Biología Molecular

y la tecnología del
ADN
Prof. Sardis Medrano

Ilustraciones de Starr et al 2009; Gerald Karp 2008; Solomon et al 2009

Debido al tamaño tan
pequeño de los sujetos bajo
estudio, la biología
molecular y celular
dependen del desarrollo de
instrumentos y técnicas mas
que ninguna otra rama de la
biología.
Consecuentemente aprender
biología molecular implica
comprender el uso de la
tecnología con la que se
colectan los datos.
 Historia
Descubrimiento de Descubrimiento de que
Descubrimiento los cromosomas los genes pueden ser
de las unidades homologos decodificados a lo largo
hereditarias
del cromosoma

Descubrimiento
de la estructura
del ADN

Descubrimiento
Descubrimiento recombinacion
de los Descubrimiento
homologa del ADN como
cromosomas
material
genetico
1800s: Miescher encontró ADN en el núcleo
1900s: Griffith transfirió material hereditario de células muertas a vivas
 Estructura del ADN

¿Qué tipo de
enlace permite
formar la cadena?

¿Cómo se unen?

¿Qué tipo de
enlace une las
bases
complementarias?
Lea el manual de laboratorio págs. 62 a 64
 Biología Molecular

• Tecnología de ADN recombinante permite a los investigadores

cotejar y comprender el ADN de diferentes organismos en el
laboratorio.

• Modificación Molecular (Ingeniería genética) Alterar el ADN

de un organismos para producir nuevos genes con nuevos rasgos.

• Biotecnología incluye todo tipo de uso comercial o industrial

tanto de células como organismos.
ADN recombinante
Herramientas para el estudio de
los Αcidos Nucleicos
Purificación de ácidos nucleicos
Hibridación de ácidos nucleicos
Amplificación enzimática del ADN por
PCR
Secuenciación de ADN
Bibliotecas de ADN
Transferencia de ADN
Determinación de la función de genes
 ADN recombinante
Inicio con el estudio de agentes
bacteriófagos, es decir, virus que infectan
bacterias.

Las enzimas de restricción de origen bacteriano se

usan para cortar el ADN en lugares específicos y
luego las moléculas son transportadas por un
vector. Tanto Bacteriófagos como plásmidos son
ejemplos de vectores.

1950s: Hershey & Chase demostraron

que el ADN y no las proteinas fueron las
que cargaron la informacion hereditaria
 Plásmidos
• Los plásmidos usados
en ADN recombinante
incluyen características
que son útiles para
aislar y analizar el
ADN clonado:
• Uno o más sitios de
restricción
• Genes que permiten al
investigador seleccionar
las células
transformadas
Cortando el ADN con una enzima de
restricción

Este proceso se le conoce

como hibridacion del ADN
Plásmido de ADN de otro organismo de interes
una bacteria

1 El plasmido y el ADN de
otro organismo son
cortados por la enzima de
restricción

Fragmento de ADN Clonable

Se mezclan dos tipos de

moléculas en forma tal
2 que se emparejan sus
extremos pegajosos. El
ADN ligasa forma une
los fragmentos.

AND recombinante

Transferencia de la molécula
de ADN recombinante a la
3 célula anfitriona
Fig. 15-2, p. 325
 Reacción en Cadena de la
Polimerasa
• La reacción en cadena de la polimerasa
polymerase chain reaction (PCR) puede ser
usada para ampificar porciones pequeñas de ADN
fuera del medio celular
• PCR usa una polimerasa resistente al calor (Taq
polymerasa), nucleoticos y cebadores replican una
secuencia de ADN en vitro
• Cada ciclo desnaturaliza y replica el número de
moléculas clonadas duplicándolas con cada ciclo.
 ADN original

Primer 1

Primer

Ciclo I
2

Primers Primers

Ciclo II
etc. Fig. 15-7, p. 330
 Gel de Electroforesis
• Es usada para separar mezclas de algunas
macromoléculas como proteínas, polipéptidos, o
fragmentos de ADN
• Los ácidos nucleicos migran hacia el polo positivo
debido a sus grupos fosfatos cargados negativamente.
• Los fragmentos se separan por tamaño, las moléculas
pequeñas migran mas rápido y se trasladan mayores
distancias que los fragmentos grandes

Lea el manual de laboratorio págs. 64 a 67

 1

Cantidades
– estandarizadas

Dirección
Pocillos del
para mezcla movimiento

Gel

Buffer
+

Fig. 15-8a, p. 332

2

Anodo
Moléculas largas

Moléculas cortas

Catodo
Fig. 15-8b, p. 332
3

Fig. 15-8c, p. 332

 Secuenciar genomas
completos
• Avanzadas tecnologías de secuenciación ya están
disponibles para el reconocimiento y estudio de
las secuencias de nucleótidos de una amplia
variedad de organismos.
• El Proyecto genoma Humano secuencio 3
billones de pb fue completado en el 2001
• 28,976 genes fueron identificados, pero no se
conocen todas sus funciones o productos
• Las secuencias están almacenadas en bases de
datos
 Fragmentos de polimorfismo restringido por
acción enzimática
Restriction Fragment Length Polymorphisms (RFLPs)

• Diferentes enzimas de restricción pueden

producir fragmentos de distintos tamaños
que posean mutaciones aleatorias de ADN
• Esto sirve para medir que tan cercanos son
dos miembros de la misma población
• Polimorfísmo genético entre biotipos o
morfos de las mismas especies
Análisis RFLP
 Fingerprints ADN
• Minisatélites (VNTR)
– Es una secuencia única de ADN usada para
identificar individuos

https://www.youtube.com/watch?v=5S_GBfxvymI
 Repeticiones cortas en Tandem
(STRs)
– Muchas copias https://www.youtube.com/watch?v
=9bEAJYnVVBA
del mismo
segmento de 2
a 10 pb de un
solo
cromosoma
– Tipos y
números de
STRs varían
entre los
individuos
Casos Forenses
• Usando PCR se
amplifican las regiones
cromosomicas donde se
han identificado los
STRs
• Se separan los
fragmentos por
electroforesis
Responda las siguientes
preguntas
Estudio de caso
 The Grim Sleeper
• Entre 1985 y 2007, se llevaron a cabo por lo menos una docena de asesinatos
en el área de Los Ángeles que estaban vinculados a la misma persona en base
a las pruebas de ADN recogidas en las escenas del crimen. El asesino se le dio
el apodo de "Grim Sleeper "porque no tenía las víctimas conocidas entre 1988
y 2002.
• A pesar de que los investigadores tenían la huella digital del ADN del
presunto asesino, la identidad de este asesino serial se desconoce debido a que
no existe una coincidencia exacta posible en la base de datos CODIS. Sin
embargo, en 2010 los investigadores descubrieron una semejanza familiar
entre el ADN de Grim Sleeper y en el CODIS un perfil de ADN de
Christopher Franklin, que había sido declarado culpable de un cargo de delito
grave por armas. Los investigadores luego sabían que el Grim Sleeper era un
pariente cercano de Franklin, así que identificaron un sospechoso en base a
una descripción dada por el único sobreviviente de un ataque.
 Responde
• ¿Qué es el CODIS?
• ¿Qué significa para los agentes forenses
cuando dicen que tienen una huella genética
digital?
• ¿Cómo ubicaron al pariente?
• ¿Qué otras evidencias se usaron para
identificar al sospechoso?
• El principal sospechoso era el padre de Christopher
Franklin, Lonnie David Franklin Jr. Desafortunadamente,
debido a que las huellas de ADN no eran una coincidencia
exacta, esta evidencia no era suficiente para detener a
Lonnie Franklin por los asesinatos. Por lo tanto, un detective
de la policía encubierto de Los Ángeles se hizo pasar por un
camarero en un restaurante de pizza donde el sospechoso
comía a menudo. En poco tiempo a partir de entonces los
investigadores recuperan la huella de ADN de Lonnie
Franklin utilizando ADN obtenido a partir de una pieza
parcialmente comida de pizza que Franklin había
descartado, y coincide con la de Grim Sleeper y el 07 de
julio 2010, Lonnie Franklin fue finalmente arrestado por los
asesinatos Sleeper Grim. Y seis años más tarde fue
condenado a la pena de muerte por el asesinato de 9 mujeres
y una menor de edad.
 Responde
• ¿La muestra colectada en la escena del
crimen fue suficiente?
• ¿Cómo tomaron la evidencia faltante?

• Busca mas información

– ¿Cuándo fue juzgado? ¿Cuál fue su sentencia?
1.¿Qué técnica se usó para separar los
fragmentos de ADN?
Responda
2.En pocas palabras describe cómo los
fragmentos de ADN son apartados.

3.¿Qué representan los rectángulos blancos?

4.¿Qué representan los rectángulos negros?

5.¿Qué sospechoso o sospechosos tienen más

probabilidades de ser inocentes?

6.¿Cuál sospechoso puede estar relacionado

con la persona que cometió el crimen?

7.¿Qué sospechoso es más probable que haya

cometido el crimen?