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A RECEPTION DU COLIS :
Pour les besoins du transport, les souches sont placées dans des flacons hermétiques, elles ont donc été privées
d'oxygène.
Nous vous conseillons de procéder à un dégazage (ouvrir la bouteille devant la flamme d'un bec bunsen ou sous une
hotte à flux luminaire) afin de renouveler l’air contenu dans les flacons.
Si possible, remplacer le bouchon hermétique par du coton cardé stérile, afin de permettre l'oxygénation.
Dans ces conditions, et avec un éclairage constant et suffisant pour les euglènes avec chloroplastes, les souches
peuvent être conservées dans leur bouteille de transport 4 semaines.
Sinon, dégazer tous les jours ou tous les deux jours.
Conserver à température ambiante, lumière constante.
COMPOSITION DU COLIS :
MATERIEL NECESSAIRE :
- Microscope
- Lames et lamelles
- Matériel de l’option « matériel »
- Feutres permanents
- Bec bunsen ou hotte à flux laminaire
MATERIEL RECOMMANDE :
Étuve
Caméra pour microscope
FICHE PREPARATEUR
# ATTENTION # : Il est indispensable d’effectuer cette opération en conditions stériles afin de ne pas contaminer les
milieux de culture. Toute contamination fausserait les observations et les résultats.
Travailler devant la flamme d’un bec bunsen ou sous une hotte à flux
laminaire.
Verser 4ml de milieu organique (noté MEUG) dans 80 tubes stériles de 5ml ou 10 ml. Avec un feutre permanent noter
sur chaque tube MO pour Milieu Organique.
Verser 4ml de milieu minéral (noté MEUG00) dans 80 tubes stériles de 5ml ou 10 ml. Avec un feutre permanent noter
sur chaque tube MM pour Milieu Minéral.
Conserver ces tubes sur un portoir à température ambiante (pour 2 à 3 jours) ou au réfrigérateur pour une durée plus
longue.
$ Conseil : Il est préférable d’utiliser des tubes à fond plat, sinon il sera nécessaire de fournir un portoir adapté aux
tubes pour chaque binôme.
2) Préparation de la salle :
Incuber les 8 tubes à 25°C 4 tubes seront incubés à l’obscurité et 4 à la lumière (voir détail dans le protocole en page 9)
Pour les tubes incubés à la lumière, l’idéal est de les exposer à une alternance lumière/obscurité de 16heures/8heures.
A. Organisation du travail :
B. Intérêts pédagogiques :
Généralités :
Les Euglènes sont des algues unicellulaires d’eau douce (il existe de rares espèces d’eau marine), elles sont flagellées.
Elles sont de forme fusiforme avec un flagelle unique.
Leur longueur est généralement comprise entre 30 et 70 µm pour une largeur comprise entre 6 et 18 µm.
Les euglènes s’observent facilement au microscope au grossissement x100 à x600.
1. Noyau
2. Chloroplastes
3. Granules paramylon
4. Vacuole contractiles
5. Kinetosome
6. Réservoir
7. Flagelle court
8. Capteur de lumière
(oeil rudimentaire)
9. Stigmate
10. Flagelle
Métabolisme :
L’euglène est une algue qui a la particularité de posséder un double
métabolisme autotrophe et hétérotrophe :
- Les euglènes possèdent des chloroplastes ce qui leur permet de se multiplier dans un milieu minéral en présence de
lumière, c’est la photosynthèse (métabolisme autotrophe)
- Les euglènes sont également capables de se multiplier à l’obscurité sur un milieu organique (métabolisme
hétérotrophe). Notre milieu contient de l’acide lactique mais d’autres sources organiques peuvent tout à fait être
utilisées.
Le temps de génération d’une euglène sur milieu minéral est de 24 heures, lorsqu’elle est exposée à une alternance
lumière/obscurité de 16heures/8heures à une température de 25°C et que les conditions d’oxygénation sont bonnes.
Après deux semaines de culture, la concentration de la suspension est
généralement d’environ 5x105 cellules.ml-1.
Cultivées dans les mêmes conditions avec de l’acide lactique, la concentration de la suspension atteint dans le même
temps 3 à 4x106 cellules. ml-1
Le temps de génération est d’environ 12 heures.
Lorsque les euglènes sont cultivées en milieu organique et à la lumière, elles profitent des deux types de métabolisme
et leur croissance est optimale.
Lorsque les euglènes sont cultivées sur milieu minéral en présence de lumière, elles photosynthétisent.
Lorsque les euglènes sont cultivées sur milieu organique à l’obscurité, elles respirent uniquement et perdent leur
chlorophylle, au microscope les chloroplastes sont observables mais ils sont vides. L’euglène parait blanche.
Les euglènes peuvent perdre ces chloroplastes dans certaines conditions. Si on ajoute un antibiotique comme la
streptomycine au milieu de culture des euglènes, la division des chloroplastes est inhibée alors que la division
cellulaire n'est pas affectée. Au cours des divisions successives des euglènes, les chloroplastes sont répartis dans les
cellules filles, mais au fil des générations, il y en a de moins en moins, ceux-ci ne pouvant plus se diviser. Au bout d'un
certain nombre de divisions cellulaires, les cellules filles ne possèdent plus de chloroplastes. Elles deviennent donc
uniquement hétérotrophes et se comportent comme des cellules animales.
! Prendre l’habitude de noter au marqueur indélébile le contenu des tubes et les initiales du binôme qui a manipulé
! Ne pas contaminer l’espèce étudiée avec des souches externes et ne pas polluer l’environnement avec les
expériences menées sur la souche étudiée :
# ATTENTION # : une fois qu’un instrument ou un milieu stérile est entré en contact avec une cellule, le sol, une main,
le col d’un tube, une solution…, il est contaminé.
B. PREMIERE SEANCE :
Chaque binôme dispose de 4 tubes de milieu organique et 4 tubes de milieu minéral et de deux compte-gouttes
stériles.
Avec un marqueur permanent noter sur les tubes et la lame EUG pour euglènes. Noter également les initiales du
binôme sur chaque tube.
Utiliser l’autre poire stérile et verser 0,5 ml de suspension d’euglènes sans chloroplaste dans deux tubes de milieu
minéral et deux tubes de milieu organique.
Déposer une goutte de suspension d’euglènes sans chloroplaste sur une lame et couvrir avec une lamelle sans
appuyer !
Avec un marqueur permanent noter sur les tubes et la lame ESC pour euglènes sans chloroplaste. Noter également les
initiales du binôme sur chaque tube.
2) Observation au microscope :
Les euglènes sont facilement observables au grossissement x100. Un grossissement de x400 ou x600 permet de mieux
observer les cultures.
Observer et décrire les similitudes et différences entre les deux souches, observer la présence ou non de chloroplastes
facilement visibles grâce à la couleur verte de la chlorophylle qu’ils contiennent.
$ Conseil : Les euglènes se déplacent assez rapidement avec leurs flagelles. Il est possible de les ralentir pour mieux
les observer en utilisant un produit nommé PROTOSLO. Déposer une goutte de PROTOSLO sur la lame
puis une goutte de suspension à observer, attendre 1 minute, couvrir avec une lamelle et observer.
4) Mise en culture :
# ATTENTION # : Ne pas visser complètement les bouchons sur les tubes afin de permettre à l’air de passer.
' NB : Si un contaminant (type champignon par exemple) apparaît dans un tube, écartez-le immédiatement pour
éviter de contaminer les autres tubes.
Pour chaque tube de culture prélever une goutte de suspension et effectuer un montage lame lamelles pour réaliser
une observation au microscope.
Cultures à la lumière :
- Euglènes dans milieu minéral
- Euglènes dans milieu organique
- Euglènes sans chloroplastes dans milieu minéral
- Euglènes sans chloroplastes dans milieu organique
Cultures à l’obscurité :
- Euglènes dans milieu minéral
- Euglènes dans milieu organique
- Euglènes sans chloroplastes dans milieu minéral
- Euglènes sans chloroplastes dans milieu organique
Comparer la densité de chaque culture (nombre de cellules par ml de culture) en regardant le nombre de cellules
visibles sur un champ d’observation au microscope au grossissement x100. Il n’est pas nécessaire d’effectuer un
comptage, une simple estimation suffit.
Observer la couleur des cellules en fonction des conditions de culture.
Observer les chloroplastes des euglènes dans les différentes conditions de culture.
INTERPRETATIONS ET CONCLUSIONS
MO = Milieu organique
MM = Milieu minéral
Cette manipulation est véritablement passionnante car elle est simple à réaliser et elle permet d’illustrer un certain
nombre de points du programme scolaire :
Euglènes :
Lorsque les euglènes poussent sur milieu organique à la lumière, elles profitent des deux métabolismes autotrophe et
hétérotrophe. La densité de la culture est donc optimale et les cellules sont vertes du fait de la présence de
chlorophylle indispensable à la photosynthèse.
Lorsque les euglènes poussent sur milieu minéral à la lumière, les cellules sont toujours vertes puisqu’elles
photosynthétisent mais la densité est moindre car elles ne profitent pas du métabolisme hétérotrophe.
Les euglènes sont incapables de pousser sur milieu minéral à l’obscurité ce qui prouve que c’est bien la photosynthèse
qui lui permet de pousser sur milieu minéral. La lumière est indispensable à la photosynthèse.
Les euglènes peuvent pousser à l’obscurité sur milieu organique, elles sont blanches car elles ne photosynthétisent pas
et perdent la chlorophylle contenue dans leurs chloroplastes. Leur métabolisme est alors purement hétérotrophe.
Le chloroplaste est donc l’organite cellulaire de la photosynthèse.
FICHE CONSERVATION
Les tubes de culture peuvent être jetés dans les bacs de récupération du plastique après avoir bien été décontaminées.
# ATTENTION # : on ne contrôle jamais totalement ce qui pousse sur milieu organique, la décontamination est
obligatoire.