Tema 14: medios de

Extracción de microalgas

Expositor: Mg. Juan Montalico Pongo

Email: ejmontalico@gmail.com
 INTRODUCCION

Las investigaciones se enfocan en la

composición de micro algas y como
indicadores de masas de agua. Las
micro algas son organismos
unicelulares o pluricelulares que tienen
la capacidad de realizar todas las
funciones vitales de forma
independiente mediante la
fotosíntesis, sirven de alimentos para
otros organismos y pueden servir como
bioindicadores de la calidad de agua.
Actualmente, entidades estatales como privadas intentan seguir
métodos establecidos o protocolos de otros países (APHA, EPA,
artículos científicos, etc.) para realizar evaluaciones de distinta
índole en aguas continentales. Sin embargo, una gran
proporción de estos estudios raramente emplea los métodos
adecuados y, mucho menos, siguen con precisión los criterios
internacionales, basándose incluso en criterios particulares.
También se está realizando las investigaciones en torno a la
producción de combustibles a partir de fuentes renovables, ha
aumentado exponencialmente en los últimos años.
 OBJETIVOS

 Dar a conocer los métodos de colecta, identificación y

análisis estandarizados para conseguir que los
muestreos de microalgas.
 Describir los métodos específicos para la colecta,
identificación y análisis de cada comunidad acuática.
 ASPECTOS GENERALES DE LAS
MICROALGAS

Las microalgas son un conjunto

heterogéneo de microorganismos
MICROALGAS

fotosintéticos unicelulares procariotas

(cianobacterias) y eucariotas se les considera responsables de la
(diatomeas y algas verdes), que se producción del 50% del oxígeno y de la
localizan en hábitats diversos tales como fijación del 50% del carbono en el
aguas marinas, dulces, salobres, planeta
residuales o en el suelo, bajo un amplio
rango de temperaturas, pH y
disponibilidad de nutrientes

Las microalgas son los productores

biológicos de lípidos más eficientes del
planeta y son una fuente natural de un
enorme grupo de compuestos de alto
valor, incluyendo una diversidad de
pigmentos.
El uso de las microalgas como fuente
bioenergética es prometedor debido
a:
Los tiempos de duplicación de biomasa
durante la fase de crecimiento exponencial
son relativamente bajos (3,5 horas),
manteniendo un contenido de lípidos hasta
del 80% por biomasa seca

El contenido de lípidos puede variarse

dependiendo de la composición del medio
de crecimiento

Crecen tanto en agua dulce como salada y

no necesitan establecerse en tierras fértiles
 CLASIFICACIÓN DE LAS
MICROALGAS
Tradicionalmente, las algas han sido
clasificadas según su color -según sea el
pigmento fotosintético que posean en
los denominados cromoplastos. Así,
pueden ser verdes, si tienen abundante
clorofila (Chlorophyta), pardas o rojas, si
predominan otros pigmentos como la
ficoxantina de color pardo-amarillenta
o la ficoeritrina de color rojo
(Rhodophyta), o verdeazuladas
(Cyanophyta)- y esta característica
sigue siendo de cierta importancia.
Determinación de los actuales sistemas de clasificación
de las algas los que se basan en los siguientes criterios
principales:, y

la naturaleza
tipo de química de los componentes de
pigmentos productos de la pared celular
almacenamiento

Así mismo se toma en cuenta, como criterios adicionales, los

siguientes caracteres citológicos y morfológicos:

el esquema y
la presencia de el proceso de
la estructura la trayectoria
células división
de los flagelos de la división
flageladas citoplasmática
nuclear
 HÁBITAT DE LAS MICROALGAS

Sobre la distribución Hay algas en todos Desde las algas que

a
a

de las algas puede los ambientes crecen en la nieve

afirmarse que son acuáticos donde de algunas
cosmopolitas, es existe luz, ya sea de montañas de
decir viven en todos agua dulce, marina América a las que
los climas, se o salobre; sin viven en las
encuentran embargo, también asociaciones de
adaptadas a las se pueden líquenes en las rocas
más diversas encontrar en casi desnudas, desde
situaciones cualquier otro algas unicelulares en
ambientales. entorno sobre la el suelo del desierto
tierra a las que viven en
fuentes termales.

Los mares y océanos contienen enormes cantidades de algas planctónicas,

estimándose que el 90% de la fotosíntesis total de la tierra es realizada por
estos organismos acuáticos.
 IMPORTANCIA DE LAS
MICROALGAS
Como ya se mencionó las microalgas son organismos muy diversos en
forma, tamaño y capacidad de adaptación a distintos ambientes,
por lo que algunas especies pueden modificar su metabolismo para
"sobreproducir" algunos compuestos celulares.

Es aquí donde reside la importancia en la investigación de estos

organismos, de modo que se pueda aprovechar adecuadamente el
enorme potencial que presentan, mediante el cultivo y producción
masiva orientada a la obtención, en gran escala, de un determinado
compuesto.

Una de las grandes ventajas del uso de cultivos de microalgas con

respecto al uso de vegetales superiores (maíz, trigo, caña), es que en
las microalgas los lípidos son sintetizados en toda la célula, en tanto
que en plantas superiores sólo se producen en una parte de ésta.

Por lo que una gran cantidad de energía fisiológica se destina al

mantenimiento de la planta y no a la síntesis del compuesto que los
investigadores están buscando: lípidos, carbohidratos, pigmentos y
vitaminas.
 COMPOSICIÓN QUÍMICA

Las algas están

compuestas,
principalmente,
por proteínas,
carbohidratos y
lípidos; así como
también por una
gran variedad de
vitaminas y
elementos (yodo,
potasio, hierro,
magnesio, calcio,
etc.) en diferentes
proporciones
dependiendo de
la cepa que se
esté analizando
APROVECHAMIENTO
TRADICIONAL
La producción comercial a gran escala de biomasa de
microalgas se limita a Dunaliella, Haematococcus, Arthrospira, y
Chlorella, que se cultivan en estanques abiertos en fincas
alrededor del mundo. Se puede mencionar los siguientes usos
comerciales de las microalgas:

Suplementos En
para alimentación
rehabilitación animal
física

Para estudios
Infinidades de
de
usos mas
investigación
CONCENTRACIÓN DE LA
BIOMASA:
La técnica de recolección de microalgas depende principalmente
de la densidad celular (típicamente baja y dispersa entre 0.3–5
g/1), del tamaño de la célula (típicamente entre 2–40 mm) y del
valor de los productos (Brennan & Owende, 2010). A continuación
se describen los métodos más utilizados para la concentración de
microalgas:
 •La centrifugación es un proceso rápido y eficaz, aunque de gran consumo energético, la
recuperación de la biomasa depende de las características de sedimentación de las
células
Centrifugación:

•La sedimentación por gravedad es la técnica más común para el aprovechamiento de

la biomasa de algas, especialmente en el tratamiento de aguas residuales, debido a los
grandes volúmenes tratados y al bajo valor de la biomasa
•La sedimentación por gravedad depende principalmente de la densidad y el tamaño
Floculación y de las microalgas, por esto, el método es más adecuado para microalgas grandes
sedimentación (tamaño> 70 micras)
por gravedad

•La biomasa cosechada es un producto perecedero y debe tratarse con rapidez después
de la cosecha. La deshidratación o secado se suele utilizar para ampliar la viabilidad en
función del producto final requerido. Los métodos que han sido utilizados son el secado al
sol, el secado por aspersión, el tambor de secado, el secado en lecho fluido, la
Deshidratación liofilización, entre otros
de la biomasa:
 Microondas: rompen células por el choque inducido con ondas

Destrucción celular:
de alta frecuencia, afectando la polaridad de las moléculas que
componen la estructura de la microalga creando por ejemplo,
fricción entre los lípidos y las proteínas, e incluso generando más
calor, lo cual hace que se debilite la pared celular

Ultrasonido: La técnica de ultrasonido consiste en la interacción

de ondas acústicas, a una frecuencia determinada con células
microbianas, como las microalgas. Estas ondas rompen la pared
celular debido a un efecto de cavitación.

Destrucción mecánica: como herramienta de extracción de

componentes de microalgas, abarca varias clases de dispositivos
mecánicos como: homogenizadores celulares, molinos de bolas
y sistemas de prensado.

Autoclave:La destrucción celular por autoclave, se realiza a

presión y a temperaturas altas.

Choque osmótico:El choque osmótico consiste en una reducción

repentina de la presión osmótica, haciendo que por ósmosis, el
agua ingrese repentinamente a la célula, incrementando la
presión interna para causar la ruptura.
 • El método ideal de extracción de aceite de microalgas para la producción de
biodiesel, no sólo debería ser específico para minimizar la co-extracción de
materiales lipídicos, sino también selectivo, hacia mono, di y triglicéridos.
Extracción del aceite:

• Ha sido utilizada tradicionalmente para obtener lípidos de fuentes animales y

vegetales, para el caso de las microalgas, el solvente es por lo general
adicionado a la biomasa seca, aunque en algunos casos es utilizado en biomasa
Extracción con con cierta cantidad de agua para disminuir los costos globales del proceso, pero
solventes químicos se disminuye también la eficiencia de la extracción.

• utilizaron CO2 supercrítico para extraer, por ejemplo, di-olefinas de células de

Botrycoccus braunii. Este organismo puede almacenar cantidades altas de
Extracción mediante
hidrocarburos de cadena larga (25 a 31 átomos de carbono), que puede ser
fluidos sub- y utilizado como sustituto de la parafina y ceras naturales.
supercríticos:

• Se degrada la pared celular de las microalgas mediante el empleo de enzimas.

Extracción
enzimática:
MÉTODOS DE COLECTA EN
ECOSISTEMAS DE AGUAS
CONTINENTALES DEL PERÚ
Es una comunidad acuática
constituida por organismos
vegetales fotosintéticos
(fitoplancton), representados
principalmente por microalgas, las
cuales forman parte de varios
grupos (algas verdes, rojas,
diatomeas, fito flagelados,
cianobacterias). La mayoría vive sin
movimiento, en la zona fótica,
suspendidos y a merced de los
movimientos del agua.
Metodología de colecta

Equipos y materiales

De protección personal
 Botas.
 Guantes de látex.
 Chaleco salvavidas (cuando el muestreo se hace
desde una embarcación)
Para la colecta de muestras
 GPS.
 Ficha de campo (anexo 1).
 Lápices y marcadores de tinta indeleble.
 Etiquetas de papel resistente al agua.
 Frascos de 50, 100 y 200 ml para las
muestras.
 Botellas de vidrio color ámbar (150 ml).
 Viales de vidrio o plástico con tapa
hermética (fitoplancton de red).
 Botellas de 2 litros de capacidad (muestras
de agua para análisis químico).
 Botella hidrográfica (Van Dorn, para
muestras verticales, clorofila “a”)
Para la colecta de muestras
 Baldes de 5 litros de capacidad.
 Red de plancton (nytal de 10 µ, 20 µ, 35 µ,
de abertura de poro) para muestras de
arrastre horizontal o vertical).
 Disco de Secchi (útil para determinar la
transparencia del agua y la profundidad
de iluminación).
 Equipo multiparámetro portátil (análisis
físico-químicos in situ: temperatura, pH,
conductividad eléctrica).
Reactivos para la fijación de muestras
 Solución de formol al 4-5 %.
 Lugol (para periodos de conservación
cortos).
 M3: mezcla de formol, yoduro de potasio y
ácido acético glacial.
Técnicas de colecta
En la ficha de campo incluir:
 Localización del área de muestreo fijando las
coordenadas (GPS).
 Descripción de la morfología y morfometría del lago
(ancho, largo, tipo de orilla, profundidad promedio).
 Observación y descripción de las entradas y salidas de
agua, vertidos puntuales, estado trófico del ecosistema
y cobertura vegetal (macrófitos).
 Fijación de estaciones de muestreo, cuyo número
dependerá del propósito del estudio. Deberán estar
ubicadas en las orillas y en la parte central del
ambiente acuático.
 Previo a la colecta de las muestras, se deberán medir algunos
parámetros físico-químicos (transparencia, temperatura,
conductividad eléctrica y pH), pues constituyen datos
importantes que servirán en la interpretación de resultados.
COLECTA DE MUESTRAS
CUANTITATIVAS
a. Muestras de superficie
Serán tomadas directamente con una botella de 150 ml de
capacidad, de preferencia color ámbar, a 20-30 cm de
profundidad. Llenar el frasco hasta el 90% de su capacidad.
b. Muestras estratificadas a diferentes profundidades
Se empleará una botella hidrográfica (Van Dorn) de volumen
conocido. Pueden integrarse varias muestras, siempre y
cuando tengan el mismo volumen.
c. Muestras concentradas
Mediante filtrado de un volumen conocido de agua a través
de la red de plancton (Branco, 1978). La cantidad de agua
filtrada dependerá del estado trófico del ecosistema:
Oligotrófico (30 - 40 litros) y meso a eutrófico (10 - 20 litros).
Este método se utiliza también para propósitos cualitativos.Se
puede estandarizar el método de modo, que los resultados
sean semi-cuantitativos (en porcentaje de abundancia).
COLECTA DE MUESTRAS
CUALITATIVAS PARA ESTUDIOS
TAXONÓMICOS
Para este propósito es importante fijar varias estaciones, ya que
el muestreo debe ser exhaustivo, tratando de abarcar la mayor
extensión posible del lago, en orillas y zona abierta del
ecosistema. Los métodos serán:
 Por arrastre horizontal y vertical, con el empleo de una red de
plancton y desde una embarcación, hasta conseguir un
filtrado visible.
 También desde la orilla efectuando lances repetidos.
Filtrando volúmenes conocidos de agua a través de la red de
plancton
NÚMERO DE MUESTRAS

La colecta de muestras tanto cualitativas como cuantitativas

deberá tener réplicas. Cuanto mayor sea el número de
muestras por estación, será mejor (entre 3 a 6).

PERIODOS DE MUESTREO

 Estará sujeto a la finalidad del estudio.

 Para estudios taxonómicos y líneas base se recomienda
colectar dos veces por año, coincidentes con las épocas
lluviosa y seca.
 Para estudios de productividad primaria, dos veces por
año.
 Para monitoreo, la frecuencia puede variar desde
muestreos mensuales (en el caso de que se haga un
seguimiento de vertidos al ecosistema), trimestrales, dos
veces al año y anuales.
Preservación y etiquetado
Muestras frescas o mantenidas en vivo
 Son de gran utilidad para la observación e identificación
de fitoflagelados.
 Las muestras colectadas deberán ser mantenidas en
refrigeración a 4 °C, en lugares sin luz y en frascos color
ámbar. Conservarlas solo por espacio de 12 horas.
Muestras preservadas
 Los preservantes más usados son solución de formol al 4-
5%, así como la solución de Lugol al 1% (0,5 ml/100 ml de
muestra).
 Una vez colectada la muestra, ésta se vierte a un frasco
por lo general de 200 ml, el cual deberá ser llenado con la
muestra hasta las ¾ partes. Posteriormente, añadir el
preservante hasta completar el volumen total, agitar la
muestra y homogeneizar, para así evitar el enquistamiento
de algunos organismos.
 Se recomienda que las muestras fijadas se guarden en
lugares frescos y protegidos de la luz.
Etiquetado
 Todas las muestras deberán ser etiquetadas para facilitar
su identificación.
 El papel de las etiquetas deberá ser especial (resistente al
agua), ya que se colocarán dentro del frasco que
contiene la muestra.
 Usar lápiz para anotar con letra legible (imprenta) los
datos o código de: procedencia, colector, fecha y hora
de colecta, tipo de muestra (cualitativa-cuantitativa) y
método de colecta (directa, arrastre, filtrada).
 Estos mismos datos serán anotados en la libreta de
campo.
 El código de muestra servirá de enlace en la base de
datos de acuerdo al tipo de estudio.
 Proceder al cierre hermético y protección adecuada
(sellar con cinta adhesiva) de cada una de las muestras
para su transporte.
 CONCLUSIONES

 Se identificaron los diferentes accesorios necesarios

para realizar el muestreo cuantitativo y cualitativo de
microalgas.
 Los diferentes procesos que se deben realizar para
tomar las muestras teniendo en cuenta el lugar de
muestreo, el tipo de muestra que se recolectara, etc.
 Los diversos métodos de extracion de biomasa de
microalgas.