio
2 2.39 2.39 2.39 2.39
xfósforo
Residuals 48 0.10266 0.10266 0.10266 0.10266

Anexo 4. Análisis de varianza para el contenido de cadmio en la inflorescencia

Grados de Suma de Media

F.V F P(>F) Sig.
Libertad cuadrados cuadratica
Micorrizas 1 0.00 0.00 0.13 0.71561
Cadmio 2 1.42 0.71 99.45 0.00000 (***)
Fósforo 1 0.07 0.07 10.28 0.00239 (**)
MicorrizasxCadmio 2 0.06 0.03 4.07 0.02338 (*)
Micorrizasxfósforo 1 0.01 0.01 1.97 0.16650
Cadmioxfósforo 2 0.02 0.01 1.15 0.32432
MicorrizasxCadmio
2 0.01 0.00 0.56 0.57301
xfósforo
Residuals 48 0.34 0.01

56
 Anexo 5. Análisis de varianza para el contenido de cadmio en el tallo

Grados de Suma de Media

F.V F P(>F) Sig.
Libertad cuadrados cuadratica
Micorrizas 1 25.10 25.10 2.98 0.00000
Cadmio 2 324.65 162.33 86.58 0.00000 (***)
fósforo 1 0.53 0.53 7.96 0.40991 (**)
MicorrizasxCadmio 2 17.77 8.89 5.76 0.00008 (***)
Micorrizasxfósforo 1 1.76 1.76 1.15 0.13733

Cadmioxfósforo 2 0.08 0.04 4.33 0.94856

MicorrizasxCadmio
2 2.44 1.22 0.52 0.21614
xfósforo
Residuals 48 1.80 0.04

Anexo 6. Análisis de varianza para el contenido de cadmio en la raíz

Grados de Suma de Media

F.V F P(>F) Sig.
Libertad cuadrados cuadratica
Micorrizas 1 25.10 25.10 32.61 0.00000 (***)
Cadmio 2 324.65 162.33 210.85 0.00000 (***)
Fósforo 1 0.53 0.53 0.69 0.40991
MicorrizasxCadmio 2 17.77 8.89 11.54 0.00008 (***)
Micorrizasxfósforo 1 1.76 1.76 2.28 0.13733
Cadmioxfósforo 2 0.08 0.04 0.05 0.94856
MicorrizasxCadmio
2 2.44 1.22 1.58 0.21614
xfósforo
Residuals 48 36.95 0.77

57
 Anexo 7. Análisis de varianza para la extracción total de cadmio por la planta

Grados de Suma de Media

F.V F P(>F) Sig.
Libertad cuadrados cuadratica
Micorrizas 1 4,044.25 4,044.25 52.15 0.00000 (***)
Cadmio 2 41,377.00 20,688.50 266.78 0.00000 (***)
Fósforo 1 958.40 958.40 12.36 0.00097 (***)
MicorrizasxCadmio 2 3,379.13 1,689.57 21.79 0.00000 (***)
Micorrizasxfósforo 1 566.72 566.72 7.31 0.00947 (**)
Cadmioxfósforo 2 546.14 273.07 3.52 0.03742 (*)
MicorrizasxCadmio
2 187.92 93.96 1.21 0.30666
xfósforo
Residuals 48 3,722.41 77.55

Anexo 8. Análisis de varianza para el factor de translocación

Grados de Suma de Media

F.V F P(>F) Sig.
Libertad cuadrados cuadratica
Micorrizas 1 0.77 0.77 3.14 0.08288
Cadmio 2 10.16 5.08 20.67 0.00000 (***)
Pósforo 1 0.82 0.82 3.32 0.07449
MicorrizasxCadmio 2 0.89 0.45 1.81 0.17431
Micorrizasxfósforo 1 0.56 0.56 2.28 0.13742
Cadmioxfósforo 2 0.85 0.43 1.73 0.18804
MicorrizasxCadmio
2 1.43 0.72 2.92 0.06385
xfósforo
Residuals 48 11.79 0.25

58
 Anexo 9 Análisis de varianza para el índice de estabilidad de la membrana de la hoja

Grados de Suma de Media

F.V F P(>F) Sig.
Libertad cuadrados cuadratica
Micorrizas 1 1,672.70 1,672.70 27.50 0.00000 (***)
Cadmio 2 899.57 449.79 7.39 0.00159 (**)
Fósforo 1 915.72 915.72 15.05 0.00032 (***)
MicorrizasxCadmio 2 1,851.70 925.85 15.22 0.00001 (***)
Micorrizasxfósforo 1 536.41 536.41 8.82 0.00465 (**)
Cadmioxfósforo 2 607.72 303.86 4.99 0.01070 (*)
MicorrizasxCadmio
2 170.45 85.22 1.40 0.25626
xfósforo
Residuals 48 2,920.03 60.83

Anexo 10. Porcentaje de colonización micorrízica en raíces de girasol inoculados con

Glomus intraradices con concentraciones distintas de Cd y P en el suelo.

Colonización de raíces por

Suelo [Cd] [P]
hongos micorrízicos
mg kg-1 mg kg-1 %
Inoculado 0 3.10
0
200 4.20
0 4.70
15
200 5.10
0 5.10
30
200 4.90
No inoculado Control 0.30

59
Anexo 11. Secado de suelo tamizado al aire libre

Anexo 12. Llenado de macetas con suelo

60
Anexo 13. Contaminación de suelo con cadmio en sus diferentes dosis

Anexo 14. Siembra de girasol en las macetas

61
 Anexo 15. Fertilización con superfostato triple en los tratamientos necesarios

Anexo 16. Vista de los cotiledones del girasol a los 10 días después de la siembra

62
 Anexo 17. Riego diario de las macetas

Anexo 18. Etiquetado de macetas con códigos QR

63
Anexo 19. Plantas de girasoles a los 49 después de la siembra

Anexo 20. Planta de girasol a los 60 días después de la siembra

64
Anexo 21. Plantas de girasol a los 78 días después de la siembra

Anexo 22. Cosecha del girasol

65
Anexo 23. Pesado de discos foliares para la evaluación de Índice de la estabilidad de la
membrana
a

Anexo 24. Pesado del girasol en fresco

66
Anexo 25. Lavado de raíces de girasol

Anexo 26. Secado de raíces al aire libre

67
Anexo 27. Pesado de raíces en seco

Anexo 28. Triturado de materia seca

68
 Anexo 29. Pesado de muestra molida para la digestión ácida

Anexo 30. Proceso de agregación de ácido nítrico perclórico a las muestras molidas

69
Anexo 31. Cristalización de las muestras molidas de girasol después de la digestión ácida

Anexo 32. Filtrado de las muestras cristalizadas

70