Universidad Nacional Experimental

de los Llanos Occidentales Ezequiel

Zamora
UNELLEZ

Programa de Ciencias del Agro y el Mar

Sub-Programa: Medicina Veterinaria

Unidad Curricular: Histologa y Embriologa Veterinaria

Unidad II

HISTOTECNIA

Mayo 2016

Los seres vivos

(animal o vegetal)
estn constituidos
por clulas

NIVELES DE ORGANIZACIN

1 CLULAS

2 TEJIDOS

3 RGANOS

HISTOLOGA

ANATOMA MICROSCPICA
Estudio de las clulas y tejidos del cuerpo animal

ANATOMA
MACROSCPICA
Estudio del animal mediante la
observacin directa y la diseccin

ANATOMA
MICROSCPICA
Estudio de clulas y tejidos del
animal mediante la observacin a
travs del microscopio

Histotecnia
Se denomina HISTOTECNIA O TCNICA
HISTOLGICA
al
conjunto
de
procedimientos aplicados a un tejido, sea
animal o vegetal, con la finalidad de analizar
sus componentes morfolgicos a travs de
los microscopios fotnicos y electrnicos.

Estudio Microscpico de Clulas y Tejidos

Mtodos Directos
Mtodos In vivo
Se estudia la clula o el organismo vivo
conservando su estado natural.
Ejemplo: Estudio de protozoarios

Mtodos In vitro
Se estudia la clula viva, pero colocada en
condiciones artificiales. El mtodo in vitro ms
usado es el CULTIVO DE CLULAS

Estudio Microscpico de Clulas y Tejidos

Mtodos Indirectos
La mayora de los conocimientos logrados sobre
la estructura microscpica de las clulas y tejidos de
un animal resultan del estudio de tejidos que provienen
de un cadver o de un animal vivo. En ambos casos,
la muestra es sometida a un procedimiento histolgico
permanente para hacer el estudio

NECROPSIA

BIOPSIA

Estudio Microscpico
Mtodos Histolgicos Indirectos
Tienen por finalidad preparar clulas, tejidos y rganos
procedentes de individuos en los que los procesos
vitales se han detenido

SE REQUIERE PRESERVAR LA ESTRUCTURA

CELULAR Y EVITAR LA
DESCOMPOSICIN POSTMORTEM

PREPARACIN
DE
TEJIDOS MUERTOS

Tcnicas de Preparacin
de Tejidos Muertos
1 Inclusin en Parafina
2

Cortes por Congelacin

Inclusin en Celoidina

PREPARACIN DE TEJIDOS MUERTOS

Tcnica de la Parafina

PREPARACIN DE TEJIDOS MUERTOS

Tcnica de la Parafina
La parafina es un hidrocarburo
del tipo de los alcanos. A
temperatura ambiente la
parafina es un slido, de
color blanco. Su punto de fusin
est entre los 47 C y 64 C;
es insoluble en agua, pero se
disuelve con el ter, el benceno
o el xileno.

Tcnica de la Parafina
Paso 1

Obtencin de la Muestra

Mediante la biopsia

(del griego bios = vida y opsis = visin),

Consiste en la toma de un fragmento de tejido u rgano

de un ser vivo.

Mediante la Necropsia
Las muestras se obtienen de cadveres.
En este caso es recomendable que los tejidos y rganos
se obtengan inmediatamente despus de producida la
muerte.

Obtencin de la Muestra

Tcnica de la Parafina
Paso 2

FIJACIN

La fijacin tiene por objeto matar las clulas y conservarlas,

evitando el crecimiento de microrganismos y
la autlisis postmortem

Se llaman fijadores a
las sustancias qumicas
o a los agentes fsicos
que se utilizan para tal
fin.

Paso 2

FIJACIN

Clasificacin de los Fijadores

Fijadores Fsicos

Fro
Congelacin

Fijadores Simples

Fijadores Qumicos
Fijadores Compuestos

Paso 2

FIJACIN

Ejemplos de Fijadores Qumicos

FIJADORES SIMPLES:

Formol al 10%
Alcohol etlico absoluto o de 96%
Alcohol metlico
cido smico al 1 2%,
Bicromato de potasio al 3-5%.

FIJADORES COMPUESTOS:
Lquido de Bouin (cido pcrico, formol y cido actico)
Lquido de Zenker (bicromato de potasio, cloruro de mercurio y cido actico)
Lquido de Helly (bicromato de potasio, cloruro de mercurio y formol)

Tcnica de la Parafina
Pasos
3-4-5
3

Deshidratacin, Aclaracin, Inclusin en Parafina

Deshidratacin:
Significa extraer o remover el agua de los tejidos fijados.
La deshidratacin debe ser completa, para facilitar la penetracin
del solvente de la parafina.
Los deshidratantes ms usados son el alcohol etlico y el alcohol isoproplico;
Se emplean en concentraciones crecientes: 70, 80, 90, 100

Aclaracin (o Diafanizacin):
Las muestras deshidratadas se encuentran totalmente embebidas en
alcohol absoluto, pero la parafina tampoco es soluble en alcohol por !o que es
necesario reemplazarlo por una sustancia que sea capaz, al mismo tiempo, de
mezclarse con el alcohol y disolver la parafina.
Estas sustancias se denominan Lquidos Aclarantes. Los de uso ms
frecuente son: el xileno, el tolueno, el benceno y el cloroformo.

Inclusin en Parafina

Deshidratacin, Aclaracin, Inclusin en Parafina

Paso 6

Tcnica de la Parafina

Inclusin y Formacin del Bloque de Parafina

El bloque de parafina se efecta empleando una serie de moldes de diversos
materiales, as como de diferentes reas y profundidades. Pueden ser de papel,
metal o plstico.
El molde elegido se llena con parafina caliente y, con una pinza. se toma la
muestra de tejido y se sumerge en el fondo del molde, donde la parafina ha
empezado a solidificarse y se le aplica una ligera presin.

Tcnica de la Parafina

Paso 6

Inclusin y Formacin del Bloque de Parafina

Llenado total del molde con parafina

lquida.

Bloques definitivos

Tcnica de la Parafina
Paso 7

MICROTOMIA U OBTENCIN DE LOS CORTES

Los cortes del tejido se obtienen utilizando instrumentos

mecnicos, denominados "micrtomos, los cuales permiten
seccionar el bloque de parafina en cortes delgados
y de grosor uniforme.

Tcnica de la Parafina
Paso 8

EXTENSIN Y ADHESIN DE LOS CORTES AL PORTAOBJETO

Los cortes obtenidos por medio de la microtoma, aislados o en forma de

cintas, generalmente se presentan arrugados, por lo que es necesario
extenderlos sobre agua caliente antes de adherirlos a las lminas portaobjetos.

Paso 9

Tcnica de la Parafina
ELIMINACIN DE LA PARAFINA EXTERNA CON CALOR SECO

Proceso de Coloracin
La coloracin o tincin consiste en la aplicacin de color a una
clula o tejido, utilizando una sustancia colorante

Colorante
Sustancia con color propio que puede ser cedido o transferido
a otros cuerpos

Bases Qumicas de la Coloracin

COLORANTE

Compuestos Qumicos

Radical
cido

Radical
Bsico

citoplasm
a
ncle
o

molculas
cidas

molculas
bsicas

Bases Qumicas de la Coloracin

Componentes
cidos y
Bsicos
del colorante

Enlaces electrostticos

Radicales
Bsicos y
cidos de
la clula
o los tejidos

Clasificacin de los Colorantes

Por su Origen
Colorantes Naturales:
1. Animal: El carmn (se extrae de un insecto)
2. Vegetal: La Hematoxilina (se extrae del campeche)
La orceina (se extrae de un tipo de liquen)

Colorantes Artificiales (o
sintticos):

Son derivados de la anilina, obtenida a su vez de la

destilacin de la hulla.
El ms usado de estos colorantes es la Eosina

Clasificacin de los Colorantes

Por el radical con color

Slo el radical
bsico tiene color

Radical
bsico

COLORANTE BSICO

Radical
cido

Slo el radical
cido tiene color

Ambos radicales
tienen color

Radical
bsico

COLORANTE CIDO

Radical
cido

Radical
bsico
Radical
cido

COLORANTE NEUTRO

Clasificacin de los Colorantes

Por los componentes celulares que colorea

Colorantes
citoplasmticos

Colorantes
nucleares

Ahora Ud. est en

capacidad de definir
los siguientes
trminos:
Acidofilia
Basofilia
Estructura acidfila
Estructura basfila

COLORANTES Y SUS FUNDAMENTOS

DE ACCIN.
Como la mayora de las estructuras
celulares y tisulares son transparentes, es
necesario emplear colorantes para su
visualizacin.
El modo de actuar estos colorantes puedes
ser por:

A.- Por afinidad qumica elemental: Colorante

cido se une a estructura bsica, y viceversa.
De aqu se derivan los conceptos de: Hematoxilina
(colorante bsico) se une a ncleos - DNA,
(estructura cida), y la eosina (colorante cido), se
une al citoplasma, (estructura bsica.
Basfilia = apetente por colorante bsico, la
hematoxilina Acidofilia o eosinfilia = apetente por
colorante acido, la eosina.

B.- Por difusin simple del colorante: Se trata de

colocar un colorante en un medio en el que no se
difunda bien, de modo que al enfrentarlo con una
pieza donde existan sustancias con mayor
apetencia por el colorante, este abandone el
medio para pasar a dicha sustancia. El Sudan III o
rojo, difunde muy bien en las grasas y mal en
alcohol, por eso se emplea una solucin
alcoholoca de sudan para teir las grasas.

C.- Por metacromasia del colorante: colorantes en

suspensin (con las molculas desordenadas),
poseen un color, que cambia cuando las
molculas se ordenan. El Azul de Toluidina en
suspensin es azul, y cuando se enfrenta a
estructuras ricas en lugares aninicos (heparina,
condroitin sulfatos, etc,) toman color rojo.
D.- Por reaccin con grupos quimicos especificos
reaccion del PAS. El acido perydico oxida los
grupos hidroxilo 1-2 glicol.

E.- Desenmascarar reacciones enzimticas

(enzimohistoqumica): La actividad fosfatasa
cida de los lisosomas, se puede poner de
manifiesto haciendole reaccionar con
glicerofosfato sdico, el fosfato luego se enfrenta
al nitrato de plomo dando sulfuro de plomo (color
parduzco).
F.- Histoautorradiografa: Determinadas sustancias
se pueden marcar con un istopo radiactivo.

Tipos de Coloracin
Existen una serie de procedimientos a travs de los
cuales clulas y tejidos son coloreados por las
sustancias colorantes

Coloracin Ortocromtica
Los tejidos adquieren el mismo color del colorante empleado.

Coloracin Metacromtica
Una sustancia o un componente celular se tie con un color diferente al del
colorante empleado.

Impregnacin
Involucra la deposicin de sustancias metlicas (cobre, plata, oro) en la
superficie de las clulas y tejidos.

Coloracin Hematoxilina-Eosina
La coloracin con hematoxilina - eosina est considerada
como la tcnica de tincin de uso ms frecuente en el estudio
de clulas y tejidos a travs del microscopio ptico
Consiste en la tincin de los ncleos con hematoxilina.
Los ncleos se colorean de azul, azul morado, violeta,
pardo oscuro o negro.
A continuacin se colorea el citoplasma y material
extracelular utilizando la eosina, que les confiere diversos
grados de color desde el rosado al rojo.

Coloracin Hematoxilina-Eosina
Paso 1

Hidratacin del Tejido

Paso 2

Coloracin con Hematoxilina

Coloracin Hematoxilina-Eosina
Paso 3

Lavado con agua

Paso 4

Coloracin con Eosina

Paso 5

Deshidratacin

Paso 6

Aclaracin (diafanizacin)

Paso 7

Montaje definitivo

Coloracin H-E

Basofilia y Acidfilia en una Coloracin

Hematoxilina-Eosina

Basofilia

Acidofilia

Tcnicas

Histolgic
a

s Especia
les

Coloracin Vital
Es una de las tcnicas empleadas para el estudio de clulas y tejidos vivos.
Se usan colorantes inocuos. Existen dos tipos de coloracin vital:
Coloracin intravital. El colorante se administra al animal vivo.
Coloracin supravital. El colorante se administra in vitro a una
porcin de un rgano extrada de un animal vivo,

Histoqumica

Coloraciones
Especficas

Tcnica para demostrar sustancias qumicas en clulas y tejidos, por medio

de reacciones qumicas.
Subtipos: Histoqumica enzimtica, inmunohistoqumica.

Coloraciones Especiales
TCNICA DEL CIDO
PERYDICO de SCHIFF (PAS)
Para Mucopolisacridos

IMPREGNACIN ARGNTICA
PARA FIBRAS RETICULARES

Coloraciones Especiales
TRICRMICA DE MASSON
PARA COLGENO

TRICRMICA DE MASSON
PARA TEJIDO MUSCULAR

Coloraciones Especiales

TCNICA DE VAN GIESON

PARA FIBRAS RETICULARES

FIN