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    VITRIFICACIÓN

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    Artículo científico que habla sobre la vitrificación

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    SUPLEMENTO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS

    VETERINARIAS DE LA UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES


    Chorroarín 280 (C1427CWO) Bs. As., Argentina. Tel.(54 11) 4524 8400.
    www.fvet.uba.ar

    LA VITRIFICACION DE OVOCITOS POR SISTEMA


    DE MÍNIMO VOLUMEN, MÉTODO POTENCIAL
    INITRA
    INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN
    PARA LA CRIOPRESERVACIÓN DE LA GAMETA
    Y TECNOLOGÍA EN REPRODUCCIÓN ANIMAL
    Facultad de Ciencias Veterinarias UBA FEMENINA EN BOVINOS

    Cynthia Gutnisky, Sergio Morado, Tomás Gadze, Antonella Donato y Pablo Cetica.
    Universidad de Buenos Aires, Facultad de Ciencias Veterinarias, Instituto de Investigación y Tecnología en
    Reproducción Animal (INITRA), INPA-CONICET, Cátedra de Química Biológica.

    Introducción alteraciones en el citoesqueleto, incrementos en la


    La producción de ganado vacuno es una de las concentración de calcio intracelular y endureci-
    explotaciones más importantes de nuestro país, miento de la zona pelúcida; así como también
    siendo la de mayor relevancia en la producción daños a nivel mitocondrial que incluyen alteracio-
    pecuaria. Las biotecnologías asociadas a la repro- nes en su distribución y función. Por otro lado,
    ducción permiten obtener mayores progresos algunas de estas anormalidades podrían ser rever-
    genéticos y disminuir la incidencia de enfermeda- sibles dependiendo del tiempo de recuperación
    des de transmisión sexual, entre otras aplicaciones. luego del atemperado.
    La vitrificación es una biotecnología que permi- Con el objetivo de disminuir estos daños, los
    te la criopreservación de ovocitos y embriones. medios, dispositivos y métodos de vitrificación han
    Consiste en el enfriamiento ultra rápido utilizando ido evolucionando. Entre los más recientes, los
    soluciones con alta concentración de sustancias métodos de vitrificación con volúmenes muy redu-
    crioprotectoras que evita la formación de cristales cidos de muestra son lo que prometen resultados
    de hielo. Sin embargo, estas altas concentraciones más alentadores. En estudios preliminares de nues-
    de crioprotectores producen daño celular princi- tro grupo de trabajo hemos evaluado la vitrifica-
    palmente por su toxicidad y su efecto osmótico. ción de ovocitos bovinos por el método de mínimo
    Esta biotecnología está siendo utilizada amplia- volumen Cryotech® analizando su recuperación
    mente con éxito para la criopreservación de ovoci- morfológica, vitalidad y capacidad de ser fecunda-
    tos y embriones humanos en las clínicas de fertili- dos in vitro.
    dad, habiendo desplazado en la práctica al conge-
    lamiento lento. En el bovino todavía no es utiliza- Trabajo realizado
    da de forma rutinaria, a pesar de que se ha demos- Los complejos ovocito-cumulus (COCs) bovinos
    trado que mejora la sobrevida embrionaria luego se obtuvieron a partir de ovarios provenientes de
    de la criopreservación respecto al congelamiento vacas de faena. Se seleccionaron bajo lupa estere-
    lento tradicional. oscópica aquellos COCs con cumulus denso y com-
    En lo que respecta a la vitrificación de ovocitos pacto. La maduración in vitro se realizó en medio
    en especies de producción, incluyendo al bovino, 199 suplementado con suero fetal bovino y gona-
    los resultados obtenidos no son satisfactorios. dotrofinas (FSH y LH). Al finalizar la maduración,
    Debido al proceso de vitrificación se han descripto los ovocitos fueron denudados y divididos en dos

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    grupos: a) control y b) vitrificados / atemperados Resultados
    (según especificaciones del kit y capacitación de Hemos observado que los ovocitos madurados
    Cryotech® para uso humano). in vitro con cumulus oophorus, denudados y luego
    Los ovocitos vitrificados fueron evaluados en vitrificados, recuperaron su volumen inicial a los
    su morfología y vitalidad inmediatamente luego pocos minutos del atemperado. Más del 94% de los
    de su atemperado al recuperar su volumen nor- ovocitos mantuvieron su morfología normal, con-
    mal (0 horas), cuando se presume su recupera- servando la integridad y definición de la membra-
    ción metabólica (3 horas) y al tiempo que se na plasmática y la zona pelúcida, reconstituyendo
    correspondería con el necesario para la forma- el espacio perivitelino y presentando un citoplasma
    ción de pronúcleos postfecundación (21 horas). homogéneo. La morfología normal también se
    Los controles fueron ovocitos no vitrificados, mantuvo a las 3 y a las 21 horas de cultivo.
    evaluados a los mismos tiempos. La morfología Concomitantemente con los resultados obteni-
    se valoró bajo microscopio óptico con contraste dos en la evaluación morfológica, más del 94% de
    interferencial-diferencial según Hofmann y la los ovocitos bovinos permanecieron vitales luego
    vitalidad mediante la técnica del fluorocromo del proceso de vitrificación/atemperado a los dife-
    acetato de fluoresceína. rentes tiempos evaluados.
    Para la fecundación in vitro (FIV) los COCs El porcentaje de fecundación in vitro observado
    madurados fueron divididos en tres grupos: a) en los ovocitos parcialmente denudados, vitrifica-
    COCs sin denudar (control FIV), b) ovocitos parcial- dos y luego atemperados disminuyó con respecto
    mente denudados (control) y c) ovocitos parcial- a los ovocitos parcialmente denudados frescos
    mente denudados vitrificados/atemperados. Los (control) (p<0,05). El porcentaje de fecundación in
    diferentes grupos fueron coincubados con semen vitro en los COCs sin denudar (control FIV) fue
    congelado de fertilidad probada y se determinó el superior a los otros dos grupos (p<0,05) y con un
    porcentaje de fecundación in vitro por el clivaje valor acorde a una buena tasa de clivaje según la
    embrionario a dos o más células a las 48 horas. bibliografía (Tabla 1).

    www.revistataurus.com.ar AÑO 20 Nº79 - TAURUS 27


    Tabla 1. Porcentaje de fecundación in vitro. que la tasa de fecundación es inferior a la de los
    ovocitos ovocitos frescos. Esta disminución podría en parte
    COCs ovocitos parcialmente deberse a cambios metabólicos que se producen
    sin denudar parcialmente denudados
    durante el proceso de vitrificación, ya que la mor-
    denudados frescos vitrificados -
    atemperados fología y viabilidad del ovocito bovino no se afec-
    Porcentaje de taría mayormente por este método.
    fecundación 80%a 58%b 28%c Mucho queda aún por recorrer en la mejora del
    in vitro
    proceso de vitrificación de la gameta femenina en
    a, b, c
    Diferentes superíndices indican diferencias significativas entre
    grupos (p<0,05).
    las especies de interés zootécnico, pero el camino,
    aunque parezca largo, no necesariamente sea
    imposible de hacerlo.
    Perspectivas
    Acorde a los datos obtenidos podemos concluir
    que luego del proceso de vitrificación de ovocitos
    bovinos por método de mínimo volumen
    Cryotech® y posterior atemperado, la gran mayoría
    de los mismos recupera su morfología normal y su
    vitalidad, manteniéndose ambas por un lapso pro-
    longado del tiempo. Esto es un gran avance sobre
    otros métodos de vitrificación en los que la morfo-
    logía y/o la vitalidad de los ovocitos se vé compro-
    metida en mayor grado. Además se observó que
    los ovocitos bovinos vitrificados / atemperados por
    el método Cryotech® tienen la capacidad de ser
    fecundados in vitro por los espermatozoides, aun-

    28 TAURUS - AÑO 20 Nº79 www.revistataurus.com.ar

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