TLC modes used for lipophilicity estimation

4.1. Reversed phase thin layer chromatography

The mechanism of the retention in RP-TLC is based on partitioning of the substance between
hydrophobic stationary phase and hydrophilic mobile phase, so the retention is generally strictly
correlated with the lipophilicity of the solutes
Polar stationary phases, such as silica gel, aluminum oxide and cellulose, impregnated with oil
substance or coated with polymers, can be used for RP-TLC
Therefore, the commercial chemically bonded stationary phases, which do not require any
sophisticated initial preparation, are generally preferred.
RP-TLC great benefits is a wider range of applicable solvents as compared to RP-HPLC like:
acetone (since a high ultraviolet absorbance is avoided in HPLC), propan-2-ol, ethanol and
dioxane (application of these viscous solvents results in high back-pressure in HPLC) as well as
methanol and acetonitrile (often used in both TLC and HPLC).
Hypotensive activity (determined as a measure of central alphaadrenergic activity and expressed
as pC25) of some -adrenergic and imidazoline receptor ligands was also correlated with retention
of these substances in RP-TLC

4.2. Micellar liquid chromatography

Micellar liquid chromatography (MLC) is a mode of reversedphase liquid chromatographic
(RPLC) where the mobile phase contains surfactant above its critical micellar concentration
(CMC).
It is worth to emphasize that surfactants in MLC not only affects the properties of mobile phase
but also adsorb on the stationary phase influencing its characteristics like reduction of
silanophilic interactions. In the ideal situation, the mobile phase should be free of organic
solvent. However, the addition of small amounts of organic solvent to micellar, aqueous solution
provides some advantages like shorter time of analysis, improved peak shape and efficiency as
well as resolution
The MLC have unique advantages, since in this chromatographic system, solutes retention is
governed by three different equilibriums. Those are solutes distribution between the micelles and
the bulk phase, partition between the stationary phase and the bulk phase and direct transfer
between surfactant-modified bed surface to the micelles.
The micelles have amphiphilic character, so both nonpolar and polar interactions between
micelles and analytes take place.

4.3. Normal phase thin layer chromatography (NP-TLC)

NP-TLC is a less frequently applied technique for lipophilicity estimation. In contrary to above
discussed techniques, NP-TLC is related to adsorption chromatography, so different molecular
mechanism of retention is involved. Usually, the mobile phase contains two organic solvents,
polar and non-polar. The non-polar solvents, such as benzene, cyclohexane, carbon tetrachloride
or toluene, are highly toxic and should be eliminated from analytical protocols. Silica gel,
Florisil® or polyamide are exemplary stationary phases used in NP-TLC
Reports concerning NP-TLC parameters of bile acids and their oxo-derivatives were presented.
Correlation between molecular parameters (total polar surface area, molecular weight) and
chromatographic data of bile acids derivatives with in silico determined human intestinal
absorption, PPB, skin permeability and log BB [60]. Furthermore, in silico-determined
bioactivity (protein coupled receptor ligand, ion channel modulator, nuclear receptor inhibitor,
protease inhibitor) depended strongly on the same descriptors
The RP-TLC and NP-TLC approaches were compared as potential tools for lipophilicity
estimation for compounds with a phenanthrene skeleton.

4.4. Salting-out thin-layer chromatography (SOTLC)

The inorganic salts are quite common ingredients of mobile phase in liquid chromatography. In
most cases, they are added as a buffer components to adjust the pH value of the solution. The
inorganic salt at low concentration can act similarly to ion-pairing reagents, increasing the
retention time of ionized compounds. On the other hand, aqueous solution of inorganic salts at
high concentrations are used as mobile phases in SOTLC.
The commonly accepted theory assumes that under these conditions, non-specific hydrophobic
interactions govern the chromatographic mechanism
it can be expected that the retention of solutes is associated with its lipophilicity. However,
several inorganic salts can be applied as modifiers of mobile phase among which ammonium
sulfate is the most widely used addition in SOTLC (because of its strong salting-out properties).
Highly polar sorbents such as silica gel, cellulose, or aluminum oxide, are commonly utilized as
stationary phases
Several SOTLC systems, containing different inorganic salts and three types of stationary
phases: silica gel, cellulose plates and basic aluminum oxide, were compared as potential tools
for lipophilicity estimation of macrolide antibiotics.
Correlations between SOTLC retention constants and intestinal absorption of angiotensin
converting enzyme (ACE) inhibitors were described by Odovic´ and co-workers. Topological
polar surface area (TPSA) and RM0 parameters were used for construction of
QSAR models which were proposed as an alternative way for prediction of intestinal absorption
for angiotensin-converting enzyme inhibitors
Mode TLC digunakan untuk estimasi lipofilikitas
4.1. Kromatografi lapisan tipis fase terbalik
Mekanisme retensi dalam RP-TLC didasarkan pada partisi zat antara fase stasioner hidrofobik
dan fase seluler hidrofilik, sehingga retensi umumnya berkorelasi ketat dengan lipofilikitas solute
Fase stasioner kutub, seperti gel silika, aluminium oksida dan selulosa, diresapi dengan zat
minyak atau dilapisi dengan polimer, dapat digunakan untuk RP-TLC
Oleh karena itu, fase stasioner terikat kimia komersial, yang tidak memerlukan persiapan awal
yang canggih, umumnya lebih disukai.
RP-TLC manfaat besar adalah berbagai pelarut yang berlaku dibandingkan dengan RP-HPLC
seperti: aseton (karena penyerapan ultraviolet tinggi dihindari di HPLC), propan-2-ol, etanol dan
dioksan (aplikasi pelarut kental ini menghasilkan tekanan punggung tinggi di HPLC) serta
metanol dan acetonitrile (sering digunakan dalam TLC dan HPLC).
Aktivitas hipotensif (ditentukan sebagai ukuran aktivitas alfaadrenerik pusat dan dinyatakan
sebagai pC25) dari beberapa ligan reseptor adrenerrgik dan imidazoline juga berkorelasi dengan
retensi zat-zat ini dalam RP-TLC

4.2. Kromatografi cair micellar

Micellar liquid chromatography (MLC) adalah mode reversedphase liquid chromatographic
(RPLC) di mana fase mobile mengandung surfaktan di atas konsentrasi micellar kritis (CMC).
Perlu ditekankan bahwa surfaktan di MLC tidak hanya mempengaruhi sifat fase seluler tetapi
juga adsorb pada fase stasioner yang mempengaruhi karakteristiknya seperti pengurangan
interaksi silanofilik. Dalam situasi ideal, fase seluler harus bebas dari pelarut organik. Namun,
penambahan sejumlah kecil pelarut organik untuk micellar, larutan berdasi memberikan
beberapa keuntungan seperti waktu analisis yang lebih singkat, peningkatan bentuk puncak dan
efisiensi serta resolusi
MLC memiliki keunggulan unik, karena dalam sistem kromatografi ini, retensi solute diatur oleh
tiga keseimbangan yang berbeda. Itu adalah distribusi solute antara micelles dan fase massal,
partisi antara fase stasioner dan fase massal dan transfer langsung antara permukaan tempat tidur
yang dimodifikasi surfaktan ke micelles.
Micelles memiliki karakter amfifilik, sehingga interaksi nonpolar dan kutub antara micelles dan
analytes terjadi.
4.3. Kromatografi lapisan tipis fase normal (NP-TLC)
NP-TLC adalah teknik yang kurang sering diterapkan untuk estimasi lipofilikitas. Berbeda
dengan teknik yang dibahas di atas, NP-TLC terkait dengan kromatografi adsorpsi, sehingga
berbeda molekuler
mekanisme retensi terlibat. Biasanya, fase seluler mengandung dua pelarut organik, kutub dan
non-kutub. Pelarut non-kutub, seperti benzena, cyclohexane, karbon tetrachloride atau toluena,
sangat beracun dan harus dihilangkan dari protokol analitis. Silica gel, Florisil® atau poliamida
adalah fase stasioner teladan yang digunakan dalam NP-TLC
Laporan mengenai parameter NP-TLC asam empedu dan turunan oxo-nya disajikan. Korelasi
antara parameter molekul (total luas permukaan kutub, berat molekul) dan data kromatografi
turunan asam empedu dengan penyerapan usus manusia yang ditentukan siliko, PPB,
permeabilitas kulit dan log BB [60]. Selanjutnya, dalam bioaktivitas yang ditentukan silico
(protein coupled receptor ligand, modulator saluran ion, inhibitor reseptor nuklir,
protease inhibitor) sangat tergantung pada deskriptor yang sama
Pendekatan RP-TLC dan NP-TLC dibandingkan sebagai alat potensial untuk estimasi
lipofilikitas untuk senyawa dengan kerangka phenanthrene.

4.4. Kromatografi lapisan tipis salting-out (SOTLC)

Garam anorganik adalah bahan yang cukup umum dari fase mobile dalam kromatografi cair.
Dalam kebanyakan kasus, mereka ditambahkan sebagai komponen penyangga untuk
menyesuaikan nilai pH solusi. Tje
garam anorganik pada konsentrasi rendah dapat bertindak mirip dengan reagen pasangan ion,
meningkatkan waktu retensi senyawa terionisasi. Di sisi lain, larutan garam anorganik berair
pada konsentrasi tinggi digunakan sebagai fase seluler di SOTLC.
Teori yang umum diterima mengasumsikan bahwa dalam kondisi ini, interaksi hidrofobik non-
spesifik mengatur mekanisme kromatografi
dapat diharapkan bahwa retensi solute dikaitkan dengan lipofilikitasnya. Namun, beberapa garam
anorganik dapat diterapkan sebagai pengubah fase seluler di antaranya amonium sulfat adalah
tambahan yang paling banyak digunakan di SOTLC (karena sifat pengasinnya yang kuat).
Sorben yang sangat kutub seperti gel silika, selulosa, atau aluminium oksida, umumnya
digunakan sebagai
fase stasioner
Beberapa sistem SOTLC, yang mengandung garam anorganik yang berbeda dan tiga jenis fase
stasioner: gel silika, pelat selulosa dan aluminium oksida dasar, dibandingkan sebagai alat
potensial untuk estimasi lipofilikitas antibiotik makrolida.
Korelasi antara konstanta retensi SOTLC dan penyerapan usus inhibitor angiotensin converting
enzim (ACE) dijelaskan oleh Odovic dan rekan kerja. Parameter area permukaan kutub topologis
(TPSA) dan RM0 digunakan untuk
Model QSAR yang diusulkan sebagai cara alternatif untuk prediksi penyerapan usus untuk
inhibitor enzim konversi angiotensin