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    Cuantificación de Clotiazepam

    Cargado por

    Andrea Costantino
    Este documento describe el desarrollo y validación de un método para cuantificar clotiazepam en plasma humano mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-MS). El método involucra la extracción en fase sólida del clotiazepam y el diazepam como estándar interno del plasma, seguido de su análisis por CG-MS. La validación demostró que el método es sensible, preciso y específico para cuantificar clotiazepam en el rango de 5 a 200 ng/

    Copyright:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
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    Cuantificación de Clotiazepam

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    Andrea Costantino
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    Este documento describe el desarrollo y validación de un método para cuantificar clotiazepam en plasma humano mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-MS). El método involucra la extracción en fase sólida del clotiazepam y el diazepam como estándar interno del plasma, seguido de su análisis por CG-MS. La validación demostró que el método es sensible, preciso y específico para cuantificar clotiazepam en el rango de 5 a 200 ng/

    Título original

    Cuantificación de clotiazepam

    Derechos de autor

    © Attribution Non-Commercial (BY-NC)

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    Este documento describe el desarrollo y validación de un método para cuantificar clotiazepam en plasma humano mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-MS). El método involucra la extracción en fase sólida del clotiazepam y el diazepam como estándar interno del plasma, seguido de su análisis por CG-MS. La validación demostró que el método es sensible, preciso y específico para cuantificar clotiazepam en el rango de 5 a 200 ng/

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    Este documento describe el desarrollo y validación de un método para cuantificar clotiazepam en plasma humano mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-MS). El método involucra la extracción en fase sólida del clotiazepam y el diazepam como estándar interno del plasma, seguido de su análisis por CG-MS. La validación demostró que el método es sensible, preciso y específico para cuantificar clotiazepam en el rango de 5 a 200 ng/

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    Cuantificacin de clotiazepam en plasma humano, con cromatografa gaseosa acoplada a un espectrmetro de masa

    Sung-Hoon Ahn, Han-Joo Maeng, Tae-Sung Koo, Dae-Duk Kim, Chang-Koo Shim, Suk-Jae Chung

    Department of Pharmaceutics, College of Pharmacy, Seoul National University, San 56-1, Shinlim-dong, Kwanak-gu, Seoul 151-742, South Korea Received 3 November 2005; accepted 21 February 2006 Available online 6 March 2006 JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B
    Anlisis industrial cromatogrfico 2011 Costantino, Andrea Rosana

    Clotiazepam:

    FARMACOCINETICA: Va oral: Se absorbe rpidamente (T max. 0.5-15hs). El grado de unin a protenas plasmticas es del 99%. Se metaboliza en el hgado, dando lugar entre otros metabolitos activos a hidroxiclotiazepam y desmetilclotiazepam. Es eliminado mayoritariamente en la orina en la forma de metabolitos glucuronoconjugados. Su semivida de eliminacin

    Primeros Mtodos:
    CG-ECD CG-NPD CG-MS CG-MS/MS HPLC

    OBJETIVO:
    Desarrollar y validar un mtodo para determinar clotiazepam en plasma humano usando CG-MS, y su aplicacin en estudios farmacocinticos.

    ORIENTACION PARA LA INDUSTRIA: METODOS BIOANALITICOS DE VALIDACION (FDA, MAYO 2001)


    Validar es documentar mediante el uso de investigaciones de laboratorio especificas que las caractersticas del funcionamiento del mtodo son adecuadas y fiables para el anlisis. La aceptabilidad se corresponde directamente con los criterios para validar. Da recomendaciones generales para validar un mtodo: Protocolo Obtencin, envio, recepcin y almacenamiento de especmenes Preparacin de muestra Aparatos Mtodos Parmetros: Especificidad/ Selectividad Precisin Exactitud Linealidad Limite de cuantificacin Estabilidad de solucin patrn y la sustancia a analizar en la matriz biolgica bajo las condiciones de anlisis y durante todo el proceso de almacenamiento incluidos los procesos de congelacin y descongelacin que puede sufrir.

    RESULTADOS Y DISCUSION:
    Estndar: Clotiazepam Estndar interno: Diazepam

    PREPARACION DE SOLUCIONES ESTANDAR: Solucin patrn: 1 mg/ml


    Solucin estndar de trabajo de clotiazepam

    Solucin estndar de trabajo de estndar interno

    Alcuota 20l + Blanco de plasma humano 5g/ml Muestras estndar de Clotiazepam en plasma (5, 10, 20, 50, 100 o 200 ng/ml)

    Tratamiento o Pre-tratamiento de muestra:


    Medida cuantitativa de las prdidas

    % de Recuperacin= 100 x Conc. De anlito encontrada Conc. De anlito en muestra


    Correccin por prdida:

    RSD = total Contenido del analito


    Extraccin: 1. Slido-Slido 2. Con fluidos supercrticos 3. Liquido-Liquido 4. En fase solida (FSE)

    Extraccin en Fase Slida:


    Ventajas:
    Mas completa recuperacin del analito en menos tiempo Mas eficiente separacin de interferentes Menos consumo de solventes Coleccin mas fcil de los analitos Manualmente mas conveniente Permite la fcil remocin del material particulado Mas fcil de automatizar

    Desventajas:
    Variabilidad entre cartuchos SPE Adsorcin irreversible de algunos analitos al material de los cartuchos. TECNICAS DE SPE CON FASES SOLIDAS EN CARTUCHOS

    USOS DE SPE:
    -

    Remocin de interferentes que se superponen con los analitos de inters en ensayos subsecuentes Remocin de contaminantes asesinos de columnas Concentracin y enriquecimiento de analitos Desalacin

    OTROS USOS:
    Intercambio de un solvente por otro Derivatizacin in situ Almacenamiento y transporte de muestra

    PASOS DE SPE:

    INSTRUMENTACION:
    CG: HP 6890 MS:5973

    COLUMNA: FSOT
    WCOT: - 30MTS - 0.25 mm di - 0.25 m - RANGO DE T: -60 A 325/350C

    FE:
    HP-5MS 5% fenil metil polisiloxano

    FM: gas carrier: Helio

    INYECTOR: split/splitless: Modo Split

    Relacin de split =

    Flujo del venteo

    Flujo en la columna

    Flujo en la columna

    2 RAMPAS DE T:
    T inicial: 150C 30C/min hta 210C 8C/min hta 270C por 0.5min

    ANALISIS CUANTITATIVO:
    ALTURA: AREA: VENTAJAS:
    No se requiere calibracin Simple, clculos rpidos No es critico el volumen de inyeccin Baja dependencia con parmetros cromatogrficos

    DESVENTAJAS:

    Suposiciones (Respuesta uniforme del detector, todos eluyen, todos son detectados) Cuantifica todos los componentes Todas las reas deben ser correctas

    METODOS Normalizacin Adicin de estndar Estndar externo Estndar interno

    ESTNDAR INTERNO:
    VENTAJAS:
    Se agregan compuestos conocidos al estndar y muestra El volumen de inyeccin no es critico Calibro los picos de inters Corrige la respuesta del detector

    DEVENTAJAS:
    Comprar estndar interno Encontrar uno que funcione y ande bien para mi muestra Debo agregar un componente a mi muestra

    Factores de Respuesta:

    Ejemplos:

    Mtodo del estndar interno: Curva de Calibracin


    Empleo de un solo estndar: Factor de respuesta relativo

    LINEALIDAD: Fue evaluado para muestras estndar de plasma 5-200ng/ml

    PRECISION Y EXACTITUD:

    Precisin: < 13.5% Exactitud: 92.4 107.9 %

    ESPECIFICIDAD:

    SENSIBILIDAD:
    LQC: 5ng/ml (S/R: 5/1) Precisin: <20 % Exactitud : 80-120%

    RECUPERACIN:

    SIN EXTRACCION: ESTANDAR DE CLOTIAZEPAM EN METANOL (5 , 50 Y 200 NG/ML) + S. I. CON EXTRACCION: MUESTRAS ESTANDAR DE CLOTIAZEPAM EN PLASMA (5 , 50 Y 200 NG/ML) + S. I.

    ESTABILIDAD:

    La estabilidad del clotiazepam y S. I. en las 3 concentraciones (baja, media, alta), fue examinada en distintas condiciones, todas fueron comparadas con las muestras frescas.

    Parmetros fueron: 92.7-99.6% iguales a los del control

    FARMACOCINETICA:

    CONCLUSION:
    CG-MS fue desarrollado para la determinacin de clotiazepam en plasma humano. Este mtodo tuvo adecuada sensibilidad, reproducibilidad y especificidad. Teniendo en cuenta los parmetros farmacolgicos obtenidos permite que pueda usarse para estudios de farmacocintica de clotiazepam en seres humanos.

    MUCHAS GRACIAS!!!!

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