Para se alcançar maiores índices reprodutivos em cabras, o fotoperíodo artificial tem sido usado ... more Para se alcançar maiores índices reprodutivos em cabras, o fotoperíodo artificial tem sido usado apenas na sincronização de estro. Além disso, esta espécie animal tem importância na produção de animais transgênicos produzidos por FIV. O objetivo deste estudo foi produzir e comparar embriões caprinos (Capra hircus-Linnaeus-1758) provenientes de cabras Alpinas submetidas ao fotoperíodo natural (estação e anestro) e artificial (120 luxes/45 dias/20 h). Foram utilizadas 31 cabras Alpinas, distribuídas em cinco grupos, avaliando o fotoperíodo natural e artificial, utilizando sêmen fresco e congelado e heparina (200μg mL-1) na capacitação espermática. Foram obtidos 720 oócitos e sete blastocistos (cinco do G3- fotoperíodo natural e dois no G2 –fotoperíodo artificial, ambos durante o anestro estacional). Estes foram congelados por um ano. Ao término do estudo concluiu-se que não houve diferença estatística entre os grupos. Após a descongelação e transferência de sete embriões, obteve-se o...
It has been the aim to value, in Nelore cows, the association of the assisted reproduction MOET e... more It has been the aim to value, in Nelore cows, the association of the assisted reproduction MOET e OPU-PIV. For this, it has tested the ovarian superovulation (SOV) 48 to 60 h after the OPU (ovum pick-up) at a random phase of the estral cycle (OPU1) and the in vitro production (PIV) of recovered oocytes embryos (OPU2) in different moments after the prostaglandin F2? (PGF2?) application. The females (n=23) after the OPU1 received progestogen implant and 48 to 60 h after the OPU, then it has began the SOV, with FSH 180 mg / cows in 8 doses, for 4 days. In 6th and 7th applications of FSH, there were administered 500 µg of PGF2? being the implants withdrawn in the 7th dose. After 12 h of the SOV, it was applied 25mg of LH to realize AI (artificial insemination) with fixed time. In the day of the embryos recovery 6 treatments were tested: T (0-144) (n=4), T (48-120) (n=5), T (48-96) (n=4), T (72-96) (n=3), T (96-72) (n=4), T (96-48) (n=3) which varied in accordance with moments of the PG...
Due to the exclusively maternal inheritance of mitochondria, mitochondrial genotypes can be coupl... more Due to the exclusively maternal inheritance of mitochondria, mitochondrial genotypes can be coupled to a particular nuclear genotype by continuous mating of founder females and their female offspring to males of the desired nuclear genotype. However, backcrossing is a gradual procedure that, apart from being lengthy, cannot ascertain that genetic and epigenetic changes will modify the original nuclear genotype. Animal cloning by nuclear transfer using host ooplasm carrying polymorphic mitochondrial genomes allows, among other biotechnology applications, the coupling of nuclear and mitochondrial genotypes of diverse origin within a single generation. Previous attempts to use Bos taurus oocytes as hosts to transfer nuclei from unrelated species led to the development to the blastocyst stage but none supported gestation to term. Our aim in this study was to determine whether B. taurus oocytes support development of nuclei from the closely related B. indicus cattle and to examine the fa...
Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, 2007
O objetivo deste estudo foi aplicar diferentes sistemas de cultivo in vitro para folículos pré-an... more O objetivo deste estudo foi aplicar diferentes sistemas de cultivo in vitro para folículos pré-antrais de fetos bovinos da raça Nelore no último trimestre de gestação e para identificar o sistema mais eficiente durante o crescimento dos folículos isolados. Para isso, folículos pré-antrais foram isolados mecanicamente e submetidos ao cultivo individual, por 9 dias, em meio não suplementado ou suplementado com soro fetal bovino (SFB), albumina sérica bovina (BSA) ou suplemento definido sintético substituto do soro KnockoutSR (KNO). Avaliou-se ainda, o efeito do gel de colágeno ou monocamada de fibroblastos fetais bovinos como substrato para o cultivo in vitro. A avaliação do aumento de diâmetro folicular foi realizada no dia da colheita (0 hora) e a cada 72 horas de cultivo. A associação entre meio suplementado com SFB e uso de gel de colágeno como substrato foram significativamente mais efetivos sobre o aumento do diâmetro folicular quando comparados aos demais tratamentos. Quando fr...
Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, 1995
Foram estudados 14 animais da espécie canina, sem raça definida, machos, adultos, com o objetivo ... more Foram estudados 14 animais da espécie canina, sem raça definida, machos, adultos, com o objetivo de analisar, laboratorialmente, o sêmen e os aspectos histológicos dos testículos antes e após a administração do sulfato de vincristina. Para tanto, os animais foram divididos em 2 grupos. No grupo I (8 animais), submeteu-se os animais à orquiectomia unilateral e um fragmento do testículo e epidídimo foram analisados histologicamente. Ao término das aplicações, os animais sofreram a orquiectomia do testículo remanescente e foram avaliados histologicamente. No grupo II (6 animais), inicialmente, condicionou-se os animais para colheita de sêmen. Após obtenção do material fecundante, este foi analisado laboratorialmente. No grupo I, todos os animais apresentaram degeneração testicular em grau leve ou moderada. No grupo II, observaram-se alterações espermáticas, principalmente ao nível de peça intermediária e cauda. Entretanto, considerando que em termos de média, as características físicas...
A utilização do soro fetal bovino (SFB), embora bastante disseminada na produção in vitro (PIV) d... more A utilização do soro fetal bovino (SFB), embora bastante disseminada na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, apresenta limitações por ser um meio indefinido e por causar efeitos que prejudicam a qualidade desses embriões. Por esse motivo, nos últimos anos, grande parte das pesquisas relacionadas à PIV está voltada para a substituição do SFB por outros compostos nos meios de cultura. No presente estudo, foram utilizados como compostos protéicos a albumina sérica bovina livre de ácidos graxos (BSA-FAF) e um produto comercial denominado fluido embriônico (FE) de maneira isolada ou em diferentes combinações e concentrações, com objetivo de substituir ou diminuir a concentração do SFB durante a maturação in vitro (MIV). Para isso, oócitos bovinos foram maturados in vitro nos seguintes grupos (G) que foram delineados de acordo com a suplementação protéica recebida: G1 (controle) = 10% de SFB, G2 = 8mg/mL de BSA-FAF, G3 = 10% de FE, G4 = 6mg/mL de BSA-FAF + 5% de SFB, G5 = 6mg/mL d...
Despite extensive efforts, low efficiency is still an issue in bovine somatic cell nuclear transf... more Despite extensive efforts, low efficiency is still an issue in bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT). The hypothesis of our study was that the use of cytoplasts produced by chemically assisted enucleation (EN) would improve nuclear reprogramming in nuclear transfer (NT)-derived embryos because it results in lower damage and higher cytoplasm content than conventional EN. For that purpose, we investigated the expression of two X-linked genes: X inactive-specific transcript (XIST) and glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PD). In the first experiment, gene expression was assessed in day-7 female blastocysts from embryonic cell NT (ECNT) groups [conventional, ECNT conv; chemically assisted, ECNT deme (demecolcine)]. Whereas in the ECNT conv group, only one embryo (25%; n=4) expressed XIST transcripts, most embryos showed XIST expression (75%; n=4) in the ECNT deme group. However, no significant differences in transcript abundance of XIST and G6PD were found when comparing the embry...
As an important step in the nuclear transfer (NT) procedure, we evaluated the effect of three dif... more As an important step in the nuclear transfer (NT) procedure, we evaluated the effect of three different treatments for oocyte activation on the in vitro and in vivo developmental capacity of bovine reconstructed embryos: (1) strontium, which has been successfully used in mice but not yet tested in cattle; (2) ionomycin and 6-dimethylaminopurine (6-DMAP), a standard treatment used in cattle; (3) ionomycin and strontium, in place of 6-DMAP. As regards NT blastocyst development, no difference was observed when strontium (20.1%) or ionomycin/6-DMAP (14.4%) were used. However, when 6-DMAP was substituted by strontium (3), the blastocyst rate (34.8%) was superior to that in the other activation groups (p <0.05). Results of in vivo development showed the possibility of pregnancies when NT embryos activated in strontium were transferred to recipient cows (16.6%). A live female calf was obtained when ionomycin/strontium were used, but it died 30 days after birth. Our findings show that st...
SummaryAiming to improve the developmental competence of bovine oocytes during meiotic block, thi... more SummaryAiming to improve the developmental competence of bovine oocytes during meiotic block, this study evaluated the effects of a serum replacer (Knockout SR®) and hormones (gonadotropins and estradiol) supplementation of prematuration medium (TCM119 with 0.5 mM IBMX [IBMX group] or 25 μM roscovitine [ROSC group]) on the kinetics of oocyte nuclear maturation and embryo development. Most IBMX and ROSC oocytes prematured for 8 h culture remained in the GV stage (70.3% and 73.1%, respectively; p > 0.05) similar to Control 8 h (63.5%) and to control immature oocytes (Control 0 h, 92.5%). After prematuration for 16 h, no oocytes remained in the GV stage at similar rates to those recently aspirated (p < 0.05); GV rates in ROSC (32.4%) were higher (p < 0.05) than in the Control 16 h group (8.6%), but similar (p > 0.05) to IBMX (9.7%). After in vitro maturation (IMV) for 24 h, metaphase II (MII) rates for oocytes prematured during 8 h were similar (p > 0.05) between control...
Para se alcançar maiores índices reprodutivos em cabras, o fotoperíodo artificial tem sido usado ... more Para se alcançar maiores índices reprodutivos em cabras, o fotoperíodo artificial tem sido usado apenas na sincronização de estro. Além disso, esta espécie animal tem importância na produção de animais transgênicos produzidos por FIV. O objetivo deste estudo foi produzir e comparar embriões caprinos (Capra hircus-Linnaeus-1758) provenientes de cabras Alpinas submetidas ao fotoperíodo natural (estação e anestro) e artificial (120 luxes/45 dias/20 h). Foram utilizadas 31 cabras Alpinas, distribuídas em cinco grupos, avaliando o fotoperíodo natural e artificial, utilizando sêmen fresco e congelado e heparina (200μg mL-1) na capacitação espermática. Foram obtidos 720 oócitos e sete blastocistos (cinco do G3- fotoperíodo natural e dois no G2 –fotoperíodo artificial, ambos durante o anestro estacional). Estes foram congelados por um ano. Ao término do estudo concluiu-se que não houve diferença estatística entre os grupos. Após a descongelação e transferência de sete embriões, obteve-se o...
It has been the aim to value, in Nelore cows, the association of the assisted reproduction MOET e... more It has been the aim to value, in Nelore cows, the association of the assisted reproduction MOET e OPU-PIV. For this, it has tested the ovarian superovulation (SOV) 48 to 60 h after the OPU (ovum pick-up) at a random phase of the estral cycle (OPU1) and the in vitro production (PIV) of recovered oocytes embryos (OPU2) in different moments after the prostaglandin F2? (PGF2?) application. The females (n=23) after the OPU1 received progestogen implant and 48 to 60 h after the OPU, then it has began the SOV, with FSH 180 mg / cows in 8 doses, for 4 days. In 6th and 7th applications of FSH, there were administered 500 µg of PGF2? being the implants withdrawn in the 7th dose. After 12 h of the SOV, it was applied 25mg of LH to realize AI (artificial insemination) with fixed time. In the day of the embryos recovery 6 treatments were tested: T (0-144) (n=4), T (48-120) (n=5), T (48-96) (n=4), T (72-96) (n=3), T (96-72) (n=4), T (96-48) (n=3) which varied in accordance with moments of the PG...
Due to the exclusively maternal inheritance of mitochondria, mitochondrial genotypes can be coupl... more Due to the exclusively maternal inheritance of mitochondria, mitochondrial genotypes can be coupled to a particular nuclear genotype by continuous mating of founder females and their female offspring to males of the desired nuclear genotype. However, backcrossing is a gradual procedure that, apart from being lengthy, cannot ascertain that genetic and epigenetic changes will modify the original nuclear genotype. Animal cloning by nuclear transfer using host ooplasm carrying polymorphic mitochondrial genomes allows, among other biotechnology applications, the coupling of nuclear and mitochondrial genotypes of diverse origin within a single generation. Previous attempts to use Bos taurus oocytes as hosts to transfer nuclei from unrelated species led to the development to the blastocyst stage but none supported gestation to term. Our aim in this study was to determine whether B. taurus oocytes support development of nuclei from the closely related B. indicus cattle and to examine the fa...
Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, 2007
O objetivo deste estudo foi aplicar diferentes sistemas de cultivo in vitro para folículos pré-an... more O objetivo deste estudo foi aplicar diferentes sistemas de cultivo in vitro para folículos pré-antrais de fetos bovinos da raça Nelore no último trimestre de gestação e para identificar o sistema mais eficiente durante o crescimento dos folículos isolados. Para isso, folículos pré-antrais foram isolados mecanicamente e submetidos ao cultivo individual, por 9 dias, em meio não suplementado ou suplementado com soro fetal bovino (SFB), albumina sérica bovina (BSA) ou suplemento definido sintético substituto do soro KnockoutSR (KNO). Avaliou-se ainda, o efeito do gel de colágeno ou monocamada de fibroblastos fetais bovinos como substrato para o cultivo in vitro. A avaliação do aumento de diâmetro folicular foi realizada no dia da colheita (0 hora) e a cada 72 horas de cultivo. A associação entre meio suplementado com SFB e uso de gel de colágeno como substrato foram significativamente mais efetivos sobre o aumento do diâmetro folicular quando comparados aos demais tratamentos. Quando fr...
Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, 1995
Foram estudados 14 animais da espécie canina, sem raça definida, machos, adultos, com o objetivo ... more Foram estudados 14 animais da espécie canina, sem raça definida, machos, adultos, com o objetivo de analisar, laboratorialmente, o sêmen e os aspectos histológicos dos testículos antes e após a administração do sulfato de vincristina. Para tanto, os animais foram divididos em 2 grupos. No grupo I (8 animais), submeteu-se os animais à orquiectomia unilateral e um fragmento do testículo e epidídimo foram analisados histologicamente. Ao término das aplicações, os animais sofreram a orquiectomia do testículo remanescente e foram avaliados histologicamente. No grupo II (6 animais), inicialmente, condicionou-se os animais para colheita de sêmen. Após obtenção do material fecundante, este foi analisado laboratorialmente. No grupo I, todos os animais apresentaram degeneração testicular em grau leve ou moderada. No grupo II, observaram-se alterações espermáticas, principalmente ao nível de peça intermediária e cauda. Entretanto, considerando que em termos de média, as características físicas...
A utilização do soro fetal bovino (SFB), embora bastante disseminada na produção in vitro (PIV) d... more A utilização do soro fetal bovino (SFB), embora bastante disseminada na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos, apresenta limitações por ser um meio indefinido e por causar efeitos que prejudicam a qualidade desses embriões. Por esse motivo, nos últimos anos, grande parte das pesquisas relacionadas à PIV está voltada para a substituição do SFB por outros compostos nos meios de cultura. No presente estudo, foram utilizados como compostos protéicos a albumina sérica bovina livre de ácidos graxos (BSA-FAF) e um produto comercial denominado fluido embriônico (FE) de maneira isolada ou em diferentes combinações e concentrações, com objetivo de substituir ou diminuir a concentração do SFB durante a maturação in vitro (MIV). Para isso, oócitos bovinos foram maturados in vitro nos seguintes grupos (G) que foram delineados de acordo com a suplementação protéica recebida: G1 (controle) = 10% de SFB, G2 = 8mg/mL de BSA-FAF, G3 = 10% de FE, G4 = 6mg/mL de BSA-FAF + 5% de SFB, G5 = 6mg/mL d...
Despite extensive efforts, low efficiency is still an issue in bovine somatic cell nuclear transf... more Despite extensive efforts, low efficiency is still an issue in bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT). The hypothesis of our study was that the use of cytoplasts produced by chemically assisted enucleation (EN) would improve nuclear reprogramming in nuclear transfer (NT)-derived embryos because it results in lower damage and higher cytoplasm content than conventional EN. For that purpose, we investigated the expression of two X-linked genes: X inactive-specific transcript (XIST) and glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PD). In the first experiment, gene expression was assessed in day-7 female blastocysts from embryonic cell NT (ECNT) groups [conventional, ECNT conv; chemically assisted, ECNT deme (demecolcine)]. Whereas in the ECNT conv group, only one embryo (25%; n=4) expressed XIST transcripts, most embryos showed XIST expression (75%; n=4) in the ECNT deme group. However, no significant differences in transcript abundance of XIST and G6PD were found when comparing the embry...
As an important step in the nuclear transfer (NT) procedure, we evaluated the effect of three dif... more As an important step in the nuclear transfer (NT) procedure, we evaluated the effect of three different treatments for oocyte activation on the in vitro and in vivo developmental capacity of bovine reconstructed embryos: (1) strontium, which has been successfully used in mice but not yet tested in cattle; (2) ionomycin and 6-dimethylaminopurine (6-DMAP), a standard treatment used in cattle; (3) ionomycin and strontium, in place of 6-DMAP. As regards NT blastocyst development, no difference was observed when strontium (20.1%) or ionomycin/6-DMAP (14.4%) were used. However, when 6-DMAP was substituted by strontium (3), the blastocyst rate (34.8%) was superior to that in the other activation groups (p <0.05). Results of in vivo development showed the possibility of pregnancies when NT embryos activated in strontium were transferred to recipient cows (16.6%). A live female calf was obtained when ionomycin/strontium were used, but it died 30 days after birth. Our findings show that st...
SummaryAiming to improve the developmental competence of bovine oocytes during meiotic block, thi... more SummaryAiming to improve the developmental competence of bovine oocytes during meiotic block, this study evaluated the effects of a serum replacer (Knockout SR®) and hormones (gonadotropins and estradiol) supplementation of prematuration medium (TCM119 with 0.5 mM IBMX [IBMX group] or 25 μM roscovitine [ROSC group]) on the kinetics of oocyte nuclear maturation and embryo development. Most IBMX and ROSC oocytes prematured for 8 h culture remained in the GV stage (70.3% and 73.1%, respectively; p > 0.05) similar to Control 8 h (63.5%) and to control immature oocytes (Control 0 h, 92.5%). After prematuration for 16 h, no oocytes remained in the GV stage at similar rates to those recently aspirated (p < 0.05); GV rates in ROSC (32.4%) were higher (p < 0.05) than in the Control 16 h group (8.6%), but similar (p > 0.05) to IBMX (9.7%). After in vitro maturation (IMV) for 24 h, metaphase II (MII) rates for oocytes prematured during 8 h were similar (p > 0.05) between control...
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