JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND SCIENCES

Electronic ISSN: 2656-3088

Homepage: https://www.journal-jps.com

REVIEW ARTICEL JPS |Volume 6 | No. 2 | APRIL-JUNI | 2023 |pp.741-749

Analysis and Validation of Metformin in Human Plasma Using the HPLC Method

Analisis dan Validasi Obat Metformin Dalam Plasma Manusia Menggunakan Metode
HPLC

Mulidini1*) , Asri Yuniar Dwi Nanda 1), Nissa Khalida Hanum 1), Lina Nurfadhila 1), Marsah
Rahmawati Utami 1)
1
Program Studi Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Singaperbangsa Karawang, ,
Karawang, Jawa Barat, Indonesia.
e-mail Author: mulidini1405@gmail.com

ABSTRACT
Analytical method validation is a process that ensures accurate, specific, reproducible and stable analysis of
the analytical range appropriate to the intended use. Analytical method validation include all procedur for that
demonstrate quantitative measure of analytes such as from plasma. Determination of the concentration of a
drug in plasma is complex because plasma is a complex matrix. The drug identified was metformin. Metformin
is a drug orally antihyperglycemic agent used in the management of type II diabetes mellitus. Methods for
quantitation of metformin in human plasma or in pharmaceutical form, one of which uses High Performance
Liquid Chromatography (HPLC). HPLC is a liquid chromatography technique used to process various mixture
components. This article review aims to make it easier for readers and future researchers to determine the
presence of metformin in human plasma by using the HPLC analysis method accurately. This research method
uses the literature review method using national journals and international journals through the google scholar
database. Methods by KCKT or HPLC that can be used to validate the determination of metformin levels in
plasma include RP-HPLC, HPLC, HPLC-UV, and U-HPLC. The most commonly used method with the best
validity, efficiency and time estimation is RP-HPLC..

Keywords: Analysis; Validation; Metformin; Plasma; HPLC.

ABSTRAK
Validasi metode analisis adalah suatu proses dalam menjamin akurasi analisis, reprodusibel, spesifik dan
stabil dari kisaran analisis sesuai dengan tujuan penggunaan. Validasi metode analisis mencakup semua
prosedur yang menunjukkan pengukuran kuantitatif analit dari matriks biologis seperti plasma. Penentuan
konsentrasi suatu obat dalam plasma merupakan hal yang kompleks karena plasma merupakan matriks yang
kompleks. Metformin adalah agen antihiperglikemik oral yang digunakan dalam pengelolaan diabetes mellitus
tipe II. Metode untuk kuantisasi metformin dalam plasma manusia atau dalam bentuk farmasi, salah satunya
menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau High Performance Liquid Chromatography
(HPLC). HPLC adalah teknik kromatografi cair yang digunakan untuk mengolah berbagai komponen
campuran.

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 741

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com
Review artikel ini bertujuan untuk mengetahui, memastikan, dan mengkorfirmasi metode analisis keberadaan
metformin dalam plasma manusia dengan menggunakan metode analisis HPLC secara akurat untuk pembaca
dan peneliti selanjutnya. Tujuan validasi metode analisis untuk memastikan dan menjamin bahwa metode
analisis tersebut sudah sesuai dan memenuhi persyaratan. Metode penelitian ini menggunakan metode
literature review dengan menggunakan jurnal nasional dan jurnal internasional melalui basis data google
scholar. Metode secara KCKT atau HPLC yang dapat digunakan untuk validasi penetapan kadar metformin
dalam plasma diantaranya RP-HPLC, HPLC, HPLC-UV, dan U-HPLC. Metode yang paling umum digunakan
serta validitas, efisiensi dan estimasi waktu yang paling baik adalah RP-HPLC.

Kata kunci: Analisis; Validasi; Metformin; Plasma; HPLC.

PENDAHULUAN karena itu penggunaan matriks plasma dalam

pengukuran kadar obat merupakan metode yang
Proses dalam menjamin suatu analisis
praktis dan nyaman untuk peninjauan
menjadi lebih spesifik, akurat, reprodusibel, serta
farmakokinetik klinis (Fauziah et al., 2017).
stabil dari kisaran analisis yang sesuai dengan
Metformin (CAS: 657-24-9) [N,N
tujuan penggunaan merupakan pengetian umum
Dimethylimidodicarbonimide diamide] adalah agen
dari validasi metode analisis. Parameter analisis
antihiperglikemik oral yang digunakan dalam
yang harus dipertimbangkan saat memvalidasi
pengelolaan diabetes mellitus tipe II. Ketersediaan
metode analisis dijelaskan dan ditentukan
hayati oralnya sekitar 50-60%, dengan konsentrasi
bagaimana caranya. Parameter tersebut meliputi
plasma puncak rata-rata 1,73 ± 0,54 μg/ml pada
presisi, akurasi, selektif, batas kuantitas (LOQ),
sekitar 2,6 ± 1,2 jam setelah dosis oral tunggal 850
batas seleksi (LOD), linearitas dan jangkauan,
mg (Yusuf et al., 2010). Metformin adalah agen
kekuatan metode, serta kekuatan metode
antihiperglikemia oral dari kelas biguanid.
(Franciska et al., 2022). Sebelum melakukan studi
Mekanisme aksi utama adalah menurunkan kadar
farmakologi praklinis dan klinis, metode analisis
glukosa untuk mengurangi glukoneogenesis di hati.
terlebih dahulu harus divalidasi agar mendapatkan
Fosforilasi protein CREB menyebabkan penurunan
metode yang sesuai untuk analisis obat dalam
dalam ekspresi gen untuk proses glukoneogenesis
matriks biologi (Fauziah et al., 2017).
serta asam lemak bebas ikut mengalami penutunan
Validasi tersebut mencakup berbagai
akibat substrat glukoneogenesis. Disisi lain,
prosedur untuk menunjukkan metode spesifik
metformin dapat meningkatkan penyerapan
pengukuran dari kuantitatif analit berdasarkan
glukosa yang dimediasi insulin di daerah jaringan
matriks biologis yaitu urin, serum, plasma atau
perifer. Senyawa metformin diserap atau
darah yang mampu diandalkan dan reprodusibel
mengalami absorbsi di daerah saluran pencernaan.
untuk tujuan penggunaan yang dimaksud (Fauziah
Optimalisasi penyerapan metformin tidak dapat
et al., 2017). Plasma merupakan suatu cairan yang
bekerja dengan baik apabila dikonsumsi
kompleks bertindak sebagai media transport yang
bersamaan dengan makanan. Metformin tidak
membawa zat-zat didalam aliran darah. Penentuan
berubah setelah dieksresi dan tidak menghasilkan
konsentrasi merupakan hal yang kompleks dalam
metabolit dalam urin maupun ASI (Gumantara et al.,
matriks biologis seperti plasma karena plasma
2017). Obat yang lebih dari 70% berikatan dengan
termasuk matriks yang kompleks (Lestari, 2014). Uji
protein plasma dapat mempengaruhi efek
bioekivalensi terkait jaminan mutu plasma obat
terapeutik dari obat tersebut (Fauziah et al., 2017).
penting bagi pasien untuk menilai efikasi dan
Banyak metode tersedia untuk kuantisasi
keamanan obat yang diuji. Pemeriksaan
metformin dalam plasma manusia, salah satunya
konsentrasi obat pada plasma adalah salah satu
menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
metode akurat dalam memastikan mutu obat serta
(KCKT) atau High Performance Liquid
mengoptimalkan terapi untuk pelayanan medis
Chromatography (HPLC). Teknik KCKT atau HPLC
(Tania et al., 2016). Sebagian besar sel jaringan
sering diaplikasikan dalam analisis konsentrasi obat
dialiri dengan plasma atau cairan jaringan. Oleh

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 742

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com
pada plasma karena kemampuannya untuk daripada fase diam. Terdapat perbedaan yang
memisahkan zat yang dapat mempengaruhi signifikan terhadap metode HPLC dengan RP-
analisis dan untuk mendeteksi serta menentukan HPLC (Tabel 2) seperti pada penelitian Magdy et
konsentrasi obat dalam yang sangat kecil (Tania et al., 2023 yang menggunakan metode HPLC dan
al., 2016). HPLC adalah metode kromatografi cair, Shakoor A et al., 2018 untuk metode RP-HPLC
biasa digunakan dalam pengolahan berbagai dalam analisis metformin pada plasma darah.
komponen-komponen campuran. Selain itu HPLC Berdasarkan hasil tabel 1, data-data yang
juga dapat digunakan untuk mengidentifikasi dan diperoleh metode yang dapat digunakan untuk
mengukur senyawa pada langkah pengembangan validasi penetapan kadar metformin dalam plasma
obat serta telah digunakan di berbagai negara secara HPLC sangatlah beragam diantaranya RP-
dalam beberapa tahun terakhir. Karakteristik HPLC HPLC, HPLC, HPLC-UV, dan U-HPLC. Dalam
adalah kecepatan, efisiensi dan biaya analisis yang review article ini terdapat 10 artikel menggunakan
lebih rendah. Tujuan dari HPLC yaitu pemisahan metode RP-HPLC, 4 artikel menggunakan metode
molekul dalam waktu sesingkat mungkin. Sebab HPLC, 4 artikel menggunakan metode HPLC-UV, 1
peningkatan hasil analisis serta meminimalisir artikel menggunakan metode U-HPLC. RP-HPLC
waktu analisis sangat penting (Annissa et al., 2020). telah banyak dilaporkan dalam penentuan
Dengan adanya kajian artikel ini diharapkan metformin sendiri atau dalam kombinasi dengan
pembaca dan penelitian selanjutnya menjadi lebih obat lain. Metode RP-HPLC yang sensitif dan
mudah dalam mengetahui keberadaan metformin selektif telah divalidasi untuk penentuan metformin
dalam plasma manusia dengan menggunakan dan vildagliptin dalam formulasi farmasi dan sampel
metode analisis HPLC secara akurat. biologis. Dari 8 artikel tersebut, menunjukkan ketika
metformin dikombinasikan dengan obat lain dalam
METODE plasma darah memperoleh hasil yang dapat
diterima, spesifisitas tinggi, presisi yang akurat,
Metode penelitian ini memakai metode
sederhana, cepat yang dapat direproduksi dengan
literature review yang diawali dengan pengumpulan
metode RP-HPLC dalam berbagai kondisi.
berbagai jurnal yang akan ditinjau. Literature review
Stabilitas ini menunjukkan metode HPLC
adalah suatu metode yang sistematis dalam
sepenuhnya divalidasi sesuai dengan pedoman
pengkajian topik tertentu yang serupa dari berbagai
ICH dan FDA. Metode ini memberikan waktu
junal agar menghasilkan suatu tulisan berisi topik
pemulihan berkisar antara 100, 13 -100,29%, dan
tersebut. Jurnal-jurnal yang akan digunakan dalam
telah dikembangkan pemisahan dan estimasi yang
literature review adalah jurnal terakreditasi yang
cepat dari 3 obat antidiabetes, dalam plasma
terbit dari tahun 2010 sampai tahun 2023, yang
manusia dalam waktu 3 menit. Metode ini divalidasi
berasal dari jurnal nasional dan jurnal internasional
dalam kisaran 0,05 – 5 μg/ml. Selain itu efektivitas
melalui basis data google scholar. Peneliti mencari
biaya adalah keuntungan yang dikembangkan dari
dengan kata kunci “analisis dan validasi”,
metode ini.
“metformin”, “plasma”, dan “HPLC”. Secara
HPLC menjadi metode analis yang umum
keseluruhan, sumber pustaka jurnal yang
digunakan dalam analisis kuantitatif dalam produk
digunakan sebanyak 23 jurnal. Jurnal-jurnal yang
obat-obatan. HPLC memiliki prinsip injeksi sampel
akan di review disaring berdasarkan judul dan
ke dalam kolom yang berisi fase diam, kemudian
abstrak sehingga didapatkan hasil jurnal sebanyak
fase gerak akan dipompa menggunakan tekanan
19 jurnal.
yang tinggi menuju kolom. Adanya pemisahan
sampel berdasarkan pada suatu partisi sampelnya
HASIL DAN DISKUSI
yaitu antara fase gerak dan fase diam. Fase gerak
Penelusuran jurnal dengan rentang tahun bertujuan agar mampu mengelusi sampel sehingga
2010 sampai tahun 2023 dengan kriteria perbedaan dapat sampai kepada detektor. HPLC fase terbalik
metode yang ditinjau mengenai analisis dan validasi atau reversed phase HPLC menggunakan fase
metformin pada plasma, disajikan dalam tabel 1. gerak yang nonpolar. Adapun pKa da pH dari analit
Pada dasarnya RP-HPLC merupakan metode tersebut bertujuan untuk menentukan dan
pengembangan dari HPLC, terdapat perbedaan memastikan waktu retensi dan juga bentuk dari
pada kedua metode tersebut seperti fase gerak puncak kromatogram. Penambahan dapar dan fase
yang digunakan pada RP-HPLC lebih polar gerak dapat mempengaruhi bentuk dari puncak

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 743

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com
kromatogram. Hasil review menunjukan rata-rata Pemisahan pasangan ion diikuti dengan deteksi UV
penelitian sebelumnya banyak menggunakan fase dilakukan pada sampel plasma manusia yang di
gerak yang merupakan campuran asetonitril deproteinisasi. Pemisahan dilakukan pada kolom
dengan dapar fosfat yang memiliki variasi dalam Discovery Reversed Phase C-18 (250 · 4,6 mm, 5
perbandingannya. Adapun fase gerak yang umum lm) dengan deteksi UV pada 233 nm. Fase gerak
digunakan dalam analisis metformin pada plasma yang terkandung 34% asetonitril dan 66% fase air.
darah dengan menggunakan metode RP-HPLC Adapun lain, fase gerak yang terdiri dari 0,1% asam
dan HPLC yaitu asetonitril sebagai pelarut non polar fosfat (pH 3,0) dan asetonitril dalam mode gradien
dan untuk pelarut polar menggunakan dapar fosfat. dengan suhu oven kolom dipertahankan pada 30
Asetonitril merupakan senyawa dengan sifat polar °C dan elusi dipantau oleh detektor UV pada 227
aprotik, sedangkan untuk metanol sendiri bersifat nm. Pada 4 artikel tersebut didapatkan metode
polar protik untuk fase gerak pada penelitian lain. HPLC-UV tervalidasi untuk kuantisasi polar dan
Asetoniril memiliki lebih banyak kelebihan analit non-polar, secara simultan secara teratur,
dibandingkan dengan metanol seperti dalam segi dalam jumlah sampel kecil dengan akurasi dan
elusi yang lebih tinggi, cut off UV yang rendah, serta presisi yang cukup. Metode ini menggunakan fase
memiliki titik didih yang tinggi. gerak sederhana dengan lebih sedikit fase diam
Dalam metode HPLC, terdapat 2 jenis non polar sehingga prosedur ekstraksi menjadi
sistem elusi yaitu isocratic system dan juga sederhana, ekonomis dan efisien.
gradient system. Sistem isokratik dalam proses Terdapat pembahasan lain mengenai
pemisahannya menggunakan pelarut dengan metode bioanalisis untuk menentukan materi
komposisi yang sama (perbandingannya tetap) dan metformin dalam perkembangan manusia,
konstan setiap waktunya. Sedangkan sistem Berbagai metode bioanalitik telah dikembangkan
gradien, dalam prosesnya fase gerak (mobile antara lain kromatografi gas (KG) dengan
phase) dipompa dengan perbandingan setiap spektrometri massa dan kromatografi cair (KC)
pelarut yang berbeda dalam kurun waktu tertentu. dengan deteksi UV atau spektrometri massa
Sistem isokratik memiliki kemampuan pemisahan metode GC dengan prosedur derivatisasi
yang kurang signifikan dibandingkan dengan kompleks. Metode KC yang dilaporkan dengan
system gradien. Hal ini mengakibatkan sistem deteksi UV telah menunjukkan tingkat konsentrasi
isokratik memiliki puncak kromatogram yang lebih spesifitas batas terbawah dari kuantifikasi/lower
lebar dibandingkan gradien (Vidushy et al., 2017). limit of quantification (LLOQ). Selain itu,
Diketahui bahwa dari 19 penelitian 15 diantaranya spektrometri massa tandem-LC mengalami
menerapkan elusi dengan sistem isokratik dan 4 beberapa kekurangan, seperti membutuhkan waktu
sisanya memilih sistem gradien. Kemasan kolom kromatografi yang lama, kurangnya sensitivitas dan
pada kromatografi fase balik yang banyak penggunaan prosedur persiapan sampel yang rumit
digunakan adalah jenis octadecylsilane (C18) dan termasuk mengekstrasi plasma. Di antara studi
octylsilane (C8). Beberapa penelitian terkait lebih analisis kuantitatif sebelumnya untuk metformin
menggunakan kolom C18. Digunakannya kolom dalam plasma manusia, nilai LLOQ berkisar dari 1
C18 fase terbalik (250 mm × 4,6 mm id, ukuran ng/mL sampai 50 ng/mL. Dari jumlah tersebut,
partikel 5 μm) dan fase gerak terdiri dari metanol penelitian yang digunakan LC-MS/MS dengan
dengan penyangga kalium dihidrogen fosfat konsentrasi LLOQ 1 ng/mL, dan rasio S/N adalah
berfungsi untuk pemisahan campuran terner. 20. Meskipun konsentrasi LLOQ lebih tinggi, waktu
Eksperimen pendahuluan menunjukkan bahwa analisis dipersingkat menjadi 2 menit dengan
konsentrasi dapar fosfat, pH, suhu, dan laju aliran mengubah kondisi fase gerak A dan B dengan
adalah faktor penting yang akan dipelajari untuk menambahkan 0,1% asam format. Dalam studi lain,
menentukan kromatin yang paling optimum pada metode analisis linier dalam kisaran 2–2000 ng/mL,
kondisi kromatografi. dengan total waktu pengoperasian 3,4 menit.
Sedangkan pada metode HPLC-UV Sehingga pada studi ini, bahwa UHPLC-HRMS
sampel plasma diencerkan minimal selama pre- dapat digunakan dalam deteksi dan analisis
treatment sampel sehingga sedikit volume sampel kuantitatif metformin plasma pada manusia. Metode
yang dibutuhkan. Sampel plasma hanya analisis yang dikembangkan menunjukkan linieritas
membutuhkan satu langkah presipitasi protein yang yang baik, sensitivitas, akurasi dan presisi, dan
membuat metode lebih cepat dan lebih mudah. pengulangan.

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 744

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com
 Metode analisis ini dengan UHPLC-HRMS beberapa metode teknik ekstraksi protein yang
dapat diterapkan untuk studi farmakokinetik membuat jumlah sampel analisis besar, sulit,
berbagai obat. Pada fase gerak RP-HPLC Berbagai mahal, dan memakan waktu. Oleh karena itu perlu
komposisi dan rasio fase gerak digunakan untuk adanya metode yang sensitif, cepat dan mudah
penentuan sensitifitas dan selektifitas metformin untuk menentukan metformin dalam plasma. pH
dan vildagliptin dengan metode kromatografi cair, fase berair diatur menjadi 5,2 dengan
sebelumnya metanol dan asetonitril digunakan menggunakan asam ortofosfat encer dan fase
dalam berbagai rasio dengan buffer fosfat. Pada gerak dijalankan secara isokratis. Laju aliran fase
HPLC-UV fase gerak mengandung asetonitril 34% gerak dipertahankan pada 1,3 ml/menit dengan
dan fase air 66%. Beberapa penelitian yang volume injeksi adalah 20 mL. Sebelum digunakan,
dilaporkan menggunakan metode fase gerak fase gerak dihilangkan gasnya dengan
gradien, menggunakan fase teknik ekstraksi padat menggunakan gas helium.
atau dengan metode yang sangat kompleks dan

Tabel 1. Hasil Review Metode analisis obat metformin pada plasma darah manusia

No. Metode Fase Kolom Elusi Laju Alir Detektor LOQ Pustaka
Gerak (mL/min)
1. RP-HPLC MeOH: Thermo Isokratik 0,8 PC220 2.18 Shakoor A et
ACN: dapar Hypersil UV-Vis μg/mL al., 2018
fosfat ODS C18 (212 nm)
(5:30:65, (5µm, 4.6
v:v) pada mm × 250
pH 3,5 mm)
2. RP-HPLC MeOH : MAGELLE Isokratik 1 DAD (235 0.18 Sebaiy e al.,
0,025 N C18 (5 nm) μg/mL 2018
KH2PO4 μm, 150
pH 3,20 mm × 4.60
(85:15 v/v) mm)
3. RP-HPLC MeOH: Onyx Isokratik 0,4 PDA (220 0.373 Balamurugan
ACN: Monolithc nm) ug/m et al., 2018
KH2PO4 C18 (100 μg/mL l
(pH 4±0,5) mm, 5μm)
(33,9:10:56,
1)
4. RP-HPLC MeOH : Thermostat Isokratik 1,2 RS DAD 0.136 marie A et
0,05 M ed RS (227 nm) μg/mL al., 2023
buffer Column
KH2PO4 + Compartme
TEA 0,05% nt
(78:22, v/v)
5. HPLC MeOH Hypersil Isokratik 0.814 DAD (235 0.50 Magdy et al.,
:0,05 M BDS C18 nm) μg/mL 2023
buffer (250 mm ×
KH2PO4 4.6 mm)
pH 7
(67:33%
v/v)
6. HPLC- ACN : fase Discovery Isokratik 1.3 UV (233 0.125 Chheri, 2014
UV air (10 mM Reversed nm) μg/mL

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 745

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com
 KH2PO4 + Phase C18
10 mM (250 · 4.6
sodium mm)
lauril sulfat)
(34:66 v/v)
pH: 5.2
7. RP-HPLC 0,03 M Resolve CN Isokratik 2,0 PDA (240 0.05 Yusuf et al.,
amonium (8 × 100 nm) μg/mL 2015
fosfat (pH mm, 4-µm)
7) : ACN - Guard
(28:72, v/v) Pak CN 4-
µm
8. HPLC ACN : Alltima C18 Isokratik 0,7 UV-Vis 7.8 Gabr et al.,
KH2PO4 (250 Waters μg/mL 2010
(34:66) mm×4.6 486 (236
mm, 5 μm) nm)
9. HPLC- 0.1% Asam Phenyl gradien 1.0-1.5 UV (227 0.01 Pawan et al.,
UV fosfat (pH (150 mm nm) μg/mL 2017
3) : ACN 4.6 mm, 5.0
μm)
10. RP-HPLC NaH2PO4 X-Terra Isokratik 1.0 UV (235 5.936 Ashutosh et
(pH 4.0) : C18 (4,6 x nm) μg/mL al., 2015
ACN (70:30 15 mm, 3,5
v/v) μm)
11. RP-HPLC ACN : Grace Isokratik 1.0 LC-100 Pandya R et
buffer vyadyec UV (237 al., 2014
KH2PO4 genesis CN nm)
(adj pH 7.0) (150 × 4.6
(72:25) mm, 4 μm)
12. HPLC- UV air : dapar S5W Isokratik 0.8 UV (232 0.1 Abdessadek
fosfat (ad Symmetry nm) μg/mL M et al., 2015
pH 3.2) C8 (250 x
(10:90) 4,6 mm, 5
μm)
13. RP-HPLC ACN : Dionex C18 gradien 1 UV (227 1,96 Hasanah et
buffer fosfat (150 mm x nm) μg/mL al., 2016
dan ACN : 4,6 mm, 5
TFA 0,1% μm)
14. RP-HPLC dapar fosfat C18 (4,6 x Isokratik 1 238 nm 0.45 Nilesh et al.,
(pH 3,0) : 250 mm, μg/mL 2019
metanol (30 5μm)
: 70, v/v )
15. UHPLC asam BEH HILIC gradien 0,4 HRMS 5 ng/ml Kang et al..
format (100×2,1 mL/menit (130-71 2020
0,1%, mm, 1,7μm) nm)
asetonitril +
asam
format
0,1%
16. HPLC ACN : SPE-MIP gradien 1 UV-Vis 1,733 Rohayati et
dapar fosfat MAA (150 x (227 nm) μg/mL al., 2015
(55:45) dan 4,6 mm)

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 746

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com
 ACN : TFA
0,1%
(55:45)
17. HPLC ACN: 0,01 100 RP Isokratik 1.25 UV-Vis 50 Troja E et al.,
M dapar C18 (125 × ng/mL 2016
fosfat + 4.0 mm i.d.,
0.3% SDS 5 µm)
(adj
pH=6.0)
(32.5:67.5
v/v) dan
18. HPLC-UV ACN : Sherisorb Isokratik 1.5 UV-Vis 1.4 Alshishani A
20mM C1 (250 x (235 nm) μg/mL et al., 2016
dapar 4.6 mm, 10
monobasic μm)
fosfat : TEA
(20:80:0,1
v/v)
19 RP-HPLC 0.05 M Enable C18 Isokratik 0.6 UV (220 0.373 Prasad P et
dapar G (250 x nm) μg/mL al, 2015
KH2PO4(p 4.6 mm, 5
H 4.5) : μm)
MeOH:
ACN
(60:20:20)

Keterangan : ACN= Asetonitril; TFA = Trifluoro Acid; MAA = Asam Metakrilat; PDA= Photodiode Array; DAD =
Diode array detector; HRMS = High Resolution Mass Spectrometry

Tabel 2. Perbandingan metode HPLC dengan RP-HPLC

Karakteristik Metode
HPLC RP-HPLC
Temperatur kolom 45oC [5] 35oC[1]
Ukuran partikel 5 um 5 um
Volume injeksi 20 ul 10 ul
Dimensi kolom 250 mm × 4.6 mm 150 mm × 4.60 mm
Laju alir 0.814 ml/menit 1 ml/menit

KESIMPULAN estimasi waktu yang baik adalah RP-HPLC,

dibandingkan bioanalisis yang menggunakan
Berdasarkan review artikel diatas, dapat
metode HPLC-UV dan UHPLC.
disimpulkan masing-masing metode bionalisis
dalam menguji penetapan kadar metformin dalam
REFERENSI
plasma darah secara KCKT memiliki berbagai
keuntungan yang beragam. Metode yang paling Abdessadek, M., Tadmori, A. E., Ahmed, E. A.,
umum digunakan serta validitas, efisiensi dan Diarra, M., Magoul, R., Ajdi, F., & Khabbal, Y.

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 747

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com
 (2015). Simple HPLC-UV Method For Fransiska, A. N., Masyrofah, D., Putri, G. K., Malik,
Determination Of Metformin In Human L. H., Wulan Birru, P., & Putri, T. R. (2022).
Plasma And Erythrocytes Application To Analisis Senyawa Obat dalam Sampel
Therapeutic Drug Monitoring. International Biologis Plasma Darah. Syntax Idea, 4(5),
Journal Of Pharmacy And Pharmaceutical 905-912.
Sciences, 35-39. Hasanah, A. N. (2016). Optimasi Kondisi
Alshishani, A., Makahleh, A., Yap, H. F., Pemisahan Glibenklamid Kombinasi
Gubartallah, E. A., Salhimi, S. M., & Saad, B. Metformin Dengan KCKT-SPE MIP
(2016). Ion-Pair Vortex Assisted Liquid- Akrilamid. Indonesian Journal Of
Liquid Microextraction With Back Extraction Pharmaceutical Science And Technology,
Coupled With High Performance Liquid 3(2), 38-46.
Chromatography-UV For The Determination Kang, Y. J., Jeong, H. C., Kim, T. E., & Shin, K. H.
Of Metformin In Plasma. Talanta, 161, 398- (2020). Bioanalytical Method Using Ultra-
404. High-Performance Liquid Chromatography
Annissa, S., Musfiroh, I., & Indriati, L. (2020). Coupled With High-Resolution Mass
Perbandingan Metode Analisis Instrumen Spectrometry (UHPL-CHRMS) For The
HPLC dan UHPLC. Article Review, Farmaka, Detection Of Metformin In Human Plasma.
17(3), 189-196. Molecules, 25(20), 4625.
Ashutosh, K. S., Manidipa, D., Seshagiri, R. J. V. L. Lestari, S. W. (2014). Validasi Metode
N., & Gowri, S. D. (2015). New Validated Penetapan Kadar Aliskiren dalam Plasma
Stability Indicating RP-HPLC Method For Darah secara In Vitro menggunakan
Simultaneous Estimation Of Metformin And Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).
Alogliptin In Human Plasma. J Chromatogr Magdy, G., Al-Enna, A. A., Belal, F., El-Domany, R.
Sep Tech, 6(6), 1-6. A., & Abdel-Megied, A. M. (2023). Analytical
Balamurugan, K., Mishra, K., & Suresh, R. 2018. Quality-By-Design Approach For
Optimization and Validation of the Development And Validation Of HPLC
Simultaneous Determination of Vildagliptin Method For The Simultaneous Estimation Of
and Metformin, in Bulk and Formulation by A Omarigliptin, Metformin, And Ezetimibe:
Reverse Phase HPLC Method Using D- Application To Human Plasma And Dosage
Optimal Experimental Design. Journal of Forms. BMC Chemistry, 17(1), 1-10.
Pharmaceutical and Scientific Innovation, 12 Nikam, N., Maru, A., Jadhav, A., & Malpure, P.
(8), 1-12. (2019). Analytical Method Development and
Brocks, D., Gabr, R. Q., & Padwal, R. S. (2010). Validation of Metformin Hydrochloride by
Determination Of Metformin In Human using RP HPLC with ICH Guidelines.
Plasma And Urine By High-Performance International Journal of Trend in Scientific
Liquid Chromatography Using Small Sample Research and Development, 3(3), 415-419.
Volume And Conventional Octadecyl Silane Pandya, R. H., Rathod, R., & Maheswari, D. G.
Column. Journal Of Pharmacy & (2014). Bioanalytical Method Development
Pharmaceutical Sciences, 13(4), 486-494. And Validation For Simultaneous
Chhetri, H. P., Thapa, P., & Van Schepdael, A. Determination Of Linagliptin And Metformin
(2014). Simple HPLC-UV Method For The Drugs In Human Plasma By RP-HPLC
Quantification Of Metformin In Human Method. Pharmacophore, 5(2), 202-218.
Plasma With One Step Protein Precipitation. Patra, R., Kollati, Y., NS, S. K., & Dirisala, V. R.
Saudi Pharmaceutical Journal, 22(5), 483- (2021). Valsartan In Combination With
487. Metformin And Gliclazide In Diabetic Rat
Fauziah, F., Kardela, W., Rasyid, R., & Silvi, M. Model Using Developed RP-HPLC Method.
(2017). Validasi Metode Analisis Α- Future Journal Of Pharmaceutical Sciences,
Mangostin Dalam Plasma Darah Manusia 7, 1-10.
Secara In Vitro Dengan Kromatografi Lapis Porwal, P. K., & Talele, G. S. (2017). Development
Tipis-Densitometri. Jurnal Farmasi Higea, of validated HPLC-UV method for
9(2), 96-102. simultaneous determination of metformin,
amlodipine, glibenclamide and atorvastatin in

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 748

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com
 human plasma and application to protein
binding studies. Bulletin of Faculty of
Pharmacy, Cairo University, 55(1), 129-139.
Prasad, P. B. N., Satyanaryana, K., &
Krishnamohan, G. (2015). Development And
Validation Of A Method For Simultaneous
Determination Of Metformin And Saxagliptin
In A Formulation By RP-HPLC. American
Journal Of Analytical Chemistry, 6(11), 841.
Rohayati, A., Hasanah, A. N., Saptarini, N. M., &
Aryanti, A. D. (2015). Optimasi Kondisi
Pemisahan Glibenklamid Kombinasi
Metformin Dalam Plasma Darah
Menggunakan KCKT. Indonesian Journal Of
Pharmaceutical Science And Technology,
2(3), 96.
Sebaiy, M. M., El-Adl, S. M., Baraka, M. M., &
Hassan, A. A. (2020). Rapid RP-HPLC
Method For Simultaneous Estimation Of
Metformin, Pioglitazone, And Glimepiride In
Human Plasma. Acta Chromatographica,
32(1), 16-21.
Shakoor, A., Ahmed, M., Ikram, R., Hussain, S.,
Tahir, A., Jan, B. M., & Adnan, A. (2020).
Stability-Indicating RP-HPLC Method For
Simultaneous Determination Of Metformin
Hydrochloride And Vildagliptin In Tablet And
Biological Samples. Acta Chromatographica,
32(1), 39-43.
Sholikhah, A. I. (2019). Gambaran Pola
Penggunaan Metformin Terhadap Kadar
Kreatinin Serum Pada Pasien Diabetes
Melitus Tipe 2 Di Rumah Sakit" X". Social
Clinical Pharmacy Indonesia Journal, 4(2),
66-74.
Troja, E., Deda, L., & Boçari, G. (2015). Ion-Pair
HPLC Method For The Quantification Of
Metformin In Human Plasma And Its
Application To A Pharmacokinetic Study.
Methodology.
Yusuf, A., Alvi, S. N., & Hammami, M. M. (2015).
Development and validation of RP-HPLC
method for the determination of metformin in
human plasma. WJPPS, 4(7), 128-38.

Journal of Pharmaceutical and Sciences |Volume 6|No.2|APRIL-JUNI|2023|pp.741-749 749

Electronic ISSN : 2656-3088
Homepage: https://www.journal-jps.com