Semina: Ciências Agrárias ISSN: 1676-546X semina.agrarias@uel.br Universidade Estadual de Londrina Brasil Rodrigues Barros Brito, Danilo; Moreno Fernandes, Rozeverter Ação anti-helmíntica da Morinda citrifolia (noni) sobre Heterakis gallinarum Semina: Ciências Agrárias, vol. 34, núm. 4, julio-agosto, 2013, pp. 1775-1782 Universidade Estadual de Londrina Londrina, Brasil Disponível em: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=445744122027 Como citar este artigo Número completo Mais artigos Home da revista no Redalyc Sistema de Informação Científica Rede de Revistas Científicas da América Latina, Caribe , Espanha e Portugal Projeto acadêmico sem fins lucrativos desenvolvido no âmbito da iniciativa Acesso Aberto DOI: 10.5433/1679-0359.2013v34n4p1775 Ação anti-helmíntica da Morinda citrifolia (noni) sobre Heterakis gallinarum Anthelmintic action of Morinda citrifolia (noni) on Heterakis gallinarum MEDICINA VETERINÁRIA ARTIGOS / ARTICLES Danilo Rodrigues Barros Brito1*; Rozeverter Moreno Fernandes2 Resumo A ação anti-helmíntica da Morinda citrifolia (noni) sobre Heterakis gallinarum foi avaliada em galinhas poedeiras naturalmente infectadas. A atividade anti-helmíntica in vitro foi determinada em helmintos adultos colocados em placas de petri descartáveis, contendo solução Tyrode pré-aquecida, nas quais foi adicionado o extrato aquoso ou etanólico e mantidas em BOD a uma temperatura de 37oC (±1). Os extratos aquoso e etanólico foram usados nas seguintes concentrações: 1,69; 3,37; 6,74; 13,48 e 26,96 mg.mL-1 e 4,17; 8,34; 16,68; 33,36 e 66,72 mg.mL-1, respectivamente. Como controle positivo usouse uma solução de citrato de piperazina tetrahidratada na concentração de 50 mg.mL-1. A atividade anti-helmíntica in vivo foi determinada em aves, administrando-se os extratos aquoso ou etanólico (10 mL/Kg/PV) durante três dias consecutivos. As fezes dos animais foram coletadas durante quatro dias, em seguida foram lavadas em água corrente e peneiradas. No quinto dia após início do tratamento, as aves foram abatidas e necropsiadas, para contagem e identificação dos helmintos remanescentes. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando o teste de Student-Newman-Keuls. No teste in vivo, não houve diferença significativa entre o extrato aquoso (concentração de 10%) e o grupo controle (água) (p>0,05) na eliminação de H. gallinarum. O extrato etanólico apresentou um percentual de eliminação de 20,35%, diferindo estatisticamente do grupo controle (p<0,05). Na concentração 26,96 mg.mL-1, para o teste in vitro, o extrato aquoso causou mortalidade de 100%, semelhante ao obtido pela piperazina (100%), diferindo estatisticamente do controle negativo (p<0,05). Nas concentrações 33,36 e 66,72 mg.mL-1, o extrato etanólico também apresentou percentagem de mortalidade de 100%, havendo diferença estatisticamente significativa do controle negativo (P<0,05). Conclui-se que a atividade antihelmíntica do fruto do noni apresentou resultados promissores no teste in vitro, havendo necessidade de estudos com maiores concentrações no teste in vivo. Palavras-chave: Plantas medicinais, helmintologia, galinha Abstract The anthelmintic effect of Morinda citrifolia (noni) on Heterakis gallinarum was evaluated in chicken naturally infected. The anthelmintic activity in vitro was determined in adults helminthes in disposable petri dishes, containing Tyrode solution, pre warmed in which aqueous or ethanolic extracts were added. The material was maintained in a BOD at 37ºC (±1). The aqueous and ethanolic extracts presented the following concentrations: 1.69; 3.37; 6.74; 13.48 e 26.96 mg.mL-1 and 4.17; 8.34; 16.68; 33.36 e 66.72 mg.mL-1, respectively. It was used as positive control, a solution of tetrahidrate citrate of piperazin in the concentration of 50 mg/mL. The anthelmintic activity in vivo was determined by the administration of aqueous or ethanolic extracts (10 mL/Kg/PV) during three consecutive days. The feces were collected during four days in each group, washed in water and sifted. In the fifth day post-treatment, the chickens 1 2 * Prof. do Instituto Federal do Maranhão, IFMA, Campus São Luís-Maracanã, São Luís, MA. E-mail: danilobrito@ifma.edu.br Prof. da Universidade Federal do Piauí, UFPI, Teresina, PI. E-mail: zmoreno48@gmail.com Autor para correspondência Recebido para publicação 21/05/12 Aprovado em 05/05/13 Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 34, n. 4, p. 1775-1782, jul./ago. 2013 1775 Brito, D. R. B.; Fernandes, R. M. were slaughtered and necropsy was performed in order to count and identify remaining helminthes. The data were analyzed by the Student-Newman-Keuls test. In the in vivo test there was no significant difference between the aqueous extract and the control group (water) (p>0.05) in the elimination of H. gallinarum. The ethanolic extract presented an elimination of 20.35%, differing statistically from the control group (p<0.05). In the concentration of 26.96 mg.mL-1, for the in vitro test, the aqueous extract presented a mortality of 100%, the same obtained by piperazin (100%), differing statistically from the negative control (p<0.05). In the concentrations of 33.36 and 66.72 mg.mL-1, the ethanolic extract also presented a mortality of 100%, there was a significant statistical difference from the negative control (p<0,05). Noni fruit extracts manifested high anthelmintic activity in vitro, however, more studies are necessary with higher concentrations in the in vivo test. Key words: Medicinal plants, helminthology, chicken Introdução Na área farmacêutica, as plantas e os extratos vegetais foram e continuam sendo de grande relevância, tendo em vista a utilização das substâncias ativas como protótipos para o desenvolvimento de novas drogas e como fonte de matérias-primas, tanto para a obtenção de fármacos (que são as substâncias ativas isoladas), como para a obtenção de adjuvantes (produtos utilizados na formulação de medicamentos) ou, ainda, de produtos elaborados exclusivamente à base de extratos vegetais: os fitoterápicos (SCHENKEL; GOSMANN; PETROVICK, 2001). Considerando a produção alternativa de frangos (frango colonial), que visa reproduzir ao máximo as condições naturais de vida da ave, busca-se produzir alimentos saudáveis, de elevado valor nutricional e isentos de contaminantes, preservando a biodiversidade em que se insere o sistema produtivo. Para tanto é necessário adotar práticas de produção menos agressivas e que aperfeiçoem o uso de recursos naturais, tendo por objetivo a autosustentação (FIGUEIREDO et al., 2001). Diversas plantas têm sido estudadas com a finalidade de substituição da utilização de produtos químicos por compostos naturais que poderão ter eficácia semelhante, melhorando a questão ambiental e a economicidade. Dentre essas plantas, a Morinda citrifolia, conhecida popularmente como noni, muito disseminada na região Nordeste do Brasil, tem mostrado ser uma planta promissora para ser usada na eliminação de helmintos parasitas de aves. Heterakis gallinarum é um nematoide pequeno, mede entre 0,4 e 1,5 centímetros. Os hospedeiros intermediários são oligoquetas dos gêneros Lumbricus, Allolobophora e Eisenia, e alguns insetos, que ingerem ovos do parasita. As galinhas se infectam quando ingerem estes hospedeiros intermediários, que contenham a forma infectante localizada nos tecidos. Parasitam o ceco e os adultos são patogênicos, causando tiflite, diarréia e perda de peso. Os ovos de H. gallinarum são semelhantes aos de Ascaridia galli (FREITAS, 1977). Em estudos realizados com galinhas soltas no município de Seropédica, Rio de Janeiro, Carneiro (2001) encontrou doze espécies de helmintos, sendo sete nematoides e cinco cestódeos. As espécies que apresentaram os maiores graus de dominância foram H. gallinarum e Capillaria sp., sendo estas duas espécies classificadas como centrais. Menezes et al. (2001) realizaram uma pesquisa sobre as helmintoses que ocorrem em galinhasd’angola criadas extensivamente no estado do Rio de Janeiro, e foi observada uma prevalência de H. gallinarum de 100 %. Fernandes (1998) estudando a fauna de helmintos em 70 frangos de corte criados semi-extensivamente, verificou que 94,3% eram positivos para A. galli e 100% para H. gallinarum. O mesmo autor também observou a localização desses helmintos, sendo que 97,7% de A. galli estavam presentes no intestino delgado e 2,3% no intestino grosso, enquanto 99,2% de H. gallinarum foram observados no ceco e 0,8% no cólon. Segundo Bowman et al. (2006), H. gallinarum serve como hospedeiro paratênico do Histomonas 1776 Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 34, n. 4, p. 1775-1782, jul./ago. 2013 Ação anti-helmíntica da Morinda citrifolia (noni) sobre Heterakis gallinarum meleagridis. Este protozoário ao ser ingerido pelo nematoide vai se localizar dentro do ovo deste parasito. Os ovos contendo H. meleagridis são liberados no ambiente e são ingeridos pelas aves. No intestino destas ocorre liberação da larva de H. gallinarum juntamente com o protozoário que irá para o ceco onde se multiplicará, podendo causar processo inflamatório severo no fígado e no ceco, com presença de pequenas áreas claras cercadas de eosinófilos. Brito et al. (2009) avaliando a atividade antihelmíntica dos extratos aquoso e etanólico do fruto da Morinda citrifolia sobre Ascaridia galli, observaram nos testes in vitro, que o extrato aquoso na concentração de 26,96 mg.mL-1 causou mortalidade de 50% e o extrato etanólico na concentração de 66,72 mg.mL-1, 76,67% após 96 horas de tratamento. Fernandes (2008) estudando a atividade anti-helmíntica in vivo de plantas sobre H. gallinarum, observou que o extrato aquoso de Simarouba versicolor apresentou percentual de eliminação de 20,22% e o extrato etanólico de 29,15%. Já o extrato aquoso da Annona squamosa apresentou percentual de eliminação de 20,60%. Estudos sobre o efeito anti-helmíntico da folha do noni (M. citrifolia) sobre A. galli, demonstraram que o extrato aquoso da folha do noni, no teste in vitro e na concentração de 13,92 mg.mL-1, causou mortalidade de 96,67% após 96 horas de tratamento, assemelhando-se ao controle positivo (piperazina a 50 mg.mL-1) que causou 100% de mortalidade (BRITO et al., 2011). Fernandes et al. (2004) pesquisando a atividade anti-helmíntica das plantas Allium sativum, Punica granatum, Tynnanthus fasciculatus e Cocos nucifera sobre o H. gallinarum em teste in vivo com frangos infectados naturalmente, constataram que o extrato aquoso e suco por gavage dessas plantas incorporadas à ração nas doses de 2, 3 e 10g kg-1 dia-1, durante três dias consecutivos, não apresentaram atividade significativa (P<0,05) sobre este helminto. Matos (2000) afirma que a avaliação de novas drogas vegetais através da pesquisa é o caminho para que se possa fazer o correto aproveitamento das plantas medicinais e seus derivados aplicados a fitoterapia. Devido à alta prevalência de H. gallinarum em aves e sua importância na sanidade e produção das mesmas e dentro da perspectiva da criação orgânica de frangos, a utilização de plantas medicinais aparece como uma alternativa no controle das helmintíases aviárias. Na criação de frangos coloniais em sistema de produção orgânico não é permitido o uso de antihelmínticos sintéticos (produtos comerciais), como tentativa de suprir esta demanda, este trabalho teve como objetivo avaliar a ação anti-helmíntica da M. citrifolia sobre H. gallinarum proveniente de aves naturalmente infectadas. Material e Métodos Fonte vegetal: Os frutos da planta M. citrifolia foram coletados no município de Altos, Estado do Piauí, no mês de julho (período seco), à latitude de 05º 02’ 20” S, longitude de 42º 27’ 39” O e a 187 m de altitude, a 42 km ao nordeste de Teresina. O solo local é Podzólico Vermelho Amarelo Distrófico com baixa fertilidade natural (P 5 mg/dm³, K 14 mg/dm³, Al 6 mmol/dm³, e Ca+Mg 8 mmol/dm³) e alta acidez (pH-5,3). A precipitação média anual do município é em torno de 1.297 mm, sendo que cerca de 90% das chuvas concentram-se no período de novembro a maio. A temperatura média anual está em torno de 25°C e a umidade relativa de 67%. A identificação botânica foi realizada no Núcleo de Referência em Ciências Ambientais do Trópico Ecotonal do Nordeste – TROPEN, Teresina-PI, sendo a exsicata depositada sob o número 21.644 no herbário Graziela Barroso. Os frutos foram picados, dessecados em estufa de circulação forçada de ar, durante oito dias, a uma temperatura máxima de 45º C (± 1). Após essa etapa, o material foi triturado em moinho, tipo willis, obtendo-se um pó que foi acondicionado em um frasco de vidro âmbar hermeticamente fechado e identificado, onde permaneceu até o momento do preparo dos extratos. 1777 Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 34, n. 4, p. 1775-1782, jul./ago. 2013 Brito, D. R. B.; Fernandes, R. M. Preparação dos Extratos: O extrato etanólico foi obtido através de maceração a frio, após quatro extrações sucessivas, sendo filtrado usandose papel de filtro Whatman nº 1. Em seguida, concentrado em evaporador rotativo sob pressão reduzida, à temperatura entre 42 e 45 ºC e, então, liofilizado. Utilizou-se em média 1,3 L de etanol para cada extração realizada. O extrato aquoso foi obtido através de cocção, ou seja, 50g de matéria vegetal (pó) para 500 mL de água destilada e, em seguida, deixou-se ferver por dois minutos e, após o resfriamento à temperatura ambiente, a solução obtida foi filtrada, obtendo-se então uma solução a 10%. Foi retirada uma alíquota de 1 mL de cada extrato, colocada em estufa de circulação forçada de ar, a uma temperatura de 45 ºC (± 1), até a obtenção de um peso constante, procedimento realizado em triplicata. A massa média obtida referente a 1mL foi relacionada ao respectivo volume total, obtendo-se então a massa total em mg.mL-1. Esse procedimento foi realizado para o extrato aquoso com o objetivo de determinar o peso seco e, para o extrato etanólico, para avaliar o rendimento aproximado após a evaporação do etanol. Manutenção das aves: Durante o experimento, foram adquiridas em granjas da zona rural, da cidade de Teresina-PI, galinhas poedeiras em fase de descarte e que não recebiam vermífugo há pelo menos três meses. Foram colocadas em um galpão composto por uma área coberta, com bebedouros e comedouros, além da cama de maravalha. Os animais tiveram acesso a uma área descoberta e de chão batido, capinada, evitando-se que os animais tivessem acesso a outras plantas. Para determinar o grau de infecção do plantel, foram realizados exames de fezes, pela técnica Willis modificada (WILLIS APUD UENO; GONÇALVES, 1994). Atividade anti-helmíntica in vitro: Foi determinada em helmintos adultos, machos e fêmeas de H. gallinarum, coletados nos cecos de aves necropsiadas. Os parasitos foram lavados em solução salina (NaCl 0,9%), e aqueles considerados ativos foram transferidos para placas de Petri descartáveis (90x15mm), contendo solução Tyrode (KALEYSA RAJ, 1975) pré-aquecida (37 ºC), totalizando 20 nematoides por placa. A seguir, foram adicionados os extratos nas seguintes concentrações: 1,69; 3,37; 6,74; 13,48 e 26,96 mg.mL-1 do extrato aquoso; e 4,17; 8,34; 16,68; 33,36 e 66,72 mg.mL-1 do extrato etanólico. Os nematoides foram mantidos em estufa BOD, à temperatura de 37° C (±1), e examinados 6, 24 e 48 horas após o tratamento. Os nematoides imóveis, mesmo após breve pressão com estilete, foram considerados mortos (SHILASKAR; PARASAR, 1985). O experimento foi repetido 3 vezes para cada dose, e a porcentagem de parasitas mortos em cada grupo foi calculada. Esse teste foi acompanhado de dois controles negativos constituídos por água e diluente (Tween 80 a 17,5% acrescido de DMSO a 12,5%) e um controle positivo com a droga referência, citrato de piperazina (50 mg.mL-1), administrada de acordo com o fabricante (Proverm Tortuga). Atividade anti-helmíntica in vivo: Os grupos (n=6) compostos de aves com peso médio de 1,5 kg, foram constituídos por controle positivo (piperazina, 50 mg.mL-1), controles negativos (água e diluente idêntico ao teste in vitro) e grupos tratados com os extratos aquoso e etanólico de M. citrifolia, nas doses de 50,1 mg.mL-1 e 24,6 mg.mL-1, respectivamente. . Os extratos aquoso e etanólico foram administrados, durante três dias consecutivos, no volume de 10 mL/kg, utilizandose uma sonda intragástrica (FERNANDES et al., 2005). Diagnosticada a infecção por exame de fezes, as aves foram transferidas para gaiolas individuais galvanizadas, com fundo removível, onde passaram por um período de adaptação de 72 horas, recebendo diariamente 50g de ração (16% de PB) e água ad libitum. Antes do início dos testes, as aves foram submetidas a um período de jejum de 6 horas, tendo disponível água à vontade. Em todos os grupos as fezes foram coletadas durante quatro dias. Em seguida, foram levadas ao 1778 Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 34, n. 4, p. 1775-1782, jul./ago. 2013 horas, recebendo diariamente 50g de ração (16% de P Ação anti-helmíntica da Morinda citrifolia (noni) sobre Heterakis gallinarum laboratório, lavadas em água corrente e peneiradas de 20/06/2002 do Conselho Federal de Medicina em tamis USBS-50, abertura 0,297 mm e tyler 48 Veterinária. Durante a necropsia parasitológica sob outro tamis de malha USBS-40, abertura 0,42 a mucosa do trato gastrintestinal foi raspada e mm e tyler 35 colocado no fundo da pia, de modo o conteúdo colocado em frascos contendo AFA a reter o resíduo do primeiro tamis. Posteriormente, quente para posterior contagem e identificação dos foram acondicionadas em frascos contendo uma helmintos remanescentes. O efeito do tratamento solução de Ácido Acético, Formol e Álcool (AFA) foi avaliado pelo método crítico controlado a quente (AMATO; BOEGER; AMATO, 1991) (STEWARD, 1955), adaptado ao presente modelo para conservação, a fim de preservar os helmintos experimental e expresso em percentual médio de eliminados para posterior contagem. No quinto eliminação de H. gallinarum, conforme a fórmula dia de tratamento, as aves foram sacrificadas abaixo: adoe (STEWARD, 1955), adaptado ao presente modelo necropsiadas de acordo com a Resolução nº 714 % de atividade Anti-helmíntica = N° total de nematoides eliminados nas fezes após o tratamento x 100 N° total de nematoides eliminados + N° total de nematoides recuperados nas fezes após o tratamento Cálculo semelhante foi aplicado aos grupos controles negativos. extrato aquoso do fruto de M. citrifolia, no intervalo de 48 horas de exposição do parasito ao extrato, está disposta na Tabela 1. Análise estatística: Os dados obtidos foram Considerando as duas maiores concentrações analisados estatisticamente, utilizando-se o teste (13,48 e 26,96 mg.mL-1), após1987). seis horas de exposição Student-Newman-Keuls, com auxílio do programa foi p<0,05 (PIMENTEL-GOMES, InStat (Graphpad Instat: GraphPad Software do H. gallinarum, o extrato aquoso do fruto da M. Oberlin, San Diego – CA, USA). O nível de citrifolia apresentou percentual de mortalidade significância adotado foi p<0,05 (PIMENTEL- superior ao controle positivo (piperazina), diferindo estatisticamente. Após 24h nas concentrações 13,48 GOMES, 1987). O pH do extrato etanólico do fruto do noni foi de 4 e 26,96 mg.mL-1, o percentual de mortalidade não foi significativamente superior ao controle positivo. Resultados e Discussão Com 48 horas de tratamento, o extrato aquoso do O pH do extrato etanólico do fruto do noni foi de fruto da M. citrifolia, levando em consideração 4,40 e, do extrato aquoso, de 3,86. O peso seco do as duas maiores concentrações (13,48 e 26,96 -1 extrato aquoso do fruto do noni foi de 50,1 mg.mL-1 mg.mL ), apresentou a mesma eficácia quando comparado ao controle positivo, não diferindo e, do extrato etanólico, de 24,6 mg.mL-1. estatisticamente (100% para ambos tratamentos). A percentagem média de mortalidade nos testes Porém quando comparado com controle negativo in vitro, usando-se diferentes concentrações do (28,67%), houve diferença estatística. 1779 Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 34, n. 4, p. 1775-1782, jul./ago. 2013 Brito, D. R. B.; Fernandes, R. M. Tabela 1. Percentual (média ± desvio padrão) de mortalidade de Heterakis gallinarum no teste in vitro com extrato aquoso do fruto de Morinda citrifolia, ao longo de 48 horas de incubação. Concentração (mg.mL-1) Extrato Aquoso do Noni Piperazina Água 1,69 3,37 6,74 13,48 26,96 50 6 Tempo (horas)/Taxa de Mortalidade (%) 24 48 0ª 11,67±7,64ª 28,33±2,89ª 51,67±10,41b 88,33±5,77b 25±13,23ª 0ª 40±5 b 55±5 b 66,67±12,58c 86,67±2,89c 100±0c 83,33±12,58c 4±1,73a 66,67±7,64 b 86,67±2,89bc 91,67±7,64c 100±0c 100±0 c 100±0 c 28,67±7,64 a Médias com letras iguais, na coluna, não diferem entre si pelo teste de Student-Newman-Keuls (P>0,05). Fonte: Elaboração dos autores. Brito et al. (2009), estudando a eficiência da M. citrifolia sobre A. galli, encontraram menor eficácia. Observaram percentual de mortalidade inferior a 5% após 48h de tratamento. A maior concentração utilizada foi também de 26,96 mg.mL-1, demonstrando possivelmente uma maior sensibilidade por parte de H. gallinarum ao extrato aquoso do fruto da M. citrifolia no teste in vitro, bem como para piperazina na concentração de 50 mg.mL-1. A ação do extrato etanólico do fruto M. citrifolia sobre H. gallinarum apresentou resultados semelhantes ao extrato aquoso, conforme mostra a Tabela 2. Após 48h de tratamento, levando em consideração as duas maiores concentrações (33,36 e 66,72 mg.mL-1), o extrato etanólico apresentou o mesmo percentual de mortalidade do controle positivo (piperazina), sendo o mesmo fato observado com o extrato aquoso. As concentrações 8,34; 16,68; 33,36 e 66,72 mg.mL-1, após 24 e 48h de tratamento, apresentaram diferença significativa (P<0,05), considerando o extrato etanólico do fruto do noni, controle positivo (piperazina) e o controle negativo (diluente). Nas três maiores concentrações (16,68; 33,36 e 66,72 mg.mL-1) , após 48h de tratamento, não houve diferença significativa entre extrato etanólico e o controle positivo. Considerando todos os tempos de exposição (6, 24 e 48h) e as três maiores concentrações (16,68; 33,36 e 66,72 mg.mL-1 ), o extrato etanólico do noni diferiu estatisticamente do controle negativo. Tabela 2. Percentual (média ± desvio padrão) de mortalidade de Heterakis gallinarum no teste in vitro com extrato etanólico do fruto de Morinda citrifolia, ao longo de 48 horas de incubação. Extrato Etanólico do noni Piperazina Diluente* Concentração (mg.mL-1) 4,17 8,34 16,68 33,36 66,72 50 6 0a 0a 10±10ªb 23,33±7,64b 73,33±7,64c 25±13,23b 4,33±1,73 a Tempo (horas)/Taxa de Mortalidade (%) 24 48 10±5ª 45±5 b 35±5b 78,33±2,89c 48,33±2,89b 93,33±2,89d c 80±10 100±0d c 100±0 100±0d c 83,33±12,58 100±0d 9,67±5ª 22,67±10,41a Médias com letras iguais, na coluna, não diferem entre si pelo teste de Student-Newman-Keuls (P>0,05). * (Tween 80 a 17,5% acrescido de DMSO a 12,5%). Fonte: Elaboração dos autores. 1780 Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 34, n. 4, p. 1775-1782, jul./ago. 2013 Ação anti-helmíntica da Morinda citrifolia (noni) sobre Heterakis gallinarum A atividade anti-helmíntica dos extratos aquosos e etanólico do fruto da M. citrifolia foi avaliada no teste in vivo e seu percentual de eliminação está contido na Tabela 3. O percentual de eliminação considerando o extrato aquoso foi muito baixo, sendo inferior a 2%. A eliminação utilizando o extrato etanólico da M. citrifolia foi semelhante ao do controle positivo (piperazina), sendo ambos inferiores a 25%, não havendo diferença significativa (P>0,05). Esse baixo percentual de eliminação do H. gallinarum descrito para os extratos testados (aquoso e etanólico) e controle positivo, pode ter ocorrido devido à localização desse nematoide nas aves, uma vez que se encontram geralmente na porção final do ceco. Isso pode ter dificultado a ação do medicamento ou dos extratos no combate ao H. gallinarum. Sobral (2010), ao avaliar galinhas caipiras, testou a atividade anti-helmíntica da Operculina hamiltonii e descreveu a ineficiência dessa planta como ovicida e larvicida sobre H. gallinarum. Tabela 3. Atividade anti-helmíntica dos extratos aquoso e etanólico obtidos do fruto de Morinda citrifolia na eliminação de Heterakis gallinarum em aves poedeiras (n=6) naturalmente infectadas. Tratamentos Extrato Aquoso (50,1 mg.mL-1) Extrato Etanólico (24,6 mg.mL-1) Água Diluente* Piperazina (50 mg.mL-1) Número de helmintos Exame de fezes Necropsia Eliminação (%) 07 361 1,90ª 35 137 20,35b 11 06 396 113 2,70ª 5,04ª 18 69 20,68b Médias com letras iguais, na coluna, não diferem entre si pelo teste de Student-Newman-Keuls (P>0,05). * (Tween 80 a 17,5% acrescido de DMSO a 12,5%). Fonte: Elaboração dos autores. Conclusões No teste in vitro, as concentrações mais elevadas dos extratos aquoso e etanólico da M. citrifolia apresentaram elevada eficácia contra H. gallinarum, com percentual de mortalidade superior a 90%. No entanto, uma baixa eficiência no teste in vivo foi observada, havendo necessidade de estudos com maiores concentrações. Referências AMATO, J. F. R.; BOEGER, W. A.; AMATO, S. B. Protocolos para laboratório – coleta e processamento de parasitos de pescado. Imprensa Universitária, UFRRJ, Rio de Janeiro. 1991. 77 p. BOWMAN, D. D.; LYNN, R. C.; EBERRARD, M. 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