Chagatest

Bioqumica Aplicada,Tecnologa Mdica, Agosto 2015.
Facultad de Medicina - Universidad de Chile.
Chagatest
ELISA recombinante v.4.0
Ensayo inmunoenzimtico (ELISA) para la deteccin de anticuerpos anti-
Trypanosoma cruzi
Carlos Araya Guerra - Fabin Briceo Molina - Valeria Campos Valenzuela - Valentina Carrillo Contreras
Objetivos:
Identificar los principales caracteres del padecimiento, su epidemiologa e
importancia clnica.
Saber los fundamentos del mtodo analtico.
Conocer la implementacin, el personal que se necesita para efectuar el mtodo

y las normas de Bioseguridad.
Tomar en cuenta los puntos de validacin y el control de calidad.

Enfermedad de Chagas
Infeccin parasitaria provocada por el protozoo
Trypanosoma cruzi , siendo su vector biolgico la
vinchuca.
Su diagnstico depende del estadio de la enfermedad:

Aguda o Crnica.
Mecanismo transmisin: vectorial, transplacentario,

transfusional, trasplante de rganos, etc.
Sntomas Comunes: Cardiaco y Digestivo (Megacolon,

Megaesfago).
Imagen: Ciclo de transmisin del Chagas.

Epidemiologa e
importancia clnica.
Principal rea endmica en
nuestro pas.
A contar del ao 1996 se hizo

obligatorio el tamizaje de los
donantes en las regiones
endmicas de Chile,
extendindose en el ao 2008
a todo el pas.
Nueva circular de vigilancia

epidemiolgica del ao 2011,
por excesiva alza en 2009.
Fuente: beatchagas.org
Ayuno de 8 horas.
Fase preanaltica: Evitar hemlisis.
Nunca congelar la muestra.
Muestra: Sangre
Tipo de tubo: Tubo Tapa lila (EDTA)
Volumen mnimo necesario : Adultos 4mL, RN y Lactantes

2mL
Transporte: Tubos tapados en posicin vertical,en un

contenedor o gradilla a temperatura ambiente. Evitar
agitacin
Modo de accin: Remueve el calcio de
la muestra mediante formacin de Tiempo de transporte: Mximo 4 horas desde la toma de
sales. muestra.
Fundamento del mtodo
Chagatest ELISA recombinante v 4.0.
Fuente : biomerieux-diagnostics.com
Peroxidasa
La enzima peroxidasa, utiliza TMB como un donante de hidrgeno en la reduccin de

perxido de hidrgeno a H2O . En esta reaccin TMB se oxida a TMB-diimina.
El TMB diimina solucin color azul (longitud de onda de 650 nm).
La reaccin se detiene con cido sulfrico solucin amarillo (longitud de onda de
fuente: b.se-todo.com
450 nm).
Fuente: en.wikipedia.org
Implementacin
Infraestructura: Laboratorio nivel 2 de bioseguridad
Temperatura ambiente de 25C.
refrigerador
personal requerido:
Secretaria
Enfermero/ Tcnico / tecnlogo
Tecnlogo Mdico
Tcnico en laboratorio clnico

Implementacin
Reactivos provistos :
Policubeta sensibilizada
Diluyente de Muestra
Conjugado Concentrado
Diluyente de conjugado
Revelador
Stopper
Buffer de lavado Concentrado

Implementacin
Equipo (No provisto):
Micropipetas multicanal (p100 y p20)
Sistema de lavado de policubetas
Espectrofotmetro para lectura de policubetas (luz

visible)
Estufa (37C)
Insumos (No provisto):
Tips descartables
Medidas de Bioseguridad:
Individuales: Colectivas:
Preparacin de los reactivos
Buffer de lavado: diluir una parte del Buffer de Lavado
Concentrado (25x) en 24 partes de agua destilada o
desionizada.( Considerar 300 uL/pocillo/lavado )
Conjugado:
Procedimiento del ensayo
Parmetros de validacin
Precisin
Intra-ensayo Total
Sensibilidad Especificidad Media
(D.O)
D.S. C.V. D.S. C.V.
14/14 1188/1192
14/14 466/474 Muestra 1 0,360 0,029 8,07% 0,043 11,90%
16/16 475/477 Muestra 2 0,550 0,036 6,55% 0,055 10,01%
100/100 483/491 Muestra 3 0,870 0,063 7,23% 0,093 10,69%
115/116 - Control (+) 1,750 0,085 4,83% 0,138 7,89%
Control (-) 0,028 0,003 10,35% 0,004 14,24%

Criterios de validacin del ensayo
1.- El promedio de las densidades pticas (D.O.) de los
Controles Negativos deben ser menor o igual a 0,100
2.- Eliminar cualquier Control Negativo con D.O. mayor a

0,100.
3.- Si se ha eliminado algn Control Negativo, volver a calcular

el promedio de los Controles Negativos
4.- El promedio de las D.O. de los Controles Positivos debe ser

mayor o igual a 1,300.
5.- La diferencia entre el promedio de las D.O. de los

Controles Positivos y Controles Negativos debe ser mayor o
igual a 1,200
Interpretacin de los resultados
Con instrumental ptico : muestras reactivas

se consideran aquellas con absorbancias
menores al Cut-off.
Cut-off = CN + 0,200 Reactiva
Por interpretacin visual : muestras

inicialmente reactivas son repetidas por
duplicado, las cuales viran a color amarillo.
No reactiva
Fase post analtica:
La confirmacin se lleva a cabo en
laboratorios de parasitologa del
ISP o en Laboratorios
Confirmatorios Reconocidos.
Control de calidad
control de calidad interno: Se utilizan

muestras positivas obtenidas en la rutina
de trabajo.
control de calidad de externo.

Conclusin
Para la implementacin de este mtodo en un laboratorio ser necesario
considerar ciertos requerimientos bsicos como materiales y equipos
sofisticados.
Adems se demuestra la
importancia de la realizacin del
tamizaje en bancos de sangre para
la vigilancia de enfermedades como
el mal de Chagas, procedimiento en
el cual este kit es de gran utilidad.
Bibliografa
Chagatest ELISA recombinante v.4.0, Wiener lab, 2000. (Inserto entregado)
Manual de Toma de muestra, Unidad de Laboratorio Clnico 2013, Complejo
Asistencial Dr. Stero del Ro
Manual de Laboratorio dirigido a servicios clnicos del Hospital Dr. Hernn

Henrquez Aravena de Temuco, 2012.
In-house ELISA method to analyze anti-Trypanosoma cruzi IgG reactivity for di

erential diagnosis and evaluation of Chagas disease morbidity , Lilian Da Silva,
Revista de sociedade Brasileira de Medicina Tropical
Manual de toma de muestras General Laboratorio Clnico, Hospital Regional de
Rancagua, 2014.
Gracias
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Saber los fundamentos del mtodo analtico.

Conocer la implementacin, el personal que se necesita para efectuar el mtodo

Tomar en cuenta los puntos de validacin y el control de calidad.

Su diagnstico depende del estadio de la enfermedad:

Mecanismo transmisin: vectorial, transplacentario,

Sntomas Comunes: Cardiaco y Digestivo (Megacolon,

Imagen: Ciclo de transmisin del Chagas.

A contar del ao 1996 se hizo

Nueva circular de vigilancia

Nunca congelar la muestra.

Tipo de tubo: Tubo Tapa lila (EDTA)

Volumen mnimo necesario : Adultos 4mL, RN y Lactantes

Transporte: Tubos tapados en posicin vertical,en un

La enzima peroxidasa, utiliza TMB como un donante de hidrgeno en la reduccin de

Temperatura ambiente de 25C.

Enfermero/ Tcnico / tecnlogo

Tcnico en laboratorio clnico

Buffer de lavado Concentrado

Micropipetas multicanal (p100 y p20)

Sistema de lavado de policubetas

Espectrofotmetro para lectura de policubetas (luz

Insumos (No provisto):

14/14 466/474 Muestra 1 0,360 0,029 8,07% 0,043 11,90%

16/16 475/477 Muestra 2 0,550 0,036 6,55% 0,055 10,01%

100/100 483/491 Muestra 3 0,870 0,063 7,23% 0,093 10,69%

115/116 - Control (+) 1,750 0,085 4,83% 0,138 7,89%

Control (-) 0,028 0,003 10,35% 0,004 14,24%

2.- Eliminar cualquier Control Negativo con D.O. mayor a

3.- Si se ha eliminado algn Control Negativo, volver a calcular

4.- El promedio de las D.O. de los Controles Positivos debe ser

5.- La diferencia entre el promedio de las D.O. de los

Con instrumental ptico : muestras reactivas

Cut-off = CN + 0,200 Reactiva

Por interpretacin visual : muestras

control de calidad interno: Se utilizan

control de calidad de externo.

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