Thèse Fettah Asma

République Algérienne Démocratique et Populaire
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique
UNIVERSITE MOHAMED KHIDER BISKRA

FACULTE DES SCIENCES EXACTES ET SCIENCES DE LA NATURE ETDE LA VIE
DEPARTEMENT DES SCIENCES DE LA MATIERE
Thèse de Doctorat en Chimie

Option : Chimie Organique et Phytochimie
Présentée par : Mme FETTAH Asma
Intitulée
Étude phytochimique et évaluation de l'activité

biologique (antioxydante - antibactérienne) des
extraits de la plante Teucrium polium L. sous espèce
Thymoïdes de la région Beni Souik, Biskra
Soutenue le 12/06/2019 devant la Commission d’Examen :
BELAIDI Salah Prof. Univ. Biskra Président

LAMARA Kaddour Prof. Univ. Oum El Bouaghi Directeur de thèse
LANEZ Touhami Prof. Univ. El Oued Examinateur
HARKATI Dalal MCA Univ. Biskra Examinateur
Remerciements
«Louanges à ALLAH le tout puissant qui m’a aidé durant toute ma vie»
Au terme de ce travail il m’est agréable de remercier toute personne ayant contribué

de prés ou de loin à sa réalisation et notamment celles dont les noms ne figurent pas
sur cette page.
Les travaux présentés dans cette thèse ont été effectués au Laboratoire de chimie
organiques du département de science de la matière, de la Faculté des Sciences
Exactes et Sciences de la Nature et de la Vie de l’Université Med Khider Biskra.
L’encadrement scientifique de ce travail a été assuré par Mr Kaddour LAMARA,

Professeur à l’Université l'Arbi Ben M'hidi Oum El Bouaghie. Je tiens vivement à lui
exprimer ma profonde reconnaissance ainsi que ma gratitude pour sa patience, sa
compréhension, ses qualités humaines et ses intérêts portés pour mon sujet de
recherche. Ce fut un honneur de travailler avec vous. Mon grand respect.
J’adresse mes sincères remerciements à Mr Salah BLAIDI professeur à l'université

de Biskra pour ses conseils prodigués et pour m’avoir fait honneur de présider le
jury de cette thèse.
Je remercie très sincèrement Mr Touhami LANEZ professeur à l'université

d’Eloued et Mme Dalal HARKATI maitre de conférences A à l'université de Biskra
qui ont accepté d’évaluer le présent travail. J’ai été très sensible à l’honneur qu’ils m'
ont fait en acceptant de juger cette thèse. Je tiens à leur exprimer mes respectueuses
gratitudes et considérations.
Toutes mes expressions de respect et de gratitude au Mr Mohamed KECHEBAR

pour m’avoir autorisé d’effectuer quelques manipulations dans son laboratoire de
phytochimie au centre de recherche scientifique et techniques sur les régions arides
CRSTRA. Ainsi que son équipe de recherche : Mme Samira KAROUNE, Mr
Haroun FADHLAOUI, Mme Mawaheb DJEDIDI et Mme Hadjer GUESMIA,
pour leurs précieux conseils et leur collaboration fructueuse.
J’adresse mes vifs remerciements à Mme Naima BENCHIKHA maitre de

conférence A à l’Université de Hama Lakhder Eloued pour m’avoir aidée à identifier
quelques composés.
Je tiens à exprimer ma profonde reconnaissance à tous et toutes mes collèges et très

particulièrement Z. NICIRA, H. BELMECHICHE, S. SEGUIIRI à l’Université
de Biskra, pour leur aide et leur encouragement, ainsi que pour l’attention qu’elles
ont bien voulu porter à ce travail.
De plus, mes remerciements vont également aux enseignants et aux personnels du

département de la science de la matière et du laboratoire de chimie.
Enfin, ne pouvant citer tous ceux et celles qui m’ont été d’un apport petit ou grand, je
leur adresse mes remerciements les plus sincères.
Dédicaces
Je dédie ce travail à mes chers parents, à ma mère et
mon père. Pour leur patience, leur amour, leur soutien
et leur encouragement tout au long de ma vie.
À mon mari Dr R. MAKHLOUFI, en signe d’amour et

de gratitude pour ces sacrifices, ces encouragements en
vue de l’achèvement de ce travail.
À mes très chères filles : Sirine, Narmine et Yasmine
À mes frères. À mes sœurs. À toute ma famille de près

ou de loin.
À mes collègues
À tous ceux qui me connaissent
À tous ceux qui aiment la science
Je dédie ce modeste travail.

‫ﻣﻠﺨــﺺ‬
‫ﻳﻌﺪ ﻫﺬﺍ ﺍﻟﻌﻤﻞ ﻣﺴﺎﻫﻤﺔ ﻓﻲ ﺗﺜﻤﻴﻦ ﺍﻟﻨﺒﺎﺗﺎﺕ ﺍﻟﻄﺒﻴﺔ ﺍﻟﻤﺴﺘﺨﺪﻣﺔ ﻓﻲ ﺍﻟﻄﺐ ﺍﻟﺒﺪﻳﻞ ﻭﻏﺎﻳﺘﻪ ﺍﻟﺒﺤﺚ ﻋﻦ ﺍﻟﻤﺮﻛﺒﺎﺕ ﺍﻟﻨﺸﻄﺔ‬
‫ﺑﻴﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﻭﺍﻟﻤﻮﺟﻮﺩﺓ ﻓﻲﻧﺒﺘﺔ ﻁﺒﻴﺔ ﻣﻦﺳﻼﻟﺔ ﺍﻟﺘﻮﻛﺮﻳﻮﻡ "‪ ،"Teucrium polium L.‬ﺍﻟﻮﺍﺳﻌﺔ ﺍﻻﺳﺘﻌﻤﺎﻝ ﻋﻨﺪ ﺍﻟﺠﺰﺍﺋﺮﻳﻴﻦ‬
‫ﻭ ﺍﻟﺘﻲ ﺗﻨﺘﻤﻲ ﻟﻠﻌﺎﺋﻠﺔ ﺍﻟﺸﻔﻮﻳﺔ "‪ ."Lamiaceae‬ﻟﻘﺪ ﺗﻢ ﻗﻄﻔﻬﺎ ﻣﻦ ﻣﻨﻄﻘﺔ ﺑﻨﻲ ﺳﻮﻳﻚ ﺑﻮﻻﻳﺔ ﺑﺴﻜﺮﺓ ﻭ ﺗﺘﻤﻴﺰ ﻫﺬﻩ ﺍﻷﺧﻴﺮﺓ‬
‫ﺑﻔﻀﺎﺋﻞ ﻋﻼﺟﻴﺔ ﻋﺪﻳﺪﺓ‪.‬‬
‫ﻳﺘﻌﻠﻖ ﺍﻟﺠﺰء ﺍﻷﻭﻝ ﻣﻦ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺪﺭﺍﺳﺔ‪ ،‬ﺑﺎﻟﻔﺤﺺ ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎﺋﻲ ﺍﻟﻨﺒﺎﺗﻲ ﻭﺍﺳﺘﺨﻼﺹ ﺍﻟﺰﻳﻮﺕ ﺍﻷﺳﺎﺳﻴﺔ ﻭﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻔﻴﻨﻮﻝ‪ ،‬ﻓﻀﻼً‬
‫ﻧﻮﻳﺪﺍﺕ ﻭﺍﻟﻌﻔﺺ ﺍﻟﻤﺘﻜﺜﻒ‬
‫ﻧﻲ ﻟﻠﺒﻮﻟﻴﻔﻴﻨﻮﻝ ﺍﻟﻜﻠﻲ ﻭﺍﻟﻔﻼﻓﻮ‬
‫ﻋﻦ ﺍﻟﺘﻘﺪﻳﺮ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻟﻬﺬﻩ ﺍﻟﻤﻮﺍﺩ ﻭ ﺫﻟﻚ ﻋﻦ ﻁﺮﻳﻖ ﺍﻟﻔﺤﺺ ﺍﻟﻠﻮ‬
‫ﺑﺎﺳﺘﻌﻤﺎﻝ ﻛﺎﺷﻒ ﻓﻮﻟﻴﻦ‪-‬ﺳﻴﻮﻛﺎﻟﻴﻮ ﻭ ﺗﺮﺍﻱ ﻛﻠﻮﺭﻳﺪ ﺍﻷﻟﻮﻣﻨﻴﻮﻡ ﻭﺍﺧﺘﺒﺎﺭ ﺍﻟﻔﺎ‬
‫ﻧﻴﻠﻴﻦ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺘﻮﺍﻟﻲ‪ .‬ﻟﻘﺪ ﺃﻅﻬﺮﺕ ﺍﻟﻨﺘﺎﺋﺞ ﺍﻟﻤﺘﺤﺼﻞ‬
‫ﻧﻮﻳﺪﺍﺕ‪.‬‬
‫ﻧﻮﻱ ﻭ ﺧﺎﺻﺔ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻔﻴﻨﻮﻝ ﻭ ﺍﻟﻔﻼﻓﻮ‬
‫ﻋﻠﻴﻬﺎ ﺛﺮﺍء ﻫﺬﺍ ﺍﻟﻨﻮﻉ ﻣﻦ ﺍﻟﻨﺒﺎﺕ ﺑﻤﺨﺘﻠﻒ ﻣﺮﻛﺒﺎﺕ ﺍﻷﻳﺾ ﺍﻟﺜﺎ‬
‫ﻛﺸﻒ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﻨﻮﻋﻲ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﻁﺮﻕ ﺍﻟﻜﺮﻭﻣﺎﺗﻮﻏﺮﺍﻓﻴﺔ )‪ TLC‬ﻭ ‪ (HPLC‬ﻋﻦ ﺍﺣﺘﻮﺍء ﻫﺬﺍ ﺍﻟﻨﺒﺎﺕ ﻋﻠﻰ ﻋﺪﺓ‬
‫ﻣﺮﻛﺒﺎﺕ ﺍﺳﺎﺳﻴﺔ ﺃﻫﻤﻬﺎ ‪ :‬ﺣﻤﺾ ﺍﻷﺳﻜﻮﺭﺑﻴﻚ ﻭ ﺣﻤﺾ ﺍﻟﻐﺎﻟﻴﻚ ﻭ ﺣﺎﺽ ﺍﻟﻜﻠﻮﺭﻭﺟﻴﻨﻴﻚ ﻭ ﺍﻟﻜﺎﻓﻴﻴﻦ ﻭ ﺍﻟﻜﻴﺮﺳﺘﻴﻦ ﻭ ﺍﻟﻔﺎ‬
‫ﻧﻴﻠﻴﻦ ﻭ‬
‫ﺑﻴﺘﺎ ﻛﻮﻣﺎﺭﻳﻦ ﻭﺍﻟﺮﻭﺗﻴﻦ‪.‬‬
‫ﻧﻲ ﺍﻟﻰ ﺩﺭﺍﺳﺔ ﺍﻟﻨﺸﺎﻁ ﺍﻟﺒﻴﻮﻟﻮﺟﻲ ﻟﻠﻤﺴﺘﺨﻠﺼﺎﺕ ﺍﻟﻤﺤﻀﺮﺓ ﻣﻦ "‪"Teucrium polium L.‬‬
‫ﻳﻬﺪﻑ ﺍﻟﺠﺰء ﺍﻟﺜﺎ‬
‫)ﺍﻟﺰﻳﻮﺕ ﺍﻷﺳﺎﺳﻴﺔ ﻭﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻔﻴﻨﻮﻝ(‪ .‬ﻓﻠﻘﺪ ﺃﻅﻬﺮ ﺗﻘﻴﻴﻢﻧﺸﺎﻁ ﻣﻀﺎﺩﺍﺕ ﺍﻷﻛﺴﺪﺓ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﻁﺮﻳﻘﺔ ﺍﺣﺘﺒﺎﺱ ﺍﻟﺠﺬﻭﺭ ﺍﻟﺤﺮﺓ ‪،DPPH‬‬
‫ﺃﻥ ﺟﻤﻴﻊ ﺍﻟﻤﺴﺘﺨﻠﺼﺎﺕ ﺍﻟﻤﺪﺭﻭﺳﺔ ﻟﺪﻳﻬﺎ ﺧﺼﺎﺋﺺ ﻣﻀﺎﺩﺓ ﻟﻸﻛﺴﺪﺓ ﻋﻠﻰ ﻣﺴﺘﻮﻳﺎﺕ ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ ﻭ ﺗﻢ ﺗﻘﺪﻳﺮﻫﺎ ﺏ‪ 50IC :‬ﻋﻨﺪ‬
‫ﻧﻴﻮﻝ ﻭ ‪149,92‬‬
‫ﻣﺴﺘﺨﻠﺺ ﺃﺳﻴﺘﺎﺕ ﺍﻹﻳﺜﻴﻞ ‪ 41,47‬ﻣﻴﻜﺮﻭﻏﺮﺍﻡ‪ /‬ﻣﻠﻞ ﻭ ‪ 47,56‬ﻣﻴﻜﺮﻭﻏﺮﺍﻡ‪ /‬ﻣﻞ ﻟﻤﺴﺘﺨﻠﺺ ﺍﻟﺒﻮﺗﺎ‬
‫ﻧﺔ ﺑﺎﻟﻤﺴﺘﺨﻠﺼﺎﺕ‬
‫ﻣﻴﻜﺮﻭﻏﺮﺍﻡ‪ /‬ﻣﻞ ﻟﻠﻤﺴﺘﺨﻠﺺ ﺍﻟﻤﺎﺋﻲ‪ .‬ﻭﻋﻠﻴﻪ ﻓﺎﻥ ﻣﺴﺘﺨﻠﺺ ﺃﺳﻴﺘﺎﺕ ﺍﻹﻳﺜﻴﻞ ﻳﻌﺘﺒﺮ ﺃﻗﻮﻯ ﻣﻀﺎﺩ ﻟﻸﻛﺴﺪﺓ ﻣﻘﺎﺭ‬
‫ﻧﻮﺍﻉ ﺍﻷﺧﺮﻯ ﻟﺘﻮﻛﺮﻳﻮﻡ ‪Teucrium‬‬
‫ﻧﺔ ﻣﻊ ﺍﻷ‬
‫ﺍﻷﺧﺮﻯ‪ .‬ﺃﻣﺎ ﺍﻟﺰﻳﺖ ﺍﻟﻌﻄﺮﻱ ﻟﻬﺬﻩ ﺍﻟﻨﺒﺘﺔ ﻓﻘﺪ ﺃﻋﻄﻰﻧﺸﺎﻁ ﻣﻨﺨﻔﺾ ﺑﺎﻟﻤﻘﺎﺭ‬
‫ﻭﺍﻟﺬﻱ ﺑﻠﻐﺖ ﻗﻴﻤﺘﻪ ‪ 1250‬ﻣﻴﻜﺮﻭﻏﺮﺍﻡ‪ /‬ﻣﻞ‪.‬‬
‫ﻧﺘﺸﺎﺭ ﻟﻤﻮﻟﺮ ﻫﻴﻨﺘﻮﻥ‪ ،‬ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺍﻟﻤﻀﺎﺩﺍﺕ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‬
‫ﺗﻢ ﺗﻘﻴﻴﻢ ﺗﺄﺛﻴﺮ ﺍﻟﻤﻀﺎﺩ ﻟﻠﺠﺮﺍﺛﻴﻢ ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺨﺘﺒﺮ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﻁﺮﻳﻘﺔ ﺍﻻ‬
‫ﻧﻴﺔﺳﻼﻻﺕ ﺑﻜﺘﻴﺮﻳﺔ ﻣﺮﺟﻌﻴﺔ‪ .‬ﺃﻅﻬﺮﺕ ﺍﻟﻨﺘﺎﺋﺞ ﺃﻥ ﺍﻟﺰﻳﻮﺕ ﺍﻷﺳﺎﺳﻴﺔ‬
‫ﺍﻟﻘﻴﺎﺳﻴﺔ ﻭﺍﻟﺘﺨﻔﻴﻒ ﺍﻟﺠﺰﺋﻲ ﻭﺫﻟﻚ ﻓﻲ ﻭﺳﻂﺳﺎﺋﻞ‪ ،‬ﺿﺪ ﺛﻤﺎ‬
‫ﻧﺔ ﻣﻊ ﺍﻟﻤﺴﺘﺨﻠﺼﺎﺕ ﺍﻟﻔﻴﻨﻮﻟﻴﺔ‪.‬‬ ‫ً‬
‫ﻣﻤﺘﺎﺯﺍ ﺿﺪ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﻜﺎﺋﻨﺎﺕ ﺍﻟﺤﻴﺔ ﺍﻟﺪﻗﻴﻘﺔ ﻣﻘﺎﺭ‬ ‫ﻟﻬﺬﺍ ﺍﻟﻨﺒﺎﺕ ﺗﻤﻠﻚﻧﺸﺎ ً‬
‫ﻁﺎ‬
‫ﻧﻰ ﻟﻠﺘﺮﺍﻛﻴﺰ ﺍﻟﻤﺜﺒﻄﺔ ﻟﻠﺠﺮﺍﺛﻴﻢ )‪ MIC‬ﻭ ‪ (CMB‬ﻟﻠﺰﻳﻮﺕ ﺍﻷﺳﺎﺳﻴﺔ ﻭﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻔﻴﻨﻮﻝ ‪ ،‬ﻳﺴﻠﻂ ﺍﻟﻀﻮء‬
‫ﺇﻥ ﺗﺤﺪﻳﺪ ﺍﻟﺤﺪ ﺍﻷﺩ‬
‫ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺘﺄﺛﻴﺮ ﺍﻟﺠﺮﺛﻮﻣﻲ ﻟﻬﺬﻩ ﺍﻟﻤﺴﺘﺨﻠﺼﺎﺕ ﺑﺘﺼﻨﻴﻔﻬﺎ ﻛﻌﻮﺍﻣﻞ ﻣﻀﺎﺩﺓ ﻟﻠﺠﺮﺍﺛﻴﻢ ﻣﻦ ﻓﺌﺔ "ﻣﺒﻴﺪ ﻟﻠﺠﺮﺍﺛﻴﻢ"‪.‬‬
‫ﻟﻤﻔﺘﺎﺣﻴﺔ‪ :‬ﺍﻟﺘﻮﻛﺮﻳﻮﻡ )‪ - (Teucrium polium L.‬ﺍﻟﺸﻔﻮﻳﺔ )‪ - (lamiacea‬ﺍﻟﺰﻳﻮﺕ ﺍﻷﺳﺎﺳﻴﺔ ‪ -‬ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻔﻴﻨﻮﻝ ‪-‬‬

‫ﻟﻜﻠﻤﺎﺕ ﺍ‬
‫ﺍ‬
‫ﺍﻟﻨﺸﺎﻁ ﻣﻀﺎﺩﺍﺕ ﺍﻷﻛﺴﺪﺓ ‪-‬ﻧﺸﺎﻁ ﻣﻀﺎﺩ ﻟﻠﺠﺮﺍﺛﻴﻢ‪.‬‬
Abstract
This work is a contribution to the valorization of medicinal plants, used in traditional

medicine. Its objectives are the research and the study of new biologically active agents,
resulting from the medicinal plant: Teucrium Polium L. subspecie thymoïdes of the
Lamiaceae family, which is very used by the Algerian population. Cultivated in Beni souik
region in the wilaya of Biskra , it is known as an important therapeutic virtues’ plant.
The first part of this study concerns phytochemical screening, extraction and
quantification of total polyphenols, flavonoids and tannins condensed by Folin-Ciocaleu
reagent, aluminum trichloride and vanillin test respectively. The results obtained show the
species’ richness in secondary metabolites and particularly in flavonoid polyphenols
A combination of chromatographic methods (TLC and HPLC), revealed the presence of
some compounds in this plant such as ascorbic acid, gallic acid, chlorogenic acids, caffeine,
quercetin, vanillin, beta-coumarine and rutin.
The second part is the biological activity study of prepared extracts of Teucrium
polium L. (essential oil and polyphenols). The evaluation of the antioxidant activity by the
DPPH free-radical scavenging method, showed that all the extracts of the studied plants have
antioxidant properties at different levels. The IC50 was estimated at 41.47 μg / ml for the ethyl
acetate extract, 47.56 μg / ml for the butanolic extract and 149.92 μg / ml for the aqueous
extract. So the ethyl acetate extract has a greater antioxidant power than the other extracts.
The essential oil has a low activity compared to the other Teucrium species with a value of
1250 μg / ml.
The antibacterial effect was evaluated in vitro by the Mueller Hinton agar diffusion
method, using standard antibiogram and micro-dilution in a liquid medium; with a respect to
eight reference bacterial strains. The results show that the essential oil of this plant has shown
an excellent activity against these microorganisms in comparison with phenolic extracts.
The determination of minimum inhibitory concentrations (MIC), minimal bactericidal
concentrations (CMB), polyphenols and essential oil, highlight the bacteriostatic effect of
these extracts, to classify them as antibacterial agents class "bactericidal".
Keywords: Teucrium polium L., lamiaceae (labiae), essential oils, polyphenols,

antioxidant activity, antibacterial activity.
Résumé
Ce travail est une contribution à la valorisation des plantes médicinales, utilisées en

médecine traditionnelle. Il a pour objectifs la recherche et l’étude de nouveaux agents
biologiquement actifs, issus d'une plante médicinale très utilisée par la population algérienne
qui est Teucrium Polium L. sous espèce Thymoïdes de la famille Lamiaceae. Cultivée dans
la région de Beni souik de la wilaya de Biskra. Elle est considérée comme une plante ayant
des vertus thérapeutiques importantes.
La première partie de cette étude concerne le screening phytochimique, l’extraction
des huiles essentielles et des polyphénols, ainsi que la quantification de ces derniers par
dosage colorimétrique des polyphénols totaux, des flavonoïdes et des tanins condensés par le
réactif du Folin-Ciocaleu, par le trichlorure d’aluminium et par le test de vanilline
respectivement. Les résultats obtenus montrent la richesse de cette espèce en métabolites
secondaires et particulièrement en polyphénols flavonoïdes.
L’analyse par des techniques chromatographiques (CCM et HPLC), a permis de
révéler la présence de quelques principaux composés dans cette plante, tels que l'acide
ascorbique, gallique, chlorogénique, caféique, quercétine, vanilline, béta coumarine et rutine.
La deuxième partie fait l'objet de l'étude de l’activité biologique des extraits préparés
de Teucrium polium L. (huile essentielle et polyphénols). L’évaluation de l’activité
antioxydante par la méthode de piégeage du radical libre DPPH, a montré que tous les extraits
de la plante étudiée, présentent des propriétés antioxydantes à différents niveaux. La IC50 a été
estimée à 41,47 µg/ml pour l’extrait acétate d’éthyle, 47,56 µg/ml pour l'extrait butanolique et
de 149,92 µg/ml pour l’extrait aqueux. L'extrait acétate d'éthyle exprime donc, un pouvoir
antioxydant plus grand que les autres extraits. L'huile essentielle présente une faible activité
par rapport aux autres espèces de Teucrium avec une valeur de 1250 µg/ml.
L’effet antibactérien a été évalué, in vitro, par la méthode de diffusion sur gélose Mueller
Hinton, en utilisant l’antibiogramme standard et la micro-dilution en milieu liquide ; vis à vis
des huit souches bactériennes de référence. Les résultats montrent que l’huile essentielle de
cette plante a manifesté une excellente activité contre ces microorganismes, à comparer avec
celle des extraits phénoliques.
La détermination des concentrations minimales inhibitrices et bactéricides (CMI et
CMB) de l’huile essentielle et des polyphénols, met en évidence l’effet bactériostatique de ces
extraits, permettant de les classer comme agents antibactériens classe "bactéricides".
Mots clés : Teucrium polium L - lamiacées (labiées) -huiles essentielles - polyphénols -

activité antioxydante - activité antibactérienne.
Sommaire
Liste des Abreviations et des Symboles
Liste des Figures
Liste des Tableaux
Objectif
Introduction Générale 1
Chapitre I
Principales Classes de Métabolites Secondaires
I.1. Introduction 4
I.2. Définition et fonctions des métabolites secondaires 4
I.3. Biosynthèse des substances naturelles 4
I.4. Classification des métabolites secondaires 5
I.4.1. Composés phénoliques 6
I.4.1.1. Définition 6
I.4.1.2. Localisation 6
I.4.1.3. Rôle et intérêt des composés phénoliques 6
I.4.1.4. Les principales classes des composés phénoliques 7
1) Les acides phénoliques 8
2) Les flavonoïdes 8
3) Les anthocyanes 11
4) Les quinones 12
5) Les tanins 13
a) Tanins condensés 13
b) Tanins saponifiables ou hydrolysables: 14
6) Les anthracénosides 15
7) Les coumarines 16
a) Les coumarines simples 16
b) Coumarines complexes 17
8) Les saponines 18
I.4.2. Les alcaloïdes 19
a- Les alcaloïdes vrais 19
b- Les pseudo-alcaloïdes 20
c- Les proto-alcaloïdes 20
I.4.3. Les terpènes et les stérols 22
a) Les terpènes 22
b) Les stérols 23
I.4.4. Les huiles essentielles 25
Références du chapitre I 29
Chapitre II
Activité Biologique (Antioxydante-Antibactérienne)
II.1. Activité anti-oxydante 37
i
II.1.1. Introduction 37
II.1.2. Stress oxydant 37
II.1.3. Radicaux libres et espèces réactives 38
II.1.4. Origines des espèces réactives de l’oxygène 39
II.1.5. Maladies liées aux stress oxydatif 40
II.1.6. Antioxydants 40
II.1.6.1. Caractéristiques des antioxydants 41
II.1.6.2. Principe des antioxydants 41
II.1.7. Antioxydants et système de défense 42
II.1.8. Rôle des antioxydants dans la prévention des AVC (accidents vasculaires
43
cérébrales) et de l’hypertension artérielle
II.1.9. Méthodes d'évaluation des propriétés anti-oxydantes in vitro 43
II.1.10. Réaction entre le radical libre DPPH et l’antioxydant 45
II.2. Activité antibactérienne 46
II.2.1. Introduction 46
II.2.2. Définition 46
II.2.3.Culture des bactéries 46
II.2.4. Les antibiotiques 47
II.2.5. Activité antimicrobienne des extraits des plantes 47
II.2.6. Description des bactéries étudiées 48
a) Escherichia coli 49
b) Staphylococcus aureus 49
c) Pseudomonas aeruginosa 49
d) Candida albicans 49
e) Enterococcus faecalis 50
f) Salmonella 50
g) Klebsiella pneumoniae 50
h) Vibrio 50
Références du chapitre II 51
Chapitre III
Étude Systématique de la Plante Sélectionnée
III.1. Introduction 56
III.2. Présentation de la région de Biskra 56
III.3. Site de prélèvement 56
III.4. Présentation de la plante : Teucrium polium L 58
III.4.1. La famille des Lamiacées 58
III.4.2. Systématique de la famille des Lamiaceae 58
III.4.3. Caractères généraux des Lamiacées 59
III.4.4. Genre Teucrium 59
a) Présentation 59
b) Habitat et répartition géographique du genre Teucrium 59
III.5. Etude monographique de l'espèce 60
ii
III.5.1. Systématique de la plante 60
III.5.2. Nom de la plante 61
III.5.3. Description de la plante 61
III.6. Valorisation des plantes associées à la plante étudiée 62
III.7. Données phytochimiques de la plante 64
III.8. Utilisation de la plante 64
Références du chapitre III 66
Chapitre IV
Matériels et Méthodes
IV.1. Introduction 71
IV.2.Récolte, Séchage et Broyage 72
IV.3.Criblage phytochimique 72
IV.3.1.Tests chimiques d’identification 72
IV.4. Contrôle d’une drogue végétale 75
IV.4.1. Dosage de l’eau 75
a) Principe 75
b) Technique 76
c) Calcul de la teneur en eau 76
IV.4.2. Dosage de cendres 76
IV.4.2.1. Teneur en cendres totales 76
a) Principe 76
b) Technique 76
c) Calcul 76
IV.4.2.2. Teneur en cendres sulfuriques 76
a) Principe 76
b) Technique 77
c) Calcul 77
IV.5. Méthodes d’extraction 77
IV.5.1. Extraction des huiles essentielles par hydrodistillation 77
IV.5.2. Extraction des polyphénols par macération 78
IV.5.3. Calcul du rendement 78
IV.6. Analyse par chromatographie sur couche mince (CCM) 79
IV.6.1. Technique 79
IV.6.2. CCM de l'huile essentielle 80
IV.6.3. CCM des polyphénols 80
IV.7. Analyse par chromatographie liquide à haute performance 81
IV.7.1. Principe 81
IV.7.2. Mode opératoire 81
IV.8. Analyse quantitative des composes phénolique 82
IV.8.1. Dosage des polyphénols totaux (PPT) 83
IV.8.2. Dosage des flavonoïdes totaux (FVT) 84
IV.8.3. Dosage des tanins condensés (TC) 85
iii
IV.9. Evaluation in vitro de l’activité antioxyante 86
IV.9.1.Estimation du pouvoir antiradicalaire (DPPH•) 86
IV.10. Analyse statistique 88
IV.11. Étude de l'activité antibactérienne 88
IV.11.1.Technique de diffusion sur milieu gélosé (Antibiogramme) 89
a) Repiquage des espèces bactériennes 89
b) Préparation de l’inoculum 89
c) Préparation des disques 89
d) Ensemencement 89
e) Lecture 90
IV.11.2. Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) 90
IV.11.3. Détermination de la concentration minimale bactéricide (CMB) 91
Références du chapitre IV 92
Chapitre V
Résultats et Discussion
V.1. Criblage phytochimique
V.2. Contrôle d’une drogue végétale
V.2.1. Dosage de l’eau par Gravimétrie (Perte à la dessiccation)
V.2.2. Dosage de cendres
V.3. Préparation des extraits
V.3.1. Extraction des huiles essentielles
V.3.2. Extraction des composés phénoliques
V.4. Caractéristiques des extraits obtenus
V.4.1. Rendement de l'extraction
V.4.2. Caractéristiques organoleptiques
V.4.3. Analyse par la chromatographie sur couche mince
V.4.4. Résultats de caractérisation par HPLC
V.5. Quantification des composés phénoliques
V.5.1. Dosage des Polyphénols totaux
V.5.2. Dosage des flavonoïdes
V.5.3. Dosage des tanins condensés
V.6. Activités biologiques des extraits
V.6.1. Evaluation de l'activité antioxydante
V.6.2. Evaluation de l'activité antibactérienne
V.6.2.2. Résultats de la CMI et CMB
V.6.2.3. Interprétation des résultats
Conclusion Générale et Perspectives
Annexe
iv
Liste des figures
Chapitre I
FIGURE LE TITRE PAGE
Figure I.1 Les voies des métabolismes 5

-Interrelation entre les métabolites primaires et les métabolites
secondaires-
Figure I.2 Principales classes des composés phénoliques. 7
Figure I.3 Structure chimique de quelques acides phénoliques. 8
Figure I.4 Structure de base des flavonoïdes. 9
Figure I.5 Structure générale des anthocyanes. 12
Figure I.6 Structure de base des quinones. 12

Figure I.7 Tanins condensés. 14
Figure I.8 Structure de Tanins hydrolysables ; esters d’acides gallique et 14
ellagique.
Figure I.9 Structure du méthyl-3-dihydroxy-1,8-anthracène. 15
Figure I.10 Structures de quelques coumarines complexes. 17
Figure I.11 Structures des saponines. 18
Figure I.12 Structure de quelques alcaloïdes vrais. 20
Figure I.13 Structures de quelques pseudo-alcaloides. 20
Figure I.14 Exemple des proto-alcaloides. 20
Figure I.15 Structure de la molécule d'isoprène. 22
Figure I.16 Classification des composés terpéniques. 23
Figure I.17 Quelques exemples de stéroïdes. 24
Figure I.18 Structure rencontrées dans les huiles essentielles. 26
Chapitre II
FIGURE TITRE PAGE
Figure II.1 Stress oxydant. 37
Figure II.2 Espèces Réactives de l’Oxygène (ERO). 38
Figure II.3 Formation des Espèces Réactives résulte d’une réduction 39

progressive de l’oxygène.
Figure II.4 Radiations UV de la lumière. 40
Figure II.5 Pprincipe des antioxydants. 41
Figure II.6 Actions de la vitamine C sur les radicaux actives. 42
Figure II.7 Aperçu des différentes espèces oxygénées activées (ERO) 43

et des antioxydants régulateurs de leur production.
Figure II.8 Structure des antioxydants les plus connus. 44
Figure II.9 Structure de la paroi bactérienne. 48
Chapitre III
Figure III.1 Une image brute Google Earth de la commune Djemourah 57
Figure III.2 Limite administrative de la commune de Djemourah 57
Figure III.3 La plante étudiée Teucrium polium L. 60
Figure III.4 Association des espèces épineuses avec Teucrium polium L. 62

Thymoïdes
Figure III.5 Alliance des différentes espèces avec Teucrium polium L. 63
Thymoïdes
Figure III.6 Astragalus armatus avec Teucrium polium L. Thymoïdes 63
Chapitre IV
Figure IV.1 Plan général de la partie expérimentale. 71

Figure IV.2 Droite d’étalonnage de l’acide gallique (moyenne ± de 83
trois essais SD).
Figure IV.3 Droite d’étalonnage de la catéchine (moyenne ± de trois 85
essais SD).
Figure IV.4 Mécanisme réactionnel intervenant lors du test DPPH• 87
entre l‘espèce radicalaire DPPH• et un antioxydant.
Chapitre V
Figure V.1 Teneure d’eau dans le Teucrium polium L. 97
Figure V.2 Résultat des cendres. 98
Figure V.3 Rendements moyens des extraits de Teucrium Polium L. 100

exprimés en % massique.
Figure V.4 Résultats de l'analyse par CCM des extraits de Teucrium 102
Polium L.
Figure V.5 Résultats de l'analyse par HPLC des extraits de Teucrium 104
Polium L.
Figure V.6 Teneurs en PPT des extraits de l’espèce Teucrium polium 106
L.
Figure V.7 Teneurs en flavonoïdes des extraits de l’espèce Teucrium 107
polium L.
Figure V.8 Teneurs en tanins condensés des extraits de Teucrium 108
polium L.
Figure V.9 Valeurs des CI50 du test DPPH (µg/ml) de HE et 111
polyphénols
Liste des Tableaux
Chapitre I
TABLEAU LE TITRE PAGE
Tableau I.1 Les différentes classes des flavonoïdes. 9

Tableau I.2 Structures de quelques coumarines simples. 17
Tableau I.3 Principaux composés des huiles essentielles et leurs 28
activités biologiques.
Chapitre II
Tableau II.1 Aperçu des différents tests pour la mesure de la capacité 45
antioxydante globale
Chapitre III
Tableau III.1 Situation géographique et bioclimatique de la station 56

d’étude.
Chapitre IV
Tableau IV.1 Les systèmes utilisés pour l’extrait d’éther de pétrole. 80
Tableau IV.2 les systèmes utilisés pour les extraits DCM, AcET et BuT. 80
Tableau IV.3 Gradient d’élution CLHP pour l’analyse des polyphénols. 82
Tableau IV.4 Souches bactériennes sélectionnées. 88
Tableau IV.5 Les différentes dilutions de la solution mère. 91

Chapitre V
Tableau V.1 Résultats des tests phytochimiques de la partie aérienne 96

de Teucrium polium L. Thymoïdes
Tableau V.2 Caractéristiques organoleptiques de extrais bruts de 101
l’espèce Teucrium polium L. de la région de Biskra.
Tableau V.3 Temps de rétention des différents témoins 103
polyphénoliques obtenus aprés séparation par CLHP.
Tableau V.4 Les phénols identifiés dans l'extrait acétate d'éthyle et 105
l'extrait butanolique
Tableau V.5 Zones d’inhibition en mm des extraits de Teucrium 113
polium L. sur les souches bactériennes testés.
Tableau V.6 Résultats CMI et CMB des extraits actifs de Teucrium 114
polium L.
Abréviations et symboles
ATCC : American type culture collection

AcOEt : Acétate d'éthyle
CLHP : Chromatographie Liquide à Haute Performance
CMB : Concentration bactéricide
CMI : Concentration minimale inhibitrice
BHT : butylhydroxytoluène
ButOH : n-butanol
CAT : capacité antioxydante totale (Total antioxidant capacity)
DCM : dichlorométhane
DMSO: Diméthyl sulfoxyde.
DO : densité optique
DPPH : 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle
EAA : équivalents d’acide ascorbique
EC : équivalent d’acide gallique
EAG : équivalent de catéchine
EC50 (IC50) : concentration inhibitrice à 50 %
HE: huile essentielle
EP : éther de pétrole
ERO : espèces réactives de l’oxygène
FVT : flavonoïdes totaux
FRAP : Capacités réductrices ferriques d’antioxydants
H2O2: peroxyde d’hydrogène
L. : Botaniste suédois Carl Linnæus (Carl von Linné)
Mg milligramme
Ml : mililitre
M-H milieu Mueller Hinton
Min minute
nm nanomètre
ORAC : Capacité d’absorbance du radical de l’oxygène
%: Pourcentage
R: rendement
Rf : Facteur de rétention
ROO. : radical peroxyde
ROOH : peroxydes organiques
PPT : polyphénols totaux
ssp : sous espèce.
T+: test positif
TC : tanins condensés
UV : ultraviolet
UFC : Unité Formant Colonie
λ: Longueur d’onde.
μg : Microgramme
µl : Microlitre.
OBJECTIFS
OBJECTIF GENERAL
Valorisation d'une plante médicinale de la famille des Lamiceae par la recherche de

différents métabolites secondaires et leurs activités pharmacologiques.
OBJECTIFS SPECIFIQUES
C’est dans cette optique que se situe notre étude dont les objectifs spécifiques se résument
dans les volets suivants :
Caractérisation qualitative des métabolites secondaires de la plante sélectionnée par

screening phytochimique.
Extraction des huiles essentielles par hydrodistillation.
Extraction des polyphénols par macération.
Analyse des extraits par CCM et CLHP.
Quantification des phénols totaux, des flavonoïdes et des tanins par dosage
colorimétrique.
Etude de l’activité antioxydante des extraits actifs de la plante choisie, par la
méthode de piégeage du radical libre DPPH.
Evaluation de l’activité antimicrobienne par la méthode de l'antibiogramme.
• INTRODUCTION
GÉNÉRALE
Introduction Générale
La phytothérapie, qui propose des remèdes naturels est bien acceptée par
l’organisme, elle est souvent associée aux traitements classiques. Celle ci connaît, de nos
jours, un renouveau exceptionnel en occident, spécialement dans le traitement des maladies
chroniques. De plus, les effets secondaires induits par les médicaments inquiètent les
utilisateurs qui se tournent vers des soins moins agressifs pour l’organisme. On estime que
10 à 20 % des hospitalisations sont dues aux effets secondaires des médicaments
chimiques. L'action de la phytothérapie sur l'organisme dépend de la composition des
plantes [1].
L’utilisation des plantes médicinales sous différentes formes, brutes ou préparées
s’est considérablement élargie. L’organisation mondiale de la santé (OMS) estime que
80% de la population globale dépend notamment de la médecine traditionnelle et de la
phytothérapie pour les soins sanitaires, ce qui semble être une solution acceptable [2]. Il a
été rapporté aussi que 60% des préparations médicamenteuses, dans les pays
industrialisés, dérivent des plantes ; ces dernières agissent comme sources d’agents
thérapeutiques modèles pour de nouveaux composés synthétiques ou comme matière de
base pour la production semi synthétique de molécules de haute complexité [3].
Un grand intérêt est donné à l’investigation sur la préparation de nouvelles
substances chimiques douées d’une activité biologique et à l’amélioration des indices
thérapeutiques [4]. Actuellement, les extraits de plantes et les préparations analogues ne
peuvent plus être considérés comme de vrais « médicaments » pour lesquels sont exigées
une identification rigoureuse et une très grande pureté [5].
Dans une logique de stratégie des études des plantes médicinales ; la valorisation ne
s’arrête pas uniquement au niveau des connaissances ethnopharmacologiques et
biologiques des plantes, mais aussi à l’étude phytochimique qui est obligatoire pour cerner
l’ensemble des informations nécessaires à cette valorisation [6]. En effet, les molécules
bioactives naturelles font l’objet de nombreuses recherches et d’une nouvelle haleine vers
l’exploitation des métabolites secondaires d’une manière générale et celle des huiles
essentielles et des polyphénols en particulier, tant dans la santé et vis-à-vis des maladies
pernicieuses (cancer) que dans l’industrie agro-alimentaire. Ces composés sont largement
recherchés pour leurs propriétés biologiques: antioxydantes, antibactériennes, anti-
inflammatoires et antiallergiques [7].
1
Dans le cadre de nos travaux, relatifs aux plantes aromatiques et médicinales de la

région de Biskra, nous nous sommes intéressés à la valorisation d’une plante très utilisée
en phytothérapie et dans la médecine traditionnelle, grâce à son efficacité dans le
traitement à combattre les rhumatismes, les troubles gastriques et l’accélération de la
cicatrisation des blessures [8,9]. C’est le Teucrium polium L. sous espèce des thymoïdes et
appartenant à la famille des lamiacées (labiées) [10], elle est cultivée dans la région de Beni
Souik de la wilaya de Biskra. Cette dernière est parmi les familles de plantes les plus
utilisées comme source mondiale d’épices et d’extraits à qualité médicale intéressante [11].
L’objectif de ce travail est l'étude phytochimique ayant pour objet la détermination
de la composition chimique de métabolites secondaires et la mise en évidence d’une
éventuelle variabilité de la quantification de ces substances, ainsi que l'évaluation de
l'activité biologique (antibactérienne et antioxydante) des extraits issus de la partie
aérienne de la plante sélectionnée.
La première partie de l’étude renferme une synthèse bibliographique qui inclut deux
chapitres. Le premier présente les principales classes des métabolites secondaires
(définition, classification et propriétés). Dans le deuxième chapitre, nous développons une
mise au point exhaustive sur l'activité antioxydante et antibactérienne.
La deuxième partie inclut le travail personnel, elle est subdivisée en trois chapitres:
Le troisième chapitre est consacré à un aperçu général sur le site de prélèvement suivi
d'une étude systématique de la plante sélectionnée Teucrium polium L.
Dans un quatrième chapitre, nous avons donné une explication détaillée de la démarche
méthodologique, en partant de la collecte des échantillons, leur séchage, broyage,
extraction et séparation. Nous avons aussi, mis le point sur tous les protocoles adoptés pour
le dosage des polyphénols, ainsi que l’évaluation de l'activité biologique des extraits
préparés.
Le cinquième et dernier chapitre a été consacré à la mise en exergue et la discussion de
tous les résultats obtenus, en comparaison avec les études antécédentes pour les mettre en
valeur.
Enfin nous achèverons ce travail par une conclusion générale dans laquelle
différentes perspectives de recherche seront évoquées, en se basant sur les résultats
obtenus.
2
Références bibliographiques
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Thrombosis. Clinical Hemostasis Review. 16(8), pp:1-6.
2. Vania G.Zuin et Jenete. H.Y.Vilegas, (2000). Phytoterapy research. 14. pp:73-88
3. Bourobou B.H., (2004). Approches sur la contribution des médicaments
traditionnels améliorés dans les soins de santé primaires: étude des cas. Pharm. Méd.
Trad. Afr., 13: 35-48.
4. Gurib-Fakim, A, (2006). Medicinal plants: traditions of yesterday and drugs of
tomorrow. Molecular aspects of Medicine , 27 (1), 1-93.
5. Benchelah, A.-C.; Bouziane, H.; Maka, M, (2004). Fleurs du Sahara, arbres et
arbustes, voyage au coeur de leurs usages avec les Touaregs du Tassili.
Phytothérapie, 2 (6), pp:191-197.
6. Brahim Harkati, (2011). Valorisation Et identification structurale des principes
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Doctorat En Sciences UNIVERSITE MENTOURI-CONSTANTINE.
7. Macheix, J.-J.;Fleuriet, A.; Jay-Allemand, C, (2005). Les composés phénoliques
des végétaux: un exemple de métabolites secondaires d'importance économique.
PPUR presses polytechniques.
8. Ansari M., Alizadeh A.M., Paknejad M., Khaniki M., Naeimi S.M, (2009).
Effects of Teucrium Polium Honey on Burn Wound Healing Process. Journal Babol
Univ Med Sci, 11: 3.
9. Ashnagar, A.; Gharibnaseri, N.; Foroozanfar, S, (2007). Isolation and
identification of the major chemical components found in the upper parts of
Teucrium polium plants grown in Khuzestan province of Iran. Chinese Journal of
Chemistry, 25 (8), pp:1171-1173.
10. Judd WS, (2002). Campbell C Botanique systématique une perspective
physiologique. Ed. De Boeck Supérieur, Université s. a., Paris, pp: 84-87.
11. Bourobou B.H., (2004). Approches sur la contribution des médicaments
traditionnels améliorés dans les soins de santé primaires: étude des cas. Pharm. Méd.
Trad. Afr., 13, pp:35-48.
3
Chapitre I
• PRINCIPALES CLASSES
DES MÉTABOLITES
SECONDAIRES
Chapitre I Principales Classes de Métabolites Secondaires
I.1. Introduction
Une des originalités majeures des végétaux réside dans leur capacité à produire des
substances naturelles très diversifiées. En effet, à coté des métabolites primaires classiques
(glucides, protides, lipides et acides nucléiques), ils accumulent fréquemment un grand
nombre de composés qui ne sont pas issus directement de la photosynthèse, mais résultent
des réactions chimiques ultérieures. Ces composés sont appelés «métabolites secondaires»
dont la fonction physiologique n'est pas toujours évidente mais représente une source
importante de molécules bioactives utilisables par l'homme dans des domaines aussi
différents que la pharmacologie ou l'agroalimentaire [1,2].
I.2. Définition et fonctions des métabolites secondaires
Les métabolites secondaires sont des molécules organiques complexes synthétisées

et accumulées en petites quantités par les plantes autotrophes. Ce sont des produits à
structure chimique souvent complexe, ils sont très dispersés et très différents selon le type
d’espèce. Ils pourraient jouer un rôle dans la défense contre les herbivores et dans les
relations entre la plante et son environnement [3,4].
Ces molécules biologiques ne sont pas, par définition, nécessaires et vitaux pour la
cellule ou l’organisme mais elles ont la particularité d’avoir des effets biologiques sur
d’autres organismes [5]. Elles sont présentes en très grand nombre et d’une variété
structurale extraordinaire. Ces composés marquent de manière originale, un genre, une
famille ou une espèce de plantes et permettent parfois d’établir une taxonomie chimique.
I.3. Biosynthèse des substances naturelles
Les grandes lignes des voies de biosynthèse des principaux métabolites secondaires
sont maintenant bien connues (Figure I.1).
4
Figure I.1: Les voies des métabolismes

-Interrelation entre les métabolites primaires et les métabolites secondaires-
I.4. Classification des métabolites secondaires
Les métabolites secondaires sont produits en très faible quantité, il en existe plus de
200000 qui sont classés, selon leur appartenance chimique, en l’occurrence, les terpènes,
les alcaloïdes, les composés acétyléniques, les cires, et les composés phénoliques [6]. Nous
citerons ci-dessous quelques importants groupes phytochimiques, source de molécules
biologiquement actives et regroupés en trois classes principales [4]:
Les composés aromatiques (les phénoliques, l’acide shikimique ou les dérivés

d’acétate).
Les composés azotés.
Les terpénoides et les stéroïdes.
5
I.4.1. Composés phénoliques

I.4.1.1. Définition :
Les polyphénols, également dénommés composés phénoliques, sont des molécules

spécifiques du règne végétal. Cette appellation générique désigne un vaste ensemble de
substances aux structures variées qu’il est difficile de définir, cependant l’élément
structural de base est un noyau benzénique auquel sont directement liés un ou plusieurs
groupes hydroxyles, libres ou engagés dans une autre fonction chimique (éther, ester,
hétéroside…etc.) [7,8,9].
Ce sont des métabolites secondaires présents chez toutes les plantes vasculaires [10].
Ils regroupent un vaste ensemble de plus de 8000 molécules, divisées en une dizaine de
classes chimiques et qui présentent toutes un point commun [11]. En effet ces composés
manifestent une grande diversité de structures : quinones (Anthracénosides), coumarines,
acides phénoliques, flavonoïdes, tanins, stilibénoides, lignanes et xanthones [12,13].
I.4.1.2. Localisation :
Les polyphénols sont présents dans toutes les parties des végétaux (racines, tiges,
feuilles, fleurs, pollens, fruits, graines et bois) [14]. Ils sont présents aussi dans diverses
substances naturelles comme les fruits rouges, le raisin ...etc. [15]
I.4.1.3. Rôle et intérêt des composés phénoliques :

Les polyphénols constituent les principes actifs de nombreuses plantes médicinales;
ils ont la capacité de moduler l'activité d'un grand nombre d'enzymes et de certains
récepteurs cellulaires. Ils sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques
comme la croissance cellulaire, la rhizogénèse, la germination des graines et la maturation
des fruits [16]. Ces composés sont réputés aussi pour leur caractère anti-oxydante,
neutralisant les radicaux libres et limitant ainsi certains dommages oxydatifs responsables
de plusieurs maladies [17]. En outre, un grand nombre de polyphénols sont reconnus pour
leurs propriétés anti-oxydantes, anti-inflammatoires, antifongiques, antivirales et
anticancéreuses. Plusieurs études ont été réalisées sur l'impact de la consommation de
végétaux sur la santé. La plupart d’entre elles ont mis en évidence une baisse du facteur de
risque pour de nombreuses affections telles que l’infarctus et le cancer [18,19].
6
I.4.1.4. Les principales classes des composés phénoliques
Les composés phénoliques, constituent le groupe le plus nombreux et le plus

largement distribué dans le royaume des végétaux, avec plus de 8000 structures
phénoliques connues [20]. Ces composés peuvent être regroupés en plusieurs catégories qui
se différencient d’abord par la complexité du squelette de base, ensuite par le degré de
modification de ce squelette (degré d’oxydation, d’hydroxylation etc.) et enfin par les
liaisons possibles de ces molécules de bases avec d’autres molécules (glucides
généralement) [21]. On distingue les acides phénoliques, les flavonoïdes, les tanins, les
coumarines, les stilbènes et les quinones [2,22]. Les différentes classes de ces composés
phénoliques sont représentées dans la figure I.2.
Figure I.2 : Principales classes des composés phénoliques.
7
1) Les acides phénoliques

Les acides phénoliques sont des substances phytochimiques ayant au moins un
groupe carboxyle et un groupe hydroxy-phénolique. La dénomination générale d’acides
phénoliques englobe les formes les plus simples des composés phénoliques qui se séparent
en deux grands groupes distincts: les acides hydroxybenzoïques qui sont des dérivés de
l’acide benzoïque et ont une structure en C6-C1, ils sont très communs aussi bien sous
forme libre que combinée à l’état d’ester ou d’hétérosides ; et les acides
hydroxycinnamiques qui dérivent de l’acide cinnamique et possèdent une structure en C6-
C3 (Figure I.3) [23,24].
Figure I.3: Structure chimique de quelques acides phénoliques.
2) Les flavonoïdes :
Le terme « flavonoïde du grec flavus, (jaune) en latin» est le nom générique qui
désigne une très large gamme de composés naturels appartenant à la famille des
polyphénols. Ils sont considérés comme des pigments quasiment universels des végétaux,
souvent responsables de la coloration des fleurs, des fruits et parfois des feuilles. À l’état
naturel les flavonoïdes se trouvent le plus souvent sous forme d’hétérosides [7,25].
Tous les flavonoïdes (plus de 6000) possèdent le même élément structural de base
[26], avec un squelette à quinze carbones qui, à son niveau le plus simple, consiste en deux
cycles phényles, les cycles A et B, connectés par un pont à trois carbones (structure en C6-
C3-C6). Le pont en C3 entre les cycles A et B est communément cyclisé pour former le
cycle C [27,28]. La figure I.4 représente la structure de base des flavonoïdes [29].
8
Figure I.4.: Structure de base des flavonoïdes.
Aujourd’hui plus de 9000 flavonoïdes ont été répertoriés et il en reste des milliers
d'autres à découvrir puisque le squelette des f1avonoïdes peut être substitué par différents
groupements comme les groupements hydroxy, méthoxy, méthyl, benzyl et
isoprényl [30-32].
Classification des flavonoïdes:
Ils peuvent être regroupés en une douzaine de classes selon le degré d’oxydation du
noyau pyranique central, lequel peut-être ouvert et recyclisé en un motif furanique
(dihydrofuranone). Le tableau I.1 illustre les principales classes de flavonoïdes [24].
De façon générale, les flavonoïdes peuvent être hydroxylés en position 3, 5, 7, 3ʹ, 4ʹ, 5ʹ
et/ou 6ʹ (suivant la numérotation présentée pour les flavones,). Un ou plusieurs de ces
groupes hydroxyles sont fréquemment méthylés, acétylés, prénylés ou sulfatés. Dans les
plantes, les flavonoïdes peuvent être présents sous forme C-ou O-glycosylés. Les formes
libres, sans sucres attachés sont appelés les génines ou aglycones [21,33].
Tableau I.1 : Les différentes classes des flavonoïdes.

Différentes classes Principales substances
Structure Nom de famille Hydroxylation Nom

3' 5, 7, 4' Apeginine
2' 4'
8 1
1'
C R=H FLAVONE 5, 7, 3', 4' Luteoline
O 2 5'
7
A B 6'
6
3 5, 7, 4' Kaempferol
4 R
5
O R=OH FLAVONOL 5, 7, 3', 4' Quercetine
9
3'
2' 4'
8 1 C
O 2
1'
5' R=H FLAVANONE 5, 7, 4' Naringenine
7
A B 6'
6
3 (Dihydroflavone) 7, 3', 4' Butine
4 R
5
O R=OH FLAVANONOL 7, 3', 4' Fustine
(Dihydroflavonol) 5, 7, 3', 4’ Taxifoline
3'
R=H CATECHINE 5, 7, 3', 4', 5' Gallocatechine
2' 4'
8 1
1'
C
O 2 5' (Flavanol-3) 5, 7, 3', 4' Catechine
7
A B 3
6'
6
4 OH R=OH 5, 7, 3', 4' Leucocyanidine
5
R LEUCOANTHO-
CYANIDINE 5, 7, 3', 4', 5' Leucodelphinidine
(Flavandiol-3, 4)
3' R=H FLAVYLIUM 5, 7, 4' Apigenidine
2' 4'
8 1 C
O 2
1'
5' (Anthocyane) 5, 7, 3', 4’ Luteolidine
7
A B 3
6'
6
R
R=OH 5, 7, 3', 4’ Cyanidine
4
5
ANTHOCYANIDINE 5,7, 3', 4', 5' Delphinidine
8 1
O 2
7
A B
6
3
1'
2' ISOFLAVONE 7, 4' Daidzein
3'
5 4
C
O
6' 4' 5, 7, 3', 4' Orobol
5'
5
6 4
5'
6'
1
3 CHALCONE 2', 4', 3, 4 Buteine
4'
2
3' 2', 3', 4', 3, 4 Okanine
1'
2'
O
5
6 4
5'
4' 6'
1
3 DIHYDROCHALCONE 4, 2', 4', 6' Phloretine
2
3' 1' 3,4, 2', 4', 6' Hydroxyphloretine
2'
O
3'
2' 4'
7
6
O 1' 5' AURONE 6,3', 4' Sulphuretine
6'
2 1
5 3 6, 7, 3', 4' Maritimetine
4 O
10
Propriétés des flavonoïdes

Ce sont des solides cristallisés dont la teinte, varie du blanc ivoire au jaune vif. Ces
hétérosides sont solubles dans l’eau (surtout à chaud), l’alcool et les solvants
organiques. Ils sont insolubles dans les solvants organiques apolaires.
Les flavonoïdes sont aussi solubles dans les solutions alcalines (ammoniaque et
potasse) donnant une coloration jaune qui disparaît par addition d’acide.
Ils possèdent un spectre d’absorption dans l’ultra violet avec, généralement deux
maximums caractéristiques variant avec chaque type flavonique [34].
Ils Protègent les plantes contre les radiations UV.
Ils sont impliqués dans les processus de défense de la plante contre les infections
bactériennes et virales.
Ils fonctionnent comme des signaux moléculaires de reconnaissance entre les
bactéries symbiotiques et les légumineuses afin de faciliter la fixation de l’azote
moléculaire.
Ils régulent l’élongation des tiges et interviennent dans la maturité des fruits [35].
3) Les anthocyanes :
Les anthocyanes (du grec anthos, fleur et Kuanos, bleu violet), terme général qui
regroupe les anthocyanidols et leurs dérivés glycosylés. Ces molécules, faisant partie de la
famille des flavonoïdes et capables d'absorber la lumière visible, sont des pigments qui
colorent les plantes en bleu, rouge, mauve, rose ou orange. Leur présence dans les plantes
est détectable à l'œil nu. Ces pigments sont donc à l’origine des couleurs des fleurs, des
fruits et des bais rouges ou bleues. Ils sont généralement localisés dans les vacuoles des
cellules épidermiques qui sont de véritables poches remplis d'eau.
On trouve également les anthocynes dans les racines, les tiges, les feuilles et les graines.
En automne, les couleurs caractéristiques des feuilles des arbres sont dues aux anthocyanes
et aux carotènes qui ne sont plus masqués par la chlorophylle [36] (Figure I.5).
11
Figure I.5: Structure générale des anthocyanes.
4) Les quinones
Cétones aromatiques provenant de l’oxydation des diphénols. Les quinones (Figure

I.6) constituent un groupe de substances biologiquement très actives. Beaucoup d’entre
elles sont antimicrobiennes, c’est à dire antibiotiques naturels agissant surtout sur les
grams +, ce sont aussi des fongicides et parfois même des vermifuges. Les quinones sont
des transporteurs d’électrons spécifiques de la membrane mitochondriale (interne) et
celle des thylakoïdes. La vitamine K1 (méthyl 2- naphtoquinone), en est un exemple, elle
est abondante dans la Luzerne. On trouve également dans ce groupe des plantes
tinctoriales. Enfin, la majorité des anthraquinones sont apéritives, mais aussi purgatives,
agissant directement sur la musculature lisse au niveau du côlon et entravant la résorption
de l’eau. En présence d'une base (NaOH ou KOH), les quinones donnent une coloration
caractéristique allant du rouge orangé au violet pourpre [37].
Figure I.6 : Structure de base des quinones.
12
5) Les tanins :
Le terme tanin provient d’une pratique ancienne qui utilisait des extraits de plantes
pour tanner les peaux d’animaux, autrement dit, transformer une peau en cuir [34]. Les
tanins sont des polyphénols que l'on trouve dans de nombreux végétaux. Leur structure
complexe est formée d'unités répétitives monomériques qui varient par leur centre
asymétrique, leur degré d’oxydation [38] et leur saveur astringente mais ayant en commun la
propriété de tanner la peau. Cette aptitude est lié à leur propriété de se combiner aux
protéines. Leur poids moléculaire est compris entre 500 et 3000 g/mol [39,40]. Ces tanins
sont des donneurs de protons aux radicaux libres lipidiques produits au cours de la
peroxydation. Des radicaux tanniques plus stables sont alors formés, ce qui a pour
conséquence de stopper la réaction en chaîne de l’auto oxydation des lipides [41-43].
Localisation et distribution
Les tanins sont très répandus dans le règne végétal mais ils sont particulièrement
abondants dans certaines familles comme les conifères, les fagacées et les rosacées [44]. Ils
peuvent exister dans divers organes tels que les écorces, le bois, les fruits (raisin, datte,
café, cacao..), les feuilles, les racines et les graines [45].
Structure et classification [7,25] :

On distingue, habituellement chez les végétaux supérieurs, deux groupes de tanins
différents aussi bien par leur structure que par leur origine biogénétique:
Les tanins condensés, formés de proanthocyanidines (sous forme d'oligomères)
Les tanins saponifiables ou hydrolysables : esters d’acides phénols et de glucose.
a) Tanins condensés:
Les tanins condensés, appelés aussi polyphénols ou procyanidoliques, sont largement
répandus dans l'alimentation humaine. Ces tanins sont des oligomères ou des polymères de
flavan-3-ols qui ont la propriété de libérer des anthocyanes en milieu acide à chaud par
rupture de la liaison inter monomérique [46].
La structure complexe des tanins condensés est formée d'unités répétitives
monomériques qui varient par leur centre asymétrique et leur degré d'oxydation.
Les formes naturelles monomériques des flavan-3-ols se différencient par la
stéréochimie des carbones asymétriques C2 et C3 et par le niveau d'hydroxylation
13
du noyau B (Figure I.7) On distingue ainsi les catéchines, les épicatéchines et les
gallocatéchines [47].
Figure I.7 : Tanins condensés.
b) Tanins saponifiables ou hydrolysables :

Les tanins hydrolysables sont des esters de glucides ou d'acides phénols, ou de dérivés
d'acides phénols (Figure I.8); la molécule glucidique est, en général du glucose, mais dans
certains cas des polysaccharides. Ce groupe de tanins est caractéristique des
Dicotylédones. Ces tanins, en raison de leurs nombreux groupements OH, se dissolvent
plus ou moins (en fonction de leur poids moléculaire) dans l'eau, en formant des solutions
colloïdales [48]. Ces tanins sont de deux types :
- Les tanins galliques qui sont des esters d’oses (glucose) et d’acides galliques.
- Les tanins ellagiques qui sont des esters d’oses et d’acides ellagiques [36].
Tanin gallique "gallotanin" Tanin éllagique "ellagitanin"
Figure I.8: Structure de Tanins hydrolysables ; esters d’acides galliques et ellagiques.
14
Propriétés des tanins :

Les tanins sont des corps généralement amorphes, solubles dans l’eau et l’alcool et
insolubles dans les solvants organiques apolaires. On les extraits, généralement par
des mélanges hydro-alcooliques.
Ils précipitent, avec de nombreux réactifs et avec les sels de métaux lourds tels que
le fer, le plomb, le zinc et le cuivre [49].
Grâce à leur astringence, les tanins sont utilisés comme antidiarrhéiques,
vasoconstricteurs et hémostatiques, mais surtout comme protecteurs veineux dans
le traitement des varices et hémorroïdes [50].
Ils sont largement employés dans l’industrie du cuir surtout dans celle des vernis et
peintures [50].
6) Les anthracénosides :
Ce sont des composés d’origine végétale ayant des propriétés laxatives et
purgatives (l’intensité de l’action les différencient : laxatif léger et purgatif violent). Ces
composés possèdent une structure de base qui dérive du méthyl-3-dihydroxy-1,8-
anthracène (Figure I.9).
OH OH
8 9 1
7 2
6
3
5 10 4 CH3
Figure I.9 : Structure du méthyl-3-dihydroxy-1,8-anthracène.
Propriétés des anthracénosides :
Les anthracénosides sont des composés polaires à cause de leur fonction phénolique
et de leurs nombreuses fonctions alcools des sucres : ils sont donc hydrophiles et solubles
dans les solvants polaires [51].
On utilise les antrhracénosides pour :
La préparation des patients à des examens radiologiques et côlonoscopiques.
Le maintient des selles molles en cas d’intervention chirurgicale ano-rectale.
15
En présente de constipation chez le patient qui va subir une intervention chirurgicale,

il est préférable de lui administrer une préparation à base de laxatif pour accélérer le
transit.
Le traitement de la constipation occasionnelle liée à un traitement médicamenteux [7].
7) Les coumarines :
Historiquement, le nom de coumarine vient de «cumaru» qui est le nom de l’arbre de

tonka (dipteryx ordorata willd, fabaceae), dans une langue amazonienne dont les fèves
contiennent 1 à 3% de coumarine. Les coumarines ont été isolées pour la première fois en
1820. Ces composés constituent une classe importante de produits naturels et donnent une
odeur caractéristique semblable à celle du foin fraichement fauché. , elles se trouvent dans
de nombreuses espèces végétales et possèdent des propriétés très diverses. Plus de milles
structures de coumarines ont été décrites et les plus simples d’entre elles sont largement
distribuées dans le règne végétal, avec une abondance remarquable au sein des
angiospermes [52]. Les familles les plus riches en coumarines sont : les légumineuses, les
rutacées, les apiécées et les thymeleacées. Elles sont présentes dans toutes les parties de la
plante et notamment dans les fruits et les graines [53,54]. Se trouvant dans la nature, soit à
l’état libre ou bien combiné avec des sucres, elles sont responsables de l'odeur
caractéristique du foin [55].
Structure chimique et classification:

Les coumarines sont caractérisées par une structure qui comporte un noyau benzo
(2 H)-1 pyrannone , résultant de la lactonisation de l’acide ortho-hydroxy- cis cinnamique
C-2 [56,57]. Toutefois leurs structures restent très diverses et peuvent être classés en deux
grands groupes [58,59]. Coumarines simples et Coumarines complexes où un noyau furanne
ou pyranne est associé au noyau benzo α pyrone.
a) Les coumarines simples : Ce sont celles qui ont des substituants dans le cycle
benzénique. Elles peuvent être des dérivés hydroxylés, méthoxylés, alkylés, alcoxylés et
glycosylés de la molécule mère (Tableau I.2) [60].
16
Tableau I.2: Structures de quelques coumarines simples.
R1 R2 R3
Umbélliférone H H OH
Esculétine OH OH H R1
Scopolétine OCH3 H OH
R2 O O
Fraxétol OCH3 OH OH
R3
Esculine O-Glu OH H
Fraxoside OCH3 O-Glu OH
b) Coumarines complexes : ils se constituent d’un noyau furane ou pyrane associé au

noyau benzo-α-pyrone, la prénylation est à l’origine des coumarines polycycliques :
furanocoumarine pyranocoumarine
Figure I.10: Structure de quelques coumarines complexes.
Propriétés des coumarines:

Les coumarines libres sont solubles dans les alcools et dans les solvants organiques
tels que les solvants chlorés avec lesquels on peut les extraire. Les formes
hétérosidiques sont plus ou moins solubles dans l’eau [7].
Elles ont un spectre UV caractéristique, fortement influencé par la nature et la
position des substituants et profondément modifié en milieu alcalin (KOH,
NaOCH3), elles sont examinées en lumière ultra-violette [7].
Elles sont capables de prévenir la peroxydation des lipides membranaires et de
capter les radicaux hydroxyles, superoxydes et peroxyles.
Les conditions structurales requises pour l’activité antiperoxydante des coumarines
sont similaires à celles des flavonoïdes [59].
17
Elles sont considérées comme des phytoalexines, c'est-à dire des métabolites que la
plante synthétise en grande quantité pour lutter contre une infection causée par des
champignons ou par des bactéries. Les coumarines peuvent également se trouver
dans le règne animal (les glandes à sécrétion odoriférante du castor) et chez certains
microorganismes [61].
8) Les saponines [62,63]

Les saponosides ou saponines sont un groupe de métabolites secondaires,
abondamment trouvés dans certaines familles du règne végétal. Ils sont principalement
produits par les plantes supérieures, mais aussi par des animaux marins inférieurs et
quelques bactéries. Leur nom provient du latin sapo signifiant "savon" en raison de leurs
propriétés à former des solutions moussantes en présence d'eau. Ce sont des hétérosides de
poids moléculaire élevé qui se composent d’une partie lipophile, l’aglycone (ou génine) et
d’une partie hydrophile osidique. Cette combinaison d’éléments structuraux polaires et non
polaires en leurs molécules explique leur comportement moussant en solution aqueuse.
Structure et classification chimique:
Au niveau structural, les saponines sont des molécules composées de deux entités : une
génine (appelée aussi aglycone) et une fraction glycoside. La partie aglycone (sapogénine)
est constituée d’un noyau stéroidique ou triterpènique [64] (Figure I.11).
Figure I.11: Structures des saponines.
Propriétés des saponosides :

Les saponines isolées de différentes sources possèdent un goût amer, elles ont été utilisées,
en tant que détergents et pesticides, en plus de leurs applications industrielles en tant
qu’agents moussants et tensioactifs [65].
18
Reconnues pour avoir un fort potentiel pharmacologique, les saponines ont été
intensivement étudiées au cours des dernières années. La communauté scientifique a
démontré un intérêt marqué envers cette classe de métabolites secondaires afin d'accélérer
le processus lié à leur développement biopharmaceutique.
Les saponines exercent des activités biologiques très variées telles que :
hémolytique, molluscicide, anti-inflammatoire, antibactérienne et antiparasitaire,
cytotoxique et antitumorale [63,66].
La nature amphipathique de cette classe leur procure une activité tensioactive qui
peut être utilisée pour accroître la pénétrabilité des macromolécules (protéines) à
travers les membranes cellulaires [67].
Des saponines ont aussi été utilisées comme adjuvants de vaccins.
I.4.2. Les alcaloïdes

Les alcaloïdes sont un groupe de composés azotés, hétérocycliques et doué de
propriétés physiologiques prononcées même à faible dose [68]. Leurs noms se terminent
toujours par ‹-ine›. Ils présentent des réactions communes de précipitation par lesquelles
ils sont détectés (capacité de se combiner avec des métaux). Représentant un groupe
fascinant de produits naturels, ils constituent l’un des plus grands groupes de près de 10000
à 12000 structures [69].
Classification:
Parmi les nombreux systèmes proposés pour la classification des alcaloïdes, on peut
citer, selon leur biogénèse et la position de l’azote, celui qui regroupe les alcaloïdes en
trois classes. On distingue généralement [70.71]:
alcaloïdes vrais.
pseudo-alcaloïdes.
proto-alcaloïdes.
a) Les alcaloïdes vrais [72]:

Les alcaloïdes vrais représentent le plus grand nombre d’alcaloïdes qui sont toxiques et
disposent d’un large spectre d’activités biologiques. Ils dérivent d’acides aminés et
comportent un atome d’azote dans un système hétérocyclique. Ils sont présents dans les
plantes, soit sous forme libre, soit sous forme de sel, soit comme N-Oxyde (Figure I.12).
19
CH3
OH O
Hygrine Cocaine Lobéline
Figure I.12 : Structure de quelques alcaloïdes vrais.
b) Les pseudo-alcaloïdes :
Ce sont des composés dont le squelette carboné de base ne dérive pas d’acide
aminé. Il s’agit d’alcaloïdes aromatiques qui sont, dans la majorité des cas, des
isoterpénoides comme la capsaicine. La caféine et la noréphédrine sont aussi des pseudo-
alcaloïdes (Figure I.13).
capsaicine noréphédrine caféine
Figure I.13 : Structures de quelques pseudo-alcaloides.
c- Les proto-alcaloïdes:
Ce sont des amines simples qui dérivent d’acides aminés mais pour lesquels l’azote
est en dehors des structures cycliques (exemple : la colchicine), certains s’associent à des
résidus terpéniques, exemple: alcaloïdes indoliques monoterpéniques (utilisés contre le
cancer) (Figure II.14).
Colchicine Adrénaline Dopamine
Figure I.14 : Exemple des proto-alcaloïdes.

20
Propriétés physico-chimiques des alcaloïdes :
Les alcaloïdes sont des substances azotées ayant des masses moléculaires très
variables de 100 à 900 g/mol [70].
Les alcaloïdes et leurs sels purs sont, en général des produits solides cristallisés,
caractérisés par un point d'ébullition propre. Certains d’entre eux sont amorphes et
se trouvent sous forme de cires. D'autres, ayant de faibles points d'ébullitions sont
à l'état liquide sous forme d'huiles et ont une viscosité variante [73].
Ils sont solubles, dans l’eau et les solvants organiques polaires comme les alcools,
tant qu’ils sont placés en milieu acide (sels d’alcaloïdes), ils sont solubles aussi,
dans les solvants organiques peu polaires comme le dichlorométhane, le
chloroforme, etc…en milieu alcalin (alcaloïdes sous forme de base) [74].
La basicité des alcaloïdes est très variable et dépend de la disponibilité du doublet
libre de l’atome d’azote. Cette basicité est fortement influencée par la présence des
groupements liés à l’atome d’azote : les groupements électro-attracteurs adjacents
à l’atome d’azote diminuent la basicité tandis que les groupements électro-
donneurs la renforcent. La colchicine et la pipérine, du fait de l’existence du
carbonyle de l’amide, sont pratiquement neutres [75].
Propriétés thérapeutiques des alcaloïdes [76,77]:
Les alcaloïdes sont des substances particulièrement intéressantes pour leur activité
pharmacologique qui s’exerce dans des domaines variés.
Au niveau du système nerveux central, ce sont des dépresseurs (morphine) ou des

stimulants (caféine)
On notera aussi l’existence de curarisants, d’anesthésiques locaux (cocaïne),
d’antifibrillants (quinidine), d’anti-tumoraux (vinblastine), d’antipaludique
(quinine).
Ces différentes activités (et d’autres) conduisent à une utilisation pharmaceutique des
plantes à alcaloïdes. D’une manière générale, les alcaloïdes sont des substances
particulièrement intéressantes pour leurs activités pharmacologiques très variées ainsi que
par leur toxicité.
21
I.4.3. Les terpènes et les stérols

a) Les terpènes :
Les terpènes sont des hydrocarbones naturels, de structure, soit cyclique soit à chaîne
ouverte : leur formule brute est (C5HX)n dont le x est variable en fonction du degré
d’insaturation de la molécule et n peut prendre des valeurs de (1-8) sauf dans les
polyterpènes où il peut atteindre plus de 100 (caoutchouc). La molécule de base est
l’isoprène de formule C5H8 (Figure I.15). Le terme terpénoïde désigne un ensemble de
substances présentant le squelette des terpènes avec une ou plusieurs fonctions chimiques
(alcool, aldéhyde, cétone, acide, lactone, etc.) [78]. Ces composés sont majoritairement
d’origine végétale. Ils sont synthétisés par les plantes, les organismes marins, les
champignons et même par les animaux [79].
Figure 1.15: Structure de la molécule d'isoprène.
Classification des terpènes [79, 80]:
Les terpènes forment un groupe de produits naturels largement représentés et d'un

intérêt chimique considérable. Bien que de structures très diverses, ils ont un caractère
commun: ils peuvent être virtuellement déconnectés en unités isoprèniques. De ce fait, la
classification des terpenoïdes est basée sur le nombre de répétitions de l’unité de base
isoprène, ce qui donne des : hémiterpènes (C5), monoterpènes (C10), sesquiterpènes
(C15), diterpènes (C20), sesterpènes (C25), triterpènes (C30), tetraterpènes (C40) et
polyterpènes comme indiqué sur la figure I.16. Les structures de chaque classe sont
illustrées dans l’Annexe I.
22
Figure I.16 : Classification des composés terpéniques.
b) Les stérols :
Les stérols possèdent une structure chimique proche de celle du cholestérol. Cette
proximité permet à ces derniers de tromper l'organisme permettant ainsi de limiter le
passage du cholestérol de l'intestin vers le sang. Ce sont des substances naturelles
stéroidiques caractérisées par un noyau polycyclique portant une fonction alcool [76].
Classification des stérols :

Selon l'IUPAC, les stéroïdes incluent tous les lipides possédant un noyau
cyclopentanophénanthrénique (stérane) ou dérivant de celui-ci [79]. Cette définition ne
catégorise pas les différents types de stéroïdes. Toutefois, l'IUPAC précise que les « stérols
sont des stéroïdes » se caractérisant par la présence d'un groupe hydroxyl -OH sur le
carbone C3 et comme exemple, le cholestérol (Figure I.17).
En revanche, pour plusieurs biochimistes, les « stérols constituent une catégorie à part
entière incluant les stéroïdes, ainsi que cinq autres sous-classes [81] :
23
• Les stérols et dérivés : cholestérol, phytostérol et stérides .

• Les stéroïdes : œstrogènes, androgènes, gluco- et minéralocorticoïdes .
• Les sécostéroïdes : vitamine D.
• Les stéroïdes conjugués.
• Les hopanoïdes.
H H
HO
Stérane Cholestérol
H
β-sitostérol
H H
HO HO
β-sitostérol Vitamine D
O
21 23 O
18 20
12 17 22
11
19 H 13
16
1 9
2 14 15
10 8
5 OH
3 7
HI 6
4
H
.
Cardénolide
Figure I.17 : Quelques exemples de stéroïdes.
24
Intérêts des terpènes et des stérols:

Les terpénoïdes sont connus comme doués de propriétés antifongiques et
antibactériennes. Le mécanisme des terpénoïdes n'est pas bien connu mais, il
pourrait induire une destruction de la membrane du microorganisme par une action
lipophilique [7].
Les triterpènes font un groupe de produits naturels de première importance dans les
terpènes. Ils sont responsables d'une multitude d'activités biologiques :
cytostatique, antivirale, insecticide, anti-inflammatoire, molluscicide et
analgésique [82].
Le β-sitostérol appartient à la famille des stérols végétaux ou phytostérols,
composés naturels présents dans toutes les plantes. Le β-sitostérol est comparable
au cholestérol. Il peut aider à réduire le taux de cholestérol en limitant la quantité
de cholestérol qui peut entrer dans le corps. Le β-sitostérol est également reconnu
pour son activité anti-inflammatoire [83].
Les stérols sont des constituants de membranes cellulaires qui jouent un rôle très
important dans la perméabilité de celles-ci et aussi dans la prolifération
cellulaire [76,84].
I.4.4. Les huiles essentielles :

Les huiles essentielles sont des composants liquides et hautement volatiles des plantes
marqués par une odeur forte et caractéristique, les terpènes (principalement les
monoterpènes) représentent la majeure partie (environ 90%) de ces composants. Les HES
ne contiennent pas de corps gras (lipides). Elles sont obtenues par distillation par la vapeur
d’eau et sont plus ou moins modifiées au cours de la préparation [85].
Localisation des huiles essentielles

Les huiles essentielles n’existent que chez les végétaux supérieurs. Elles sont produites
dans le cytoplasme des cellules sécrétrices et s’accumulent en général dans des cellules
glandulaires spécialisées, souvent situées sur ou à proximité de la surface des tissus des
plantes et recouvertes d’une cuticule [86]. Ces huiles essentielles se rencontrent dans tout le
règne végétal. Cependant elles sont particulièrement abondantes chez certaines familles:
les conifères, les rutacées, les ombellifères, les myrtacées, les lamiacées, Asteraceae,
Apiaceae et les poacées. Tous les organes peuvent en renfermer, surtout les sommités
25
fleuries (lavande, menthe...) mais on en trouve aussi dans les racines ou rhizomes (vétiver,
gingembre), dans les écorces (cannelle), le bois (camphrier), les fruits (poivres) et les
graines (Muscade).Elles peuvent être stockées dans tous les organes végétaux : fleurs,
feuilles, écorces, bois, racines, rhizomes, fruits et graines [87,88].
Composition chimique des huiles essentielles :

Les huiles volatiles sont des mélanges très complexes dont les constituants sont
principalement des monoterpènes et des sesquiterpènes de formule générale (C5H8) n. Les
composés oxygénés dérivés de ces hydrocarbures incluent des alcools, des aldéhydes, des
esters, des éthers, des cétones, des phénols et des oxydes. On estime qu’il y a plus de 1000
monoterpène et 3000 de structure sesquiterpéne. D’autres composés incluent des
phenylpropanes et des structures spécifiques contenants le soufre ou l’azote, la figure I.18
présente la structure de quelque composants retrouvés dans les huiles essentielles.
Figure I.18 : Structures rencontrées dans les huiles essentielles.
26
Propriétés physico-chimiques [86,88]:

En ce qui concerne les propriétés physico-chimiques, les huiles essentielles forment
un groupe très homogène, qui a des propriétés communes représentées dans les points
suivants :
• Les huiles essentielles sont habituellement liquides à température ambiante et
volatiles, ce qui les différencient des huiles dites fixes.
• Elles sont plus ou moins colorées et peuvent conférer leur odeur à l’eau. Leur densité
est en général inférieure à celle de l’eau.
• Leur indice de réfraction et pouvoir rotatoire sont très élevés.
• Elles sont entraînables par la vapeur d’eau et solubles dans l’alcool, l’éther et les
huiles fixes, mais insolubles dans l’eau.
• Elles sont altérables, sensibles à l’oxydation et ont tendance à se polymériser donnant
lieu à la formation de produits résineux. Il convient alors de les conserver à l’abri de la
lumière et de l’air.
Propriétés pharmacologiques des huiles essentielles :

Depuis longtemps, les huiles essentielles sont utilisées en thérapeutique. Leurs
applications dans ce domaine sont vastes. Elles requièrent de bonnes connaissances de ces
substances et du fonctionnement du corps humain. L’usage des huiles essentielles en
médecine ne fut jamais abandonné malgré la découverte de processus de synthèse
organique et la naissance de l’industrie pharmaceutique, alimentaire et cosmétique. Celles
ci sont considérées comme un véritable réservoir de molécules de base qui sont
irremplaçables. Elles ont une action antiinflammatoire, antiseptique, antivirale,
désodorisante, insecticide et antioxydante [89,90]. Néanmoins, une seule huile peut avoir
plusieurs utilisations à la fois.
Ces produits naturels présentent un grand intérêt comme matière première destinée à
différents secteurs d’activité. Le tableau I.3 regroupe les différentes compositions
chimiques des huiles essentielles et leurs activités biologiques.
Toxicité des huiles essentielles :

La toxicité chronique des huiles essentielles est assez mal connue; on manque aussi de
données sur leurs éventuelles propriétés mutagènes, tératogènes ou cancérogènes. On
connaît par contre beaucoup mieux le risque de toxicité aigue lié à une ingestion massive,
en particulier la neurotoxicité de huiles essentielles à thuyone (thuya, absinthe, tanaisie,
27
sauge, officinale) ou à pinocomphone (hysope): ces cétones induisent des crises

épileptiformes et tétaniformes et des troubles psychiques et sensoriels nécessitant
l'hospitalisation. De telles intoxications ne sont pas exceptionnelles car il ya d’'autres
monoterpènes qui sont également toxiques à des doses fortes: camphre, menthol, (risque de
spasme de glotte chez le jeune enfant), cinéole, et E-anéthole [91,92].
Tableau I.3 : Principaux composés des huiles essentielles et leurs activités biologiques.
Nom de
l'élément Activités biologiques
biochimique
Les acides Anti-inflammatoires très puissants, agissent en calmant le système

nerveux.
Les aldéhydes Anti- inflammatoires, calmants du système nerveux, anti- infectieux et
peuvent irriter les muqueuses et la peau.
Anti-inflammatoires, anti-infectieux, stimulent le système immunitaire à
Les cétones faibles doses, cicatrisantes, calmantes et peuvent être neurotoxiques à
forte dose.
Les huiles essentielles, riches en cétones, ne doivent pas être employées
seules.
Les éthers Effets antalgiques, rééquilibrants nerveux (antidépresseurs psychiques) et
à inversion des effets si les doses sont trop élevées.
Les esters Rééquilibrants nerveux.
Stimulants du système immunitaire et ont des propriétés antiseptiques et
Les antalgiques.
monoterpènes Peuvent occasionner des brûlures importantes sur la peau, donc leur
action doit être limitée dans le temps.
Anti-infectieux et à action contre les microbes, les champignons, les
Les phénols virus et les bactéries, irritants pour la peau et les muqueuses (peuvent
entraîner des brûlures).
Peuvent (en grande quantité) endommager le foie en détruisant les
cellules hépatiques.
Anti-inflammatoires, antiallergiques et ayant un emploi important en

Les cosmétologie
sesquiterpènes car ont une bonne tolérance avec la peau et ont des propriétés
thérapeutiques
28
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Chapitre II
• ACTIVITÉS
BIOLOGIQUES
(ANTIOXYDANTE ET
ANTIBACTÉRIENNE)
Chapitre II Activité Biologique (Antioxydante-Antibactérienne)
II.1. Activité anti-oxydante

II.1.1. Introduction
Nos cellules et tissus peuvent être soumis à une grande variété d’agressions
physiques (traumatisme, irradiation, hyper ou hypothermie), chimiques (acidose, toxines)
et métaboliques (exposition à des xénobiotiques, privation d’un facteur hormonal ou de
croissance). La plupart de ces agressions débouchent sur une expression commune appelée
stress oxydant, dû à l’exagération d’un phénomène physiologique, normalement très
contrôlé et la production de radicaux dérivés de l’oxygène [1].
II.1.2. Stress oxydant

Le stress oxydatif, appelé aussi stress oxydant, se définit comme étant un
déséquilibre entre les systèmes oxydants et les capacités antioxydantes de l’organisme en
faveur des premiers, ce qui conduit à des dommages cellulaires irréversibles [2] (Figure
II.1). Cette perturbation peut avoir diverses origines, telle que la surproduction endogène
d’agents pro-oxydants d’origine inflammatoire, un déficit nutritionnel en antioxydants ou
une exposition environnementale à des facteurs pro-oxydants comme la pollution, un
contact avec le rayonnement gamma, ultraviolet ou même l’ozone, certains pesticides et
solvants, métaux toxiques, exercice intense ou mal géré, consommation de tabac et
d’alcool et aussi prise des médicaments [3].
Figure II .1: Stress oxydant.
37
Cependant, le stress oxydatif est un fonctionnement de l'organisme qui est normal

tant qu'il ne dépasse pas certaines limites. En effet, tous les organismes vivants qui
consomment de l'oxygène produisent des radicaux libres qui sont de petites substances
chimiques très oxydées par le contact avec l'oxygène, et dont nos cellules savent
normalement très bien se débarrasser. Le stress oxydatif devient anormal lorsque les
cellules sont soit dépassées par la quantité de radicaux libres à éliminer, soit ne disposent
pas de ressources anti-oxydantes (vitamines, oligoéléments, enzymes) suffisantes pour les
éliminer [4].
II.1.3. Radicaux libres et espèces réactives
Un radical libre est défini comme toute molécule possédant un ou plusieurs

électrons non appariés [5], cette molécule est très instable et réagi rapidement avec d’autres
composants, essayant de capturer l’électron nécessaire pour acquérir la stabilité, une
réaction en chaine débute lorsqu’un radical libre attaque la molécule stable la plus proche
en lui arrachant son électron, et la molécule attaquée devient elle-même un radical libre [6].
Les espèces réactives oxygénées ERO, classe spécifique de radicaux, incluant les
radicaux libres comme le radical hydroxyl (OH.), le radical superoxyde (O2.) et sa forme
protonnée (HO2.), le radical peroxyl (ROO.) ainsi que les espèces non radicalaires comme
le peroxyde d’hydrogène (H2O2) et l’oxygène (O2), sont produites par divers mécanismes
physiologiques à dose raisonnable (Figure II.2) [7]. Ces espèces réactives de l’oxygène
doivent être neutralisées immédiatement par différents systèmes antioxydants [8].
Figure II.2: Espèces Réactives de l’Oxygène (ERO).

38
II.1.4. Origines des espèces réactives de l’oxygène
Il existe deux sources différentes de ces radicaux libres :
Production endogène
La chaîne respiratoire mitochondriale, dans laquelle les êtres aérobies puisent leur énergie,
joue un rôle capital dans la cellule en couplant l’oxydation de coenzymes transporteurs
d’hydrogène ou d’électrons avec la phosphorylation de l’ADP (Adenosine DiPhosphate) en
ATP (Adenosine TriPhosphate). Les conséquences de cette activité mitochondriale sont
doubles et paradoxales. D’une part, la mitochondrie fournit à la cellule une source
d’énergie importante puisque 36 molécules d’ATP à haut potentiel énergétique sont
générées lors de la réduction de l’oxygène. Par contre, dans les conditions physiologiques,
environ 0,4 à 4 % d’électrons s’échappent, réagissent directement avec l’oxygène dissous
dans le cytoplasme et donnent naissance à des ERO (Figure II.3) [9-10].
Figure II.3 : Formation des Espèces Réactives résultant d’une

réduction progressive de l’oxygène.
Formation par voie exogène

Les ERO peuvent également générées par différents agents non enzymatiques comme les
rayonnements UV induisant la synthèse de radicaux libres (O2•-, OH•) et des molécules
génératrices de radicaux libres (H2O2) par l’intermédiaire d’agents photosensibilisants,
39
ainsi que les radiations ionisantes (Figure II .4). L’ingestion d’alcool ou de médicaments
est suivie de la formation de radicaux libres selon divers mécanismes dont les structures
peuvent jouer le rôle d’accepteurs et de donneurs d’électrons [11].
Figure II.4: Radiations UV de la lumière.
II.1.5. Maladies liées aux stress oxydatif
De nombreuses anomalies pathologiques sont induites par le stress oxydant : baisse

de la fluidité des membranes, diminution de la sensibilité à l’insuline, perturbation de
l’immunité cellulaire, fibrose, dépôts de lipides oxydés, affaiblissement musculaire, lésions
secondaires dues au caractère cytotoxique et mutagène des métabolites libérés notamment
lors de l’oxydation des lipides, malformation des fœtus, formation d’auto-anticorps et
immunosuppression [12,13].
En conséquence, le stress oxydant sera la cause initiale et essentielle de plusieurs

maladies telles que le cancer, la cataracte, la sclérose latérale amyotrophique, le syndrome
de détresse pulmonaire aigu, l’œdème pulmonaire, le vieillissement accéléré, l’Alzheimer,
parkinson, les infections intestinales, le rhumatisme et le diabète [14,15].
II.1.6. Antioxydants
L’organisme a développé des systèmes de défense très efficaces contre la

production des RL. Les molécules contrôlant cette production sont désignées par le terme
«antioxydant». Du point de vue biologique, les antioxydants sont toute substance qui,
présente à faible concentration par rapport à celle du substrat oxydable, retarde ou inhibe
40
significativement l’oxydation de ce substrat [16], et dont les produits de réaction avec

l’oxydant ne sont pas toxiques [17].
II.1.6.1. Caractéristiques des antioxydants:
Un composé est considéré antioxydant in vivo, lorsqu’il requière les propriétés

suivantes [15].
Agi spécifiquement sur les radicaux libres ;

Chélate les métaux de transition ;
Agi en synergie avec d’autres antioxydants pour se regénérer ;
Agi à des concentrations physiologiques relativement faibles ;
La demi-vie de l’antioxydant doit être suffisamment longue pour réagir avec
l’oxydant.
II.1.6.2. Principe des antioxydants:
La réaction d'oxydation est souvent une réaction en chaîne, les anti-oxydants

bloquent cette chaîne et empêchent ainsi les radicaux libres d'attaquer les cellules du corps.
Les antioxydants vont se lier aux radicaux libres et réalisent une réaction d'oxydation
avec eux, ce qui va les rendre inoffensifs et donc rendre impossible leurs oxydations par les
protéines ou les acides gras (Figure II.5).
Figure II.5 : principe des antioxydants.
41
II.1.7. Antioxydants et système de défence
Les antioxydants, analogues de l’acide ascorbique, sont des substances

naturellement présentes dans l'organisme et capables de neutraliser ou stabiliser les
radicaux libres par résonance (Figure II.6). L’organisme possède des enzymes qui peuvent
métaboliser les ERO [18].
Les systèmes de défense contre les dommages induits par ROS/RNS sont classés en
trois catégories : Les antioxydants préventifs qui suppriment la formation de radicaux libre,
les antioxydants piégeurs de radicaux, qui inhibent ou empêchent le déclenchement des
réactions en chaîne et arrêtent la propagation et les antioxydants impliqués dans des
processus de réparation.
Figure II.6 : Actions de la vitamine C sur les radicaux actifs.
En effet, les cellules disposent d’un ensemble complexe de défenses anti-oxydantes

(Figure II.7). Ces dernières peuvent se diviser en systèmes non enzymatiques ; apportées
par l’alimentation sous forme de fruits et légumes riches en vitamines C, E, caroténoïdes,
ubiquinone, flavonoïdes, glutathion ou acide lipoïque ; et systèmes enzymatiques qui se
composent d’enzymes (superoxyde dismutase, glutathion peroxydase, catalase), de
protéines (ferritine, transferrine, céruléoplasmine, albumine) et les systèmes de réparation
des dommages oxydatifs comme les endonucléases [19].
42
Figure II.7 : Aperçu des différentes espèces oxygénées activées (ERO)

et des antioxydants régulateurs de leur production.
II.1.8. Rôle des antioxydants dans la prévention des AVC (accidents

vasculaires cérébraux) et de l’hypertension artérielle
Si les antioxydants ont le pouvoir d’excéder la capacité des radicaux libres à

endommager les tissus de l’organisme et prévenir, particulièrement, les maladies
cardiovasculaires, il parait évident de corréler ce pouvoir à une activité vasodilatatrice.
En effet, Burn et al, 2000 [20] et K.Chira et al. 2008 [21], ont démontré une étroite relation
entre l’activité antioxydante et la capacité vasodilatatrice d’un groupe de composés
phénoliques. De même, d’autres études ont abouti à conclure que les antioxydants agissent
comme vasodilatateurs et par la suite aident à baisser la pression artérielle et prévenir les
attaques vasculo-cérébrales (AVC) [19,22,23].
II.1.9. Méthodes d'évaluation des propriétés anti-oxydantes in vitro

L’activité anti-oxydante d’un composé correspond à sa capacité à résister à
l’oxydation. Les antioxydants les plus connus sont le β-carotène (provitamine A), l’acide
ascorbique (vitamine C), le tocophérol (vitamine E) [24] ainsi, que les composés
phénoliques (acide gallique) (Figure II.8).
43
Figure II.8 : Structure des antioxydants les plus connus.
En revanche, la plupart des structures des antioxydants possèdent des groupes

hydroxyphénoliques dont les propriétés anti-oxydantes sont attribuées en partie, à la
capacité de ces composés naturels à piéger les radicaux libres tels que les radicaux
hydroxyles (OH•) et superoxydes (O2•) [25].
Plusieurs méthodes sont disponibles pour évaluer, in vitro, l’activité anti-oxydante

par piégeage de radicaux différents (Tableau II.1), comme les peroxydes ROO• par les
méthodes ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity) [26] et TRAP (Total Radical-
Trapping Antioxidant Parameter) [27] les ions ferriques par la méthode FRAP (Ferric ion
Reducing Antioxidant Parameter) [28] ou les radicaux ABTS• (sel d’ammonium de l’acide
2,2’-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonique) [29] ainsi que la méthode utilisant le
radical libre DPPH• (diphényl-picrylhydrazyle) [30].
Du point de vue méthodologique, le test au radical libre DPPH• est recommandé

pour des composés possédant la fonction OH [31]. Il s’effectue à température ambiante, ceci
permet d’éliminer tout risque de dégradation thermique des molécules thermolabiles.
44
Le test est largement utilisé au niveau de l’évolution des extraits naturels très riches en
composés phénoliques [32,33].
Tableau II.1: Aperçu des différents tests pour la mesure de la capacité antioxydante globale.
Méthode Nom Générateur de radicaux Standard Mesure/Calcul
TEAC Total équivalent ABTS + horseradisch Décoloration du radical

antioxydant capacité peroxydase + peroxyde Trolox ABTS•- : λ=734 nm
d’hydrogène formation Unité : équivalent Trolox
du radical (ABTS•+)
FRAP Ferric reducing ability Réduction du Fe(III) Changement
of plasma (TPTZ)2 Cl3 Fe(II) d’absorbance à λ=593nm
Unité : FRAP par rapport
à une solution de Fe(II)
CUPRAC Cupric reducing Réduction du cuivre(II) acide Absorbance à λ =450 nm
antioxydant capacity néocuprione urique Unité : équivalent d’acide
urique
DPPH 2,2 DPPH Diminution de
diphénylpicrylhydrazyl Trolox l’absorbance λ=515nm
Unité : équivalent Trolox
TRAP Total radical trapping 2,2-azobis Diminution de la
parameter (2-amidinopropane) Trolox fluorescence de la
dichlorohydrate (APPH) β-phycoérythrine
radicaux peroxyles de (λ=495 nm et λ=575 nm).
nature hydrophile Unité : équivalent Trolox
ORAC Oxygène radical 2.2-azobis Diminution de la
antioxydant capacité (2-amidinopropane) Trolox fluorescence
dichlorohydrate (APPH) (λ=485 nm et λ=520 nm)
radicaux peroxyles de Unité : équivalent Trolox
nature hydrophile
II.1.10.Réaction entre le radical libre DPPH et l’antioxydant [34]

Le composé chimique 1,1-diphényle-2-picrylhydrazyle fut l’un des premiers
radicaux libres utilisé pour étudier la relation structure-activité anti-oxydante des composés
phénoliques. Il possède un électron non apparié sur un atome du pont d’azote. Du fait de
cette délocalisation, les molécules du radical ne forment pas des dimères, DPPH• reste
dans sa forme monomère relativement stable à température ordinaire. La délocalisation
provoque aussi la couleur bleue bien caractéristique de la solution de DPPH•. La mesure de
l’efficacité d’un anti-oxydant se fait en suivant la diminution de la coloration bleue, due a
une recombinaison des radicaux DPPH•, mesurable par spectrophotométrie à λ = 517 nm.
45
II.2. Activité antibactérienne

II.2.1. Introduction
Les bactéries sont responsables de diverses infections dans les organismes vivants.
Les chercheurs ont espéré pouvoir éradiquer certaines maladies avec la découverte des
antibiotiques. Malheureusement la large utilisation de ces médicaments a généré une
résistance croissante des bactéries face aux antibiotiques. Dans cette perspective, il y a eu
un grand intérêt pour la recherche de nouvelles substances biologiquement actives et
efficaces comme alternative à partir des ressources naturelles.
II.2.2.Définition
Les bactéries sont des micro-organismes unicellulaires classés parmi les

procaryotes car ils ne possèdent pas de membrane nucléaire. Ce caractère les distinguent
des autres organismes unicellulaires, classés parmi les eucaryotes (champignons, algues, et
protozoaires). Elles sont divisées en bactéries proprement dites (Bacteria) et bactéries
primitives (Archaea). Toutes les bactéries rencontrées en pathologie appartiennent aux
Bacteria.
Ces dernières ont généralement un diamètre inférieur à 1µm. On peut les voir au
microscope optique, à l’état frais ou après coloration. Leur forme peut être sphérique
(cocci), en bâtonnet (bacilles), incurvée (vibrions) ou spiralée (spirochètes). Les détails de
leur structure ne sont visibles qu’en microscopie électronique [35].
II.2.3.Culture des bactéries
On utilise habituellement, pour cultiver les bactéries, des milieux complexes à base
d’extraits ou d’hydrolysats enzymatiques de viande. Ces milieux peuvent être liquides
(bouillons) ou solides. La solidification des milieux et obtenue par l’addition de l’agar, un
extrait d’algues qui a la propriété de fondre à l’ébullition et de se solidifier à des
températures inférieures à 40°C. En milieu liquide, les bactéries se dispersent librement et
leur multiplication se traduit par un trouble, le plus souvent homogène. Sur un milieu
solide, lorsque la quantité de bactéries est faible, chaque bactérie va pouvoir se multiplier
sur place jusqu’à former un amas de bactéries visible à l’œil nu, que l’on appelle colonie
(Si la densité bactérienne est trop élevée dans l’échantillon ensemencé, les colonies sont
46
confluentes et forment une nappe.). L’emploi de milieux solides permet ainsi le

dénombrement des bactéries viables dans un échantillon [35,36].
II.2.4. Les antibiotiques
Ils sont définis par Turpin et Velu comme : « Tout composé chimique, élaboré par
un organisme vivant ou produit par synthèse, à coefficient chimio-thérapeutique élevé dont
l’activité thérapeutique se manifeste à très faible dose et d’une manière spécifique, par
l’inhibition de certains processus vitaux, à l’égard des virus, des micro-organismes ou
même de certaines cellules des êtres pluricellulaires » [37]. Ils ont la capacité soit de détruire
les bactéries (effet bactéricide), ou d’inhiber leur croissance (effet bactériostatique) [38].
Classification des antibiotiques
Il existe plusieurs classifications des antibiotiques, elles sont basées sur le spectre
d'action, la cible, ou la famille chimique. Cette dernière est la plus fréquemment
rencontrée. Les principales familles chimiques des antibiotiques sont: Bêtalactamines:
pénicilline et céphalosporines; Aminosides: streptomycine, gentamycine; Chloramphénicol
et thiamphénicol; Cyclines: tétracyclines, doxycycline. Macrolides et apparentés :
Erythromycine et oléandomycine [39].
II.2.5. Activité antimicrobienne des extraits des plantes
L’utilisation des antibiotiques conduit dans la très grande majorité des cas à la
sélection de populations microbiennes résistantes. Cette résistance est due à des mutations
chromosomiques ou à l’acquisition de gènes de résistance portée par des éléments
génétiques mobiles (plasmides, phages, transposons et intégrons). Ces résistances ont
conduits à chercher de nouveaux agents antimicrobiens possédant une efficacité plus
importante que les drogues synthétiques, d’une part et bien accepté par l’organisme d’autre
part (sans exercer des effets délétères sur la santé humaine) [40,41].
Beaucoup de groupes de recherches ont étudié l’activité antimicrobienne des
extraits de plantes médicinales telles que fennel (Foeniculum vulgare), peppermint
(Mentha piperita) et thyme (Thymus vulgaris), ils ont trouvé que ces extraits sont actifs
non seulement contre les bactéries mais aussi contre les champignons, les levures et les
virus [42,43].
47
D’autres groupes de chercheurs ont franchi une étape plus loin, ils ont isolé et identifié les
métabolites responsables de l’activité antimicrobienne des extraits de plantes, cette étape
constitue une plateforme pour plusieurs implications incluant l’industrie pharmaceutique,
la médecine alternative, et la thérapie naturelle [44].
II.2.6. Description des bactéries étudiées
Les bactéries représentent un groupe étonnamment complexe et fascinant. Ce sont

des organismes cellulaires simples appelés Procaryotes qui ne contiennent pas de noyaux et
qui sont d’habitude trouvés en très grand nombre parce qu’ils peuvent se multiplier
rapidement. Bien que les bactéries soient microscopiques, on distingue différentes
morphologies. Les plus communes sont les tiges, les coccidies (circulaire) et la spirale.
Elles peuvent être grandes, petites, ovales grosses, longues, courtes ou encore plus
épaisses. Les bactéries peuvent être divisées en deux groupes (Gram positif et Gram
négatif), basés sur la différence de la structure et de la composition chimique de la paroi
cellulaire (Figure II.9).
Figure II.9: Structure de la paroi bactérienne.
48
a) Escherichia coli
C’est une bactérie à Gram négatif, commensal du tube digestif de l’homme et de

l’animal et qui appartient à la famille des Entérobactéries. Elle est de forme non sporulée,
de type aérobie facultative et généralement mobile grâce aux flagelles. Sa longueur varie
de 2 à 6 μm alors que sa largeur est de 1,1 à 1,5 μm. E. coli représente la bactérie la plus
impliquée dans les infections aigues de l’appareil urinaire, elle provoque également les
diarrhées d’été, diarrhée infantile et les intoxications alimentaires [45].
b) Staphylococcus aureus
Ce sont des cocci Gram positif appartenant à la famille des Micrococcaceæ avec un
diamètre de 0,5 à 1,5 μm, de forme non sporulée qui tendent à se grouper en paires et en
petites chaines et habituellement non capsulée ou possédant des capsules limitées. Elles
sont anaérobies facultatives. Staphylococcus aureus représente l’agent commun des
infections postopératoires de blessures, endocardite aigue et intoxication
alimentaire [46].
c) Pseudomonas aeruginosa
Ce sont des bacilles Gram négatif, de forme non sporulée, elles sont aérobies et
mobiles grâce à la présence de 1 à 2 flagelles. Ces bactéries synthétisent deux principaux
types de pigments pyocyanine : bleue phénazine, pyoverdine: jaune vert. Il s’agit de
bactéries résistantes à plusieurs antibiotiques [47]. Pseudomonas aeruginosa est responsable
de 16% des cas de pneumonie nosocomiale, 12% des infections urinaires et 8% des
infections suites aux blessures chirurgicales [48].
d) Candida albicans
Actuellement, le genre Candida comprend 81 espèces de champignons
levuriformes. Candida albicans est le plus souvent à l’origine de la plupart des
manifestations pathologiques chez l’homme. On la rencontre habituellement, à l’état
saprophytique, dans le tube digestif de l’homme et, par contiguïté, elle peut être retrouvée
au niveau de la muqueuse vulvo-vaginale, ou de la bouche. Mais on ne retrouve
qu’exceptionnellement Candida albicans au niveau de la peau. Cette espèce est responsable
de plus de 80% des infections connues sous le terme de candidose, comme les infections
superficielles cutanées et superficielles muco-cutanées [49].
49
e) Enterococcus faecalis
Gram positif anaérobies facultatifs, flore normale du tractus gastro-intestinal, des
voies génitales féminines, et de la cavité orale, elles provoquent des infections des voies
urinaires, des plaies et des tissus mous entrainant une endocardite en présence de valvules
cardiaques déjà lésées. Enterococcus faecalis est résistant aux β-lactames, aux
aminoglycosides et à la vancomycine [50].
f) Salmonella
Bacille à Gram négatif appartenant à la famille des Enterobacteriacae et au genre
Salmonella. Ce genre comporte 2 espèces (S. enterica et S.bongori). C est la première
cause de toxi-infections alimentaires collectives bactériennes dans le monde. Elle est l’une
des préoccupations majeures des laboratoires de contrôle de qualité alimentaire. S.
Typhimurium est largement répandue dans les différents réservoirs animaux (porcs,
bovins, volailles…) et dans certaines denrées destinées à l’homme [51].
g) Klebsiella oxytoca
Non mobiles, capsulés avec colonies à aspect de muqueuses sensibles à la

Gentamicine, la Kanomycine, la Céphalosporine et la Polymyxine B mais pas sensibles à
la pénicilline. Commensales du tube digestif, elles provoquent des infections urinaires ou
respiratoires, parfois compliquées de septicémies et d’infections nosocomiales [52].
Les Klebsiella sont des Enterobacteriaceae à bacilles gram négatif, immobiles et

capsulées (sauf 6 % des souches de K. pneumoniae subsp. pneumoniae). Elles sont
abondantes dans le sol et les eaux et sont des fixateurs de l'azote atmosphérique. [53].
h) Vibrio
Vibrio cholerae est un bacille Gram négatif en forme de bâtonnet incurvé et
oxydase-positif. Il est doté d'une grande motilité et d'un seul flagelle polaire. Cette bactérie
de 1 à 3 µm par 0,5 à 0,8 µm est un anaérobie facultatif de la famille des Vibronaceae. Les
sérogroupes O1 (biotypes classique et El Tor) et O139, sont les principaux agents
pathogènes en cause dans les épidémies de choléra. Les sérogroupes pathogènes produisent
la toxine cholérique (CT), alors que les souches non pathogènes peuvent ou non produire
cette toxine [54].
50
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55
Chapitre III
• ÉTUDE
SYSTÉMATIQUE DE
LA PLANTE
SÉIECTIONNÉE
Chapitre III Étude Systématique de la Plante Sélectionnée
I.1.Introduction
Depuis longtemps, les plantes médicinales furent une source inépuisable permettant
de traiter certaines maladies et pathologies souvent mortelles.
En Algérie, les plantes médicinales forment un groupe relativement important et un
réservoir inestimable de molécules bioactives, cependant un nombre limité d’espèces est
étudié en terme d'investigation phytochimique et de valorisation biologique.
Au cours de nombreux travaux de recherche, une espèce a été récoltée : Teucrium
polium L.; elle appartient à la famille botanique des lamiacées.
Ce chapitre présente une étude approfondie à propos de cette plante. Il met en
valeur des données bibliographiques issues de son genre, sa famille et son usage en
médecine traditionnelle.
III.2. Présentation de la région de Biskra
La wilaya de Biskra est située au Nord-est Algérien à environ 470 Km du sud-est

d'Alger, elle s'étend sur une superficie de 21671,2 Km2 et compte actuellement 12 Daïras et
33 communes.
Elle est limité au : nord par la wilaya de BATNA, nord-est par la wilaya de
KHENCHELA, nord-ouest par la wilaya de M'SILA, sud-est par la wilaya d’EL OUED,
sud-ouest par la wilaya de DJELFA et au sud par la wilaya d'OUARGLA.
III.3. Site de prélèvement :
Djemourah est une commune de la wilaya de Biskra, situé à 37 km du nord de la

wilaya. Elle est limitée au nord par les communes de :Ain Zaâtout et El kantara, au sud par
la commune de Branis, à l'est par la commune de Tigharghar et à l’ouest par la commune
d’El Outaya (Figure III.1 et Figure III.2). Elle couvre une superficie de 24917 Km. Son
climat est chaud et sec en été et froid et sec en hiver.
Les paramètres géographiques de notre station d’étude sont représentés dans le
tableau suivant :
Tableau III.1: Situation géographique et bioclimatique de la station d’étude.

Station Partie étudiée Longitude (O) Latitude (N) Etage
bioclimatique
Djemourah Partie aérienne 5° 50′ 39 35° 4′ 11 Aride (sec)
(Biskra)
56
Figure III.1 : Une image brute de Google Earth de la commune Djemourah.
Figure III.2. : Limite administrative de la commune de Djemourah.
57
III.4. Présentation de la plante : Teucrium polium L.

III.4.1. La famille des Lamiacées.
La famille des Lamiacées ou Labiées est l’une des familles les plus utilisées
comme source mondiale d’épices et d’extraits à fort pouvoir antimicrobien, antifongique,
anti-inflammatoire et antioxydant [1,2]. Les huiles essentielles caractérisent cette famille.
La famille des lamiacées est une importante famille de plantes dicotylédones qui
comprend environ 6 900 espèces et près de 258 genres [3], largement répartie dans le basin
méditerranéen. Elle est composée surtout de plantes herbacées, d’arbustes et de quelques
arbres. Cette famille est divisée en deux principales sous-familles: les Stachyoideae et les
Ocimoideae. Les lamiacées sont des herbacées ayant la consistance et la couleur de
l’herbe, parfois sous-arbrisseaux ou ligneuses [4]. Une grande partie de ces plantes sont
aromatiques et riches en huiles essentielles d’où leur intérêt économique et médicinal
puisqu’elles permettent de produire des huiles essentielles, des condiments
(sauge, thym, basilic, menthe etc.), ainsi que des infusions très prisées et fournissant des
antibiotiques naturels utilisés en aromathérapie, en cosmétique et aussi pour la fabrication
des parfums et des produits pour la peau [5].
Entre autres, un très grand nombre de genres de la famille des Lamiacées sont des sources
riches en terpénoides, flavonoïdes, iridoides glycosylés et en composés phénoliques [6].
III.4.2. Systématique de la famille des Lamiaceae
D’après la nouvelle classification de l'APG 3 (Angiosperms Phylogeny Group 3, 2009) [7],

la famille des Lamiacées est classée comme suit :
Embranchement : Embryophytes
Sous Embranchement : Trachéophytes
Super Classe : Spermaphytes
Classe : Angiospermes
Grade : Triporées évoluées
Grade : Astéridées
Grade : Lamiidées (Euastéridées I)
Ordre : Lamiales
Famille : Lamiacées
58
III.4.3. Caractères généraux des Lamiacées [8,9]
- Les tiges sont quadragulaires, au moins dans leur jeune âge, et sont à rameaux opposés,
- Les feuilles opposées sont simples, parfois amplexicaules, toujours sans stipule et à limbe
penninerve,
- Les inflorescences formées par de faux verticilles axillaires ou glomérules proviennent de
la réunion de 2 cymes bipares,
- Les fleurs hermaphrodites ou unisexuées sont accompagnées de bractéoles et ont évolué
vers l’adaptation à la pollinisation par les insectes (entomophilie),
- Le calice est gamosépale persistant à 5 sépales soudés,
- La corolle est gamopétale et zygomorphe. Elle comprend un tube plus ou moins long,
droit ou incurvé et souvent poilu. Le limbe est bilabié, partagé en 5 lobes (2 pour la lèvre
supérieure et 3 pour la lèvre inférieure),
- Les étamines sont au nombre de 4 : 2 grandes et 2 petites (sauf pour le genre Mentha qui
en compte 5),
- Le gynécée est formé de 2 carpelles formant un ovaire biloculaire reposant sur un disque
glanduleux et possédant 2 ovules par loge. Chaque loge se subdivise, par une fausse
cloison, en 2 logettes uniovulées. Les ovules sont anatropes ascendants à raphé interne,
- Le fruit est un tétrakène formé de 4 nucules secs enveloppés par le calice.
III.4.4. Genre Teucrium
a) Présentation
Nom générique des germandrées (labiées) désignant en Latin Teucrium, mot venant
du grec teukris. Le genre Teucrium fait partie des genres les plus importants de la famille
des Lamiacées et est réparti en 340 espèces et variétés environ. D'un point de vue
taxonomique, elles sont identifiables grâce à la forme du calice et de l’inflorescence [10].
b) Habitat et répartition géographique du genre Teucrium
Le genre de Teucrium est l’un des plus riches en espèces, qui se trouve en
abondance au sud–ouest de l’Asie, de l’Europe et du nord de l’Afrique. Au nord
(abandonnément trouvée dans le secteur Irano-Turanien, principalement méditerranéen et
occidental), elle pousse dans les pelouses arides, les rocailles de basse altitude, les collines
et les déserts arides [11]. Cette plante est présente dans la majorité des pays du Moyen-
Orient et de la Méditerranée [12,13].
59
Dans le monde
Ainsi, réparti sur différents pays du bassin méditerranéen, le genre Teucrium
(Lamiaceae) est représenté en Iran par 13 espèces dont l'orientale avec quatre sous-espèces
accroissantes, se sont : orientale, de l'espèce d'orientale de Teucrium, glabrescens, de
l'espèce d'orientale de Teucrium, taylori, de l'espèce d'orientale de Teucrium, et
gloetrichum, de l'espèce d'orientale de Teucrium [14].
En Algérie
Elle est assez commune dans l’espace méditerrano-saharien, plus rare au Sahara
septentrional et au Tassili, elle pousse dans les lieux rocailleux et secs, les lits arides, les
roches et les sables [3,15]. C’est une plante méditerranéenne, commune dans l’atlas saharien.
Elle pousse surtout dans les lits pierreux des oueds et dans les roches en altitude entre 1200
et 2600 m [16,17].
Selon OZENDA [15], les espèces les plus répandues de Teucrium en Algérie sont :
pseudo-chamaepitys, campanulatumbotrys, flavum, Kabylicum, lucidum, Polium,
mauritanicum, montanum, compactum, albidum, bracteatum, buxifolium, atratum,
santaequézel, simonneau, ramosissim, scordiodes, ,fruticans, Spinosum et resupinatum.
III.5. Etude monographique de l'espèce

Cette plante a été identifiée par Mr S. DOUMANDJI professeur à l’Institut ENSA,
l'école nationale supérieure d'agronomie -ALGER-.
III.5.1. Systématique de la plante
• Règne: planta
• Embranchement : Angiospermes
• Classe : Dicotylédones
• Ordre : Tubiflorale
• Famille : Labiées ou Lamiacées
• Genre : Teucrium
• Espèce : Polium L.
• Sous espèce : Thymoides
Figure III.3. Représente la plante étudiée Teucrium polium L.
60
III.5.2. Nom de la plante
• Nom Local : Djada ; jaad ; Djaida

• Nom arabe : El Khayata
• Nom Amazigh : Thazirekth; Felfla-Timzourin; Haida; Timtchich.
• Nom français : Pouliot de Montagne
• Nom en Italien : Camedrio polio, Canitola polio.
• Nom en espagnol : Poleo montano, Tomillo terrero, Zamarilla.
III.5.3. Description de la plante
C’est une plante tomenteuse, blanchâtre, vivace de 10 à 30 cm moyennement velue

et à odeur forte et désagréable, ces tiges sont nombreuses, ligneuses à base révolutées, en
général à marges, grêles, dressées ascendantes et plus ou moins ramifiées. Les feuilles sont
sessiles, oblongues ou linéaires, cunéiformes, crénelées, à bords plus ou moins enroulés
régulièrement dentés et d’une couleur verte pâle en dessus et blanche en dessous.
Les inflorescences sont en têtes denses capituliformes serrés ; les fleurs jaunâtres et
globuleuses ou ovoïdes, courtement pédonculés. Le calice, petit (3 à 4 mm) et en cloche,
ayant des dents courtes triangulaires presque égales et très velues.
La corolle, à tube ne dépassant pas le calice, velue en dehors, a des lobes latéraux et
linéaires, le médian est ovoïde; les fruits murs et secs, d’une couleur noire, légèrement
creusés, rocailleux et sèches.
La floraison est en la période, du mois d’avril au mois de juin ; les fleurs sont d’un
jaune doré de 5 mm et la récolte est en printemps–été ; commun dans les broussailles et les
friches [6,18].
Teucrium polium : Appartient à la série quatre
● Corolle bilabiée; lèvre inférieure de la corolle à cinq lobes inégaux corolle caduque
blanche- rocailles.
● Calice vert grisâtre.
● Feuilles linéaires ou lancéolées à marge, en général révolutée, denticulées-crénelées,
inflorescences en têtes denses capitulifomes ou un peu allongées, à bractées florales
réduites mais ressemblent aux feuilles.
61
● Feuilles linéaires vert-grisâtres à marge pratiquement entière, quelques–unes: seulement

crénelées. Cf supra : ssp Thymoides (pomel) batt, feuilles à marges distinctement crénelées.
● Espèces très polymorphes où la détermination des micro-morphes reste toujours

délicate [3].
III.6. Valorisation des plantes associées à la plante étudiée
L’analyse de cortège floristique, du point de vue physionomique, nous révèle que

Teucrium polium L. sous espèce des thymoides se trouve en association avec certaines
espèces de la strate herbacée : Artemisia herba alba, Astragalus armatus, Atractylis flava,
Gefn et, Annabasis articulata, mais d’une manière générale, cette association se développe
dans les mêmes conditions climatiques, ce sont les exigences édaphiques qui font leur
différence.
Signalons la dominance des espèces herbacées en coussinet, généralement épineux,

résultat d’un pâturage intensif sur les autres espèces comme Artemisia herba alba et
Annabasis articulata.
Le plus remarquable, c’est que l’espèce Teucrium polium L se sert des espèces épineuses
comme bouclier pour assurer son développement contre le cheptel (voir les photos des
Figures III.4-6).
Figure III.4: Association des espèces épineuses avec Teucrium polium L. Thymoïdes.
62
Figure III.5: Alliance des différentes espèces avec Teucrium polium L. Thymoïdes.
Figure III.6: Astragalus armatus avec Teucrium polium L. Thymoïdes.
63
III.7. Données phytochimiques de la plante
Plusieurs chercheurs ont évalué la composition chimique de Teucrium polium L.

développée dans différents secteurs géographiques. La plupart de ces études, basées sur
l'analyse des extraits par des méthodes chromatographiques, ont révélé la présence de
composés polyphénoliques tels que les flavonoïdes et les tanins, ainsi que d’autres
composés, tels que les saponines, les stéroïdes les terpènoides et les huiles essentielles.
Les composés chimiques thérapeutiques trouvés dans Teucrium polium L. comprennent:

les polyphénols (Proestos et al., 2006); Stefkov et al., 2009; Djabou et al., 2012) [19,20,21],
les diterpénoïdes avec un squelette neoclerodane, et avec plus de 220 diterpènes [22], les
huiles essentielles principalement monoterpéniques/ les sesquiterpènes hydrocarbures et
sesquiterpènes oxygénés Cozzani et al., 2005 [23]; Kabouche et al., 2007 [24]; Saroglou et al.,
2007 [25]; Moghtader,2009 [26]; Belmekki et al.,2013 [27]; Elmasri et al., 2014 [28]; Sadeghi et
al., 2014 [29]; Khani and Heydarian, 2014 [30], les glycosides phenylethanoides tels que la
verbascoside, poliumoside et la vandulifolioside Oganesyan et al., 1991; Ladjel et al.,1994
[31,32] et les glycosides de flavones avec aglycones très méthylés Rizk et al., 1986 [33];
Harborne et al., 1986 [34]; Kawashty et al., 1999 [35] et Sharififar et al., 2009 [36].
En 2009, Stefkov et al. [20], ont identifié six flavones aglycones: luteoline, apigenine,
diosmetine, cirsiliol, cirsimaritine et cirsilineol, cependant les composés stéroïdiens ont été
isolés par Ulubelen et al., 1994 [37] et Kisiel et al., 1995 [38]. L'analyse des principes actifs
révèle la présence des saponines Hassan, 2007 [39], des tanins et des alcaloïdes (Shakhanbeh
et Atrouce, 2001; Parsaee et Shafiee-Nick, 2006 [40,41]. Le Tableau II cité dans l'annexe
présente quelques exemples de composés isolés du genre Teucrium.
III.8. Utilisation de la plante
Très tôt au cours de l'évolution, les hommes, pour se soigner, utilisèrent les
ressources présentes dans leur environnement naturel. Les plantes tinrent une place très
importante qui ne s'est jamais démentie. Teucrium polium L. possède un large spectre
d'effet pharmacologique:
64
Plante vermifuge et stimulante, tout simplement.

Dans la médecine folklorique iranienne, Teucrium polium est employé comme
anticonvulsant [11].
Des espèces de Teucrium polium ont été employées en tant qu'herbes médicinales
pendant plus de 2000 an comme diurétique, inotropique et chronotropique [42], tonique,
antipyrétique[24], cholagogue et anorexique [43].
Le feuillage de Teucrium polium légèrement poivré, était couramment utilisé pour
relever les salades ou parfumer les fromages de chèvre. Une infusion des feuilles et
des fleurs était ainsi consommée comme boisson régénératrice [18].
En médecine traditionnelle, le Teucrium est employée comme analgésique,
antispasmodique et hypolipidémique. Cette plante peut avoir quelques intérêts d’ordre
clinique: cas de désordres stomacaux [44,45] et gastro-intestinaux tels que la colite.
L'huile essentielle de Teucrium polium possède une activité antispasmodique
puissante ; L'extrait éthanolique de Teucrium polium s'est avéré, possédant des
activités anti-inflammatoires, anticancéreux et antioxydants [46,47,48,49].
D'autres espèces de Teucrium possèdent, également des effets pharmacologiques,
comme combattre les rhumatismes, les troubles gastriques, la fièvre et les mucosités
abondantes, elles accélèrent la cicatrisation des blessures [50,51].
Seulement la tradition apporte des indications de traitement symptomatique de
diarrhées légères et actuellement celles de l’hygiène buccale.
Teucrium polium a été utilisée (partie aérienne) dans le traitement symptomatique des
bouleversements digestifs et dans des états neurotoniques des adultes et des enfants,
particulièrement dans des bouleversements plus petits du rêve [52].
L’utilisation de l’extrait éthanolique de Teucrium polium sur des milieux de culture de
Saccharomyces, in vitro, a mené à diminuer le taux des acides gras et à bloquer la
peroxydation au niveau des érythrocytes, il a montré ainsi des effets antibactériens et
antifongiques [53,54].
Cette plante est largement distribuée comme agent hypoglycémiant [55].. Sa décoction
dispose d’un effet hypoglycémiant chez les rats normoglycémiques par rapport aux
modèles hyperglycémiques induits par la streptozotocine [56].
Par conséquent, d'autres investigations sont nécessaires maintenant pour élucider le
mécanisme d'action pharmacologique et identifier les composants bioactifs
responsables de telles actions afin d'expliquer leur efficacité thérapeutique [57].
65
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70
Chapitre IV
• MATÉRIELS ET
MÉTHODES
Chapitre IV Matériels et Méthodes
IV.1. Introduction
Les plantes aromatiques constituent une richesse naturelle très importante dont la
valorisation requière une parfaite connaissance des propriétés à mettre en valeur. Les
propriétés des plantes dépendent de la présence d’agents bioactifs variés et appartenant à
différentes classes chimiques. L’intérêt porté sur ces plantes n’a pas cessé de croître au
cours de ces dernières années. A cet effet, on s’est intéressé à l’une des espèces de la
famille des Lamiacées : le Teucrium polium L. ssp thymoïdes et il est important de définir
leurs identités, connaitre leurs compositions chimiques et rechercher leurs activités
biologiques. Dans cette partie expérimentale, deux axes ont été envisagés : Le premier axe
concerne l’ étude phytochimique, suivie par la quantification des teneurs en polyphénols
par dosages. Dans le deuxième, nous nous sommes intéressés au pouvoir antioxydant et à
l'activité antibactérienne des extraits issus de la partie aérienne de cette plante. Ce travail a
été effectué selon le plan illustré dans la (Figure IV.1).
Matière végétale
Récolte + Séchage+ Broyage
Criblage Extraction Calcination

phytochimique
Huile Ployphénols
essentielle
Dosage
Analyse Activité biologique
Rendement Activité antioxydant:

Test DPPH
CCM
Activité antibactérienne:
HPLC Méthode des disques
Figure IV.1: Plan général de la partie expérimentale.
71
IV.2.Récolte, Séchage et Broyage

Le matériel végétal est constitué de la partie aérienne (tiges, feuilles, fleurs) de la
plante Teucrium Polium L. sous espèce des Thymoïdes, il a été récoltée au mois de Mai
dans la région de Beni souik de la wilaya de Biskra. Cette plante a été séchée à l’abri de la
lumière et de l’humidité à température ambiante. Apres séchage, puis broyage, cette
dernière est réduite en poudre et stockée soigneusement dans un flacon en verre bien fermé
dans un endroit sec, en vue de son utilisation ultérieure.
IV.3.Criblage phytochimique
Le screening chimique d’une drogue végétale représente toujours la première étape
de l’étude chimique et permet d'orienter les recherches ultérieures.
Les techniques de détection utilisables pour un "screening" des substances actives doivent
être rapides, simples et sensibles afin de ne mettre en œuvre qu'une faible quantité de
matière végétale. Ces méthodes sont donc limitées à la détection de quelques groupes
chimiques. Les tests phytochimiques sont basés sur des essais de solubilité, de réactions de
coloration et de précipitation ainsi que sur des examens en lumière ultra violette.
IV.3.1.Tests chimiques d’identification
On procède aux tests chimiques d’identification, selon les méthodes décrites par Békro [1]
et Béourou [2] avec quelques modification, de la manière suivante:
Alcaloïdes :
Dans un erlenmayer de 50ml, introduire 6g de la Poudre végétale et 30ml d’une solution

d’acide sulfurique à 10%. Agiter pendant 2 minutes puis filtrer avec papier filtre. Mettre le
filtrat dans 4 tubes:
• Dans le 1er tube, ajouter quelques gouttes de réactif de MAYER (couleur jaunâtre).
• Dans le 2ème tube, ajouter quelques gouttes de réactif de BOUCHARDAT (couleur
brune).
• Dans le 3ème tube, ajouter quelques gouttes de réactif de DRAGENDORFF
(couleur orangé).
72
Polyphénols :
Dans un erlenmayer, introduire 6g de poudre végétale, ajouter un mélange d’eau distillée
6ml et 12ml d’acétone. Placer au bain marie (60°C max) pendant 5min environ, en
agitant de temps en temps. Eviter une trop forte évaporation de l’acétone. Placer le filtrat
dans un tube à essai de 16ml et lui ajouter 2 gouttes de solution de perchlorure ferrique
(FeCl3).
Flavonoïdes :
Macérer 10 g du produit dans 150ml d’HCl à 1% pendant une nuit, filtrer et procéder aux
tests.
• Prendre 10ml du filtrat, le rendre basique par NH4OH. L’apparition de la couleur

jaune claire indique la présence de flavonoïdes.
• Ajouter à 5ml du filtrat, 2,5ml d’alcool amylique, la phase alcoolique colorée en
jaune indique la présence de flavonoïdes libres.
• Evaporer la phase aqueuse du test précédent sous vide, ensuite dissoudre le
précipité dans 3ml d’HCl à 1% en chauffant légèrement, refroidir et ajouter 2,5ml
d’alcool amylique. L’apparition de la couleur jaune indique l’existence de
glycosides de flavones.
Tanins :
Prendre 10g du produit, l’extraire avec de l’alcool éthylique 50°, filtrer puis tester le filtrat
avec quelques gouttes d’une solution de FeCl3. L’apparition d’une coloration verdâtre ou
bleu - noir indique la présence des tanins.
La différentiation entre les tanins galliques et catéchiques se fait par le réactif de Stiasny
(méthanal-acide chlorhydrique concentré 2 : 1v/v).
Les tanins condensés : (Stiasny)
Dans un erlenmayer, introduire 6g de poudre végétale, Ajouter un mélange d’eau distillée

6ml et 12ml d’acétone. Placer au bain marie (60°C max) pendant 5min, en agitant de temps
en temps. Eviter une trop forte évaporation de l’acétone. Placer 15ml de filtrat dans un
erlenmayer et lui ajouter 8ml de réactif de Stiasny. Porter au bain-marie pendant 30min.
L’apparition d’un précipité montre la présence des tanins condensés.
73
Les tanins galliques:
Pour révéler les tanins galliques, filtrer le mélange précédemment chauffé et prélever
0,5ml du filtrat. Saturer ensuite le filtrat avec de l’acétate de sodium, ajouter à ce mélange,
100μl d’une solution de FeCl3 à 1%. Le développement d’une teinte bleu-noire indique la
présence des tanins galliques non précipités par le réactif de Stiasny.
Saponosides :
Prendre 2g de produit sec, le chauffer dans 80ml d’eau distillée, filtrer et refroidir la
solution et agiter le filtrat. L’apparition de mousse persistante indique la présence des
saponosides.
Coumarines :
Dans un erlen, introduire 6g de la poudre végétale, 16ml d’éthanol et 2ml de l’eau
distillée. Agiter pendant 2min puis filtrer. Prendre 2ml de filtrat, lui ajouter 0,5ml de
NaOH 10%, chauffer jusqu'à l’ébullition, après le refroidissement ajouter 4ml d’eau
distillée. Ajouter quelque goutte de HCl concentré, la présence de la couleur jaune indique
la présence des coumarines.
Cardénolides :
Prendre 1g du produit sec, macérer dans 20ml d’eau distillée et filtrer, prélever 10 ml du
filtrat. Celui-ci est ensuite extrait avec un mélange de 10ml de CHCl3 et C2H5OH.
Evaporer la phase organique, dissoudre le précipité dans 3ml d’acide acétique glacial,
ajouter quelques gouttes d’une solution de FeCl3 suivie de 1 ml d’H2SO4. La présence de la
couleur verte bleue dans la phase acide implique la présence des cardénolides.
Huiles essentielles :
Prendre environ 10g du produit sec broyé, le mettre dans un appareil à entraînement à la
vapeur selon la norme (E.P.1953), chauffer doucement pendant 4 à 5 heures. L’apparition
d’une couche huileuse sur le distillat indique la présence des huiles essentielles.
Caractérisation des Stérols :

On ajoute 0,5ml à 1ml d’acide sulfurique concentré à une solution chloroformique à 10%,
la phase inférieure acide prend une coloration d’abord jaune ensuite rouge foncé.
74
Terpènes:
Une quantité de 0,3 à 0,4g de la matière sèche est macérée dans 15ml de méthanol à 70%,
puis le filtrat est évaporé à sec. Le résidu obtenu est dissout dans le chloroforme. On ajoute
ensuite quelques gouttes d’acide sulfurique concentré au fond du tube sans agiter. La
formation d’une coloration jaune qui passe au bout de deux minutes au rouge, révèle la
présence des terpènes.
Sucres réducteurs :
On ajoute 1ml de liqueur Fehling à 5ml d’extrait puis on chauffe les tubes contenant les
mélanges au bain marie à 40°C. Un test positif est indiqué par l’apparition d’une couleur
rouge brique.
Amidon :
La valeur de 2g de poudre végétale est ajoutée à quelques gouttes d’iode I2, la formation
d’une coloration bleue violette indique la présence d’amidon
IV.4. Contrôle d’une drogue végétale
IV.4.1. Dosage de l’eau
Les drogues végétales sont séchées à des fins de conservation, une dessiccation
insuffisante peut en effet entraîner le développement de moisissures ou de levures. Cet
essai sert à déterminer et à limiter la quantité d’eau contenue dans la drogue sèche dans les
conditions indiquées. Le dosage de l'eau dans les drogues végétales permet de vérifier la
bonne conservation ainsi que le bon conditionnement de ceux ci. Il faut, en outre tenir
compte de la teneur en eau dans les dosages de principes actifs. D’après les normes
décrites dans la pharmacopée européenne (2000), Cette teneur ne dépasse pas les 10 %.
Gravimétrie (Perte à la dessiccation) : Dessiccation à l’étuve
a) Principe :
Chauffées pendant un temps suffisant à 100-105°C, les drogues convenablement
divisées subissent une perte de masse qui correspond sensiblement à la quantité d'eau
qu'elles contenaient.
75
b) Technique :
Nous avons opéré sur un échantillon homogène, broyé ou concassé. Nous avons,
ensuite introduit 2g de la poudre dans un verre de montre préalablement taré. Le verre et
son contenu est placé dans l’étuve à 100°C pendant 24h.
Après refroidissement dans un dessiccateur renfermant un desséchant (gel de

silice), le verre de montre est pesé.
c) Calcul de la teneur en eau

ˋ
X= ∗ %
m: masse de l’échantillon avant le séchage ;
mˋ : masse de l’échantillon après le séchage = masse après séchage (creuset + échantillon)
– masse du creuset vide.
IV.4.2. Dosage de cendres

IV.4.2.1. Teneur en cendres totales :
a) Principe :
Il s’agit d’évaluer la quantité de substances résiduelles non volatilisées lorsque la
drogue est complètement calcinée. D’après les normes décrites dans la pharmacopée
européenne (2007), le teneur en cendres totales est au maximum 14,0 %.
b) Technique :
Dans un creuset en porcelaine, préalablement taré, on introduit 5g de notre poudre
végétale. On calcine au four à 600°C pendant 6h (toute la matière organique brûle et on ne
récupère que la partie inorganique de l’échantillon), on laisse refroidir dans un dessiccateur
et on pèse.
c) Calcul :
M : masse finale (creuset + cendres totales) ; =
ˋ
∗ %
Mˋ: masse du creuset vide ;
E : prises d’essais de la matière.
IV.4.2.2. Teneur en cendres sulfuriques

a) Principe
Les cendres sont des substances résiduelles non volatilisées recueillies lorsque
l’échantillon de drogue est calciné avec de l’acide sulfurique. Ces dernières déterminent la
quantité de substances inorganiques (impuretés inorganiques) contenues dans la drogue.
76
D’après les normes décrites dans la pharmacopée européenne (2005), Cette valeur est au
maximum 0,1 % déterminé sur 1,0g.
b) Technique :
Dans un creuset en porcelaine taré(T), on introduit une prise d’essai de 2 g de la
poudre et on pèse l’ensemble (M). La poudre est ensuite humectée avec H2SO4 à 50% et
laissée dans l’étuve pendant 24 heures à 100°C (jusqu’à évaporation à sec), le creuset est
mis dans un four à 600°C pendant 6 heures (calcination maintenue jusqu'à la disparition
des particules noires) et la poudre est enfin pesé après refroidissement dans un dessiccateur
(Mˋ).
c) Calcul :
La masse des cendres sulfuriques (M CS) est donnée par la formule : M CS= Mˋ- T
La masse de la prise d’essai : M PE = M-T
% = ∗ %
Le pourcentage des cendres sulfuriques (% CS) est donné par :
IV.5.Méthodes d’extraction
IV.5.1.Extraction des huiles essentielles par hydrodistillation :
Hydrodistilation :
C’est une technique largement utilisée pour l’extraction des huiles essentielles.
L’avantage de cette technique réside en la diminution de la température de distillation. Les
composés volatils sont donc entraînés à des températures beaucoup plus basses que leur
température d’ébullition, ce qui évite leur décomposition.
L’opération consiste à introduire 50g de masse végétale séchée dans un ballon de
1litre, on y ajoute une quantité d’eau distillée correspondant à 2/3 du volume du ballon.
L’opération d’extraction est réalisée pendant 6 heures à partir du début d’ébullition. Le
distillat obtenu est soumis à une extraction liquide-liquide, trois fois par le chloroforme
(CHCl3) et la phase organique est séchée par le sulfate de magnésium anhydre (MgSO4).
Après une simple filtration, on procède à l’évaporation pour l’élimination totale du solvant.
Enfin l’huile obtenue est conservée dans un flacon fumé et bien scellé à une température de
5°C.
77
IV.5.2.Extraction des polyphénols par macération:
La macération est une méthode traditionnelle et couramment employée. Elle

consiste en la mise en contact du matériel végétal avec le solvant sans ou avec agitation.
Cette procédure, malgré les temps longs d'extraction et l'utilisation d'une quantité
considérable de solvants, est relativement peu coûteuse. En plus, elle se déroule à
température ambiante, ce qui est très positif pour conserver l'intégrité des molécules
polyphénoliques [3, 4].
Technique :
Pour extraire les polyphénols de la plante étudiée, on a macéré 200 g de poudre végétale,
après séchage et broyage dans un mélange hydro-alcoolique (méthanol/eau 70/30 : V/V)
trois fois, avec agitation de temps en temps à la température ambiante et à l'obscurité, en
renouvelant le solvant toutes les 24heures. Les extraits hydroalcooliques sont réunis et
évaporés sous pression réduite à une température inférieure à 50°C jusqu’à l’obtention
d’une solution visqueuse. Le résidu brut obtenu de couleur vert foncée est repris avec 150
ml d’eau distillée bouillante pendant une nuit, ensuite le mélange est filtré par simple
filtration. Après, on procède à l'affrontement par les solvants organiques de polarité
croissante [5]. Le premier est effectué par un solvant apolaire (éther de pétrole) pour
éliminer les pigments et dégraisser la matière végétale [6], la phase résiduelle est épuisée
successivement par le dichlorométhane, l’acétate d’éthyle et le n-butanol. Les extractions
sont répétées trois fois [7]. Les quatre phases organiques ainsi obtenues sont séchées par du
sulfate de magnésium anhydre MgSO4, puis filtrées, évaporées sous pression réduite à
température inférieur à 50°C et ensuite pesées pour déterminer les rendements [8]. Le
protocole de l'extraction est résumé dans l'organigramme de l'Annexe IV.
IV.5.3.Calcul du rendement
Le rendement d’une extraction se calcule par le rapport entre la masse de l’extrait

obtenu et la masse de la matière première végétale traitée. Ce rendement est exprimé en
pourcentage et calculé par la formule suivante :
R% = ([MEX] / [MMV] ) × 100
MMV : masse de la matière végétale séchée et laminé en (g)

MEX : masse de l'extrait obtenu après évaporation en (g)
78
IV.6. Analyse par chromatographie sur couche mince (CCM)
La chromatographie sur couche mince est un outil précieux pour l’analyse en

phytochimie. Elle est assez peu onéreuse et son utilisation est très simple. C'est une
méthode facile et très rapide, elle repose principalement sur des phénomènes
d'adsorption [9]. Cette technique d’analyse qui permet un contrôle aisé et rapide, est réalisée
avec divers solvants et différents adsorbants. De ce fait nous avons opté pour cette
technique dans le but de connaitre la composition de l'extrait brut, de faire une
comparaison entre deux ou plusieurs extraits bruts et de trouver par consequent, le système
de solvant donnant une bonne séparation [10].
IV.6.1. Technique :
Une plaque de CCM se compose d’un support (en aluminium, en verre ou en
plastique), sur lequel est fixé une fine couche d’un milieu de désorption (silice, cellulose,
alumine, polyamides...) comme phase stationnaire. On la place en position verticale ou
légèrement inclinée dans une cuve en verre. Cette dernière repose contre l’une des parois et
est immergée d’environ 0,5 centimètre dans la phase mobile, constituée d’un ou de
plusieurs solvants et dont les vapeurs auront préalablement saturé la cuve fermée.
L’échantillon à étudier, déposé à l’état liquide par une micropipette et éventuellement
séché, il sera plus ou moins entrainé par la progression par capillarité de la phase mobile
vers le haut de la plaque. Le comportement de chaque molécule sur la plaque dépend des
interactions existant entre soluté, phase mobile et phase stationnaire [11,12] . L’identification
des substances séparées se fait selon différentes méthodes :
directement si les substances sont colorées ;

à l’aide d’un révélateur si elles sont incolores afin de les transformer en tâches
colorées.
Le comportement d’une molécule particulière dans un système donné est exprimé par son
Rf (Rate factor ou rapport frontal) qui est le rapport de la distance parcourue par cette
molécule sur celle parcourue par la phase mobile (front du solvant)
Rf = d = Distance parcourue par la substance

D Distance parcourue par le solvant
79
IV.6.2. CCM de l'huile essentielle :

L’application de la CCM comme moyen d’analyse permet l’identification de
certains constituants et surtout la mise en évidence des composés majoritaires des huiles
essentielles. Pour l’analyse de l’huile essentielle de cette plante, nous avons utilisé comme
éluant le système de solvant suivant : Hexane / Dichlorométhane (5/5 : V/V).
La détection de nos produits est réalisée en premier lieu avec la lampe U.V, mais parce que
de nombreux composés n’absorbent pas la lumière U.V, on est contraint de rendre visible
certaines taches en pulvérisant notre plaque avec une solution d’acide sulfurique/Acide
Acétique/Eau distille (5/5/10 : V/V/2V), il apparait des taches de différentes Rf.
IV.6.3. CCM des polyphénols :
• L’extrait d’éther de pétrole :

Les systèmes d'élution utilisés sont illustrés dans le tableau IV.1. suivant:
Tableau IV.1: Les systèmes utilisés pour l’extrait d’éther de pétrole
Système volume (ml)
Ether de pétrole - d’acétate d’éthyle. 9.5/0.5
Ether de pétrole - d’acétate d’éthyle. 9/1
Ether de pétrole - d’acétate d’éthyle. 7/3
• L’extrait de dichlorométhane, de l’acétate d’éthyle et du n-butanol :

Préparation de la phase mobile : l’éluant est constitué par un mélange de deux solvants
organiques. Pour cela, différents systèmes de solvants ont été essayés pour définir ceux
qui donnent les meilleures séparations (Tableau IV.2).
Tableau IV.2: les systèmes utilisés pour les extraits DCM, AcOET et ButOH.
Système volume (ml)
Chloroforme – méthanol 9/1
Chloroforme - méthanol 8.5/1.5
Chloroforme – méthanol 7/3
80
IV.7. Analyse par chromatographie liquide à haute performance
La technique de séparation la plus appréciée en analyse phytochimique est la

chromatographie liquide à haute performance (pression), abrégée HPLC (CLHP en
français). Elle est très utilisée dans de nombreux secteurs d’activités tels :
l’agroalimentaire, l’industrie chimique et pharmaceutique, les cosmétiques, etc.
IV.7.1.Principe :
La méthode de séparation qu’elle utilise fait appel aux mêmes éléments de base que
ceux employés pour la chromatographie classique sur colonne, soit un ou plusieurs
solvants et une colonne remplie avec une phase stationnaire, mais avec un appareillage
plus sophistiqué. C'est une méthode physico-chimique basée sur les différences
d’interactions entre les molécules à séparer et les phases mobile et stationnaire.
Préalablement, les solutés sont mis en solution dans la phase mobile (solvant). Après son
injection, ce mélange passe sous haute pression à travers la colonne (tube en acier
inoxydable) qui renferme la phase stationnaire [13].
IV.7.2.Mode opératoire :
L’analyse est réalisée par un chromatographe (SHIMADZU SPD-10A), au niveau du
laboratoire de Valorisation et de Technologie des Ressources Sahariennes (VTRS),
Université Hamma Lakhdar d'EL Oued.
Ce chromatographe HPLC-RP-C18, est équipé des éléments suivants :
- une colonne (d’une longueur de 125mm et d’un diamètre interne de 4,6mm) contenant la
phase stationnaire apolaire (phase inverse), cette dernière est constituée de silice modifié
chimiquement par greffage de résidus (C-18), les colonnes en phase inverse permettent la
séparation des composés polaires et solubles dans l’eau ou dans les mélanges hydro-
alcooliques ;
- un système de pompage, Pompe: VARIAN 9010, pour déplacer la phase mobile à haute
pression (plusieurs dizaines de bars) ;
- un injecteur : VARIAN 9100, pour introduire l’échantillon, dans le système à haute
pression ;
- un détecteur monochrome: VARIAN 9065 ;
- un logiciel informatique permettant de visualiser les signaux enregistrés par le détecteur ;
-Temps d’analyse : 15min ;
La phase mobile est de composition constante (mode isocratique), elle est composée d’un
mélange méthanol - eau (60 : 40 V/V) [14].
81
Différentes substances de nos extraits sont identifies par comparaison des

chromatogrammes des standards avec ceux des échantillons.
Les conditions opératoires sont les suivantes:
Débit: 1 ml/min ;
Volume d’injection: 20µl ;
La température est réglée à 25°C.
Longueur d’onde: 300nm ;
Concentration de l’échantillon: 10mg/ml ;
Temps d’analyse : 50min ;
La phase mobile est un mélange de deux phases dont la composition est précisée dans le
tableau IV.3 :
A = Eau acidifié (acide acétique 0,2%)
B = Acétonitrile
Tableau IV.3 : Gradient d’élution CLHP pour l’analyse des polyphénols.
Temps (min) A (%) B (%)

0.01 10 90
0.02 10 90
6.00 14 86
16.00 17 83
23.00 19 81
28.00 23 77
30.00 10 90
50.00 10 90
IV.8. Analyse quantitative des composes phénolique

Des déterminations quantitatives des principaux groupes de métabolites secondaires
ont été effectuées sur les extraits de Teucrium polium L. ssp thymoides; Cette plante a été
choisie pour l’évaluation de l’activité biologique sur la base de sa richesse en composés
phénoliques. La recherche bibliographique réalisée sur les plantes Lamiacée, en général et
les Teucrium polium en particulier, ainsi que l’analyse des chromatogrammes des extraits
AcOEt et n-BuOH, ont confirmée cette richesse. Par conséquent, la teneur en composés
phénoliques (polyphénols totaux, flavonoïdes totaux et tanins) de nos extraits choisis est
déterminée colorimétriquement avec le spectrophotomètre UV-Vis de marque DR2800
HACH LANGE.
82
Tous les dosages des composés phénoliques et également le test DPPH, ont été
réalisés au sein du laboratoire de phytochimie du Centre de Recherche Scientifique et
Technique sur les Régions Arides (CRSTRA), Biskra (Algérie).
IV.8.1. Dosage des polyphénols totaux (PPT)
Principe :
Le dosage des polyphénols se fait avec le réactif de Folin-Ciocalteu, qui en milieu

alcalin se réduit en oxyde de tungstène et de molybdène donnant une couleur bleue en
[15]
présence de polyphénols . Le réactif FCR est constitué d’un mélange d’acide
phosphotungstique (H3PW12O40) et d’acide phosphomolybdique (H3PMo12O40), de
coloration jaune. Lors de l’oxydation, il est réduit en mélange d’oxydes de tungstène
(W8O23) et de molybdène (Mo8O23). La coloration produite est proportionnelle à la quantité
de polyphénols présents dans l’extrait analysé et l’intensité de cette coloration est mesuré
dans le visible à une longueur d’onde de l’ordre 760 nm.
Protocole :
On réalise une gamme d’étalonnage en milieu aqueux (6 points de concentrations à partir

de A1 jusqu’à A6, voir annexe) avec un polyphénol témoin, en général de l’acide gallique
(2g de l’AG dissout dans 2ml d’eau distillée pour obtenir la solution S1).
On peut représenter la courbe d’étalonnage de l’acide gallique (Figure IV.2) en
prenant la concentration (mg/ml) en fonction de l’absorbance, le coefficient de corrélation
R2 = 0,98646.
Abs
(nm) 1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4 y = 0,0038x + 0,0009
0,2 R² = 0,9864
0
0 100 200 300 400
conc( µg/l)
Figure IV.2: Droite d’étalonnage de l’acide gallique (moyenne ± de trois essais SD).
83
Brièvement 125μl d'extrait de l'échantillon ont été ajoutés à 125μl de réactif de Folin-
Ciocalteu (10 fois dilué). Les solutions ont été mélangées et incubées pendant 3 minutes à
une température ambiante. Après l’incubation, 1250µl de la solution de carbonate de
sodium Na2CO3 (75g/l) a été ajoutée. Le mélange a été ensuite ajusté avec 1ml d’eau
distillée puis incubé pendant 90 min dans l'obscurité à température ambiante. L'absorbance
a été mesurée à la longueur d’onde λ = 760 nm [16,17].
A partir de la courbe d’étalonnage précédente, la concentration des polyphénols

totaux des extraits est calculée et le résultat est exprimé en μg d’équivalents d’acide
gallique par milligramme d’extrait (μg EAG/mg d’extrait).
Une courbe d’étalonnage effectuée à l’aide de l’acide gallique à différentes concentrations

est réalisée dans les mêmes conditions que les échantillons.
IV.8.2.Dosage des flavonoïdes totaux (FVT)
Principe :
Le dosage des flavonoïdes est réalisé à l’aide de la méthode colorimétrique au
trichlorure d’aluminium et la soude. Le trichlorure d’aluminium forme un complexe jaune
avec les flavonoïdes et la soude forme un complexe de couleur rose qui absorbe dans le
visible à 510 nm selon la méthode décrite par (Dewanto et al., 2002) [17] et (Kim et al.,
2003) [18] avec quelques modifications.
Protocole :
Une quantité de 250μl d’extrait dilué est ajouté à 75μl d’une solution de NaNO2 à 5%.
Après 6min d’incubation à température ambiante, 150 μl d’une solution fraîchement
préparée de chlorure d’aluminium (AlCl3, 10%) est additionnée au mélange précédent.
Après 5 mn de repos, toujours à température ambiante, 500μl de soude (NaOH, 1M) est
ajouté. Le mélange homogène résultant est ajusté à 2500μl avec de l’eau distillée.
L’absorbance de cette préparation est mesurée à 510 nm.
La concentration des flavonoïdes, dans les extraits, est calculée à partir de la gamme
d’étalonnage de la catéchine (Figure IV.3) et exprimée en mg d’équivalents de la
catéchine par gramme d’extrait (mg EC g-1 extrait).
84
Abs 1,8
y = 0,003x + 0,018
(nm) 1,6
R² = 0,997
1,4
1,2
1
0,8 Série1
0,6 Linéaire (Série1)
0,4
0,2
0
0 100 200 300 400 500 600
conce(mg/l)
Figure V.3: Droite d’étalonnage de la catéchine (moyenne ± de trois essais SD).
IV.8.3. Dosage des tanins condensés (TC)

Principe :
Les tanins condensés sont déterminés par la méthode à la vanilline en utilisant la
procédure rapportée par Sun et al. [19]. Cette méthode est basée sur la capacité de la
vanilline à réagir avec les unités des tanins condensés, en présence d’acide pour produire
un complexe coloré mesuré à 500 nm.
En milieu acide, les tanins condensés se dépolymérisent et par réaction avec la vanilline, se
transforment en anthocyanidols de couleur rouge, mesurables par spectrophotométrie à
500nm [19].
Protocole :
Une aliquote de 0,05ml d’extrait est ajoutée à 1,5 ml de vanilline à 4% et 750ml
d’acide chlorohydrique (HCl). Le milieu réactionnel est mélangé grâce à un vortex, laissé à
incuber pendant 20 minutes puis analysé en spectrophotométrie à 500 nm contre un blanc
contenant de l’acétone 80 %.
Les teneurs en tanins condensés sont déterminées, en se référant à une gamme étalon
de catéchine (0 à 400 μg.ml-1). Comme pour les flavonoïdes, les teneurs en tanins
condensés sont exprimées en mg d’équivalent catéchine par gramme d’extrait (mg EC g-1
extrait).
85
Remarque :
Les valeurs des concentrations de polyphénols seront lues à partir des droites d’étalonnage,
établies de la solution de référence d’acide gallique et la gamme étalon est préparée avec
de l’acide gallique à des concentrations variable de 50, 100, 200, 300, 400 µl/l.
IV.9. Evaluation in vitro de l’activité antioxyante
Plusieurs méthodes sont disponibles pour évaluer, in vitro, l'activité antioxydante

des huiles essentielles, des composes phénoliques, des aliments et des systèmes
biologiques. La plupart de ces méthodes sont basées sur la coloration ou la décoloration
d'un réactif dans un milieu réactionnel. La méthode du piégeage du radical libre DPPH
(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil) est la plus simple à réaliser in vitro [20]. Le DPPH est
largement employé pour évaluer le balayage de divers produits naturels et il est considéré
comme un composé modèle pour les radicaux libres de ces produits.
Dans ce cadre, nous nous sommes intéressés à l’évaluation du pouvoir antioxydant des
extraits naturels de la partie aérienne de la plante Teucrium polium L. ssp thymoides en
vue de leur valorisation en tant qu’antioxydants.
IV.9.1.Estimation du pouvoir antiradicalaire (DPPH•)
Principe :
Le 2,2-diphényl-1-picryl-hydrazine (DPPH•) est un radical organique libre, stable et
de couleur rouge pourpre. En présence de composés antiradicalaires, le radical DPPH• est
réduit et change de couleur en virant au jaune, ce qui entraîne une diminution de son
absorbance [21]. Le virage vers cette coloration et l’intensité de la décoloration de la forme
libre en solution dépend de la nature, de la concentration et de la puissance de la substance
antiradicalaire [22]. On peut résumer cette réaction par l’équation suivante :
DPPH. + AH → DPPH-H + A.
(Violet) (Jaunâtre)
Où (AH) représente un composé capable de céder un hydrogène au radical DPPH. (violet)
pour le transformer en molécule DPPH-H [23].
Le (DPPH•) est généralement le substrat le plus utilisé pour l’évaluation rapide et

directe de l’activité antioxydante, en raison de sa stabilité en forme radicale libre et la
86
simplicité de l’analyse (Figure IV.4). Il absorbe dans le visible à la longueur d’onde de

515 à 520 nm [24].
Figure IV.4 : Mécanisme réactionnel intervenant lors du test DPPH• entre

l‘espèce radicalaire DPPH• et un antioxydant.
Mesure de l’activité
Pour la mesure de cette activité antiradicalaire, une prise d’essai de 1 ml de chaque
extrait (0.1mg/ml) et 250 μl de la solution méthanolique, est soumise au DPPH (0.2 mM).
Après agitation au vortex, les tubes sont placés à l’obscurité et à température ambiante,
pendant 30 minutes pour réagir [25]. L’absorbance est mesurée à 517 nm contre un témoin
négatif (sans extrait). Le témoin positif utilisé est un antioxydant de synthèse: le 2,6-di-t-
butyl-4-methylphenol ou butylhydroxytoluène (BHT) pour les extrait phénoliques et
l'acide ascorbique pour les HE. Les résultats sont exprimés en pourcentage d’inhibition et
calculés suite à la diminution de l’intensité de la coloration du mélange, selon la formule
suivante [26]:
PI = (DO témoin – DO extrait / DO témoin) × 100
PI : pourcentage d’inhibition.
DO témoin : absorbance du témoin négatif.
DO extrait : absorbance de la solution d’extrait acétonique.
L’étude de la variation de l’activité antiradicalaire en fonction de la concentration des

extraits, permet de déterminer la concentration qui correspond à 50% d’inhibition (CI50),
une faible valeur de la CI50 correspondant à une grande efficacité de l’extrait.
87
Le calcul des IC50 a été réalisé graphiquement par les régressions linéaires des graphes
tracés ; pourcentages d’inhibition en fonction de différentes concentrations des fractions
testées. La valeur de la CI50 est exprimée en µg/ml (3 répétitions pour chaque
concentration).
IV.10. Analyse statistique

Toutes les analyses ont été effectuées à trois reprises. Les résultats sont exprimés en
moyenne ± écart-type. Les données sont analysées statistiquement en utilisant le logiciel
statistique Minitab.2000. Le test indépendant « t » a été utilisé pour la comparaison des
moyennes entre les groupes. L’analyse de la variance à un facteur contrôlé (ANOVA) et le
test de la différence significative de Tukey ont été utilisés pour comparer les moyennes des
groupes. Le niveau de signification est fixé à p <0.05.
IV.11. Étude de l'activité antibactérienne
C’est une méthode de mesure in-vitro, du pouvoir antibactérien des composés. La

technique utilisée est celle du contact direct qui compte deux méthodes, la méthode des
puits et la méthode de diffusion. Nous avons adopté la dernière, qui est une vieille
méthode, mais toujours d’actualité puisqu’elle est encore utilisée fréquemment dans les
laboratoires de bactériologie pour la mesure du pouvoir antibactérien des antibiotiques de
synthèse [27]. Cette étude a été effectuée au laboratoire de bactériologie du Centre de
Recherche Scientifique et Technique sur les Régions Arides (CRSTRA), Biskra (Algérie),
sur les souches bactériennes pathogènes suivantes (Tableau IV.4.):
Tableau IV.4: Souches bactériennes sélectionnées.

Groupe Code ATCC
Souche
Salmonella Gram - 13311
Staphylococcus aureus Gram + 25923
Candida levure -
Enterococcus faecalis Gram + 10541
Pseudomonas aeruginosa Gram - 27893
Klebseila oxytoca Gram - 13182
Escherichia coli Gram - 25922
Vibrio cholerae Gram - 14035
88
IV.11.1.Technique de diffusion sur milieu gélosé (Antibiogramme)
Le principe de cette méthode, consiste à mesurer le diamètre de la zone d’inhibition

de la croissance microbienne autour d’une source d’antibiotique déposée à la surface de la
gélose. La sensibilité des souches aux extraits de la plante a été réalisée par la technique, in
vitro, de diffusion en milieu gélosé, ou méthode des disques [28]. Cette technique consiste à
introduire le germe que l’on veut étudier à la surface du milieu gélosé (Muller Hinton),
contenu dans des boites de pétri sur une épaisseur de 4 mm puis, on applique des disques
imprégnés de substance chimique que l’on veut tester. On aperçoit les substances diffuses
dans la gélose avec une forme circulaire. Après 18-24 heures, les disques apparaissent
entourés d’une zone d’inhibition [29].
a) Repiquage des espèces bactériennes
Les différentes espèces bactériennes ont été repiquées par la méthode des stries,
puis incubées à 37 °C afin d'obtenir des colonies isolées qui vont servir à la préparation de
l’inoculum.
b) Préparation de l’inoculum
Pour préparer l’inoculum, on racle 4 à 5 colonies bien isolées et parfaitement

identiques à partir d'une culture de 18h, sur le milieu d'isolement puis déchargées dans de
l’eau physiologique stérile. La suspension bactérienne est ensuite homogénéisée à l’aide
d’un vortex et sa turbidité est ajustée à 0,5 Mc Farland, soit une densité optique égale à
0,08 à 0,10 ; lue à une longueur d’onde de 625 nm correspondant à 108 UFC/ml [21].
c) Préparation des disques
Dans cette étude, on a utilisé le papier Wattman N°3, coupé en disques de 6 mm.
Ces disques doivent avoir un contour régulier pour donner une zone d’inhibition facile à
mesurer. Ces derniers, une fois préparés, sont placés dans une boite de pétri (en verre)
contenant 10 ml d'eau distillée et auto clavés pendant 20 mn à 120 °C [30].
d) Ensemencement
Des boites de pétri stériles, préalablement coulées, sont ensemencées par étalage à
l'aide d'un râteau stérile. L'ensemencement s'effectue de telle sorte à assurer une
distribution homogène des bactéries. A l'aide d'une pince stérile, les disques de papier
89
filtre, contenant les produits à tester sont déposés à la surface de la gélose inoculée au
préalable. L'activité antibactérienne est déterminée en termes de diamètre de la zone
d'inhibition produite autour des disques après 24 h d'incubation à 37° C [30].
Les extraits préparés sont dilués dans le DMSO. Ce choix a été fait, parce que ce dernier
est le solvant préconisé par la majorité des auteurs qui ont prouvé qu’il n'a aucun
pouvoir antibactérien puissant.
e) Lecture :
Après la culture, la lecture s’effectue en mesurant sur chaque disque le diamètre

d’inhibition du principe actif. Cette distance millimétrique est ensuite reportée sur l’échelle
de concordance afin que la souche soit interprété sensible, intermédiaire ou résistante vis-
à-vis du principe actif étudié [31].
La sensibilité des différentes souches vis-à-vis de l’huile essentielle étudiée est classée
selon le diamètre d'inhibition et selon les critères suivants [32-33]:
- Non sensible (-) pour Ø<8 mm;

- Sensible (+) pour 9-14 mm;
- Très sensible (++) pour Ø 15-19 mm et extrêmement sensible (+++) pour Ø >20 mm.
Les bactéries montrant une sensibilité aux extraits, sont sélectionnées pour déterminer la
concentration minimale inhibitrice (CMI). Plus la zone d’inhibition mesurée est grande,
plus le germe est sensible.
IV.11.2. Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI)
La CMI est la plus faible ou la plus petite concentration de la substance qui peut
inhiber le développement des bactéries pendant 18 à 24 h à 37 °C. On peut la déterminer,
soit en milieu liquide soit en milieu solide [34,35], celle ci est réalisée uniquement pour les
extraits les plus actifs constatés lors des tests de sensibilité [36]. Elle est déterminée par la
méthode de micro-dilution en milieu gélosé. Pour cela, on réalise une série de
dilutions à partir de la solution mère (Tableau IV. 5), cette solution a été préparée en
solubilisant 20 mg de l’extrait dans le méthanol. Une même quantité de bactéries de
densité 105 µg/ml répartie dans une série de tubes, contenant des concentrations
croissantes de la substance, de volume de 2ml pour chaque tube. Après 18 heures
90
d’incubation, on observe une croissance bactérienne (se traduisant par une turbidité du
milieu visible à l’œil nu), dans les tubes contenant une faible concentration de l’extrait [37].
Tableau IV.5 : Les différentes dilutions de la solution mère.
Concentration Volume Volume d’eau Concentration

initiale (µg/ml) (ml) Distillée (ml) finale (µg/ml)
2000 6.4 3.6 128
1280 2 2 64
1 3 32
0.5 3.5 16
0.5 7.5 8
80 2 2 4
1 3 2
0.5 3.5 1
0.5 7.5 0.5
5 2 2 0.25
1 3 0.125
IV.11.3. Détermination de la concentration minimale bactéricide (CMB)
La concentration minimale bactéricide (CMB) est la plus faible concentration de

substance qui laisse plus de 0,01% de germes survivants. C'est la plus petite concentration
d’une substance qui peut tuer les bactéries après 18h de culture à 37°C. On peut la
déterminer, soit en milieu liquide soit en milieu solide [38,39].
Pour déterminer la CMB nous avons procédé à des sous culture, à partir des tubes qui ne
contiennent aucune croissance bactérienne visible. Donc c'est la concentration minimale
d’une sous culture dont il n’y a pas de poussée bactérienne.
Le rapport CMB/CMI nous a permis de déterminer les pouvoirs bactéricide et

bactériostatique de l’huile essentielle étudiée. Lorsque ce rapport est supérieur à
4, l’huile essentielle (l’extrait) a un pouvoir bactériostatique, il est bactéricide
quand il est inférieur ou égal à 4 [40].
91
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95
Chapitre V
• RÉSULTATS ET
DISCUSSIONS
Chapitre V Résultats et Discussion
V.1.Criblage phytochimique
Le screening phytochimique nous a permis de mettre en évidence la présence de
métabolites secondaires au niveau des tissus végétaux de notre plante et d'avoir une bonne
idée sur ses activités pharmacologiques. Ces métabolites lui confèrent la protection contre
les bactéries, les champignons et les attaques pesticides et sont donc responsables de
l'effort d'activité antimicrobienne contre certains micro-organismes [1].
La détection de ces composés chimiques est basée sur des essais de solubilité des
constituants, des réactions de précipitation et du changement de couleur.
Les résultats obtenus au terme des tests préliminaires pour le criblage phytochimique,
réalisés sur la partie aérienne de Teucrium polium L. sous espèce des thymoïdes sont
résumés dans le tableau V.1. Ils révèlent la présence ou l’absence d’un groupe de
métabolites secondaires.
Réaction positive : (+) abondant ; Réaction négative : (-) absent
Tableau V.1.: Résultats des tests phytochimiques de la partie aérienne de Teucrium

polium L. Thymoïdes.
Teste de Résultats
Polyphénols +
Flavonoïdes +
Flavonoïdes libres +
Glucoside de flavones +
Coumarines -
Alcaloïdes +
Huiles essentielles +
Tanins +
Stérols non saturés et terpènes +
Cardenolide +
Saponosides +
Amidon -
Sucres réducteurs -
96
A la fin de cette étude qualitative des différentes substances bioactives, nous

remarquons l’absence totale des coumarines, de l'amidon et des composés réducteurs. Par
contre nous apercevons l’existence des autres substances naturelles bioactives. D'après ces
résultats, nous déduisons que la plante Teucrium polium L. sous espèce Thymoides de la
région de Beni souik, Biskra, comme d'autres espèces de la famille Lamiaceae, est riche
en divers métabolites secondaires, ce qui explique l’intérêt et l’attention particulière portée
par les chercheurs, à travers les études scientifiques sur cette plante [2].
V.2.Contrôle d’une drogue végétale

V.2.1. Dosage de l’eau par Gravimétrie (Perte à la dessiccation) :
Taux d’humidité
Les végétaux sont riches en eau, les plantes fraîches en renferment de 60 à 80 %. Pour
assurer une bonne conservation, la teneur en eau doit être inférieure ou égale à 10% [3].
Nous avons donc utilisé la méthode pondérale pour en déterminer la teneur dans la poudre
des feuilles sèches de notre plante. C’est la détermination de la perte de masse par
dessiccation à l’étuve.
Résultats:
,
Masse de l’échantillon avant le séchage m = 2 g ∗ 100% = 8,5%
Masse de l’échantillon après le séchage m’= 1,83g
8,5%
eau
91,5%
matiére
végétale
Figure V.1 : Teneur en eau dans le Teucrium polium L.

Interprétation des résultats:
Les résultats de cette analyse ont révélé un taux d’humidité inférieure à 10%, dans la
plante de Teucrium polium L, avec une valeur égale à 8,5%. La teneur en eau, inférieure à
10% confère à notre poudre une meilleure conservation à long terme.
97
V.2.2.Dosage des cendres
Le dosage des cendres totales et cendres sulfuriques a été déterminé, après calcination dans
l'étuve à 600°C pendant 6h, les résultats obtenus en utilisant les formules citées en annexe
sont exposés dans la figure V.2.
Résultats
4,2
12,4 cendres cendres
totales sulfuriques
95,8
78,6
a)Teneur en cendres totales b) Teneur en cendres sulfuriques
Figure V.2 : Résultat des cendres
Interprétation des résultats :
Le pourcentage de la quantité de substance non volatilisée est de 12,40%, valeur

n’ayant pas dépassé les normes décrites dans la pharmacopée européenne.
Le pourcentage des cendres sulfuriques est de 4,20%, valeur légèrement élevée, ce
qui peut se justifier par une richesse en éléments minéraux de notre poudre.
V.3.Préparation des extraits
V.3.1.Extraction des huiles essentielles
Les huiles essentielles ont été extraites par hydrodistillation, en utilisant le

chloroforme (CHCl3), excellent solvant d'extraction pour de nombreux matériaux
organiques tels que les graisses, l’huile …etc. La densité de la phase organique est
supérieure à celle de la phase aqueuse, ce qui donne une bonne séparation dans l'ampoule à
décanter. Après évaporation, l'huile obtenue, a une masse de 1,37g.
98
V.3.2. Extraction des composés phénoliques
Le procédé d’extraction est basé sur la différence de solubilités des composés d’un
mélange dans un solvant. Dans la présente étude, la méthode utilisée est celle de
l'extraction par macération, avec un gradient de polarité croissante, en utilisant des solvants
de plus en plus polaires afin d’obtenir des extraits enrichis en molécules d’intérêt [4].
Cette méthode d’extraction menée à température ambiante, permet d’extraire le maximum
de composés et de prévenir leur dénaturation ou modification probable, dues aux
températures élevées utilisées dans d’autres méthodes d’extraction [5]. Cette étape permet
de séparer les polyphénols selon leur structure et leur degré de polymérisation; en les
affrontant par plusieurs solvants spécifiques allant du moins polaire au plus polaire.
Affrontement par l’éther de pétrole

Généralement utilisé pour dégraisser la drogue, surtout les lipides, la chlorophylle et les
impuretés qui risquent de compliquer l’épreuve chromatographique. La masse obtenue est
0,44g.
Affrontement par le dichlorométhane

Les plantes sont donc extraites avec du dichlorométhane pour entrainer les terpénoïdes et
les polyphénols aglycones (flavonoïdes, coumarines, tanins, et anthracenosides),
(m= 4,4g).
Affrontement par l’acétate d'éthyle

L’affrontement par ce solvant entraine les aglycones, les mono-O-glycosides et
partiellement les di-O-glycosides présents dans les extraits éthanoliques et les tannins
dimériques. L'extrait brut obtenu a une masse de 7,47g.
Affrontement par le n-butanol

Le n-butanol va entrainer essentiellement le reste des di-o-glycosides, les tri-
oglycosides et les C-glycosides. La masse obtenue est 9,5 g.
V.4.Caractéristiques des extraits obtenus
Les résultats de l'extraction des huiles essentielles et des polyphénols de la plante

étudiée, incluent les rendements des extraits obtenus ainsi que leurs caractères
organoleptiques.
99
V.4.1.Rendement de l'extraction :
La détermination des rendements est réalisée à partir du poids des extraits obtenus,
après évaporation à sec par rapport au poids initial. Les rendements sont calculés par la
moyenne des trois essais ± l’écart-type pour chaque extraction et les résultats ainsi obtenus
sont illustrés sur la figure V.3.
3 4,75
2 3,74
2,2
1 1,37
0,22
0
HE EP DCM AC d'ET But
Figure V.3. : Rendements moyens des extraits de Teucrium Polium L. exprimés en % massique
• D'après ces résultats, on peut dire que la partie aérienne de Teucrium polium L. ssp
thymoides, présente un rendement satisfaisant en huile essentielle (1,37%), en
comparaison avec ceux obtenus pour les autres espèces de Teucrium étudiées et qui
est de 0,55 % et 0,75 % pour Kabouche A. et al [6] et Moghtader M.[7]
respectivement, 0,37 % pour Lograda T [8 ], 0,21% trouvé par Belmekki N.[9] et
pour Roukia H.[10], il est de l’ordre de 0,5%.
• Du point de vue rentabilité en poids, les extraits polaires (AcE et BuT), ont donné les
proportions les plus élevées en comparaison avec les extraits moins polaires (EP et
DCM).
• Ces résultats montrent que cette plante est riche en HE et en polyphénols et que le
bon rendement est attribué à l'extrait butanolique qui contient les flavonoïdes
glycosylés [11,12].
On peut déduire que le rendement, en extrait naturel d'une même espèce peut varier, et ceci
en fonction de plusieurs paramètres comme des études l’avaient montré, d'une part, de
l'influence de la technique d'extraction et d'autre part, de celle du cycle végétatif, ainsi que
100
la période de récolte et la localisation géographique. Le temps de séchage de la plante

influe également sur le rendement des extraits [ 13,14,15].
V.4.2.Caractéristiques organoleptiques
Les caractéristiques organoleptiques d’un extrait sont des données nécessaires

pour l’appréciation de la qualité de ce dernier. En effet, il est généralement admis que ces
caractéristiques peuvent être corrélées avec la composition chimique [16]. Ces caractères
sont résumés dans le tableau V.2.
Tableau V.2. : Caractéristiques organoleptiques des extrais bruts de l’espèce Teucrium

polium L. de la région de Biskra.
Extrait Aspect Couleur Odeur
HE liquide –limpide jaune Forte
Ether de pétrole visqueux vert foncé Agréable
Dichlorméthane visqueux vert foncé Agréable
Acétatk2e d'éthyle Pâteux vert jaunâtre Faible
n- Butanol Solide marron foncé Piquante
V.4.3.Analyse par la chromatographie sur couche mince :
Cette technique nous donne une indication sur le contenu des extraits analysés et
procure les informations nécessaires pour la poursuite d’autres études.
Pendant l’analyse CCM, plusieurs systèmes de solvants ont été essayés sur les extraits
bruts obtenus, en utilisant des plaques analytiques recouvertes de gel de silice. Chaque
extrait, avec un système spécifique, donne une bonne séparation et une visibilité acceptable
des spots, comme il est indiqué par les chromatogrammes illustrés dans la figure V.4.
La CCM nous a permis de contrôler la qualité de nos différents extraits, même si elle n’est
pas suffisante pour identifier un constituant précis, elle nous a aidé à obtenir des
renseignements utiles sur les éléments constitutifs de nos extraits (fluorescence, coloration,
facteur de rétention...) comme il est indiqué dans l'Annexe VI.
101
HE extrait EP extrait DCM extrait AcOEt extrait ButOH
HX -DCM 5/5:V/V EP -Ac 7/3 :V/V Chlforme – méthanol Chloroforme – méthanol

9/1 : V/V 7/3 : V/V
Figure V.4. : Résultats de l'analyse par CCM des extraits de Teucrium Polium L.
Ces résultats montrent l’existence de plusieurs taches de différents facteurs de rétention, ce

qui nous a permit de révéler un polymorphisme chimique très important dans les extraits
préparés de la plante sélectionnée.
• Le chromatogramme de l'huile essentielle montre une richesse en composés

terpéniques.
• Les solvants éther de pétrole et dichlorométhane sont généralement utilisés pour
dégraisser la drogue végétale. A l’œil nu, les taches apparaissent vertes dans la plaque
CCM de ces fractions et sont typiques des chlorophylles, les taches mauves
représentent les stérols.
• L'extrait acétate d'éthyle présente une bonne migration. Les taches sont bien distinctes
avec un facteur de rétention qui diffère d'une tache à l'autre, tout cela montre que
l’extrait analysé manifeste une richesse en composés phénoliques. L'extrait butanolique
renferme les composés les plus polaires de type flavonoïdes glycosylés. Partant de
leurs fluorescences, les échantillons (AcOET et ButOH) sont riches en flavones, en
premier lieu. Celles-ci correspondent aux tâches violettes, brunes et grises. En 2ème lieu,
en flavonols et qui présentent la couleur jaune et ses dérivés : jaune pâle, jaune
fluorescent, et jaune orangé.
Les profils chromatographiques des deux extraits n-ButOH et AcOEt Teucrium polium L.
thymoïdes, montrent clairement leurs richesses en polyphénols et en particulier en
102
flavonoïdes. Ceci à travers les différentes taches visibles sous la lumière UV aux longueurs
d’onde 254 nm et 366 nm, ainsi que leur révélation en jaune.
V.4.4. Résultats de caractérisation par HPLC

Le besoin de connaitre les profils et d'identifier les composés individuels dans les
échantillons exige le remplacement des méthodes traditionnelles par des techniques
séparatives. L’HPLC est, sans doute la technique analytique la plus utile pour caractériser
les composés polyphénoliques [17].
Les résultats de l'analyse HPLC-RP-C18, des extraits de la partie aérienne de la

plante sélectionnée, sont repris dans le tableau V.4. Les chromatogrammes de cette
analyse HPLC sont présentés dans la figure V.5, comme on peut l’observer (suivant le
nombre de pics sur les chromatogrammes), afin de comparer leur profil chromatographique
avec ceux des standards et d’obtenir une information sur la nature chimique de quelques
constituants.
Huit composés phénoliques purs ont été utilisés dans l’analyse HPLC comme témoins et
leurs temps de rétentions (Tr) sont représentés dans le tableau ci-dessous.
Tableau V.3.: Temps de rétention des différents témoins polyphénoliques obtenus après
séparation par CLHP.
Standards Temps de Equation de Coefficient de
rétention (min) la courbe d'étalonnage corrélation
Acide ascorbique 4,21
y = 211.7x - 1098 R² = 0,96144
Acide gallique 5,23 y = 23616x - 7232 R² = 0,99864
Acide chlorogénique 13,62

y = 39775x - 1881 R² = 0,9983
Acide caféique 16,3 y = 72328X R² = 0,99864
Quercétine 20,37 y = 548.0x - 2832 R² = 0,9960
Vanilline 21,46
y = 82773x - 1423 R² = 0,99525
Acide B coumarine 23,95
y=157538x R² = 0,9996
Rutine 29,04 y = 24112.98x - 1060 R² = 0,99842
103
uV
6000
5000
HE
4000
3000
2000
1000
0 10 20 30 40 min
uV
225000
200000
Extrait AcOEt
8
175000
150000
125000
100000 3 4 5
6
2
75000
1
1 7
50000
1
25000
0
0 10 20 30 40 min
uV
600000
Extrait ButOH
500000
400000
300000
8
200000 4 1
3 1
5 6 7
100000
1
0
0 10 20 30 40 min
Figure V.5. : Résultats de l'analyse par HPLC des extraits de Teucrium Polium L..
104
Tableau V.4 : Les phénols identifiés dans l'extrait acétate d'éthyle et l'extrait butanolique
N° de composé Composés AcOEt T(nim) ButOH T(nim)
phénoliques
01 Acide ascorbique + 4,43 + 4,44
02 Acide gallique + 5,18 - -
03 Acide chlorogénique + 13.46 + 13,56
04 Acide caféique + 16,01 + 16,71
05 Quercétine + 20,19 + 20,11
06 Vanilline + 21,10 + 21,15
07 Acide B coumarine + 23,35 + 23,24
08 Rutine + 29,05 + 29,20
(+) abondant ; (-) absent

• L'analyse de la fraction de l'huile essentielle montre qu'il ya une diversité de
produits dans sa composition, révélés par plusieurs pics dont l'un est majoritaire à
3min, cependant tous non identifiables par manque de standards des huiles
essentielles.
• L'extrait AcOEt est plus riche en substances chimiques que l'extrait butanolique, ce
qui en accord avec les résultats obtenus par CCM.
• L’analyse CLHP nous a permis d'identifier huit composés phénoliques. L’extrait
acétate d'éthyle montre trois autres pics majoritaires; le premier, avec un temps de
rétention Tr = 3,46min; un deuxième, avec un temps de rétention Tr = 30,69min et
un dernier pic avec un temps de rétention Tr = 32,287min. Dans cette fraction, la
teneur la plus élevée est attribuée à la rutine.
• L’extrait butanolique montre aussi trois pics majoritaires; le premier, avec un temps
de rétention Tr = 3,47min, un deuxième, avec un temps de rétention Tr = 30min qui
est la plus forte et un dernier pic avec un temps de rétention Tr = 33,42min, alors
que les autres composés phénoliques identifiés sont les moins représentatif.
105
V.5. Quantification des composés phénoliques

Cette analyse permet d'avoir une estimation sur la teneur en polyphénols dans
l’échantillon. Le dosage des phénols totaux a été effectué par une méthode adaptée de
Dewanto et al.[18], en utilisant le réactif de Folin-Siocalteu, tandis que les flavonoides ont
été quantifiés par le dosage direct par le trichlorure d'aluminium d'après une méthode
adaptée de Dewanto et al. Pour les Tanins condensés, le dosage s’est fait par le test de
vanilline selon la méthode de Sun et al. [19].
Tous les résultats de dosages sont rassemblés dans les tableaux de l'Annexe VII.
V.5.1. Dosage des Polyphénols totaux

La détermination de la quantité des composés phénoliques a été faite à l’aide d’une
courbe d’étalonnage linéaire (y = ax+b), réalisée avec des solutions étalons de l’acide
gallique à différentes concentrations.
La teneur en polyphénols totaux de chaque extrait a été calculée, à partir de la
courbe d’étalonnage et exprimée en milligrammes équivalent d’acide gallique par
gramme d'extrait, la mesure de la densité optique a été effectuée à une longueur d’onde de
760nm. Les résultats sont rassemblés dans le tableau A de l'Annexe VII.
L’étude statistique montre que la quantité des composés phénoliques extraits à

partir de Teucrium polium L. ssp thymoïdes présente des différences significatives selon
le solvant utilisé. Les résultats sont représentés dans la figure V.6.
120
100
80
119,66 109,99
60
40
49,89
20
0
acétate d'ET n- butanol aqueux
Figure V.6. : Teneurs en PPT des extraits de l’espèce Teucrium polium L..
106
Concernant les teneurs en composés phénoliques obtenus, nous avons enregistré une
variabilité claire en fonction du solvant. On remarque d'après ces résultats que la quantité
des composés phénoliques varie entre 119,66, 109,99 et 49,89 mg EAG /g d'extrait.
Le taux des composés phénoliques le plus élevé est détecté dans l'extrait acétate d'éthyle
(119,66 mg EAG/g d’extrait), suivi par l'extrait butanolique (109,99 mg EAG/g d’extrait).
Tandis que l’extrait aqueux présente la plus faible teneur (49,89 mg EAG/g d’extrait).
D’une manière générale, l’estimation de la teneur en polyphénols totaux, en utilisant le

réactif du Folin Ciocalteu, indique que cette plante est riche en ces composés.
V.5.2. Dosage des flavonoïdes :
La détermination du dosage des flavonoïdes a été faite selon la méthode de

trichlorure d’aluminium (AlCl3 ), à l’aide d’une courbe d’étalonnage linéaire (y = ax+b)
et est réalisée avec des solutions étalons de la catéchine à différentes concentrations.
La teneur en flavonoïdes de chaque extrait a été calculée à partir de la courbe d’étalonnage

et exprimée en mg d’équivalents catéchine par gramme d’extrait (mg EC/g d’extrait). La
mesure de la densité optique a été effectuée à la longueur d’onde de 510 nm, les résultats
sont portées sur le tableau B Annexe VII. Les valeurs de ce tableau sont reprises en
histogramme dans la figure suivante:
100
80
60
97,55 94,55
40
20 31,55
0
A-d'éthyle n-butaol eau
Figure V.7. : Teneurs en flavonoïdes des extraits de l’espèce Teucrium polium L..
107
Comme cité précédemment, les flavonoïdes suivent aussi la même tendance. Nous
remarquons, d’après ces résultats, que la quantité de flavonoïdes est comprise entre
31,55 et 97,55 mg EC/ g d'extrait. Il parait clairement que le taux de flavonoïdes le plus
élevé a été détecté dans l'extrait d'acétate d'éthyle (97,55 mg EC/ g d'extrait), par contre
la quantité enregistrée pour l'extrait aqueux (31,55 mg EC/g d'extrait) reste la plus
faible par rapport à l'extrait acétate d'éthyle et le n-butanol (94,55 mg EC/g d'extrait),
ces deux derniers sont 3 fois plus riche que l’extrait aqueux.
V.5.3. Dosage des tanins condensés
Les teneurs en tanins condensés de l’espèce étudiée ont été déterminées, en

utilisant le réactif de la vanilline, à l’aide d’une courbe d’étalonnage linéaire (y = ax+b)
réalisée avec des solutions étalons de la catéchine à différentes concentrations.
La teneur en tanins condensés de chaque extrait a été calculée à partir de la courbe
d’étalonnage et exprimée en mg d’équivalents catéchine par g d’extrait (mg EC/g Ext). La
mesure de la densité optique a été effectuée à la longueur d’onde de 550 nm et les résultats
obtenus sont présentés dans la figure V.8 et les valeurs sont indiquées dans le tableau C
Annexe VII.
200
150
100
152
50
31 40,78
0
A-d'éthyle n-butaol eau
Figure V.8. : Teneurs en tanins condensés des extraits de Teucrium polium L..
D'après les résultats présentés par l'histogramme, nous avons enregistré une
variabilité significative. Nous notons que la quantité des tanins condensés varie entre 31 et
152 mg EC/g d’extrait, elle est la plus élevé (152 mg EC/g d’extrait) dans l'extrait acétate
d’éthyle, cependant elle est faible dans ceux rapportés dans les extraits n-butanol et aqueux
avec 31 et 40 (mg EC/g d’extrait) respectivement.
108
Tous les résultats obtenus montrent que la partie aérienne de notre plante présente
une quantité intéressante des composés phénoliques. Toutefois, la plus forte concentration
est notée pour la fraction acétate d'éthyle. Ces résultats sont en accord avec ceux
mentionnés dans l'analyse par CCM et HPLC, qui montre la richesse de l'extrait acétate
d'éthyle de la plante Teucrium polium L. Thymoides en ces composés.
La comparaison des teneurs des extraits de notre plante en polyphénols avec les
autres espèces de Teucrium, a montré que notre plante présente une teneur élevée. Par
exemple, les résultats trouvées par R. Mahmoudi [20] montrent que l’extrait acétate
d’éthyle obtenu par macération, renferme la plus grande quantité de phénols totaux
89.05±0.50 mg EAG/ g MS de la plante Teucrium polium geyrii. Ils sont nettement
inférieurs à nos résultats, par contre la plante de Teucrium polium L. Capitatum de Biskra
semble renfermer une grande quantité en polyphenols totaux, soit en moyenne 206,54 ±
58,17 mg éq.AG/g MS et 146,13 ± 18,95 mg éq. AG/g MS pour la plante de Sétif, ce sont
les résultats trouvés par S.MALKI [21], tandis que DJERIDANE et al. [22], rapportent que
la plante Teucrium polium provenant de Tamanrasset est riche en composés phénoliques.
Les dosages par spectrophotométrie UV-visible ont montré que les extraits acétate
d'éthyle, butanolique et aqueux de la plante sélectionnée contiennent des composés
phénoliques (PPT, FVT et TC) mais avec des quantités différentes. Plusieurs facteurs
influencent la teneur en composés phénoliques d’une plante. D’une part, les facteurs
externes ou exogènes qu’ils soient de natures biotiques ou abiotiques et d’autre part, les
facteurs internes ou endogènes tels que les facteurs génétiques conduisant à des différences
importantes entre les espèces du même genre [23]. Ils peuvent être d’origine géographique,
où dues aux conditions climatiques ou de stockage, à la période de maturité à la récolte, et
aussi à la technique d’extraction employée [24-25].
Les travaux conduits par Katalinic et al. [ù226] et Koffi et al. [27] confirment nos
résultats en indiquant que le milieu hydro-alcoolique permet une meilleure extraction des
polyphenols totaux. L’addition de l’eau aux solvants organiques augmente la solubilité des
polyphenols par modulation de la polarité du solvant organique. La solubilité des
polyphenols dépend principalement du nombre de groupements hydroxyles, du poids
moléculaire et de la longueur de la chaîne carbonique du squelette de base [28].
109
V.6. Activités biologiques des extraits

L’étude des activités biologiques des substances bioactives des plantes médicinales
se trouve à la base des médecines dites alternatives, de nombreux procédés utilisés dans la
conservation des produits alimentaires crus ou cuits et des substances actives exploitées
dans les produits pharmaceutiques. L'étude précédente confirme la richesse de la plante
médicinale Teucrium polium L. Thymoides en métabolites secondaires ce qui nous a
incité à explorer biologiquement leurs extraits.
La présente étude, s’intéresse particulièrement à l’activité antioxydante et antibactérienne

des extraits naturels issus de cette plante [29].
V.6.1.Evaluation de l'activité antioxydante
Dans cette étude, la méthode choisie pour l’évaluation de l’activité anti-oxydante des
extraits préparés de cette plante, est le piégeage du radical libre DPPH car cette technique
est reconnue comme étant simple, rapide et efficace, en raison de la grande stabilité du
radical [30]. L’activité antioxydante est déterminée par la diminution de l’absorbance d’une
solution alcoolique de DPPH à 515 nm qui est due à sa réduction à une forme non
radicalaire DPPH-H, par les antioxydants présents dans l’extrait végétal [31,32].
L’effet de piégeage des extraits sur le radical DPPH est exprimé en valeurs de IC50
(µg/ml). On rappelle que la IC50 représente la quantité de réactifs nécessaire à l’inhibition
de la moitié de la quantité initiale de radicaux présents. En effet, la IC50 est inversement
liée à la capacité anti-oxydante d'un composé, plus cette valeur est basse, plus l'activité
anti-oxydante est grande.
Cette concentration est calculée graphiquement par les régressions linéaires des tracés:
pourcentages d’inhibition en fonction des différentes concentrations des échantillons
testées.
Les résultats obtenus du test de mesure de l’absorbance du radical libre DPPH (Annexe
VIII), nous a permis de tracer l’histogramme de variation du pourcentage d’inhibition en
fonction de la concentration de chaque extrait de la plante étudiée (Figure V.9).
110
IC50 160
1,4
mg/ml 140
1,2
120
1
100
0,8
80
0,6
60
0,4 40
0,2 20
0 0
HE Ac. Asc. Acétate d’ET n- butanol Eau
Figure V.9: Valeurs des CI50 du test DPPH (µg/ml) de HE et polyphénols.
- À la lumière de ces résultats, on constate que l’huile essentielle de Teucrium polium L.

ssp thymoïdes peut ramener le radical libre stable 2,2 diphenyl-1picrylhydrazyl (DPPH) au
diphenyl-picrylhydrazine jaune-coloré avec un IC50 de 1250 µg/ml montrant une activité
antioxydante inférieure à celle de l’acide ascorbique.
Khaled-Khodja N. et al. [33], ont trouvé une valeur d’IC50 de 95 µg/ml, en étudiant l’effet
antioxydant de l’huile essentielle de Teucrium polium de (Bejaïa, Algérie), ce qui est
supérieur au pouvoir antioxydant de l’huile essentielle de la plante étudiée. Pour le
Teucrium polium geyrri , le résultat trouvé par Hammoudi R.est 19,46 µg/ml [34], malgré
que ce sont les mêmes espèces. D’autre part, à comparer avec d’autres espèces comme
Teucrium marum (Lamiaceae), Ricci, D., et al. [35] trouvent une valeur d’IC50 de 13,13
µg/ml ainsi que Bencheikh S. E. [36] qui obtient avec un IC50 de 58,6336 µg/ml montrant
une valeur inférieure à celle signalée dans notre étude .
D'une manière générale, l’huile essentielle de l’espèce étudiée possède une activité
antioxydante très faible en comparaison avec celle des autres espèces de Teucrium.
- Dans le cas des polyphénols, en comparant les IC50 des différents extraits testés de notre
plante par rapport à celle de standard butylhydroxytoluène BHT (11,5 µg/ml). Nous
remarquons, en premier lieu que tous nos extraits ont des activités moins importantes que
la substance de référence. En second lieu, l’extrait Acétate d'éthyle est généralement le
plus actif par rapport aux autres extraits.
Selon les valeurs indiquées dans le tableau B (AnnexeVIIII) qui sont reprises en
histogramme de la concentration d'inhibition à 50% (CI50). Nous notons une divergence
évidente dans les valeurs obtenues entre les différents solvants utilisés dans le processus
111
d'extraction des plyphénols. Les profils d’activité anti-oxydante révèlent que l’extrait
acétate d’éthyle a manifesté un pouvoir antioxydant important (41, 47 µg/ml), suivi par
l'extrait n-butanol d'une valeur égale à (47,56 µg/ml). Tandis que l'extrait aquatique est le
moins actif avec une valeur égale à (149,92 µg/ml). Ce résultat peut être expliqué par la
richesse de l’extrait AcOEt en composés phénoliques comme les flavonoïdes qui sont des
antioxydants puissants.
Nos résultats se révèlent plus importants que ceux trouvés par MalkI S.et Hamoudi
R. [21,34], qui ont enregistré des valeurs de CI50 plus élevées pour les deux sous espèces
Teucrium polium L. Capitatum et Teucrium polium geyri respectivement.
Il est important de noter que les teneurs en polyphénols totaux et en flavonoïdes sont
corrélées avec l’activité anti-oxydante.
En effet, dans ce sens et d’une manière générale, le pouvoir antioxydant est

fortement tributaire de la concentration en composés phénoliques (Hanson et al., 2004) [38].
Ces données sont corroborées par les travaux de (Trabelsi et al. 2010) [39], qui ont montré
une corrélation significative et positive entre les teneurs en composés
phénoliques et l’activité antioxydante. Néanmoins dans le cas de nos résultats relatifs à
l’activité antiradicalaire DPPH, cette relation n’est pas toujours évidente, puisqu’elle
peut être non significative voire même négative dans certains cas. En effet, (Djeridane et
al. 2006) [40] estiment que l’existence d’une synergie entre les différents composés
phénoliques peut être déterminante dans la capacité antioxydante d’une plante donnée.
Ainsi cette activité ne dépend pas seulement de la teneur en polyphénols mais aussi
de la structure et de l’interaction entre les différents composés [41,42].
V.6.2.Evaluation de l'activité antibactérienne
L'activité antibactérienne des extraits obtenus est déterminée par la méthode de

diffusion en milieu gélosé. Elle nous a permis de mettre en évidence le pouvoir
antibactérien vis-à-vis de huit bactéries de références. Les souches bactériennes utilisées
sont des souches de référence obtenues de l’American Type Culture Collection (ATCC).
La gentamicine et le DMSO ont servi de témoins positif et négatif, respectivement.
112
V.6.2.1.Résultats de l’antibiogramme
La détermination de la zone d’inhibition permet une estimation du caractère de

sensibilité ou de résistance de la souche bactérienne vis-à-vis des extraits testés. Les
diamètres des zones d’inhibition sont mesurés par un pied à coulisse en mm (Annexe X).
Les résultats obtenus après 24h d’incubation à l’étuve à 37 °C, sont rassemblés dans le
tableau V.5. D’après Ponce et al. (2003) [43], la sensibilité d'un extrait a été classée par le
diamètre des halos d'inhibition : non sensible (-) pour les diamètres de moins de 8mm ;
sensible (+) pour des diamètres de 8 à 14mm ; très sensible (++) pour des diamètres de 15
à 19mm et extrêmement sensible (+++) pour les diamètres de plus de 20 mm.
L’extrait est considéré comme bactéricide si aucune colonie n’est observée dans la zone
d’inhibition. Par contre, il est dit bactériostatique quand quelques colonies sont présentes,
même en densité faible.
Tableau V.5.: Zones d’inhibition en mm des extraits de Teucrium polium L. sur les
souches bactériennes testés.
Les bactéries HE EP DCM Ac-Et ButOH T+

Les extraits
Entero D 16 00 00 00 00 22
S ++ - - - - +++
Pseudomenas D 10 00 00 00 00 25
S + - - - - ++++
E. Colie D 11 00 00 00 00 21
S + - - - - +++
Salmonelle D 12 07 00 11 10 23
S + + - + + +++
Vibrio D 14 00 00 00 00 22
S + - - - - +++
Staph NCTC D 16 08 08 16 14 30
S ++ - - ++ + +++++
Candida D 14 00 00 00 00 22
S + - - - - +++
K.O. D 16 00 00 00 00 23
S ++ - - - - +++
D : diamètre de la zone d’inhibition ; S : Sensibilité ; - : Résistante ; + : Sensible ; ++ : Très sensible.
113
V.6.2.2.Résultats de la CMI et la CMB
Les valeurs obtenus des CMI et CMB de l'huile essentielle et des extraits acétate d'éthyle et
celle de n- butanol de la plante étudiée, sur la souche Staphylococcus aureus ATCC 25923
sont illustrés dans le tableau V.6.
On appelle CMI, la plus faible concentration d'une substance, qui peut inhiber le
développement des bactéries pendant 18 à 24 h à 37 °C et la CMB, la concentration
d’antibiotique qui laisse moins de 5% de survivants après 18 heures. Les antibiotiques
classés comme bactéricides sont ceux pour lesquels il y a peu d’écart entre la CMI et la
CMB [44],
Tableau V.6. : Résultats des CMI et CMB des extraits actifs de Teucrium polium L.
Staphylococcus aureus
Extrait HE Ac-Et But
CMI ( µg/ml) 1 0.125 0.125
CMB (µg/ml) 2 0.25 0.25
V.6.2.3.Interprétation des résultats
Les résultats portés sur le tableau V.6, montrent que les réponses sont très variables, ils
permettent de mentionner :
• Il apparaît un effet antibactérien de la plante Teucrium polium L.ssp Thymoïdes sur

différentes souches bactériennes Gram positif ou négatif. Lequel effet est due à la
présence des huiles essentielles et des flavonoïdes qui sont des métabolites
secondaires, réputés pour leur activité antibactérienne.
• Le diamètre de la zone d’inhibition variant de 7 à 16 mm, diffère d’une bactérie à une
autre et d’un extrait à un autre. La variation de l’activité antibactérienne des extraits
explique les variations de leurs compositions chimiques.
• Les résultats de ce travail ont démontré que l'huile essentielle de Teucrium Polium L.
présente un potentiel antimicrobien contre une gamme de microorganismes (bactéries
testés).
114
• Pour les composés phénoliques, nous constatons que Salmonnelle et Staphylococcus

aureus sont les bactéries les plus sensibles. Ceci pourrait être expliqué par le fait que
les bactéries à G+ possèdent des dispositifs structuraux qui sont plus susceptibles aux
extraits naturels [45].
• Il est clair que l’extrait acétate d'éthyle présente le meilleur résultat sur un diamètre
élevé de la zone d’inhibition (16 mm) avec une CMI de 0,125 µg/ml et une CMB de
0,25 µg/ml. Son effet inhibiteur couvre aussi bien les bactéries Gram positif que celles
Gram négatif.
• L’extrait butanolique est doué d’une activité non négligeable sur Staphylococcus
aureus avec un diamètre de la zone d’inhibition (14 mm), une CMI de 0,125 µg/ml, et
une de CMB de 0,25 µg/ml.
• Une faible réactivité est présentée par les deux extraits éther de pétrole et
dichlorométhane, ceci peut s'expliquer par leur richesse en composés les moins actifs.
• Vis-à-vis des bactéries à Gram négatif Pseudomonas aeruginosa, Klebseila oxytoca,
E.coli et Vibrio cholerae ainsi qu'envers la levure candida, elles se sont avérées les
plus résistantes.
• La présence d’une zone d’inhibition bien appréciable autour des extraits testés permet
de constater une activité relativement importante vis-à-vis des Cocci Gram +
Staphylococcus aureus et salmonelle et Bacille Gram -.
• On peut dire que cette espèce de Teucrium est significativement sensible aux extraits
avec des CMI extrêmement faibles montrant un effet bactériostatique.
• Les CMB obtenues pour les extraits étudiés, sont plus proches des CMI, ce qui
explique que les deux extraits testés ont un pouvoir bactéricide.
Selon la bibliographie disponible, il n’existe pas de travaux déjà réalisés sur l’activité
antimicrobienne de l’huile essentielle et des polyphénols de Teucrium Polium L. sous
espèce Thymoïdes. Pour cela, les résultats de cette étude sont comparés à ceux obtenus
pour d'autres espèces de Teucrium. Les résultats obtenus par R. Hammoudi et M.H.
Mahammed [46] montrent une activité sur E.coli et une résistance envers Pseudomonas
par contre ceux de S. Benchikh [35], ne présentant pas d’activité sur E.coli et Leisteria
mais sont actives sur Pseudomonas et d'autres bactéries. Les résultats portés par Özkan G
[47] révèlent une activité antibactérienne des extraits de Teucrium montbretii. Selon
Derwich et al. [48], l’activité antimicrobienne des produits naturels est expliquée par la
115
présence de groupes d'hydroxyles phénoliques capables de former des liaisons hydrogènes

avec les emplacements actifs des enzymes de la cellule ciblée.
Le mode d’action des extraits dépend du type de microorganismes, du type d’extrait et de

sa concentration. En général, les bactéries Gram(-) sont plus résistantes que les bactéries
Gram(+) et ce grâce à la structure de leur membrane externe [49]. Plusieurs travaux ont
confirmé la grande résistante des bactéries G- par rapport aux G+. Ce constat peut être dû à
l'action de certains composés, d’une part et à la présence d'une couche de
lipopolysaccharide (LPS) chez les bactéries G- qui pourrait fonctionner comme barrière
efficace contre n'importe quelle biomolécule entrante, d’autre part [50]. L’activité des
principes actifs et des extraits végétaux peut dépendre de leur composition chimique. Elle
peut être liée à la polarité des substances bioactives, aux conditions de séchage, de broyage
de la plante [51] et dépend également de plusieurs facteurs dont le mode d’extraction et la
concentration en principes actifs [52].
Par conséquent, il est suggéré que les extraits phénoliques et les huiles essentielles soient
utilisés comme source potentielle d'agents antibactériens naturels contre les bactéries
multi-résistantes [53].
116
Références du chapitre V
1. Marjorie M.C., (1999). Plant products as antimicrobial agents. Clinical microbiology
Reviews, 12, 564-582.
2. Naghibi F., Mosaddegh M., Mohammadi Motamed S & Ghorbani A. (2005).
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120
• CONCLUSION
GÉNÉRALE
Conclusion Générale
La majorité des médicaments actuels sont des copies concentrées de remèdes

végétaux. Notre pays est doté d’une biodiversité végétale immense qui reste à découvrir.
Une grande partie de cette flore est constituée par des espèces médicinales et c'est dans le
cadre de la recherche de molécules à activités biologiques nouvelles, d'origine végétale,
que notre travail s'inscrit. L’objet de cette étude est, en l'occurrence, l'évaluation de
l'activité antioxydante et antibactérienne des extraits organiques de la partie aérienne de la
plante médicinale Teucrium polium L. sous espèce thymoïdes, de la wilaya de Biskra.
La sélection de la plante est basé sur quelques données ethno-pharmacologiques.

Le screening phytochimique réalisé, a mis en évidence la présence de divers métabolites
secondaires tels que: huiles essentielles, polyphénols, flavonoïdes, tanins, stérols, terpènes,
saponosides et alcaloïdes dans cette plante. Dans un premier temps, nous nous sommes
intéressés à la qualification, par analyse chromatographie CCM et HPLC qui a révélé la
présence de l'acide ascorbique, gallique, chlorogénique, caféique, quercétine, vanilline,
béta coumarine et la rutine et d'autres composés majoritaires non identifiés.
L'analyse semi-quantitative des phénols totaux, des flavonoïdes et des tanins condensés des
extraits phénoliques a été réalisée par dosage colorimétrique. Celle-ci nous a permis de
confirmer que cette plante est riche en composés phénoliques. La teneur en polyphénols
totaux estimée, par la méthode de Folin Ciocalteu est comprise entre 119,66 et 49,89 mg
EAG/g d'extrait. Le dosage des flavonoïdes par la méthode d’AlCl3 a révélé, que l’extrait
acétate d'éthyle détient la quantité la plus élevée (97,55 mg EC/ g d’extrait), suivi par
l'extrait butanolique (94,55 mg EC/g d'extrait). La teneur la plus élevée en tanins
condensés par la vanilline est attribuée à l'extrait acétate d'éthyle (152 mg EC/g d’extrait).
Les résultats de cette quantification prouvent la richesse de l'extrait d'acétate par les
composés phénoliques.
La détermination de l'activité antioxydante de l'huile essentielle de cette plante est
effectuée par la méthode de piégeage du radical libre DPPH, elle a donnée des résultats
acceptables, avec une valeur de 1.250 mg/ml donc l'huile essentielle de notre plante
présente une capacité de réduction du DPPH. non négligeable, mais celle-ci reste moyenne
par rapport au pouvoir antioxydant des huiles essentielles des autres espèces de la famille
des Lamiacées. Par contre celle des polyphénols, réalisée toujours par la même méthode
(piégeage de radical libre DPPH) sur les extraits phénoliques, a montré que la fraction
93
acétate d'éthyle présente un pouvoir antioxydant plus important que les autres extraits, avec
une valeur de 41, 47 µg/ml.
En parallèle, l’évaluation de l’activité antibactérienne des extraits préparés a été

évaluée in vitro, en utilisant l’antibiogramme standard et la micro-dilution en milieu
liquide; L'huile essentielle de la partie aérienne de Teucrium polium L. Thymoïdes,
présente une excellente sensibilité vis-à-vis des huit microorganismes sélectionnées. Pour
le pouvoir antibactérien des polyphénols, seule la souche Staphylococcus aureus a montré
une bonne activité pour les extraits testés suivi par Salmonella, qui exhibe une activité
moyenne. Les autres souches bactériennes Enterococcus faecalis, Vibrio cholerae,
Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebseila oxytoca et la levure Candida se sont
révélées insensibles aux extraits phénoliques de notre plante. Les résultats obtenus ont
montré que l' extrait acétate d'éthyle a manifesté une activité modérée contre S.aureus et
une faible activité contre Salmonella. En revanche l'extrait butanolique a présenté une
faible activité vis-à-vis de ces bactéries.
Concernant les concentrations minimales inhibitrices (CMI) des extraits

phénoliques et de l’huile essentielle de Teucrium Polium L. Thymoïdes, envers la souche
bactérienne la plus sensible, varient entre 0,125 et 2 µg/ml. L’étude des concentrations
minimales bactéricides (CMB) a permis de mettre en évidence l’effet bactériostatique de
ces extraits, permettant de les classer comme agents antibactériens "bactéricides".
Pour la continuité des travaux entamés avec plus d’efficacité, de nombreuses

perspectives peuvent être envisagées :
élargir le panel des activités antioxydantes in vitro et in vivo.
élargir le spectre d'activités biologiques ciblées, en incluant l'activité cytotoxique,
anti-inflammatoire, antifongique et anticancéreuse, ou autres...
isoler et caractériser les principes actifs responsables de ces propriétés
pharmacologiques.
approfondir l’étude phytochimique, en utilisant des techniques plus performantes
pour la détermination de la structure chimique de ces composés par différentes
méthodes de séparation et d'identification.
étudier la toxicité des extraits pour déterminer leur utilisation.
investigation phytochimique, pharmaceutique et ethnobotanique des autres plantes
médicinales algériennes.
94
• ANNEXE
Annexes
Annexe I : Structure de quelques composés terpéniques
Annexe II: Quelques métabolites secondaires isolés du genre Teucrium
Espèce Principes actifs isolés Références

Teucrium polium L Polyphénols, flavonoïdes ABDOLLAHI et al., 2003
Teucrium hyrcanicum L. 5, 6, 4’-trihydroxy-7-éthoxyflavone OGANESYAN, 2005
(7méthylscutellareine). cirsiliol (6-
hydroxyluteolin derivatives
Teucrium polium subsp. 19-acétylteupoline LA TORRE et al., 1986
Pilosum
Teucrium podium Teupoline MALAKOV et al., 1982
Teucrium orientale Flavone : cirsilineol (5,4’-dihydroxy- OGANESYAN, 2007

6,7,3’trimethoxyflavone).
Teucrium tomentosum 3-acétoxy-4,18:15,16-diepoxy-6,12- SOUNDARYA et al., 2003

dihydroxyneocleroda-13(16),14-dien-
19,20olide,
Annexes
Teucrium frutican Diterpènes, flavonoïdes SOSA et TONN, 2006 ;

COLL et TANDRO, 2004
Teucrium lusitanicum et α-pinène, sabinène, β-pinène, CAVALEIRO et al., 2004
T. algarbiensis limonène, germacrène D et élemol.
Teucrium divaricatum villosine B, villosine A, teuvincenone ULUBELEN et al., 1994
D
Teucrium arduini L. Sesquiterpène (β - caryophyllène KREMER et al., 2013
(Croatie) (35.2 %) et germacrène D (18,7 %)).
Composés phénoliques (quercétine,
acide férulique et acide rosmarinique)
Teucrium chamaedrys Steroides ULUBELEN et al,1993 ;

LOPEZ et al., 2007
Teucrium cylindrunium neoclerodane diterpènes OLGUIN et al., 1998
Teucrium marum Isocaryophyllène, β-bisabolèn, RICCI et al., 2005
(Sardinia) βsesquiphelletrene, α -santalene
dolichodial et, Α-caryophyllene.
Teucrium Iberian Terpènes VELASCO- NEGUERUELA
(Peninsula et Balearic et PEREZ-ALONSO, 1990
islets)
Annexe III: Les réactifs utilisés pour le criblage phytochimique

Réactif de MAYER
Chlorure mercurique…………………...... ..1,35g
Iodure potassium……………………..……..5 g
Eau distillée…………………………....……30 ml
Agiter jusqu’à dissolution puis ajouter :
Eau distillée…………………….........q.s.p 100 ml
Réactif DE BOUCHARDAT
Iode…………………………………….....….2 g
Iode de potassiu……….……….……...….….2 g
Eau distillée…………....…………..q.s.p 100 ml
Réactif de DRAGENDORFF
Sous nitrate basique de bismith…….……..…0.85 g
Iodure potassium……………………….…...…..8 g
Acide acétique glacial……………………….. 10 ml
Eau distillée…………………………………..70 ml
Chauffer et filtrer sur verre fritté, si nécessaire.
Réactif de STIASNY :
Formol…………………………………..….….6 ml
Acide chlorhydrique…………………….……..3 ml
Annexes
Annexe IV: Organigramme de l'extraction des polyphénols
Annexe V: Calcul des cendres totales (CT)et cendres sulfuriques (CS)
La masse finale (totale) M= 60,83g . .

La masse de creuset vide M’= 60,21
CT = ∗ 100% = 12,4 %
La prise d’essais de la matière PE= 5g
,
% = ∗ 100% = 4,20 %
Annexes
Annexe VI : Relation entre structure et couleur de flavonoïdes
Couleur de tache Type de flavonoïde

Annexe
Brun 3-OH absent ou 3-substitué
Violet Flavone 5-OH et 4-OH
Flavone 3-OR et 5-OH ; 4-OH
Flavone 6 ou 8 OH
Chalcone, isoflavone, dihydroflavonol, flavanones.
Bleu clair Flavone sans 5-OH libre
Flavonol sans 5-OH libre avec 3-OH substitué
Jaune terne, jaune, Flavonol 3-OH libre avec ou sans 5-OH libre.
fluorescence orangée
Jaune vert brillant 5-OH libre ou 5-OH substitué
Jaune fluorescent avec 3-OH libre
Aurone, chalcone, flavanone.
Jaune pâle Dihydroflavonol
Couleur de tache Type de flavonoïde
Brun 3-OH absent ou 3-substitué
Violet Flavone 5-OH et 4-OH
Flavone 3-OR et 5-OH ; 4-OH
Flavone 6 ou 8 OH
Chalcone, isoflavone, dihydroflavonol, flavanones.
Bleu clair Flavone sans 5-OH libre
Flavonol sans 5-OH libre avec 3-OH substitué
Jaune terne, jaune, Flavonol 3-OH libre avec ou sans 5-OH libre.
fluorescence orangée
Jaune vert brillant 5-OH libre ou 5-OH substitué
Jaune fluorescent avec 3-OH libre
Aurone, chalcone, flavanone.
Jaune pâle Dihydroflavonol
Annexe III : la gamme d’étalonnage de l’acide gallique.
Annexe VII : Résultats de dosage des composés phénoliques
GAMME D'ETALLONAGE
Gamme Acide
R1 R2 R3 MOY
gallique
25 0,067 0,08 0,057 0,068
50 0,16 0,152 0,142 0,151
100 0,451 0,458 0,449 0,453
200 0,809 0,806 0,793 0,803
300 1,137 1,141 1,039 1,106
Annexes
valeurs de l’absorbance pour la courbe d’étalonnage de l’acide gallique.
Polyphenoles totaux
R1 R2 R3 Moy Cal
acétate 0,37 0,389 0,318 0,359 119,66
Absorbane d’éthyle
à 760 nm N-butanol 0,289 0,327 0,329 0,315 106,99
aqueux 0,143 0,153 0,353 0,149 49,89
Valeurs moyennes de l’absorbance d’étalonnage de la catéchine.
Catéchine MOY
0 0
50 0,187
100 0,371
200 0,64
300 1,056
500 1,645
Valeurs moyennes de l’absorbance de la courbe d’étalonnage de la catéchine.
FLAVONOIDES
R1 R2 R3 MOY Cal
acétate 0,333 0,308 0,291 0,310 97,55
Absorbant
d’éthyle
à 510 nm
n-butanol 0,302 0,317 0,289 0,302 94,55
aqueux 0,112 0,122 0,104 0,084 31,55
Valeurs moyennes de l’absorbance de la courbe d’étalonnage de la catéchine.
TANNIN CONDENSE
R1 R2 R3 Moy Cal
Absorbant acétate 0,425 0,438 0,559 0,474 152
à 550 nm d’éthyle
n-butanol 0,071 0,132 0,130 0,111 31
Aqueux 0,133 0,152 0,136 0,140 40,78
Annexes
Dosage des polyphénols
Concentrationv(mg/ml R1 R2 R3 Moy Cal PI%

[10] 0 ,326 0,345 0,321 0 ,330 0,173 17,3
acétate [20] 0,264 0,232 0,234 0,243 0,34 39,19
d’éthyle [50] 0,198 0,191 0,192 0,193 0,5158 51,58
[150] 0,194 0,260 0,179 0,166 0,5341 53,41
[250] 0,198 0,183 0,188 0,189 0,5258 52,58
Absorbance [20] 0,293 0,294 0,277 0,288 0,28 28
à 695
n-butanol [50] 0,197 0,194 0,204 0,197 0,506 50,6
[150] 0,191 0,168 0,171 0,176 0,558 55,8
[250] 0,178 0,173 0,179 0,176 0,558 55,8
[20] 0,354 0,371 0,369 0,364 0,088 8,8
aqueux [50] 0,280 0,249 0,250 0,250 0,3508 35,08
[150] 0,201 0,201 0,190 0,193 0,5066 50,66
[250] 0,197 0,180 0,188 0,188 0,529 52,9
Tableau A: Quantité des phénols totaux dans les différents extraits.

Extrait Polyphénols totaux
(mg EAG/g d’extrait)
Acétate d’éthyle 119.66 ±12.25
n-butanol 109.99 ±7.53
Eau 49.89 ± 1.93
y Tableau B: Quantité des flavonoïdes totaux dans les différents extraits.

Extrait flavonoïdes totaux
Acétate d’éthyle 97.55 ±7.04
n-butanol 94.55 ±5.17
Eau 31.55 ± 3.01
Tableau C : Quantité des tanins condensés (mg EC/g d’extrait).
Extrait tannins condensé

Acétate d’éthyle 152,00 ±24,63
n-butanol 31,00 ±11,55
Eau 40,00 ± 3,40
Annexes
Annexe VIII : Résultats de l'activité antioxydante de l'HE de Teucrium

polium ssp thymoïdes
Concentrations Pourcentage d’inhibition du DPPH.

(µg/ml)
600 35.68 ± 0.17
800 38.54 ± 0.77
1000 44.37 ± 0.46
1200 50.10 ± 0.77
1400 52.45 ± 1.40
1600 56.13 ± 0.61
2000 59.40 ± 0.78
Tableau A: CI50 du test DPPH (µg/ml) des différents extraits
ntioxydants Valeur de IC50

(mg/ml)
HE de TP 1,250
Acide ascorbique 0.225
70
Pourcentage d'inhibition du
60
R² = 0,972
50
DPPH
40
30
20
10
0
0 500 1000 1500 2000 2500
Concentrations de l'HE en µg/ml
Annexes
Annexe VIIII : Résultats de l'activité antioxydante des polyphénols de

Teucrium polium ssp thymoïdes
Extrait Répétition CI50

acétate R1 49 ,5
d’éthyle R2 38,82
R3 36,08
n- R1 48,54
butanol R2 43,13
R3 51,01
aqueux R1 152
R2 155
R3 142,76
Tableau B: Valeurs des CI50 de différents extraits étudié
Extrait Valeurs de (IC

50 en µg/ml)
Acétate d’éthyle 41,47
n-butanol 47,56
Eau 149,92
BHT 11,5
Annexes
Annexe X : Antibiogramme des extraits préparés

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République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

UNIVERSITE MOHAMED KHIDER BISKRA

Thèse de Doctorat en Chimie

Présentée par : Mme FETTAH Asma

Étude phytochimique et évaluation de l'activité

Soutenue le 12/06/2019 devant la Commission d’Examen :

BELAIDI Salah Prof. Univ. Biskra Président

Au terme de ce travail il m’est agréable de remercier toute personne ayant contribué

L’encadrement scientifique de ce travail a été assuré par Mr Kaddour LAMARA,

J’adresse mes sincères remerciements à Mr Salah BLAIDI professeur à l'université

Je remercie très sincèrement Mr Touhami LANEZ professeur à l'université

Toutes mes expressions de respect et de gratitude au Mr Mohamed KECHEBAR

J’adresse mes vifs remerciements à Mme Naima BENCHIKHA maitre de

Je tiens à exprimer ma profonde reconnaissance à tous et toutes mes collèges et très

De plus, mes remerciements vont également aux enseignants et aux personnels du

À mon mari Dr R. MAKHLOUFI, en signe d’amour et

À mes très chères filles : Sirine, Narmine et Yasmine

À mes frères. À mes sœurs. À toute ma famille de près

À tous ceux qui me connaissent

À tous ceux qui aiment la science

Je dédie ce modeste travail.

‫ﻟﻤﻔﺘﺎﺣﻴﺔ‪ :‬ﺍﻟﺘﻮﻛﺮﻳﻮﻡ )‪ - (Teucrium polium L.‬ﺍﻟﺸﻔﻮﻳﺔ )‪ - (lamiacea‬ﺍﻟﺰﻳﻮﺕ ﺍﻷﺳﺎﺳﻴﺔ ‪ -‬ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻔﻴﻨﻮﻝ ‪-‬‬

This work is a contribution to the valorization of medicinal plants, used in traditional

Keywords: Teucrium polium L., lamiaceae (labiae), essential oils, polyphenols,

Ce travail est une contribution à la valorisation des plantes médicinales, utilisées en

Mots clés : Teucrium polium L - lamiacées (labiées) -huiles essentielles - polyphénols -

Figure I.1 Les voies des métabolismes 5

Figure I.3 Structure chimique de quelques acides phénoliques. 8

Figure I.4 Structure de base des flavonoïdes. 9

Figure I.5 Structure générale des anthocyanes. 12

Figure I.6 Structure de base des quinones. 12

Figure II.1 Stress oxydant. 37

Figure II.2 Espèces Réactives de l’Oxygène (ERO). 38

Figure II.3 Formation des Espèces Réactives résulte d’une réduction 39

Figure II.5 Pprincipe des antioxydants. 41

Figure II.6 Actions de la vitamine C sur les radicaux actives. 42

Figure II.7 Aperçu des différentes espèces oxygénées activées (ERO) 43

Figure II.9 Structure de la paroi bactérienne. 48

Figure III.1 Une image brute Google Earth de la commune Djemourah 57

Figure III.2 Limite administrative de la commune de Djemourah 57

Figure III.3 La plante étudiée Teucrium polium L. 60

Figure III.4 Association des espèces épineuses avec Teucrium polium L. 62

Figure IV.1 Plan général de la partie expérimentale. 71

Figure V.1 Teneure d’eau dans le Teucrium polium L. 97

Figure V.2 Résultat des cendres. 98

Figure V.3 Rendements moyens des extraits de Teucrium Polium L. 100

Tableau I.1 Les différentes classes des flavonoïdes. 9

Tableau III.1 Situation géographique et bioclimatique de la station 56

Tableau IV.1 Les systèmes utilisés pour l’extrait d’éther de pétrole. 80

Tableau IV.3 Gradient d’élution CLHP pour l’analyse des polyphénols. 82

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