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Ecotoxicología

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Evaluación de Sedimentos Contaminados en el Municipio de Poopó a Través de


Ecotoxicología con Cultivo de Cebolla (Allium cepa)

Ayrton Manuel Mamani


Christian Manuel Mamani
Kenneth Andres Vega Quisbert
Facultad de Ciencias Agrarias y Naturales
INGA5202 Ecología A
MSc. Ing. Milton Robert Perez Lovera

29 de agosto de 2024
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1. INTRODUCCION

La extracción de minerales y metales (minería) puede generar desechos que contienen

sustancias químicas tóxicas, teniendo un impacto negativo en los ecosistemas y los organismos

que habitan en el mismo de esta manera alterando de manera significativa la biodiversidad en el

municipio de Poopó.

En la cuenca San Juan de Sora Sora se encuentran tres ríos muy importantes: Huanuni,

Payrumani y Machacamarca los que desembocan en el lago Poopó. Sobre estos ríos se encuentran

varias operaciones mineras entre las principales están: Huanuni, Japo, Morcocala, Santa Fe¸

además de varias cooperativas mineras. Todas estas minas en su proceso de operación requieren

ingentes cantidades de agua, tanto para la extracción del mineral como en su proceso metalúrgico,

estas aguas son vertidas al río sin previo tratamiento. En el proceso de extracción de la materia

prima se encuentra con bolsones, venas e inclusive la napa, que se convierten en pasivos

ambientales ya que tienen que ser depositadas en algún lugar y generalmente es en el río. Estas

aguas que provienen del subsuelo como de las operaciones mineras son de calidad pobre;

contienen elevada acidez, presencia de metales pesados, sólidos suspendidos que son nocivos para

la agropecuaria y salud humana. Precisamente sobre el río Huanuni se encuentra la Empresa

Minera Huanuni, que trabaja desde hace años atrás extrayendo, principalmente estaño, sus

efluentes son descargados al río sin ningún tratamiento y estas aguas llegan hasta el lago Poopó

ocasionando diversos problemas a la calidad del agua, suelo, vegetación e inclusive a los animales.

2. ANTECEDENTES DE INVESTIGACIÓN

Los desechos que genera la actividad minera han provocado que existan diversos problemas

ambientales, contaminando ríos y sedimentos debido a restos de metales pesados. Por esta misma
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razón, sabiendo que el agua y la tierra es fundamental para la agricultura, se llevara a cabo el

presente proyecto, esperando obtener conocimientos sobre ecotoxicología, bioensayos y pruebas

estadísticas.

3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

3.1. JUSTIFICACIÓN

En el municipio de Poopó la actividad minera es la actividad económica, que desde su inicio

vino contaminando el habitad, esto a través del vertimiento de metales pesados y aguas ácidas

producto de sus procesos.

El rio Poopó es y ha sido impactado negativamente por la minería mismo que ha generado el

deterioro de la calidad del agua de tal rio.

3.2. PREGUNTAS DE INVESTIGACIÓN

Pegunta descriptiva

¿Cómo describir las características físicas de la ecotoxicología de las aguas contaminadas?

Pregunta correlacional

¿Cómo estudiar los cambios de radiculación que sufren los bulbos de cebolla (Allium cepa)

sometidos a distintas concentraciones de agua contaminada, y las modificaciones morfológicas

visibles en plántulas de Allium cepa bajo diferentes concentraciones de agua contaminada?

Pregunta explicativa

¿Cómo afectara la ecotoxicología de aguas contaminadas en los bioensayos como la cebolla, si

es que estas aguas llegaran a servir para el riego agrícola?


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4. OBJETIVOS

4.1.1. OBJETIVO GENERAL

Evaluar la ecotoxicología del agua del Municipio de Poopó mediante bioensayos con bulbos de

Cebolla (Allium cepa).

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Describir las características físicas de la ecotoxicología de las aguas contaminadas.

Estudiar los cambios y las alteraciones morfológicas visibles en plántulas de cebolla (Allium

cepa) bajo diferentes concentraciones de agua contaminada.

5. HIPÓTESIS
5.1. HIPÓTESIS DE INVESTIGACIÓN
El efecto en causas fisiológicas de los vegetales en función de un agua contaminada, que tanto

tienes los efectos contaminantes del agua residual de la planta de tratamiento de Oruro en función

de un estudio con especies vegetales, comprobando el crecimiento en altura, si las aguas están muy

contaminadas estas especies vegetales no crecerán de forma normal.

5.2. HIPÓTESIS ESTADÍSTICA


Para (Allium cepa)

Ho: LRC T 1❑agua ❑ij =LRC T 1 ❑agua ❑ij

Hi: LRC T 1❑agua ❑ij LRC T 1 ❑agua ❑ij

 = Media general de la longitud radicular

LR= Longitud radicular


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T= Tratamiento

= Factor agua

Ei = Error experimental

6. MARCO TEÓRICO
6.1. MARCO CONCEPTUAL
La ecotoxicología es la disciplina científica que estudia el efecto de las sustancias y

compuestos químicos sobre los ecosistemas. Los estudios ecotoxicológicos son los que

proporcionan la información científica que luego va a traducirse en legislaciones: convenios

internacionales que prohíben el uso de ciertos compuestos químicos a nivel mundial; regulaciones

para las descargas de efluentes; evaluación y remediación sitios contaminados y clasificación de

productos químicos.

Los bioensayos son herramientas ampliamente utilizadas en el campo de la ecotoxicología, la

cual se ocupa del estudio del efecto y destino de los agentes tóxicos de origen antropogénico a los

ecosistemas acuícolas y terrestres (Larrain 1995). Estas pruebas de toxicidad permiten realizar

mediciones experimentales del efecto de agentes químicos o físicos en sistemas biológicos,

estableciendo relaciones concentración-respuesta bajo condiciones controladas en terreno o en

laboratorio.

Los bioindicadores son todos aquellos organismos vivos los cuales, gracias a sus

características ecológicas, cuentan con una elevada sensibilidad a los diferentes cambios

ambientales que se dan en la naturaleza, reaccionando frente a ellos como si de estímulos

específicos se trataran, reaccionando ante la presencia de acumulaciones de contaminantes.


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Las características de aguas contaminadas en general las aguas, en particular las de deshechos

residuales (aguas servidas, efluentes), son mezclas complejas y a menudo contienen sustancias

poco solubles, volátiles, inestables, coloreadas y/o a veces partículas coloidales en suspensión.

(Castillo, 2004)

Los efluentes de mina los drenajes ácidos de minados son una de las principales fuentes de

contaminación de las aguas superficiales y subterráneas en el mundo. Este problema puede

persistir durante décadas e incluso cientos de años una vez finalizado el ciclo productivo, existe la

necesidad de prevenir su formación y aplicar el tratamiento más adecuado cuando se ha formado.

Estos drenajes son tóxicos en diverso grado para el hombre, la fauna y la vegetación, contienen

metales disueltos y constituyentes orgánicos solubles e insolubles, que generalmente proceden de

labores mineras, procesos de concentración de minerales, presas de residuos y escombreras de

mina. (Aduvire, 2006)

Los efluentes son emanaciones de aguas provenientes de interior mina. Las mismas fluyen en

forma natural o por bombeo, a través de las estructuras mineralizadas o de los espacios dejados por

las operaciones mineras. Estas aguas tienen un alto contenido de soluciones acidas y, a veces, son

portadoras de metales pesados que contaminan las aguas superficiales y el suelo a lo largo de su

recorrido. (Juan C. Montoya Choque, 2011)

6.2. MARCO NORMATIVO – LEGAL


Ley No. 1333, ley del medio ambiente del 23 de marzo de 1992.

Capítulo II del recurso agua

Artículo 36. Las aguas en todos sus estados son de dominio originario del estado y

constituyen un recurso natural básico para todos los procesos vitales. Su utilización tiene relación
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e impacto en todos sus sectores vinculados al desarrollo, por lo que su protección y conservación

es tarea fundamental del estado y la sociedad.

Artículo 37. Constituye prioridad nacional la planificación, protección y conservación de las

aguas en todos sus estados y el manejo integral y control de las cuencas donde nacen o se

encuentran las mismas.

Artículo 38. El estado promoverá la planificación, el uso y aprovechamiento integral de las

aguas, para benéfico de la comunidad nacional con el propósito de asegurar su disponibilidad

permanente, priorizando acciones a fin de garantizar agua de consumo para toda la población.

Artículo 39. El estado normara y controlara el vertido de cualquier sustancia o residuo líquido,

sólido y gaseosos que cause o pueda causar la contaminación de las aguas o la degradación de su

entorno. Los organismos correspondientes reglamentaran el aprovechamiento integral, uso

racional, protección y conservación de las aguas. (ambiente, 1992)

Capitulo XI de los Recursos Minerales

Artículo 70. La explotación de los recursos minerales debe desarrollarse considerando el

aprovechamiento integral de las materias primas, el tratamiento de materiales de desecho, la

disposición segura de colas, relaves y desmontes, el uso eficiente de energía y el aprovechamiento

racional de los yacimientos.

Artículo 71. Las operaciones extractivas mineras, durante y una vez concluidas su actividad

deberán contemplar la recuperación de las áreas aprovechadas con el fin de reducir y controlar la

erosión estabilizar los terrenos y proteger las aguas, corrientes y termales.


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Artículo 72. El Ministerio de Minería y Metalurgia, en coordinación con la Secretaría

Nacional del Medio Ambiente, establecerá las normas, técnicas correspondientes que determinarán

los límites permisibles para las diferentes acciones y efectos de las actividades mineras.

6.3. MARCO REFERENCIAL (ESTADO DEL ARTE)


7. METODOLOGÍA

7.1. UBICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN

Está ubicada en el departamento de Oruro, en el municipio de Poopó, se encuentra situado

a una altitud de 3700 metros sobre el nivel del mar. En cuanto a distancia Poopó se encuentra a 55

km del departamento de Oruro.

7.2. MATERIALES Y EQUIPOS

7.2.1. Material biológico

- Cebolla (Allium cepa)

7.2.2. Material de gabinete

- Computadora

- Impresora

- Lector USB y CD

- Cámara fotográfica

7.2.3. Material de laboratorio

- Tubos de ensayo

- Gradilla

- Pipeta pasteur
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- Bulbos de allium cepa

- Bisturí

- Agua destilada

- Reglilla

- Guardapolvo

- Barbijo quirúrgico

- Gorro quirúrgico

7.3. PROCEDIMIENTO METODOLÓGICO

7.3.1. Protocolo base de la investigación

La presente investigación se realizará de acuerdo a la metodología de Gabriela Castillo,

2004

Dado que la prueba con cebollas no requiere mantenimiento de un cultivo, el control de

calidad debe enfatizarse en la calidad de los lotes de material a utilizar. Por esa razón, debe darse

especial importancia al almacenamiento del material, así como al control de hongos que pueden

afectar la viabilidad de las cebollas y su normal desarrollo. Es por ello que se recomienda disponer

de un número de cebollas por lo menos tres o cuatro veces mayor al requerido para las pruebas. Su

almacenamiento debe hacerse en ambiente exento de humedad, a una temperatura entre 10 y 20°

grados centígrados. b) Control de calidad en las pruebas con Allium cepa Un elemento importante

en la elaboración de las pruebas es el proceso de pelado de los bulbos. Durante este procedimiento

debe evitarse el daño del anillo radicular. Igualmente, se debe trabajar con un alto número de

réplicas para controlar la variabilidad de las pruebas. Se recomienda utilizar doce réplicas por

concentración con el fin de descartar, por lo menos, dos de los valores más extremos. En el caso

que exista un bajo desarrollo radicular en más de dos bulbos del control, se considera que el lote
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de bulbos tiene problemas, por tanto, los resultados no serán válidos. Al igual que en todas las

pruebas, se debe establecer la sensibilidad de los bulbos a los tóxicos de referencia y registrar

mediante la confección de una carta control, por lo menos, veinte pruebas. Resultados por encima

o por debajo de la sensibilidad establecida son indicativos de problemas con el material biológico

utilizado.

Procedimiento Para el Desarrollo de la Prueba

Preparación de las Diluciones.

Para realizar una curva dosis-respuesta se recomienda preparar un mínimo de cinco o seis

diluciones de la muestra o compuesto a estudiar, de manera que se obtengan valores de toxicidad

intermedios entre el 100 y 0%. Para las muestras ambientales se recomienda el uso de un factor de

dilución de 0,3 o 0,5 para la preparación de la serie de diferentes concentraciones. El uso de un

factor de 0,3 permite evaluar la toxicidad considerando el intervalo entre el 100 y 1% de la

muestra realizando cinco diluciones (100, 30, 10, 3 y 1%). Al aplicar un factor de dilución de 0,5,

es necesario utilizar mayor número de diluciones para abarcar el mismo intervalo de

concentraciones (100, 50, 25, 12, 6, 3 y 1,5%), pero se obtiene mayor precisión en los resultados.

Para la preparación de cada dilución se utiliza agua dura reconstituida (es posible el uso de

agua mineral dura para consumo humano), realizando el control negativo con el agua de dilución

empleada.

Para el caso de las muestras cuya toxicidad es desconocida, previo a la realización de la

prueba definitiva, se sugiere hacer una prueba presuntiva (ensayo preliminar) utilizando diluciones

logarítmicas (100; 10; 1; 0,1; 0,01) que permitan establecer el intervalo de concentración

conveniente para obtener valores de efecto entre 100 y 0% necesarios para calcular la CI50.
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Con el fin de controlar la sensibilidad de las semillas, simultáneamente a la evaluación de

la toxicidad de una muestra debe realizarse un control positivo, utilizando, por ejemplo, una sal de

Zn (II) como tóxico de referencia. La concentración de prueba de este control es la

correspondiente a la CI50 para el lote de semillas en uso.

Protocolo de ensayo

 se deben seleccionar bulbos de 1,5 cm de diámetro, secos y sin formación de hojas y/o raíz.

Pueden ser obtenidos del mercado local o adquiridos a través de algún proveedor.

 Previo al montaje de la prueba, los bulbos deben limpiarse eliminando la epidermis seca y

removiendo, con un bisturí o instrumento punzante, los restos de tejido y raíces

del área radicular (figura 2). No se deben dañar las raíces primordiales. Con el fin

de eliminar los restos de tejidos es conveniente colocar los bulbos en agua destilada por

dos horas y secar.

Medio de crecimiento

La solución madre preparada de acuerdo con lo indicado se diluye diez veces con agua

destilada, y el pH se ajusta a siete antes de utilizar

 Utilizar agua dura o agua de la llave como medio de crecimiento. En el caso de usar

cualquiera de estas opciones el control negativo y el agua utilizada para preparar las

diluciones de los compuestos químicos o las muestras deberá ser la misma.

Almacenamiento de los bulbos de cebolla


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 Se recomienda adquirir los bulbos en vísperas de la realización de pruebas o en su defecto,

almacenarlos en un lugar donde se puedan garantizar condiciones secas, y una temperatura

entre 10 y 20 ºC. En algunas regiones, los bulbos pueden mantenerse almacenados hasta

por un año, sin embargo, en zonas geográficas donde la temperatura y humedad son altas,

el almacenamiento está limitado a unos pocos días Preparación de diluciones

 se sugiere el empleo de una serie de cinco concentraciones, un control negativo y uno o dos

controles positivos. Para su preparación se emplea el método de dilución en forma

secuencial aplicando un factor de 0,2 o 0,3.

 Cuando se va a llevar a cabo una evaluación presuntiva puede emplearse una serie de

diluciones logarítmicas, por ejemplo: 100; 10; 1; 0,1; 0,01, etcétera, lo cual permitirá

establecer el intervalo de concentración conveniente para la determinación de la

concentración inhibitoria media (CI50).

 Se recomienda igualmente utilizar agua dura para el control negativo, así como para la

preparación de las diluciones de la muestra y la preparación del control positivo con el

tóxico de referencia Cu(II

Ensayo

 Cuando se trabaja con bulbos de diámetro pequeño, las pruebas se realizan en tubos de

ensayo de 10 cm de longitud x 1,5 cm de ancho; en el caso de bulbos de mayor diámetro

pueden utilizarse tubos o recipientes de mayor volumen, dependiendo del tamaño de los

mismos.

 Es importante destacar que la profundidad de los recipientes debe ser tal que, al término de

la prueba, la elongación máxima no alcance el fondo del recipiente (Fiskesjö, 1985).


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 En la prueba se utilizan cinco concentraciones de la muestra, un control negativo, y uno o

dos controles positivos, cada una con doce réplicas.

 El ensayo se inicia con el llenado de los tubos con cada una de las diluciones y controles;

este llenado deber hacerse hasta el borde del tubo.

 A continuación, se colocan los bulbos limpios sobre la boca del tubo, cuidando que la zona

radicular quede inmersa en el líquido

 Los tubos se colocan en una gradilla, la cual se localiza sobre una mesa que no presente

vibraciones y se mantienen a temperatura ambiente (20 C) por un periodo de 72 horas.

Debe evitarse la iluminación directa.

 Dos veces al día durante el periodo de prueba se debe restablecer el volumen perdido por

evaporación o absorción. Para restablecer este volumen se utiliza la muestra o dilución

correspondiente. Se recomienda inclinar el bulbo sin sacar las raíces del tubo,adicionando

cuidadosamente el volumen con ayuda de una pipeta Pasteur

Expresión de resultados Medición

 Al término del periodo de exposición se registra la longitud promedio de las raíces, la cual

se lleva a cabo con ayuda de una regla común con escala en milímetros.

 La medición se lleva a cabo colocando la escala en el margen del

Tabla 1

Condiciones recomendadas para la prueba de toxicidad con Allium cepa


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Nota. La tabla muestra el resumen de las condiciones recomendadas para las pruebas de toxicidad

con Allium cepa

7.3.2. Flujo grama y descripción procedimental

7.3.3. Análisis de laboratorio

7.4. DISEÑOS DE INVESTIGACIÓN

7.4.1. Factores y variables de estudio

Como factor independiente se tiene a las aguas de minería del municipio de Poopó, y

como variables de estudio se tendrá el crecimiento radicular de la cebolla allium sepa

7.4.2. exploración, descripción, evaluación e interpretación de datos

Para este estudio analizaremos la prueba de diseño estadístico al azar que nos permite

analizar el porcentaje de germinación y Longitud Radicular de cebolla (Allium cepa) en suelos

contaminados por la minería.

El Análisis de Varianza (ANOVA) es un tipo de prueba paramétrica. Esto quiere decir que

deben cumplirse una serie de supuestos para aplicarla, y que el nivel de la variable de interés debe

ser, como mínimo, cuantitativo (es decir, como mínimo de intervalo, por ejemplo, el coeficiente

intelectual, donde existe un 0 relativo).

8. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Tabla 2

Fecha indicada para las distintas actividades programadas


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ACTIVIDAD FECHA

Inicio del perfil y entrega del proyecto 16-8-24 al 20-9-24

Primera defensa del perfil 1-9-24 al 4-9-24

Entrega del perfil de proyecto 20-9-24

Ultima defensa 20-9-24

Ingreso a campo y trabajos de gabinete 24-9-24 al 10-10-24

Redacción y presentación del proyecto final 7-11-2024

Defensa del proyecto final 7-11-2024

Entrega del artículo académico 14-11-24

Nota. Esta tabla muestra el cronograma de actividades programadas

9. PRESUPUESTO ESTIMADO

Tabla 3

Presupuesto de materiales

DESCRIPSION PRECIO

Internet 50 Bs

Lector USB y CD 30 Bs

Guantes quirúrgicos 40 Bs

Gorro quirúrgico 20 Bs

Barbijos quirúrgicos 10 Bs

Computadora 3000 Bs

Impresora 1200 Bs

Cámara fotográfica 1000 Bs


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Tubos de ensayo 50 Bs

Gradilla 20 Bs

Pipeta pasteur 10 Bs

Bulbos de allium sp 10 Bs

TOTAL 5440 Bs

Nota. La presente tabla muestra el presupuesto total estimado en Bs.

REFERNCIAS

Planes, E., I. (2015, 1 junio). Cuáles son los aportes de la ecotoxicología a las regulaciones

ambientales. https://ri.conicet.gov.ar/handle/11336/48860

Silva, J., Torrejón, G., Bay-Schmith, E., & Larrain, A. (2003). Calibración del bioensayo de

toxicidad aguda con Dapnia pulex (crustacea: cladocera) usando un toxico de referencia. Gayana,

67(1). https://doi.org/10.4067/s0717-65382003000100011

Roldán, L. F. (2020, 29 junio). Bioindicadores: qué son, tipos y ejemplos. ecologiaverde.com.

https://www.ecologiaverde.com/bioindicadores-que-son-tipos-y-ejemplos-2846.html

Aduviri, M. A. (2016). Valoracion economica del servicio ambiental que brindan las aguas del

lago poopo al municipio de oruro . La Paz.

Juan C. Montoya Choque, M. R. (2011). Kimsa Jalsuri. En M. R. Lovera, Evaluación Ambiental

de Pacopampa – Sora Sora, subcuenca Huanuni . Oruro: Nelzon Espinoza, Gueldy Torrico y

Edwin Alvarado.
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Ley de Medio Ambiente (1333) - Infoleyes Bolivia. (s. f.).

https://bolivia.infoleyes.com/norma/2173/ley-de-medio-ambiente-1333

Castillo Gabriela. (2004). Ensayos toxicológicos y métodos de evaluación de calidad de aguas. 1ra

edición. Impreso en México.

Ruiz Laura. ( 13 de mayo de 2019). Análisis de varianza (ANOVA): que es y cómo se usa en

estadística. https://psicologiaymente.com/cultura/analisis-de-varianza-anova

ANEXOS
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Imagen 1.

Imagen satelital mediante la aplicación Google earth del municipio de Poopó

Nota. La imagen representa la ubicación geográfica en coordenadas -18.381981, -66.962027

Imagen 2.

Nota. El gráfico representa los pasos para realizar el bioensayo de la cebolla. Adaptando

ensayos toxicológicos y métodos de evaluación de aguas (p. 50), por C.M. Gabriela,

2004, México
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Imagen 3.

Nota. El gráfico representa los reactivos a utilizarse en el protocolo de ensayo (p.58), por

C.M. Gabriela, 2004, México

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