Carolina Ramos González-21300315

Nefelometría
 ¿Qué es?

La nefelometría consiste en la medición de la radiación causada por

partículas (en disolución o en suspensión), midiendo así la potencia
de la radiación dispersada en un ángulo distinto al de la dirección de
la radiación incidente.

Cuando una partícula en suspensión es alcanzada por un haz de luz,

existe una porción de la luz que se refleja, otra porción es absorbida,
otra desviada y el resto se transmite. Es por esto que cuando la luz
golpea un medio transparente en el cual exista una suspensión de
partículas sólidas, la suspensión se observa turbia.
 ¿En que consiste?
Dispersión de la radiación por partículas en disolución
En el momento en el cual un haz de luz choca contra las partículas de
una sustancia en suspensión, la dirección de propagación del haz cambia
su dirección. Este efecto depende de los siguientes aspectos:

• Dimensiones de la partícula (tamaño y forma).

• Características de la suspensión (concentración).
• Longitud de onda e intensidad de la luz.
• Distancia de la luz incidente.
• Ángulo de detección.
• Índice de refracción del medio.
 ¿En que consiste?
La nefelometría es un método óptico de análisis que permite derivar la cantidad de sustancia bajo
análisis midiendo la radiación difusa por efecto Tyndall. Se aplica para fases dispersas extremadamente
finas, de diámetro del orden de decenas o cientos de nanómetros y tiene altos niveles de sensibilidad y,
adecuadamente estandarizado, también puede ser muy preciso.
Las mediciones nefelométricas requieren que el haz de luz que sale de la solución de ensayo se canalice
a un detector en ángulo recto con respecto a la dirección del haz incidente, con el fin de recoger el nivel
máximo de energía. Cabe señalar que, en cambio, en el método turbidimétrico, utilizado para fases
dispersas de mayor diámetro y que, por lo tanto, dan lugar a una menor difusión de Tyndall, en
comparación con el fenómeno predominante de absorción de luz, la medición se lleva a cabo en la
misma dirección del radio incidente. Los instrumentos comúnmente utilizados son espectrofotómetros
también equipados para mediciones nefelométricas o nefelómetros especiales.
 ¿En que consiste?
El efecto Tyndall consiste esencialmente en la difusión de una onda electromagnética como resultado de
fenómenos de reflexión y refracción generados por la interacción con sistemas coloidales que consisten
en partículas del orden de la longitud de onda del radio incidente. La difusión de la radiación ocurre a lo
largo de todas las direcciones espaciales posibles, pero con diferentes niveles de intensidad. La ley de la
aleación de Rayleigh, la intensidad de la luz difusa al número de partículas presentes en suspensión:
donde, Trabajando con un determinado instrumento, y condiciones experimentales como para mantener
un volumen constante V de las partículas, y la intensidad I 0 del rayo incidente, el segundo miembro de
la ecuación anterior permite agrupar todos los términos considerados constantes, introduciendo una Los
factores nefelométricos, debido a su alta sensibilidad, se ven afectados por varios factores.
01 Nefelómetro
03 Sistema monocromador
Es un instrumento utilizado para medir Este sistema está ubicado entre la fuente de la
partículas suspendidas en una muestra líquida radiación y la cubeta, para que de esta manera se
o en un gas. De modo que una fotocelda evite la incidencia sobre la cubeta de radiaciones con
colocada en un ángulo de 90° con respecto a diferentes longitudes de onda en comparación con la
una fuente luminosa detecta la radiación por radiación deseada.
las partículas presentes en la suspensión.

02 Fuente de radiación 04 Cubeta de lectura

En nefelometría es de vital importancia
disponer de una fuente de radiación con una Es un recipiente generalmente
gran potencia lumínica. Existen diferentes prismático o cilíndrico, y puede
tipos, que van desde lámparas de xenón y tener diferentes tamaños. En éste se
lámparas de vapor de mercurio, lámparas encuentra la solución en estudio.
halógenas de wolframio, radiación laser, entre
otros.
 Aplicaciones
Los estudios nefelométricos ocupan una posición muy importante en los laboratorios clínicos. Las aplicaciones van desde la
determinación de inmunoglobulinas y proteínas de fase aguda, del complemento y de coagulación.

Detección de complejos inmunes

Cuando una muestra biológica contiene un antígeno de interés, éste se mezcla (en una solución buffer) con un anticuerpo
para formar un complejo inmune.
La nefelometría mide la cantidad de luz que se dispersa por la reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac), y de esta manera se
detectan los complejos inmunes.
Este estudio puede ser llevado a cabo por dos métodos:

Nefelometría del Punto Final:

Esta técnica puede ser utilizada para el análisis del punto final, en la cual el anticuerpo de la muestra biológica estudiada es
incubado por veinticuatro horas.
El complejo Ag-Ac es medido utilizando un nefelómetro y la cantidad de luz dispersada es comparada con la misma medida
llevada a cabo antes de la formación del complejo.
 Aplicaciones
Nefelometría cinética
En este método, la tasa de la formación de complejos es monitoreada de forma continua. La tasa de reacción depende de la
concentración del antígeno de la muestra. Acá las medidas se toman en función al tiempo, por lo cual la primera medida es
tomada al tiempo “cero” (t=0).
La nefelometría cinética es la técnica más utilizada, ya que el estudio puede llevarse a cabo en 1 hora, en comparación al
largo periodo de tiempo del método del punto final. La relación de dispersión se mide justamente después de agregar el
reactivo.
Por lo tanto, siempre que el reactivo sea constante, la cantidad del antígeno presente se considera directamente proporcional
a la relación de cambio.

Otras aplicaciones
La nefelometría es utilizada generalmente en análisis de calidad química del agua, para la determinación de claridad y para
controlar los procesos de su tratamiento.
También se utiliza para medir la contaminación del aire, en el cual se determina la concentración de las partículas a partir de
la dispersión que éstas producen en una luz incidente.
 Ejemplo
La nefelometría es una técnica utilizada en inmunología para determinar los niveles de varias proteínas del plasma sanguíneo.
Por ejemplo, los niveles totales de los isotipos o clases de anticuerpos: Inmunoglobulina M, Inmunoglobulina G e
Inmunoglobulina A. Es importante en la cuantificación de las cadenas ligeras libres en enfermedades como el mieloma
múltiple. La cuantificación es importante para la clasificación de la enfermedad y para el seguimiento de la misma una vez que
el paciente ha sido tratado (el aumento de la desviación de la relación entre las cadenas ligeras kappa y lambda después de que
el paciente haya sido tratado es una indicación de la reaparición de la enfermedad).
Se realiza midiendo la luz dispersa en un ángulo de la muestra que se está midiendo. En la nefelometría diagnóstica, la rama
ascendente de la curva de Heidelberger-Kendall se amplía optimizando el curso de la reacción para que la mayoría de las
señales de medición de las proteínas plasmáticas (de la sangre humana) caigan en el lado izquierdo de la curva de
Heidelberger-Kendall, incluso a concentraciones muy altas.
Esta técnica se utiliza ampliamente en los laboratorios clínicos porque es relativamente fácil de automatizar. Se basa en el
principio de que una suspensión diluida de partículas pequeñas dispersa la luz (normalmente un láser) que la atraviesa en lugar
de simplemente absorberla. La cantidad de dispersión se determina recogiendo la luz en un ángulo (normalmente a 30 y 90
grados).
El anticuerpo y el antígeno se mezclan en concentraciones tales que sólo se forman pequeños agregados que no se depositan
rápidamente en el fondo. Se mide la cantidad de dispersión de la luz y se compara con la cantidad de dispersión de las mezclas
conocidas. La cantidad de la incógnita se determina a partir de una curva estándar.
 Diferencia con turbidimetría

La elección entre uno de ambos métodos reside en la

dispersión de luz, si es extensa, es apropiado aplicar la
turbidimetría, en cambio si es mínima es apropiada la
nefelometría. De la nefelometría se obtienen mejores
resultados, porque determina concentraciones de pocas partes
por millón (ppm), con una precisión de 1 al 5%.
La nefelometría se basa en la medición de radiación dispersa,
en cambio la turbidimetría en la medición de la intensidad de
un haz disminuido.
El instrumento usado en la nefelometría, el nefelómetro se
asemeja al fluorómetro. En cambio en turbidimetría se utiliza
el turbidíemetro que es un fotómetro de filtro.
 Bibliografía:
Equipo editorial. (9 de julio de 2021). Nefelometría. Lifeder. Recuperado
de https://www.lifeder.com/nefelometria/.