Diego Tocaín1, Lennys Berutti 2, Eleonora Layana1 1Universidad Técnica del Norte. Ibarra – Ecuador.

2 Pontificia Universidad Católica del Ecuador. Ibarra - Ecuador.adiegotb@gmail.com, lbberutti@pucesi.edu.ec,

emlayana@utn.edu.ec

RESUMEN

En la producción de trucha arcoíris existe un dimorfismo sexual notable en tamaño, ganancia

de peso y calidad de la carne, por lo cual es necesario obtener cardumes monosexos,
genotípicamente hembras, pero capaz de producir semen y comportarse como machos
funcionales. Existen varios métodos de control sexual, tales como, irradiación de rayos
ultravioleta en el esperma, choques térmicos, y presión, los cuales producen alevines
ginogenéticos, económicamente deseables dentro de esta especie de salmónidos. El objetivo
de esta investigación fue evaluar el porcentaje de reversión sexual (masculinización) en la
trucha arcoíris con diferentes dosis de hormona. El mayor porcentaje de reversión del grupo
experimental se obtuvo aplicando 3mg de 17 α-metiltestosterona por cada kg de alimento,
suministrado durante 60 días, después de este período de alimentación continuaron con su
dieta normal hasta el final del experimento. Los resultados reportaron que con este tratamiento
el 86% de las hembras del grupo experimental se masculinizaron y 14% presentaron intersexo.
Se realizó también la caracterización física de la especie en función del peso y talla durante el
tiempo de crecimiento y desarrollo y se concluyó que a lo largo de su crecimiento si existió una
interacción entre días de crecimiento y aplicación de la hormona.

Palabras claves: Truchas, reversión sexual, masculinización, hormona, 17 α -metiltestosterona

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Introducción
Ecuador es uno de los países con mayor biodiversidad en el mundo por los diferentes
pisos climáticos que posee. Esto le ha permitido desarrollar diferentes especies de interés
agrícola, pecuario y acuícola, destacándose en la producción de truchas, cultivo que se
ha intensificado y fortalecido en los últimos años (Banco Nacional de Fomento [BNF],
2016). Sin embargo, en este salmónido, durante su crecimiento y posterior cosecha se
pueden apreciar diferencias entre macho y hembra asociadas al dimorfismo sexual. En las
épocas de reproducción los machos secretan enzimas que le otorgan un sabor amargo
a la carne, además de ser más agresivos por lo que provocan lesiones a las hembras y
son más propensos a enfermedades por hongos (Arai, 2000). En las hembras se presenta
una disminución del crecimiento y pierden el 30% de su peso corporal en el desarrollo
gonadal. Esto significa que durante la madurez sexual los salmónidos no ocupan su energía
metabólica en la producción de carne, sino en la formación y maduración de sus gónadas.
Por este motivo la tasa de crecimiento somático es baja. Otro aspecto negativo se asocia a
la maduración sexual, que en el macho transcurre entre los 7 y los 12 meses y en la hembra
a los 24 meses (Pérez, et al., 1999).

En la actualidad algunas técnicas biotecnológicas proporcionan ventajas que inciden en el

crecimiento y el manejo de esta especie. La técnica más recomendada es la ginogénesis en
donde se produce un efecto de esterilidad que inactiva el esperma mediante tratamientos
previos a la fertilización y permite utilizarlo únicamente para iniciar el desarrollo del huevo
(Benavides, et al., 2012). Esto se logra a través de la manipulación cromosómica mediante
choque térmico para obtener individuos triploides (Pineda, 2003).

Mejía y Román (2009), demostraron que es posible optimizar la producción generando

poblaciones monosexo (solo hembras), bajo manejo hormonal. Esto se logra aplicando una
hormona masculina para que los individuos genotípicamente hembras trocasen a machos
para ser utilizados como reproductores en el cruce con hembras normales, de este modo
se produciría una población de solo hembras. Como se muestra, en este procedimiento
el uso de estrógenos es indirecto ya que la masculinización de las hembras permite

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obtener machos homogaméticos (XX), que se comportan fenotípicamente como machos

y genotípicamente siguen siendo hembras. El semen de estos machos funcionales puede
ser utilizado para fertilizar las ovas normales, obteniendo descendientes 100% hembras,
para un consumo sin restricciones y utilizados en programas de reproducción (Bastardo et
al., 2003).

Se ha reportado para este fin el uso de 31 esteroides diferentes, entre los que se incluye la
17 α – metil testosterona, siendo esta la hormona más utilizada por su fácil obtención y gran
estabilidad química; aunque no necesariamente es la más potente. Esta investigación tiene
como objetivo analizar el porcentaje de reversión sexual a través de la comparación de
diferentes dosis de tratamientos hormonales en la trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss).

Materiales y Métodos

Material biológico

Se seleccionaron ovas y esperma de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss) de 2 a 3 años

de maduración. Los peces se obtuvieron de los estanques del Centro de Investigación
Acuícolas Papallacta, propiedad del Ministerio de Acuacultura y Pesca (MAP), ubicado en
la parroquia de Papallacta en el cantón Quijos provincia del Napo, Ecuador.

Diagnosis de la madurez sexual de reproductores

Se procedió a verificar el estado de madurez sexual de las truchas hembras presionando

suavemente el abdomen para comprobar la existencia de ovas maduras. Los machos
adultos por lo general se mantienen en estado maduro durante toda la época (Imaki, 2003).
Para proceder a anestesiar a los ejemplares seleccionados, se agregaron 10ml de eugenol
en 100 litros de agua contenidos en la tina donde se encontraban las truchas. Las hembras
seleccionadas se colocaron sobre el soporte de extracción de ovas y se masajeo suavemente
el abdomen con movimientos repetitivos desde la parte superior a la inferior. De esta forma
las ovas cayeron y se depositaron en una malla recolectora; este procedimiento es conocido
como método unipersonal (Imaki, 2003). Para los reproductores machos el procedimiento
fue similar se presionó suavemente el abdomen de forma repetitiva, el material seminal se
recogió en cajas Petri.

Ginogénesis

En un volumen de 2ml de semen, se aplicó la irradiación de rayos ultravioleta colocando la

lámpara UV a una altura de 10cm, con una longitud de onda de 254 mm y un tiempo de 270
segundos (Parra, 2014), manteniéndola en continua agitación con el fin de que la muestra
recibiera una irradiación uniforme. Para la fecundación artificial se empleó el método
seco, cuya unidad experimental estuvo representada por 540 gramos de ovas (Blanco,
1995) a las que se le rociaron los 2ml de semen irradiado, mezclándolo uniformemente y
sometiéndose a choques térmicos en un equipo de baño maría (modelo YCW-010). Los
choques térmicos se aplicaron por inmersión de las ovas a baño de maría, mantenidas
a temperaturas y tiempos ya definidos de 28°C, 10 minutos de duración y 10 minutos
postfertilización o tiempo de espera de fecundación (Muñoz, 2007). Finalmente fueron
llevadas a la incubadora con la ayuda de un cedazo, evitando los movimientos bruscos y
sobre todo sin presencia de la luz. La incubación se realizó a temperaturas entre 8-10°C
(Imaki, 2003).

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Alimentación

La población obtenida de 735 alevines se dividió en siete lotes. Seis de estos lotes fueron
alimentados con una dieta comercial a la que se le añadió 17 α-metil testosterona en
diferentes cantidades y a diferentes días de consumo, mientras que el lote restante consumió
la misma dieta comercial sin testosterona (grupo testigo) (Tabla 1). Para la preparación de
la hormona se aplicó el procedimiento descrito por Bastardo et al., (2003). Del alimento
balanceado seleccionado, marca Biomix se pesaron 3kg, que se separó en tres bandejas con
1 kg c/u y en las que se agregó la hormona 17 α-metil testosterona (Genetech) previamente
diluida en 57 ml de alcohol etílico al 99.5%. Las cantidades utilizadas correspondieron a
1, 3 y 5 mg, que se mezclaron con el alimento. Posteriormente este alimento se cubrió
con papel periódico para permitir la evaporación del alcohol. Al día siguiente se colocó
en fundas selladas, dentro de un recipiente totalmente oscuro y en la refrigeradora para
evitar la desintegración de la hormona. Este procedimiento se realizó cada 21 días. Una
vez que se identificó el primer día en que el alevín absorbe su saco vitelino, se inició el
suministro del alimento hormonado cada 60 minutos durante 9 horas diariamente por un
período de entre 60 y 90 días, según el tipo de tratamiento. Concluido este período de
alimentación se les suministro su dieta de balanceado comercial (dieta control) hasta el final
del experimento (12 meses).

Tabla 1.
Tratamientos en estudio de la reversión sexual de la trucha arcoíris.

TRATAMIENTO CÓDIGO DESCRIPCIÓN

T1 H1D1 Hormona a 1 mg/kg de alimento a 60 días
T2 H1D2 Hormona a 1 mg/kg de alimento a 90 días
T3 H2D1 Hormona a 3 mg/kg de alimento a 60 días
T4 H2D2 Hormona a 3 mg/kg de alimento a 90 días
T5 H3D1 Hormona a 5 mg/kg de alimento a 60 días
T6 H3D2 Hormona a 5 mg/kg de alimento a 90 días
T7 H0D0 Hormona a 0 mg/kg de alimento a 0 días

Toma de datos

Una vez concluida la alimentación hormonada las truchas fueron trasladadas a las piscinas
de crianza. Allí se criaron de forma convencional alimentadas con balanceado comercial
con sus respectivas raciones hasta completar el tiempo del estudio.

A los 270 días desde que absorbieron su saco vitelino las truchas fueron sacrificadas
mediante el corte en la cuarta arteria branquial y luego fueron depositados en una tina con
agua para su desangrado total. Este procedimiento se realizó de tal forma que las vísceras
no tuvieran contacto con sangre. Una vez que se desangraron completamente se realizó
un corte longitudinal desde el orificio urogenital hasta la cabeza para poder observar las
gónadas masculinas, femeninas o ambas.

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Resultados
Para el propósito de este estudio, se aplicó un Análisis de Varianza ADEVA con arreglo
factorial AxB y material testigo. En la Tabla 2 se observa que, del total de hembras en el
grupo experimental, se llega a un máximo de reversión sexual del 86%. El tratamiento
hormonal que muestra este resultado superior es el constituido por 3mg de 17 α-metil
testosterona durante 60 días (codificación: H2D1). En esta misma muestra experimental el
14% presentó intersexo,

Tabla 2. Porcentaje de reversión sexual en la trucha arcoíris.

Tratamientos / H0 D0 H1 D1 H2 D1 H3 D1 H1 D2 H2 D2 H3 D2 Total
Reversión
Hembras 76% 13% 0% 0% 4% 0% 0% 13%
Machos 24% 48% 86% 83% 52% 85% 84% 66%
Intersexo 0% 39% 14% 17% 44% 15% 16% 21%
Total 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100%

El comportamiento de la reversión sexual en la trucha arcoíris en función de los tratamientos

propuestos en el presente trabajo se muestra en la Figura 1. Existe un crecimiento
significativo de especímenes con reversión sexual conforme se aumenta la dosis de 17
α-metil testosterona (Figura 1(a)). También se observan valores relativamente superiores en
cuanto a presencia de especímenes intersexo para valores bajos de alimento hormonado
(Figura 1(b)).

Fig. 1. (a): Reversión sexual de trucha arcoíris luego de tratamiento hormonal; (b) Presencia de especímenes
intersexo luego de tratamiento hormonal de trucha arcoíris

Una vez observados los resultados de las observaciones realizadas luego de los distintos
tratamientos propuestos en el presente trabajo, es necesario determinar de forma cuantitativa
mediante un Análisis de Varianza cual es la variable cuyo efecto es más significativo. Los
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resultados de este análisis se muestran en la Tabla 3.

Tabla 3.
Esquema de la ADEVA del efecto de la alimentación hormonada sobre la reversión sexual de la trucha
arcoíris.

Promedio Valor
Origen de las Suma de Grados de de F Probabilidad crítico
variaciones cuadrados libertad cuadrados F
Dosis hormonal 1591 2 795,5 251,21 0,004 19
Tiempo de 2,67 1 2,67 0,84 0,456 18,51
alimentación
Error 6,33 2 3,17
Total 1600 5

El análisis realizado muestra que el factor llamado “Dosis hormonal” presenta un P-valor de
0.004 en tanto que el factor denominado “Tiempo de alimentación” presenta un P-valor de
0.456. Estos resultados indican que la “Dosis hormonal” se encuentra en la zona de rechazo
de la hipótesis nula respecto de esta variable. Por otra parte, el “Tiempo de alimentación”
se encuentra en zona de aceptación de su hipótesis nula correspondiente. De este modo
se puede afirmar que de estas variables, la “Dosis hormonal” influye de modo significativo
desde el punto de vista estadístico, en cuanto a la reversión sexual en la trucha arcoíris.
Estos resultados se muestran de forma gráfica en la Figura 2.

Fig. 2. (a): Promedios de porcentaje de reversión sexual para las tres dosis de hormona

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estudiada; (b): Varianza en porcentaje de reversión sexual para las tres dosis de hormona
estudiada; (c): Promedios de porcentaje de reversión sexual en el tiempo de alimentación
estudiado; (d): Varianza en porcentaje de reversión sexual en el tiempo de alimentación
estudiado.

Los resultados del ANDEVA realizado muestran que el porcentaje de reversión sexual se ve
significativamente influenciado por el factor “Dosis hormonal”. Sin embargo, los resultados
mostrados en la Figura 2 sugieren que esta influencia tiende a estabilizarse a partir de 5 mg
de α-metil testosterona.

En la Figura 3 se muestra los porcentajes de variación sexual de todos los tratamientos

aplicados en el presente trabajo, comparados con los datos del grupo testigo.

Fig. 3. Porcentajes de sexo según tratamiento aplicado en el presente trabajo según la codificación mostrada

en la Tabla 1.

La Figura 3 muestra que con todos los tratamientos con alimento hormonado, el porcentaje
de hembras mostrado originalmente tiende a disminuir, en tanto que el porcentaje de
machos funcionales aumenta. Esto corrobora los propuesto en la hipótesis de trabajo en la
presente investigación. Hay un porcentaje de truchas arcoíris que presenta intersexo. Este
porcentaje tiende a ser significativo para los tratamientos con bajas cantidades de hormona
α-metil testosterona y conforme se aumenta la dosis en el tratamiento, este porcentaje
disminuye.

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Conclusiones
• Este trabajo permitió a través del método de reversión sexual, masculinizar un 86%
de las hembras de trucha arco iris, demostrando que el tratamiento de 3mg de
hormonas con 60 días de aplicación fue la dosis de mayor incidencia en el porcentaje
de aparición de gónadas masculinas.

• - La tecnología aplicada en el presente trabajo es una innovación en Ecuador.

Su utilización tiene implicaciones de gran importancia en el sistema productivo del
rubro trucha ya que permite obtener mayor proporción de hembras en un período
de tiempo más corto que utilizando las poblaciones de ambos sexos con menos
implicaciones asociadas a su dimorfismo.

• - Las observaciones realizadas sugieren que la utilización de la hormona α-metil

testosterona en dosis bajas, incentiva la aparición de especímenes con intersexo en
la trucha arcoíris.

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