ROXANE WIRSCHUM SILVA

ARANHAS DO GÊNERO Loxosceles: CARACTERIZAÇÃO CITOGENÉTICA DE

DUAS ESPÉCIES OCORRENTES EM CURITIBA, PR

Monografia apresentada à disciplina Estágio

em Genética (BG016), como requisito
parcial à conclusão do Curso de Ciências
Biológicas, Setor de Ciências Biológicas,
Universidade Federal do Paraná.

Orientador: Prof. Dr. Ives José Sbalqueiro

CURITIBA
2001
 i

Dedico este trabalho aos

meus pais, Juarez e Dirce,
pelo eterno e incansável
apoio e ao Fernando, pelo
seu amor, carinho e
compreensão ...
 ii

AGRADECIMENTOS

Ao Prof. Dr. Ives José Sbalqueiro, pelos ensinamentos e, principalmente,

pelo incentivo dado deste o início, pois sem estes, não seria possível a realização
deste trabalho.
À Profa Débora do Rocio Klisiowicz (Departamento de Patologia Básica),
pelas eternas conversas e trocas de idéias, as quais me serviram de ensinamento
não só para a minha formação como Bióloga, mas também para a minha vida.
À Profa Doralice Maria Cella – IBC-UNESP/Rio Claro (Departamento de
Biologia Celular e Molecular) – , pela receptividade, atenção destinadas a mim (na
ocasião do estágio em Rio Claro) e colaboração para a realização deste trabalho.
A todo o pessoal do Laboratório de Citogenética Animal da UFPR:
Iris Hass (mestranda), pela amizade, apoio, conversas e sugestões dadas
para este trabalho;
Edivaldo H. C. de Oliveira (doutorando), pelo apoio e amizade;
Maria Cristina da Silva Cortinhas (mestranda), pela amizade, apoio e
incentivo dados durante todo o período de realização deste trabalho;
Marcos Vinícius M. Ferrari (mestrando), pelo auxílio fornecido para as
ilustrações deste trabalho;

Daniel, Rafael e Roger pelas opiniões e companheirismo destinados

durante todo o período que estivemos trabalhando juntos no laboratório;
Elizabete Maia, pela força dada deste o início desta caminhada.
Ao aluno de graduação em Ciências Biológicas da UNESP/ Rio Claro,
Douglas de Araújo, pela amizade, auxílio e dicas para a realização preparações
citológicas em aranhas.
Aos amigos da minha turma de graduação (97/2) pelo apoio,
companheirismo e incentivo.
Ao LIPAPE (Laboratório Interdisciplinar de Pesquisa em Animais
Peçonhentos da UFPR), pelos exemplares cedidos para o estudo realizado neste
trabalho.
 iii

Aos membros da banca avaliadora desta monografia:

Profa Dra Marta Margarete Cestari, da Universidade Federal do Paraná,
pelas correções e críticas feitas durante a análise do projeto desta monografia;
Profo Dr. Alberto Sérgio Fenocchio, professor visitante da Universidade
Federal do Paraná e adjunto da Universidad Nacional de Misiones, pelas
sugestões e auxílios dados para a realização deste trabalho.
À todos os meus familiares, aos meus irmãos Julianna e Cezar pelos
conselhos, apoio e incentivos dados durante todo o meu curso de graduação.
À Deus, por ter me dado a oportunidade de estar aqui, neste mundo,
realizando pequenas obras perto das muitas já realizadas por Ele.
 iv

SUMÁRIO

RESUMO.............................................................................................................. v
1 INTRODUÇÃO................................................................................................... 1
1.1. Aspectos gerais........................................................................................ 1
1.2. O Gênero Loxosceles............................................................................... 2
1.2.1. Estudos Citogenéticos no Gênero Loxosceles........................... 7
2. OBJETIVOS..................................................................................................... 8
3. MATERIAL E MÉTODOS................................................................................. 9
3.1. Coleta do Material..................................................................................... 9
3.2. Obtenção Cromossômica........................................................................ 9
3.3. Coloração Convencional.......................................................................... 10
3.4. Bandeamento C......................................................................................... 10
3.5. Análise do Material................................................................................... 11
3.6. Fotomicrografias....................................................................................... 11
4. RESULTADOS................................................................................................. 12
4.1. Loxosceles intermedia Mello-Leitão, 1934............................................. 13
4.1.1. Coloração convencional................................................................ 13
4.1.2. Bandeamento C............................................................................... 16
4.2. Loxosceles laeta Nicolet, 1849................................................................ 17
4.2.1. Coloração convencional................................................................ 17
4.2.2. Bandeamento C............................................................................... 19
5. DISCUSSÃO..................................................................................................... 22
6. CONCLUSÕES................................................................................................. 24
7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS................................................................ 25
 v

RESUMO

As aranhas do gênero Loxosceles são pequenas, apresentam distribuição

cosmopolita, hábitos noturnos e não agressivos. Na região metropolitana de
Curitiba, são encontradas duas espécies de aranha marrom: L. intermedia e L.
laeta. A primeira espécie é a mais abundante e responsável, nos últimos anos, por
inúmeros acidentes denominados de Loxoscelismo. A ação do veneno é
proteolítica e hemolítica causando manchas avermelhadas no local da picada,
inchaço local, necroses epidérmicas e, em casos graves, anemias e insuficiência
renal aguda. O presente trabalho tem como objetivo estudar citogeneticamente
estas aranhas, através da coloração comum (Giemsa) e bandeamento C, em
células pré-meióticas e meióticas. Exemplares foram coletados em domicílios e
fornecidos pelo LIPAPE (Laboratório Interdisciplinar de Pesquisa em Animais
Peçonhentos) e as preparações citológicas obtidas de testículos de exemplares
adultos. Os dados mostram que as duas espécies se caracterizam por
apresentarem um número diplóide diferenciado entre os sexos: 2n=23 nos machos
e 24 nas fêmeas. Esta diferença no número diplóide é devido ao sistema
cromossômico de determinação sexual – múltiplo do tipo X1X2Y
(machos)/X1X1X2X2 (fêmeas). A aplicação do bandeamento revelou que, em L.
intermedia, a maioria dos bivalentes autossômicos apresenta banda C
pericentromérica, o mesmo se verificando com os cromossomos sexuais, X1 e X2.
Já o cromossomo Y mostrou-se praticamente todo heterocromático. Em L. laeta,
todos os cromossomos apresentaram bandas pericentroméricas conspícuas,
sendo que o cromossomo Y, apresentou-se totalmente heterocromático. Células
meióticas também apresentaram este padrão de bandamento. Na literatura
inexistem dados a respeito do padrão de distribuição da heterocromatina
constitutiva para Loxosceles, sendo, portanto, os dados aqui apresentados para L.
intermedia e L. laeta, inéditos não só para estas espécies como para o gênero.
 1

1. INTRODUÇÃO

1.1. Aspectos Gerais

As aranhas estão incluídas na ordem Araneae, que é uma das mais amplas
dentro da classe Arachnida, pois inclui de 35 a 38.000 espécies conhecidas em nível
taxonômico (BARNES & RUPPERT, 1996). Provavelmente surgiram há 400 milhões
de anos atrás e no período Paleozóico alcançaram um grande desenvolvimento.
Habitam praticamente toda a Terra, incluindo algumas ilhas do Ártico, sendo
que no Brasil estão registradas cerca de 4.000 espécies, mas as estimativas
sugerem que esse número pode ser de 10.000 (BRESCOVIT, 1999).
Todas as aranhas conhecidas são predadoras e alimentam-se principalmente
de insetos, podendo capturar também pequenos vertebrados. O corpo é dividido em
duas partes: prossoma (cefalotórax), onde estão situadas quatro pares de pernas, e
opistossoma (abdome arredondado) (BARNES & RUPPERT, 1996). As aranhas são
muito importantes no ecossistema pois são predadoras capazes de regular a
população de outros artrópodes, principalmente insetos, que quando em grande
número, podem se tornar pragas.
A ordem Araneae divide-se em três subordens (Kaston, 1972; Pielou, 1979;
Coddington & Levi, 1991, apud OLIVEIRA, 1998): Araneomorphae, com 90 famílias,
possuindo 2.700 gêneros e 35.000 espécies, cujos representantes ocorrem em
quase todas as regiões biogeográficas; Mygalomorphae, com 15 famílias, incluindo
aproximadamente 260 gêneros e 2.200 espécies, sendo que a maioria dessas é da
Região Neotropical, Paleotropical e Australiana; Mesothelae, com uma única família,
Liphistiidae, contendo dois gêneros e cerca de 40 espécies, as quais ocorrem
principalmente na Região Paleártica e Oriental.
Em relação às aranhas de interesse médico, os primeiros relatos de acidentes
humanos causados por aranhas datam do século XVIII. O número conhecido de
espécies venenosas, em todo o mundo, não ultrapassa a 30 e estão distribuídas nos
gêneros Phoneutria (Ctenidae), conhecidas como aranha armadeira ou aranha das
bananas, Loxosceles (Sicariidae), denominadas popularmente como aranhas
marrons, Lycosa (Lycosidae), as aranhas de jardim, e Latrodectus (Theridiidae), as
viúvas-negras ou flamenguinhas. Espécies não pertencentes aos grupos citados
acima podem picar, porém geralmente a conseqüência é apenas uma dor local.
 2

Os primeiros relatos citogenéticos em aranhas foram realizados no final do

século XIX e início do XX (Carnoy, 1885; Wagner, 1896 e Bosenberg, 1904, 1905,
apud OLIVEIRA, 1998), e serviram de incentivo para que outros pesquisadores
começassem a realizar análises cariotípicas neste grupo de animais. Os dados
existentes na literatura a respeito da ordem Araneae, mostram que apenas 1% das
espécies são conhecidas cariotipicamente, envolvendo tanto o número diplóide
como a morfologia e mecanismos cromossômicos de determinação sexual.
O número diplóide das espécies da ordem Araneae apresenta uma ampla
variação, de 2n=7 a 2n=94 (OLIVEIRA, 1998), ao passo que o mecanismo
cromossômico de determinação sexual do tipo X1X2 nos machos e X1X1X2X2 nas
fêmeas, predomina em cerca de 84% das espécies citologicamente estudadas
(WHITE, 1973). Atualmente sabe-se que aproximadamente 72% das espécies
apresentam o tipo X1X2/X1X1X2X2, 9% X/XX, 9% X1X2X3/X1X1X2X2X3X3, 1%
X1X2X3Y/X1X1X2X2X3X3 e 2% apresentam variações interindividuais intra ou
interpopulacionais, sendo que apenas duas espécies revelam o tipo
X1X2X3X4/X1X1X2X2X3X3X4X4 e duas o X1X2Y/ X1X1X2X2 (OLIVEIRA, 1998). Saliente-
se que, em todos os casos, o número de cromossomos X nas fêmeas corresponde
ao dobro daquele observado nos machos.

1.2. O Gênero Loxosceles:

O gênero Loxosceles Heinecken & Lowe, 1832 caracteriza-se por apresentar

aranhas pequenas e não agressivas. Elas possuem cerca de 16 mm de corpo,
pernas longas e finas (FISCHER, 1996). Constróem uma teia irregular constituída
por fios pegajosos, assemelhando-se a um algodão esfiapado. São de hábitos
noturnos e têm como habitat natural sítios específicos tais como frestas, cascas de
árvores e grutas. Este gênero inclui um grande número de espécies distribuídas no
mundo inteiro, variando de 16 (BÜCHERL, 1960) a 30 (GERTSCH, 1967) na
América do Sul. Seus centros de origem localizam-se na África e Américas, sendo
que no Brasil são encontradas sete espécies (L. adelaida Gertsch, 1967, L.
amazonica Gertsch, 1967, L. gaucho Gertsch, 1967, L. hirsuta Mello-Leitão, 1931, L.
intermedia Mello-Leitão, 1934, L. laeta Nicolet, 1849, e L. similis Moenkhaus, 1898).
No Paraná ocorrem quatro espécies (L. gaucho, L. hirsuta, L. intermedia, L. laeta),
 3

sendo que duas delas (L. intermedia e L. laeta) estão presentes em Curitiba e região
metropolitana.
Elas são denominadas popularmente de “aranha marrom” e, até meados da
década de 30, eram consideradas inofensivas ao homem. No entanto, o seu veneno
é considerado um dos mais ativos sobre o organismo humano, podendo provocar,
inclusive, morte em vítimas que apresentam um certo quadro de subnutrição ou que
demorem a serem medicadas.
No Peru, a espécie L. laeta é a causadora de inúmeros acidentes, muitas
vezes fatais (SCHENONE et al., 1989), ao passo que Curitiba está entre as cidades
com os maiores índices de acidentes loxoscélicos no Brasil, com um total de 100
casos em 1989 e mais de 1000 em 1992, conforme é mostrado na série Cadernos
de Saúde, da Secretaria Municipal da Saúde de Curitiba (1993).
No aspecto epidemiológico, Curitiba destaca-se por apresentar ampla
disseminação de aranha-marrom com predominância intradomiciliar, pois são
encontradas freqüentemente sob tijolos, telhas, madeiras, entulhos, atrás de
quadros e fendas das paredes.
Os acidentes correspondem em maior número aos causados por L.
intermedia e, em menor freqüência, por L. laeta (RIBEIRO et al., 1991). A espécie L.
intermedia (Fig. 1) é caracterizada principalmente por apresentar coloração marrom-
avermelhada e abdome oval com tonalidade cinza-esverdeado (FISCHER, 1996). Já
L. laeta (Fig. 2) caracteriza-se por apresentar um cefalotórax de coloração marrom-
pálida, um pouco mais claro que o da outra espécie, sendo as características do
abdome idênticas às da espécie anterior. Para ambas, a reação da picada é indolor
e o acidente ocorre quando a aranha é comprimida contra o corpo do indivíduo. A
ação do veneno é proteolítica e hemolítica, causando necrose local, edema,
hemorragias, complicações renais e, raras vezes, podendo levar o indivíduo à morte.
No Setor de Ciências Biológicas da Universidade Federal do Paraná estão
sendo desenvolvidos vários projetos visando compreender melhor não só a biologia,
como a biodiversidade de suas espécies e o comportamento destas aranhas, além
de verificarem os efeitos deste veneno para fins medicinais. Entre estes, destacam-
se o trabalho de SANTOS FILHO (2000) que sugere um efeito deletério sobre o
endotélio dos vasos sangüíneos e o de SOUZA et al. (1998), inferindo que este
veneno pode causar em suas vítimas, uma degradação parcial das moléculas de
entactina e uma atividade de rompimento da membrana basal, que são propostas
 4

como causadoras da deficiência renal e hemorragia comumente observadas nestes

casos.
Outro trabalho interessante é o de FISCHER (1996) que visa determinar o
ciclo biológico e alguns aspectos ecológicos importantes em L. intermedia,
destacando-se comportamento copulatório, oviposição, fertilidade, desenvolvimento
pós-embrionário, alimentação e fauna acompanhante e fenologia, que poderão ser
utilizados em trabalhos de controle biológico desta espécie.

Figura 1a – Exemplar macho de L. intermedia. As setas apontam os

pedipalpos, os quais são abaulados, caracterizando o sexo.
 5

Figura 1b – Exemplar fêmea de L. intermedia. As setas apontam os

pedipalpos, que diferente dos machos, não são abaulados.

Figura 1c – Casal de L. intermedia. M = macho; F = fêmea.

 6

Figura 2a – Exemplar macho de L. laeta. As setas apontam os pedipalpos, os

quais são abaulados, caracterizando o sexo.

Figura 2b – Exemplar fêmea de L. laeta. As setas apontam os pedipalpos, os

quais, diferente dos machos, não são abaulados.
 7

Figura 2c – Casal de L. laeta. M = macho; F = fêmea.

1.2.1. Estudos Citogenéticos no Gênero Loxosceles:

Os estudos citogenéticos neste gênero são escassos, destacando-se os

trabalhos pioneiros em L. rufipes e L. rufescens (BEÇAK & BEÇAK, 1960; DIAS &
SAÉZ, 1965, 1966), que mostraram o mesmo número diplóide (2n=20). Estas
espécies provavelmente correspondem a L. gaucho e L. laeta, respectivamente, o
que mostra uma certa confusão na identificação taxonômica das espécies deste
gênero. Também foram estabelecidos os números cromossômicos em L. reclusa –
machos 2n=18, X1X2 e fêmeas 2n=20, X1X1X2X2 – conforme TUGMON et al. (1990).
SILVA (1988), em uma análise preliminar em 50 exemplares de L. laeta
coletados em áreas rurais de Lima (Peru), observou duas populações celulares, uma
com 23 e outra com 24 cromossomos. Nas metáfases com 23 cromossomos, havia
um elemento muito pequeno, semelhante a um cromossomo acrocêntrico, sendo
que o restante dos cromossomos se apresentaram submetacêntricos. Na meiose
 8

notou as presenças de 10 bivalentes autossômicos e um trivalente, os sexuais.

Exemplares da mesma espécie foram estudados por OLIVEIRA (1998), onde
metáfases mitóticas espermatogoniais, de cinco machos adultos, apresentaram o
mesmo número diplóide (2n=23), sendo dez pares homomórficos (autossomos) e
três cromossomos heteromórficos (sexuais). Nas células meióticas desses mesmos
machos, confirmou-se a presença do sistema de determinação sexual do tipo X1X2Y.
Estudos feitos por OLIVEIRA et al. (1996) e OLIVEIRA (1998) com L. gaucho,
coletada em São Roque – SP, encontraram-se, metáfases mitóticas com 2n=23,
sendo 10 pares cromossômicos homomórficos e 3 cromossomos heteromórficos. A
análise de células meióticas evidenciou a ocorrência do sistema de determinação
sexual do tipo X1X2Y, similar ao observado em L. laeta. Estes autores verificaram
que em células metafásicas oogoniais de L. gaucho havia 24 cromossomos,
correspondentes a 12 pares homomórficos, o que confirma a ocorrência do sistema
de determinação sexual do tipo X1X1X2X2 na fêmea.

2. OBJETIVOS

Tendo em vista os poucos trabalhos sobre citogenética em aranhas, em

especial no gênero Loxosceles, com a inexistência de dados relativos aos padrões
de bandeamento, este trabalho pretende:
• Estudar citogeneticamente as duas espécies de Loxosceles – L. intermedia e L.
laeta –, ocorrentes na região metropolitana de Curitiba, através das aplicações
das técnicas de colorações: convencional e bandeamento C;
• Comparar os dados obtidos neste trabalho com os descritos na literatura, não só
para estas espécies como às outras espécies do gênero Loxosceles;
• Fornecer subsídios para uma melhor compreensão citotaxonômica dessas duas
espécies.
 9

3. MATERIAL E MÉTODOS

3.1. Coleta do Material

Os exemplares de Loxosceles intermedia e Loxosceles laeta, foram coletados

em domicílios de Curitiba ou fornecidos pelo LIPAPE (Laboratório Interdisciplinar de
Pesquisa em Animais Peçonhentos) do Setor de Ciências Biológicas da
Universidade Federal do Paraná.

3.2. Obtenção Cromossômica

As preparações citológicas, para o estudo de cromossomos mitóticos e

meióticos, foram obtidas a partir de testículos de exemplares adultos e embriões.

a) A partir de testículos:

O material obtido por esta técnica – mitose e meiose – orientou a

caracterização do cariótipo dos machos das duas espécies estudadas neste
trabalho, seguindo as recomendações de OLIVEIRA (1998), com modificações:
♦ Em sala climatizada, remover o testículo em solução fisiológica para insetos (7,5g
NaCl + 2,38g Na2HPO4 anidro + 2,72g KH2PO4, dissolvido em 1000ml de água
destilada);
♦ Colocar o material em uma solução de colchicina a 0,1%, preparada com solução
fisiológica para insetos, durante um período de 1 hora para que ocorra o acúmulo
de metáfases;
♦ Adicionar um volume de água de torneira igual ao de colchicina, para atuar como
solução hipotônica, durante 15 minutos, à temperatura de aproximadamente
25°C ou colocar o material direto na água de torneira durante 5 minutos para
hipotonização;
♦ Fixar em Carnoy I (metanol – ácido acético na proporção de 3:1), durante, no
mínimo, 30 minutos;
 10

♦ Colocar o testículo em uma lâmina, juntamente com uma gota de solução de

ácido-acético a 60% e, com um bastão de alumínio, macerar o material até
dissociar completamente e obter uma suspensão celular;
♦ Secar a lâmina em chama de lamparina, espalhando o material.

b) A partir de embriões:

As metáfases obtidas por esta técnica auxiliaram na montagem e descrição

do cariótipo das fêmeas de L. intermedia, de acordo com a técnica de WEBB et al.
(1978), com modificações:
♦ Remover o córion do ovo para a eliminação do embrião;
♦ Colocar o embrião em uma solução de colchicina a 0,1%, preparada com solução
fisiológica para insetos, durante 2 horas, para que ocorra acúmulo de metáfases;
♦ Adicionar um volume de água de torneira igual ao de colchicina, para atuar como
solução hipotônica, durante 15 minutos, à temperatura de aproximadamente
25°C ou colocar o material direto na água de torneira durante 5 minutos para
hipotonização;
♦ Fixar em Carnoy I (metanol – ácido acético na proporção de 3:1), durante, no
mínimo, 30 minutos;
♦ Colocar o embrião em uma lâmina, juntamente com uma gota de solução de
ácido-acético a 60% e, com um bastão de alumínio, macerar o material até
dissociar completamente e obter uma suspensão celular;
♦ Secar a lâmina em chama de lamparina, espalhando o material.

3.3. Coloração Convencional – Giemsa

♦ Corar as lâminas com uma solução de Giemsa a 3%, em tampão fosfato (pH=
6,8), durante 7 minutos, à temperatura de 22°C aproximadamente;
♦ Lavar em água destilada e secar ao ar.

3.4. Bandeamento C

A técnica utilizada foi a de SUMNER (1972), com algumas modificações:

 11

♦ Tratar a lâmina feita no dia, com solução de ácido clorídrico (0,2N) durante 2
minutos à temperatura de 43 a 45°C;
♦ Lavar com água destilada e secá-la ao ar;
♦ Colocar a lâmina, já seca, em solução de hidróxido de bário a 5% durante 15
segundos, à temperatura de 43 a 45°C;
♦ Lavar a lâmina em água destilada com jatos fortes;
♦ Colocar a lâmina em solução salina de 2XSSC, durante 15 minutos, à
temperatura de 60-65°C;
♦ Lavar a lâmina várias vezes com água destilada e secá-la;
♦ Submeter a lâmina à coloração com Giemsa conforme descrito no item anterior
com 7 minutos no corante.

3.5. Análise do Material

Para a determinação dos números diplóides (2n) foram analisadas, ao

microscópio, em média, dez células por preparação. Destas, três foram
fotomicrografadas para a montagem do cariótipo, sendo este montado a partir do
tamanho dos cromossomos, ou seja, os pares foram ordenados do maior para o
menor.
Para o bandeamento C, foram selecionadas e fotografadas as melhores
metáfases para a caracterização do padrão. Foram comparadas entre si os
cariótipos dos exemplares das espécies do presente trabalho – coloração
convencional e bandeamento C – bem como entre estes e aqueles descritos na
literatura.

3.6. Fotomicrografias

As células selecionadas foram fotografadas em microscópio Carl Zeiss, em

objetiva 100 de imersão. O filme empregado foi o IMAGELINK e para a revelação
Dektol diluído em água (1:1).
As cópias das fotos foram feitas em papel Kodak F-3 e reveladas em Dektol
diluído em água (1:3).
 12

4. RESULTADOS

As células metafásicas espermatogoniais analisadas tanto de Loxosceles

intermedia (Fig. 3b) como de Loxosceles laeta (Fig. 4) mostraram 2n=23, sendo
possível identificar-se dez pares de cromossomos homomórficos e três
cromossomos heteromórficos. Análises feitas a partir de células meióticas destes
indivíduos revelou a ocorrência de dez bivalentes mais um trivalente, evidenciando,
assim, que os três cromossomos heteromórficos são os sexuais – dois Xs (X1 e X2) e
o Y. A análise em células “ovos” mostrou 12 pares homomórficos (Fig. 3a),
confirmando o sistema cromossômico múltiplo do tipo X1X2Y/X1X1X2X2.

Figura 3 – Cariótipo de L. intermedia evidenciando os 10 pares de

autossomos, os cromossomos sexuais femininos (a) e os
sexuais masculinos (b). Barra=10µm.
 13

Figura 4 – Cariótipo de L. laeta evidenciando os 10 pares de autossomos e os

3 sexuais. Barra=10µm.

4.1. Loxosceles intermedia Mello-Leitão, 1934

4.1.1. Coloração Convencional

As metáfases mitóticas espermatogoniais mostraram a ocorrência de

cromossomos meta e submetacêntricos, sendo o cromossomo Y metacêntrico,
sempre facilmente identificável devido ao seu tamanho extremamente pequeno (Fig.
5). Nas metáfases de três exemplares foram observadas falhas (gaps)
cromossômicas, que correspondem a 20,41% das células analisadas, localizadas na
região distal de alguns cromossomos (Fig. 6).
A análise de células meióticas mostrou a presença, na fase de diplóteno, de
dez bivalentes autossômicos e de um trivalente sexual, sendo 2n=10II+X1X2Y (Fig.
7). Note-se que o Y, o menor do genoma, é bem saliente nesta figura, na qual a
associação com os dois Xs (X1 e X2) ocorre pelos telômeros de um dos braços
maiores de cada X com os telômeros dos dois braços – maior e menor – do Y. Na
Fig. 8 é mostrada a interpretação da associação dos sexuais no trivalente.
 14

Figura 5 – Metáfase mitótica espermatogonial evidenciando a morfologia

dos cromossomos dando um destaque maior para o
cromossomo Y (seta). Barra=10µm.

Figura 6 – Metáfase evidenciando as falhas cromossômicas (setas).

Barra=10µm.
 15

Figura 7 – Diplóteno evidenciando o trivalente sexual. Barra=10µm.

Figura 8 – Figura ilustrativa da interpretação da associação dos sexuais

no trivalente.
 16

4.1.2. Bandeamento C

A análise do material submetido à técnica de bandamento C, mostrou (em

células mitóticas) um padrão pericentromérico, sendo proeminente em poucos
cromossomos, incluindo os Xs (Fig. 9), o mesmo verificando-se em células meióticas
(Fig. 10). Na figura 10, destacam-se a marcação pericentromérica tanto no X1 como
no X2 e o Y que é totalmente heterocromático.

Figura 9 – Bandeamento C evidenciando marcações pericentroméricas

em poucos cromossomos da metáfase. Barra=10µm.
 17

Figura 10 – Bandeamento C evidenciando marcações nos

bivalentes e nos sexuais (setas) em uma célula
diplotênica. O Y apresenta-se totalmente
heterocromático (seta). Barra=10µm.

4.2. Loxosceles laeta Nicolet, 1849

A análise do material foi realizada em células espermatogoniais de

exemplares adultos.

4.2.1. Coloração convencional

As metáfases mitóticas espermatogoniais mostraram a ocorrência de

cromossomos meta e submetacêntricos, sendo o cromossomo Y metacêntrico,
sempre facilmente identificável devido ao seu tamanho extremamente pequeno (Fig.
11). Em apenas um dos exemplares analisados foi possível verificar a presença de
falha cromossômica e, a exemplo do que ocorreu em L. intermedia, está localizada
na região distal de poucos cromossomos (Fig. 11). Esta alteração cromossômica foi
observada em apenas um indivíduo e corresponde a 3,45% das células analisadas.
 18

Figura 11 – Metáfase evidenciando falha cromossômica em um dos

cromossomos autossomos (seta) e o cromossomo Y
facilmente identificável devido ao seu tamanho reduzido.
Barra=10µm.

A análise de células meióticas mostrou a presença, na fase de diplóteno, de

dez bivalentes autossômicos e um trivalente sexual, sendo 2n=10II+X1X2Y (Fig. 12).
Nesta figura, observa-se que a associação entre os cromossomos X1, X2 e Y deu-se,
à exemplo do que ocorreu em L. intermedia, pelas duas regiões teloméricas.
 19

Figura 12 – Diplóteno evidenciando o trivalente sexual. Barra=10µm.

4.2.2. Bandeamento C

A análise de células submetidas à técnica de bandeamento C, mostrou que

nas metáfases mitóticas o padrão de distribuição da heterocromatina constitutiva
apresentou-se pericentromérico em todos os cromossomos (autossomos e sexuais
X1 e X2), sendo que o cromossomo Y se apresentou totalmente heterocromático
(Fig. 13). O mesmo verificou-se nas células meióticas, com destaque para o Y que é
todo marcado (Fig. 14).
 20

Figura 13 - Bandeamento C evidenciando marcações pericentroméricas

em todos os cromossomos da metáfase. Na seta o
cromossomo Y totalmente heterocromático. Barra=10µm.

Figura 14 – Bandeamento C em uma célula diplotênica evidenciando

marcações nos bivalentes e nos sexuais (setas).
Barra=10µm.
 21

Na Tabela 1 é apresentado um resumo comparativo dos achados

citogenéticos – mitóticos e meióticos; colorações convencional e bandeamento C –
observados nas duas espécies estudadas neste trabalho.

Tabela 1: Resumo comparativo dos achados citogenéticos nas duas espécies

Taxa 2n Coloração comum Banda C Meiose

♂♂ ♀♀ (Diplóteno)

L. intermedia 23/24 ♦ 10 pares: ♦ 10 pares: Pericentromérica

M-SM M-SM proeminente em
♦ 3 sexuais: ♦ 4 sexuais: poucos pares de
X1 e X2= M- X1 e X2= M- autossomos, X1 e
SM SM X2;
Y= M Y todo marcado. 10 bivalentes
autossômicos+
L. laeta 23/24 ♦ 10 pares: Pericentromérica X1X2Y
M-SM em todos os
♦ 3 sexuais: autossomos, X1, X1
X1 e X2= M- e X2, X2;
SM Y todo marcado.
Y=M

Legenda: M = metacêntrico, SM = submetacêntrico.

 22

5. DISCUSSÃO

O presente trabalho mostrou que as duas espécies – L. laeta e L. intermedia –

apresentam 10 pares de autossomos meta – submetacêntricos e três cromossomos
ímpares, os sexuais X1, X2 e Y, igualmente com dois braços. Em ambas, o Y
constituiu-se no menor cromossomo do conjunto. Em relação às fêmeas, obteve-se
dados somente em L. intermedia, na qual verificou-se a presença de 12 pares
homomórficos, incluindo os Xs (X1X1X2X2), todos meta – submetacêntricos, tal qual o
observado no material dos machos. Em L. laeta, o sistema de determinação sexual
foi inferido a partir do que foi observado nos machos, sendo idêntico ao descrito em
L. intermedia. Nas células de alguns exemplares, de ambas espécies, foram
observadas falhas cromossômicas (gaps), o que caracteriza alterações
cromossômicas (aberrações) não esperadas. É possível que elas reflitam a ação de
inseticidas, utilizados nos domicílios de origem desses exemplares, visando
combatê-las bem como os insetos, seus alimentos preferidos. Neste sentido, tais
inseticidas estariam agindo como agentes mutagênicos. Novas coletas, tanto em
locais isentos da ação de inseticidas como em domicílios que o utilizam, são
necessárias para se testar esta proposição.
O cariótipo destas duas espécies aqui descritas confirmam os relatos
inicialmente propostos por SILVA (1988) e OLIVEIRA (1998), para L. laeta e por
SBALQUEIRO et al., (1998) e OLIVEIRA (1990), para L. intermedia, exceto para o
cariótipo das fêmeas de L. intermedia que é inédito.
Comparativamente, estes cariótipos mostram-se similares à L. gaucho no que
diz respeito ao número diplóide e ao sistema de determinação sexual. Porém, em
relação à morfologia dos cromossomos, esta espécie apresenta 2 pares de
cromossomos acrocêntricos (OLIVEIRA et al., 1996; OLIVEIRA, 1998). Uma
inversão pericêntrica parece ser o mecanismo responsável pela variação
morfológica.
Com relação aos achados em outras espécies de Loxosceles, as diferenças
são observadas quanto ao número de cromossomos: 18 (machos)/20 (fêmeas) em
L. reclusa e ao sistema cromossômico múltiplo: X1X2 (machos)/X1X1X2X2 (fêmeas),
conforme TUGMON et al. (1990).
Segundo OLIVEIRA (1998), o sistema X1X2 pode ter dado origem ao X1X2Y
através de fissão cêntrica envolvendo um cromossomo autossômico metacêntrico,
 23

com subseqüente fusão cêntrica de um dos braços deste elemento com o X1,
originando o NeoX1 e fusão cêntrica do outro braço deste mesmo cromossomo
autossômico com o X2, originando o NeoX2. O homólogo do cromossomo
autossômico que sofreu fissão cêntrica, constituiria o NeoY, sendo seu tamanho
reduzido explicado pela ocorrência de heterocromizações seguidas de deleções.
Tanto em L. intermedia quanto em L. laeta, foram observados dez bivalentes
e um trivalente em células meióticas, confirmando o sistema cromossômico sexual
múltiplo como sendo do tipo X1X2Y nos machos e X1X1X2X2 nas fêmeas. Estes
dados coincidem com os achados de OLIVEIRA (1998) não só em relação às duas
espécies como também para L. gaucho.
A presença de blocos heterocromáticos conspícuos em poucos cromossomos
de L. intermedia e em todos os de L. laeta constitui-se em uma diferença citológica
importante que poderá ser útil na identificação taxonômica do grupo. Com relação ao
Y, em ambas este cromossomo é fortemente marcado. A morfologia idêntica –
metacêntrica –, seu tamanho reduzido, associados ao padrão de bandeamento C,
sugerem uma origem comum, ou seja, representam, possivelmente, um caráter
sinapomórfico na história evolutiva destas duas espécies.
Os dados referentes ao padrão de distribuição da heterocromatina constitutiva
aqui apresentados são inéditos para o gênero tendo em vista o não relato destes
achados na literatura. Seria interessante que a análise do bandeamento C fosse
estendida às demais espécies do gênero, para verificar se há, de fato, uma
diferenciação cariotípica entre as espécies, o que contribuiria à uma melhor
caracterização taxonômica do grupo.
 24

6. CONCLUSÕES

As duas espécies ocorrentes na região Metropolitana de Curitiba apresentam

cariótipos similares, a nível de coloração comum, tanto em células somáticas como
meióticas.
Em ambas, o número cromossômico é igual a 23 nos machos e 24 nas
fêmeas, sendo que em L. laeta o 2n nas fêmeas foi inferido a partir dos dados dos
machos. Os dados de fêmeas com 24 cromossomos em L. intermedia são inéditos.
As presenças de um trivalente em células meióticas (diplótenos) confirmam o
sistema múltiplo de determinação sexual do tipo X1X2Y/X1X1X2X2, que é responsável
pela diferenciação cromossômica numérica entre machos e fêmeas.
Estes dados compactuam com os provenientes da literatura pertinente, onde
observa-se uma constância no número diplóide entre os machos (2n=23) bem como
entre as fêmeas (2n=24), como conseqüência do sistema de determinação sexual de
cromossomos múltiplos.
Em relação ao bandeamento C, que é inédito também para o gênero, se
observou um padrão pericentromérico proeminente em poucos pares
cromossômicos de L. intermedia e em todos os de L. laeta, exceto nos Ys de ambas
que se mostraram totalmente heterocromáticos, o que constitui uma informação
importante para a taxonomia destes taxa.
Portanto, os estudos citogenéticos em Loxosceles abrem a perspectiva de
uma melhor caracterização específica dos táxons que o compõem. Com isso, outros
estudos (biológicos, ecológicos, fisiológicos, comportamentais, entre outros) que
estão sendo realizados com estas aranhas podem ser grandemente enriquecidos,
em termos comparativos, pois não se tem certeza que os efeitos do veneno de todas
as espécies estudadas sejam potencialmente iguais, causando o loxoscelismo tal
como o conhecemos, ou se não o são, em que grau de importância se manifestam.
 25

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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