The Role of Dimethylaminoethanol in Cosmetic Dermatology: Rachel Grossman

Am J Clin Dermatol 2005; 6 (1): 39-47
REVIEW ARTICLE 1175-0561/05/0001-0039/$34.95/0
© 2005 Adis Data Information BV. All rights reserved.
The Role of Dimethylaminoethanol in

Cosmetic Dermatology
Rachel Grossman
Johnson & Johnson Consumer Products Worldwide, Skillman, New Jersey, USA
Contents
Abstract . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39
1. Chemistry . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
2. Pharmacologic Actions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
2.1 Acetylcholine-Enhancing Activity of 2-Dimethylaminoethanol (DMAE) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
2.2 Anti-Inflammatory Activity of DMAE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
2.3 Antiaging Activity of DMAE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
3. Clinical Perspective in Dermatology . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3.1 Efficacy Studies of DMAE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3.2 Safety of Topical DMAE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
4. Potential Mechanism(s) of Action of DMAE: Evidence for the Role of Acetylcholine in the Skin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
4.1 Epidermis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
4.2 Dermis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
5. Potential Role of DMAE in Aging Skin: An Overview . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
6. Future Considerations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
7. Conclusions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
Abstract Skincare formulations for the improvement of aging skin are increasingly important consumer products.
Here, we review available data on one such agent – 2-dimethylaminoethanol (DMAE) or deanol – that has
recently been evaluated in a placebo-controlled trial. DMAE is an analog of the B vitamin choline and is a
precursor of acetylcholine. Although the role of acetylcholine as a neurotransmitter is well known, growing
evidence points to acetylcholine as a ubiquitous cytokine-like molecule that regulates basic cellular processes
such as proliferation, differentiation, locomotion, and secretion in a paracrine and autocrine fashion. Indeed, this
modulatory role may contribute to the cutaneous activity of DMAE.
In a randomized clinical study, 3% DMAE facial gel applied daily for 16 weeks has been shown to be safe and
efficacious (p < 0.05) in the mitigation of forehead lines and periorbital fine wrinkles, and in improving lip shape
and fullness and the overall appearance of aging skin. These effects did not regress during a 2-week cessation of
application. Beneficial trends (p > 0.05 but ≤ 0.1) were noted in the appearance of coarse wrinkles, under-eye
dark circles, nasolabial folds, sagging neck skin, and neck firmness. Application was found to be well tolerated,
with no differences in the incidence of erythema, peeling, dryness, itching, burning, or stinging between the
DMAE and placebo groups. An open-label extension of the trial showed that the long-term application of DMAE
gel for up to 1 year was associated with a good safety profile. The acute skin-firming effects of DMAE have been
confirmed by quantitative measures of cutaneous tensile strength. In vitro studies in peripheral blood lympho-
cytes indicate that DMAE is a moderately active anti-inflammatory agent. Although its mechanisms of action in
the skin remain to be elucidated, evidence suggests that the skin is an active site of acetylcholine synthesis,
storage, secretion, metabolism, and receptivity. Muscarinic acetylcholine receptors have been localized to
keratinocytes, melanocytes and dermal fibroblasts, whereas nicotinic acetylcholine receptors have been found in
40 Grossman
keratinocytes. The role of acetylcholine and the role of DMAE as a modulator of acetylcholine-mediated
functions in the skin remain to be elucidated.
Thus, the benefits of DMAE in dermatology include a potential anti-inflammatory effect and a documented
increase in skin firmness with possible improvement in underlying facial muscle tone. Studies are needed to
evaluate the relative efficacy of DMAE compared with other skin-care regimens (e.g., topical antioxidant
creams, α-hydroxy acids).
Deanol or 2-dimethylaminoethanol (DMAE) is a relatively new 1. Chemistry

skin-care ingredient that is gaining popularity as an antiwrinkle
and skin-firming agent. An analog of the B vitamin choline, DMAE is a simple amine base [C4H11NO/(CH3)2NCH2
DMAE is found naturally in high concentrations in salmon, ancho- CH2OH] with structural similarity to choline (figure 1). Consider-
vies and sardines, and is believed to contribute to the beneficial ing its alkalinity, pure DMAE is neutralized by acid to form
effects of these foods. Described as an ‘instant antiaging facelift’ DMAE salts that are used in various formulations. DMAE salts
and ‘wrinkle cure’, it is the latest entrant into the arena of skin have been formulated as oral tablets for studies of neurologic
rejuvenation products.[1] Although relatively new to dermatology, applications and as topical preparations for dermatologic applica-
the compound has a long history of investigation in the treatment tions.
of mood and hyperkinetic disorders,[2] enhancement of memory,[3]
and improvement in children with learning and behavior disor-
2. Pharmacologic Actions
ders.[4,5] These investigations were based on early reports of
DMAE as a precursor of choline and the cholinergic neurotrans-
mitter acetylcholine.[2,6] Originally marketed in the US for the Known pharmacologic actions of DMAE may be classified
treatment of hyperactivity in children, DMAE is no longer avail- under three major types of activity: acetylcholine-enhancing, anti-
able for that indication. However, it continues to be available as a inflammatory, and antiaging activity. These actions have generally
nutritional supplement, being used largely for memory enhance- not been specifically demonstrated in the skin and must remain
speculative at present. The role of DMAE as a cytokine modulator
ment and potential antiaging effects.
and regulator of cellular function, growth, and differentiation in
Recent evidence suggests a more ubiquitous or non-neuronal the skin also remains to be elucidated, although the identification
role for DMAE, since acetylcholine has been shown to act as an of the enzymatic machinery and receptor proteins for acetylcho-
autocrine and paracrine factor, regulating basic cellular functions line in this organ suggest the molecular existence of a framework
such as mitosis, differentiation, cell-cell contact, cytoskeletal or- for such actions (see section 4).
ganization, secretion, absorption, trophic and locomotor functions,
Dimethylaminoethanol (DMAE/deanol)
as well as barrier and immune functions.[7,8] Indeed, the history of
DMAE can be delineated along two lines of evidence or ideas: the HO CH2 CH2 N CH3
classic evidence of DMAE as a precursor of acetylcholine in the CH3

neuromuscular system, and the relatively newer evidence of ace- Choline
tylcholine as a local transmitter or cytokine in non-neuronal tis-

CH3
sues. Whereas the former has led to studies of neuromuscular
HO CH2 CH2 N CH3
applications, the latter is becoming important to dermatologic
CH3
investigations. This article reviews the experimental and clinical
Acetylcholine
evidence of DMAE activity in the skin and present thoughts on the
potential mechanisms of action of this compound in the skin. O CH3
Although much work remains to be done, available clinical data CH3 C O CH2 CH2 N CH3
support the efficacy and safety of DMAE as a skin-firming and CH3
antiwrinkle agent with potential utility in antiaging topical formu- Fig. 1. Chemical structure of 2-dimethylaminoethanol (DMAE): comparison
lations. with the structures of choline and acetylcholine.
© 2005 Adis Data Information BV. All rights reserved. Am J Clin Dermatol 2005; 6 (1)
Dimethylaminoethanol in Dermatology 41
2.1 Acetylcholine-Enhancing Activity of Table I. Effect of 2-dimethylaminoethanol (DMAE) on cytokine secretion in

2-Dimethylaminoethanol (DMAE) stimulated peripheral blood lymphocytes in vitro[12]
Cytokine DMAE IC50 (μg/mL)a
Evidence suggests that DMAE can increase choline concentra- IL-1α >1000
tions in the blood by inhibiting its metabolism in peripheral tissues IL-2 19
such as the kidney and liver.[9] In mice, intravenous administration IL-4 >1000
of DMAE has been shown to increase both the concentration and IL-6 450
the rate of turnover of free choline in the blood.[9] In this study,
IL-10 425
DMAE was administered intraperitoneally at a dose of 3 mmol/kg
IL-12 >1000
(267.3 mg/kg) and caused an increase in the concentration of
IFNγ >1000
choline as well as an inhibition of the oxidation and phosphoryl-
TNFα Stimulated
ation of [3H]methylcholine in the kidneys. In the liver DMAE
a The inhibitory constant for 50% inhibition (IC50) of cell proliferation
inhibited the rate of phosphorylation of [3H]methylcholine but did
by DMAE in this assay was 550 μg/mL.
not affect its oxidation or increase its level in this tissue. The direct
IFN = interferon; IL = interleukin; TNF = tumor necrosis factor.
addition of DMAE in vitro did not appear to affect the concentra-
tion of free choline or choline metabolism to phosphorylcholine in
the blood, suggesting that increases in serum choline were due to inhibit proliferation of and to exhibit stimulatory activity against
the inhibitory effects of DMAE in peripheral tissues and not due to tumor necrosis factor-α. No activity was documented against the
direct serum effects of DMAE. The accumulating choline can remaining cytokines tested (IL-1α, IL-4, IL-12 and interferon-γ).
conceivably feed the acetylcholine synthesis pathway in tissues The cutaneous anti-inflammatory activity of DMAE remains to be
containing choline acetyltransferase (ChAT), the enzyme required documented.
for catalyzing the conversion of choline to acetylcholine. The
acetylcholine content of brain tissue, for example, has been shown 2.3 Antiaging Activity of DMAE
to increase following intraperitoneal administration of 2.4 mmol/
kg (213.8 mg/kg) DMAE or 2.2 mmol/kg (196 mg/kg) of its In vitro studies show that DMAE decreases the extent of
acetamidobenzoate salt in rats.[10] Although the cutaneous influx protein crosslinking, a characteristic of cellular aging.[13] The
of choline or an increase in the levels of acetylcholine in skin increase in crosslinking of proteins may be due to the formation of
following topical application of DMAE have not yet been docu- hydroxyl free radicals, and DMAE is hypothesized to reduce such
mented, ChAT activity has been localized to the epidermis, indi- crosslinking by acting as a free-radical scavenger.[13] Indeed, elec-
cating that acetylcholine synthesis can occur in the skin.[11] As in tron spin resonance spectroscopic evidence demonstrates that
other muscles, acetylcholine is the neurotransmitter that signals DMAE is a free-radical scavenger[14,15] and that polymerization of
contraction of the facial muscles. Additional effects modulated via
bovine serum albumin induced by hydroxyl free-radical genera-
acetylcholine receptors in other skin components, such as kerati-
tion in vitro can be inhibited by DMAE.[13] An emerging concept
nocytes, melanocytes, dermal fibroblasts and endothelial cells,
in gerontology is a modification of the “free-radical theory of
may occur and are open to investigation.
aging” and posits that while oxygen free radicals are an inherent
and essential aspect of aerobic cellular metabolism, excessive
2.2 Anti-Inflammatory Activity of DMAE
formation of such (positive) radicals during aging can have dam-
DMAE appears to have moderate anti-inflammatory activity as aging effects, particularly at the cell membrane.[16] Antiaging
documented in a peripheral blood lymphocyte (PBL) assay.[12] therapies should therefore increase the number of electrons on the
Human PBLs were stimulated with phytohemagglutinin in vitro to inside of the plasma membrane that are available to scavenge the
induce the clonal expression and secretion of cytokines by T cells. hydroxyl free radicals and stabilize cell membranes. In addition to
The addition of DMAE to this assay system was shown to strongly being such a free-radical scavenger, DMAE has long been known
inhibit interleukin (IL)-2 secretion and to moderately inhibit IL-6 as a precursor of phosphatidylcholine, the primary phospholipid of
and IL-10 secretion by phytohemagglutinin-stimulated PBLs cell membranes. Thus, it may also serve to stabilize cell mem-
(table I). All three cytokines are important in the regulation of branes via phosphatidylcholine formation. Again, such mechan-
humoral immunity, antibody response and allergic reactions; IL-2 isms have not specifically been demonstrated in cutaneous cells,
can additionally mediate macrophage activation and delayed hy- and further investigation is warranted to explore the cutaneous
persensitivity reactions. DMAE was also shown to moderately pharmacology of DMAE.
42 Grossman
Vehicle
3. Clinical Perspective in Dermatology 4.0
3% DMAE gel
Various properties such as skin firming, lifting, and antiaging

have been attributed to DMAE. However, until recently, double-
blind, placebo-controlled trials were not available to back these 3.8
claims. Three recent reports have documented the efficacy of a 3%
Dermatologist grade
gel formulation of DMAE.[17-19] Two of these studies[17,18] have
further documented the safety of DMAE facial applications for up
to 1 year of use. 3.6
3.1 Efficacy Studies of DMAE
The efficacy of a 3% DMAE gel was shown recently in a 3.4
multicenter, double-blind, placebo-controlled study.[17] The study

†
included 156 patients between 35 and 60 years of age who were *
randomized to receive the DMAE gel or placebo gel for 16 weeks

3.2
followed by a 2-week period of regression evaluation. On a scale 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
of 0–9 (where 0 indicated none and 9 indicated severe), study Weeks of use
patients had a score of 3–6 for the overall appearance of aging skin Fig. 2. Clinician-rated overall appearance of aging skin (scale: 0 [none] to 9
at baseline, indicating moderate to moderately severe photodam- [severe]) for patients who applied 3% 2-dimethylaminoethanol (DMAE)
age. All patients were considered as candidates for daily use of facial gel (n = 105) vs the vehicle gel (n = 51) for 16 weeks.[17] * p < 0.05; †
p ≤ 0.1.
facial skin-care products such as tretinoin, α- or β-hydroxy acids,
and/or other products for photodamaged skin. However, all con-
confirmed the skin-firming ability of 3% DMAE gel.[18] Thirty-
comitant treatments for photoaging were prohibited during the
five patients entered the open extension study. No other photoag-
trial. Following 16 weeks of application, clinician-rated overall
ing treatments were permitted but patients were encouraged to use
global assessment of facial skin appearance was significantly
sunscreen. This study showed that the beneficial effects were
(p < 0.05) better among patients who received topical DMAE gel
maintained with no further statistical differences noted. Adverse
compared with those who received placebo applications (figure 2).
effects were limited to cutaneous effects only.[12,18] The incidence
Other parameters showing consistent and significant (p ≤ 0.05)
of erythema and irritation was reduced from baseline, suggesting
improvements with DMAE gel relative to placebo included the
appearance of forehead lines, periorbital fine wrinkles, lip thick- that irritation attenuated over time.[12] Thus, DMAE facial gel is
ness, and lip shape (figure 3; table II). Beneficial trends (p > 0.05 amenable for long-term use, with documented safety for up to 12
but ≤ 0.1) were noted in the appearance of coarse wrinkles, under- months of continuous use among patients with moderate to moder-
eye dark circles, sagging neck skin, and neck firmness. Instrumen- ately severe photoaged skin.
tal evaluation of skin moisturization was found to be better with With the exception of skin color and skin moisture content, all
active DMAE application than with vehicle at various time points evaluations of efficacy in the two studies described were subjec-
and relative to baseline values. Application of DMAE gel was tive evaluations. A third study sought to objectively quantify the
found to be safe, with no differences in the incidence of erythema, efficacy of DMAE gel, specifically in terms of the skin-firming
peeling, dryness, itching, burning or stinging between the DMAE ability or skin tensile effect of the agent. The study was a random-
and placebo groups. The overall incidence of adverse effects was ized, double-blind, split-face trial that compared a 3% DMAE gel
40% in the DMAE group and 47% in the placebo group. None of formulation with placebo vehicle.[19] The tensile properties of
these adverse effects was considered by the investigator as defi- facial skin were measured using three different methodologies –
nitely or probably related to the applications. No statistically sensorial assessment, measurements of skin distension under suc-
significant differences were noted between the active and vehicle tion, and measurements of shear-wave propagation. The first
groups. No evidence of rebound effect was noted during the 2- phase of the study was a pilot phase that included 8 volunteers,
week evaluation after cessation of application; the benefits of 26–53 years of age. The DMAE and placebo facial gels were
topical DMAE gel persisted after cessation of application. applied on each cheek and objective measurements were made
At the end of 16 weeks at one center, patients were eligible to after 10 minutes of such application. Although a trend toward
enter an open-label 8-month extension of the above study, which decreased (improved) skin distensibility was noted in the DMAE
group, wide interindividual variations precluded the drawing of DMAE in the regulation of paracrine and autocrine functions of
any consistent conclusion. Therefore, the researchers designed a acetylcholine in this non-neuronal tissue? Indeed, what is the
second phase of study, during which 30 healthy women, 36–49 evidence for the existence of such a cytokine system in the skin?
years of age, were enrolled and objectively evaluated 45 minutes The simple answer to these questions is that much of this remains
after applying a pea-sized amount of 3% DMAE or placebo gel.
to be elucidated. DMAE-induced increases in cutaneous acetyl-
The DMAE formulation was found to produce an 11% decrease in
choline levels remain to be documented. Increased acetylcholine at
maximum resonance running time measurements (RRTM), a mea-
neuromuscular synaptic junctions may be the driving force behind
sure indicating significant increase (p < 0.05) in the firmness of the
skin compared with the placebo gel formulation.[19] Mechanical increased facial muscle tensile strength and increased firmness of
anisotropy, which has previously been shown to increase progres- the skin and should be investigated in further studies. However,
sively with age,[20] was also shown to decrease following DMAE
application.[19] The use of DMAE also produced a small (4%)
albeit statistically insignificant decrease in multidirectional
RRTM, a measure of the average tensile strength of the skin. No
change was noted in the minimum RRTM, a measure of tension
along resting skin tension lines. Data also indicated that the skin-
firming effect of DMAE gel was restricted to the area of skin with
loose tensile characteristics. In other words, DMAE appears to
firm facial skin in areas where it is needed most. The effect of
DMAE on the tensile strength of skin could not be attributed to
changes in hydration-related viscoelastic properties of the stratum
corneum. In fact, hydration and lipid measurements were docu- Baseline 16 weeks
mented to be similar for both DMAE and placebo gel formula-
tions.[19]
Taken together, data from these three studies document the
skin-firming ability of DMAE gel. From a clinical and aesthetic
standpoint, potential benefits of DMAE application include im-
provements in forehead lines, periorbital fine wrinkles, lip thick-
ness (fullness) and shape, and overall appearance of facial skin
after 4 weeks of application.
3.2 Safety of Topical DMAE
In the clinical trials described in section 3.1, DMAE gel (3%) Baseline 16 weeks
was found to be safe for up to about 1 year of continuous

application. No adverse events were related to the DMAE gel. In
human modified repeated-insult patch tests (sensitization), 3%
DMAE facial gel did not elicit any sensitization (n = 382).[21]
Thus, 3% DMAE gel appears to have a good safety profile when
used topically on a daily basis for up to 1 year, with no significant
adverse events.
4. Potential Mechanism(s) of Action of DMAE:

Evidence for the Role of Acetylcholine in the Skin
Why should DMAE have any effect on the skin? How does it Baseline 16 weeks
bring about its skin-firming effects? Does it do so via modulation Fig. 3. Representative photographs of three patients before (left) and after
of the well-understood classic system of neurotransmitter (acetyl- (right) a 16-week application of 3% 2-dimethylaminoethanol (DMAE) facial
choline) regulation of facial muscle contraction? Is there a role for gel.[17]
44 Grossman
Table II. Statistical differencesa between 2-dimethylaminoethanol (DMAE) [n = 105] and placebo (n = 51) groups in secondary efficacy parameters
following 16 weeks of 3% topical DMAE facial gel application in a double-blind, placebo-controlled trial[17]
Parameter Week 2 Week 4 Week 6 Week 12 Week 16 Week 18 (2-week
regression phase)
Forehead lines p < 0.068 p < 0.023 p < 0.012 p < 0.068 p < 0.012
Coarse wrinkles p < 0.095 p < 0.077
Periorbital fine wrinkles p < 0.0230
Under-eye dark circles p < 0.08
Diminished nasolabial fold p < 0.059
Increased lip thickness p < 0.0340 p < 0.058 p < 0.021 p < 0.130 p < 0.023 p < 0.024
Increased lip shape p < 0.05 p < 0.05 p < 0.050 p < 0.073
Improved sagging neck p < 0.088
skin
Improved neck firmness p < 0.092
a Values of p ≤ 0.05 appear in bold and indicate statistically significant differences in the DMAE group compared with the placebo group; values of
p > 0.05 but ≤ 0.1 indicate trends in improvement with DMAE facial gel application compared with placebo gel application.
the lack of change in resting skin tension lines in the study of the Muscarinic receptors are transmembrane glycoprotein molecules
tensile properties of skin following DMAE gel application de- with highly conserved coding sequences.[26] Activation of these
scribed in section 3.1[19] indicates that mechanisms other than receptors following acetylcholine binding is responsible for bring-
classic neurotransmitter regulation of facial muscle contraction ing about metabolic changes in target cells and in mediating signal
contribute to the increased firmness and other benefits noted with transduction by coupling with G proteins and altering the levels of
DMAE treatment. second messengers. Overall, five molecular subtypes of muscarin-
There is growing evidence for the role of a non-neuronal ic receptors are known.[27,28] These include the m1 through m5
signaling network or communication system in human skin in receptors. The odd-numbered muscarinic receptors – m1, m3 and
which acetylcholine acts as a local hormone or cytokine.[22,23] m5 – activate phospholipase C, which triggers the release of the
Enzymes and receptors involved in acetylcholine synthesis, cat- second messenger inositol 1,4,5-triphosphate, resulting in the mo-
abolism and action have been documented in various layers of the bilization of intracellular calcium (Cai). The even-numbered mus-
skin. It appears highly likely that DMAE mediates its benefits via carinic receptors – m2 and m4 – inhibit adenyl cyclase, thereby
this cholinergic system. increasing intracellular cyclic adenosine monophosphate. Kerati-
nocytes express a heterogeneous population of muscarinic acetyl-
4.1 Epidermis choline receptors (mAChRs).[29] Receptor subtypes m1 and m3
have been identified in the granular and basal cells, respectively,
Acetylcholine appears to work in the epidermis as a local while both m4 and m5 receptors have been shown to be present in
hormone with autocrine and paracrine functions. Both ChAT the prickle cell layer.[30] Confocal microscopy data indicate that
(synthesizing enzyme) and acetylcholinesterase (metabolizing these receptors are present on the keratinocyte cell surface[29] and
enzyme) activities have been immunohistochemically visualized accumulate at sites of cell-to-cell contact.[30] The profile of
near the nuclei and in or near cell membranes, respectively.[11] mAChRs changes during different stages of keratinocyte turn-
Further, newly synthesized acetylcholine has been detected in cell over,[30] indicating that these muscarinic receptors are involved in
homogenates and culture supernatants.[24] More recently, human the intrinsic changes of epidermal growth and differentiation.
keratinocytes in culture were shown to express a Na+-dependent, Human keratinocytes also express nicotinic acetylcholine re-
saturable, high-affinity choline transporter system similar to that ceptors (nAChRs). These receptors are acetylcholine-gated ion
reported in intestinal epithelial cells and endothelial cells of the channels or ionotropic receptors, mediating the influx of Na+ and
blood-brain barrier.[25] Thus, acetylcholine can be synthesized, Ca2+ ions and the efflux of K+ ions.[31,32] Activation of nicotinic
stored, secreted and metabolized by human epidermal keratino- receptors results in the release of a variety of second and third
cytes.[11] messengers such as Ca2+, nitric oxide, prostacyclin, cytokines, and
Besides the enzymatic machinery, the epidermis also contains growth factors. The receptor channels are composed of α- and β-
both muscarinic and nicotinic receptor types for acetylcholine. subunits. At least nine different α-subunits, named α2 to α10, and
three β-subunits, named β2 to β4, have been identified in non- variable between individuals, depending on age, lifestyle, hormo-
muscle cells. The differences in subunit composition determine nal status and genetic predisposition.
the functional characteristics of the channel.[32] Activation of UV irradiation results in the photochemical generation of reac-
nAChRs regulates cell differentiation[33] and cell adhesion and tive oxygen species such as superoxide anion, peroxide and singlet
motility.[31] Specifically, activation of α7 and α9 nAChRs ex- oxygen that cause deleterious chemical modifications of cellular
pressed at the latest stage of keratinocyte differentiation in the components such as DNA, proteins and lipids.[41] Additionally, the
epidermis causes an increase in filaggrin, a prohumectant sub- oxidative stress induces signal transduction pathways that mediate
stance that may be responsible for skin softness.[34] It will be damage to connective tissue, largely because of an increase in the
interesting to evaluate the role of these receptors and of acetylcho- expression of the nuclear transcription factor, activator protein
line in the manifestation of skin appearance, particularly during factor-1 (AP-1), which stimulates transcription of genes for matrix
aging and following application of DMAE. degrading enzymes such as metalloproteinases. Consequently,
Normal human skin melanocytes express m1–5 subtypes of photoaging results in a degradation of skin collagen. In addition,
mAChRs on their surface membranes.[35] Activation of these re- ongoing collagen production is impaired by downregulation of
ceptors has been shown to result in a transient mobilization of type I and type II procollagen gene expression. Impairment of
Cai.[35] collagen synthesis also occurs during chronologic aging as a result
of decreasing numbers of fibroblasts and their capacity to produce
4.2 Dermis type I procollagen in aging skin compared with young skin.[42]
Photoaged skin shows an accumulation of degraded and disorga-
In the dermis, human skin fibroblasts have been shown to nized collagen fibrils and is characterized by the appearance of
express m2, m4 and m5 receptor subtypes.[36] Acetylcholine action wrinkles, mottled pigmentation, rough skin, and loss of skin
via these receptors has also been shown to be mediated following tone.[43] Sun-protected aged skin appears thinner, more evenly
mobilization of Cai stores.[36] Additionally, immunohistochemical pigmented, laxer, and more finely lined.[41] Elastin fibrils are also
studies have shown ChAT activity in the endothelial cells of altered during aging, with decreases in protected aged skin and
dermal blood cells.[37] Such endothelial cells express a vesicular increases in photodamaged skin, with the increase being due to
acetylcholine transporter system in vitro, indicating a developed abnormal elastin.[44] Much like photoaging and chronologic aging,
endothelial cholinergic system in the dermal vasculature. climacteric aging has been shown to be characterized by increased
Overall, these data reflect an exquisite control of cellular pro- skin distensibility and viscosity and a decrease in elasticity.[45]
cesses by a single molecule – acetylcholine. The molecule appears Considering the overall changes in aging skin, any formulation
to regulate different biologic processes by differentially activating developed to improve its appearance should provide some combi-
cholinergic receptors at specific stages of growth and differentia- nation of the following benefits:
tion.[38] It is conceivable that DMAE mediates its cutaneous ef-
• free-radical scavenging capacity;
fects, at least partially, via increasing acetylcholine levels and
modulating acetylcholine receptors much like endogenous steroid
• decrease in oxidative stress;
hormones and retinoids[39] or growth factors.[40] Depending on the • inhibition of AP-1 expression;
timing and specificity of receptor interaction, multiple effects on • inhibition of metalloproteinase induction;
skin strength, elasticity, and the appearance of wrinkles and fine • inhibition of collagen degradation and/or promotion of collagen
lines, could be affected. synthesis, which should result in an increase in skin elasticity
and skin thickness or firmness; and
5. Potential Role of DMAE in Aging Skin: • decrease in appearance of coarse and fine wrinkles or lines.
An Overview Currently, the only US FDA-approved product for
photodamaged skin is topical tretinoin. Topical tretinoin has been
The aging skin is a complex and dynamic system that under- approved as an adjunctive agent for the mitigation of fine facial
goes chronologic aging as well as photoaging. The latter is caused wrinkles (0.02% tretinoin cream, 0.05% tretinoin emollient cream)
by environmental effects, specifically UV irradiation, and super- and for the mitigation of mottled pigmentation and rough skin in
imposes on changes of chronologic aging. In addition, climacteric patients using comprehensive skin-care and sun-avoidance pro-
aging caused by hormonal changes in postmenopausal women has grams. Besides retinoids, other agents used in skin-rejuvenation
also been recognized and may additionally impact the skin. Thus, programs include α-hydroxy acids and antioxidants (e.g. vitamin
the manifestations and appearance of facial skin can be highly C ester).[46,47] In addition, nonpharmacologic procedures such as
46 Grossman
microdermabrasion, α-hydroxy acid peels, and laser resurfacing needed to compare DMAE with other anti-aging formulations/
are common practices aimed at rejuvenating photodamaged skin. therapies, including head-to-head comparisons and combination
For improvement in frown lines associated with aging, Botox® 1 regimens that may have the potential for synergistic efficacy.
Cosmetic (Allergan, Inc.) – a sterile, vacuum-dried, purified botu-
linum toxin type A neurotoxin complex – received FDA approval 7. Conclusions
in 2002.[24] It is indicated in the US for the temporary improvement
in the appearance of moderate to severe glabellar lines associated DMAE is a relatively new skin-care ingredient. Clinical data
with corrugator and/or procerus muscle activity in adult patients regarding its efficacy and safety in improving the appearance of
≥65 years of age. Improvement in facial appearance following aged facial skin are emerging and show that the use of facial
botulinum toxin injection occurs because of the blockade of neuro- DMAE gel can improve skin firmness and reduce wrinkles safely
muscular transmission (acetylcholine) to the facial muscles in- at a concentration of 3%. The exact mechanism(s) by which
volved in frown formation. Since reinnervation of muscles or DMAE mediates these effects on the skin has not been clarified.
development of extrajunctional acetylcholine receptors may occur Indeed, it appears that it may do so via multiple actions. Thus, for
with time, the effects of botulinum toxin can slowly reverse. Thus, example and similar to neuromuscular tissue, it may improve
treatment with Botox® Cosmetic requires intramuscular injections muscle tone by increasing the supply of acetylcholine at the
at repeated intervals by skilled healthcare providers to maintain its neuromuscular junction. Additionally, it may mediate some of its
effect and the search for more easily used, long-lasting skin-care actions, particularly proliferation and differentiation, via increas-
products continues. ing cutaneous acetylcholine availability for paracrine and
A novel agent, DMAE has been described here as a safe and autocrine functions. There is now considerable evidence for the
efficacious agent for the mitigation of forehead lines and peri- skin as an active site of acetylcholine synthesis, metabolism and
orbital fine wrinkles, improved lip shape and fullness, and overall receptivity. Other potential mechanisms of action of DMAE in the
improvement in the appearance of aging skin. These effects have skin include free-radical removal, inhibition of age-associated
been documented in a randomized, placebo-controlled trial of 16 increases in protein crosslinking, membrane stabilization, and
weeks following daily application of a 3% facial gel formula- anti-inflammation. More studies are needed to elucidate the ac-
tion.[17] Further, long-term safety has been documented in an open- tions of DMAE in the skin and to assess its clinical benefits
label extension of this study for a total treatment duration of 1 relative to other available antiwrinkle and/or anti-photoaging treat-
year.[18] The acute skin-firming effects of 3% DMAE gel have ments. Because of its multiple actions, DMAE may also have
been confirmed by quantitative measures of cutaneous tensile utility in combination regimens that can provide a more compre-
effect.[19] The benefits of topical DMAE gel include lack of hensive approach to skin care for aging skin.
sensitization,[21] anti-inflammatory potential,[12] and overall safe-
ty.[17,18] Further, DMAE may mediate its benefits via multiple Acknowledgments
effects, including an increase in skin firmness and possible im-
provement in underlying facial muscle tone and anti-inflammatory Dr Rachel Grossman is an employee of Johnson & Johnson and receives
effects. Other modes of action that remain to be investigated compensation, which includes common stock. Dr Grossman is also in private
practice and has no other conflicts of interest that are directly relevant to the
include prevention of free-radical damage, compensation of age-
contents of this review.
related loss of acetylcholine receptors, autocrine and paracrine
modulation of local cytokines, and regulation of growth, differ-
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El papel del dimetilaminoetanol en la
dermatología cosmética
Raquel Grosman
Johnson & Johnson Consumer Products Worldwide, Skillman, Nueva Jersey, EE. UU.
Contenido
Resumen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39 1.
Química . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
2. Acciones farmacológicas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
2.1 Actividad potenciadora de la acetilcolina del 2-dimetilaminoetanol (DMAE) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
2.2 Actividad antiinflamatoria de DMAE. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
2.3 Actividad antienvejecimiento de DMAE. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
3. Perspectiva Clínica en Dermatología. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3.1 Estudios de eficacia de DMAE. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
3.2 Seguridad del DMAE tópico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
4. Mecanismo(s) potencial(es) de acción de DMAE: Evidencia del papel de la acetilcolina en la piel. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
4.1 Epidermis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
4.2 Dermis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
5. Papel potencial de DMAE en el envejecimiento de la piel: una descripción general. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
6. Consideraciones futuras. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
7. Conclusiones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46
Resumen Las formulaciones para el cuidado de la piel para mejorar la piel envejecida son productos de consumo cada vez más
importantes. Aquí revisamos los datos disponibles sobre uno de esos agentes, el 2-dimetilaminoetanol (DMAE) o deanol, que
se evaluó recientemente en un ensayo controlado con placebo. DMAE es un análogo de la vitamina B colina y es un precursor
de la acetilcolina. Aunque el papel de la acetilcolina como neurotransmisor es bien conocido, la creciente evidencia apunta a
la acetilcolina como una molécula ubicua similar a una citocina que regula procesos celulares básicos como la proliferación,
diferenciación, locomoción y secreción de forma paracrina y autocrina. De hecho, este papel modulador puede contribuir a la
actividad cutánea de DMAE.
En un estudio clínico aleatorizado, se demostró que el gel facial DMAE al 3% aplicado diariamente durante 16 semanas es
seguro y eficaz (p < 0,05) en la mitigación de las líneas de la frente y las arrugas finas periorbitarias, y en la mejora de la forma
y el volumen de los labios y el estado general. apariencia de la piel envejecida. Estos efectos no retrocedieron durante un cese
de aplicación de 2 semanas. Tendencias beneficiosas (p > 0,05 pero≤0.1) se notaron en la aparición de arrugas gruesas, ojeras
debajo de los ojos, pliegues nasolabiales, flacidez de la piel del cuello y firmeza del cuello. Se encontró que la aplicación fue
bien tolerada, sin diferencias en la incidencia de eritema, descamación, sequedad, picazón, ardor o escozor entre los grupos
de DMAE y placebo. Una extensión de etiqueta abierta del ensayo mostró que la aplicación a largo plazo de gel DMAE por
hasta 1 año se asoció con un buen perfil de seguridad. Los efectos reafirmantes de la piel agudos de DMAE han sido
confirmados por medidas cuantitativas de resistencia a la tracción cutánea.in vitrolos estudios en linfocitos de sangre
periférica indican que DMAE es un agente antiinflamatorio moderadamente activo. Aunque sus mecanismos de acción en la
piel quedan por dilucidar, la evidencia sugiere que la piel es un sitio activo de síntesis, almacenamiento, secreción,
metabolismo y receptividad de la acetilcolina. Los receptores muscarínicos de acetilcolina se han localizado en
queratinocitos, melanocitos y fibroblastos dérmicos, mientras que los receptores nicotínicos de acetilcolina se han
encontrado en
40
queratinocitos. El papel de la acetilcolina y el papel de DMAE como modulador de las funciones mediadas por acetilcolina
en la piel quedan por dilucidar.
Por lo tanto, los beneficios de DMAE en dermatología incluyen un efecto antiinflamatorio potencial y un aumento
documentado en la firmeza de la piel con una posible mejora en el tono muscular facial subyacente. Se necesitan estudios
para evaluar la eficacia relativa de DMAE en comparación con otros regímenes para el cuidado de la piel (p. ej., cremas
tópicas antioxidantes, α-hidroxiácidos).
El deanol o 2-dimetilaminoetanol (DMAE) es un ingrediente relativamente nuevo 1. Química

para el cuidado de la piel que está ganando popularidad como agente antiarrugas y
reafirmante de la piel. Un análogo de la vitamina B colina, DMAE se encuentra

DMAE es una base de amina simple [C4H11NO/(CH3)2NCH2
naturalmente en altas concentraciones en el salmón, las anchoas y las sardinas, y se CH2OH] con similitud estructural a la colina (figura 1). Teniendo en cuenta su
cree que contribuye a los efectos beneficiosos de estos alimentos. Descrito como un alcalinidad, el DMAE puro se neutraliza con ácido para formar sales de DMAE
'estiramiento facial antienvejecimiento instantáneo' y 'cura antiarrugas', es el último
que se utilizan en diversas formulaciones. Las sales de DMAE se han
participante en el campo de los productos para el rejuvenecimiento de la piel.[1]
formulado como tabletas orales para estudios de aplicaciones neurológicas y
Aunque es relativamente nuevo para la dermatología, el compuesto tiene una larga
como preparaciones tópicas para aplicaciones dermatológicas.
historia de investigación en el tratamiento de los trastornos hipercinéticos y del
estado de ánimo.[2]mejora de la memoria,[3]
y mejora en niños con trastornos del aprendizaje y del

2. Acciones farmacológicas
comportamiento.[4,5] Estas investigaciones se basaron en los primeros
informes de DMAE como precursor de la colina y el neurotransmisor
Las acciones farmacológicas conocidas de DMAE se pueden clasificar
colinérgico acetilcolina.[2,6] Comercializado originalmente en los EE. UU.
en tres tipos principales de actividad: actividad potenciadora de la
para el tratamiento de la hiperactividad en niños, el DMAE ya no está
acetilcolina, antiinflamatoria y antienvejecimiento. Estas acciones
disponible para esa indicación. Sin embargo, sigue estando disponible
generalmente no se han demostrado específicamente en la piel y deben
como suplemento nutricional y se usa principalmente para mejorar la
seguir siendo especulativas en la actualidad. El papel de DMAE como
memoria y posibles efectos antienvejecimiento.
modulador de citocinas y regulador de la función, el crecimiento y la
Evidencia reciente sugiere un papel más ubicuo o no neuronal de
diferenciación celular en la piel también queda por dilucidar, aunque la
DMAE, ya que se ha demostrado que la acetilcolina actúa como un identificación de la maquinaria enzimática y las proteínas receptoras de
factor autocrino y paracrino, regulando funciones celulares básicas acetilcolina en este órgano sugieren la existencia molecular de un marco
como la mitosis, diferenciación, contacto célula-célula, organización del para dichas acciones (ver sección 4).
citoesqueleto, secreción, absorción, funciones tróficas y locomotoras,
Dimetilaminoetanol (DMAE/deanol)
así como funciones de barrera e inmunitarias.[7,8]De hecho, la historia de
DMAE se puede delinear a lo largo de dos líneas de evidencia o ideas: la HO CH2 CH2 norte CH3
evidencia clásica de DMAE como un precursor de la acetilcolina en el CH3

sistema neuromuscular, y la evidencia relativamente más reciente de la colina
acetilcolina como un transmisor local o citoquina en tejidos no

CH3
neuronales. . Mientras que el primero ha dado lugar a estudios de
HO CH2 CH2 norte CH3
aplicaciones neuromusculares, el segundo se está volviendo importante
CH3
para las investigaciones dermatológicas. Este artículo revisa la
acetilcolina
evidencia experimental y clínica de la actividad de DMAE en la piel y
presenta ideas sobre los posibles mecanismos de acción de este O CH3
compuesto en la piel. Aunque queda mucho trabajo por hacer, los datos CH3 C O CH2 CH2 norte CH3
clínicos disponibles respaldan la eficacia y seguridad de DMAE como CH3
agente reafirmante de la piel y antiarrugas con utilidad potencial en Figura 1.Estructura química del 2-dimetilaminoetanol (DMAE): comparación
formulaciones tópicas antienvejecimiento. con las estructuras de la colina y la acetilcolina.
©2005 Información de datos de Adis BV. Reservados todos los derechos. Am J Clin Dermatol 2005; 6 (1)
Dimetilaminoetanol en Dermatología 41
2.1 Actividad potenciadora de la acetilcolina Tabla I.Efecto del 2-dimetilaminoetanol (DMAE) sobre la secreción de citoquinas
en linfocitos de sangre periférica estimuladosin vitro[12]
del 2-dimetilaminoetanol (DMAE)
citocina CI DMAE50(μg/mL)un
La evidencia sugiere que DMAE puede aumentar las concentraciones
IL-1α > 1000
de colina en la sangre al inhibir su metabolismo en tejidos periféricos
IL-2 19
como el riñón y el hígado.[9]En ratones, se ha demostrado que la
IL-4 > 1000
administración intravenosa de DMAE aumenta tanto la concentración
IL-6 450
como la tasa de recambio de colina libre en la sangre.[9]En este estudio,
IL-10 425
se administró DMAE por vía intraperitoneal a una dosis de 3 mmol/kg
IL-12 > 1000
(267,3 mg/kg) y provocó un aumento en la concentración de colina, así
como una inhibición de la oxidación y fosforilación de [3H]metilcolina en IFNγ > 1000
los riñones. En el hígado, DMAE inhibió la tasa de fosforilación de TNFa estimulado

a La constante inhibitoria para una inhibición del 50% (IC 50) de proliferación celular
[3H]metilcolina pero no afectó su oxidación ni aumentó su nivel en este
por DMAE en este ensayo fue de 550 μg/mL.
tejido. La adición directa de DMAEin vitrono pareció afectar la
IFN=interferón;ILLINOIS=interleucina;TNF=factor de necrosis tumoral.
concentración de colina libre o el metabolismo de la colina a
fosforilcolina en la sangre, lo que sugiere que los aumentos en la colina
sérica se debieron a los efectos inhibitorios de DMAE en los tejidos inhibir la proliferación y exhibir actividad estimulante contra el
periféricos y no a los efectos séricos directos de DMAE. La colina factor de necrosis tumoral-α. No se documentó actividad frente
acumulada posiblemente puede alimentar la vía de síntesis de acetilcolina a las restantes citocinas analizadas (IL-1α, IL-4, IL-12 e
en tejidos que contienen colina acetiltransferasa (ChAT), la enzima interferón-γ). Queda por documentar la actividad
necesaria para catalizar la conversión de colina en acetilcolina. Se ha antiinflamatoria cutánea del DMAE.
demostrado que el contenido de acetilcolina del tejido cerebral, por
ejemplo, aumenta después de la administración intraperitoneal de 2,4 2.3 Actividad antienvejecimiento de DMAE
mmol/kg (213,8 mg/kg) de DMAE o 2,2 mmol/kg (196 mg/kg) de su sal de
acetamidobenzoato en ratas.[10]Aunque aún no se ha documentado la in vitrolos estudios muestran que DMAE disminuye el grado de
entrada cutánea de colina o un aumento en los niveles de acetilcolina en entrecruzamiento de proteínas, una característica del envejecimiento celular.[13] El
la piel después de la aplicación tópica de DMAE, la actividad de ChAT se
aumento en el entrecruzamiento de las proteínas puede deberse a la formación de
ha localizado en la epidermis, lo que indica que la síntesis de acetilcolina
radicales libres de hidroxilo, y se supone que el DMAE reduce dicho
puede ocurrir en la piel.[11]Como en otros músculos, la acetilcolina es el
entrecruzamiento al actuar como eliminador de radicales libres.[13]De hecho, la
neurotransmisor que señala la contracción de los músculos faciales.
evidencia espectroscópica de resonancia de espín de electrones demuestra que
Pueden ocurrir efectos adicionales modulados a través de los receptores
DMAE es un eliminador de radicales libres.[14,15]y que la polimerización de la
de acetilcolina en otros componentes de la piel, como queratinocitos,
albúmina sérica bovina inducida por la generación de radicales libres de hidroxiloin
melanocitos, fibroblastos dérmicos y células endoteliales, y están
vitropuede ser inhibido por DMAE.[13]Un concepto emergente en gerontología es una
abiertos a investigación.
modificación de la "teoría de los radicales libres del envejecimiento" y postula que,
si bien los radicales libres de oxígeno son un aspecto inherente y esencial del
metabolismo celular aeróbico, la formación excesiva de tales radicales (positivos)

2.2 Actividad antiinflamatoria de DMAE
durante el envejecimiento puede tener efectos dañinos. , particularmente en la
DMAE parece tener una actividad antiinflamatoria moderada como membrana celular.[dieciséis] Por lo tanto, las terapias antienvejecimiento deberían
se documenta en un ensayo de linfocitos de sangre periférica (PBL).[12] aumentar la cantidad de electrones en el interior de la membrana plasmática que
Los PBL humanos fueron estimulados con fitohemaglutininain vitropara están disponibles para eliminar los radicales libres de hidroxilo y estabilizar las
inducir la expresión clonal y la secreción de citoquinas por las células T. Se membranas celulares. Además de ser un eliminador de radicales libres, el DMAE se
demostró que la adición de DMAE a este sistema de ensayo inhibía conoce desde hace mucho tiempo como un precursor de la fosfatidilcolina, el
fuertemente la secreción de interleucina (IL)-2 e inhibía moderadamente la fosfolípido principal de las membranas celulares. Por lo tanto, también puede servir
secreción de IL-6 e IL-10 por PBL estimulados con fitohemaglutinina (tabla I). para estabilizar las membranas celulares mediante la formación de fosfatidilcolina.
Las tres citocinas son importantes en la regulación de la inmunidad humoral, Nuevamente, dichos mecanismos no se han demostrado específicamente en células
la respuesta de anticuerpos y las reacciones alérgicas; La IL-2 también puede cutáneas, y se justifica una mayor investigación para explorar la farmacología
mediar en la activación de los macrófagos y en las reacciones de cutánea de DMAE.
hipersensibilidad retardada. También se demostró que DMAE moderadamente
42 Hombre bruto
Vehículo
3. Perspectiva Clínica en Dermatología 4.0
Gel de DMAE al 3%
Se han atribuido al DMAE varias propiedades como reafirmante de la

piel, reafirmante y antienvejecimiento. Sin embargo, hasta hace poco
tiempo, los ensayos doble ciego controlados por placebo no estaban 3.8
Gradodermatólogo
disponibles para respaldar estas afirmaciones. Tres informes recientes han
documentado la eficacia de una formulación de gel al 3% de DMAE. [17-19]Dos
de estos estudios [17,18]han documentado aún más la seguridad de las
3.6
aplicaciones faciales de DMAE hasta por 1 año de uso.
3.1 Estudios de eficacia de DMAE
La eficacia de un gel de DMAE al 3 % se demostró recientemente en un 3.4

estudio multicéntrico, doble ciego, controlado con placebo.[17]El estudio
† *
incluyó a 156 pacientes entre 35 y 60 años de edad que fueron
aleatorizados para recibir gel de DMAE o gel de placebo durante 16
semanas seguido de un período de evaluación de regresión de 2 3.2
0 2 4 6 8 10 12 14 dieciséis 18
semanas. En una escala de 0 a 9 (donde 0 indica ninguno y 9 indica
Semanas de uso
grave), los pacientes del estudio obtuvieron una puntuación de 3 a 6 para Figura 2.Apariencia general calificada por el médico de la piel envejecida (escala: 0
la apariencia general de la piel envejecida al inicio del estudio, lo que [ninguno] a 9 [grave]) para pacientes que aplicaron gel facial de 2-
indica un fotodaño de moderado a moderadamente grave. Todos los dimetilaminoetanol (DMAE) al 3 % (n = 105) frente al gel vehículo (n = 51) para 16
pacientes fueron considerados candidatos para el uso diario de semanas[17]* p < 0,05; † pag≤0.1.
productos para el cuidado de la piel del rostro como tretinoína, α- o β-

confirmó la capacidad reafirmante de la piel del gel DMAE al 3%. [18]Treinta
hidroxiácidos y/u otros productos para la piel fotodañada. Sin embargo,
y cinco pacientes entraron en el estudio de extensión abierto. No se
durante el ensayo se prohibieron todos los tratamientos concomitantes
permitieron otros tratamientos de fotoenvejecimiento, pero se animó a los
para el fotoenvejecimiento. Después de 16 semanas de aplicación, la
pacientes a usar protector solar. Este estudio mostró que los efectos
evaluación global general calificada por el médico de la apariencia de la
piel del rostro fue significativamente (p < 0. beneficiosos se mantuvieron sin observarse más diferencias estadísticas.
Otros parámetros que muestran consistente y significativa (p≤0,05) las Los efectos adversos se limitaron únicamente a los efectos
mejoras con gel de DMAE en relación con el placebo incluyeron la aparición de cutáneos.[12,18] La incidencia de eritema e irritación se redujo desde el
líneas en la frente, arrugas finas periorbitales, grosor y forma de los labios inicio, lo que sugiere que la irritación se atenuó con el tiempo. [12]Por lo
(figura 3; tabla II). Tendencias beneficiosas (p > 0,05 pero≤0.1) se observaron tanto, el gel facial DMAE es apto para uso a largo plazo, con seguridad
en la aparición de arrugas gruesas, ojeras, piel del cuello flácida y firmeza del documentada de hasta 12 meses de uso continuo entre pacientes con piel
cuello. Se encontró que la evaluación instrumental de la hidratación de la piel fotoenvejecida de moderada a moderadamente grave.
era mejor con la aplicación activa de DMAE que con el vehículo en varios Con la excepción del color de la piel y el contenido de humedad de la
momentos y en relación con los valores de referencia. Se encontró que la piel, todas las evaluaciones de eficacia en los dos estudios descritos
aplicación de gel DMAE era segura, sin diferencias en la incidencia de eritema, fueron evaluaciones subjetivas. Un tercer estudio buscó cuantificar
descamación, sequedad, picazón, ardor o escozor entre los grupos de DMAE y objetivamente la eficacia del gel DMAE, específicamente en términos de
placebo. La incidencia global de efectos adversos fue del 40 % en el grupo de la capacidad reafirmante de la piel o el efecto tensor de la piel del agente.
DMAE y del 47 % en el grupo de placebo. El investigador consideró que El estudio fue un ensayo aleatorizado, doble ciego y de cara dividida que
ninguno de estos efectos adversos estaba definitivamente o probablemente comparó una formulación de gel de DMAE al 3 % con un vehículo de
relacionado con las aplicaciones. No se observaron diferencias placebo.[19]Las propiedades de tracción de la piel del rostro se midieron
estadísticamente significativas entre los grupos activo y vehículo. No se utilizando tres metodologías diferentes: evaluación sensorial, medidas de
observó evidencia de efecto de rebote durante la evaluación de 2 semanas distensión de la piel bajo succión y medidas de propagación de ondas de
después de suspender la aplicación; los beneficios del gel de DMAE tópico corte. La primera fase del estudio fue una fase piloto que incluyó a 8
persistieron después del cese de la aplicación. voluntarios, de 26 a 53 años de edad. Se aplicaron los geles faciales
DMAE y placebo en cada mejilla y se realizaron mediciones objetivas a
Al final de las 16 semanas en un centro, los pacientes eran elegibles para
los 10 minutos de dicha aplicación. Aunque se notó una tendencia hacia
participar en una extensión abierta de 8 meses del estudio anterior, que una disminución (mejora) de la distensibilidad de la piel en el DMAE
grupo, amplias variaciones interindividuales impidieron sacar cualquier ¿DMAE en la regulación de las funciones paracrina y autocrina de la
conclusión consistente. Por lo tanto, los investigadores diseñaron una acetilcolina en este tejido no neuronal? De hecho, ¿cuál es la evidencia de
segunda fase del estudio, durante la cual 30 mujeres sanas, de 36 a 49 años de la existencia de tal sistema de citoquinas en la piel? La respuesta simple a
edad, se inscribieron y evaluaron objetivamente 45 minutos después de aplicar
estas preguntas es que mucho de esto queda por dilucidar. Los aumentos
una cantidad del tamaño de un guisante de DMAE al 3 % o gel de placebo. Se
inducidos por DMAE en los niveles cutáneos de acetilcolina aún no se
descubrió que la formulación de DMAE produce una disminución del 11 % en
han documentado. El aumento de acetilcolina en las uniones sinápticas
las mediciones del tiempo de funcionamiento de resonancia máxima (RRTM),
neuromusculares puede ser la fuerza impulsora detrás del aumento de la
una medida que indica un aumento significativo (p < 0,05) en la firmeza de la
piel en comparación con la formulación de gel de placebo. [19]La anisotropía fuerza de tracción de los músculos faciales y el aumento de la firmeza de
mecánica, que previamente se ha demostrado que aumenta progresivamente la piel y debe investigarse en estudios adicionales. Sin embargo,
con la edad, [20]También se demostró que disminuía después de la aplicación
de DMAE.[19]El uso de DMAE también produjo una disminución pequeña (4 %)
aunque estadísticamente insignificante en la RRTM multidireccional, una
medida de la resistencia a la tracción promedio de la piel. No se observaron
cambios en el RRTM mínimo, una medida de tensión a lo largo de las líneas de
tensión de la piel en reposo. Los datos también indicaron que el efecto
reafirmante de la piel del gel DMAE estaba restringido al área de la piel con
características de tensión suelta. En otras palabras, DMAE parece reafirmar la
piel del rostro en las áreas donde más se necesita. El efecto de DMAE sobre la
resistencia a la tracción de la piel no se puede atribuir a cambios en las
propiedades viscoelásticas relacionadas con la hidratación del estrato córneo.
De hecho, se documentó que las mediciones de hidratación y lípidos eran Base 16 semanas
similares para las formulaciones de gel de DMAE y placebo.[19]
En conjunto, los datos de estos tres estudios documentan la

capacidad reafirmante de la piel del gel DMAE. Desde un punto de vista
clínico y estético, los beneficios potenciales de la aplicación de DMAE
incluyen mejoras en las líneas de la frente, las arrugas finas periorbitales,
el grosor y la forma de los labios, y la apariencia general de la piel del
rostro después de 4 semanas de aplicación.
3.2 Seguridad del DMAE tópico
En los ensayos clínicos descritos en la sección 3.1, se encontró que el gel Base 16 semanas
de DMAE (3 %) era seguro hasta aproximadamente 1 año de aplicación

continua. No se relacionaron eventos adversos con el gel DMAE. En pruebas
de parche modificadas en humanos con insultos repetidos (sensibilización), el
gel facial con DMAE al 3 % no provocó ninguna sensibilización (n = 382).[21]
Por lo tanto, el gel de DMAE al 3 % parece tener un buen perfil de seguridad cuando
se usa tópicamente a diario durante un máximo de 1 año, sin efectos adversos
significativos.
4. Mecanismo(s) potencial(es) de acción de DMAE:

Evidencia del papel de la acetilcolina en la piel
¿Por qué el DMAE debería tener algún efecto en la piel? ¿Cómo provoca Base 16 semanas
sus efectos reafirmantes en la piel? ¿Lo hace a través de la modulación del Fig. 3.Fotografías representativas de tres pacientes antes (izquierda) y después
sistema clásico bien entendido de regulación de neurotransmisores (derecha) una aplicación de gel facial de 2-dimetilaminoetanol (DMAE) al 3% durante
(acetilcolina) de la contracción del músculo facial? ¿Hay un papel para 16 semanas.[17]
44
Tabla II.Diferencias estadísticasunentre los grupos de 2-dimetilaminoetanol (DMAE) [n = 105] y placebo (n = 51) en los parámetros secundarios de eficacia después de 16
semanas de aplicación tópica de gel facial con DMAE al 3 % en un ensayo doble ciego controlado con placebo[17]
Parámetro Semana 2 Semana 4 Semana 6 semana 12 semana 16 Semana 18 (2 semanas
fase de regresión)
lineas de la frente p < 0,068 p < 0,023 p < 0,012 p < 0,068 p < 0,012
Arrugas gruesas p < 0,095 p < 0,077
Arrugas finas periorbitales p < 0,0230
Ojeras debajo de los ojos p < 0,08
Disminución del pliegue nasolabial p < 0,059
Aumento del grosor de los labios p < 0,0340 p < 0,058 p < 0,021 p < 0,130 p < 0,023 p < 0,024
Aumento de la forma de los labios p < 0,05 p < 0,05 p < 0,050 p < 0,073
Mejora de la flacidez del cuello p < 0,088
piel
Mejora de la firmeza del cuello. p < 0,092
un Valores de p≤0.05 aparecen enaudaze indican diferencias estadísticamente significativas en el grupo DMAE en comparación con el grupo placebo; valores de p > 0.05
pero≤ 0,1 indican tendencias de mejora con la aplicación de gel facial DMAE en comparación con la aplicación de gel placebo.
la falta de cambio en las líneas de tensión de la piel en reposo en el estudio de Los receptores muscarínicos son moléculas de glicoproteína transmembrana
las propiedades de tracción de la piel después de la aplicación del gel DMAE con secuencias codificantes altamente conservadas.[26]La activación de estos
descrito en la sección 3.1[19]indica que otros mecanismos además de la receptores después de la unión de acetilcolina es responsable de provocar
regulación clásica de los neurotransmisores de la contracción del músculo cambios metabólicos en las células diana y de mediar en la transducción de
facial contribuyen al aumento de la firmeza y otros beneficios observados con señales al acoplarse con proteínas G y alterar los niveles de segundos
el tratamiento con DMAE. mensajeros. En general, se conocen cinco subtipos moleculares de receptores
Cada vez hay más pruebas del papel de una red de señalización muscarínicos.[27,28]Estos incluyen los receptores m1 a m5. Los receptores
no neuronal o un sistema de comunicación en la piel humana en el muscarínicos impares, m1, m3 y m5, activan la fosfolipasa C, que desencadena
que la acetilcolina actúa como una hormona local o citocina.[22,23] la liberación del segundo mensajero inositol 1,4,5-trifosfato, lo que da como
Se han documentado enzimas y receptores implicados en la síntesis, el resultado la movilización de calcio intracelular (Cai). Los receptores
catabolismo y la acción de la acetilcolina en varias capas de la piel. muscarínicos pares, m2 y m4, inhiben la adenilciclasa, lo que aumenta el
Parece muy probable que el DMAE transmita sus beneficios a través de monofosfato de adenosina cíclico intracelular. Los queratinocitos expresan
este sistema colinérgico. una población heterogénea de receptores muscarínicos de acetilcolina

(mAChR).[29]Se han identificado los subtipos de receptores m1 y m3 en las
4.1 Epidermis células granulares y basales, respectivamente, mientras que se ha demostrado

que tanto los receptores m4 como m5 están presentes en la capa de células
La acetilcolina parece actuar en la epidermis como una hormona local con espinosas.[30]Los datos de microscopía confocal indican que estos receptores
funciones autocrinas y paracrinas. Tanto la actividad de ChAT (enzima están presentes en la superficie de las células de los queratinocitos. [29]y se
sintetizadora) como la de acetilcolinesterasa (enzima metabolizadora) se han acumulan en los sitios de contacto de célula a célula.[30]El perfil de los cambios
visualizado inmunohistoquímicamente cerca de los núcleos y en o cerca de de mAChR durante las diferentes etapas del recambio de queratinocitos, [30]lo
las membranas celulares, respectivamente.[11] que indica que estos receptores muscarínicos están implicados en los
Además, se ha detectado acetilcolina recién sintetizada en homogeneizados cambios intrínsecos del crecimiento y la diferenciación epidérmicos.
celulares y sobrenadantes de cultivos.[24]Más recientemente, se demostró que los
queratinocitos humanos en cultivo expresan un Na+-sistema transportador de colina Los queratinocitos humanos también expresan receptores nicotínicos de
de alta afinidad, saturable y dependiente similar al informado en las células acetilcolina (nAChR). Estos receptores son canales iónicos activados por
epiteliales intestinales y las células endoteliales de la barrera acetilcolina o receptores ionotrópicos, que median la entrada de Na +y Ca2+
hematoencefálica.[25]Por tanto, la acetilcolina puede ser sintetizada, almacenada, iones y la salida de K+iones[31,32]La activación de los receptores nicotínicos da
secretada y metabolizada por los queratinocitos epidérmicos humanos.[11] como resultado la liberación de una variedad de segundos y terceros
mensajeros como Ca2+, óxido nítrico, prostaciclina, citocinas y factores de
Además de la maquinaria enzimática, la epidermis también contiene tipos crecimiento. Los canales receptores están compuestos por subunidades α y β.
de receptores tanto muscarínicos como nicotínicos para la acetilcolina. Al menos nueve subunidades α diferentes, denominadas α2a α10, y
tres subunidades β, denominadas β 2a β4, han sido identificados en células no variable entre individuos, dependiendo de la edad, el estilo de vida, el
musculares. Las diferencias en la composición de subunidades determinan estado hormonal y la predisposición genética.
las características funcionales del canal.[32]La activación de nAChR regula la La radiación ultravioleta da como resultado la generación fotoquímica de
diferenciación celular[33]y adhesión celular y motilidad.[31] Específicamente, la especies reactivas de oxígeno, como el anión superóxido, el peróxido y el
activación de α7y α9Los nAChR expresados en la última etapa de la oxígeno singulete, que provocan modificaciones químicas perjudiciales de los
diferenciación de los queratinocitos en la epidermis provocan un aumento de componentes celulares, como el ADN, las proteínas y los lípidos. [41]Además, el
la filagrina, una sustancia prohumectante que puede ser responsable de la estrés oxidativo induce vías de transducción de señales que intervienen en el
suavidad de la piel.[34]Será interesante evaluar el papel de estos receptores y daño al tejido conectivo, en gran parte debido a un aumento en la expresión
de la acetilcolina en la manifestación de la apariencia de la piel, del factor de transcripción nuclear, proteína activadora factor-1 (AP-1), que
particularmente durante el envejecimiento y después de la aplicación de estimula la transcripción de genes para enzimas que degradan la matriz. como
DMAE. las metaloproteinasas. En consecuencia, el fotoenvejecimiento da como
Los melanocitos de piel humana normal expresan subtipos m1-5 de resultado una degradación del colágeno de la piel. Además, la producción de
mAChR en sus membranas superficiales.[35]La activación de estos re- colágeno en curso se ve afectada por la regulación a la baja de la expresión
Se ha demostrado que los receptores dan como resultado una movilización transitoria de Cai. génica del procolágeno tipo I y tipo II. El deterioro de la síntesis de colágeno
[35] también ocurre durante el envejecimiento cronológico como resultado de la
disminución del número de fibroblastos y su capacidad para producir
4.2 Dermis procolágeno tipo I en la piel envejecida en comparación con la piel joven. [42]
La piel fotoenvejecida muestra una acumulación de fibrillas de colágeno degradadas
En la dermis, se ha demostrado que los fibroblastos de la piel humana expresan y desorganizadas y se caracteriza por la aparición de arrugas, pigmentación
los subtipos de receptores m2, m4 y m5.[36]También se ha demostrado que la acción moteada, piel áspera y pérdida del tono de la piel.[43]La piel envejecida protegida por
de la acetilcolina a través de estos receptores está mediada tras la movilización de el sol parece más delgada, con una pigmentación más uniforme, más laxa y con
Caihistorias.[36]Además, los estudios inmunohistoquímicos han mostrado actividad líneas más finas.[41]Las fibrillas de elastina también se alteran durante el
ChAT en las células endoteliales de las células sanguíneas dérmicas.[37]Tales células envejecimiento, con disminuciones en la piel envejecida protegida y aumentos en la
endoteliales expresan un sistema transportador de acetilcolina vesicularin vitro, lo piel dañada por el sol, siendo el aumento debido a la elastina anormal.[44]Al igual que
que indica un sistema colinérgico endotelial desarrollado en la vasculatura dérmica. el fotoenvejecimiento y el envejecimiento cronológico, se ha demostrado que el
envejecimiento climatérico se caracteriza por una mayor distensibilidad y viscosidad

En general, estos datos reflejan un control exquisito de los procesos de la piel y una disminución de la elasticidad.[45]
celulares por parte de una sola molécula: la acetilcolina. La molécula parece Teniendo en cuenta los cambios generales en el envejecimiento de la piel,
regular diferentes procesos biológicos mediante la activación diferencial de cualquier formulación desarrollada para mejorar su apariencia debe proporcionar
receptores colinérgicos en etapas específicas de crecimiento y una combinación de los siguientes beneficios:
diferenciación.[38] Es concebible que el DMAE medie sus efectos cutáneos, al • capacidad de captación de radicales libres;
menos parcialmente, mediante el aumento de los niveles de acetilcolina y la
• disminución del estrés oxidativo;
modulación de los receptores de acetilcolina de forma muy similar a las
hormonas esteroides endógenas y los retinoides.[39]o factores de
• inhibición de la expresión de AP-1;
crecimiento.[40]Dependiendo del momento y la especificidad de la interacción

• inhibición de la inducción de metaloproteinasas;
del receptor, podrían verse afectados múltiples efectos sobre la fuerza de la • inhibición de la degradación del colágeno y/o promoción de la síntesis
piel, la elasticidad y la aparición de arrugas y líneas finas. de colágeno, lo que debería dar como resultado un aumento de la
elasticidad de la piel y el grosor o la firmeza de la piel; y
5. Papel potencial de DMAE en el envejecimiento de la

• disminución en la apariencia de arrugas o líneas gruesas y finas.
Actualmente, el único producto aprobado por la FDA de EE. UU. para la piel
piel: una descripción general dañada por el sol es la tretinoína tópica. La tretinoína tópica ha sido aprobada
como un agente adyuvante para la mitigación de las arrugas faciales finas
La piel envejecida es un sistema complejo y dinámico que sufre un
(crema de tretinoína al 0,02 %, crema emoliente de tretinoína al 0,05 %) y para
envejecimiento cronológico así como un fotoenvejecimiento. Este último es causado
la mitigación de la pigmentación moteada y la piel áspera en pacientes que
por efectos ambientales, específicamente la radiación UV, y se superpone a los
utilizan programas integrales de cuidado de la piel y para evitar la exposición
cambios del envejecimiento cronológico. Además, el envejecimiento climatérico
al sol. . Además de los retinoides, otros agentes utilizados en los programas de
causado por cambios hormonales en mujeres posmenopáusicas también se ha
rejuvenecimiento de la piel incluyen ácidos α-hidroxi y antioxidantes (p. ej.,
reconocido y puede afectar adicionalmente a la piel. Por lo tanto, las
éster de vitamina C).[46,47]Además, los procedimientos no farmacológicos como
manifestaciones y la apariencia de la piel del rostro pueden ser altamente
46 Hombre bruto
la microdermoabrasión, las exfoliaciones con ácido α-hidroxi y el rejuvenecimiento necesarios para comparar DMAE con otras formulaciones/terapias
con láser son prácticas comunes destinadas a rejuvenecer la piel dañada por el sol. antienvejecimiento, incluidas comparaciones directas y regímenes
Para mejorar las líneas de expresión asociadas con el envejecimiento, Botox®1 combinados que pueden tener el potencial de eficacia sinérgica.
Cosmetic (Allergan, Inc.), un complejo de neurotoxina tipo A de toxina botulínica
purificada, esterilizada y secada al vacío, recibió la aprobación de la FDA en 2002. 7. Conclusiones
[24] Está indicado en los EE. UU. para la mejora temporal en la apariencia de las líneas
glabelares de moderadas a severas asociadas con la actividad del músculo

DMAE es un ingrediente relativamente nuevo para el cuidado de la piel.
corrugador y/o prócero en pacientes adultos. ≥65 años de edad. La mejora en la
Están surgiendo datos clínicos sobre su eficacia y seguridad para mejorar la
apariencia facial después de la inyección de toxina botulínica ocurre debido al
apariencia de la piel facial envejecida y muestran que el uso del gel facial
bloqueo de la transmisión neuromuscular (acetilcolina) a los músculos faciales
DMAE puede mejorar la firmeza de la piel y reducir las arrugas de forma
involucrados en la formación del ceño fruncido. Dado que la reinervación de los
segura a una concentración del 3%. No se han aclarado los mecanismos
músculos o el desarrollo de receptores de acetilcolina extrasinápticos pueden ocurrir
exactos por los cuales DMAE media estos efectos en la piel. De hecho, parece
con el tiempo, los efectos de la toxina botulínica pueden revertirse lentamente. Así, el que puede hacerlo a través de múltiples acciones. Así, por ejemplo y de forma
tratamiento con Botox®El cosmético requiere inyecciones intramusculares a similar al tejido neuromuscular, puede mejorar el tono muscular aumentando
intervalos repetidos por parte de proveedores de atención médica capacitados para el aporte de acetilcolina en la unión neuromuscular. Además, puede mediar
mantener su efecto y continúa la búsqueda de productos para el cuidado de la piel algunas de sus acciones, en particular la proliferación y diferenciación,
más fáciles de usar y duraderos. mediante el aumento de la disponibilidad de acetilcolina cutánea para
funciones paracrinas y autocrinas. Ahora hay considerable evidencia de que la
piel es un sitio activo de síntesis, metabolismo y receptividad de la
Un nuevo agente, DMAE, se ha descrito aquí como un agente seguro y
acetilcolina. Otros posibles mecanismos de acción de DMAE en la piel
eficaz para mitigar las líneas de la frente y las arrugas finas periorbitales,
incluyen la eliminación de radicales libres, la inhibición de los aumentos
mejorar la forma y el volumen de los labios y mejorar en general la
asociados con la edad en el entrecruzamiento de proteínas, la estabilización
apariencia de la piel envejecida. Estos efectos se han documentado en un
de la membrana y la antiinflamación. Se necesitan más estudios para dilucidar
ensayo aleatorizado controlado con placebo de 16 semanas después de las acciones de DMAE en la piel y evaluar sus beneficios clínicos en relación
la aplicación diaria de una formulación de gel facial al 3%. [17]Además, la con otros tratamientos antiarrugas y/o anti-fotoenvejecimiento disponibles.
seguridad a largo plazo se ha documentado en una extensión abierta de Debido a sus múltiples acciones, el DMAE también puede tener utilidad en
este estudio para una duración total del tratamiento de 1 año.[18]Los regímenes combinados que pueden proporcionar un enfoque más integral
efectos reafirmantes agudos de la piel del gel de DMAE al 3 % han sido para el cuidado de la piel envejecida. estabilización de membrana y
confirmados mediante medidas cuantitativas del efecto de tracción antiinflamación. Se necesitan más estudios para dilucidar las acciones de
DMAE en la piel y evaluar sus beneficios clínicos en relación con otros
cutánea.[19]Los beneficios del gel tópico DMAE incluyen falta de
tratamientos antiarrugas y/o anti-fotoenvejecimiento disponibles. Debido a sus
sensibilización,[21]potencial antiinflamatorio,[12]y la seguridad en general.
múltiples acciones, el DMAE también puede tener utilidad en regímenes
[17,18]Además, DMAE puede mediar sus beneficios a través de múltiples
combinados que pueden proporcionar un enfoque más integral para el
efectos, incluido un aumento en la firmeza de la piel y una posible mejora
cuidado de la piel envejecida. estabilización de membrana y antiinflamación.
en el tono muscular facial subyacente y los efectos antiinflamatorios. Se necesitan más estudios para dilucidar las acciones de DMAE en la piel y
Otros modos de acción que quedan por investigar incluyen la prevención evaluar sus beneficios clínicos en relación con otros tratamientos antiarrugas
del daño de los radicales libres, la compensación de la pérdida de y/o anti-fotoenvejecimiento disponibles. Debido a sus múltiples acciones, el
receptores de acetilcolina relacionada con la edad, la modulación DMAE también puede tener utilidad en regímenes combinados que pueden
autocrina y paracrina de las citocinas locales y la regulación del proporcionar un enfoque más integral para el cuidado de la piel envejecida.
crecimiento, la diferenciación y la locomoción.
6. Consideraciones futuras
Como se indica a lo largo de este artículo, queda mucho trabajo por

hacer para dilucidar los mecanismos de acción de DMAE en la piel. Una
acción mediada por la acetilcolina que modula la contracción de los
músculos faciales y el tono muscular no parece explicar completamente
los efectos clínicos observados del DMAE en la piel. Para el futuro,
también son necesarios estudios controlados con evaluaciones objetivas.
Eur. J. Biochem. 173,261 - 267 (1988)
0 FEBS 1988
Regulation of collagen metabolism and cell growth by epidermal growth factor

and ascorbate in cultured human skin fibroblasts
Ryu-ichiro HATA', Hironobu SUNADA', Katsuhiko ARAI ',Toshiaki SAT0 ', Yoshifumi NINOMIYA ', Yutaka NAGAI
and Haruki S E N 0 0
Department of Tissue Physiology, Medical Research Institute, Tokyo Medical and Dental University
Department of Anatomy, School of Medicine, Tokyo Medical and Dental University
(Received October 26, 1987/January 11, 1988) - EJB 87 1190
Epidermal growth factor (2 - 50 nglml), prepared from mouse submaxillary glands, stimulated growth and
the synthesis of non-collagenous proteins and hyaluronic acid, but inhibited collagen synthesis in cultured human
skin fibroblasts, both stimulation and inhibition being dose-dependent. All these effects may be intrinsic functions
of the epidermal growth factor molecule, because these effects were cancelled by the co-presence of antiserum
specific for epidermal growth factor and because they were also observed following the addition of human
epidermal growth factor produced urogastrone cDNA. On the other hand, L-ascorbate (vitamin C) stimulated
growth and collagen synthesis, as well as synthesis of non-collagenous proteins, with no significant effect on
hyaluronic acid synthesis.
Co-presence of epidermal growth factor and ascorbate gave additive effects on growth and protein synthesis
of the cells. These results suggest that the two growth-promoting factors, epidermal growth factor and L-ascorbate,
modulate metabolism of extracellular matrix components as well as cell growth in a quite different manner in
human skin fibroblasts.
Epidermal growth factor (EGF), first isolated from male nents, we found that treatment of human skin fibroblasts with
mouse submaxillary glands, is a 53-amino-acid polypeptide ascorbate stimulated growth of the cells.
[l]. It modulates the growth properties of many types of cells Differentiation and growth are the most essential func-
including cells of mesenchymal origin such as fibroblasts [2] tions of cells. In order to understand the relationship between
and osteoblasts [3, 41 in addition to cells of epithelial origin the expression of these two functions in human skin fibro-
[l].EGF also regulates a variety of cellular functions including blasts, we investigated the mode of action of two growth-
metabolism of extracellular matrix components [4 - 71. Uro- promoting factors, EGF and ascorbate, as well as Bt,cAMP,
gastrone, isolated from human urine, was noticed by its inhi- a modulator of intracellular CAMP, on the synthesis of extra-
bition of gastric acid secretion and was found to correspond cellular matrix components, that is, collagen and acidic
to human EGF (h-EGF) [8, 91. glycosaminoglycans (GAG).
L-Ascorbate (vitamin C), which was first found by its anti- A part of this work was reported at the 10th International
scorbutic activity, also has been shown to have multifarious Congress of the International Society of Developmental Biol-
functions on various kinds of cells [lo, 111. One of the most ogists [14].
important functions of ascorbate may be its activity as a
cofactor for the hydroxylation of proline and lysine residues
in collagen [12], which is the most abundant protein present MATERIALS AND METHODS
in the animal body. It is also reported that ascorbate increases
messenger RNA levels for collagen in cultured fibroblasts [13]. Materials
In the course of an investigation on regulatory mechanisms Dulbecco's modified Eagle's medium, fetal bovine serum,
involved in the metabolism of extracellular matrix compo- and Fungizone were purchased from Gibco, New York. Peni-
cillin G and dihydrostreptomycin were generously donated by
Correspondence to R. Hata, Department of Tissue Physiology, Toyo Jozo Co. Ltd, Shizuoka. Sodium ascorbate was obtained
Medical Research Institute, Tokyo Medical and Dental University, from Wako Pure Chemical Industries Ltd, Osaka; while
Tokyo, Japan 101 2-aminopropionitrile fumarate was obtained from Tokyo
Abbreviations. Bt2cAMP, dibutyryl-adenosine 3',5'-monophos- Kasei Co. Ltd, Tokyo. Mouse submaxillary gland epidermal
phate; DMEM, Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented growth factor (m-EGF), receptor grade, and anti-(m-EGF)
with Fungizone (250 pg/l), penicillin G (50 mg/l), dihydrostrepto- rabbit serum were purchased from Collaborative Res. Inc.
mycin (50 mg/l) and Hepes (3 g/l); DMEM-10, DMEM containing
10% fetal bovine serum; EGF, epidermal growth factor; h-EGF,
(Lexington, MA). Human epidermal growth factor (h-EGF),
human epidermal growth factor; m-EGF, mouse epidermal growth produced from urogastrone cDNA, was a generous gift from
factor; Tris/saline, 0.05 M Tris/HCl containing 0.15 M NaCl, pH 7.4. Wakunaga Pharmaceutical Co. Ltd, Hiroshima, and was over
Enzymes. Clostridium histolyticum collagenase (EC 3.4.24.3); lysyl 99% pure as judged by SDS/polyacrylamide gel electro-
hydroxylase (EC 1.14.11.4); pepsin (EC 3.4.23.1); prolyl hydroxylase phoresis and high-performance liquid chromatography.
(EC 1.14.11.2); pronase (EC 3.4.24.4). Dibutyryl-adenosine 3',5'-monophosphate (Bt2cAMP) was
262
from Sigma Chemical Co. (St Louis, MO). Tissue-culture After removal of the medium, the cell layer was rinsed with
plastics were from Becton Dickinson & Co. (Oxnard, CA). 1 ml of Trisisaline (0.05 M Tris/HCl, 0.11 M NaC1, pH 7.4)
Purified Clostridium histolyticum collagenase was obtained and processed for the measurement of specific activity and of
from Amano Pharmaceutical Co. Ltd, Nagoya, and was DNA content by a modification of a fluorometric method [19]
further purified by gel chromatography as reported [15]; the as described previously [IS].
absence of nonspecific proteases in the preparation was veri-
fied as described [16]. ~-[2,3-~H]Proline, [meth~l-~HIthymidine
and D-[I,6-3H(n)]glucosamine hydrochloride were obtained Cell membrane transport
from New England Nuclear Co. (Boston, MA). N-
Ethylmaleimide and SDS were obtained from Nakarai Chemi- Cells were cultured in DMEM-10 containing increasing
cal Ltd, Kyoto. Pepsin (porcine gastric mucosa) was from concentrations of m-EGF for 4 days, then further incubated
Boehringer Mannheim GmbH (Mannheim, FRG). Pronase in the presence of 10 pCi [3H]proline for 10 min at 37°C. After
(actinase E) was from Kaken Pharmaceutical Co. Ltd, Tokyo. placing the dishes on ice, the medium was removed and the
Other chemicals used were of reagent grade. cell layer was rinsed three times with 1 ml DMEM containing
10 mM proline and 1 mM cycloheximide. The cells were col-
lected with 1 .0 ml 10% chilled trichloroacetic acid, sonicated,
Cell culture and centrifuged at 2000 x g at 2 "C. Radioactivity in the super-
Human forearm skin fibroblasts were obtained from three natant was calculated per mass DNA [20].
patients with progressive systemic sclerosis (37 - 46 years old,
PSS1, PSS2, and PSS3) and age-matched normal adults
(HSF1, HSF2, HSF3, and HSF4) as described previously [17] Preparation of collagen components
and used at population-doubling levels of 10-30. The cells Cells were incubated with fresh DMEM-10 containing
(0.5 - 1 x lo5) at similar population-doubling levels were 0.1 mM ascorbate and 50 yCi [3H]proline for 24 h. The me-
plated onto 35-mm dishes and grown in medium (DMEM- dium fraction (medium and the first Trislsaline wash of the cell
10) for 7-10 days until apparent confluence was obtained. layer) and cell layer were collected separately and sonicated on
Then the cells were treated with 0-50 ng/ml of m-EGF, ice. Procollagen was precipitated by the addition of am-
10 ng/ml of h-EGF, and/or 0 - 1 mM sodium ascorbate for monium sulfate (176 mg/ml) in the presence of protease
1-5 days. In some experiments, the cells at log phase were inhibitors (EDTA, 25 mM; N-ethylmaleimide, 10 mM;
used. In these cases, the cells 2 - 3 days after inoculation were phenylmethylsulfonyl fluoride, 1 mM). The precipitate was
treated with 10 ng/ml of m-EGF or 0.1 mM sodium ascorbate dissolved in 0.5 M acetic acid and the solution was treated
for 4 days. The cells were also treated with 0.1 mM Bt,cAMP with pepsin (100 yg/ml) for 6 h at 5°C [16] and used as the
for the last 24 h, during the time of labeling. The medium was collagen fraction.
changed twice a week and on the day before labeling with
radioactive materials.
SDS/polyacrylamide slab gel electrophoresis
Metabolic labeling of the cells Lyophilized collagen samples were treated with or without
The medium was replaced with fresh DMEM-10 contain- purified bacterial collagenase and separated by SDS/S0h
ing varying amounts of m-EGF, h-EGF, ascorbate and/or polyacrylamide gel electrophoresis in the presence or absence
0.1 rnM BtzcAMP in the presence of 10- 50 yCi [3H]proline, of dithiothreitol as described previously [4]. After electro-
0.5 mM 2-aminopropionitrile and cultured for 24 h at phoresis, the gels were immersed in 1.1 M sodium salicylate
37°C. solution for 30min [21] and processed for fluorescence
autoradiography [22] as described [16].
Determination of total hydroxyproline
After being labeled with [3H]proline, the cell layer and Determination of acidic glycosaminoglycans
medium were collected and briefly sonicated on ice. An aliquot and rate of synthesis
was used for the determination of radioactive hydroxyproline The cells were incubated with 1.0ml fresh DMEM-10
and proline as described previously [18]. containing [3H]glucosamine (20 yCi/ml) and 0.1 mM
ascorbate for 24 h. Crude acidic glycosaminoglycans were
Determination of collagen in the high-molecular-mass fraction isolated after actinase E digestion as reported [23] and the
components were separated by two-dimensional electro-
Another aliquot of the sonicate was heated for 30 min in phoresis on cellulose acetate strips as described [24]. The
a boiling water bath after addition of carrier bovine serum amount of each was determined by a colorimetric assay of
albumin (1 mg) and gelatin (0.1 mg) and dialyzed against each spot as reported [25] and the relative amount of each
0.05 M acetic acid at 5°C. The retentate was used for the which accumulated (nmol hexosamine/pg DNA) was calculat-
determination of collagen and non-collagenous protein using ed. Radioactivity of each spot was measured after dissolving
purified bacterial collagenase [16].The relative rate of collagen in 1.0 ml dioxane and from the data the relative rate of
synthesis was calculated assuming that collagen has an imino glycosaminoglycan synthesis was calculated [26].
acid content 5.4 times higher than that of other proteins [15].
Quantification of D N A content and D N A synthesis Expression of data

The cells were refed with 1.0 ml fresh DMEM-10 and All the data are the means f SD of quadruplicate assays
incubated with 10 pCi 13H]thymidinefor an additional 2 h. in duplicate cultures unless specified otherwise.
263
I I
DAYS IN CULTURE Fig. 2. Effect of increasing m-EGF concentrations on the metabolism of

human skin fibroblasts in culture. Cells (HSF3) at apparent confluence
Fig. 1 . Effect of incubation time with mEGF on growth and protein were further cultured for 4 days in the absence or presence of increas-
synthesis ofhuman skinfibroblasts in culture. Cells (HSF3) at apparent ing concentrations of m-EGF. (A) Growth of the cells, as determined
confluence were further cultured for 5 days in DMEM-10 in the by DNA content (+); cell membrane transport of [3H]proline (0).
presence or absence of 10 ng/ml of m-EGF. (A) DNA content was (B) Synthesis of collagen (0)and of NCP ( 0 )were determined by
determined as described under Methods. (B) Relative rates of collagen measuring radioactivities incorporated into collagenase-sensitive and
synthesis (0)and of non-collagenous protein (NCP) synthesis ( 0 ) collagenase-resistant proteins, respectively. Data are percentages of
were determined by measuring radioactivities incorporated into the control (cells cultured in &heabsence of rn-EGF). (C) Relative rate
collagenase-sensitive and collagenase-resistant proteins, respectively. of collagen synthesis to total protein synthesis
Values are percentages of the control (cells cultured 5 days without m-
EGF). (C) Relative rate of collagen synthesis to total protein synthesis
200
DNA
RESULTS
Effects of epidermal growth jactor
-
ip
v
150
100
W
on cell growth of and protein synthesis in human skin fibroblasts l-
a 50
Addition ofm-EGF to the medium (DMEM-10) of appar- a
ent confluent human skin fibroblast cultures stimulated Ly
growth of the cells depending upon exposure time of EGF COLLAGEN

(Fig. 1A). Synthesis of non-collagenous protein (NCP) was
also stimulated, but collagen synthesis was inhibited (Fig. 1B).
Thus, the relative rate of collagen synthesis was decreased
from 7 % to 2% of the total protein synthesized after 3-5-
days exposure to EGF (Fig. 1C). When increasing amounts
of in-EGF were added to the medium, 40% promotion of
cell growth (in terms of DNA content) was observed at the
concentration of 2 ng/ml. The content of DNA was further
increased slightly when 50 ng/ml was used (Fig. 2A). Synthesis
of non-collagenous protein was activated, the extent being
dependent on the concentration of m-EGF added (Fig. 2B).
This increment is not the reflection of accelerated incorpo-
ration of radioactive materials, because the cell membrane Fig. 3. Specificity of EGF effects on cell growth and collagen synthesis
of human skinfibroblasts in culture. Cells (PSS3) were cultured in the
transport, measured by incorporation of [3H]proline, was not
absence (control) or in the presence of m-EGF (50 ng/ml) and/or anti-
increased by the presence of m-EGF (Fig. 2A). Collagen syn- (m-EGF) or anti-(h-EGF) (10 ngiml). (A) Cell growth was determined
thesis of the cells was inhibited dose-dependently, and the by fluorometric analysis of DNA content. (B) Collagen synthesis was
relative rate of collagen synthesis to the total protein synthesis determined by measuring radioactivities incorporated into collage-
was reduced to 2 % by the presence of 10-50 ng/ml of nase-sensitive protein. (C) Relative rate of collagen synthesis to total
m-EGF. protein synthesis
Specificity of EGF effects

preparation. We reached this conclusion for the following
In the experiments described above, we used ‘receptor- reasons. (a) The purity of m-EGF used in these experiments
grade’ m-EGF. Selective inhibition of collagen synthesis was was over 99% by SDS/polyacrylamide gel electrophoresis. (b)
mediated by the intrinsic effect of m-EGF itself and not due to Both the stimulatory effect on cell growth and the inhibitory
a contaminant which might have been present in the m-EGF effect on collagen synthesis were completely abolished by the
264
ASCORBATE
0.lmM 1.omM
COLLAGEN
X
TOTAL Hyp
8
oLT 011 012 ' ' ' ' ' ' '
0.5
ASCORBATE (mM)
Fig. 4. Eflect of increasing ascorbate concentrations on the synthesis o j

collagen and non-collagenousproteins in human skin fibroblasts. Cells
(HSF3) at confluence were incubated with DMEM-10 containing
50 pCi [3H]proline and increasing concentrations of sodium ascorbate
(0- 1 mM) for 24 h. Incorporation of radioactivity into collagenase-
sensitive (0)and collagenase-resistant proteins (e), radioactivity as
o L o M l + ;
DAYS IN CULTURE
i 3 4d '
hydroxyproline (0)and relative rates of collagen synthesis ( 0 )were
determined as described under Methods. SDs were less than the size Fig. 5. Effects of incubation time with sodium ascorbate on cellgrowth
of symbols used and protein synthesis of human skin fibroblasts. The cells (HSF3) at
confluence were further incubated with DMEM-10 for 5 days in the
absence or presence of 0.1 mM (A - C) or 1.O mM (D - F) sodium
ascorbate. (A, D) Cell growth was determined by measuring DNA
co-presence of anti-(m-EGF) serum in the culture medium; content. (B, E) Relative rates of collagen synthesis (0)and of non-
further, the presence of this serum alone did not induce any collagenous protein (NCP) synthesis ( 0 )were determined by the
significant changes in growth or protein synthesis of the fibro- bacterial collagenase method. (C, F) Relative rates of collagen
blasts, as shown in Fig. 3. (c) Human EGF also induced acti- synthesis
vation of cell growth and specific inhibition of collagen syn-
thesis by the human skin fibroblasts (Fig.3). This h-EGF
was prepared from cDNA of urogastrone by a genetically (Fig. 5A). Synthesis of non-collagenous protein (as well as of
engineered Escherichia coli host, its purity was also over collagen) was stimulated, although this activation was less
99% and contaminants which might have been present in the pronounced (Fig. 5B). Thus relative rate of collagen synthesis
h-EGF preparation could not have been the same as those was increased from 7% to 10.5% after 5 days in culture
possibly present in the m-EGF which had been prepared by by the successive addition of 0.1 mM ascorbate (Fig. 5C),
extraction of mouse submaxillary glands. Fibroblasts ob- indicating that activation of collagen synthesis is not merely
tained from a normal adult (HSF4) and from a patient with a reflection of a general increase in [3H]proline incorporation
progressive systemic sclerosis (PSS3) gave similar results. due to augmentation of cell membrane transport [14]. Ad-
These data clearly indicate that the stimulation of cell dition of 1 mM ascorbate for 5 days successively induced
growth and of non-collagenous protein synthesis and selective similar effects on both cell growth and protein synthesis, but
inhibition of collagen synthesis in the fibroblasts were induced their magnitude was less than with 0.1 mM ascorbate (Fig. 5)
by an intrinsic activity of EGF itself. as observed in the case of 24-h treatment (Fig.4).
Effects of ascorbate on cell growth and protein synthesis Universality of effects of m-EGF and ascorbate
of human skin fibroblasts on the metabolism of various kind of cells
We added increasing amounts of sodium ascorbate to the In order to examine the extent of the effects of EGF and
culture medium (DMEM-10) of separate cultures of human ascorbate, we treated fibroblasts obtained from normal adults
skin fibroblasts and then incubated the cultures for 24 h. or from patients with progressive systemic sclerosis with
Collagen and non-collagenous protein synthesis, as measured 0.1 mM sodium ascorbate or 10 ng/ml of m-EGF. All the cells
by the bacterial collagenase method, was stimulated by the responded to these factors by an increase in their growth rate
presence of 0.05 -0.1 mM ascorbate, the stimulative effects (data not shown). In some experiments, the cells at log phase
being slightly less pronounced with 0.2 mM or higher concen- were treated with EGF or ascorbate. The growth rates of the
trations of ascorbate (Fig. 4). Total collagen synthesis, as ob- treated cells were higher than that of the control cells which
served by determination of the total hydroxyproline, showed were cultured in the absence of EGF or ascorbate but the
a similar tendency (Fig.4). Production of a low amount of effects were less obvious, because control cells were also grow-
hydroxyproline in the absence of added ascorbate may be ing (data not shown). The relative rate of collagen synthesis
dependent on the presence of a low level of ascorbate-like differed between cell lines but activation of collagen synthesis
factor contained in the fetal bovine serum used in the exper- by ascorbate and inhibition by m-EGF were confirmed in all
iment. The reason for the lesser effects of ascorbate at 0.2 mM lines tested, indicating the universality of the effects (data not
or higher concentrations on collagen and non-collagenous shown).
protein synthesis is not clear, but the phenomenon is probably Regarding the relative rates of collagen synthesis deter-
due to the cellular toxicity of hydrogen peroxide produced by mined by bacterial collagenase, the method described above
the autooxidation of ascorbate under culture conditions. only measures collagen components in the non-dialyzable,
Ascorbate is very unstable in solution, especially under high-molecular-mass fraction. However, intracellular collagen
culture conditions, of neutral pH and 37°C [27]. When we degradation has been suggested recently [4, 18, 281. Thus, in
added 0.1 mM ascorbate in the culture medium daily for order to determine total synthesis of collagen, we analyzed
5 days, it stimulated growth of the fibroblasts by 40% the total amount of radioactive hydroxyproline, which in-
265
I
t Ascorbate O . l m M 1.0
3
Y 3mt A
COLLAGEN TYPE I TYPEIII
Fig. 6 . Effects of EGF and ascorbate on collagen components produced

by human skinfibroblasts. The cells (HSF3) were cultured in DMEM-
10 in the presence of 10 ng/ml of m-EGF or 0.1 mM sodium ascorbate
for 4 days. The cells were incubated with DMEM-10 containing
50 pCi [3H]proline, 0.1 mM sodium ascorbate and 0.5 mM 2-amino-
propionitrile fumarate, in the presence or absence of 10 ng/ml of
m-EGF for the last 24 h. An aliquot was used for the determination
of relative rate of collagen synthesis and the remaining was used for
the purification of collagen. Relative amounts of collagen components
were determined by densitometry of collagen bands after separation
of the components by SDS/polyacrylamide gel electrophoresis fol-
lowed by fluorography. The values are the means of two experiments Fig. 8. Effects of rn-EGF, ascorbate, and BtzcAMP on protein synthesis
of human skinfibroblasts. The cells (HSF2) at confluence were cultured
for 5 days in DMEM-10 in the presence or absence of 10 ng/ml of
m-EGF and/or 0.1 mM sodium ascorbate. Then they were incubated
for an additional 2 4 h with DMEM-10 containing 20 pCi of
[3H]proline and 0.1 mM sodium ascorbate in the presence or absence
of 10 ng/ml of m-EGF and/or 0.1 mM Bt2cAMP. (A) Relative rates
of collagen synthesis (0)and non-collagenous protein (NCP) syn-
thesis ( 0 )were determined by the bacterial collagenase method. (B)
Relative rate of collagen synthesis
Collagen types produced by human skin fibroblasts

before and after treatment with ascorbate or m-EGF
When collagen components were analyzed by SDS/
polyacrylamide gel electrophoresis followed by densitometry
of the fluorogram, the cells were shown to produce types I,
111, and V collagens in the ratio of 88 :8 :4, which means types I
and 111 collagens occupied 5.3% and 0.5%, respectively, of
total protein synthesized. Collagen synthesis of the cells was
inhibited by the presence of m-EGF and was activated by the
presence of ascorbate in the culture medium for 4 days (Fig. 6)
' 1 5
DAYS IN CULTURE
5
as described above. By treatment with m-EGF for 4 days,
Fig. 7. Additive effects of m-EGFand ascorbate on cellular metabolism production of both type I and type111 collagens was decreased
of human skin fibroblasts. Cells (HSF3) were incubated with DMEM- and by treatment with ascorbate, synthesis of both type I and
10 in the presence or absence of 10 ng/ml of m-EGF and/or 0.1 mM type I11 collagens was increased.
sodium ascorbate for 5 days. (A) Cell growth determined by DNA
content. (B) Relative rates of collagen synthesis (0)and of non- Effects of co-presence of EGF and ascorbate on growth
collagenous protein (NCP) synthesis ( 0 ) were determined by the and protein synthesis offibroblasts
bacterial collagenase method. (C) Relative rates of collagen synthesis
The presence of both m-EGF and ascorbate in the culture
medium of the fibroblasts for 5 days stimulated the growth
of the cells to a higher degree than the separate addition of
cludes both hydroxyproline (collagen) in the high-molecular-
either factor (Fig. 7A), suggesting that the two stimulations
mass fraction and that in the dialyzable, low-molecular-mass are mediated by separate mechanisms. Production of non-
fraction, the latter possibly corresponding to the amount of
collagenous protein by the cells was also activated additively
intracellular degradation of collagen that occurred during
by the presence of both factors. On the other hand, the
labeling with [3H]proline for 24 h. Total synthesis of collagen,
stimulatory effect of ascorbate on collagen synthesis was at-
as observed by measuring total hydroxyproline, was also acti-
tenuated by the co-presence of m-EGF, resulting in a value
vated by the treatment with ascorbate and was inhibited by
between the value obtained by the separate addition of each
the presence of m-EGF (data not shown), even though the
factor (Fig.7B and C ) .
inhibition of total collagen synthesis in fibroblasts from
patients with progressive systemic sclerosis was less promi-
nent. The latter results suggest that intracellular degradation Modulation of protein synthesis in Jibroblasts by Bt,cAMP
of collagen in these cells treated with m-EGF is higher than Treatment of the fibroblasts with 0.1 mM Bt2cAMP for
that in normal cells so treated. 24 h during the labeling period with [3H]proline inhibited
266
ASCORBATE Here we have described that the effects of m-EGF and h-EGF
h
E
Y
W
m;;7
100
150 d
on human skin fibroblasts obtained from normal adults and
patients with progressive systemic sclerosis were quite similar
to those on osteoblasts. These data suggest that stimulation
of growth and inhibition of collagen synthesis are general
effects of EGF on cells of mesenchymal origin.
Cyclic AMP, an intracellular second messenger, modulates
I-
U various cellular functions including collagen metabolism.
a
W However, its effect on collagen synthesis is not unidirectional.
f
U
The addition of agents which elevate intracellular cAMP levels
inhibits collagen synthesis of lung fibroblasts [29], but stimu-
lates collagen synthesis in osteoblasts [30]. These results
suggest that even though collagen synthesis of both fibroblasts
and osteoblasts was similarly inhibited by EGF, collagen syn-
O' 0 i2 44 4A i i 4 4 d
DAYS IN CULTURE
' thesis in these two mesenchymal cells is regulated by quite
different mechanisms. The addition of Bt2cAMP, which in-
creases the intracellular cAMP level, to the culture medium
Fig. 9. Effects of m-EGF and ascorbate on glycosaminoglycan synthesis of human skin fibroblasts inhibited the synthesis of both non-
of human skin ,fibroblasts. The cells (HSF2) were cultured in the collagenous protein and collagen (Fig. 8) without affecting the
presence or absence of 10 ng/ml of m-EGF or 0.1 mM sodium growth of the cells (data not shown). Inhibition of collagen
ascorbate for 1-5 days. The cells were incubated with [3H]glucos- synthesis by EGF and Bt2cAMP was additive (Fig. 8). These
amine and 0.1 mM ascorbate in the presence or absence of m-EGF results suggest that, even though the EGF molecule regulates
for the last 24 h. The relative rates of glycosaminoglycan components
synthesized (dpm/hg DNA) were calculated as described under both cell growth and collagen synthesis in human skin fibro-
Methods. HA, hyaluronic acid; HS, heparan sulfate; DS, dermatan blasts, the intracellular pathways of the regulatory mecha-
sulfate; CS, chondroitin 4 and/or 6-sulfate nisms of the two processes are independent.
EGF stimulated accumulation and synthesis of hyaluronic
acid by human skin fibroblasts (Fig. 9). Accumulation and
non-collagenous protein synthesis as well as collagen synthesis stimulated synthesis of hyaluronic acid [31] and a decrease in
of the cells. The inhibitory effect was more striking with collagen synthesis [32] are often observed with viral transfor-
collagen synthesis; thus the relative rate of collagen synthesis mation of cells. These data suggest that the action of EGF on
by the cells was decreased (Fig.8). The presence of both fibroblasts is someway related to that of transformation on
Bt2cAMP and m-EGF or ascorbate modulated protein syn- the cells. Recent data that a product of the Moloney sarcoma
thesis by decreasing the synthesis of both non-collagenous virus oncogene is quite similar to the precursor of EGF [33]
protein and collagen (Fig. 8). also supports this idea.
Sequential addition of ascorbate in the fibroblast culture
for 4 - 5 days activated growth and protein synthesis, includ-
Effects of m-EGF and ascorbate on production ing that of collagen. Specific inhibition of collagen synthesis
ofglycosaminoglycans by ,fibroblasts by cis-hydroxyproline or by L-azetidine 2-carboxylic acid re-
Two-dimensional electrophoresis of the glycosamino- sulted in the inhibition of growth of normal fibroblasts [34].
glycans isolated from the fibroblasts treated with m-EGF for Addition of L-azetidine 2-carboxylic acid to confluent cultures
1 - 5 days showed increased accumulation of hyaluronic acid of human skin fibroblasts cancelled the stimulative effects of
(data not shown), as reported earlier [6]. Accumulation of an ascorbate derivative on collagen synthesis as well as on cell
sulfated glycosaminoglycans was not increased. The relative growth [35]. These results indicate that the growth-promoting
amount of hyaluronic acid synthesized (radioactivity/mass effect of ascorbate on the fibroblasts is due to the accumu-
DNA) was also increased after incubation with m-EGF for lation of newly synthesized extracellular matrix which is
1- 5 days (Fig. 9A), but those of heparan sulfate, dermatan necessary for attachment of proliferating cells.
sulfate and chondroitin sulfate were decreased (Fig. 9B - D). This work was supported by the following: Grant-%Aid for
Similar results were obtained by using h-EGF (data not Scientific Research (58570140) and for Co-operative Research
shown). By incubation of the cells with ascorbate, a slight (58380017) from the Ministry of Education, Science and Culture of
increase in accumulation of hyaluronic acid was observed but Japan, and the Intractable Disease Division, Public Health Bureau,
less prominent than that of cells treated with m-EGF (data the Ministry of Health and Welfare (Scleroderma Research Commit-
not shown). tee) of Japan.
The relative amount of hyaluronic acid synthesized per
mass DNA was not significantly increased (Fig. 9E), while REFERENCES
amounts of sulfated glycosaminoglycans were either un-
changed or only slightly decreased (Fig. 9F - H). 1. Carpenter, G. & Cohen, S. (1979) Annu. Rev. Biochem. 48,193-
216.
2. Lembach, K. J. (1976) Proc. Natl Acad. Sci. USA 73,183- 187.
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1816.
EGF stimulates accumulation of glycosaminoglycans as 4. Hata, R., Hori, H., Nagai, Y., Tanaka, S., Kondo, M.,
well as collagen in liver epithelial cells 151. We previously Hiramatsu, M., Utsumi, N. & Kumegawa, M. (1984) Endocri-
repbrted that m-EGF activated growth and synthesis of non- nology 115, 867 - 876.
collagenous protein but specifically inhibited type I collagen 5. Kumegawa, M., Hiramatsu, M., Yajima, T., Hatakeyama, K.,
synthesis in cloned mouse osteoblasts (MC3T3-El cells) [4]. Hosoda, S. & Namba, M. (1982) Endocrinology 110,607-612.
267
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© FEBRERO 1988
Regulación del metabolismo del colágeno y el crecimiento celular por factor de

crecimiento epidérmico y ascorbato en fibroblastos de piel humana cultivados
Ryu-ichiro HATA1, Hironobu SUNADA1, Katsuhiko ARAI1, Toshiaki SATO1, Yoshifumi NINOMIYA1, Yutaka NAGAI1 y Haruki
SENOO2
1
Departamento de Fisiología de Tejidos, Instituto de Investigación Médica, Universidad Médica y Dental de Tokio
2
Departamento de Anatomía, Facultad de Medicina, Universidad Médica y Dental de Tokio
(Recibido el 26 de octubre de 1987/11 de enero de 1988) — EJB 87 1190
El factor de crecimiento epidérmico (2-50 ng/ml), preparado a partir de glándulas submaxilares de ratón, estimuló el
crecimiento y la síntesis de proteínas no colágenas y ácido hialurónico, pero inhibió la síntesis de colágeno en fibroblastos
de piel humana cultivados, siendo la estimulación y la inhibición dependientes de la dosis. Todos estos efectos pueden ser
funciones intrínsecas de la molécula del factor de crecimiento epidérmico, porque estos efectos fueron anulados por la
presencia conjunta de antisuero específico para el factor de crecimiento epidérmico y porque también se observaron
después de la adición del ADNc de urogastrona producido por el factor de crecimiento epidérmico humano. Por otro lado,
el L-ascorbato (vitamina C) estimuló el crecimiento y la síntesis de colágeno, así como la síntesis de proteínas no colágenas,
sin efecto significativo sobre la síntesis de ácido hialurónico.
La presencia conjunta de factor de crecimiento epidérmico y ascorbato dio efectos aditivos sobre el crecimiento y la
síntesis de proteínas de las células. Estos resultados sugieren que los dos factores promotores del crecimiento, el factor de
crecimiento epidérmico y el L-ascorbato, modulan el metabolismo de los componentes de la matriz extracelular así como
el crecimiento celular de una manera bastante diferente en los fibroblastos de piel humana.
El factor de crecimiento epidérmico (EGF), aislado por el ascorbato aumenta los niveles de ARN mensajero para el
primera vez de las glándulas submaxilares de ratones machos, es colágeno en fibroblastos cultivados [13]. En el curso de una
un polipéptido de 53 aminoácidos [1] que modula las propiedades investigación sobre los mecanismos reguladores implicados en el
de crecimiento de muchos tipos de células, incluidas las células de metabolismo de los componentes de la matriz extracelular
origen mesenquimatoso, como los fibroblastos [2] y los encontramos que el tratamiento de fibroblastos de piel humana con
osteoblastos. [3, 4] además de las células de origen epitelial [1], el ascorbato estimuló el crecimiento de las células.
EGF también regula una variedad de funciones celulares, incluido
el metabolismo de los componentes de la matriz extracelular [4— La diferenciación y el crecimiento son las funciones más
7]. La urogastrona, aislada de la orina humana, se observó por su esenciales de las células. Para comprender la relación entre la
inhibición de la secreción de ácido gástrico y se encontró que expresión de estas dos funciones en fibroblastos de piel humana,
correspondía al EGF humano (h-EGF) [8, 9], investigamos el modo de acción de dos factores promotores del
También se ha demostrado que el L-ascorbato (vitamina C), crecimiento, EGF y ascorbato, así como Bt2cAMP, un modulador
que se descubrió por primera vez por su actividad antiescorbútica, de cAMP intracelular, en la síntesis de componentes de la matriz
tiene múltiples funciones en varios tipos de células [10, 11]. Una extracelular, es decir, colágeno y glicosaminoglicanos ácidos
de las funciones más importantes del ascorbato puede ser su (GAG).
actividad como cofactor para la hidroxilación de residuos de Una parte de este trabajo se informó en el 10º Congreso
prolina y lisina en el colágeno [12], que es la proteína más Internacional de la Sociedad Internacional de Biólogos del
abundante presente en el cuerpo animal. También se informa que Desarrollo [14].
DISCUSIÓN
El EGF estimula la acumulación de glicosaminoglicanos y
elude tanto la hidroxiprolina (colágeno) en la fracción de masa colágeno en las células epiteliales del hígado [5]. Anteriormente
molecular alta como la de la fracción de masa molecular baja informamos que m-EGF activó el crecimiento y la síntesis de
dializable, la última posiblemente correspondiente a la cantidad de proteína no colágena, pero inhibió específicamente la síntesis de
degradación intracelular de colágeno que ocurrió durante el colágeno tipo I en osteoblastos de ratón clonados (células MC3T3-
marcaje con [3H]prolina durante 24 horas. H. La síntesis total de E1) [4].
colágeno, como se observó midiendo la hidroxiprolina total, Aquí hemos descrito que los efectos de m-EGF y h-EGF en
también fue activada por el tratamiento con ascorbato y fue inhibida fibroblastos de piel humana obtenidos de adultos normales y
por la presencia de m-EGF (datos no mostrados), aunque la pacientes con esclerosis sistémica progresiva fueron bastante
inhibición de la síntesis total de colágeno en fibroblastos de similares a los de los osteoblastos. Estos datos sugieren que la
pacientes con progresiva la esclerosis sistémica fue menos estimulación del crecimiento y la inhibición de la síntesis de
prominente. Los últimos resultados sugieren que la degradación colágeno son efectos generales del EGF sobre las células de origen
intracelular del colágeno en estas células tratadas con m-EGF es mesenquimatoso.
2
El AMP cíclico, un segundo mensajero intracelular, modula
varias funciones celulares, incluido el metabolismo del colágeno.
Sin embargo, su efecto sobre la síntesis de colágeno no es
unidireccional. La adición de agentes que elevan los niveles de
AMPc intracelular inhibe la síntesis de colágeno de los fibroblastos
pulmonares [29], pero estimula la síntesis de colágeno en los
osteoblastos [30]. Estos resultados sugieren que, aunque la síntesis
de colágeno tanto de los fibroblastos como de los osteoblastos fue
inhibida de manera similar por el EGF, la síntesis de colágeno en
estas dos células mesenquimales está regulada por mecanismos
bastante diferentes. La adición de Bt2cAMP, que aumenta el nivel
de cAMP intracelular, al medio de cultivo de fibroblastos de piel
humana inhibió la síntesis tanto de proteína no colágena como de
colágeno (Fig. 8) sin afectar el crecimiento de las células (datos no
mostrados). La inhibición de la síntesis de colágeno por EGF y
Bt2cAMP fue aditiva (Fig. 8). Estos resultados sugieren que,
aunque la molécula de EGF regula tanto el crecimiento celular
como la síntesis de colágeno en los fibroblastos de la piel humana,
las vías intracelulares de los mecanismos reguladores de los dos
procesos son independientes.
EGF estimuló la acumulación y síntesis de ácido hialurónico
por fibroblastos de piel humana (Fig. 9). La acumulación y la
síntesis estimulada de ácido hialurónico [31] y una disminución en
la síntesis de colágeno [32] se observan a menudo con la
transformación viral de las células. Estos datos sugieren que la
acción de EGF sobre los fibroblastos está relacionada de algún
modo con la de transformación sobre las células. Los datos
recientes de que un producto del oncogén del virus del sarcoma de
Moloney es bastante similar al precursor de EGF [33] también
respaldan esta idea.
La adición secuencial de ascorbato en el cultivo de fibroblastos
durante 4-5 días activó el crecimiento y la síntesis de proteínas,
incluida la del colágeno. La inhibición específica de la síntesis de
colágeno por c/'v-hidroxiprolina o por ácido L-azetidina 2-
carboxílico resultó en la inhibición del crecimiento de fibroblastos
normales [34]. La adición de ácido L-azetidina 2-carboxílico a
cultivos confluentes de fibroblastos de piel humana canceló los
efectos estimulantes de un derivado de ascorbato sobre la síntesis
de colágeno, así como sobre el crecimiento celular [35]. Estos
resultados indican que el efecto promotor del crecimiento del
ascorbato sobre el fibroblasto se debe a la acumulación de matriz
extracelular recién sintetizada que es necesaria para la unión de
células en proliferación.

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Am J Clin Dermatol 2005; 6 (1): 39-47

REVIEW ARTICLE 1175-0561/05/0001-0039/$34.95/0

© 2005 Adis Data Information BV. All rights reserved.

The Role of Dimethylaminoethanol in

Deanol or 2-dimethylaminoethanol (DMAE) is a relatively new 1. Chemistry

classic evidence of DMAE as a precursor of acetylcholine in the CH3

tylcholine as a local transmitter or cytokine in non-neuronal tis-

2.1 Acetylcholine-Enhancing Activity of Table I. Effect of 2-dimethylaminoethanol (DMAE) on cytokine secretion in

Various properties such as skin firming, lifting, and antiaging

3.1 Efficacy Studies of DMAE

The efficacy of a 3% DMAE gel was shown recently in a 3.4

multicenter, double-blind, placebo-controlled study.[17] The study

randomized to receive the DMAE gel or placebo gel for 16 weeks

3.2 Safety of Topical DMAE

was found to be safe for up to about 1 year of continuous

4. Potential Mechanism(s) of Action of DMAE:

El deanol o 2-dimetilaminoetanol (DMAE) es un ingrediente relativamente nuevo 1. Química

reafirmante de la piel. Un análogo de la vitamina B colina, DMAE se encuentra

estado de ánimo.[2]mejora de la memoria,[3]

y mejora en niños con trastornos del aprendizaje y del

evidencia clásica de DMAE como un precursor de la acetilcolina en el CH3

acetilcolina como un transmisor local o citoquina en tejidos no

clínicos disponibles respaldan la eficacia y seguridad de DMAE como CH3

los riñones. En el hígado, DMAE inhibió la tasa de fosforilación de TNFa estimulado

metabolismo celular aeróbico, la formación excesiva de tales radicales (positivos)

Se han atribuido al DMAE varias propiedades como reafirmante de la

3.1 Estudios de eficacia de DMAE

La eficacia de un gel de DMAE al 3 % se demostró recientemente en un 3.4

productos para el cuidado de la piel del rostro como tretinoína, α- o β-

similares para las formulaciones de gel de DMAE y placebo.[19]

En conjunto, los datos de estos tres estudios documentan la

3.2 Seguridad del DMAE tópico

de DMAE (3 %) era seguro hasta aproximadamente 1 año de aplicación

se usa tópicamente a diario durante un máximo de 1 año, sin efectos adversos

4. Mecanismo(s) potencial(es) de acción de DMAE:

(acetilcolina) de la contracción del músculo facial? ¿Hay un papel para 16 semanas.[17]

Parámetro Semana 2 Semana 4 Semana 6 semana 12 semana 16 Semana 18 (2 semanas

este sistema colinérgico. una población heterogénea de receptores muscarínicos de acetilcolina

4.1 Epidermis células granulares y basales, respectivamente, mientras que se ha demostrado

envejecimiento climatérico se caracteriza por una mayor distensibilidad y viscosidad

crecimiento.[40]Dependiendo del momento y la especificidad de la interacción

5. Papel potencial de DMAE en el envejecimiento de la

purificada, esterilizada y secada al vacío, recibió la aprobación de la FDA en 2002. 7. Conclusiones

glabelares de moderadas a severas asociadas con la actividad del músculo

crecimiento, la diferenciación y la locomoción.

Como se indica a lo largo de este artículo, queda mucho trabajo por

Regulation of collagen metabolism and cell growth by epidermal growth factor

(Received October 26, 1987/January 11, 1988) - EJB 87 1190

Quantification of D N A content and D N A synthesis Expression of data

DAYS IN CULTURE Fig. 2. Effect of increasing m-EGF concentrations on the metabolism of

growth of the cells depending upon exposure time of EGF COLLAGEN

Specificity of EGF effects

Fig. 4. Eflect of increasing ascorbate concentrations on the synthesis o j

COLLAGEN TYPE I TYPEIII

Fig. 6 . Effects of EGF and ascorbate on collagen components produced

Collagen types produced by human skin fibroblasts

Regulación del metabolismo del colágeno y el crecimiento celular por factor de

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