Cinnamomum kanehirai Hay

indegenous tree

Simbiotik/
Endofitik/
parasitik

Antrodia cinnamomea = A. camphorata

 Antroquinonol
Fungsi:
Anti-oxidant (free radical scavenging), anti-inflammatory,
antimicrobial, hepatoprotective, neuroprotective, anti tumor,
anti-cancer, antidiabetic, and free radical-induced DNA damage
protecting activities
Extremely difficult to obtain fruiting
bodies of A. cinnamomea in the wild
as a result of the slow growth rate
and rarity of host tree Cinnamomum
kanehirai Hay.

Therefore, artificial cultivation,

including basswood cultivation, solid-
state fermentation, and submerged
fermentation, has been applied as a
substitute for the wild fruiting body
of A. cinnamomea to meet the
increasing demand

Antroquinonol pathway?
 Antroquinonol (AQ)
• Postulation bahwa biosynthesis AQ dimulai dengan polyketide
pathway
• AQ mempunyai alur biosintesis yang menyerupai CoQ (ring
backbone yang mirip)
• Cincin quinone di meroterpenoids dapat berasal dari
polyketide pathway
• OA yang yang dibentuk oleh acetyl-CoA dan malonyl-CoA via
jalur poliketida, merupakan precursor dari AQ
• Yu et al. (2017) membuktikan bahwa defesiensi gen pks63787
pada mutan A. cinnamomea menyebabkan tidak terproduksi
OA dan AQ. Hal tersebut memperkuat pemahaman bahwa OA
merupakan precursor dari AQ
 Metode
• A. cinnamomea di kultur pada medium [a]
tanpa [U-13C] oleic acid dan [b] yang
mengandung [U-13C] oleic acid
• Diekstrak miseliumnya
• Dianalisa dengan UHPLC-MS
• Fragmen [13C] pada ring backbone terdeteksi
pada spektrum [13C2] AQ
• Orsenilic acid + farnesyl
 Senyawa intermediet

(f) orsellinic acid (OA)

(h) 5-demethoxy-coenzyme Q3 (5-DMQ3)

(e) co-enzym Q0 (CoQ0)

(i) co-enzyme Q3 (CoQ3)

(g) 3-farnesyl-orsellinic acid (FOA) (c) Antroquinonol (AQ)

 Hasil analisa

(6-DMQ3)

• 6-DMQ3
• RT = 14.48
• Terbentuk melalui MVA pathway
• Senyawa yang diduga sebagai intermediet, namun ternyata tidak
terdapat isotop pada gugus benzequinone di 6-DMQ3
 (5-DMQ3)
• (5-DMQ3) (RT = 19.97 min)
mirip dengan 6-DMQ6
[M + H]+ = 357.24242
produk ion tropylium =
m/z 167.07027
Ion chromenylium =
m/z 207.10157

Senyawa yang menunjukkan

bahwa terdapatnya
penggabungan antara
prenilated aromatik dan
benzoquinone ring pada yeast
[13C2](5-DMQ3)
 CoQ3 • CoQ3 RT = 20.41 min
[M + H]+ = 387.25299
product ions
tropylium m/z 197.08084
chromenylium m/z 237.11214

[13C2]CoQ3
AQ

AQ (RT = 22.26 min)

[M + H]+ = 391.28429,
tropylium ion = m/z
181.08592
chromenylium ion = m/z
221.11722

[13C2]AQ
 OA pada RT = 2.45 min
Precursor ion [M+H]+ =
OA standar m/z 169.04954
produk ion =
m/z 151.03897

OA [M + H]+

OA [m]+
 CoQ0 pada RT = 3,43 min
Precursor ion [M +H]+ =
CoQ0 standar 183.06519
produk ion =
m/z 168.04171 dan
m/z 137.05971

CoQ0 [M + H]+

CoQ0 [m]+
 5-DMQ0 [M + H]+
5-DMQ0 pada RT = 3.58 min
Precursor ion [M + H]+ =
155.07027
product ion =
m/z 109.02841 dan
m/z 127.03897

[13C2] 5-DMQ0 [M + H]+

Senyawa Teori (%) [a] (%) [b] (%)
OA 0.8019 0.9 10.2
CoQ0 0.8046 0.9 10.6
Jumlah OA dan CoQ0 ditemukan lebih tinggi pada [bl]
dibandingkan pada [a]. Hasil tersebut menunjukkan bahwa
[13C2]OA dan [13C2]CoQ0 yang terdeteksi pada [sampel] berasal
dari [13C2]asetil CoA.
DMQ3 3.2 22.1
Acetyl-CoA yang diberi label [13C2] ada pada elusi atau senyawa
dengan RT = 19.97 min yaitu DMQ3.
DMQ3. (5-DMQ3) terbentuk melalui polyketide pathway.
 Poliketid pathway
AQ biosynthesis is assumed to be highly related to the CoQ biosynthesis genes
Mevalonic acid pathway
 Kesimpulan
• Terdapat dua rute yang memungkinkan pada pembentukan AQ:
• Rute Pertama :
• OA terbentuk dari poliketida pathway
• Farnesyl terbentuk dari mevalonat pathway
• Bergabung membentuk Intermediet pertama : 3-farnesyl-orsellinic acid (FOA)
• FOA methylation pada C-6; decarboxylation dan hydroxylation pada C-1
membentuk 5-demethoxy-CoQ3 (5-DMQ3)
• Hydroxylation dan methylation pada C-5 membentuk CoQ3
• Sehingga membentuk AQ.

• Rute Kedua
• 5-DMQ0 atau CoQ0 merupakan gugus modifikasi dari OA yang terbentuk dari
poliketida pathway
• Farnesyl terbentuk dari mevalonat pathway
• Farnesil bergabung dengan 5-DMQ0 atau CoQ0
• Membentuk 5-DMQ3 atau CoQ3
• Selanjutnya melalui proses yang belum diketahui menjadi AQ.
 Reference
Jurnal utama:
Chou, K.C.C., F. Sheu, K.H. Chen, S.H. Yang, H.L. Wu, and B.H. Chiang. 2017. Biosynthesis of Antroquinonol and
4-Acetylantroquinonol B via a Polyketide Pathway Using Orsellinic Acid as a Ring Precursor in Antrodia
cinnamomea. J. Agric. Food Chem. 2017, 65, 74−86.
Jurnal pendukung:
Angamuthu, V., M. Shanmugavadivu, G. Nagarajan, and B. K. Velmurugan. 2019. Pharmacological activities of
antroquinonol- Mini review. Chemico-Biological Interactions 297: 8–15.
Yu, P.W., T.Y. Cho, R.F. Liou, S. S. Tzean, and T.H. Lee. 2017. Identification of the orsellinic acid synthase PKS63787 for the
biosynthesis of antroquinonols in Antrodia cinnamomea. Appl Microbiol Biotechnol. (101):4701–4711.
Gatenbeck, S. and K. Mosbach. 1959. Acetate carboxyl oxygen (18O) as donor phenolic hydroxy groups of orsellinic
acid produced by fungi. Acta Chemica Scandinavica, 13.
https://scholar.google.co.id/citations?user=B4FVtawAAAAJ&hl=en&oi=sra
Mosbach, K. and I. Bavertoft. 1971. A comparative study on the biosynthesis of palmitic and orsellinic acid in
Penicillium baarnense. Acta Chemica Scandinavica, 25.
Van Eijk, G.W. 1969. Isolationa and identification of orsellinic acid and penicillic acid produced by Penicillium fennelliae
Stolk. Antonie van Leeuwenhoek, 35.
Braesel, J., Fricke, J., Schwenk, D., Hoffmeister, D. 2016. Biochemical and genetic basis of orsellinic acid biosynthesis
and prenylation in a stereaceous basidiomycete, Fungal Genetics and Biology.
Birch, A.J. 1967. Biosynthesis of polyketides and related compounds. Science, 156.
Steyn, P.S. 1969. The biosynthesis of polyketide derived mycotoxins. Pure & Appl. Chem, 52.
Dewick, P.M. 2009. Medicinal natural product. 3rd ed. John Wiley & Sons.
 Jalur biosintesis CoQ ditelusuri pada mutan
Saccharomyces cerevisiae
• Coq1 mensintesis hexaprenyl diphosphate tail
• Coq2 menambahkan hexaprenyl tail pada 4-hydroxybenzoic acid,
membentuk 3-hexaprenyl-4-hydroxybenzoic acid (HHB).
• Coq6 menambahkan hydroxyl group pertama pada posisi C-5 gugus
aromatic, membentuk 3-hexaprenyl-4,5-dihydroxybenzoic acid dam
selanjutnya melakukan O-methylation untuk membentuk 3-hexaprenyl-
5methoxy-4-hydroxybenzoic acid dengan bantuan Coq3.
• Enzim (yang belum teridentifikasi) akan mengkatalisa decarboxylation dan
hydroxylation pada C-1, membentuk 2-demethyl-6-demethoxy CoQ.
• Coq5 mengkatalisa C-methylation pada C-2 di gugus aromatic membentuk
6-demethoxy-CoQ6 (6-DMQ6).
• Coq7 menambahkan hydroxyl kedua pada posisi C-6, menghasilkan 6-
demethyl CoQ6 yang dilanjutkan dengan, O-methylation kedua yang
dikatalisa oleh Coq3 untuk mensintesis CoQ6.
• Coq4, Coq9, Coq10, dan Coq11 dibutuhkan pada biosintesis CoQ6, namun
fungsinya belum diketahui.