Práticas Experimentais - Extração de DNA

EXTRAÇÃO DE DNA DE MORANGO
Materiais:
• Um morango (fresco ou congelado).
• Um saco plástico tipo “Zip loc”.
• 50 ml de detergente de cozinha transparente. .. ou 100 ml
• 15g de sal de cozinha (+- duas colheres de chá).
• 200 ml de água filtrada ou destilada (preferência mineral).
• Um funil.
• Um filtro de papel.
• Um tubo de ensaio.
• Um bastão de vidro.
• Álcool etílico gelado (álcool a 90º g.l).
• Gelo.
OBS:
1. O saquinho do tipo “Zip loc” deve ser bem espesso. Quanto mais
espesso, mais resistente. Geralmente os saquinhos utilizados para
embalar comidas no freezer são apropriados.
2. Kiwi ou banana também podem ser utilizados.
3. O álcool deve estar muito gelado. Resfrie-o em banho-maria com gelo
e água algum tempo antes da experiência.
Procedimentos:
• Coloque um morango, previamente lavado e sem as sépalas em um
saco zip loc.
• Esmague o morango com o punho por, no mínimo 02 minutos.
• Adicione a solução de extração ao conteúdo do saco.
** Solução de extração:
50 ml de detergente + 15g de sal de cozinha + 200 ml de água
mineral.
• Misture tudo, apertando com as mãos, por 01 minuto.
• Derrame o extrato no aparato filtrante e deixe filtrar diretamente dentro
do tubo de ensaio. Não encha totalmente o tubo (encha somente até
1/8 do seu volume total).
• Incline o tubo com o líquido filtrado (em ângulo de 30 a 40º) e derrame
vagarosamente, pela parede, o álcool gelado até que o mesmo esteja
cheio pela metade. Você verá que o álcool não se mistura
prontamente com a solução filtrada, formando duas fases (na
superfície fica o álcool). Entre as duas fases é possível observar a
formação de um precipitado com aspecto de fiapos esbranquiçados,
que são as moléculas de DNA.
• Com a ajuda do bastão, é possível enrolar as moléculas que estão
precipitando, ou seja, você pode pescar o DNA da cebola. Faça
movimentos circulares cuidadosos, não mexa muito para não quebrar
as moléculas de DNA.
• Os fios esbranquiçados e grudentos formados são aglomerados de
muitas moléculas de DNA e ficarão presos na ponta do bastão de
vidro.
• Deixe secar sobre uma estante e ressuspenda o DNA em água ou
solução de cloreto de sódio a 4%.
* O morango é mais indicado para o desenvolvimento deste

experimento. Uma das razões de se trabalhar com morangos é que eles
se prestam muito bem à extração de DNA, porque são muito macios e
fáceis de homogeneizar. Morangos maduros também produzem
pectinases e celulases, que são enzimas que degradam a pectina e a
celulose (respectivamente), presentes nas paredes celulares das
células vegetais. Além disso, os morangos possuem muito DNA: eles
possuem oito cópias de cada conjunto de cromossomos (são
octoplóides).
EXTRAÇÃO DE DNA DE CEBOLA
Materiais:
• Uma cebola grande.
• Uma faca.
• Um ralador.
• Dois béqueres de 250 ml.
• Duas provetas de 50 ml.
• Dois bastões de vidro.
• Uma espátula.
• Um funil.
• Um filtro de papel.
• Banho-maria a 60ºC.
• Água filtrada ou destilada.
• Detergente de cozinha transparente.
• Sal de cozinha.
• Etanol 95% gelado.
• Gelo.
OBS: Resfrie o etanol em banho-maria com gelo e água algum tempo
antes da experiência.
Procedimentos:
• Rale uma cebola e coloque-a em um béquer até a marca de 50 ml,
aproximadamente.
• Prepare uma solução com 80 ml de água quente, 20 ml de
detergente e uma colher (de sopa) de sal e misture bem.
• Adicione esta solução com detergente e sal à cebola ralada.
• Espere 10 minutos.
• Coloque o frasco com a cebola em um banho de gelo. À medida que
a solução onde está à cebola esfria é possível observar que o líquido
parece estar “talhando”.
• Após cerca de 5 minutos, filtre. O líquido filtrado deve ser aparado em
um béquer limpo.
• Incline o vidro com o líquido filtrado (em ângulo de 30 a 40º) e derrame
vagarosamente, pela parede, o álcool gelado. Você verá que o álcool
não se mistura prontamente com a solução filtrada, formando duas
fases (na superfície fica o álcool). Entre as duas fases é possível
observar a formação de um precipitado com aspecto de fiapos
esbranquiçados, que são as moléculas de DNA.
• Com a ajuda do bastão, é possível enrolar as moléculas que estão
precipitando, ou seja, você pode pescar o DNA da cebola. Faça
movimentos circulares cuidadosos, não mexa muito para não quebrar
as moléculas de DNA.
• Os fios esbranquiçados e grudentos formados são aglomerados de
muitas moléculas de DNA e ficarão presos na ponta do bastão de
vidro.
• Deixe secar sobre uma estante e ressupinada o DNA em água ou
solução de cloreto de sódio a 4%.
EXTRAÇÃO DNA HUMANO
Materiais:
• Detergente
• Sal de cozinha
• Álcool
• Água
• Um bastão de vidro
• Recipientes para seu experimento
• Corante (opcional)
Procedimentos:
Pegue dois copos de agua e coloque em um recipiente.
Adicione mais um colher de sal a mistura e mexa-a bem, retire 3 colheres desta
mistura e coloque em outro recipiente.
Pegue essas 3 colheres da mistura e faça um bochecho por aproximadamente
1 minuto.
Coloque a mistura do seu bochecho em um recipiente (de preferência de vidro
para que você possa observar melhor a sua experiência) e coloque mais ou
menos 1 gota de detergente, misturando levemente para que não forme bolhas.
Separe meio copo de água e coloque algumas gotas de corante nele.
Coloque devagar mente e espere por certa de 2 minutos.
Agora é só observar.
Obs.: sua experiência deverá ficar assim ou parecido.

E agora vamos para as explicações:
Quando você fez aquele bochecho você retirou algumas células da sua boca,
que ficaram na sua mistura, depois foi adicionado o detergente, que quebrou as
membranas das células deixando o DNA solto na mistura.
O sal e o álcool foram responsáveis de separar o DNA da agua e formar aquele
emaranhado que você pode ver nesta última figura que está aqui em cima.
EXTRAÇÃO DE DNA -
** Algumas questões podem ser apresentadas durante o
desenvolvimento do experimento. Por exemplo:
01. Qual é a função do detergente?

R. O detergente emulsiona gorduras, ou seja, atua nas membranas
da célula que são formadas de fosfolipídios, desestruturando-as.
02. Qual é a função do Sal?

R. O NaCl em solução dissocia-se em Na+ e Cl-. Esses íons
interagem com os fosfatos das moléculas de DNA, tornando-as
neutralizadas e estabilizadas, mas menos solúveis em água.
03. Qual é a função da agitação com o bastão de vidro?

R. Ajudar a quebrar as paredes e as membranas celulares. Não se
deve agitar por muito tempo, nem muito vigorosamente (rápido),
pois o DNA poderá ser degradado.
04. Para que filtrar o extrato?

R. A filtração retira os debris (restos) celulares. O filtrado contém o
DNA e outras moléculas.
05. Qual é a função do Etanol?

R. O álcool etílico desidrata ainda mais as moléculas de DNA,
retirando-as da solução. O resultado pode ser visualizado como uns
filamentos esbranquiçados que são as várias moléculas de DNA
emaranhadas. Não é possível visualizar a dupla-hélice, pois esta
estrutura só pode ser visualizada de modo indireto e através de
aparelhos mais sofisticados.
MODELO DNA
Sabemos que o DNA é um ácido nucleico que contém as informações a
respeito de todas as nossas características. O DNA é constituído por duas
cadeias de nucleotídeos ligadas entre si através de ligações de hidrogênio.
Essa estrutura se mantém em uma forma de hélice, como uma escada
disposta em espiral.
Cada nucleotídeo é formado por fosfato, um açúcar chamado de
desoxirribose e uma base nitrogenada. As bases nitrogenadas do DNA são:
adenina, guanina, citosina e timina. Cada base só se liga a uma determinada
base específica: adenina liga-se à timina e citosina, à guanina.
Nesta proposta de aula, você montará um modelo utilizando jujubas para
melhor ilustrar a estrutura do DNA. Para montar o seu modelo de DNA de
jujubas você precisará de:
- Jujubas: representarão as bases nitrogenadas.
- Palitos de dente: representarão as ligações de hidrogênio
- Arame fino e maleável: representará açúcar e fosfato.
A montagem é bem simples. Inicialmente corte o arame em dois pedaços
iguais. O ideal é que tenha até 30 centímetros de comprimento cada um.
Pegue as jujubas e coloque uma em cada ponta do palito de dente. Você
deverá padronizar as cores para cada base nitrogenada. Por exemplo:
amarela para a adenina e verde para a timina. Desse modo, a jujuba verde
só pode fazer par com a amarela.
Depois de formar os pares de jujubas, passe o arame pelo interior delas,
ligando os pares uns aos outros. Após passar por todos os pares você terá
um modelo semelhante a uma escada. Mas lembre-se que o DNA possui
forma helicoidal! Dessa forma, você precisará torcer o arame.
Está pronto seu modelo de DNA com jujuba!
Transcreva a seguinte sequência do DNA
A C G T T C A T A C T C G
C C G T G A T
C G C T G T A T G C G A
A T A C A G C A
T C G T A C T G C
A T G A C G T C A A T
T C G A G T C G A A G T
A C A T C T C G
G A T C G C A G C T C A G
A T T A T G A

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EXTRAÇÃO DE DNA DE MORANGO

* O morango é mais indicado para o desenvolvimento deste

Obs.: sua experiência deverá ficar assim ou parecido.

01. Qual é a função do detergente?

02. Qual é a função do Sal?

03. Qual é a função da agitação com o bastão de vidro?

04. Para que filtrar o extrato?

05. Qual é a função do Etanol?

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