UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

LAB Nº 2:

“CUALIFICACIÓN DE MICROPIPETA”

AUTOR:

ESPÍRITU SERRANO LUIS ANGEL

EXPERIENCIA CURRICULAR:

ANÁLISIS INSTRUMENTAL

CICLO:

VI-A

DOCENTE COORDINADOR

DR. CRUZ MONZÓN, JOSÉ ALFREDO

Trujillo,

Perú2022
 I. PRÁCTICA DE LABORATORIO:
Cualificación de Micropipetas

II. COMPETENCIAS
❖ Demostrar empíricamente que el instrumento (micropipeta) cumple con las
especificaciones de su requerimiento

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

 Las micropipetas:

Son dispositivos para recolectar y transferir pequeños volúmenes de líquidos; para su correcto
manejo, se deben de realizar un determinado número de pasos consecutivos (Eppendorf, 2020),
su empleo permite el desarrollo de múltiples técnicas científicas enfocadas en áreas de la salud
e investigación.

Son instrumentos de laboratorios diseñados para conseguir una alta exactitud y precisión en el
manejo de líquidos. Ambos términos pueden ser definidos según Gómez (2020), de la siguiente
manera: la exactitud es la diferencia entre el volumen dispensado y el seleccionado en una
pipeta; y por otro lado la precisión se refiere a la repetitividad de los pipeteos, expresándose
mediante la desviación estándar (s) o coeficiente de variación (cv).

 La calibración de pipetas y dispensadores:

En la micropipeta implica que en determinadas condiciones ambientales la dispensación de un
volumen conocido de agua debe tener un cierto peso. Para ser más precisos, hablamos de
determinar la correlación entre el volumen dispensado y el volumen nominal o volumen
seleccionado en un sistema de dispensación (Departamento de Servicio Técnico de Eppendorf,
2017).

 Según López et al (2020), los errores más frecuentes durante el pipeteo son:
1. Elección la punta adecuada
No utilizar las puntas adecuadas afecta a la precisión y exactitud de las medidas, ya que
un mal ajuste puede provocar que el volumen pipeteado no corresponda con el
seleccionado o que se produzcan fugas durante el pipeteo.
2. Tipos de líquidos a pipetear
Para pipetear líquidos viscosos, densos o peligrosos, se recomienda el uso de pipetas de
desplazamiento positivo o el empleo de puntas especiales, diseñadas según las
características del líquido a pipetear.
 3. Ritmo de pipeteo
Es muy importante mantener un ritmo de pipeteo constante entre muestras, ya que
esto mejora la repetitividad de nuestras medidas. Evitar las prisas porque aspirar de
forma brusca o muy rápido puede favorecer la formación de burbujas, espuma y
aerosoles, producir salpicaduras y provocar la contaminación de la pipeta o la pérdida
del líquido pipeteado.
4. Reutilización de la punta
Las puntas de pipeta están fabricadas para un único uso. Las puntas de pipeta usadas
no deben limpiarse para su reutilización, ya que esto perjudicaría la precisión de nuestra
medida y podría provocar la contaminación de nuestras muestras.
5. Ángulo de la pipeta
Es importante mantener la micropipeta lo más vertical posible durante la aspiración,
formando un ángulo de 90o con el líquido a pipetear. Nunca debemos alejarnos más de
20o de esta posición o de lo contrario podría disminuir la calidad de nuestros resultados.
6. Profundidad a la que se sumerge la punta de la pipeta al aspirar
La profundidad de inmersión de la punta en el líquido a pipetear es muy importante,
especialmente cuando trabajamos con volúmenes muy pequeños. Esta profundidad no
debe superarse, ya que el volumen medido podría ser inexacto o no conforme a las
especificaciones. La profundidad recomendada depende del volumen nominal de la
punta utilizada.

 Con respecto a las Medidas de seguridad y protección debemos tener en cuenta al

manipular micropipetas según González y Ancochea (2020), son las siguientes:
• Evitar que el líquido penetre en el eje de la micropipeta, ya que podría
contaminarse. La contaminación del eje, de los sellos o del émbolo de la micropipeta
puede provocar la acumulación de sedimentos que acaban provocando una
aspiración del líquido defectuosa y, por tanto, unos resultados inexactos.
• Las micropipetas de volúmenes nominales mayores (5-10 mL) suelen llevar filtros de
seguridad en el cono donde se acoplan las puntas, lo que evita que entre líquido en
el interior de la micropipeta.
• Se deben extremar las precauciones cuando se trabaje con disoluciones ácidas o
muy corrosivas, ya que un contacto prolongado de la micropipeta con estas
sustancias puede dañar el émbolo. La exposición de las diferentes piezas a gases
 corrosivos puede reducirse empleando puntas con filtros que ejercen de barreras
frente a los aerosoles.

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

1. Balanza analítica
o Sensibilidad 8,0000 mg
Figura N° 01: Balanza analítica

FUENTE: Elaboración propia

2. Micropipeta
Figura N° 2: Micropipeta de 1000 uL
 FUENTE: Elaboración propia

3. Muestra
Figura N° 3: Micropipeta

FUENTE: Elaboración propia

4. Guantes descartables de látex

Figura N° 4: Guantes de látex

 FUENTE:
Elaboración propia

V. PROCEDIMIENTO
✓ Determinar el volumen a medir con la pipeta de 1000 uL
✓ Realizar la medición con la pipeta para luego pesar la medición de su masa
✓ Pesar la masa de 100 uL 5 veces en el mismo vaso de muestra
✓ Repetir con los volúmenes de 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 y 1000 microlitros

VI. CALCULOS
1. Datos de las condiciones ambientales
o Temperatura de laboratorio (aire): 16 °C
o Presión Atmosférica (hPa): 1015
o % Humedad Relativa: 87
o Temperatura del agua: 16.5 °C
o Densidad del agua a 16.5 °C= 0.998945 g/cm3

2. Para determinar la densidad del aire utilizamos la siguiente relación

[0.34844𝑃 − ℎ(0.00252𝑡 − 0.02058)] ∗ 10−3

𝑝𝑎𝑖𝑟𝑒 =
(273.15 + 𝑡)

[0.34844 ∗ 1016 − 81(0.00252 ∗ 16 − 0.02058)] ∗ 10−3

𝑝𝑎𝑖𝑟𝑒 =
(273.15 + 16)

𝒈
𝒑𝒂𝒊𝒓𝒆 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟐𝟏
𝒄𝒎𝟑

3. Calculamos la Masa verdadera corregida para el agua (g)

 1 1
𝑊𝑣 = 𝑊𝑎𝑝𝑎𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 [1 + 𝑝𝑎𝑖𝑟𝑒 ( − )]
𝑝𝑜𝑏𝑗 𝑝𝑝𝑒𝑠𝑎

1 1
𝑊𝑣 = 𝑊𝑎𝑝 [1 + 0.00121 ( − )]
0.998945 8

𝑊𝑣 = 𝑊𝑎𝑝(1 + 0.001)

𝑾𝒗 = 𝟏. 𝟎𝟎𝟏𝑾𝒂𝒑

Por lo tanto, a todas las masas de agua aparentes las multiplicamos por 1.001 para encontrar la
masa corregida a las condiciones de laboratorio.

4. Para poder encontrar el volumen de agua en uL, empleamos la fórmula de

densidad.

𝑊𝑣
𝐷𝐻2𝑂 𝑎 16°𝐶 =
𝑉𝐻2𝑂

𝑊𝑣
𝑉𝐻2𝑂 =
𝐷𝐻2𝑂 𝑎 16°𝐶

𝑊𝑣(𝑔) 103 𝑢𝐿
𝑉𝐻2𝑂 = ∗
0.998945(𝑔/𝑐𝑚3 ) 1𝑐𝑚3

𝑽𝑯𝟐𝑶 = 𝟏𝟎𝟎𝟐. 𝟎𝟓𝟕 𝑾𝒗 𝒖𝑳

Por lo tanto, a todas las masas de agua corregidas o reales las multiplicamos por 1002.057 para
encontrar el volumen de H2O en uL.

5. Con la toma de datos hallamos el promedio, desviación estándar y Coeficiente

de variación
•

PESO DEL VASO 29.3625 gramos

Volumen evaluado en uL: 100

Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso del agua (g) Peso real (g)
agua (uL)
1 116.3473 86.9848 116.4636 116.5866
2 116.4411 87.0786 116.5575 116.6806
3 116.5327 87.1702 116.6492 116.7724
4 116.6294 87.2669 116.7460 116.8693
5 116.7270 87.3645 116.8437 116.9671
Promedio
116.7752
(uL):
Wv = 1.001 Wap Varianza: 0.0225
V (H2O) Desviación
1.002057 Wv uL 0.1502
= estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0013

PESO DEL VASO 116.7270 gramos

Volumen evaluado en uL: 200

Peso del agua Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso real (g)
(g) agua (uL)
1 116.9155 0.1885 117.0324 117.2732
2 117.1099 0.3829 117.2270 117.4681
3 117.3044 0.5774 117.4217 117.6632
4 117.5118 0.7848 117.6293 117.8713
5 117.6105 0.8835 117.7281 117.9703

Promedio (uL): 117.6492

Wv = 1.0010 Wap Varianza: 0.0817

Desviación
V (H2O) = 1.002057 Wv uL 0.2858
estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0024

PESO DEL VASO 117.6105 gramos

Volumen evaluado en uL: 300

Peso del agua Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso real (g)
(g) agua (uL)
1 118.0067 0.3962 118.1247 118.2495
2 118.3060 0.6955 118.4243 118.6679
3 118.5995 0.9890 118.7181 118.9623
4 118.8985 1.2880 119.0174 119.2622
5 119.2110 1.6005 119.3302 119.5757

Promedio (uL): 118.9435

Wv = 1.0010 Wap Varianza: 0.2648

 Desviación
V (H2O) = 1.002057 Wv uL 0.5146
estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0043

PESO DEL VASO 119.211 gramos

Volumen evaluado en uL: 400

Peso del agua Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso real (g)
(g) agua (uL)
1 119.5962 0.3852 119.7158 119.9621
2 120.0097 0.7987 120.1297 120.3768
3 120.4087 1.1977 120.5291 120.7770
4 120.8051 1.5941 120.9259 121.1746
5 121.1980 1.9870 121.3192 121.5688

Promedio (uL): 120.7719

Wv = 1.0010 Wap Varianza: 0.4023

Desviación
V (H2O) = 1.002057 Wv uL 0.6343
estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0053

PESO DEL VASO 121.1980 gramos

Volumen evaluado en uL: 500

Peso del agua Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso real (g)
(g) agua (uL)
1 121.6971 0.499 121.819 122.069
2 122.1975 1.000 122.320 122.571
3 122.6069 1.409 122.730 122.982
4 123.1940 1.996 123.317 123.571
5 123.6883 2.490 123.812 124.067

Promedio (uL): 123.052

Wv = 1.001 Wap Varianza: 0.625

 Desviación
V (H2O) = 1.002057 Wv uL 0.791
estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.006

PESO DEL VASO 123.6883 gramos

Volumen evaluado en uL: 600

Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso del agua (g) Peso real (g)
agua (uL)
1 124.2863 0.5980 124.4106 124.6665
2 124.8790 1.1907 125.0039 125.2610
3 125.4612 1.7729 125.5867 125.8450
4 126.0465 2.3582 126.1725 126.4321
5 126.6377 2.9494 126.7643 127.0251
Promedio
125.8459
(uL):
Wv = 1.001 Wap Varianza: 0.8668
V (H2O) Desviación
1.002057 Wv uL 0.9310
= estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0074

PESO DEL VASO 126.6377 gramos

Volumen evaluado en uL: 700

Peso del agua Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso real (g)
(g) agua (uL)
1 135.8147 9.1770 135.9505 136.2302
2 136.4380 9.8003 136.5744 136.8554
3 136.9937 10.3560 137.1307 137.4128
4 137. 5572 10.9195 137.6948 137.9780
5 138. 2508 11.6131 138.3800 138.6646

Promedio (uL): 137.4282

Wv = 1.001 Wap Varianza: 0.8987

 Desviación
V (H2O) = 1.002057 Wv uL 0.9480
estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0069

PESO DEL VASO 138.2508 gramos

Volumen evaluado en uL: 800

Peso del agua Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso real (g)
(g) agua (uL)
1 139.0333 0.7825 139.1723 139.4586
2 139.8195 1.5687 139.9593 140.2472
3 140.5989 2.3481 140.7395 141.0290
4 141.3803 3.1295 141.5217 141.8128
5 142.1598 3.9090 142.3020 142.5947

Promedio (uL): 141.0285

Wv = 1.001 Wap Varianza: 1.5357

Desviación
V (H2O) = 1.002057 Wv uL 1.2393
estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0088

PESO DEL VASO 142.1598 gramos

Volumen evaluado en uL: 900

Peso del agua Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso real (g)
(g) agua (uL)
1 143.0468 0.8870 143.1898 143.4844
2 143.9409 1.7811 144.0848 144.3812
3 144.8226 2.6628 144.9674 145.2656
4 145.7138 3.5540 145.8595 146.1595
5 146.5978 4.4380 146.7444 147.0463

Promedio (uL): 145.2674

Wv = 1.001 Wap Varianza: 1.9812

 Desviación
V (H2O) = 1.002057 Wv uL 1.4075
estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0097

PESO DEL VASO 146.5978 gramos

Volumen evaluado en uL: 1000

Peso del agua Volumen de
Réplica Peso total (g) Peso real (g)
(g) agua (uL)
1 147.5695 0.9717 147.7171 148.0209
2 148.5456 1.9478 148.6941 149.0000
3 149.5276 2.9298 149.6771 149.9850
4 150.5099 3.9121 150.6604 150.9703
5 151.4956 4.8978 151.6471 151.9590

Promedio (uL): 149.9871

Wv = 1.001 Wap Varianza: 2.4239

Desviación
V (H2O) = 1.002057 Wv uL 1.5569
estnadar:

D H2O: 0.998945 g/cm3 % C.V. 0.0104

Resultados comparativos entre el valor nominal (uL) y experimental (uL) de volúmenes,

empleando micropipetas sería:

VALOR VALOR
N° NOMINAL EXPERIEMNTAL
(uL) (uL)
1 100 116.7752
2 200 117.6492
3 300 118.9435
4 400 120.7719
5 500 123.052
6 600 125.8459
7 700 137.4282
8 800 141.0285
9 900 145.2674
10 1000 149.9871
Fuente: Elaboración propia

VALOR EXPERIEMNTAL (uL) vs VALOR NOMINAL (uL)

250.0000
VALOR EXPERIEMNTAL (uL)

y = 0.1938x
200.0000
R² = 0.8524

150.0000

100.0000

50.0000

0.0000
0 200 400 600 800 1000 1200
VALOR NOMINAL (uL)

Fuente: Elaboración propia

Interpretación: Al dar un valor de R2 = 0.8524, quiere decir que los datos obtenidos son fiables
solo en un 85 %, pues para ser totalmente confiables debería dar un valor del 100%, por ende,
puede deberse a una mala toma de datos o mal manejo de equipo. Asimismo, podemos decir
que presenta una correlación lineal de alta a muy alta.

VII. CONCLUSIONES
• Se demostró empíricamente que el instrumento (micropipeta) cumple con las
especificaciones de su requerimiento
• Se logro manipular 2 tipos de micropipeta, la primera con un rango de 20 a 200 uL y la
segunda de 100 a 1000 uL, en el cual de manejaron diferentes volúmenes.
• Se verificó la precisión y exactitud del volumen aportado por la micropipeta 100 a 1000
uL, para en base a ello poder asegurar la calidad de los ensayos realizados que involucren
su utilización.

VIII. RECOMENDACIONES
• Manipular bien la micropipeta, tanto para absorber como para liberar el líquido a
trabajar.
• Pesar correctamente, esperando siempre unos segundos hasta que se estabilice la
balanza, para el registro correcto de los datos experimentales.
 IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

López, A.; Fernández, I.; & Fuentes, C. (2020). Consideraciones en el uso y mantenimiento de
micropipetas. http://hdl.handle.net/10251/145914

Departamento de Servicio Técnico de Eppendorf (2017). Calibración y ajuste de sistemas de

dispensación en el laboratorio. Farmaespaña industrial, Septiembre-octubre 2017, pp.
86-88. Disponible: http://www.farmaindustrial.com/digital-
versions/magazines/index.html?id=61

Gómez, L. (2020). Manual de Prácticas de Biomateriales. http://citecuvp.tij.uabc.mx/bio/wp-

content/uploads/2020/07/11796-Biomateriales.pdf

Eppendorf (2020). Eppendorf Research® Plus. Manual de instrucciones

https://www.eppendorf.com/productmedia/doc/es/174967/Eppendorf_Liquid-
Handling_ Operating-manual_Research-plus.pdf

González, S., & Ancochea, C., (2020). Buenas prácticas de laboratorio. Visavet.es.
https://www.visavet.es/es/bioslab/practicas-laboratorio.php