Coloração de Gram

Una Sete Lagoas - Medicina Veterinária
GIOVANNA BRAZ DE OLIVEIRA

PEDRO HENRIQUE ABREU FREITAS
GUILHERME LOPES CARVALHO
FELIPE GANDINI MENDONÇA
HELLEN STHEFANE GOMES RIBEIRO
COLORAÇÃO DE GRAM
SETE LAGOAS/MG
2024
1
GIOVANNA BRAZ DE OLIVEIRA
PEDRO HENRIQUE ABREU FREITAS
GUILHERME LOPES CARVALHO
FELIPE GANDINI MENDONÇA
HELLEN STHEFANE GOMES RIBEIRO
COLORAÇÃO DE GRAM
Projeto apresentado como requisito básico para

a disciplina Agravos e Imunidade na Saúde
Animal do curso de Medicina Veterinária da
Faculdade Una de Sete Lagoas.
Orientadora: Gabriella Santos
SETE LAGOAS/MG
2
SUMÁRIO
INTRODUÇÃO...................................................................................4
OBJETIVOS E MATERIAIS................................................................5
MÉTODOS..........................................................................................5
RESULTADOS....................................................................................6
REFERÊNCIAS..................................................................................8
3
1. INTRODUÇÃO
A coloração de Gram é uma técnica desenvolvida em 1884 pelo médico

dinamarquês Hans Christian Joaquim Gram, que permite diferenciar bactérias
Gram positivas ou Gram negativas a partir das diferenças entre suas paredes
celulares. Apesar de ser uma técnica antiga, ainda é muito utilizada nos dias
de hoje, pois é rápida, fácil e barata de executar.
• Estrutura da parede celular

Entender a diferença entre uma bactéria Gram positiva e uma bactéria Gram
negativa é crucial para o diagnóstico e tratamento de infeções.
As bactérias Gram positivas possuem uma parede celular espessa composta
predominantemente por peptidoglicanos. Estes são formados por polímeros
constituídos por açucares e aminoácidos que originam uma espécie de malha
na região exterior a membrana celular das bactérias. A princípio, há diferente
graus de permeabilidade na parede dos microrganismos, uma bactéria Gram
positiva retém o cristal violeta durante a coloração de Gram, ficando roxas.
Já as bactérias Gram negativas, possuem uma parede celular mais fina, com
uma camada menor de peptidoglicanos e uma membrana externa composta
de lipopolissacarideos, que confere a bactéria proteção, estabilidade e
interação com o hospedeiro. Este tipo de bactéria retém o cristal violeta
durante o processo de descoloração e acabam ficando rosa no processo de
coloração final.
• Processo de coloração de Gram
O procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a
cor com base nas diferenças nas propriedades químicas e físicas da parede
celular. De fato, o uso de corantes permite aumentar o contraste e evidenciar
a estrutura bacterianas. Essa coloração envolve quatro etapas principais:
1. Aplicação do cristal violeta: um corante solúvel em água, na cor roxa. Tem
a função de penetrar nas células bacterianas.
2. Aplicação do iodo: Tem a função de mordente, formando um complexo
com o cristal de violeta.
3. A descoloração: utiliza-se etanol ou a acetona para se fazer a
descoloração. As bactérias Gram Positivas retém o corante enquanto as
Gram negativas perdem essa coloração.
4. A contra coloração: nessa etapa, utiliza-se a safranina. Na contra
coloração as bactérias Gram positivas ficam roxas enquanto as Gram
negativas ficam rosas.
5. O azul de metileno pode ser utilizado para visualizar estruturas fúngicas,
porém a coloração de Gram é mais utilizada e específica para a
visualização de bactérias. Também para fungos existem a coloração de
lactato de ácido fénico pois é um corante que vai destacar as paredes
celulares dos fungos. 4
• Resposta a coloração de Gram
A coloração de Gram é muito importante para a identificação de patógenos
bacterianos em amostras clínicas, pois determina o tratamento apropriado.
Bactérias Gram Positivas: Apresentam uma coloração azul ou violeta, devido
a retenção do cristal violeta. Este tipo de bactéria é suscetível a antibióticos
como a penicilina.
Bactérias Gram Negativas: Adquirem uma coloração rosada ou arroxeada
devido a absorção da safranina após a descoloração. Por serem negativas,
acabam sendo mais resistentes e requerem antibióticos específicos.
Azul de algodão: O azul de algodão é usado em exames microscópicos de

colônias de fungos, pois cora a quitina e a celulose, elementos da parede
celular dos fungos.
2. OBJETIVOS
O objetivo desse relatório é para entender a importância da coloração de Gram

na identificação de bactérias e na diferenciação entre Gram positivas e Gram
negativas. Além disso, realizar o procedimento seguindo etapas corretamente e
observar sob o microscópio a coloração final e a morfologia das bactérias para
escolher tratamentos apropriados de acordo com sua classificação.
3. MATERIAIS
• Lâminas de Microscópio
• Inóculos de Bactérias
• Microscópio
• Cristal Violeta
• Iodo
• Álcool ou Acetona
• Safranina
• Pipetas
• Bico de Bunsen
4. METÓDOS
1. Com uma alça de inoculação, foi coletado em formato ``L`` uma

pequena quantidade da cultura bacteriana do dedo sujo.
2. Foi espalhado a amostra em uma lâmina de microscópio.
3. Foi adicionado uma quantidade de cristal violeta sobre a amostra, a
cobrindo completamente, por 15 segundos. Após isso, foi a lâmina foi
lavada suavemente com água corrente para remover o excesso do
corante violeta. Foi submetido um período de 45 segundos após a
lavagem.
5
4. Foi aplicado o iodo sobre a amostra e deixado agir por 1 minuto,
seguido de uma lavagem superficial para a retirada do excesso do
iodo.
5. Nessa etapa, foi adicionado o álcool etílico (99,5 GL) sobre a lâmina,
descorando-a até que não desprenda mais corante. Novamente a
lâmina foi lavada.
6. Aplicamos a safranina na lâmina e deixamos agir por 30 segundos.
Lavamos a lâmina e deixamos secar ao ar livre enquanto repetimos
esse mesmo processo em outros meios de cultivo: do esfregaço do
telefone, da maçaneta e do banheiro, além do bebedouro.
7. Aplicamos o óleo de imersão sobre a lâmina e levamos ao microscópio
5.RESULTADOS
Primeira Observação: Dedo Sujo
Podemos observar no meio de cultivo do dedo sujo que aquela bactéria é

puntiforme, tem uma elevação plana, além de possuir uma borda inteira e uma
superfície lisa. Foi observado crescimento dessa colónia no primeiro estágio da
lâmina, no segundo estágio, houve uma redução drástica com o uso do sabonete.
Após o álcool, havia apenas uma colónia no terceiro estágio. Não houve
crescimento após o uso de clorexidina no quarto e último estágio. Ao fazer a
coloração de Gram, foi observado no microscópio, uma maior parte de bactérias
Gram positivas, enquanto números mínimos de bactérias Gram negativas
estavam presentes.
Segunda observação: Esfregaço do telefone
Após a coloração de Gram do meio de cultivo referente ao telefone, observamos

que aquela bactéria tem o formato circular, uma elevação convexa com uma
borda inteira e superfície lisa. Ao observar no microscópio, havia
predominantemente, bactérias Gram negativas, enquanto o número de bactérias
Gram positivas eram poucas.
6
Terceira observação: Esfregaço da maçaneta
Não houve crescimento no meio de cultivo, portanto não foi possível fazer a
coloração de Gram e identificar qual tipo de bactéria estava presente.
Quarta Observação: Esfregaço do bebedouro
Não houve crescimento no meio de cultivo, portanto não foi possível fazer a
coloração de Gram e identificar qual tipo de bactéria estava presente.
7
REFERÊNCIAS
https://docs.ufpr.br/~microgeral/arquivos/pdf/pdf/Gram.pdf
https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/
https://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/115_03gram.pdf

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• Estrutura da parede celular

Azul de algodão: O azul de algodão é usado em exames microscópicos de

O objetivo desse relatório é para entender a importância da coloração de Gram

1. Com uma alça de inoculação, foi coletado em formato ``L`` uma

Primeira Observação: Dedo Sujo

Podemos observar no meio de cultivo do dedo sujo que aquela bactéria é

Segunda observação: Esfregaço do telefone

Após a coloração de Gram do meio de cultivo referente ao telefone, observamos

Quarta Observação: Esfregaço do bebedouro

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