Clase Espectrofotometria UV-VIS

MÉTODOS ÓPTICOS: ESPECTROFOTOMETRIA UV-
VIS
Métodos òpticos
Métodos òpticos
Métodos òpticos
ESPECTROSCOPIA
La espectroscopía es el estudio del espectro de la

luz que emiten los cuerpos, sustancias y
elementos.
De este estudio se puede conocer la composición,

temperatura, densidad, velocidad de
desplazamiento y otros factores que les son propios
y componen a estos cuerpos, sustancias o
elementos
POR ESPECTROSCOPÍA SE ENTIENDE TODOS LOS FENÓMENOS DE
ABSORCIÓN Y EMISIÓN DE RADIACIÓN POR PARTE DE
LA MATERIA
Existe otro conjunto de espectroscopías

denominadas de emission, en las que las moléculas
. En la medida de IA, se son previamente excitadas, analizándose a
basan las espectroscopías continuación la radiación que estas emiten al
de absorción retornar a su estado
(microondas, IR y fundamental.
electrónica),
aunque existen otras
técnicas que se basan en
las medidas de ID (Rayos
. Las moléculas pueden ser excitadas de diferentes formas:
X), o de IR. -Por una reacción química (quimiluminiscencia)
-Por absorción de radiación (fluorescencia y fosforescencia).
- Mediante el paso de una corriente eléctrica (descarga
voltaica en un medio enrarecido).
-Aplicación de campos magnéticos (técnicas de resonancia).
Cuanto más larga la longitud de onda de la luz visible tanto más rojo el color.
Asimismo las longitudes de onda corta están en la zona violeta del espectro.
Las longitudes de onda mas largas que las del rojo se les conoce como
infrarrojas y las mas cortas que el violeta, ultravioletas.
Ultravioleta Luz visible Infrarrojo
102 -104 ~ 104 104-107
UV Violeta Azul Verde Amarillo Naranja Rojo IR

4000 A Espectro Visible 7500 A
Algunas equivalencias
1m 0.001 mm 10-6 m
nm = mm 0.001m
10-9 m
1Å 0.0001m =0.1
nm 10-10 m
Comparación de las mediciones de las
longitudes de onda con la luz visible.
ESPECTROFOTOMETR
IA
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más

usados, y se basa en la relación que existe entre la absorción de
luz por parte de un compuesto y su concentración. Cuando se
hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda)
sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es
absorbida por el medio y otra transmitida, como consecuencia
de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P,
siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del
rayo de luz transmitido.
Ley de Lambert - Beer
1.- Ley de Lambert. :

Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio homogéneo, la
disminución de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio, lo
que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida diminuye exponencialmente al
aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente (Fig. 2):
P / P0 = e –kb
Fig. 2. Ley de Lambert

Donde:
Po : Intensidad de la luz incidente P : Intensidad de la luz transmitida
b : Espesor del medio absorbente
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la luz
incidente, del espesor del medio absorbente y de la naturaleza del medio.
2.- Ley de Beer :
La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al
aumentar aritméticamente la concentración de la sustancia absorbente, cuando este
haz pasa a través de un medio homogéneo (Fig. 3).
P / P0 = e -kc
Fig. 3. Ley de Beer

donde :
Po : Intensidad de la luz incidente P : Intensidad de la luz transmitida
c : Concentración de la solución
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda
de la luz incidente, de la concentración de la solución, y frecuentemente, de la
naturaleza del medio.
Ambas leyes se combinan en una sola, generando la Ley de
Lambert-Beer
log P0 / P = a b c ó A=abc
A = log P0 / P = - log T
donde :
a : Absortividad b : Longitud o espesor del medio (longitud de la
cubeta)
c : Concentración de la solución P/Po= T : Transmitancia
Transmitancia (T) :
Es la razón entre la luz monocromática transmitida
(P) por una muestra y la energía o luz incidente
(Po) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente
como la transmitida deben ser medidas a la misma
longitud de onda.
T = P / P0 = 10-abc ó %T = 100 P / P0
Absorbancia(A) : Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una
sustancia pura o en solución.
A = - log T = 2 – log %T
Pero.
T = P / P0 = 10-abc
Luego
A = - log ( P / P0 ) = - log 10-abc
A=abc
Esta ecuación indica que la absorbancia es una función lineal de la concentración,
donde a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a
depende de las unidades de b y c. Si la concentración c está expresada en moles por
litro y la longitud de la cubeta b en centímetros, la constante a recibe el nombre de
absortividad molar( ξ ) .
Luego A= ξb c
A
Ley Lambert - Beer
A α l.c
x
A= ‫ع‬. l . c 0,50
0,4
0,25 x
0,2 0.3
0,1
X C (M)
Problema:
Una solución de KMnO4 tiene una absorbancia de 0,539 cuando se mide a 540 nm en una
celda de 1.0 cm ¿Cuál es la concentración de KMnO4? Antes de determinar la absorbancia
de la solución desconocida, se obtuvieron los siguientes datos de calibración para el
espectrofotómetro.
Concentración de Absorbancia
KMnO4 (M)
0,0300 0,162
0,0600 0,330
0,0900 0,499
0,120 0,670
0,150 0,840
0,9
Absorbancia x
0,8
0,7
x
0,6
0.539
0,5 x
0,4
x
0,3
0,2
0,1
X= 0,1 M
0,03 0,06 0,09 0,12 0,15
Concentración (moles /L) - M
Si l = 1 cm
Reemplazando tenemos:
0,162 = ‫ ع‬x 1 x 0,0300

0,0300 0,0300
A= ‫ع‬. l . c
5,40 = ‫ع‬
A = 5,4 L x 1cm x c
cm.mol
L
0,539 = 5,4 cm.mol x 1cm x c
5.4 L 5,4 L
cm. mol cm.mol
C= 0,0998 mol/L
APLICACIONES
ANÁLISIS
ANÁLISIS CUALITATIVO CUANTITATIVO
 Se realiza barrido espectral (espectro de  Amplia aplicabilidad a sistemas orgánicos
absorción) e inorgánicos.
 Se compara el espectro obtenido de la  Sensibilidad de hasta 10-7M
muestra que contiene el analito absorbente y  De moderada a alta selectividad
el espectro de un estándar de dicho analito.
 Buena precisión
 Requiere proceso de aislamiento y/o
purificación de los analitos absorbentes  Fácil adquisición de datos
contenidos en la muestra,
• Estudio de estabilidad térmica de aceites vegetales comestibles. Tiene gran importancia con fines de
identificación, como criterio de pureza o para control de calidad
• Identificación y análisis de compuestos orgánicos.
• Determinación de contaminantes orgánicos, inorgánicos y pesticidas a nivel de trazas
La espectrofotometría se refiere a los métodos
cuantitativos de análisis químico que utilizan la luz
para medir la concentración de las sustancias
químicas. Se conocen como métodos
espectrofotométricos y según sea la radiación
utilizada como espectrofotometría de absorción
visible (colorimetría), ultravioleta e infrarroja.
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, lo cual indica la absorción y emisión de luz a través
de ellas en forma de miles de millones de moléculas energéticas llamadas fotones, los cuales contienen una
energía según la teoría de Planck.
Las moléculas pueden absorber energía y almacenarla en forma de energía interna (calor) esto permite que
se inicien procesos físico-químicos tales como la fotosíntesis en plantas. La mecánica cuántica nos dice que
la luz está compuesta como ya se mencionó, por fotones; cada uno de ellos contiene energía especial:
E foton = hv= hc/ λ
Donde:
c es la velocidad de la luz, v es su frecuencia, λ su longitud de onda y
h= 6.6 x10 -34 J *s (constante de Planck).
Cuando decimos que una sustancia química absorbe
luz de longitud de onda λ , esto significa que las moléculas de esa sustancia absorben fotones de esa
longitud de onda.
Referencias
Douglas A. Skoog, Stanley R. Crouch, F. J Holler (2008). Principios de Análisis

Instrumental. 6° Edición. Editor Cengage Learning
https://www.academia.edu/37326567/Principios_de_an%C3%A1lisis_instrumental_6ta_E
dici%C3%B3n_Douglas_A._Skoog_LIBROSVIRTUAL
Libro: Spectroscopic Tools for Food Analysis
https://iopscience.iop.org/book/978-0-7503-2324-6.pdf
Spectrocopic Methods in Food Analysis-
https://www.pdfdrive.com/spectroscopic-methods-in-food-analysis-d184120252.html
Methods of Analysis of Food Components and Additives, Second Edition (Chemical &
Functional Properties of Food Components)
https://www.pdfdrive.com/methods-of-analysis-of-food-components-and-additives-second
-edition-chemical-functional-properties-of-food-components-d188095951.html

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MÉTODOS ÓPTICOS: ESPECTROFOTOMETRIA UV-

La espectroscopía es el estudio del espectro de la

De este estudio se puede conocer la composición,

Existe otro conjunto de espectroscopías

Ultravioleta Luz visible Infrarrojo

102 -104 ~ 104 104-107

UV Violeta Azul Verde Amarillo Naranja Rojo IR

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más

1.- Ley de Lambert. :

Fig. 2. Ley de Lambert

Fig. 3. Ley de Beer

Ley Lambert - Beer

0,162 = ‫ ع‬x 1 x 0,0300

E foton = hv= hc/ λ

Douglas A. Skoog, Stanley R. Crouch, F. J Holler (2008). Principios de Análisis

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