Luminol

Aplicacin de luminol
en huellas
de escena del crimen
William Ivan Alejandro LLANOS TORRIC
Julio de 2.010
El lugar de los hechos
La fase ms importante en la
investigacin
Es
irrepetible
Han de localizarse todos los indicios
para su posterior envo al laboratorio.
Si los indicios no se detectan, no se
preservan,
no
se
embalan
adecuadamente, no llegar a haber
identificacin criminalstica.
Situaciones caractersticas en el
Lugar de Hechos
Siempre es posible que se hayan producido
mezclas, contaminaciones o prdida de indicios.
Los indicios son frgiles y pudieron haberse
manipulado.
Los indicios pueden pasar inadvertidos.
Los indicios pueden sufrir alteraciones en sus
caractersticas
Tipos de indicios
Sangre:
Sustancia viscosa, roja y espesa, presente en el
sistema circulatorio (arterias, arteriolas,
capilares y venas), constituidas por una parte
lquida o plasma y una parte de elementos
celulares (hemates, leucocitos y plaquetas).
Identificacin del individuo de quien procede

Podemos asegurar que con respecto al ser humano, existen
numerosas diferencias sanguneas individuales que ya han sido
puestas de manifiesto, e indudablemente todava existen otras que
an no han sido establecidas.
Karl Landsteiner
Disertacin Nobel, 1930.
Cada nuevo individuo es nico en su informacin gentica, de

aqu el trmino de individualidad biolgica. En cualquier parte del
organismo siempre se encuentra el mismo material gentico,
propio de cada individuo y diferente de cualquier otro, excepto en
el caso de gemelos monocigotos.
Zannoni Primarrosa
1.999.
Sangre:
Entre sus funciones se tienen:
Trasportar el oxgeno y eliminar el anhdrido
carbnico.
Promover las defensas del organismo frente a las
infecciones.
Termorregulacin.
Regulacin osmtica.
Nutricin celular.
Sangre:
Volemia:
Volumen normal de sangre de una persona.
Clculo:
6 8 % del peso corporal.
13 / 14 parte del peso corporal.
M 10%.
Sangre:
Agua 90%
Fraccin Lquida
Slidos 10%
Composicin
Glbulos Rojos.
Fraccin Slida
(Elementos Celulares)
Glbulos Blancos.
Plaquetas.
Protenas.
Lpidos.
Glcidos.
Sales Minerales.
Enzimas.
Sangre:
Elementos
Celulares
Glbulos Rojos
(Hemates o Eritrocitos):
Anucleados, bicncavos, circulares.
7 7,5 m dimetro.
2 3 m espesor.
85 M volumen.
5.000.000 x mm3H.
4.500.000 x mm3H.
Sangre:
Elementos
Celulares
Glbulos Blancos (Leucocitos):

Nucleados.
6.500 7.00 mm3.
Granulocitos E: 1,5% parsitos.
Granulocitos B: 0,5% respuestas alrgicas.
Linfocitos: 26% detectan y atacan clulas
cancerosas.
Monocitos: 6% devoran clulas muertas o
daadas (Macrfagos).
Hemoglobina:
Estructura:
Cromoprotena
PM 64.500 96% Globina 4% Hemo
Globina:
Fraccin proteica constituida por cuatro
cadenas polipeptdicas.
Hemo:
Ncleo porfirnico formado por cuatro grupos pirroles unidos por
puentes de meteno (=C) que constituyen anillos tetrapirrlicos.
16 Ismeros N 9 presente en elementos biolgicos.
Un tomo de hierro est ligado a los cuatro nitrgenos en el centro
del anillo.
1 Molcula de Hemo = 4 Grupos Hemo.
Sangre:
Examen visual preliminar:
Aspecto.
Color.
Forma.
Nmero.
Dimensiones.
Ubicacin.
Importancia Criminalstica:
Data de los hechos.
Intensidad de las lesiones.
Reconstruccin de los hechos.
Admitir o refutar alegatos.
Identificacin de sujetos.
Color:
Ropa blanca y soportes claros y absorbentes:
Contornos muy ntidos por penetrar la sangre en los tejidos.

Reciente: Roja.
Antigua: Morena o parda y an negruzca.
Una vez seca: diminutas masas, ligeramente elevadas como
pequeas escamas brillantes, ms o menos resquebrajadas
segn condiciones ambientales.
Manchas de proyeccin.
Manchas por escurrimiento.
Manchas por contacto.
Forma:
Manchas por impregnacin.
Manchas por limpiamiento.
Manchas por arrastre.
Reconstruccin de los hechos.

Importancia:
Intensidad de las lesiones.

Admitir o refutar alegatos.
Problemas forenses que plantea

una muestra de sangre:
Naturaleza sangunea.
Determinacin de especie.
Identificacin del individuo.
Data de la mancha de sangre.
Cantidad de sangre que compone la mancha.
Regin del cuerpo de donde procede la sangre.
Sexo gentico de la persona de quien procede la sangre.
Grupo etario.
Agentes extraos a su naturaleza (medicamentos, drogas
ilcitas, agentes patgenos).
Naturaleza Sangunea:
Mtodos de Orientacin:
Es Sangre?
TCNICA
INDICADOR
SEAL
SENSIBILIDAD
Adler
Bencidina
Azul Intenso
1 / 200.000
O - Tolidina
Orto Tolidina
Azul Verdoso
1 / 200.000
Medinger
Verde de Malaquita
(leuco derivado)
Verde
1 / 1.000.000
K Meyer
Fenolftalena
Rojo
1 / 1.000.000
Luminol
Hidracida del cido Quimioluminiscencia

Alfa Amino ftlico
blanco azulada
1 / 5.000.000
Histolgicos.
Biolgicos.
Mtodos
De Certeza:
Fsicos (Cromatogrficos Instrumental).
Microqumicos.
Mtodos de Certeza:
Microqumicos
Teichmann
Cristales de
Clorhidrato de Hematina.
Takayama
Cristales de
Hemocromgeno.
Guarino
Cristales de
Hematoporfirina
(cida Alcalina).
Determinacin de Especie:
Histolgicos
Uhlenhutt:
Protenas Sricas (Halo Isogentico).
Mtodos
Bioqumicos
ADN
Hexagon Obti Test (Banda Azul):

Hemoglobina Humana Sub Tipos
HbAo, HbA2, Hb F y Hb S.
Sistemas tendentes a la determinacin

de la identidad biolgica:
Sistemas Eritrocitarios:
ABO: A; B; AB; O; y Sub Grupos.
Rh: D; d; C; c; Cc; E; e; Ee.
MNS: M; N; MN.
Otros sistemas: Kell; Lewis; Kidd; Diego; P; otros.
Sistema ABO:
Antecedentes
A
Antgenos
Aglutingenos
B
Alfa Anti A
Anticuerpos
Beta Anti B
Test de Landsteiner
Incompatibilidad
Sangunea
LA PRUEBA
DE
LUMINOL
Fe
LUMINOL
El Luminol qumicamente denominado
como: 3 aminophtalahidrazida (5-amino2, 3-dihidro-phthalazino-1,4-diona) fue
sintetizada por Smicthz en el ao de
1902, comprobando a la vez, que esta
sustancia produce una brillante
quimioluminiscencia (produccin de luz
por reaccin qumica: Una fuerte luz
fluorescente azul en soluciones cidas
con pH menor de 7).
Posteriormente, en el ao de 1927 otro investigador de

apellido Lommel, observ dicha quimioluminiscencia
despus de la oxidacin del compuesto en medio alcalino
(Soluciones con pH mayores de 7).
En 1934 el investigador Albrecht denomin a este
compuesto LUMINOL, por las propiedades
quimioluminiscentes que presentaba.
Adems descubre que la reaccin quimioluminiscente se da
en presencia del perxido de hidrgeno.
En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol
presentaba luminiscencia en presencia de sangre. Esto es
debido a la capacidad peroxidsica de la hemoglobina.
Posteriormente, en el ao de 1927 otro investigador de

apellido Lommel, observ dicha quimioluminiscencia
despus de la oxidacin del compuesto en medio alcalino
(Soluciones con pH mayores de 7).
En 1934 el investigador Albrecht denomin a este
compuesto LUMINOL, por las propiedades
quimioluminiscentes que presentaba.
Adems descubre que la reaccin quimioluminiscente se da
en presencia del perxido de hidrgeno.
En 1936 Gleu y Pfannstiel descubrieron que el Luminol
presentaba luminiscencia en presencia de sangre. Esto es
debido a la capacidad peroxidsica de la hemoglobina.
En el ao de 1937 se report la primera aplicacin forense

del Luminol, como prueba presuntiva de deteccin de
sangre, dicho ensayo fue realizado por Walter Specht. Este
investigador roci sangre en varios
substratos como paredes, gradas, piedras, y tierra dejndola
expuesta por 14 das a las condiciones ambientales.
Seguidamente aplic el Luminol y
fotografi los resultados. Todas las reas que contenan
manchas de sangre presentaron luminiscencia que perdur
por 15 minutos. En esta ocasin el Luminol funcion bien
con manchas de sangre frescas y viejas; se observ mayor
respuesta quimioluminiscente en las manchas de sangre
viejas, que en las manchas frescas o nuevas.
En el ao de 1939, los investigadores Moody y Proescher,

basndose en la investigacin de Specht, aplicaron el
Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenan
manchas de sangre de tres aos de antigedad, obteniendo
resultados satisfactorios.
En 1942, McGrath, recomend el uso de la prueba de
Luminol, para la deteccin de sangre, l not que las
manchas de sangre viejas, daban respuestas ms fuertes y
prolongas, debido a que en estas, hay una mayor
concentracin de metahemoglobina y hemtica.
Los investigadores Lytle y Hedgecock, en el ao de 1978

estudiaron los efectos del Luminol en solucin alcalina, en
la sangre detectada por la prueba, concluyendo que no
afectaba la actividad enzimtica de los eritrocitos, pero no
reportan los efectos del reactivo en la determinacin de
grupo ABO en las manchas, ni anlisis de marcadores
genticos (ADN).
La prueba de Luminol es extremadamente sensible en la
deteccin de sangre. En 1986 Thornton y colaboradores
detectaron luminiscencia, a simple vista, proveniente de
sangre que fue diluida 1:10000 partes.
En el ao de 1939, los investigadores Moody y Proescher,

basndose en la investigacin de Specht, aplicaron el
Luminol, en papel, tela y piezas de hierro que contenan
manchas de sangre de tres aos de antigedad, obteniendo
resultados satisfactorios.
En 1942, McGrath, recomend el uso de la prueba de
Luminol, para la deteccin de sangre, l not que las
manchas de sangre viejas, daban respuestas ms fuertes y
prolongas, debido a que en estas, hay una mayor
concentracin de metahemoglobina y hemtica.
Fundamento terico
de la prueba de luminol
La prueba del Luminol emplea:
el Carbonato de Sodio para crear una solucin alcalina de
pH 10.4-10.8,
Perborato de Sodio como agente oxidante, y el
Luminol como la sustancia a ser oxidada con la
subsecuente emisin de luz.
La sangre es el sistema peroxidasa que cataliza la reaccin.
Reactivos utilizados para la prueba

de luminol
1. Carbonato de Sodio
2. Perborato de Sodio Trihidratado
3. Luminol
(5-amino-2,3-dihydrophthalazine 1,4-dione)
Preparacin del reactivo

1. Pesar 3,5 gramos de Perborato de Sodio en una
balanza analtica. Depositar la medida en un beaker de
1.000 ml de volumen.
2. Pesar 25 gramos de Carbonato de Sodio y 0,5 gramos
de Luminol en una balanza analtica y colocarlos juntos en
un recipiente limpio.
3. Medir un volumen de agua destilada de 500 ml con una
probeta de 1.000 ml de capacidad.
Preparacin del reactivo

4. Agregar los 500 ml de agua destilada al beaker con los
3,5 gramos de Perborato de Sodio.
5. Agitar hasta disolver por completo.
6. Agregar a esta solucin la medida de Carbonato de
Sodio y Luminol.
7. Agitar hasta disolver por completo.
8. Verter la solucin disuelta en el atomizador.
Cmo se aplica la prueba

Antes de la aplicacin del reactivo el personal debe vestir
prendas que lo protejan del contacto directo con el
Luminol. Es imprescindible la utilizacin de mascarillas
que impidan la inhalacin del atomizado.
Se debe procurar una completa oscuridad para la
aplicacin del reactivo.
Aplicar el reactivo por aspersin, en las zonas del
escenario en donde se sospecha la presencia de sangre.
Cmo se aplica la prueba

En un lapso no menor de 10 segundos debe aparecer una
reaccin lumnica que evidencia la actividad peroxidasa que
posee la sangre entre otras sustancias.
Despus de localizar los diferentes focos lumnicos se
procede a evaluar la naturaleza de estos.
De sospechar que los focos lumnicos se deben a la
presencia de sangre (manchas de color y aspecto
caracterstico), se debe delimitar el rea de reaccin
positiva con cinta adhesiva o con un marcador a base de
agua, esto con el objetivo de facilitar el levantamiento de
muestra y el registro fotogrfico.
Cuidados que se deben tener al

aplicar la prueba
Procurar en la medida de lo posible no entrar en contacto

directo con la sustancia. Es necesario asegurarse de que
todo el personal presente este debidamente protegido.
La vida media del Luminol ya preparado, es de 8 horas,
por lo que debe tenerse la precaucin de no exceder este
tiempo en su aplicacin.
La prueba de Luminol es presuntiva para detectar la
presencia de sangre, esto significa que requiere de otras
tcnicas como la determinacin de especie para afirmar la
presencia de sangre.

aplicar la prueba
Esta sustancia no es corrosiva y no mancha
Se ha observado que no tiene efectos destructivos e

inhibitorios sobre la sangre, permitiendo la realizacin de
anlisis posteriores de ABO y ADN.
Una desventaja de esta tcnica es que por ser basada en
la
actividad peroxidasa y esta estar presente en muchas
sustancias tales como ciertos metales, jugo de fruta,
detergentes y productos de limpieza en general, es comn
obtener reacciones inespecficas.

aplicar la prueba
Antes de la aplicacin de la prueba se debe realizar un
ensayo previo con controles positivos, falsos positivos y
negativos, para evaluar la efectividad del reactivo.
El reactivo de Luminol muestra una alta sensibilidad ante
la presencia de sangre, se observan reacciones positivas
en muestras diluidas, hasta diez mil veces y capaz de
detectar manchas de 25 aos de antigedad.
Varios
estudios
han
demostrado que el luminol
provoca la prdida de
diversos
marcadores
genticos.
Debido a que el luminol es
hidrosoluble, tambin puede
diluir una muestra ya diluda.
Esto coloca al indicio por
debajo de los lmites de
deteccin.
Fotografa de la prueba luminol

La fotografa en la Prueba del Luminol es de suma
importancia para la investigacin criminalstica, ya que ella
muestra toda la labor realizada por el equipo de aplicacin,
como a la vez permitir al juzgador en el proceso del debate,
como se manifestaron las manchas de sangre, su dinmica,
arrastre, etc.
Fotografa de la prueba luminol

Fijar fotogrficamente escenarios reactivados con Luminol,
depende de varios factores:
ISO de la pelcula
Tiempo de exposicin
Duracin de la luminiscencia del qumico
Intensidad de la luminiscencia
Tomas en total oscuridad
Para obtener imgenes positivas de la escena se deben
de controlar varios factores, sujetos algunos a variaciones
como el tiempo de exposicin, espacio y luz.
Comparacin con
reactivos para pruebas
de
campo
de
sangre
- Fluoresceina
- Bluestar
- Luminol
Pruebas comparativas
Sangre lavada y repintada
FLUORESCEINA BLUESTAR
Tiempo de exposicin: 20 s
LUMINOL
Tiempo de exposicin: 1 m 15 s
Sangre lavada y limpiada

del piso
FLUORESCEINA
BLUESTAR
LUMINOL
Sangre lavada en alfombra
FLUORESCEIN
BLUESTAR
LUMINOL
Sangre lavada con

detergente para ropa
FLUORESCEINA
BLUESTAR
LUMINOL
Gracias

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El lugar de los hechos

Identificacin del individuo de quien procede

Cada nuevo individuo es nico en su informacin gentica, de

Glbulos Blancos (Leucocitos):

Contornos muy ntidos por penetrar la sangre en los tejidos.

Reconstruccin de los hechos.

Intensidad de las lesiones.

Problemas forenses que plantea

Hidracida del cido Quimioluminiscencia

Hexagon Obti Test (Banda Azul):

Sistemas tendentes a la determinacin

Posteriormente, en el ao de 1927 otro investigador de

Posteriormente, en el ao de 1927 otro investigador de

En el ao de 1937 se report la primera aplicacin forense

En el ao de 1939, los investigadores Moody y Proescher,

Los investigadores Lytle y Hedgecock, en el ao de 1978

En el ao de 1939, los investigadores Moody y Proescher,

Reactivos utilizados para la prueba

Preparacin del reactivo

Preparacin del reactivo

Cmo se aplica la prueba

Cmo se aplica la prueba

Cuidados que se deben tener al

Procurar en la medida de lo posible no entrar en contacto

Cuidados que se deben tener al

Esta sustancia no es corrosiva y no mancha

Se ha observado que no tiene efectos destructivos e

Cuidados que se deben tener al

Fotografa de la prueba luminol

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Sangre lavada y limpiada

Sangre lavada en alfombra

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