HIBRIDAREA SOMATIC

Hibridarea somatic

Const
n
fuzionarea
(contopirea) a doi sau mai muli
protoplati i refacerea unei noi
celule care conine material
genetic (nuclee, cromozomi,
organite
citoplasmatice)
provenit din celule care aparin
aceleiai specii sau la specii
diferite (fr a recurge la
hibridarea sexuat).

Cu alte cuvinte, hibridarea

somatic
prin
fuziunea
protoplatilor este o metod de
obinere a hibrizilor ntre plante
aparinnd aceleiai specii sau
unor specii diferite, imposibil de
realizat prin metode clasice.

Hibridarea somatic
S-a constatat c protoplatii izolai
enzimatic sunt capabili s fuzioneze
spontan, dar cu o frecven relativ
mic (8% la Datura innoxia i 11 % la
Lilium longiflorum), deoarece sunt
ncrcai
cu
sarcin
electric
negativ.

Hibridarea somatic
Keller i Melchers (1973) au elaborat prima metod eficient
de inducere a fuzionrii protoplatilor prin neutralizarea sarcinilor
electrice, folosind ioni de Ca++ i K+ cu sarcin electric pozitiv
(CaCl2, KH2PO4), la temperatura de 37 0C i pH alcalin (9,510,5).
Ulterior, s-a elaborat metoda de fuzionare prin tatament cu
polietilenglicol (care este indicatorul cel mai eficient), aplicat n
concentraie de 25-40 %. Totui, acesta prezint o oarecare
toxicitate care poate atinge 50% din protoplati, ducnd n unele
cazuri la formarea de celule multinucleate, prin fuziuni ale mai
multor protoplati.
Zimmermann (1981) a elaborat o metod modern n care
fuziunea protoplatilor este indus ntr-un cmp electric
alternativ discontinuu, aceasta realizndu-se ntr-un procent de
80 -100%, cu o eficien mult mai mare dect prin tratamentul cu
polietilenglicon, deoarece nu afecteaz viabilitatea protoplatilor.

Hibridarea somatic
Prin fuzionarea protoplatilor de la diferite specii
este posibil manipularea informaiei genetice i
hibridarea celular interspecific, cu rol deosebit n
lucrrile de ameliorare, oferind numeroase posibiliti de
combinri genomice pentru a crea forme cu totul noi.
Se
obin
celule
hibride,
interspecifice sau intergenerice,
cu o nou zestre ereditar i cu
caracteristici noi.
n urma fuzionrii protopltilor
se formeaz produi de fuziune
homocariotici
(n
cadrul
celulelor ce aparin aceleiai
specii) i heterocariotici (n
cazul fuzionrii celulelor ce
aparin la dou specii diferite).

Hibridarea somatic- faze

Hibridarea somatic ntre dou specii diferite const

din urmtoarele faze:
preluarea materialului iniial folosind esuturi de
meristem foliar;
izolarea celulelor prin tratamente enzimatice;
obinerea de protoplati i fuzionarea lor pn la
realizarea heterocarionului;
nceperea diviziunilor mitotice;
formarea calusului;
obinerea plantelor prin culturi de calus selecionat;
regenerarea plantelor ntregi transplantate la sol.

Hibridarea somatic

Uneori din hibridarea celular nu regenereaz

plante, ci se obin numai linii celulare hibride.
Binding i Nehls (1978) au obinut astfel de linii
celulare hibride ntre speciile Vicia faba x Pethunia
hybrida din care a generat un calus, fr a evolua
n formarea de plante ntregi.
Alte hibridri somatice, capabile s rup barielele
interspecifice s-au mai realizat ntre:
Pethunia parodii i Pethunia parviflora,
Pethunia hybrida i Atropa belladona,
Datura innoxia i Atropa belladona, etc.

Aplicaii ale hibridrii

celulare
ntre reproducerea sexuat la plantele
superioare i fuzionarea protoplatilor exist
diferene eseniale.
n cadrul reproducerii sexuate, informaiile
citoplasmatice sunt transmise n general numai
de planta mam i nu exist surse de variabilitate
citoplasmatic.
De asemenea, nu apar
recombinri ntre diferite tipuri de formaiuni
cloroplastice sau mitocondriale.

Aplicaii ale hibridrii

celulare
1. Varaii somaclonale
n cazul hibridrii de protoplati, prin
combinarea genotipurilor de la speciile
incompatibile apropiate sau ndeprtate din
punct de vedere taxonomic, se obin varaii
somaclonale din care pot fi selecionate noi
forme valoroase sub aspect genetic,
utilizate ca material iniial n lucrri de
ameliorare.

Aplicaii ale hibridrii celulare

2. Obinerea de hibrizi celulari (cibrizi)
Cnd fuziunea de hibrizi de protoplati este urmat de o
recombinare genetic, se poate realiza o hibridare att a
nucleilor, ct i a organitelor citoplasmatice (cloroplaste,
mitocondrii). Dac unul dintre nuclei este eliminat n cursul
divizunilor succesive, se obin hibrizi citoplasmatici numii

cibrizi n care apar, cel mai frecvent, recombinri mitocondriale.

Definitie. Cibrizii sunt hibrizi celulari care mbin genele nucleare
ale unui genitor cu cele extranucleare ale celuilalt.
Din heterocarioni rezult hibrizi somatici, care nglobeaz
cromozomii celor 2 specii, sau cibrizi care nglobeaz cromozomii i
genele nucleare de la o specie, cu genele extranucleare de la
cealalt. n unele cazuri apar himere formate din esuturi i celule
diferite genetic. De aceea, selecia adevrailor produi de
hibridare somatic este o problem cheie a hibridrii parasexuale.

Aplicaii ale hibridrii celulare

La plantele superioare, regenerarea de organisme

noi, pornind de la genotipuri ndeprtate genetic i
protoplati transformai prin recombinare genetic,
constituie o metod eficient de ameliorare. Astfel
se realizeaz creterea variabilitii materialului
iniial de selecie i transformarea fondului genetic.
Prin fuzionarea de protoplati s-au realizat muli
hibrzi somatici vegetali i animali, unii dintre acetia
dovedindu-se a fi adevrate himere sau aberaii
biologice.
n sectorul vegetal pot fi menionai cibrizii: gru +
orz, tomate + cartofi, Vicia + Petunia, ntre specii
de Nicotiana, etc.

Aplicaii ale hibridrii celulare

3. Transferul de material genetic n protoplasti
Elaborarea unor metode eficiente de obinere a unor cantiti
mari de protoplati a fcut posibil folosirea acestora n vederea
unor manipulri genetice la plante.
Transferul direct de gene, prin hibridare somatic se poate realiza
n faza de protoplast, protejat la exterior numai de membrana
plasmatic (plasmalema).
Includerea n protoplaste a unor microorganisme, virusuri, organite,
macromolecule exogene se poate realiza pe 3 ci:
- prin endocitoz prin strbaterea membranelor plasmatice dup
degradarea peretelui celular. Pe aceast cale au fost incluse n
protoplati: alge, virusuri, bacterii, drojdii, nuclei, cloroplaste,
mitocondrii, ADN exogen, etc. Membrana plasmatic poate fi uor
traversat de molecule de ADN extern care va migra pn la
nucleu i se va integra n cromozomi.
- fuzionarea membranelor;
- transfer prin intermediul lipozomilor , care sunt vezicule artificiale
de fosfolipide ce pot include diverse materiale, inclusiv ADN, pe
care l pot transfera n protoplati, prin fuzionarea acestor tipuri de
celule.

Aplicaii ale hibridrii celulare

Tehnologia
ADN-ului
recombinat,
prin
fuziunea
protoplatilor a devenit n prezent o ramur de vrf a
biologiei, care va reui s elaboreze produse cu rol
esenial n dezvoltarea economiei mondiale
Ex. mrirea rezistenei plantelor la factorii chimici sau
fizici (toxine, erbicide) i la factori abiotici (ger, secet,
salinitatea solului)

Tehnicile de inginerie genetic, molecular i celular pot

contribui la crearea unor noi forme adaptate la stresul
biotic i osmotic, prin cercetri care vizeaz funcionarea
sistemelor enzimatice, reglarea i transferul informaiei
genetice de la formele rezistente la cele sensibile.

Aplicaii ale hibridrii celulare

4. Ameliorarea plantelor i crearea de soiuri noi

Rezultatele obinute pn n prezent arat c ameliorarea

plantelor i BTH sunt domenii complementare care pot asigura
progrese remarcabile pentru viitor, prin valorificarea realizrilor
ingineriei genetice privind hibridarea somatic interspecific i
intergenetic.
Hibridarea somatic a devenit o surs important de
variabilitate, fie la nivel nuclear (recombinri ntre genomuri), fie
la nivel citoplasmatic (modificri de ADN mitocondrial sau ADN
- cloroplastic).
Totodat, este posibil apariia unui numr ct mai mare de
mutaii, precum i livrarea de hibrizi somatici i cibrizi. Hibridarea
somatic poate fi un mijloc rapid de introducere a unor gene
strine n interiorul unei specii cultivate.
Transferul unor caractere de la speciile slbatice la cele cultivate
asigur mrirea rezistenei plantelor hibride, att la factori

Aplicaii ale hibridrii celulare

la speciile floricole
Tehnologia hibridrii prin fuziuni de protoplati este
relativ simpl n comparaie cu alte tehnici de inginerie
genetic, n mod particular cu tehnologia ADNrecombinat.
Pn n anul 1992 au fost regenerate pornind de la
culturi de protoplati circa 50 de specii ornamentale, att
monocotiledonate, ct i dicotiledonate (Ochatt i Power
- 1992).
Exemple de genuri i specii regenerate:
Chrysanthemum Otsuka i col.-1985;
Gaillardia grandiflora Binding - 1981;
Pelargonium hortorum Yarrow i col. 1987, etc.

Aplicaii ale hibridrii

celulare

Cercetrile actuale ce se efectueaz prin culturi de protoplati

vizeaz
numeroase aspecte: introducerea de gene
responsabile de fixarea azotului atmosferic, de sinteza de noi
pigmeni, de rezistena la frig, secet, poluare etc .

Protoplatii sunt izolai de obicei din fragmente de limb,

acestea sunt introduse ntr-o soluie unde au loc dou operaii
simultane: plasmoliz i degradarea peretelui celular.

Plasmoliza se realizeaz cu ajutorul zahrului din soluie i este

necesar pentru a evita spargerea celulelor dup dispariia
peretelui celular i pentru a detaa celula de peretele ei
scheletic. Degradarea peretelui pectocelulozic se face cu
enzime care se determin pentru fiecare specie.

Condiiile de mediu pentru realizarea acestor operaii sunt:

temperatur de 22oC, pH = 5,5; lumina: 2000-4000 lux; durata
16-24 ore.