TOXICOLOGIA

Laboratório de Toxicologia
UNICAMP
TOXICOLOGIA: é a ciência que estuda os efeitos nocivos causados
pelas substâncias químicas ao interagirem com organismos vivos.

Agente tóxico Organismo vivo

Efeito nocivo
OBJETIVO: diagnóstico, tratamento e prevenção de
intoxicações
• avaliar as lesões causadas e investigar os mecanismos
envolvidos;
• identificar e quantificar substâncias tóxicas em
fluídos biológicos e no ambiente;
• avaliação de risco;
• determinar níveis toleráveis;
• estabelecer condições seguras para uso de
substâncias.
 Conceitos
• AGENTE TÓXICO, TOXICANTE OU XENOBIÓTICO:
Substância química, de estrutura química definida, capaz de
produzir um efeito nocivo (efeito tóxico) através de sua
interação com um organismo vivo.

• TOXICIDADE: Capacidade inerente de a substância química

produzir efeito nocivo após interação com organismo.

• INTOXICAÇÃO: Conjunto de sinais e sintomas que evidenciam o

efeito nocivo produzido pela interação entre agente químico e
organismo.
 AÇÃO TÓXICA E SUAS FASES

I- Fase da II- Fase III- Fase IV- Fase

exposição toxicocinética toxicodinâmica clínica

Vias de introdução Absorção Ação tóxica Sinais e

Dose / concentração Distribuição sintomas

Tempo / freqüência Biotransformação

Propriedades físico- Excreção
químicas
Suscetibilidade
individual

Disponibilidade Biodisponibilidade Interação com o Efeito

química sítio de ação nocivo
 FASE DE EXPOSIÇÃO
• Vias de introdução
DL50 DDT pele 2500 mg/Kg
oral 118 mg/kg
Rapidez de absorção: via respiratória > via oral

• Dose / concentração
Fenobarbital: 100 mg: sonolência
500 mg: sono profundo

• Tempo / freqüência
Aguda: dose única ou no prazo de 24 hs
Sub-aguda: 24 hs - uma semana
Crônica: mais de uma semana
 Tempo / freqüência

Agente tóxico Exposição Exposição crônica

aguda

Benzeno Depressor SNC Mielotóxico

Sílica Irritação das Silicose

vias aérias

Hg ++ Nefrotóxico Neurotóxico
 FASE DE EXPOSIÇÃO
• Propriedades físico-químicas: interferem na
toxicocinética
Solubilidade: chumbo tetraetila: pele – alta absorção
acetato de chumbo: pele – baixa absorção
Hidrossolúvel: vias aéreas superiores
Lipossolúvel: pulmão
• Tamanho das partículas
• Pressão de vapor (volatilidade)
• Suscetibilidade individual: hiporreativo, hiperreativo
 FASE CLÍNICA
• Efeito tóxico: alteração biológica nociva.
• Efeito tóxico local: é o que ocorre no sítio do primeiro contato
entre o organismo e o agente químico.

• Efeito tóxico sistêmico: é o que requer absorção e distribuição

do agente químico para um sítio distante da sua via de
penetração, onde produzirá o efeito nocivo.

• Efeito tóxico reversível e irreversível: além da dose, tempo e

freqüência da exposição, é dependente da capacidade de
regeneração do tecido do órgão ou sistema afetado.
 Toxicocinética: Movimento do agente tóxico no organismo

Agente Tóxico
Absorção

Compartimento central (sangue)

Livre Ligado à proteínas plasmáticas
Não ionizado Ionizado

Distribuição

Tecidos / Órgão alvo Rins Fígado

(Depósito/efeito) (Eliminação) (Biotransformação)
Compartimento periférico ou profundo
 Principais vias de introdução

• Respiratória (mais importante): gases,

vapores, partículas.

• Cutânea: líquidos (solventes).

• Digestiva: partículas (deglutidas com muco).

 ABSORÇÃO
Chegada da substância na corrente sanguínea

Substância Sangue

Membranas

Vias de introdução: Transcutânea,

respiratória, digestiva e parenterais.
 MECANISMOS DE TRANSPORTE NA MEMBRANA

difusão simples maioria das substâncias

difusão facilitada glicose e outras açúcares
transporte ativo aminoácidos

pinocitose anticorpos, gotas de lipídeos

fissuras eritrócitos
Absorção pela pele: Efeito local ou sistêmico

Passagem pela epiderme por difusão

• lipossolubilidade
• peso molecular (inversamente proporcional)
• permeabilidade da epiderme (aumento da permeabilidade:
ácidos, álcalis, substâncias irritantes, água).
• espessura da epiderme
Difusão através da camadas inferiores da epiderme e derme
• fluxo sangüíneo
• movimentação do fluído intersticial
• interação com componentes da derme
Absorção por via respiratória: gases e
vapores

• Hidrossolubilidade

• Difusibilidade

• Coeficiente de partição

– sangue/ar

– tecido/sangue
Tamanho Órgão atingido

< 1 m Alvéolos pulmonares

Sangue: fagocitose
Linfa
2 a 5 m Região traqueobronquial
faringe
> 5 m Região nasofaríngea
 DISTRIBUIÇÃO

• Transporte da substância para os

tecidos: sítio de ação ou depósito

(agente tóxico livre e não ionizado)

• Barreiras: hematoencefálicas,

placentária
 Hg e seus Elementar - Orgânico - Inorgânico - sais
compostos Hg0 (vapor, metilmercúrio, e óxidos (Hg2++
líquido) fenilmercúrio e Hg++)
Propriedades neurotóxico e Neurotóxico Nefrotóxico e
tóxicas nefrotóxico hepatotóxico
Via 80% 80% Pouca absorção
respiratória
Via oral 0,001% 90 - 95% 1 a 7%

Via dérmica pouco Boa absorção Pouco absorvido

absorvido
Distribuição Hb lipoproteinas albumina
(eritrócitos)
Depósito cérebro, rins cérebro rins, fígado

Excreção Ar exalado Fezes Fezes, urina, suor,

saliva, cabelos e
unhas
 BIOTRANSFORMAÇÃO
• Toda alteração que ocorre na estrutura química da substância,
no organismo.
• Aumenta a hidrossolubilidade. Produtos de biotransformação
podem ser ativos e/ou inativos.

Agente AT inalterado
tóxico Metabólito Metabólito final
(fase I) intermediário
(fase II)

Oxidação
Redução Conjugação ou síntese
Hidrólise
 BIOTRANSFORMAÇÃO
Cocaína
CH3
N Éster metil ecgonina
O
C O CH
3
(15-35%)

OH

CH3
N
N
H Norcocaína CH3
N
O
C O CH
3
O (2-6%) O
C O CH
3 C
O OH
O C O
O C
OH
Cocaína
Ecgonina
CH3
(3%) N
(1-8%)
O
C OH

O Benzoilecgonina
O C
(15-50%)
 BIOTRANSFORMAÇÃO
Cocaína

CH3
N
O
Cocaetileno
C O CH CH
2 3

CH3 O C
N
O
O
C O CH
3

O
O C

Cocaína CH3
N
O
C O CH Anidroecgonina
3
metil éster
 EXCREÇÃO
Via renal
• Filtração, reabsorção e secreção tubular
Via digestiva
• Biliar e fecal
Via pulmonar (substâncias voláteis)
• Passagem do agente tóxico dos alvéolos para o ar
Outras vias
• Leite: etanol, diazepam, tetraciclina, estrogênio, AAS,
dicumarol, teofilina, progesterona, cloranfenicol, fenitoína,
morfina, clorpromazina, fenobarbital, etc...
• Saliva, lágrima, suor
TOXICIDADE, RISCO E SEGURANÇA
▪ TOXICIDADE: capacidade inerente da substância
produzir efeito nocivo após interação com
organismo.

▪ RISCO: probabilidade da substância produzir dano

sob determinadas condições.

▪ SEGURANÇA: probabilidade da substância não

produzir dano sob determinadas condições.
RISCO = TOXICIDADE X EXPOSIÇÃO

Não existe ausência de risco!

• Avaliação da toxicidade
• Controle da exposição
• Avaliação do risco
• Gerenciamento do risco
 Classificação da toxicidade

Dose tóxica

Avaliação da USO
toxicidade Dose não tóxica SEGURO
Dose tolerável

Limites de tolerância
 Limite de tolerância
• Nível de exposição tolerável, que não causa
efeitos nocivos ao indivíduo.

• Dificuldade: Estabelecer o que deve ser

considerado efeito nocivo.

• Para substâncias altamente tóxicas a

exposição tolerável deve ser próxima de
zero.
AVALIAÇÃO DE TOXICIDADE

• 1937 – Síntese da sulfanilamida / veículo - etilenoglicol

• 1938 – Food and Drug Administration (FDA)

• 1939 – Início da segunda guerra mundial

 AVALIAÇÃO DE TOXICIDADE
1957 – Alemanha, Talidomida: Ação hipnótico-
sedativa. Estudos em ratos, coelhos e cobaias: taxa
de letalidade não significativa (doses altas).

▪ Foi considerada de baixa

toxicidade - mais seguro que os
barbitúricos.
▪ Comercializada em 46 países
para o tratamento de enjôo
matinal em gestantes.
▪ 1961 / 62 – Retirada do
mercado (no Brasil, em 65).
▪ Jun/98 – aprovada pela FDA
para tratamento de reação
hansênica do tipo II.
 AVALIAÇÃO DE TOXICIDADE

Década de 60 – Environmental Protection Agency (EPA)

 AVALIAÇÃO DE TOXICIDADE

Relação dose /efeito: aumento da dose promove

aumento do efeito, indica a alteração biológica
individual.

Relação dose /resposta: indica a proporção da

população que manifesta um efeito definido.

A resposta é a taxa de incidência de um efeito.

 AVALIAÇÃO DA TOXICIDADE

Relação dose/efeito: aumento da dose promove

aumento do efeito, indica a alteração biológica
individual
Relação dose/resposta: indica a proporção da
população que manifesta um efeito definido.

A resposta é a taxa de incidência de um efeito.

Testes necessários para avaliação de
toxicidade
Toxicidade aguda
Toxicidade sub-crônica (curta duração)

Toxicidade crônica (longo prazo)

Efeitos locais sobre a pele e olhos

Sensibilização cutânea

Mutagênese e carcinogênese

Reprodução e teratogênese
Toxicidade aguda: DL50 e CL50
Vias de administração: oral, dérmica e inalatória
Determina a classe toxicológica e as precauções no
rótulo
Caracteriza a relação dose resposta que conduz ao
cálculo da DL50
Fornece informações sobre tecidos e órgãos,
através de estudos macroscópicos e microscópicos;
Fornece dados sobre outros efeitos: início,
natureza e duração da intoxicação associada a
morte
Exemplo: administração de um agente tóxico em animais (grupos de
50 animais), em 4 doses diferentes, por via oral. O efeito
observado é a morte.

N.º de mortes / n.º de indivíduos

Relação causal: aumenta a dose, aumenta o efeito (morte)

CONTROLE G1 G2 G3 G4
(2 mg/kg) (4 mg/kg) (6 mg/kg) (8 mg/kg)

0/50 1/50 13/50 27/50 48/50

DL50
n
100 %

50 %

-1 0 1 2 3 4
DL50 Log dose
Valores de DL50 para algumas substâncias
potencialmente tóxicas

Substância DL50 oral em ratos machos

(mg/kg)
Etanol 7000
Cloreto de sódio 3000
Sulfato cúprico 1500
DDT 100
Nicotina 60
Tetredotoxina 0,02
Dioxina 0,02
 CLASSIFICAÇÃO DE TOXICIDADE

Classificação de DL 50 oral em ratos

toxicidade (mg/Kg)
Muito tóxica < 25

Tóxica 25 a 200

Nociva 200 a 2000

Teste de dose fixa
• 5, 50 e 500 mg/kg
• 10 machos e 10 fêmeas

Dose (mg/kg) Classe Toxicidade

<5 I Extremamente tóxico
5 a 50 II Altamente tóxico

50 a 500 III Medianamente tóxico

> 500 IV Pouco tóxico

CLASSIFICAÇÃO DE TOXICIDADE
- indicação no rótulos de praguicidas -

I Extremamente Faixa
tóxico vermelha
II Altamente tóxico Faixa amarela

III Medianamente tóxico Faixa azul

IV Pouco tóxico Faixa verde

Toxicidade sub-crônica

dose de não observação de efeitos (NOEL)

identificar os órgãos afetados e a severidade dos
danos após exposições repetidas
determinar se o efeito é devido ao acúmulo da
substância ou não
o teste deve ser realizado em pelo menos duas
espécies animais, sendo uma não roedora,
utilizando pelo menos 3 doses.
21 a 90 dias em roedores; 1 ano para animais de
maior porte
caracteriza os efeitos de exposições repetidas
Exemplo: administração de um agente tóxico em animais, em 4 doses
diferentes, por via oral. O efeito observado é lesão hepática.

CONTROLE G1: 1,25 G2: 2,5 G3: 5 G4: 10

mg/Kg/dia mg/Kg/dia mg/Kg/dia mg/Kg/dia

Não Não Não Lesão Lesão

observação observação observação hepática hepática

de efeito de efeito de efeito leve evidente

 Curva dose-resposta
3.0

Efeito tóxico
intensidade do efeito

2.5

2.0

1.5

1.0
IDA NOEL
0.5

0.0
0.01 0.10 1.00 10.00

Log10 Concentração (ng/ml)

 Fator de segurança ou incerteza

• Fator = 10: quando se tem dados sobre a

exposição crônica da substância em humanos.
• Fator = 100: quando os dados em humanos são
inconclusivos ou ausentes, mas existem dados
em animais.
• Fator = 1000: quando não existem estudos de
toxiciade crônica ou os dados em animais de
experimentação não são suficientes.
NOEL = no observed effect level (dose de não observação de efeitos)
IDA = ingestão diária admitida (dose que pode ser ingerida por toda a vida sem
observação de efeito).

IDA = NOEL L
fator de segurança

Exemplo: Aspartame: IDA = 50mg/kg

NOEL = 5000 mg/kg/dia
Fator de segurança = 100

10: considera-se que o homem é 10 vezes mais sensível que a

espécie mais sensível de animal de laboratório.
10: considera-se que na espécie humana haverá variações de
sensibilidade de até 10 vezes entre os indivíduos.
TOXICIDADE CRÔNICA (À LONGO PRAZO)

Período deve ser superior a 3 meses (6 meses a 2

anos em roedores e 1 ano em não roedores).

2 espécies, 10 a 50 animais por dose e sexo.

Observam-se os efeitos tóxicos após exposição
prolongada (ex: carcinogênese).
EFEITOS LOCAIS SOBRE A PELE E OLHOS

Avaliação dos efeitos diretos sobre olhos e pele

Animal: coelho
Teste de Draize (1944)

Parâmetros avaliados:

Pele: eritema, escara, edema e corrosão

Olhos: alterações da conjuntiva, córnea, íris e cristalino

Irritação reversível ou não reversível (permanece por mais

de 14 dias)
Teste de Draize
 Efeitos locais sobre a pele e olhos

Classe Olhos Pele

I opacidade da córnea reversível ou não corrosivo
em 7 dias, irritação permanente

II sem opacidade da córnea, irritação irritação

reversível 7 dias severa

III sem opacidade da córnea, irritação irritação

reversível 72 horas moderada

IV sem opacidade da córnea, irritação irritação

reversível 24 horas leve
SENSIBILIZAÇÃO CUTÂNEA

Coelhos ou cobaias

Doses repetidas da substância, com ou sem adjuvantes, por

um período de uma a duas semanas

Após duas ou três semanas da última exposição os animais

são submetidos a uma dose não irritante e o aparecimento de

eritema é monitorado.
ESTUDOS DE MUTAGÊNESE E CARCINOGÊNESE

Identificar agentes mutagênicos (capazes de provocar

modificações no material genético das células, que serão
transmitidas às novas células durante a divisão celular)

Testes in vitro: teste de AMES (1975): Cepas de Salmonella

typhimurium

Testes in vivo: cromossomas de células de medula óssea em

metáfase.

Teste de carcinogênese: emprega-se a maior dose tolerada,

durante o período médio de vida do animal.
ESTUDOS DE REPRODUÇÃO E TERATOGÊNESE

Exposição só do macho; só da fêmea ; ambos

Exposição do macho durante a espermogênese

Exposição da fêmea durante a organogênese.

Observar: comportamento no acasalamento,

fertilidade, ocorrências durante a gravidez e após
o parto

Para agentes químicos que atravessam a barreira

placentária: informações sobre o desenvolvimento
e sobrevivência do embrião no útero.
 REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS E SITES RECOMENDADOS

• Revista Brasileira de Toxicologia

• Revista Brasileira de Toxicologia Ocupacional
• Revista de Farmácia e Bioquímica da Universidade de São Paulo
• Revista de Saúde Pública
• Anvisa: http://www.anvisa.gov.br
• Bireme: http://www.bireme.br
• Cetesb: www.cetesb.br
• Drogas de abuso: http://www.drugabuse.gov; www.nida.nih.gov
• Sociedade Brasileira de Toxicologia: http://www.sbtox.org.br/
• American Association of Poison Control Centers: http://www.aapcc.org/
• European Society of Teratology: http://www.etsoc.com/
• European Society of Toxicology in vitro:
http://www.xs4all.nl/~shorbach/estiv/index.html
• Medlineplus: http://medlineplus.gov
• Toxnet: http://toxnet.nlm.nih.gov
 CENTRO DE CONTROLE DE
INTOXICAÇÕES / FCM /
UNICAMP

Fone: 3521-7555
E-mail: cci@fcm.unicamp.br