Manual de Bioquimica 5ta Edicion 3a Revisión314

Manual de prácticas
de bioquímica
5a edición
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Manual de prácticas
de bioquímica
5a edición
MEO. Nora Patricia Flores Moreno

Cirujano Dentista
Maestría en Educación Odontológica
Profesor de Tiempo Completo de la Facultad de
Odontología, UANL.
Profesora y Jefa del Departamento de Bioquímica, Facultad
de Odontología, UANL.
PhD Andrea G. Alcázar Pizaña

Ing. Bioquímico
Maestría en Ciencias en Ingeniería Bioquímica
Doctor en Ciencias con Especialidad en Biotecnología
Profesor Investigador de Tiempo Completo
Facultad de Odontología
Unidad de Odontología Integral
y Especialidades/CIDICS, UANL.
SNI 1
MEO. Patricia Benítez Chávez

Cirujano Dentista
Maestría en Educación Odontológica
Profesora de Tiempo Completo de la Facultad de
Odontología, UANL.
Editor responsable:
Dra. Natalia Guadalupe Tripp Arreguín
Editorial El Manual Moderno
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s .OVEDADES
Av. Sonora núm. 206, s $ISTRIBUCIONES Y MÉS
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Manual de prácticas de bioquímica, quinta edición

D.R.© 2016 por Editorial El Manual Moderno S.A. de C.V.
ISBN: 978-607-448-541-7
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Mexicana, Reg. núm. 39
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publicación puede ser reproducida, almacenada en sistema
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escrito de la Editorial.
Director editorial y de producción:

Dr. José Luis Morales Saavedra
Editora asociada:
LCC Tania Uriza Gómez
Diseño de portada:
LDG Eunice Tena Jiménez
Agradecimiento
A Dios por iluminarnos con su bendición y bondad.

A todo el Departamento de Bioquímica de la Facultad de
Odontología: Instructores y pre-Instructores, a Luisa,
Milagro y Lulú por todo su apoyo infinito e incondicional.
A nuestra directora: Dra. Rosa Isela Sánchez Nájera
por permitirnos el espacio y las condiciones para la
realización de esta obra.
A nuestras familias por permitirnos llegar a realizar

nuestros sueños y objetivos profesionales, con su cariño
y apoyo tan grande que siempre nos han otorgado,
¡mil gracias infinitas siempre!
V
Contenido
Agradecimiento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . V
Introducción ........................................................................ IX
Generalidades . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IX
Disposición de residuos de las prácticas de laboratorio de bioquímica . . . . . . . . . . X
Práctica 1 Reglamento, precauciones y material del laboratorio de bioquímica . . . . . . . . . . . 1
1. Conocer el material y equipo de laboratorio de bioquímica . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
Práctica 2 Método científico, cómo buscar artículos e información en la Internet . . . . . . . . . . 13
Práctica 3 Determinación del pH salival y de diversas soluciones problema por

medio del uso de indicadores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
Práctica 4 Pruebas coloreadas de las proteínas. Propiedades de algunos aminoácidos . . . . . 19

1. Prueba de Millon . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
2. Reacción de Biuret . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
3. Prueba de cianuro nitroprusiato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
Práctica 5 Identificación cualitativa de la presencia de catalasa en hígado bovino fresco . . 29
Práctica 6 Determinación de grupos sanguíneos y factor Rh. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33
Práctica 7 Factores que intervienen en la velocidad de la reacción enzimática . . . . . . . . . . . 39
1. Influencia de la concentración de la enzima sobre la velocidad

de una reacción catalizada enzimáticamente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
VII
2. Influencia de la temperatura sobre la velocidad de una
reacción catalizada enzimáticamente. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3. Influencia del pH sobre la velocidad de una reacción catalizada

enzimáticamente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Práctica 8 Reacciones para investigar la presencia de azúcares reductores . . . . . . . . . . . . . . . 47
1. Reacción de Benedict . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
2. Reacción de Barfoed . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51
3. Prueba de yodo Lugol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54
Práctica 9 Reacciones para investigar la presencia de azúcares no reductores

y fermentación . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
1. Fermentación de azúcares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
2. Hidrólisis de azúcares no reductores: sacarosa y almidón . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61
Práctica 10 Pruebas para identificar la presencia de glucosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
1. Tiempo de remoción de glucosa bucal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
2. Determinación de glucosa en sangre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69
Práctica 11 Investigación de lípidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73
1. Solubilidad de las grasas (aceite de maíz) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73
2. Solubilidad de la glicerina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77
3. Investigación de ácidos grasos insaturados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80
4. Investigación del colesterol por medio de la reacción

de Liebermann-Burchard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
Práctica 12 Determinaciones químicas de la saliva . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
1. Determinación de pH. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 88
2. Determinación de Mucina. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91
3. Determinación de Tiocianatos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 94
Práctica 13 Determinación de la capacidad Buffer de la saliva. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97
Práctica 14 Fermentación de carbohidratos de la placa dental y formación de ácidos. . . . . . 101
Práctica 15 Extracción de DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 107
Prelaboratorios. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 111
VIII Manual de prácticas de bioquímica

Introducción
El manual de prácticas de bioquímica está diseñado el lugar donde depositarán los contenidos de los
para estudiantes de odontología y de carreras afines tubos de ensayo, la basura contaminada, y lo que es
que cursan la unidad de aprendizaje bioquímica, con considerado como RPBI (residuos peligrosos biológico-
la finalidad de que puedan realizar actividades y evi- infecciosos), tanto los punzocortantes como los no
dencias en el laboratorio que enriquezcan su cono- anatómicos.
cimiento de forma sencilla y aplicada. Este manual es el resultado de muchos años de
El objetivo de este laboratorio es identificar algunas trabajo y dedicación, tiene la finalidad de ayudar a
características de las principales biomoléculas, para los estudiantes a adquirir destrezas en la búsqueda
comprobar los conocimientos teóricos que se imparten de información, observación, análisis y discusión de
en dicha unidad. Para lograr este objetivo, el orden resultados, cualidades muy importantes para fomen-
de las prácticas está basado en el programa del curso. tar la investigación en los futuros profesionistas.
Al inicio del manual se podrán apreciar generali-
dades de cada práctica así como normas y reglas del
laboratorio de bioquímica, de igual forma se especi- Generalidades
fica el valor del laboratorio dentro la calificación final
1. Requisitos indispensables para presentarse al
de la unidad de aprendizaje de Bioquímica.
laboratorio en cada práctica.
El manual está estructurado en 15 prácticas, den-
tro de las cuales se incluyen la identificación y com- s "ATA BLANCA DE ALGODØN MANGA LARGA
probación de las características químicas y físicas de
las diferentes moléculas que tienen relación con el s 5NIFORME CLÓNICO BLANCO
estudio sobre la bioquímica en el ser humano.
s -ANUAL DE PRÉCTICAS DE LABORATORIO
Cada práctica contiene una introducción y un
objetivo de la misma y está compuesta de pruebas s 0RELABORATORIO CONTESTADO DE LA PRÉCTICA
apoyadas en el fundamento teórico, que especifican correspondiente.
el material, reactivos y soluciones problema a utili-
zar, así como el procedimiento a seguir. Al finalizar s ,ENTES DE PROTECCIØN
cada prueba, el estudiante deberá llenar el cuadro de
s ,ÉPIZ GRASO
resultados, realizar dibujos y escribir sus conclusio-
nes y discusiones. s 3ECADOR
El manual contiene fotografías que facilitan al
estudiante la comprensión de los procedimientos y s #AJA DE CERILLOS O ENCENDEDOR
resultados que se obtendrán, con la finalidad de pro-
porcionarles una guía de las coloraciones que de- 2. Se asigna a cada estudiante el lugar de trabajo
definitivo y el número de equipo con el que
muestran los resultados de las pruebas.
trabajará durante todo el semestre.
Una parte muy importante del manual es fomen-
tar en los estudiantes una conciencia ecológica en la 3. El laboratorio de bioquímica tiene un valor de
disposición de residuos peligrosos que se generan en 20% de la calificación final del curso. Para ob-
las distintas pruebas realizadas en cada práctica. Al tener este porcentaje se tomará en cuenta lo
finalizar cada prueba se explica de manera detallada siguiente:
IX
s Asistencia a teoría y práctica de la- g) Al terminar cada sesión, las prácticas se-
boratorio, entrega de pre laboratorio, par- rán firmadas y selladas por el instructor
ticipación y conducta del alumno en las en el área destinada para sellos, misma
actividades. que se encuentra en la sección anexos y
al finalizar cada práctica se entregará el
s 0RIMER EXAMEN TEØRICO DE LABORATORIO manual con resultados, conclusiones y
discusiones contestados.
s 3EGUNDO EXAMEN TEØRICO DE LABORA-
torio.
5. Demostración del material y equipo de labo-
4. Reglas que deberán seguirse en el laboratorio:
ratorio con el que trabajarán en las sesiones
a) Se permitirán sólo 5 min de tolerancia prácticas (práctica 1).
después de la hora de entrada para ingre-
6. Pláticas sobre toxicidad de reactivos, riesgos de
sar al laboratorio y recoger el equipo que
trabajo, venenos, antídotos y medidas de ur-
corresponde.
gencia inmediata.
b) El material roto por el estudiante deberá
7. Enseñar a los estudiantes cómo pipetear de
ser repuesto antes de la siguiente sesión,
forma correcta para evitar problemas de in-
mientras tanto se hará un vale al Depar-
toxicaciones por los reactivos que se usen.
tamento de Bioquímica en el que se es-
pecificará el tipo de material que se debe
y que será firmado por el estudiante y el
instructor titular. Disposición de residuos de las
El material roto se repondrá en forma prácticas de laboratorio de
física (no con dinero). bioquímica
C ,IMPIEZA %L ESTUDIANTE NO DEBERÉ TIRAR Se utilizarán recipientes donde se vaciarán los resi-
papeles en el piso de laboratorio, tendrá duos clasificados de la siguiente manera:
que dejar su lugar de trabajo limpio y uti-
lizar los botes de basura del laboratorio. s #OLECTOR DE SOLUCIONES ÉCIDAS Y BÉSICAS !
d) Cuando el estudiante falte a una sesión s #OLECTOR DE MEZCLAS DE SUSTANCIAS TØXICAS IN-
práctica no podrá reponer los experimen- orgánicas (E inorgánicas).
tos vistos en esa ocasión.
s #OLECTOR DE MEZCLAS DE SUSTANCIAS TØXICAS OR-
e) Al terminar cada práctica, los integrantes gánicas (E orgánicas).
de cada equipo deberán seguir de manera
puntual las indicaciones que señalan la s #OLECTOR DE SOLVENTES NO HALOGENADOS #
disposición de residuos de los tubos de
ensayo, la basura contaminada y los RPBI. s #OLECTOR DE RESIDUOS DE CIANURO
f) Al finalizar la actividad, el equipo utili- s #OLECTOR DE BASURA CONTAMINADA

zado deberá ser entregado completo, lim-
pio y seco, 10 min antes de la hora de s #OLECTOR DE RESIDUOS PUNZOCORTANTES DE 20")
salida.
s #OLECTOR DE RESIDUOS no anatómicos de RPBI.
X Manual de prácticas de bioquímica

Reglamento, precauciones
Práctica 1
y material del laboratorio
de bioquímica
Reglamentación y precauciones en el laboratorio de bioquímica
Introducción
Cuando trabajamos en un laboratorio debemos evitar
a toda costa el riesgo de accidentes, esto sólo lo
podemos conseguir si se siguen ciertas normas y prác-
TICAS DISE×ADAS DE MANERA ESPECÓlCA ,A SEGURIDAD EN
un laboratorio se realiza con base en un conjunto de Conocer el reglamento del laboratorio de bioquími-
protocolos de trabajo, los cuales deben incluir el CA DE LA &ACULTAD DE /DONTOLOGÓA DE LA 5!.,
riesgo y las normas de prevención, así como también
las medidas que debemos tomar cuando ocurre un
accidente. Es necesario que cada laboratorio cuente Metodología
con sus propios protocolos, mismos que todo el per-
,EE EL SIGUIENTE REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BIO-
sonal debe conocer y cumplir, además es muy impor-
química y comenta los puntos importantes con tu
tante resaltar que cada una de las personas debe
instructor y compañeros de clase.
comprender que sus actitudes y acciones dentro de
un laboratorio determinan la seguridad de sus com-
pañeros y las propias.
Un programa de seguridad de laboratorio depende Normas de admisión al laboratorio
de la participación y cooperación de todos: estudian- a) Queda prohibido ingresar al departamento de
tes, profesores, instructores y asistentes. Recuerda: tu bioquímica con gorras, pearcings y cabello lar-
descuido puede poner en riesgo a tus compañeros. go que rebase la nuca (en hombres).
En el laboratorio de bioquímica de la Facultad de
Odontología contamos con un reglamento que esta- b) Se prohíbe ingresar al laboratorio con pantalón
blece la normatividad y lineamientos para su uso. Sus corto, blusas escotadas y de tirantes, sandalias
disposiciones deberán ser acatadas por los alumnos o zapatos abiertos. Utilizar zapato que esté por
que cursan la materia de Bioquímica, así como por completo cerrado o que sea de seguridad.
profesores e instructores que la imparten y que se
encuentran dentro del mismo departamento. Incluye c) Si el estudiante falta a teoría de laboratorio no
reglas para la admisión y permanencia de los estu- podrá asistir a la práctica y se contará como
diantes dentro del laboratorio, algunas normas de inasistencia.
disciplina que deberán acatarse; asimismo, se hace
referencia a las sanciones correspondientes a las que d) Se dará un margen de 5 min para entrar al
se harán acreedores aquellos estudiantes que no laboratorio, al término del cual el estudiante
cumplan con este reglamento. no podrá realizar la actividad.
1
e) El estudiante deberá entregar su prelaborato- k) No pipetear con la boca.
rio contestado y su manual de prácticas de
laboratorio, ya que son un requisito para poder l) No dejar basura en las mesas de trabajo o en
realizar la actividad. el piso, ésta deberá ser dispuesta en los conte-
nedores de basura.
f) El estudiante deberá colocarse la bata (abro-
chada) y sus lentes de protección antes de entrar m) El estudiante sólo podrá permanecer dentro del
al laboratorio y deberán quitárselos después de aula o laboratorio durante su horario de clase.
salir de éste.
Precauciones básicas en la práctica

Normas de permanencia en el habitual del laboratorio
laboratorio
A ,OS MOSTRADORES DEBEN ESTAR LIMPIOS Y OR-
A ,A REALIZACIØN DE LAS ACTIVIDADES ES individual, denados.
por lo que cada alumno deberá tener su propio
manual de prácticas y colores. Será sancionado b) Eliminar los residuos químicos en el contene-
al copiar el trabajo de sus compañeros, por lo dor adecuado de acuerdo con las normas esta-
tanto la práctica será anulada. blecidas para tal fin.
b) Para que la actividad tenga validez, deberá te- C ,OS OBJETOS AGUDOS AGUJAS LANCETAS ENTRE
ner el sello que acredite su realización, la cual otros) han de considerarse en potencia infec-
deberá ser firmada por el instructor; asimismo ciosos, ser manejados con sumo cuidado y de-
será necesario tener la asistencia a la teoría y ben almacenarse en contenedores especiales
a la práctica marcada en la lista. bien etiquetados (RPBI).
c) Al terminar, cada alumno deberá dejar limpio d) Es obligatorio emplear bata durante el tiempo
y en orden su lugar, con el material completo y que se trabaje en el laboratorio.
revisado por la asistente; además debe estar por
E ,AVARSE LAS MANOS TRAS ACABAR LAS ACTIVIDADES
completo seco y en buen estado. del laboratorio.
d) Está prohibida la utilización de teléfonos celu-
f) No debe ser almacenado en el laboratorio nin-
lares y aparatos de audio dentro del salón de
gún tipo de alimento ni bebida, salvo en refri-
clase y del laboratorio, ya sea para hacer o reci-
geradores autorizados.
bir llamadas, tomar fotos, video o grabar audio.
Sólo se podrá utilizar cámara fotográfica o la g) No hay que cerrar sobres ni pegar etiquetas hu-
cámara del celular, cuando les indique el profe- medeciéndolas con la lengua. Tampoco se reco-
sor o instructor que tomen fotografías de los mienda llevarse lápices o bolígrafos a la boca.
procedimientos de la práctica.
h) No deben aplicarse cosméticos, aunque puede
e) Se prohíbe comer, fumar o masticar chicle en utilizarse crema de manos.
esta zona.
i) Es muy importante no tocarse ni frotarse los
f) Evitar gritar y usar palabras altisonantes mien- ojos mientras se trabaja.
tras se esté en el laboratorio.
j) Consultar al profesor o instructor en caso de
g) Tratar con respeto a los profesores, instructo- alguna duda y mantenerlo informado de cual-
res y al personal de apoyo (secretarias, asisten- quier eventualidad.
tes e intendentes).
k) Mantener las sustancias inflamables lejos de las
h) Evitar correr en el laboratorio, puede ser peli- llamas de los mecheros y no calentarlas o des-
groso para las demás personas que se encuen- tilarlas directo con el mechero.
tren ahí.
l) Nunca mirar por la boca de los tubos, probetas
i) Antes de empezar una práctica el alumno debe u otro material mientras se realice una reac-
conocer y entender los procesos a trabajar. ción, para evitar salpicaduras y otros riesgos.
j) Mantener silencio y procurar estar concentra- m) Revisar los materiales antes de iniciar la prác-
do en lo que se realiza. tica e informar en caso de cualquier novedad.
2 Manual de prácticas de bioquímica

Qué hacer en caso de: b) Si por descuido tocas o te cae algún producto
en la piel u ojos, lávate de inmediato la zona
a) En caso de derrames accidentales de reactivos afectada con abundante agua e informa al pro-
y, o soluciones, debes reportar el accidente al fesor o instructor.
instructor o asistente .
1. Investiga qué significa la etiqueta en cada uno de los siguientes casos:

E
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
EXPLOSIVO _________________________________________________________________
O
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
COMBURENTE _________________________________________________________________
C
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
CORROSIVO _________________________________________________________________
Práctica 1 Reglamento, precauciones y material del laboratorio de bioquímica 3

F _________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
FÁCILMENTE
INFLAMABLE _________________________________________________________________
F+
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
EXTREMADAMENTE _________________________________________________________________
INFLAMABLE _________________________________________________________________
Xn
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
NOCIVO _________________________________________________________________

T _________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
TÓXICO
_________________________________________________________________
T+ _________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
MUY TÓXICO
_________________________________________________________________
XI _________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
IRRITANTE _________________________________________________________________

2. Investiga otros reglamentos de laboratorios y escribe 10 normas que hayas encontrado en común con
las de tu laboratorio.
1. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
2. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
3. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
4. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
5. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
6. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
7. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
8. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
9. _______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
10. ______________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
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Conocer el material y equipo del laboratorio de bioquímica
Introducción s Vidrio. Es uno de los materiales más usados en

el laboratorio, debe ser resistente a los ácidos
En el laboratorio de bioquímica se trabaja con dife- y a los álcalis, así como responder a determi-
rentes tipos de materiales y equipo, la elaboración nadas exigencias térmicas y mecánicas. Sus
de la mayoría de ellos se realiza sobre todo con los ventajas son su carácter inerte, transparencia,
siguientes materiales: manejabilidad y la posibilidad de diseñar pie-
zas a medida; sin embargo, su mayor incon-
s Metales. ,OS MÉS UTILIZADOS SON HIERRO Y SUS
veniente es la fragilidad (figura 1-5).
aleaciones, cobre, níquel, platino, plata y plomo.
Estos metales se utilizan para fabricar soportes,
pinzas, anillos, rejillas, recipientes para agua,
espátulas, mecheros, entre otros (figura 1-1).
s Porcelana. Con este material se fabrican cáp-

sulas, crisoles (figura 1-2).
s Corcho. En particular se usa en la elaboración Identificar el material y la función del equipo más
de tapones (figura 1-3). importante que utilizarás en el laboratorio de bio-
química.
s Caucho. Sirve para fabricar mangueras y ta-
pones.
Metodología
s Asbesto. Se emplea en la fabricación de mallas,
guantes y como aislante térmico (figura 1-4). Tu instructor te mostrará el equipo de laboratorio
que utilizarás para realizar tus prácticas a lo largo de
s Teflón. Es utilizado en la fabricación de man- TODO EL SEMESTRE ,LENA EL SIGUIENTE CUADRO CON LA
gueras, válvulas, llaves para buretas, recipien- información que te proporcione y compleméntala
tes, empaques, entre otros. con lo que tú investigues:
Figura 1-1. Equipo de laboratorio a base de metales.

Figura 1-2. Equipo de laboratorio Figura 1-3. Equipo de laboratorio a base
a base de porcelana. de corcho y caucho.
Figura 1-4. Equipo de laboratorio a base Figura 1-5. Equipo de laboratorio a base de vidrio.
de asbesto.
NOMBRE DIBUJO MATERIAL FUNCIÓN
Probeta graduada
Termómetro
Continúa

Gradilla
Mechero
Vaso de
precipitados
Tubo de ensayo
Pinza
Continúa

Soporte universal
Trípode o tripié
Aro
Asbesto
Crisol o vidrio de
reloj.
Continúa

Pipetas
Cápsula o placa
de porcelana
Embudo
Mortero
Varilla o agitador
de vidrio
Continúa

Piseta
Portaobjetos
Referencias
"ISHOP - , &ODY % 0 3CHOEFF , % %DS Clinical Chemistry: Principles, Techniques, and Correlations. ,IPPINCOTT
7ILLIAMS 7ILKINS
"ETTELHEIM & ,ANDESBERG * Laboratory Experiments for Introduction to General, Organic and Biochemistry. Cengage
,EARNING
2OJO - $ !GUIAR * - #ERCENADO % DE /RY & DE LA 2OSA - 2ECOMENDACIONES PARA LA IMPLANTACIØN DE LA NOR-
mativa de calidad UNE-EN-ISO 15189 en el laboratorio de microbiología clínica: bacteriología y serología.Enfermedades Infeccio-
sas y Microbiología Clínica, 28(9), 629-637.
"EJARANO , $ # DE 1UÓMICA 0 '5·! $% ,!"/2!4/2)/ $% ")/15·-)#!

Método científico, cómo
Práctica 2
buscar artículos e información
en la internet
Introducción ,OS DATOS QUE SE OBTENGAN EN LA experimentación

tendrán que ser analizados, lo que permitirá com-
El ser humano siempre ha tenido la curiosidad de probar si la hipótesis formulada era correcta, también
conocer las causas de muchos fenómenos naturales, permite dar una explicación científica al hecho o
esto lo ha llevado a conocer su entorno y así poder fenómeno observado; es decir, interpretar los hechos
MODIlCARLO ,OS CONOCIMIENTOS SOBRE LAS DIVERSAS observados de acuerdo a los datos experimentales.
ciencias de la naturaleza que el hombre ha adquirido, Con las regularidades observadas en un hecho o fe-
se deben, sobre todo, al trabajo de investigación de nómeno natural, se puede formular una ley científica,
los científicos. El procedimiento que éstos emplean las cuales se pueden integrar en una teoría científica,
en su trabajo se llama método científico. que es una explicación global de una serie de obser-
El método científico es un proceso planificado,
vaciones y leyes interrelacionadas.
destinado a explicar fenómenos, establecer relaciones
,A COMUNICACIØN DE LOS RESULTADOS Y PROPUESTAS
entre los hechos y enunciar leyes que los expliquen,
de un trabajo de investigación es de gran importan-
para obtener, con estos conocimientos, aplicaciones
cia para transmitir el conocimiento generado, el ins-
útiles al hombre. El método científico consta de las
trumento más utilizado es el reporte de investigación,
siguientes fases:
que no sólo informa de los resultados, sino también
recopila ideas y propuestas, avances tecnológicos que
s /BSERVACIØN
puedan ayudar a plantear la investigación o resolver
s &ORMULACIØN DE HIPØTESIS un problema en particular. Es por eso, que las ideas
deben expresarse con claridad y estar bien estructu-
s %XPERIMENTACIØN radas, ya que de no ser así, con dificultad se tomarán
con seriedad.
s &ORMULACIØN DE TEORÓAS O LEYES
De manera usual, la búsqueda de información del
tema que se quiere desarrollar debe estar con base en
,A observación consiste en examinar con atención libros y revistas científicas especializadas, con la tec-
los hechos y fenómenos que tienen lugar en la natu- nología que disponemos en nuestros días. Estas fuen-
raleza y que pueden ser percibidos por los sentidos. tes de información a menudo las encontramos
Después de las observaciones, se plantea el cómo y agrupadas en bases de datos, como por ejemplo la de
el porqué de lo que ha ocurrido y se formula una la National Library of Medicine encontrada en la pá-
hipótesis. Formular una hipótesis consiste en elabo- gina web www.pubmed.com, o bases de datos de las
rar una explicación provisional de los hechos obser- universidades; por ejemplo, la Universidad Autónoma
vados y de sus posibles causas. DE .UEVO ,EØN POSEE UNA biblioteca digital que re-
Una vez elaborada la hipótesis se tiene que com- úne recursos de información electrónica, digital e im-
probar si ésta es cierta o no, para lo cual se tendrán presa, mediante los cuales podemos localizar de forma
que llevar a cabo experimentos donde se modifiquen referencial y en texto completo: libros, revistas, tesis,
variables que intervienen en el proceso; de esta ma- videos, entre otros materiales que se encuentran dis-
nera el fenómeno que se quiere estudiar se tendrá ponibles para ser consultados por la comunidad uni-
que reproducir y observar varias veces. versitaria, en algunos casos, por el público en general.
13
Metodología 3. Busca tres bases de datos en las cuales puedas
encontrar información de revistas y libros cien-
1. Discute en grupo la importancia del método tíficos que puedas utilizar para elaborar un
científico en la obtención de conocimiento. reporte científico.
2. Haz equipos de cuatro personas para proponer 4. Baja de una base de datos un artículo de inves-
las partes que debe de contener un reporte tigación e identifica las partes del reporte cien-
científico, cada equipo deberá exponer sus re- tífico.
sultados.
Referencias
'AY , 2 -ILLS ' % !IRASIAN 0 7 Educational research: Competencies for analysis and applications. Pearson Higher Ed.
,AWRENCE 3 'ILES # , /CTOBER 3EARCHING THE WEB 'ENERAL AND SCIENTIlC INFORMATION ACCESS )N Internet Technologies
and Services, 1999. Proceedings. First IEEE/Popov Workshop on (pp. 18-31). IEEE.

Determinación del pH salival
y de diversas soluciones
Práctica 3
problema por medio del
uso de indicadores
Introducción 3. HCl 10%.
El pH puede definirse como logaritmo vulgar o decimal 4. Saliva.

negativo de la concentración de iones hidrógeno.
Esto es pH = -log H. Solución problema 5.
,A ESCALA DE P( ES DEL AL EN DONDE DEL AL Solución problema 6.
6.9 es pH ácido y del 7.1 al 14 es alcalino o básico, Solución problema 7.
7 es el pH neutro en el centro de la escala. (El instructor indicará qué soluciones problema
Un ácido es una sustancia que tiende a perder o [5, 6, y 7] utilizarán para medir su pH).
donar iones Hidrógeno (H+), y una base es aquella
que tiende a aceptar o recibir dichos iones.
Se utilizará papel Hydrión, el cual es un papel ab-

sorbente impregnado con un indicador de amplia
Conocer la escala de el pH y determinar el de dife- gama de la escala del pH.
rentes soluciones mediante el uso de papel Hydrión.
s (UMEDECE CADA UNA DE LAS TIRAS DE PAPEL (Y-
drión con la solución problema correspondiente.
s #OMPARA LA TIRA DE PAPEL (YDRIØN CON EL COLO-

rímetro; el color y la tonalidad determinarán
el pH de la solución problema (figura 3-1).
s #OLORÓMETRO
s 0APEL (YDRIØN
s 0IPETA DE ML PARA GOTEAR LAS SOLUCIONES
Soluciones problema
1. Agua destilada.
2. NaOH 10%. Figura 3-1. Comprobación de pH en colorímetro.
15
Cuadro de resultados
Solución problema Color y número Resultado
1. Agua destilada
2. NaOH 10%
3. HCl 10%
4. Saliva
5.
6.
7.
Dibujos
Dibuja la escala de pH que obtuviste con la saliva y las sustancias utilizadas.

Con base en los resultados obtenidos, realiza tus conclusiones.
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s ,AS SOLUCIONES DE NaOH 10% y HCl 10% se vaciarán en el colector de soluciones ácidas y básicas.
s %L INSTRUCTOR Y PERSONAL DEL LABORATORIO TE INDICARÉN DØNDE SE VACIARÉN LAS SOLUCIONES PROBLEMA Y
s %L papel Hydrión impregnado se vaciará en el colector de basura contaminada.
Referencias
$ÓAZ ! 0RISCILA $ #HÉVEZ # 6ERØNICA # -ENÏNDEZ 6ELÉSQUEZ ' . Variación de la neutralidad del PH salival a
cinco minutos de ingesta de alimentos derivados del maíz en universitarios de 17 a 22 años (Doctoral dissertation, Universidad de
El Salvador).
7OLF + &ARREL - -ARSDEN * -ONTEIRO - ' !LI 2 7ELCH 3 3TRANG * 2EVISIØN DE LOS INDICADORES BIOLØGICOS
de uso ilegal de drogas, consideraciones prácticas y utilidad clínica. RET, Revista de Toxicomanías, (28).
,/.'/2)! * ! ' 0%2)/$/.#)! / # % % #/-0!2!2 %, .)6%, $% 0( 3!,)6!, %. ,!3 $)&%2%.-
4%3 %4!0!3 $% ,! %.&%2-%$!$ 0%2)/$/.4!, ).6%34)'!#)¼. #,·.)#! 0/2
Cruces Mayhua, A. (2014). Prevalencia de caries dental, volumen del flujo salival, grado de pH salival y capacidad amortiguadora
de la saliva en adolescentes con y sin Sindrome de Down.
Práctica 3 Determinación del pH salival y de diversas soluciones problema... 17

Pruebas coloreadas de
Práctica 4
las proteínas. Propiedades
de algunos aminoácidos
Introducción
,AS PROTEÓNAS SON MOLÏCULAS ESENCIALES DE TODOS LOS
organismos vivos que llevan a cabo diversas funcio-
nes como: estructurales, catalíticas, transporte, regu-
lación metabólica y defensa.
,AS PROTEÓNAS ESTÉN COMPUESTAS POR TIPOS DE Identificar y clasificar algunos aminoácidos que forman
, α aminoácidos, los cuales contienen un átomo de parte de las proteínas, de acuerdo con las reacciones
carbono central (α) al que están unidos un grupo específicas del grupo químico, contenido en su
amino, un grupo carboxilo, un átomo de hidrógeno cadena lateral R.
y un grupo R (cadena lateral).
,AS PRUEBAS COLOREADAS PARA LA IDENTIlCACIØN DE
aminoácidos se basan en la reactividad de la cadena
lateral R (figura 4-1).
COO
H3N C H
R
Figura 4-1. Estructura general de los L-α aminoácidos.
1. Prueba de Millon
Introducción cual es positiva en los aminoácidos que lo contengan

en su estructura. Sin embargo, la presencia de clo-
,OS aminoácidos aromáticos o del benceno contienen ruros interfiere en esta prueba, dicha interferencia
estructuras cíclicas en la cadena lateral R. Algunos puede evitarse al agregarse un exceso del reactivo
de éstos contienen en dicha cadena al grupo fenóli- de Millon. Ésta es positiva cuando aparece una co-
co, el cual está constituido por varios compuestos loración roja, lo que indica que la solución problema
orgánicos, en el que el radical hidroxilo (OH) reem- es un aminoácido aromático con el grupo fenólico
plaza a uno o más átomos de hidrógeno. en su estructura.
,A 0RUEBA DE -ILLON ES ESPECÓlCA PARA DETERMI-
nar la presencia de grupos fenólicos, razón por la
19
! CADA TUBO AGREGAR M, DEL REACTIVO DE -ILLON
3. Mezclar y hervir a fuego directo cada uno de
los tubos durante 40 segundos (tomar cada tubo
con las pinzas como se muestra en la figura).
4. Enfriar en agua todos los tubos.
Identificar aminoácidos que contienen el grupo fe-
nólico en su cadena lateral R. 5. Añadir 1 gota de nitrito de sodio al 1 % a cada
uno de los tubos y mezclar.
6. Calentar todos los tubos a baño María hirvien-
te durante 3 minutos (figura 4-2).
,A APARICIØN DE UN COLOR ROJO indica que la
prueba es positiva (figura 4-3).
s TUBOS DE ENSAYO
s VASO DE PRECIPITADO DE M,
s PIPETAS VOLUMÏTRICAS
s -ECHERO
s 6ASO PRECIPITADO DE METAL
Reactivos
s 2EACTIVO DE -ILLON ÉCIDO DE SULFATO MERCÞRICO
s 3OLUCIØN DE NITRITO DE SODIO AL .A./2).
s 3OLUCIØN SATURADA DE CLORURO DE SODIO .A#L
Soluciones problema
s 3OLUCIØN DE PROTEÓNA DE HUEVO AL
s 3OLUCIØN DE TIROSINA AL Figura 4-2. Baño maría.
s 3OLUCIØN DE FENOL AL

s 3OLUCIØN DE TRIPTØFANO AL
s 3ALIVA
1. Se preparan seis tubos de ensayo (se marcan

con el lápiz graso para diferenciarlos).
s 4UBO !GREGAR M, DE PROTEÓNA DE

huevo al 1%.
s 4UBO !GREGAR M, DE TIROSINA AL Figura 4-3. Resultados.
s 4UBO !GREGAR M, DE FENOL AL
s 4UBO !GREGAR M, DE TRIPTØFANO AL
s 4UBO !GREGAR M, DE SALIVA
2ECORDAR QUE LA 0RUEBA DE -ILLON ES INTERFERIDA POR LA PRE-
s 4UBO !GREGAR M, DE PROTEÓNA DE sencia de cloruros, pero esto se elimina al agregar un exceso
huevo al 1% + 15 gotas de solución satu- de reactivo de Millon.
rada de cloruro de sodio saturada.

Solución problema Identificación Color Resultado
1. Proteína de huevo 1%
2. Tirosina 0.5%
3. Fenol 1%
4. Triptófano 0.2%
5. Saliva
6. Proteína de huevo 1% + NaCl
Dibujos
Dibujar los 6 tubos con el color que mostraron en el resultado.
Práctica 4 Pruebas coloreadas de las proteínas. Propiedades de algunos aminoácidos 21

Con base en los resultados obtenidos, realiza tus conclusiones con fundamentos teóricos.
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,OS CONTENIDOS DE LOS SEIS TUBOS SE COLOCARÉN EN EL colector de mezclas de sustancias toxicas inorgánicas.
2. Reacción de Biuret
Introducción se enlazan por sus grupos aminos, y la pérdida de un

GRUPO AMINO COMO AMONIACO .(
Un péptido consiste en dos o más residuos de ami-
noácidos que se unen mediante enlaces peptídicos.
,A REACCIØN DE "IURET ES ESPECÓlCA PARA COMPUES-
tos que contienen dos o más enlaces peptídicos en
su estructura molecular; es decir, que las proteínas y
péptidos (desde tripéptidos) dan esta prueba positi-
va y se caracterizan por la aparición de una colora-
CIØN VIOLETA ,OS DIPÏPTIDOS Y AMINOÉCIDOS LA DAN
negativa.
El reactivo de Biuret es una sustancia formada Identificar algunos péptidos y proteínas, a través de
por la condensación de dos moléculas de urea que la presencia de los enlaces peptídicos.

s 4UBO !GREGAR M, DE SOLUCIØN DE
gelatina al 1%.

peptona al 1%.

s TUBOS DE ENSAYO
urea al 1%.
s PIPETAS
s 4UBO !GREGAR M, DE SALIVA
! CADA UNO DE LOS TUBOS AGREGAR M, DE HI-

dróxido de sodio (NaOH) al 10 % y mezclar.
Reactivos
s 2EACTIVO DE "IURET 3. A cada uno de los tubos agregar 5 gotas de
sulfato de cobre diluido (Biuret) y mezclar.
s (IDRØXIDO DE SODIO .A/( AL
Nota: Obsérvese la aparición de una coloración violeta
s 3ULFATO DE COBRE DILUIDO AL o lila indica que la prueba es positiva (figura 4-4).
Soluciones problema
s 3OLUCIØN DE GELATINA AL
s 3OLUCIØN DE PEPTONA AL
s 3OLUCIØN DE UREA AL
s 3ALIVA
1. Preparar una serie de cinco tubos (se marcan

del 1 al 5 con el lápiz graso).

proteína de huevo al 1%. Figura 4-4. Reacción de Biuret positiva.
%STA REACCIØN SE VE INTERFERIDA CUANDO HAY SALES DE AMONIO SULFATO DE MAGNESIO GLICERINA TÉRTARO SØDICO POTÉSICO ,A INTERFERENCIA
de los dos primeros elementos se elimina con una solución concentrada de hidróxido de sodio (NaOH) al 40%.

2. Gelatina 1%
3. Peptona 1%
4. Urea 1%
5. Saliva
Dibujos

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s ,OS CONTENIDOS DE LOS CINCO TUBOS SE COLOCARÉN EN EL colector de soluciones ácidas y básicas.
3. Prueba del cianuro nitroprusiato
Introducción cianuro nitroprusiato. El cianuro de sodio reduce el

dipéptido cistina, a dos moléculas del aminoácido
En la cadena lateral alifática de la cisteína hay un cisteína.
átomo de azufre. Aunque el grupo sulfhidrilo (-SH)
de la cisteína es apolar, puede formar enlaces de hi-
DRØGENO DÏBILES CON EL OXÓGENO Y EL NITRØGENO ,OS
grupos sulfhidrilo, que son muy reactivos, son com-
ponentes importantes de muchas enzimas. Además,
los de dos moléculas de cisteína pueden oxidarse de
forma espontánea y unirse para formar un dipéptido
llamado cistina, metabolito circulante en la sangre.
,A PRESENCIA DE GRUPOS SULFHIDRILO LIBRES 3( DE
la cisteína, se determinan mediante la prueba de Identificar la presencia de grupos SH en péptidos.

B 4UBO !GREGAR M, DE SOLUCIØN DE
proteína de huevo al 1%.
C 4UBO !GREGAR M, DE SALIVA
D 4UBO !GREGAR M, DE AGUA DESTILADA

s TUBOS DE ENSAYO !GREGAR A LOS TUBOS Y M, DE AGUA
destilada y mezclar.
s PIPETAS VOLUMÏTRICAS
!GREGAR A LOS TUBOS Y M, DE CIANURO
de sodio al 5%.
Reactivos s -EZCLAR BIEN LOS TUBOS Y A×ADIR A CADA UNO DE
s 3OLUCIØN DE CIANURO DE SODIO AL ellos, 5 gotas de nitroprusiato de sodio al 5%
(la preparación de la solución deberá ser re-
s 3OLUCIØN DE NITROPRUSIATO DE SODIO AL ciente).
s ,A APARICIØN DE UNA COLORACIØN PÞRPURA INDICA

que esta prueba es positiva (figura 4-5).
Soluciones problema
s 3OLUCIØN DE CISTINA AL EN ÉCIDO SULFÞRICO
diluido al 1%.
s 3ALIVA
s !GUA DESTILADA
1. Se preparan una serie de cuatro tubos de en-

sayo (marcarlos con el lápiz graso del 1 al 4).
A 4UBO !GREGAR M, DE CISTINA AL Figura 4-5. Prueba del Cianuro Nitroprusiato
en ácido sulfúrico diluido al 1%. positiva.
$EBIDO AL PELIGRO QUE SIGNIlCA TRABAJAR CON EL CIANURO 6%.%./ EL ALUMNO TENDRÉ SUMO CUIDADO EN SU MANEJO 9 SERÉ EL ASISTENTE
de laboratorio quien se lo proporcione.

1. Cistina 0.5%
3. Saliva
4. Agua destilada
Dibujos

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s ,OS CONTENIDOS DE LOS CUATRO TUBOS SE COLOCARÉN EN EL colector de residuos de cianuro.
Referencias
2EMOTA 0 8 ! $%3#2)0#)¼. $% 02#4)#!3 02!#4)#! .O %3425#452! 9 #/-0/3)#)¼. $% ,/3
!,)-%.4/3 ESTRUCTURA CELULAR CONTENIDO DE HUMEDAD PROTEÓNAS CARBOHIDRATOS Y LÓPIDOS PRESENTES EN LOS SISTEMAS ALIMENTA-
rios. UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA, 11.
-ALÏNDEZ # ,UIS * $ETERMINACIØN DE METABOLITOS SECUNDARIOS EN TRES PTERIDOlTOS PLANTAS CON INTERES MEDICINAL
"UITRAGO , - 'ØMEZ #RUZ 2 /LIMPO -ENDIVIL # !YALA &AJARDO ! 5RIBE !RDILA * ! #UANTIlCACIØN DE CISTINA
en orina espontánea para la detección de cistinuria. Acta bioquímica clínica latinoamericana, 48(1), 0-0.
&ORMATIVAS 0ROPØSITOS ) $%3#2)0#)¼. $% 02#4)#!3 02!#4)#! .O -%4/$/3 #5!,)4!4)6/3 0!2!
,! )$%.4)&)#!#)/. $% !-)./!#)$/3 9 02/4%).!3 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA, 11.

Identificación cualitativa de la
Práctica 5
presencia de catalasa en
hígado fresco bovino
Introducción (no pueden vivir sin oxígeno), pero dada su toxici-

dad debe transformarse con rapidez en compuestos
Una de las enzimas que intervienen en la protección menos peligrosos.
y en el mantenimiento del balance oxidante-antio- ,A AUSENCIA CONGÏNITA DE CATALASA ES CAUSANTE DE
xidante es la catalasa. una acatalasemia (o acatalasia), la enfermedad de
,A catalasa es una enzima perteneciente a la ca- Takahara, que se manifiesta por la ausencia de activi-
tegoría de las oxidorreductasas, se compone de cua- dad de la catalasa en los glóbulos rojos y con graves
tro subunidades idénticas a las que se pueden unir infecciones gangrenosas de la boca, puede producir la
otras moléculas. Se encuentra en las células de los pérdida de dientes así como destrucciones de los maxi-
tejidos animales y vegetales, cuya función en los lares y regiones blandas que los cubre.
tejidos es necesaria, ya que durante el metabolismo ,A PRESENCIA DE LA ENZIMA CATALASA EN LOS TEJIDOS
celular se forma una molécula tóxica que es el pe- de los organismos, se puede demostrar en un sencillo
róxido de hidrógeno, H2O2 AGUA OXIGENADA ,A experimento de laboratorio.
importancia de la función de la catalasa en los tejidos
radica en que cataliza la descomposición del peróxi-
do de hidrógeno (H202) en oxígeno y agua. En la
célula, cada molécula de catalasa puede romper mi-
llones de moléculas de peróxido de hidrógeno en
MENOS DE UN SEGUNDO ,A REACCIØN DE LA CATALASA
sobre el H2O2, es la siguiente: Identificar la presencia de la catalasa en tejidos ani-
males mediante la observación de la liberación de
oxígeno al agregar peróxido de hidrógeno.
,A REACCIØN CATALIZADA POR ESTA ENZIMA OCURRE EN

dos etapas, en las cuales interviene el hierro del
grupo hem de la hemoglobina como cofactor.
En los seres humanos, la catalasa utiliza iones de
hierro para sujetar al peróxido de hidrógeno. Muchas
bacterias pueden utilizar enzimas catalasas más gran- s 5n tubo de ensayo o un vidrio de reloj.
des para atacar al peróxido de hidrógeno.
El peróxido de hidrógeno es un residuo del me- s 0IPETA
tabolismo celular de muchos organismos vivos y tie- s 0ERØXIDO DE HIDROGENO
ne, entre otras, una función protectora contra
microorganismos patógenos, sobre todo anaerobios s 4ROCitos de hígado.
29
3. Observar la reacción inmediata que se produce
(figura 5-3).
Datos
1. Colocar en el tubo de ensayo un trozo de hí-
s P( ØPTIMO DE LA CATALASA
gado crudo (figura 5-1).
s 2ANGO DE TEMPERATURA PARA ACCIØN DE LA CATA-
2. Añadir 5 ml de H2O2 (peróxido de hidrógeno)
(figura 5-2). lasa: 0-69 °C.
Figura 5-2. Añadir H2O2.

Figura 5-1. Hígado fresco.
Figura 5-3. Se produce un intenso burbujeo.

Dibujos
Dibujar un diagrama de flujo del procedimiento que seguiste en la práctica, desde el inicio hasta el resultado
obtenido.
Práctica 5 Identificación cualitativa de la presencia de catalasa en hígado fresco bovino 31

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Importante: ,OS TROZOS DE HÓGADO UTILIZADOS EN LA PRUEBA EXPERIMENTAL SERÉN DEPOSITADOS EN UNA BOLSA DE
plástico que será entregada a la asistente en turno del laboratorio, para su conservación en el congelador y
su posterior desecho.
Referencias
,ØPEZ ) 3 "ALBUENA , - (ERNÉNDEZ ! * *ANUARY %L TEMA DE LA CATALASA EN LOS DIFERENTES NIVELES DE ENSE×ANZA
aprendizaje. In Congreso Virtual sobre Tecnología, Educación y Sociedad (Vol. 1, No. 4).
!HMED 4 "AIDYA 3 !CHARJEE - 2AHMAN 4 1UALITATIVE ANALYSIS OF DRINKING WATER THROUGH THE MOST PROBABLE
number (MPN) method.Stamford Journal of Microbiology, 3(1), 9-16.
3CHABAUER , 7ENNING - (UBER ) %HLING 3CHULZ - .OVEL PHYSICO CHEMICAL DIAGNOSTIC TOOLS FOR HIGH THROUGHPUT
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/KUDA - /SAKI 4 +IKUCHI 3 5EDA * ,IN 9 9ONEZAWA ( &UKUDA 9 %VALUATION OF A STOOL ANTIGEN TEST USING
a mAb for native catalase for diagnosis of Helicobacter pylori infection in children and adults.Journal of medical microbiology, 63(Pt
12), 1621-1625.

Determinación de grupo
Práctica 6
sanguíneo y factor RH
Introducción anticuerpos B en el plasma. Encontró también un

cuarto tipo de sangre, la cual no tiene ningún tipo
,AS FUNCIONES DE LA SANGRE SE HAN ESTUDIADO POR MUCHOS de proteína o antígeno, pero sí tiene anticuerpos anti
siglos, se intentaron en muchas ocasiones transfusiones A y anticuerpos Anti B, y la denominó Tipo 0.
buscando curar alguna enfermedad, sin embargo estas Son 4 los tipos de sangre que podemos observar
transfusiones resultaban contraproducentes. de acuerdo con la presencia o no de los antígenos.
%N +ARL ,ANDSTEINER COMENZØ A MEZCLAR ,A SANGRE TIPO ! SANGRE TIPO " SANGRE TIPO !" Y
distintas sangres, y observó que al mezclarlas algunas sangre tipo O.
se disolvían sin ningún problema, y otras no. Con base en estos conceptos, se sabe que en una
Descubrió que en la superficie de los glóbulos transfusión sanguínea, una persona con la sangre tipo A
rojos o hematíes existían dos tipos de proteínas o SØLO PUEDE RECIBIR DE OTRA CON TIPO ! ,A SANGRE 4IPO
antígenos que denominó A y B. " SØLO SE MEZCLARÉ CON OTRA TIPO " ,A SANGRE TIPO !"
Observó que en el plasma también se pueden en- como no tiene su plasma anticuerpos A o B puede
contrar dos tipos de proteínas denominadas anticuer- recibir de A y de B, por lo que se le denomina aceptor
pos que reaccionan a la presencia de estos antígenos universal; por último, la sangre tipo O como no tiene
! Y " ,OS ANTICUERPOS Y LOS ANTÓGENOS PERTENECEN AL antígenos ni anticuerpos puede donar a todos los tipos
tipo de proteínas llamadas inmunoglobulinas. de sangre, por lo que se le denomina donador univer-
De esta forma tendremos en el plasma anticuer- SAL ,OS ANTÓGENOS CORRESPONDEN A UN TIPO DE PROTEÓNAS
pos A en una sangre cuyos glóbulos rojos sean tipo que actúan contra invasores ajenos al cuerpo, conoci-
B, y anticuerpos B en el plasma de una sangre cuyos dos como anticuerpos o inmunoglobulinas, se ligan a
glóbulos rojos sean tipo A. los antígenos invasores y los inactiva o destruye.
+ARL ,ANDSTEINER AL OBSERVAR QUE ALGUNAS SANGRES Se han descubierto muchos otros tipos de sangre,
eran compatibles al mezclarse, determinó que existe pero son minoritarios. Actualmente existen 32.
otro grupo sanguíneo, el tipo AB. Este tipo de sangre +ARL ,ANDSTEINER RECIBIØ EL PREMIO NOBEL DE ME-
es compatible debido a no tener anticuerpos A y dicina por su investigación en los tipos de sangre ABO.
Proteínas
Composición Estructura Forma Función

química
Catalizadoras Reguladoras P. de P. de P. de
Simples Primaria Globulares Fibrosas defensa Estructurales transporte
(enzimas) (hormonas) reserva
Ej: Antígenos: Ej:

Conjugadas Secundaria Ej: Colágena A, B, RH Ej: Colágena Hemoglobina
Ej: Ferritina
Inmunoglobulinas
Derivadas Terciaria
Cuaternaria
Figura 6-1. Clasificación de proteínas hemáticas.
33
%N ,ANDSTEINER Y 7EINER DESCUBREN OTRO
antígeno o proteína presente en los distintos grupos
sanguíneos, éstas van ligadas a un cromosoma. Fue-
ron denominados factores RH debido a que fueron
encontrados al estudiar sobre un tipo de mono de-
nominado Rhesus.
,AS SANGRES QUE CONTENÓAN ESTE FACTOR LAS DENOMI-
no Rh+ y las que no lo tenían Rh-. De igual forma
un Rh+ puede recibir sangre de un Rh- no le afecta.
Pero un Rh- no puede recibir de un Rh+ ya que no
se disolvería, provocando aglutinación.
,OS ANTÓGENOS !"/ TAMBIÏN PUEDEN PRESENTARSE Figura 6-1. Muestras de sangre en portaobjetos.
en distintos tejidos y secreciones de nuestro cuerpo,
como la saliva, secreciones del tubo gastrointestinal, 2. Colocar en las muestras de sangre los sueros
líquido de quistes ováricos ,líquido seminal, líquido anti-A, anti-B y anti-D en las divisiones corres-
amniótico, células epiteliales, endotelio de vasos san- pondientes (figura 6-2).
guíneos, leucocitos, plaquetas, lágrimas, entre otros.
3. Mezclar con un palillo diferente en cada sección
para evitar la contaminación de las muestras
(figura 6-3).
4. Al finalizar la práctica, observa el resultado

obtenido y realiza tu conclusión. Recuerda
también que el trabajar con punzocortantes y
desechos biológicos como la sangre es poten-
Identificar el grupo sanguíneo mediante toma de
cialmente infecciosa.
muestras de sangre contra los antígenos A, B y D.
s -UESTRA DE SANGRE
s PORTAOBJETOS
s ,ANCETA DESECHABLE
s 3UEROS ANTI ! ANTI " Y ANTI $
s ,ÉPIZ GRASO
Figura 6-2. Colocación de sueros Anti-A,
s 0ALILLOS DE MADERA Anti-B y Anti-D.
1. Dividir el portaobjetos en tres secciones y

marcar cada casilla con las letras A, B y D. Por
el reverso de éstas, agregar una gota de sangre en
cada una de las divisiones; para esto se necesita-
rá dar una pequeña punción en un dedo de la
mano con una lanceta desechable (figura 6-1). Figura 6-3. Mezclar con palillo.

Dibujos
Dibujar un diagrama de flujo del procedimiento que seguiste en la práctica, desde el inicio hasta el resultado
obtenido.
Práctica 6 Determinación de grupo sanguíneo y factor RH 35

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s %L PORTAOBJETOS Y LA LANCETA SE COLOCARÉN EN EL colector de residuos punzocortantes de RPBI.
s %L PALILLO Y EL ALGODØN SE COLOCARÉN EN EL colector de residuos no anatómicos de RPBI.
Referencias
#UIPING :HANG 9I ,I ,EISHEN 7ANG 3HURONG 3UN 'ONGSHU ,IU *UNHONG ,ENG *IA 'UO ,I ,V 7EIDONG ,I #UILIN :HANG ET
al.(2015). Blood group AB is protective factor for gestational diabetes mellitus: a prospective population-based study in Tianjin,
China. Diabetes Metab Res Rev.,1(6): 627–637. Published online 2015 May 11. doi: 10.1002/dmrr.2650.
-IAO 3 9 :HOU 7 #HEN , 7ANG 3 ,IU 8 ! )NmUENCE OF !"/ BLOOD GROUP AND 2HESUS FACTOR ON BREAST CANCER
risk: A meta–analysis of 9665 breast cancer patients and 244 768 controls. Asia–Pacific Journal of Clinical Oncology, 10(2), 101-
108.
,ØPEZ %SPINOSA * ! !PUNTES PARA LA HISTORIA DE LAS TRANSFUSIONES SANGUÓNEAS Revista Cubana de Medicina General Inte-
gral, 13(4), 405-408.
,ANDSTEINER + The specificity of serological reactions. Courier Corporation.
,ANDSTEINER + 7IENER ! 3 3TUDIES ON AN AGGLUTINOGEN 2H IN HUMAN BLOOD REACTING WITH ANTI RHESUS SERA AND WITH
human isoantibodies. The Journal of experimental medicine, 74(4), 309-320.

Factores que intervienen
Práctica 7
en la velocidad de la
reacción enzimática
Introducción
,AS ENZIMAS SON PROTEÓNAS QUE CATALIZAN REACCIONES
químicas en los seres vivos. Igual que la biocatálisis
que regula la velocidad a la cual tienen lugar los
procesos fisiológicos, las enzimas llevan a cabo fun-
ciones definitivas relacionadas con la salud y la enfer- s TUBOS DE ENSAYO
MEDAD ,A VELOCIDAD DE ACCIØN DE LAS ENZIMAS DEPENDE
de varios factores, tales como pH, temperatura, con- s VASOS DE PRECIPITADO
centración de la enzima, concentración del sustrato,
oxidación y radiación. s PLACA DE PORCELANA
Para ésta práctica la enzima que se investigará s PIPETAS
será la amilasa salival o ptialina, que se encuentra en
la saliva. Esta enzima es responsable de la hidrólisis s 4ERMØMETRO
del almidón proveniente de los alimentos, hasta con-
vertirlo en moléculas de maltosa. Podremos demos- s 0APEL (YDRIØN
trar que durante la hidrólisis, el almidón pasa por
productos intermediarios llamados dextrinas (amilo-
dextrinas, eritrodextrinas y acrodextrinas), pues a
medida que avanza el proceso va perdiendo su ca-
Reactivos
pacidad de dar su color típico azul marino con las s 2EACTIVO DE YODO ,UGOL
soluciones yodadas. Cuando se está en etapa de ami-
lodextrina da color café oscuro con el reactivo de s (#L
,UGOL EN LA ETAPA DE ERITRODEXTRINA DA UN COLOR ROJI- s .A/(
zo y en la etapa de acrodextrina se dice que no hay
color, sin embargo, podemos apreciar un color ama-
RILLO CLARO QUE ES EL COLOR DEL REACTIVO DE ,UGOL
Soluciones problema
s 3ALIVA
s !LMIDØN
Identificar los factores que alteran la velocidad enzi-

mática de la amilasa salival o ptialina.
37
Influencia de la concentración de la enzima sobre la velocidad
de una reacción catalizada por enzimas
,A VELOCIDAD DE UNA REACCIØN CATALIZADA POR ENZIMAS 5. Observa los cambios de color que se llevan a
será directamente proporcional a la concentración cabo en las placas de porcelana, a mayor concen-
de la enzima. tración de enzima (amilasa salival) se llega con
mayor rapidez al punto acrómico, esto ocurre
en un tiempo aproxima entre 10 y 16 minutos.
6. Si la actividad de la amilasa es débil se puede

AGREGAR M, DE .A/( AL $EBIDO A QUE
los halógenos tiene acción sobre la velocidad
de acción de la amilasa salival.
1. Se preparan cuatro tubos de ensayo (enume-

rarlos del 1 al 4 con el lápiz graso).
!GREGAR A CADA UNO DE LOS TUBOS M, DE AL-

midón al 1%.
a) Tubo 1. Agregar 1 gota de saliva.
b) Tubo 2. Agregar 2 gotas de saliva.
c) Tubo 3. Agregar 5 gotas de saliva.
d) Tubo 4. Agregar 10 gotas de saliva.
3. Agitar a la perfección cada uno de los tubos.
#ADA MIN SE LES HACE LA PRUEBA DE ,UGOL

(yodo) en la placa de porcelana el contenido
de cada uno de los tubos, hasta llegar al punto
acrómico (figura 7-1). Figura 7-1. Prueba de Yodo-Lugol cada 2 minutos.
MINUTOS
Tubo No. 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 15

Dibujos
Dibuja la placa de porcelana con los distintos cambios que observaste al llevarse a cabo la hidrólisis y reali-
ZAR LA PRUEBA DE ,UGOL
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Práctica 7 Factores que intervienen en la velocidad de la reacción enzimática 39

s ,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS DEBERÉN COLOCARSE EN EL colector de soluciones ácidas y básicas.
s 3ECAR LA PLACA DE PORCELANA CON UN PAPEL SANITA Y COLOCAR EL PAPEL EN EL colector de basura contaminada.
Influencia de la temperatura sobre la velocidad de una reacción

catalizada por enzimas
,OS CAMBIOS EN LA TEMPERATURA DURANTE UNA REACCIØN b) Recipiente 2. Agua de la llave, para tener
que es catalizada por una enzima influyen de manera una temperatura ambiente.
directa sobre la velocidad de la reacción, algunas
veces provocan aceleración y otras, inhibición de la c) Recipiente 3. Agua destilada, calentarla
velocidad. hasta una temperatura de 38°.
d) Recipiente 4. Agua destilada, calentarla

hasta una temperatura de 85° (figura 7-2).
4. Una vez colocados los tubos en cada uno de

los recipientes, dejar pasar 5 min para que to-
men la temperatura del recipiente y agregar a
cada tubo 5 gotas de saliva; por último, agitar.
1. Se prepara una serie de cuatro tubos (enume- (ACER LA PRUEBA DE ,UGOL YODO EN LA PLACA DE
rarlos del 1 al 4 con el lápiz graso). porcelana a cada uno de los tubos, cada 2 min
hasta llegar a 20 minutos.
!GREGAR A CADA UNO DE LOS TUBOS M, DE AL-
midón al 1%. 6. Después de transcurridos 20 min, aquellos tu-
bos que todavía den color con el reactivo de
3. Preparar los siguientes recipientes para incu- ,UGOL SE INCUBARÉN DURANTE MIN EN EL RE-
bar los tubos: cipiente en el que la hidrólisis se realizó más
rápido, y pasado este tiempo se le hará la prue-
a) Recipiente 1. Hielo picado, para tener BA DE ,UGOL
una temperatura de 10°.
Figura 7-2. Dejar reposar 5 minutos.

MINUTOS
Tubo No 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
1. Temp.
10°
2. Temp.
Amb.
3. Temp.
38°
4. Temp.
85°
Dibujos
$IBUJA LA PLACA DE PORCELANA CON LAS TONALIDADES QUE OBSERVASTE AL HACER LA PRUEBA DE ,UGOL CADA DOS MINUTOS

1. ¿En cuál tubo ocurrió la hidrólisis más rápido?
2. ¿A qué temperatura se realizó dicha hidrólisis?
z1UÏ TUBOS TODAVÓA DAN COLOR CON EL REACTIVO DE ,UGOL
4. ¿Cómo se encuentra la enzima en cada uno de los tubos?
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s ,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS COLOCAR EN EL colector de soluciones ácidas y básicas.
s 3ECAR LA PLACA DE PORCELANA CON UN PAPEL SANITA Y COLOCAR EL PAPEL EN EL colector de basura con-
taminada.
Influencia del pH sobre la velocidad de una reacción

catalizada por enzimas
,AS VARIACIONES EN EL P( INmUYEN DE MANERA DIRECTA TUBOS

sobre la velocidad de una reacción catalizada por
Reactivos 1 2 3 4 5 6 7
enzimas, algunas veces provocan una aceleración y
otras, una inhibición. HCl 0.2 % 5.00 1.25 0.60 0.25 0.00 0.00 0.00
NaOH 0.2 % 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.25 1.25
H20 4.00 7.75 8.40 8.75 9.00 8.75 7.75
s -EZCLAR BIEN EL CONTENIDO DE LOS TUBOS
s !GREGAR M, DE ALMIDØN AL A CADA UNO DE

los tubos.
s 3E PREPARA UNA SERIE DE SIETE TUBOS DE ENSAYO s !GREGAR M, DE SALIVA A CADA UNO DE LOS TUBOS
(enumerarlos del 1 al 7 con el lápiz graso).
s (ACER LA PRUEBA DE ,UGOL YODO EN LA PLACA DE
s !GREGAR A CADA TUBO LO SIGUIENTE porcelana a los 2, 12, 22 y 32 minutos.

Recuerda:
s ,A PRUEBA DE YODO NO DEBE HACERSE EN MEDIO
alcalino, por lo que antes de hacer la Prueba
DE ,UGOL AL CONTENIDO DE LOS TUBOS Y SE
coloca una gota de HCl al 0.2% en la concavi-
dad de la placa de porcelana, para acidificar.
s 0ASADOS LOS MIN ES NECESARIO REINCUBAR LOS

tubos que no sufrieron hidrólisis (tubos en los
que no hubo cambio en la coloración de la
PRUEBA DE YODO ,A REINCUBACIØN DEBE SER A Figura 7-3. Placa de Porcelana con la Prueba de
38 ° durante 20 min, después de este tiempo Yodo-Lugol.
HACER DE NUEVO LA PRUEBA DE ,UGOL lGURA
s 5N P( DESFAVORABLE DESTRUYE O INHIBE LA ACTI-

vidad de la enzima.
Anotar colores y tipo de pH (ácido o básico) de acuerdo al colorímetro.
TUBOS
Minutos 1 2 3 4 5 6 7
2´
12 ´
22 ´
32´
20´
pH

1. ¿Qué pH tiene cada uno de los tubos?
2. ¿Qué pH inactiva a la enzima (Amilasa salival)?
3. ¿Qué pH inhibe la actividad de la enzima (Amilasa salival)?
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s ,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS COLOCAR EN EL colector de soluciones ácidas y básicas.
s 3ECAR LA PLACA DE PORCELANA CON UN PAPEL SANITA Y COLOCAR EL PAPEL EN EL colector de basura contami-
nada.
Referencias
3UMNER * " 3OMERS ' & Chemistry and methods of enzymes. Academic Press.
#ORDERO - ! ,ØPEZ ! 3 6ILLAR . - 'ARCÓA ) ' ,ØPEZ - 2 0I×ERO ! / #ASTELL % # #ORTISOL SALIVAL
como indicador de estrés fisiológico en niños y adultos; revisión sistemática. Nutrición Hospitalaria,29(n05), 960-968.
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,AMBY 4OVAR # 0 'ØMEZ 'ONZÉLEZ / , *ARAMILLO 'ØMEZ , - #ONCENTRACIØN DE α-amilasa salival en niños con
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ÏDGAR :APATA * -ODELAMIENTO DE LA CINÏTICA DE HIDRØLISIS ENZIMÉTICA DE PROTEÓNAS DEL PLASMA BOVINO

Reacciones para investigar
Práctica 8
la presencia de azúcares
reductores
Introducción
,OS CARBOHIDRATOS REDUCTORES SON AQUELLOS QUE POSEEN
un grupo aldehído o cetónico libre en su estructura
química, capaz de reaccionar frente a los ácidos, iones
metálicos o bases. Sufren oxidación o fragmentación
para dar lugar a la observación de positividad de las Investigar e identificar las propiedades químicas de
reacciones investigadas. reducción de algunos carbohidratos, aplicando pruebas
,OS IONES CÞPRICOS EN PRESENCIA DE LAS SOLUCIONES específicas (Benedict) para cada uno de ellos.
de azúcares reductores se reducen a iones cuprosos
que al final forman óxido cuproso.
Reacción de Benedict
Introducción
En esta prueba investigaremos la presencia de azú-
cares reductores, que se basa en la formación de
óxido cuproso (precipitado de color rojo) al reducir-
se el hidróxido cúprico a un azúcar ácido en un
medio alcalino para dar estabilidad a la reacción. s TUBOS DE ENSAYO
El reactivo de Benedict es una solución muy es-
table formada por: s PIPETAS
s #ITRATO DE SODIO $ISUELVE EL #U3/4 (sulfato s VASO DE PRECIPITADO DE M,

de cobre). s 0INZA PORTATUBOS
s #ARBONATO DE SODIO $A EL MEDIO DE /( A LA
reacción.
s 3ULFATO DE COBRE 3E TRANSFORMA EN HIDRØXIDO Reactivos

cúprico, para después reaccionar y dar óxido s 2EACTIVO DE "ENEDICT
cuproso.
45
Soluciones problema
s !LMIDØN
s 'LUCOSA
s 'ALACTOSA
s 3ACAROSA
s -ALTOSA
s CIDO ASCØRBICO
s 3ALIVA
Figura 8-1. Calentar a baño maría

durante 3 minutos.
s 3E PREPARA UNA SERIE DE SIETE TUBOS ENUMERAR-

los del 1 al 7 con el lápiz graso).
s !GREGAR A CADA UNO DE LOS TUBOS M, DEL

reactivo de Bendict.
s !GREGAR GOTAS DE LA SOLUCIØN PROBLEMA A CADA

uno de los tubos.
s -EZCLAR CADA TUBO E INTRODUCIRLOS EN BA×O -A-

ría durante 3 minutos (figura 8-1).
s /BSERVAR EL PRECIPITADO ROJO que indica positi-

vidad en la reacción (figura 8-2). Figura 8-2. Observación de resultados.
Solución Problema Identificación Color Resultado
1. Almidón
2. Glucosa 1%
3. Galactosa 1%
4. Maltosa 1%
5. Sacarosa 1%
6. Saliva
7. Ácido ascórbico

Dibujos
Dibuja los cambios de coloración que observaste en los diferentes tubos durante la reacción de Benedict.
Práctica 8 Reacciones para investigar la presencia de azúcares reductores 47

Con base en los resultados obtenidos, realiza tus conclusiones.
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s ,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS SE COLOCARÉN EN EL colector de mezclas de sustancias tóxicas inorgánicas.

Reacción de Barfoed
Introducción
,A PRUEBA DE "ARFOED IDENTIlCA LA PRESENCIA DE MO-
nosacáridos, ésta es otra prueba de reducción, pero
en medio ácido.
Es similar a la reacción de Benedict, pero en esta s 0REPARAR UNA SERIE DE SIETE TUBOS DE ENSAYO
prueba los monosacáridos dan el resultado positivo (enumerarlos del 1 al 7 con el lápiz graso).
(rojo) más rápido, aún en concentraciones más pe-
queñas que los disacáridos, por lo que esta caracte- s !GREGAR M, DE LA SOLUCIØN PROBLEMA EN EL
rística se aprovecha para investigar la presencia de tubo correspondiente.
azúcares simples (monosacáridos).
El reactivo de Barfoed es una solución de ácido s !GREGAR M, DEL REACTIVO DE "ARFOED A CADA
láctico (que proporciona el medio ácido) y acetato tubo.
de cobre (que dona el cobre para la reacción). s !GITAR CADA TUBO Y COLOCARLOS EN BA×O -ARÓA
durante 3 minutos (figura 8-3).
s /BSERVAR EL RESULTADO lGURA
s TUBOS DE ENSAYO
s PIPETAS
s 0INZA PORTATUBOS
Reactivos Figura 8-3. Calentar a baño maría durante 3

s 2EACTIVO DE "ARFOED minutos.
Soluciones problema
s 'LUCOSA
s &RUCTOSA
s 'ALACTOSA
s ,ACTOSA
s 3ACAROSA
s !LMIDØN
s 3ALIVA Figura 8-4. Observación de resultados.

Solución Problema Identificación Color Resultado
1. Glucosa 1%
2. Fructosa 1%
3. Galactosa 1%
4. Lactosa 1%
5. Sacarosa 1%
6. Saliva
7. Almidón 1%
Dibujos
Dibuja los cambios que observaste en cada tubo al realizar la prueba de Barfoed.

Con base en los resultados obtenidos, explica con fundamentos teóricos el porqué los monosacáridos dan
positiva la prueba de Barfoed.
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s ,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS SE COLOCARÉN EN EL colector de soluciones ácidas y básicas.

Prueba de yodo Lugol
Introducción 2. Agregar a cada una de las concavidades de la

placa de porcelana una gota del reactivo de
Algunos de los polisacáridos tienen formas típicas de YODO ,UGOL lGURA
reaccionar en el yodo con el que dan compuestos
coloreados. Esta prueba se puede llevar a cabo en 3. Observa los resultados (figura 8-6).
tubos de ensayo o en una placa de porcelana para
observar su coloración.
%L REACTIVO DE ,UGOL ES UNA SOLUCIØN DE YODO
elemental y yoduro de potasio en agua destilada.
s PLACA DE PORCELANA
Reactivos
s 2EACTIVO DE YODO ,UGOL
Figura 8-5. Agregar 1 gota de Yodo-Lugol.
Soluciones problema
s !LMIDØN
s CIDO ASCØRBICO
s 'LUCOSA
1. Colocar una gota de cada solución problema

por separado en las concavidades de la placa
de porcelana. Figura 8-6. Observación de resultados.

Solución problema Color Resultado
1. Almidón
2. Ácido Ascórbico
3. Glucosa
Dibujos
Dibuja la placa de porcelana con los resultados que obtuviste.

Explica con fundamentos teóricos los resultados positivos y negativos que obtuviste.
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Secar la placa de porcelana con un papel sanita y colocar el papel en el colector de basura contaminada.
Referencias
Moreano Pilatasig, M. M. (2015). Determinación de azucares reductores y su relación con carbohidratos no absorbidos en niños (a)
DEL CENTRO DE EDUCACIØN INICIAL h-ARÓA -ONTESSORIv DEL CANTØN ,ATACUNGA EN EL PERÓODO
(UANCA ,ØPEZ 3 %SPINAL # -OLLINEDO 0 %VALUACIØN DE LA CALIDAD DE JARABE DE GLUCOSA PRODUCIDO POR HIDRØLISIS EN-
zimatica a partir de almidón de yuca (Manihot esculenta). Revista Boliviana de Química, 32(2), 24-29.
(ERRERA . 2 - #ARMONA # ! # (ERRERA , # " 0RUEBAS BIOQUÓMICAS PARA LA DETECCIØN DE METABOLITOS PRODU-
cidos en los errores innatos del metabolismo. Iatreia, 27(4), 417-427.
4ANNER 3 ! :IHLER "ERNER ! 2IGOZZI % 'RATTEPANCHE & #HASSARD # ,ACROIX # )N VITRO CONTINUOUS FERMENTATION
model (PolyFermS) of the swine proximal colon for simultaneous testing on the same gut microbiota.PloS one, 9(4).
3ADASIVAM 3 -ANICKAM ! "IOCHEMICAL METHODS .EW !GE )NTERNATIONAL

Reacciones para investigar
Práctica 9
la presencia de azúcares no
reductores y fermentación
Fermentación de azúcares
Introducción
,A FERMENTACIØN ES UN PROCESO ANAEROBIO DURANTE EL
cual los carbohidratos son catabolizados hasta alcohol
etílico y CO2 O EN ÉCIDOS COMO EL ÉCIDO LÉCTICO ,A
fermentación es realizada por levaduras. Fue descu-
BIERTA POR ,OUIS 0ASTEUR QUE LA DESCRIBIØ COMO LA VIE s TUBOS DE ENSAYO DE X
sans Iáir (la vida sin el aire).
,A LEVADURA DE PAN FERMENTA LOS CARBOHIDRATOS s VASOS DE PRECIPITADO DE M,
glucosa, fructosa, maltosa y sacarosa, pero no a la
galactosa, lactosa y pentosa, ya que requieren de s PIPETAS
levaduras adaptativas o especiales. s PAPEL lLTRO
Una levadura particular puede fermentar ciertos
azúcares pero no otros, depende de la presencia o s EMBUDO
ausencia de determinadas enzimas y de su especifi-
cidad enzimática. Para el caso de los disacáridos s TAPONES
fermentables, antes de que tenga lugar la fermenta-
ción alcohólica, los disacáridos se desdoblan a sus
monosacáridos respectivos, los cuales son los que se
fermentan.
Soluciones problema
,A REACCIØN DE LA FERMENTACIØN SE PUEDE APROVE- s 'LUCOSA
char para identificar un azúcar determinado en orina
y otros líquidos corporales, viendo si es o no destrui- s 'ALACTOSA
da por la levadura de la fermentación. s -ALTOSA
,OS AZÞCARES AL SER FERMENTABLES POR LA LEVADURA
de pan se convierten en otros productos de natura- s ,ACTOSA
leza no glúcida, por lo que al hacerles la reacción de
Benedict, ésta será negativa para los azúcares fer- s ,EVADURA DE PAN
mentables, ya que se convierten en alcohol, y será
s +AOLÓN
positiva para los azúcares no fermentables.
55
Reactivos 4. Agitar los tubos para suspender la levadura en
la solución azucarada y pueda tener lugar la
s 2EACTIVO DE "ENEDICT fermentación.
5. Tapar los tubos (usar tapones de hule) e intro-

ducirlos en baño María (45 °).
6. Cada 3 min los tubos se sacarán, agitarán y

destaparán para observar la diferencia de pre-
sión entre ellos, ya que el que sufre fermenta-
ción tendrá mayor presión que el que no
1. Preparar 4 tubos de ensayo de 25 x 200. fermenta.
A 4UBO !GREGAR M, DE GLUCOSA 7. Después de los 15 min se sacan los tubos para
agregarles 2 gr de Kaolín.
B 4UBO !GREGAR M, DE GALACTOSA
C 4UBO !GREGAR M, DE MALTOSA 8. Se agitan y se procede a filtrar.
D 4UBO !GREGAR M, DE LACTOSA 9. Enseguida al líquido que se obtiene de la fil-

tración, se le realizará la prueba de Benedict
!GREGAR A CADA TUBO M, DE AGUA DESTILADA AGREGAR M, DEL REACTIVO DE "ENEDICT E
mezclar bien. introducir en baño María durante 3 minutos.
3. Agregar a cada tubo un pedacito de levadura Precaución con los tubos cuando están en baño
de pan. María debido a que los tapones pueden saltar.
Solución problema Resultado a prueba de Benedict Fermentación Presión
1. Glucosa 1%
2. Galactosa 3%
3. Maltosa 1%
4. Lactosa 3%

Dibujos
Realiza el diagrama de flujo del procedimiento que seguiste, incluyendo los colores que se obtuvieron en
cada tubo.
Práctica 9 Reacciones para investigar la presencia de azúcares no reductores y fermentación 57

Realiza tus conclusiones, explicando con fundamentos teóricos, cuáles son los carbohidratos que fermentaron,
y cómo reaccionaron a la prueba de Benedict después de la fermentación, explicando este concepto también
con fundamentos teóricos.
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s ,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS SE COLOCARÉN EN EL colector de mezclas de sustancias tóxicas inorgánicas.
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cidos en los errores innatos del metabolismo. Iatreia, 27(4), 417-427.
4ANNER 3 ! :IHLER "ERNER ! 2IGOZZI % 'RATTEPANCHE & #HASSARD # ,ACROIX # )N VITRO CONTINUOUS FERMENTATION
model (PolyFermS) of the swine proximal colon for simultaneous testing on the same gut microbiota.PloS one, 9(4).
3ADASIVAM 3 -ANICKAM ! Biochemical methods. New Age International.

Hidrólisis de azúcares no reductores: sacarosa y almidón
Introducción
Recordemos que los azúcares reductores son aque-
llos que poseen un grupo aldehído o cetona libre,
capaz de reaccionar frente a ácidos, iones metálicos
y bases, sufriendo oxidación o fragmentación; lo cual
da positividad a la reacción de Benedict. Como s TUBOS DE ENSAYO
ejemplo de esto, tenemos a los monosacáridos como
la glucosa. s VASO DE PRECIPITADO DE M,
,OS AZÞCARES NO REDUCTORES SON AQUELLOS QUE NO
tienen un grupo aldehído o cetona libre, tal es el caso s PIPETAS
de los disacáridos como la sacarosa, y polisacáridos
como el almidón.
Esta práctica nos muestra cómo se lleva a cabo la Reactivos
hidrólisis de los azúcares no reductores a través de
ácidos y de alta temperatura. s 2EACTIVO DE "ENEDICT
,A ACCIØN DE LOS ÉCIDOS MINERALES SOBRE LOS CAR-
bohidratos depende de la concentración del ácido y
del tipo de carbohidratos, por la acción de los ácidos
diluidos los monosacáridos no sufren alteración, Soluciones problema
mientras que los disacáridos y polisacáridos corres- s 3ACAROSA
pondientes sí lo hacen, en especial a temperaturas
elevadas. s !LMIDØN
,OS ÉCIDOS CONCENTRADOS ACTÞAN DE LA MISMA FOR-
s (#L
ma, sólo que su acción continúa y produce la deshi-
dratación de los monosacáridos para formar derivados s .A/(
del hidroximetil furfural en caso de las hexosas, y
furfurales en el de las pentosas. Se ha encontrado que
estas últimas y los cetoazúcares se deshidratan más
rápido que los aldoazúcares.
Debido a la estructura química de estos carbohi-
dratos que no tienen un grupo potencial (aldehído
o cetona) libre, es necesario que se hagan reaccionar
con ácido en altas temperaturas para que se hidrolicen
a sus monosacáridos respectivos (azúcares reducto- Parte 1
res), por lo que la reacción de Benedict da positiva. s 0REPARAR DOS TUBOS DE ENSAYO ENUMERARLOS
con el lápiz graso).
Disacárido: Sacarosa + HCl + calor =
glucosa y fructosa. s !GREGAR A CADA UNO DE LOS TUBOS M, DE SA-
carosa 1%.
Polisacárido: Almidón + HCl + calor =
s 4UBO !GREGAR M, DE (#L AL
n glucosas.
s 4UBO !GREGAR M, DE AGUA DESTILADA
s -EZCLAR CADA TUBO Y CALENTARLOS MINUTOS EN

baño María hirviente.
s %NFRIAR Y NEUTRALIZAR EL TUBO CON M, DE

Mencionar las fracciones que identifican a los azúca- NaOH 10%
res reductores y no reductores, por medio de la iden- s 2EALIZAR LA PRUEBA DE "ENEDICT AGREGAR M,
tificación de los resultados obtenidos en dichas del reactivo de Benedict a los dos tubos.
reacciones.

s #OLOCAR LOS DOS TUBOS EN BA×O -ARÓA DURANTE
3 minutos.
Parte 2
s 0REPARAR DOS TUBOS DE ENSAYO ENUMERARLOS
con el lápiz graso).
s !GREGAR A CADA UNO DE LOS TUBOS M, DE AL-
midón 1%.
s 4UBO !GREGAR M, DE (#L
s -EZCLAR CADA TUBO Y CALENTARLOS MIN EN
baño María hirviente.
s %NFRIAR Y NEUTRALIZAR EL TUBO CON M, DE

NaOH 10%.
s (ACER LA 0RUEBA DE "ENEDICT AGREGAR M, Figura 9-2. Baño María durante diez minutos.
del reactivo de Benedict) a los dos tubos.
s #OLOCAR LOS DOS TUBOS EN BA×O -ARÓA DURANTE

3 minutos.
Importante: Hacer al mismo tiempo los dos

procedimientos (figuras 9-1, 9-2 y 9-3).
Figura 9-1. Baño María durante tres minutos. Figura 9-3. Baño María durante tres minutos.
Cuadro de resultados (figura 9-4)

Solución problema Resultados a la prueba de Benedict Hidrólisis
1. Sacarosa + HCl
2. Sacarosa + H2O destilada
3. Almidón + HCl
4. Almidón + H2O destilada

Figura 9-4. Observación de resultados.
Dibujos
Realiza un diagrama de flujo del procedimiento que seguiste, con los cambios de color que observaste en
cada tubo.

Con fundamentos teóricos, realiza tus conclusiones de los resultados que obtuviste de los azúcares no
reductores.
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,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS SE COLOCARÉN EN EL colector de mezclas de sustancias tóxicas inorgánicas.

Pruebas para identificar la
Práctica 10
presencia de glucosa
Tiempo de remoción de la glucosa bucal
Introducción
Esta prueba resulta útil para determinar el tiempo
que los hidratos de carbono o azúcares desdoblados
permanecen en la boca (en contacto con la denti-
ción) después de su ingestión.
Para determinar el tiempo de permanencia de la s (ISOPOS
glucosa en la boca utilizaremos una cinta especial de
papel conocida como Test-tape o glucocinta que tie- s $ULCES
ne la capacidad de detectar la presencia de glucosa,
mediante la aparición de color verde.
Objetivo Reactivos
Determinar el tiempo de remoción de glucosa en s Test-tape (figura 10-1).
boca antes y después de la ingesta de carbohidratos.
Figura 10-1. Material y reactivos.
63
Soluciones problema s Transferir la humedad del hisopo a una de las
tiras de Test-tape marcada con 0, la tira perma-
Saliva o placa dentobacteriana tomada directo de la necerá de color amarillo si la persona no ha
boca de los alumnos. ingerido azúcar.
Importante: El alumno masticará un dulce y después

se enjugará la boca, para tomar la segunda muestra
(figura 10-2).
s 4RANSFERIR LA HUMEDAD DEL HISOPO A LA SEGUNDA TIRA

marcada con 0, esta vez la cinta tomará un color
s Cada equipo tendrá cinco tiras de Test-tape y verde, lo cual indica la presencia de glucosa.
las colocará en un lugar seco y limpio.
s ! PARTIR DE ESTE MOMENTO SE REPITE LA TOMA DE
s %NUMERAR LAS TIRAS DE LA SIGUIENTE MANERA muestras cada 3 min a las tiras restantes marcadas
con los números 3, 6 y 9. El que ya no aparezca
s ,AS DOS PRIMERAS CON Y EL RESTO DE LAS
el color verde quiere decir que la totalidad de
tiras con los números 3, 6, y 9.
la glucosa ha sido removida (figura 10-3 y 10-4).
Importante: ,A PRIMERA MUESTRA SE DEBERÉ TOMAR
antes de ingerir dulce. Nuestras observaciones con el Test-tape (glucocinta)
indican que el tiempo de remoción de glucosa en
s $ESPUÏS DE QUE EL ALUMNO SE ENJUAGØ LA BOCA boca oscila entre 10 y 15 minutos.
con agua, con un hisopo removerá cualquier Aquellos alumnos que necesitan mayor tiempo
desecho húmedo que se pueda encontrar sobre para la remoción de glucosa pueden ser motivados a
las superficies dentales, espacios interproxima- tener una mejor higiene de su boca y a moderar el
les o retromolares de la boca. consumo de dulces.
Figura 10-2. Masticar dulce.

Figura 10-3. pasar hisopo sobre superficies
dentales.
Figura 10-4. Transferir humedad a tiras marcadas.

Glucocinta Minutos Color
1. Sin glucosa 0
2. Con glucosa 0
3. Con glucosa 3
4. Con glucosa 6
5. Con glucosa 9
Dibujos
Esquematizar el procedimiento que seguiste en esta práctica.
Práctica 10 Pruebas para identificar la presencia de glucosa 65

Con fundamentos teóricos, realiza tus conclusiones de la relación que tiene el resultado que obtuviste con
tu higiene bucal y pH salival.
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,AS TIRAS SE COLOCARÉN EN EL colector de basura contaminada.

Determinación de glucosa en sangre
Introducción
,A GLUCOSA ES EL CARBOHIDRATO MÉS ABUNDANTE Y EL
principal combustible de las células vivas. En el ser
humano, la glucosa es la fuente de energía preferida
de 1) las células cerebrales, 2) de las células que no
tienen mitocondrias, como los eritrocitos, y 3) de las Identificar los niveles de glucosa en sangre, para com-
células que tienen un aporte limitado de oxígeno, prender y aplicar los términos de hipoglucemia e
como las del globo ocular. hiperglucemia.
Después de que la glucosa proveniente de la die-
ta es absorbida hacia el torrente sanguíneo, ésta debe
ser introducida a las células, proceso regulado por la
hormona llamada insulina. Cuando hay una síntesis
insuficiente, un aumento de la destrucción de ésta o
una acción ineficaz de la misma, la glucosa no puede
ser utilizada por las células (captación celular inade-
cuada de la glucosa), por lo que las cantidades nor- s !LGODØN
males de glucosa en sangre aumentan (hiperglucemia),
la consecuencia son desequilibrios metabólicos me- s ,ANCETAS
jor conocidos como diabetes mellitus. s 4IRAS REACTIVAS PARA DETERMINACIØN CUANTITA-
Dentro de la profesión odontológica es de gran tiva de glucosa).
importancia reconocer a los pacientes diabéticos o
con estados transitorios de hiperglucemia o de hipo- s 'LUCØMETRO
glucemia, para prevenir complicaciones durante su
atención o posterior a ésta.
El nivel normal de glucosa en sangre es de:
Solución problema
60 a 110 mg de glucosa por cada s 3ANGRE
decilitro de sangre (60-110mg/dL).
,A INVESTIGACIØN DE HIPERGLUCEMIA EN EL CONSULTORIO

o en casa para detectar los niveles de glucosa sanguí-
nea en pacientes diabéticos, es fácil y rápida con los
métodos que utilizan sangre capilar. Se encuentra
disponible una gran variedad de reactivos, equipos y
lancetas que hacen de éste un método fácil para
puncionar el dedo y obtener sangre capilar, la cual s #ON UNA TORUNDA DE ALGODØN CON ALCOHOL HA-
se aplica a la tira (que contiene oxidasa de glucosa cer la asepsia de la yema del dedo en el que se
y un cromógeno); ésta se lava o deja secar y se lee va a hacer la punción.
por comparación visual con el colorímetro.
,OS VALORES OBTENIDOS MEDIANTE ESTOS MÏTODOS SE s (ACER PRESIØN SOBRE LA YEMA DEL DEDO
comparan de manera favorable y corresponden a la
s (ACER LA PUNCIØN CON LA LANCETA lGURA
glucosa sérica que se obtiene en los laboratorios.
,OS CUIDADOS TOMADOS EN CUENTA PARA REALIZAR s !PLICAR UNA GOTA DE SANGRE SOBRE LA CINTA INDI-
esta prueba y la toma del tiempo necesario para que cadora (figura 10-6).
se desarrolle el color son esenciales.
Esta práctica nos permite determinar de una ma- s #OLOCAR LA CINTA EN EL GLUCØMETRO
nera sencilla el nivel de glucosa en sangre como
s %VALUAR EL DATO QUE NOS PROPORCIONA DE ACUER-
método auxiliar en el consultorio.
do a los niveles de glucosa (figura 10-7).

Figura 10-5. Punción con lanceta. Figura 10-6. Gota de sangre sobre cinta
indicadora.
Figura 10-7. Observar resultado.
Muestra Tiempo Nivel de glucosa
Gota de sangre

Dibujos
Realiza un esquema de la entrada de la glucosa desde la sangre hacia el interior de las células, haciendo
énfasis en la participación de la insulina.

Con fundamentos teóricos, realiza tus conclusiones del resultado que obtuviste de glucosa en sangre.
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s ,A LANCETA SE COLOCARÉ EN EL colector de residuos punzocortantes de RPBI.
s %L ALGODØN SE COLOCARÉ EN EL colector de residuos no anatómicos de RPBI.
Referencias
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salud bucal. Revista Archivo Médico de Camagüey, 7(5).
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2 y puntuaciones de riesgo. 16 de Abril, 54(258), 45-55.
6IERA . -ORALES 4 -ORØN ! 'ARCÓA - & 6ILLALOBOS * .IVELES DE GLUCOSA EN SALIVA Y SANGRE DE NI×OS Y ADOLES-
centes con Diabetes Mellitus tipo 1. Ciencia Odontológica, 10(2).
-ATSUDA - $E&RONZO 2 ! )NSULIN SENSITIVITY INDICES OBTAINED FROM ORAL GLUCOSE TOLERANCE TESTING COMPARISON WITH
the euglycemic insulin clamp. Diabetes care, 22(9), 1462-1470.

Investigación de lípidos
Práctica 11
Introducción
Como los lípidos no poseen un grupo funcional que
los caracterice, no pueden clasificarse como otro tipo
de biomoléculas cuya identificación se basa en el grupo
FUNCIONAL QUE POSEEN ,OS LÓPIDOS SON UN GRUPO HE-
terogéneo de compuestos orgánicos que tienen la Demostrar la solubilidad de grasas y ácidos grasos en
propiedad de ser insolubles en agua, pero solubles diferentes solventes como una de sus características
en solventes no polares como el éter, cloroformo y fisicoquímicas más importantes.
EL BENCENO ,A RAZØN DE SU ESCASA O NULA SOLUBILIDAD
en agua se debe a que la porción principal de su
estructura es de naturaleza hidrocarbonada.
Solubilidad de las grasas (aceite de maíz)
Introducción Reactivos
En esta prueba se observará la solubilidad que tienen s !LCOHOL ª
las grasas (ésteres de ácidos grasos con glicerol) y la
solubilidad que presenta una fracción de ellas que es s .A/(
la glicerina o glicerol, en diferentes solventes. s #LOROFORMO
s (#L
s ³TER
s !GUA DESTILADA
s TUBOS DE ENSAYO
s PIPETAS
Solución problema 1. Preparar seis tubos de ensayo (enumerarlos del

s !CEITE DE MAÓZ 1 al 6 con el lápiz graso).
71
2. Agregar 3 gotas de aceite de maíz a cada uno D 4UBO !GREGAR M, DE ÏTER
de los tubos.
E 4UBO !GREGAR M, DE .A/(
A 4UBO !GREGAR M, DE AGUA DESTILADA
F 4UBO !GREGAR M, DE (#L
B 4UBO !GREGAR M, DE ALCOHOL DE ª
Nota: Observar si la grasa desaparece al agitar cada
C 4UBO !GREGAR M, DE CLOROFORMO uno de los tubos. Si esto sucede, se considerará
soluble en dicha solución.
¡No deberá haber ningún mechero encendido en el laboratorio cuando se trabaje con éter!
Figura 11-1. Observación de resultados. Figura 11-2. Observación de resultados.
1. H2O destilada
2. Alcohol 96°
3. Cloroformo
4. Éter
5. NaOH 10%
6. HCl 10%

Dibujos
Realiza la prueba de solubilidad y dibuja lo que observaste al agregar el aceite de maíz a cada uno de los
tubos con los diferentes solventes.
Práctica 11 Investigación de lípidos 73

De acuerdo con tus observaciones en esta práctica, escribe una breve conclusión acerca de la solubilidad del
aceite de maíz.
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s ,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS Y SE COLOCARÉN EN EL colector de mezclas de sustancias orgánicas.
s ,OS CONTENIDOS DE LOS TUBOS Y SE COLOCARÉN EN EL colector de soluciones ácidas y básicas.

Solubilidad de la glicerina
El propanotriol, glicerol o glicerina (C3H8O3) es s !GUA DESTILADA
un alcohol con tres grupos hidroxilos (–OH). El gli-
cerol es muy abundante en la naturaleza, ya que es s !LCOHOL ª
componente estructural de muchos lípidos como los s #LOROFORMO
triglicéridos o fosfolípidos. Es uno de los principales
productos de la degradación digestiva de los lípidos,
paso previo para el ciclo de Krebs y también aparece
como un producto intermedio de la fermentación al-
cohólica. Se presenta en forma de líquido a una tempe-
ratura ambiental de 25 ° C y es higroscópico e inodoro.
El glicerol está presente en todos los aceites, grasas
animales y vegetales unido a los ácidos grasos como
el ácido esteárico, oleico, palmítico y ácido láurico para 1. Preparar tres tubos de ensayo (enumerarlos del
formar una molécula de triglicéridos El glicerol com- 1 al 3 con el lápiz graso).
binado también está presente en todas las células
animales y vegetales como parte de su membrana 2. Agregar 5 gotas de glicerina a cada uno de los
celular en forma de fosfolípidos. En esta prueba se tubos.
observará la solubilidad de la glicerina.
s 4UBO !GREGAR M, DE ALCOHOL ª
s 4UBO !GREGAR M, DE CLOROFORMO
3. Observar si desaparece la glicerina al agitar

cada uno de los tubos; si así sucede se consi-
s TUBOS DE ENSAYO derará soluble en dicha solución.
s PIPETAS
Solución problema ¡No deberá haber ningún mechero

encendido en el laboratorio!
s 'LICERINA
1. H2O destilada
2. Alcohol 96°
3. Cloroformo

Dibujos
Realiza la prueba de solubilidad y dibuja lo que observaste cuando agregaste glicerina a los tubos con los
solventes.

De acuerdo con tus observaciones en esta práctica, escribe una breve conclusión acerca de la solubilidad de
la glicerina, indicando si se trata de un lípido o no y por qué.
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s %L CONTENIDO DE LOS TUBOS SE COLOCARÉN EN EL colector de mezclas de sustancias orgánicas.

Investigación de ácidos grasos insaturados
Introducción s 4UBO !GREGAR M, DE ÉCIDO PALMÓTICO
,OS ÉCIDOS GRASOS INSATURADOS SON AQUELLOS QUE TIENEN s 4UBO !GREGAR M, DE ÉCIDO OLEICO
dobles ligaduras en su estructura.
,A INVESTIGACIØN DE LOS ÉCIDOS GRASOS INSATURADOS !GREGAR A CADA UNO DE LOS TUBOS M, DEL RE-
se hace por medio de la adición de halógenos (flúor, activo de Kauffman.
cromo, bromo y yodo), los cuales tienen la particu-
3. Observar si hubo desaparición del color.
laridad de fijarse a la instauración, y desaparecer el
color del reactivo.
¡No deberá haber ningún mechero
encendido en el laboratorio!
s TUBOS DE ENSAYO
s PIPETAS
Soluciones problema
s CIDO PALMÓTICO
s CIDO OLEICO
Reactivos
s 2EACTIVO DE +AUFFMAN
s El reactivo de Kauffman contiene bromo
1. Preparar dos tubos de ensayo (enumerarlos Figura 11-3. Reactivo de Kaufman agregado
con el lápiz graso). por instructor o asistente de laboratorio.

Figuras 11-4. y 11-5. Observación de resultados.
1. Ácido palmítico
2. Ácido oleico
Dibujos
Realiza la práctica de identificación de ácidos grasos insaturados y los dibujos de tus observaciones

Haz una breve conclusión acerca de lo que observaste en tu práctica de identificación de ácidos grasos sa-
turados, explicando por qué el reactivo de Kauffman sirve para identificación de dicho tipo de ácidos grasos.
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s %L CONTENIDO DE LOS TUBOS SE DEJARÉ REPOSAR H DESPUÏS DE LA REACCIØN Y SE COLOCARÉ EN EL colector de

mezclas de sustancias orgánicas.

Investigación del colesterol por medio de la reacción de
Liebermann-Burchard
Introducción Solución problema

El colesterol es un lípido esteroide, formado por una s 3OLUCIØN CLOROFØRMICA DE COLESTEROL
molécula de ciclopentanoperhidrofenantreno, cons-
tituida por cuatro anillos denominados A, B, C y D.
Este compuesto se presenta en la naturaleza en dos
formas: como colesterol libre o como éster; es decir Reactivos
unido con diferentes ácidos grasos. Se encuentra am- s !NHÓDRIDO ACÏTICO
pliamente distribuido en los animales vertebrados e
invertebrados. En los animales superiores se halla en s CIDO SULFÞRICO CONCENTRADO
todos los tejidos, pero las concentraciones más ele-
vadas se dan en el cerebro, el hígado, la piel y las
glándulas adrenales, es componente fundamental de
las membranas de muchas células animales, se en-
cuentra en las lipoproteínas del plasma sanguíneo y
es un precursor importante de muchos otros esteroi-
des biológicamente activos, como los ácidos biliares,
numerosas hormonas y la vitamina D.
En esta prueba se investigará la presencia del El material que utilices deberá estar por completo
colesterol aprovechando que produce compuestos seco, ya que la humedad interfiere en la reacción.
COLOREADOS CON EL REACTIVO DE ,IEBERMANN "URCHARD
El colesterol reacciona con reactivos muy ácidos, los %N UN TUBO DE ENSAYO SECO SE PONEN M,
cuales forman compuestos coloreados (verde bandera). de solución clorofórmica de colesterol.
,A REACCIØN SE ACELERA AL AGREGAR IONES METÉLICOS 2. Agregar 10 gotas de anhídrido acético.
como el hierro, aluminio y cobalto.
Esta prueba se utiliza para determinar el coleste- 3. Agregar 2 gotas de ácido sulfúrico concentrado.
rol sanguíneo, el cual aumenta al ingerir alimentos
ricos en grasas, causando arteriosclerosis y enferme- 4. Agitar y dejar reposar 3 minutos.
dades coronarias.
5. Observar el color verde que indica una reac-
ción positiva.
Identificar el colesterol por medio de la prueba de

,IEBERMAN "URCHARD
s TUBO DE ENSAYO
s PIPETAS
Figura 11-6. Observación de resultados.

1. Solución clorofórmica de colesterol
Dibujos
Realiza tu práctica de identificación de colesterol y los dibujos de tus observaciones.

De acuerdo con los resultados que obtuviste, elabora una breve discusión de la identificación del colesterol
UTILIZANDO EL REACTIVO DE ,IEBERMAN "URCHARD
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s %L CONTENIDO DEL TUBO DEBE COLOCARSE EN EL colector de mezclas de sustancias orgánicas.
Referencias
$A 3ILVA '0 -ACK- #ONTIERO * 'LYCEROL ! PROMISING AND ABUNDANT CARBON SOURCE FOR INDUSTRIAL MICROBIOLOGY "IOTE-
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7ANG :8 :HUGE * &ANG ( 0RIOR "! 'LYCEROL PRODUCTION BY MICROBIAL FERMENTATION A REVIEW "IOTECHNOL !DV n
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%THIOPIA "AHIR $!2 *OURNAL OF #EREALS AND /IL SEEDS
'UNSTONE & $ (ARWOOD * , $IJKSTRA ! * 4HE LIPID (AND"OOK 4HIRD %D #2# 0RESS 4AYLOR &RANCIS GROUP

Determinaciones químicas
Práctica 12
de la saliva
Introducción
,A SALIVA ES SECRETADA POR TRES PARES DE GLÉNDULAS
salivales llamadas: parótidas, sublinguales y submaxi-
lares. Éstas aumentan la producción de saliva cuando
son estimuladas por la presencia de comida o por
irritación química o física de la lengua; y por la esti- s CÉPSULA DE PORCELANA
mulación de cualquier otro órgano de los sentidos. s TUBO DE ENSAYO PYREX GRANDE
,AS GLÉNDULAS SALIVALES TIENEN DOS FUNCIONES PRIN- s TUBOS DE ENSAYO PYREX X
cipales: 1) transformar y secretar sustancias complejas
s CASO DE PRECIPITADO DE M,
de la sangre, como enzimas, mucopolisacáridos y
glucoproteínas; 2) excretar sustancias que por no s PIPETAS
regular no están presentes en la sangre, como drogas, s 0APEL (YDRIØN
metales y alcohol.
En promedio, la cantidad de saliva segregada en
H ES DE M, DE MANERA ORDINARIA CONTIENE Reactivos
99.5% de agua y 0.5% de sólidos. s CIDO ACÏTICO DILUIDO
s (IDRØXIDO DE SODIO .A/( AL
s 2EACTIVO DE "IURET SULFATO DE COBRE DILUIDO
s #LORURO FÏRRICO AL
s CIDO CLORHÓDRICO (#L AL
s #LORURO MERCÞRICO AL
Identificar las principales propiedades químicas de

Soluciones problema
la saliva. s 3ALIVA
85
Determinación de pH
El pH es la concentración efectiva de los iones de

hidrógeno en una solución. También, se puede definir
como el grado de acidez o alcalinidad de una sustancia.
Introducción
,A DETERMINACIØN DEL P( ES IMPORTANTE PORQUE LA
acidez y la alcalinidad en la boca contribuyen a de-
terminar la susceptibilidad a la caries o a la enferme-
dad periodontal, de manera respectiva.
Figura 12-1. Muestra de saliva en papel hydrión.
1. Mojar una tira (3 cm aprox.) de papel Hydrión

con saliva (directo en boca) (figura 12-1).
2. Se deja secar.
3. Comparar el color con el colorímetro (figura

12-2).
Importante: ,A SALIVA HUMANA TIENE UN P( ENTRE

6.35 y 6.85, que equivale a 7 en el colorímetro. Figura 12-2. Comparar pH en colorímetro.
Solución problema pH Color
Saliva

Dibujos
Realiza la determinación del pH de la saliva y dibuja los resultados que observaste en la tira de papel Hydrion,
compárala con el colorímetro que te proporcionará tu instructor.
Práctica 12 Determinaciones químicas de la saliva 87

Con base a los resultados obtenidos en tu práctica haz una breve conclusión acerca de la importancia de los
cambios de pH en la saliva.
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s %L PAPEL (YDRIØN DEBE COLOCARSE EN EL colector de basura contaminada.

Determinación de la mucina
Introducción 5. Con sumo cuidado depositar la mucina en otro

tubo de ensayo.
,A MUCINA ES UNA SOLUCIØN VISCOSA PRESENTE EN LA
saliva, compuesta de mucopolisacáridos, glucopro- !GREGAR M, DE .A/( AL
teínas, mucoproteínas y glucolipoproteínas.
,A TÏCNICA PARA ANALIZAR LA SECRECIØN DE LAS GLÉN- 7. Hacer la prueba de Biuret.
dulas salivales es más difícil a causa del contenido de
8. Observar, la aparición de una coloración violeta
mucina, debido a que no se pueden aislar en forma
o lila indica que la prueba es positiva (figuras
adecuada las diferentes sustancias que la componen.
12-3 y 12-4).
Investigar la presencia de mucina (proteína) en la

saliva, por medio de la prueba de Biuret.
Figura 12-3. Formación de precipitado (mucina).
%N UN TUBO DE ENSAYO SE PONEN M, DE SALIVA
!GREGAR M, DE ÉCIDO ACÏTICO DILUIDO PARA

acidificar y acercar a la mucina a su punto
isoeléctrico, cuando esto ocurre se observa
una ligera precipitación.
3. Si no hubiera precipitación, ésta se puede pro-

VOCAR AL AGREGAR DE A M, DE ALCOHOL Y
deslizarlo con cuidado por la pared del tubo;
esto evita que se mezclen los dos líquidos.
4. Mezclar los líquidos con un agitador y observar

que la mucina se adhiere al agitador. Si esto no
resulta, tirar el alcohol por una de las paredes
del tubo, y la mucina quedará depositada en Figura 12-4. Después de agregar NaOH 10% y
el fondo. hacer Biuret, observar resultado.
Saliva

Dibujos
Realiza la prueba de presencia de mucina en la saliva y haz los dibujos correspondientes.

Haz una breve conclusión de la prueba de identificación de mucina en saliva, indicando el porqué la prueba
de Biuret es utilizada para su identificación.
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s %L ALCOHOL DEBE DESECHARSE EN EL colector de solventes no halogenados.
s ,A MUCINA CON .A/( Y PRUEBA DE "IURET SE COLOCARÉ EN EL colector de soluciones ácidas y básicas.

Determinación de tiocianatos
,A ENFERMEDAD PERIODONTAL ES DE ORIGEN MULTIFACTORIAL

producida por la interacción de agentes microbianos
y es considerado como el factor etiológico primario,
además de un huésped susceptible y factores ambien-
tales. Es probable que el hábito de fumar sea un
verdadero factor de riesgo debido a que los fumado-
res son más propensos a desarrollar enfermedades Identificar la presencia de tiocinatos en saliva.
periodontales.
Algunos de los componentes del tabaco sirven
como marcadores bioquímicos, por ejemplo: la nico-
tina, la cotinina, la carboxihemoglobina y el tiocia-
NATO 3#. ,OS MÉS UTILIZADOS SON LOS DOS ÞLTIMOS
,A VIDA MEDIA DEL 3#. EN SANGRE ES DE DÓAS LO
que permite tener mayor información una vez sus-
pendido el hábito. Esta diferencia entre ambos mar-
cadores hace que se prefiera la cuantificación de %N UN TUBO DE ENSAYO PONER M, DE SALIVA
-SCN en las investigaciones que se llevan a cabo para (figura 12-5).
conocer la influencia del hábito de fumar sobre de- 2. Agregar 5 gotas de la Solución de cloruro férrico
terminados procesos biológicos. El sistema de lacto- al 0.4% (figura 12-6).
peroxidasa opera en la saliva sobre todo mediante la
interacción con peróxido de hidrógeno y tiocianato 3. Agregar 1 gota de HCl, para acidificar (figura
(SCN), el primero es generado de forma local por las 12-7).
bacterias, y el segundo está presente en las secrecio-
nes salivales normales y en los individuos fumadores. s ,A APARICIØN DE UNA COLORACIØN QUE VA DE
El tiocianato o ácido cianhídrico es un gas tóxico anaranjado a rojo, indica la presencia
presente en el humo de los cigarrillos que se meta- de tiocianatos.
boliza en el hígado con rapidez y se acumula en
s 0ARA COMPROBAR QUE LA COLORACIØN SE DEBE
sangre, saliva y orina; se puede utilizar como marca-
a tiocianatos, agregar 5 gotas de cloruro
dor de exposición al humo del tabaco, incluso de
de mercurio (HgCl) al 5%.
abstinencia a largo plazo, al presentar una vida media
de 10 a 14 días. s 3I LA SOLUCIØN SE DECOLORA SON TIOCIANATOS
,OS TIOCIANATOS SON sales del ácido tiociánico, que (figura 12-8).
por lo general contienen azufre; su presencia en sa-
liva provoca la aparición de manchas negras sobre s %N CASO DE NO DECOLORARSE NO SON TIOCIA-
las superficies dentales. natos, y la aparición del color se debe a
En esta práctica comprobaremos la presencia de una interferencia del fosfato de hierro.
tiocianatos en saliva.
Figura 12-5. Recolectar 5ml de saliva. Figura 12-6. Agregar 5 gotas de Cloruro férrico 4%-.

Figura 12-7. Agregar 1gota de HCl- Comprobar Figura 12-8. Si desaparece el color, hay presencia
presencia de tiocianatos. de tiocianatos.
Saliva
Dibujos
Realiza la prueba de presencia de tiocianatos en la saliva y los dibujos correspondientes

Realiza una breve conclusión, indicando el resultado de la prueba
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____________________________________________________________________________________________
s %L CONTENIDO DEL TUBO SE COLOCARÉ EN EL colector de mezclas de sustancias tóxicas inorgánicas.
Referencias
3CHIPPER 2 ' 3ILLETTI % 6INGERHOEDS - ( 3ALIVA AS RESEARCH MATERIAL "IOCHEMICAL PHYSICOCHEMICAL AND PRACTICAL
aspects. Arch. Oral Biol. 52:1114-1135.
0FAFFE 4 #OOPER 7HITE * "EYERLEIN 0 +OSTNER + Y 0UNYADEERA # $IAGNOSTIC 0OTENTIAL OF 3ALIVA #URRENT 3TATE AND
Future Applications. Clinical Chemistry 57(5):675–687.

Determinación de la
Práctica 13
capacidad buffer de la saliva
,a propiedad de la saliva de contribuir a la capacidad s CIDO LÉCTICO .
buffer (amortiguadora) de la placa dentobacteriana
s )NDICADORES 6ERDE Y PÞRPURA DE "ROMOCRESOL
es uno de los factores determinantes de la suscepti-
bilidad o resistencia a la caries dental. Esto puede ser
medido mediante la determinación de la capacidad
buffer de la saliva, esta propiedad es la resistencia al Solución problema
cambio de pH, al agregar un ácido o un álcali.
Se ha demostrado que para hacer descender el s 3ALIVA
P( DE M, DE SALIVA PROVENIENTE DE INDIVIDUOS SIN
caries, hay que añadir un promedio de 14 gotas de
solución 0.1 N de ácido láctico, mientras que en los
pacientes que tienen caries rampante la cantidad de
gotas de ácido láctico que hay que agregar, es apenas
de 5.
1. El estudiante debe de enjuagarse la boca antes
de recoger la saliva.
2. Masticar cera rosa para estimular la produc-

ción de saliva.
2EUNIR M, DE SALIVA EN UN TUBO DE ENSAYO
4. Agregar 3 gotas del indicador (se encuentra en

Investigar la capacidad buffer que tiene la placa den- goteros y está compuesto por partes iguales de
tobacteriana. los colorantes verde y púrpura de bromocre-
sol) (figura 13-1).
5. Mezclar bien.
6. Agregar gota a gota el ácido láctico, hasta tener

el mismo color de un pH de 5 (naranja) (figu-
ra 13-1).
s $E A GOTAS DE ÉCIDO LÉCTICO INDICAN

que la capacidad buffer de la saliva es
s TUBOS DE ENSAYO
escasa, en tanto que 14 gotas significan
s #ERA ROSA que ésta es excelente.
95
s 0ARA DETERMINAR LA CAPACIDAD buffer de la s 3E CONSIDERA QUE QUIENES REQUIEREN ME-
saliva de cualquier persona se tomará nos de 10 gotas de ácido láctico, tienen
como promedio la cantidad de 10 gotas una escasa capacidad buffer; por lo tanto,
de ácido láctico. tendrán mayor susceptibilidad a la caries.
s 0ERSONAS QUE REQUIEREN MÉS DE GOTAS

de ácido láctico, se considera su capaci-
dad buffer adecuada.
Figura 13-1. Agregar 3 gotas del indicador. Figura 13-2. Agregar gotas de ácido láctico hasta
obtener coloración naranja.
Solución problema Gotas de indicador Color No. de gotas de ácido láctico
Saliva

Dibujos
Realiza la prueba de la capacidad buffer de la saliva y haz los dibujos de las observaciones que realizaste.
Práctica 13 Determinación de la capacidad buffer de la saliva 97

Haz una breve conclusión de esta práctica, relacionando la cantidad de ácido láctico que utilizaste con la
capacidad buffer de la saliva que colectaste, así como también con el grado de higiene oral.
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s %L CONTENIDO DEL TUBO SE COLOCARÉ EN EL colector de mezclas de sustancias orgánicas.
Referencias
Bardow, A.; Bente, D.M.; Nauntofte, N. B. (2000). The buffer capacity and buffer systems of human whole saliva measured
without loss of CO2. Archives of Oral Biology 45:1-12
%RICSON $ "RATTHALL $ 3IMPLIlED METHOD TO ESTIMATE SALIVARY BUFFER CAPACITY 3CAND * $ENT 2ES

Fermentación de carbohidratos
Práctica 14
de la placa dental
y formación de ácidos
,A PLACA DENTAL ES UNA MASA DE COLONIAS BACTERIANAS s 3OLUCIØN INDICADORA AZUL DE BROMOTIMOL
que se adhiere sobre las superficies de los dientes, la
encía y otras superficies de la boca. Está compuesta s 3OLUCIØN INDICADORA PÞRPURA DE BROMOCRESOL
por bacterias y por una matriz intercelular formada s 3OLUCIØN INDICADORA VERDE DE BROMOCRESOL
sobre todo por carbohidratos y proteínas, cuya fuente
es la saliva; así como por polisacáridos extracelulares
sintetizados por diferentes bacterias de la placa, los
cuales pueden incluir polímeros de la glucosa (glu- Sustancia problema
canos), de la fructosa (fructanos) y heteroglucanos.
En esta práctica, mediante indicadores (azul de s 0LACA DENTAL
bromotimol, púrpura y verde de bromocresol), com-
probaremos cómo el metabolismo de los carbohidra-
tos fermentables en la placa forma ácidos; así, se
produce el descenso del pH de la placa que en algunos
pacientes puede alcanzar valores tan bajos como 4.
,A PLACA DENTAL EN LAS PERSONAS SUSCEPTIBLES A LA
formación de caries tiene un pH más bajo y se man- 1. Remover tres porciones de la placa con los ins-
tiene ácida durante mayor tiempo que la de los pa- trumentos (figura 14-1).
cientes libres de caries. Esta diferencia se debe a:
2. Colocar cada porción por separado en las con-
s ,A CANTIDAD DE ÉCIDOS QUE SE PRODUCEN POR LA cavidades de la placa de porcelana:
fermentación de los carbohidratos.
s ,A CAPACIDAD buffer (amortiguadora) de la saliva.
s La capacidad buffer de la saliva influye sobre
la placa al neutralizar los ácidos que se forman
dentro de ella.
s PLACAS DE PORCELANA
s DULCE
s JUEGO DE INSTRUMENTOS DENTALES ESPEJO PIN- Figura 14-1. Remoción de placa
zas y explorador). dentobacteriana (1).
99
s 0ORCIØN DE LA PLACA !GREGAR GOTA DEL s #OMPARAR LOS RESULTADOS CON LOS DE LAS
indicador verde de bromocresol. primeras muestras (figura 14-2).
s 0ORCIØN DE LA PLACA !GREGAR GOTA DEL s Cuando se tiene una baja acidez en la
indicador púrpura de bromocresol. placa, se observará un cambio de color
en el azul de bromotimol. Una mayor
s 0ORCIØN DE LA PLACA !GREGAR GOTA DEL acidez produce cambios de color en el
indicador azul de bromotimol. púrpura de bromocresol y en el color del
verde de bromocresol.
3. Anotar el color y el pH de cada porción (para
determinar el pH usar el colorímetro).
4. Disolver en la boca un dulce durante 3 minutos.
5. Retirar el dulce y no enjuagarse la boca.
6. Dejar pasar 5 minutos.
7. Tomar de nuevo tres porciones de placa, si es

posible de la misma área o de una adyacente.
s PORCIØN DE LA PLACA !GREGAR GOTA DEL

indicador púrpura de bromocresol.
s PORCIØN DE LA PLACA !GREGAR GOTA DEL

indicador azul de bromotimol.
s !NOTAR LOS COLORES Y DETERMINAR EL P( PARA

determinar el pH usar el colorímetro). Figura 14-2. Observación de resultados.
ANTES DE COMER DULCE
Placa dental Indicador Color
1ª porción
2ª porción
3ª porción
DESPUÉS DE COMER DULCE

Placa dental Indicador Color
1ª porción
2ª porción
3ª porción

Dibujos
Realiza la práctica de fermentación de carbohidratos de la placa dental y haz los dibujos de tus observaciones.
Práctica 14 Fermentación de carbohidratos de la placa dental y formación de ácidos 101

Haz una breve conclusión acerca de la fermentación de carbohidratos de la placa dental explicando qué
significa una alta o baja acidez.
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____________________________________________________________________________________________
s Secar la placa de porcelana con un papel sanita y colocar el papel en el colector de basura contaminada.
Referencias
7ADE 7 ' 4HE ORAL MICROBIOME IN HEALTH AND DISEASE 0HARMACOLOGICAL 2ESEARCH n
2ANER % ,INDQVIST , *OHANSSON 3 (ASSAN ( #ARLÏN ! 3UKSU ART . Y $AHLÏN ' P( AND BACTERIAL PROlLE OF
dental plaque in children and adults of a low caries population. Anaerobe 27:64-70.
!LMSTÍH ! ,INGSTRÚM 0 %LIASSON , Y #ARLÏN ! &ERMENTATION OF SUGARS AND SUGAR ALCOHOLS BY PLAQUE Lactobacillus
strain. Clin Oral Invest. 17:1465–1470

Extracción de DNA
Práctica 15
Introducción
El ácido desoxirribonucleico, DNA, por siglas en
inglés, es una molécula de gran tamaño que guarda
y transmite de generación en generación toda la in-
formación necesaria para el desarrollo de todas las
funciones biológicas de un organismo. El DNA se s !LCOHOL
forma de la unión paralela de dos cadenas, cada una
s $ETERGENTE LÓQUIDO
está conformada por cuatro diferentes nucleótidos.
,A POSICIØN Y LA CANTIDAD DE ÏSTOS A LO LARGO DE LAS s %NZIMAS ABLANDA CARNE
cadenas se le conocen como código genético o s 3AL
genoma.
s !GUA
,A PALABRA $.! NOS TRAE A LA CABEZA SOlSTICADO
equipo científico y un personal bastante calificado s &UENTE DE $.!
para llevar a cabo una extracción de DNA; sin em- s 6ASO lGURA
bargo, es posible realizar esto de forma más sencilla. s ,ICUADORA
Ahora es posible considerarse un experto por un
rato, sólo tienes que seguir las instrucciones y al final s #OLADOR
del experimento obtendrás DNA verdadero. s 4UBOS DE ENSAYO
Figura 15-1. Material.
103
5. Dejarlo repasar 10 minutos.
6. Colocarlo en un tubo de ensayo de vidrio hasta

1/3 de su capacidad.
7. Añadir una pizca de enzima al tubo de ensayo

!GREGAR M, DE AGUA FRÓA JUNTO CON UN (figura 15-5).
pedazo de la fuente de DNA y sal.
8. Agitar con suavidad para no romper el DNA.
,ICUAR A MÉXIMA VELOCIDAD DURANTE SEGUNDOS
9. Agregar alcohol hasta llenar la mitad del tubo
(figura 15-2).
de ensayo (deslizarlo con sumo cuidado por la
3. Filtrar la mezcla resultante con un colador (fi- pared del tubo y evitar que se mezclen).
gura 15-3).
10. El DNA se elevará hasta la interfase. Con un
4. Agregar detergente líquido a la mezcla obteni- palillo, por fin, podrás extraerlo (figuras 15.6a
da de la licuadora (1/6 parte de la cantidad de y 15.6b).
aquél) (figura 15-4).
Figura 15-2. Licuar por 15 minutos. Figura 15-4. Agregar detergente líquido.
Figura 15-3. Filtrar la mezcla. Figura 15-5. Añadir enzima.

Figura 15-6a. Extraer ADN con un palillo. Figura 15-6b. Extraer ADN con un palillo.
Dibujos
Haz un diagrama de flujo de los pasos que seguiste para llevar a cabo la extracción de ADN.

Haz una breve conclusión de los resultados que obtuviste en tu práctica.
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s $EPOSITAR EL PALILLO DESECHABLE EN EL colector de basura contaminada.
s $EPOSITAR LA MEZCLA EN EL colector de mezclas de sustancias toxicas orgánicas.
Referencias
3AMBROOK * % & &RITSCH Y 4 -ANIATIS -OLECULAR #LONING ! ,ABORATORY -ANUAL #OLD 3PRING (ARBOR ,ABORATORY 0RESS
#OLD 3PRING (ARBOR .EW 9ORK %%55
http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/
.ELSON $AVID , -ICHAEL - #OX (90%2,).+ hHTTPENWIKIPEDIAORGWIKI,EHNINGERv ,EHNINGER 0RINCIPIOS DE "IOQUÓMICA
A ED .EW 9ORK 7 ( &REEMAN AND #OMPANY COP
Prelaboratorios
107
Prelaboratorio práctica 1.
Reglamento, precauciones y material
del laboratorio de bioquímica
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Contesta de manera acertada las siguientes preguntas:
a) ¿En qué parte se específica dónde se desecharán las soluciones presentes en los tubos de ensaye
utilizados en cada práctica?
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b) ¿Qué vestimenta deberán portar los alumnos para poder ingresar al laboratorio?
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c) Menciona algunos puntos que están prohibidos en el laboratorio de bioquímica.
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2. Contesta con una F (Falso) o V (Verdadero) según le corresponda al enunciado de acuerdo a lo que
se mencionó en la teoría.
a) ,AS SE×ORITAS PUEDEN ENTRAR AL LABORATORIO CON EL CABELLO SUELTO Y PANTALONES AJUSTADOS ???????????
b) Se dan 5 min de tolerancia para entrar al laboratorio. ___________
c) Cuando el alumno falte a una práctica del laboratorio podrá reponer los experimentos realizados
durante la sesión. ___________
108 Prelaboratorios
OJO AUTOR: Figuras no aptas para impresión
3. Menciona el nombre de cada material utilizado en el laboratorio y su función.
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Prelaboratorios 109
Método científico, cómo buscar
artículos e información en Internet
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Menciona cuatro bases de datos para la realización de proyectos escolares.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. ¿Qué se entiende por método científico?
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. Menciona los pasos del método científico.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. Selecciona con una “V” si es verdadero o con una “F” si es falso, según sea el caso.
a) Wikipedia es una base de datos confiable ___________
B ,A 5NIVERSIDAD DE 3TANDFORD TIENE SU PROPIA BASE DE DATOS ???????????
c) Si una hipótesis no es válida, se le conoce como teoría ___________
5. ¿Qué es una hipótesis?
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
7. Importancia de saber buscar artículos científicos en Internet.
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_____________________________________________________________________________________________
110 Prelaboratorios
Determinación del pH salival
y de diversas soluciones problema
por medio del uso de indicadores
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Define qué es el pH y qué nos indica la escala para medirlo.
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2. Menciona dos métodos para medir el pH.
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3. ¿Qué importancia tiene el conocer el pH de algunas sustancias, qué es un ácido, y un álcali o base?
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4. ¿Qué son las soluciones reguladoras de pH y para qué sirven?
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5. Realiza un diagrama de flujo del procedimiento para la determinación de pH por medio del uso de
indicadores de las diferentes sustancias problema.
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Prelaboratorios 111
Pruebas coloreadas de las proteínas.
Propiedades de algunos aminoácidos
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. ¿Qué son los aminoácidos y cuál es la importancia de éstos?
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2. ¿Qué es una proteína? Dibuja un enlace peptídico.
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3. Menciona al menos 4 métodos para determinar la presencia de proteínas.
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4. ¿Por qué mediante la prueba de Biuret podemos detectar la presencia de proteína pero no de ami-
noácidos libres?
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5. Menciona para qué se utiliza la Prueba de cianuro o nitroprusiato.
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_____________________________________________________________________________________________
6. Menciona los diferentes tipos de grupos sanguíneos y explica a qué se debe esta diferencia.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
7. Realiza un diagrama de flujo del procedimiento de las dos pruebas coloreadas para determinar pro-
teínas y aminoácidos y un diagrama de flujo para el procedimiento de determinación del tipo sanguíneo.
_____________________________________________________________________________________________
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112 Prelaboratorios
Identificación cualitativa
de la presencia de catalasa en hígado
fresco bovino
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. ¿Qué es la catalasa y cuál es su función?
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. Menciona tres características importantes de la enzima catalasa
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. ¿Qué es el peróxido de hidrógeno y cómo lo conocemos de manera común?
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_____________________________________________________________________________________________
4. Dibuja la descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno
5. Realiza un resumen de un artículo de la Internet e investiga lo siguiente: ¿Qué es la acatalasemia y

por qué es importante para nosotros como odontólogos? (Realízalo en una hoja aparte y entrega las
dos engrapadas).
Prelaboratorios 113
Pre-laboratorio práctica 6.
Determinación de grupo sanguíneo
y factor Rh
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
Define los siguientes conceptos:
1. Antígeno:
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_____________________________________________________________________________________________
2. Anticuerpo:
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3. Aglutinación:
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. Clasificación de los grupos sanguíneos:
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
5. Factor Rh:
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6. Explica por qué el antígeno D es el responsable de la condición Rh positiva.
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114 Prelaboratorios
Factores que intervienen en la
velocidad de la reacción enzimática
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. ¿Qué factores afectan la actividad enzimática? Menciona por lo menos tres y describe cómo es que
cada uno de ellos afecta la actividad enzimática.
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2. ¿Por qué la actividad enzimática varía al cambiar la temperatura y el pH?
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3. Explica el procedimiento por medio del cual podemos detectar la actividad enzimática en esta práctica.
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4. Dibuja un diagrama de flujo del procedimiento que seguirás en la práctica (puedes hacerlo en otra
hoja).
Prelaboratorios 115
Reacciones para investigar la presencia
de azúcares reductores
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Menciona la clasificación de los carbohidratos. Explica qué es un azúcar reductor.
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_____________________________________________________________________________________________
2. Menciona al menos dos técnicas para determinar la presencia de azúcares reductores.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. Explica el fundamento de la prueba de Barfoed y qué tipo de carbohidratos identifica.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. %XPLICA EL FUNDAMENTO DE LA PRUEBA DE YODO ,UGOL Y QUÏ TIPO DE CARBOHIDRATOS IDENTIlCA
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
5. Menciona el nombre de 5 azúcares reductores y 5 que no lo son.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
6. Mediante un diagrama de flujo explica el procedimiento que seguirás para realizar la práctica Reac-
ciones para investigar la presencia de azúcares reductores.
116 Prelaboratorios
Reacciones para investigar la presencia
de azúcares no reductores y
fermentación
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Explica qué es la fermentación de azúcares y cuáles productos se pueden obtener de ésta. Menciona
al menos 5 ejemplos de azúcares fermentables y 5 de no fermentables por levadura de pan.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. A qué se debe que en el proceso de fermentación, la levadura pueda transformar los azúcares a alco-
hol etílico y CO2 o a ácido láctico. Menciona el nombre de las enzimas responsables en cada uno de
los casos.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. ¿Cómo se llama la ruta metabólica por medio del cual los carbohidratos se desdoblan hasta ácido
láctico? Explica por qué los disacáridos tienen que hidrolizarse a monosacáridos antes del proceso de
fermentación.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. Menciona dos aplicaciones en donde se pueda aprovechar la reacción de fermentación de azúcares.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
5. Describe el fundamento de la técnica que se utiliza en esta práctica para determinar si un carbohi-
drato ha sido fermentado o no.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
6. Explica mediante un diagrama de flujo el procedimiento que seguirás en la práctica Fermentación de
carbohidratos.
Prelaboratorios 117
Pruebas para identificar la presencia
de glucosa
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Explica la importancia de conocer el tiempo de remoción de la glucosa en la boca.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. ¿Cuál es el tiempo de remoción de glucosa en la boca promedio?, ¿qué indica un tiempo de remoción
mayor al promedio?
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. Explica el proceso por el cual los carbohidratos se hidrolizan en la boca.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. Mediante un diagrama de flujo explica el procedimiento de la práctica Tiempo de remoción de la
glucosa dental.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
5. Menciona los valores normales de glucosa en sangre.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
6. Explica la importancia de mantener los niveles normales de glucosa en sangre en una persona con
diabetes mellitus.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
7. Explica las condiciones celulares y metabólicas que pueden impedir el paso de la glucosa de la sangre
a las células. Tiene que estar bien fundamentada tu respuesta.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
118 Prelaboratorios
(primera parte)
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Define qué es un lípido y cuántas clases de lípidos hay, ejemplifica cada una con un esquema.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. Menciona las características más importantes de cada una de las diferentes clases de lípidos.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. Explica la razón por la cual los lípidos son solubles sólo en disolventes orgánicos.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. Realiza un diagrama de flujo mediante el cual expliques el procedimiento de la práctica.
Prelaboratorios 119
(segunda parte)
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Realiza un esquema de la molécula de colesterol. Explica.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. Menciona las principales fuentes de colesterol y la concentración normal en sangre. Explica.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. Explica de manera se transporta el colesterol en el torrente sanguíneo y qué pasa si aumenta la con-
centración de éste en la sangre. Explica.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. %XPLICA EL FUNDAMENTO DE LA TÏCNICA DE ,IEBERMANN "URCHARD PARA DETERMINAR COLESTEROL EN SANGRE
Explica.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
5. Realiza un diagrama de flujo para explicar el procedimiento de la práctica. Explica.
120 Prelaboratorios
Determinaciones químicas de la saliva
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Menciona cuál pH salival favorece las condiciones para que una persona sea propensa a la caries den-
tal, y qué pH favorece las condiciones para desarrollar la enfermedad periodontal.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. Explica qué es la mucina y cuál es su función e importancia en la saliva.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. Define que son los tiocianatos y explica la fundamentación teórica de por qué está presente en los
fumadores.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. Explica por qué los tiocianatos predisponen a desarrollar la enfermedad periodontal.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Prelaboratorios 121
Prelaboratorio práctica13.
Determinación de la capacidad buffer
de la saliva
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Explica qué es la capacidad buffer de la saliva.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. ¿Cuál es la función de la capacidad buffer de la saliva?
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. Explica el mecanismo químico de la capacidad buffer de la saliva.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. Explica el mecanismo físico de la capacidad buffer de la saliva.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
5. ¿Qué factores influyen en la prevalencia de la caries dental?
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
6. Realiza un esquema del proceso carioso.
122 Prelaboratorios
Fermentación de carbohidratos de la
placa dental y formación de ácidos
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Define qué es la placa dentobacteriana y cuáles son sus componentes.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
2. Esquematiza la ruta metabólica que siguen las bacterias de cavidad oral para fermentar los carbohi-
dratos provenientes de los alimentos.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. Al formarse ácidos como resultado de la fermentación, esto nos indica que la ruta es aerobia o anae-
robia:
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
4. ¿Qué efecto tiene la capacidad buffer de la saliva contra la formación de ácidos de la palca dentobac-
teriana?
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Prelaboratorios 123
Extracción de DNA
Semestre: _________________________________________________________________________
Nombre: __________________________________________________________________________
Grupo: ____________________________________________________________________________
1. Realiza un diagrama de flujo de la práctica de extracción del DNA.
2. Investiga otras formas de extraer el DNA en el laboratorio, donde se utilice equipo más sofisticado y
explica mediante un diagrama de flujo cómo se lleva a cabo. Es muy importante que menciones el
nombre de la técnica.
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
124 Prelaboratorios
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Prelaboratorios 125
Sellos
Práctica 1 Práctica 2
Prelaboratorios 127
Práctica 15
128 Prelaboratorios
Esta obra ha sido publicada por
Editorial El Manual Moderno, S.A. de C.V.
y se han terminado los trabajos de esta
primera edición el 15 de enero de 2016,
en los talleres de Mujica Impresor S.A. de C.V.
Camelia, No. 4, Col. El Manto
Delegación Iztapalapa
C.P. 09830, México, D.F.
5a. edición, 2015

Manual de Bioquimica 5ta Edicion 3a Revisión314

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A nuestras familias por permitirnos llegar a realizar

Disposición de residuos de las prácticas de laboratorio de bioquímica . . . . . . . . . . X

Práctica 1 Reglamento, precauciones y material del laboratorio de bioquímica . . . . . . . . . . . 1

1. Conocer el material y equipo de laboratorio de bioquímica . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

Práctica 2 Método científico, cómo buscar artículos e información en la Internet . . . . . . . . . . 13

Práctica 3 Determinación del pH salival y de diversas soluciones problema por

Práctica 4 Pruebas coloreadas de las proteínas. Propiedades de algunos aminoácidos . . . . . 19

3. Prueba de cianuro nitroprusiato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

Práctica 5 Identificación cualitativa de la presencia de catalasa en hígado bovino fresco . . 29

Práctica 6 Determinación de grupos sanguíneos y factor Rh. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33

Práctica 7 Factores que intervienen en la velocidad de la reacción enzimática . . . . . . . . . . . 39

1. Influencia de la concentración de la enzima sobre la velocidad

3. Influencia del pH sobre la velocidad de una reacción catalizada

Práctica 8 Reacciones para investigar la presencia de azúcares reductores . . . . . . . . . . . . . . . 47

3. Prueba de yodo Lugol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54

Práctica 9 Reacciones para investigar la presencia de azúcares no reductores

2. Hidrólisis de azúcares no reductores: sacarosa y almidón . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61

Práctica 10 Pruebas para identificar la presencia de glucosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65

1. Tiempo de remoción de glucosa bucal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65

2. Determinación de glucosa en sangre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 69

Práctica 11 Investigación de lípidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

1. Solubilidad de las grasas (aceite de maíz) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 73

3. Investigación de ácidos grasos insaturados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80

4. Investigación del colesterol por medio de la reacción

Práctica 12 Determinaciones químicas de la saliva . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87

Práctica 13 Determinación de la capacidad Buffer de la saliva. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97

Práctica 14 Fermentación de carbohidratos de la placa dental y formación de ácidos. . . . . . 101

Práctica 15 Extracción de DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 107

VIII Manual de prácticas de bioquímica

f) Al finalizar la actividad, el equipo utili- s #OLECTOR DE BASURA CONTAMINADA

X Manual de prácticas de bioquímica

Reglamentación y precauciones en el laboratorio de bioquímica

Precauciones básicas en la práctica

2 Manual de prácticas de bioquímica

1. Investiga qué significa la etiqueta en cada uno de los siguientes casos:

Práctica 1 Reglamento, precauciones y material del laboratorio de bioquímica 3

4 Manual de prácticas de bioquímica

Práctica 1 Reglamento, precauciones y material del laboratorio de bioquímica 5

6 Manual de prácticas de bioquímica

Introducción s Vidrio. Es uno de los materiales más usados en

s Porcelana. Con este material se fabrican cáp-

Figura 1-1. Equipo de laboratorio a base de metales.

Práctica 1 Reglamento, precauciones y material del laboratorio de bioquímica 7

NOMBRE DIBUJO MATERIAL FUNCIÓN

8 Manual de prácticas de bioquímica

Práctica 1 Reglamento, precauciones y material del laboratorio de bioquímica 9

f) Al finalizar la actividad, el equipo utili- s #OLECTOR DE BASURA CONTAMINADA

s 0IPETA DE ML PARA GOTEAR LAS SOLUCIONES

s 3OLUCIØN DE FENOL AL

s 4UBO !GREGAR M, DE PROTEÓNA DE

s 4UBO !GREGAR M, DE SOLUCIØN DE

s 4UBO !GREGAR M, DE SOLUCIØN DE

! CADA UNO DE LOS TUBOS AGREGAR M, DE HI-

s 3OLUCIØN DE GELATINA AL

s 3OLUCIØN DE PEPTONA AL

s 3OLUCIØN DE UREA AL

s 4UBO !GREGAR M, DE SOLUCIØN DE

C 4UBO !GREGAR M, DE SALIVA

D 4UBO !GREGAR M, DE AGUA DESTILADA

s 3OLUCIØN DE PROTEÓNA DE HUEVO AL

!GREGAR A CADA UNO DE LOS TUBOS M, DE AL-