Taq-polymerase
Taq-polymerase (ofte forkortet med Taq pol) er en termostabil DNA-polymerase navngivet efter den termofile bakterie Thermus aquaticus, fra hvilken den oprindeligt blev isoleret af Thomas D. Brock i 1965.[1] Taq pol anvendes ofte i PCR.
T. aquaticus er en bakterie, der lever i varme kilder, hvorfor dens proteiner er termostabile. Heriblandt Taq-polymerasen, der blev identificeret[1] som værende i stand til at klare de proteindenaturerende betingelser (høj temperatur), der behøves for at gennemføre flere cykler i polemeriseringsmetoden PCR.[2] Derfor erstattede den DNA-polymerasen fra E. coli, som tidligere blev anvendt i PCR.[3] Taq pols temperaturoptimum for aktivitet er 75-80 °C, med en halveringstid på 9 minutter ved 97,5 °C, og den kan replikere en DNA-streng på 1000 basepar på under 10 sekunder ved 72 °C.[4]
En af ulemperne ved Taq pol er dens lave nøjagtighed i inkorporeringen af baser. Den mangler en 3' til 5' exonuklease korrekturaktivitet,[4] hvilket betyder, den ikke kan fjerne fejlinkorporerede nukleotider, mens dens fejlrate er målt til omkring 1 per 9000 nukleotider.[5] Nogle andre termostabile DNA-polymeraser, der besidder en korrekturaktivitet, er blevet isoleret fra andre termofile bakterier og archaea, så som Pfu-polymerase, og disse bruges nu i stedet for (eller i kombination med) Taq pol for en amplifikation med større nøjagtighed.
Taq pol laver DNA-produkter, der har A-overhæng i deres 3'-ender. Dette kan være nyttigt i TA-kloning, hvor en kloningsvektor (eksempelvis et plasmid), der har et 3'-T-overhæng, bruges, hvormed A-overhænget i PCR-produktet komplementeres og således gør ligering af PCR-produktet ind i plasmidvektoren.
Se også
[redigér | rediger kildetekst]
Referencer
[redigér | rediger kildetekst]- ^ a b Chien A, Edgar DB, Trela JM (1976). "Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophile Thermus aquaticus". J. Bact. 174: 1550-1557. PMID 8432.
{{cite journal}}: CS1-vedligeholdelse: Flere navne: authors list (link) - ^ Saiki, RK (1988). "Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase". Science. 239: 487-91. doi:10.1126/science.2448875. PMID 2448875. Arkiveret fra originalen 19. december 2008. Hentet 3. februar 2009.
{{cite journal}}: Ukendt parameter|coauthors=ignoreret (|author=foreslået) (hjælp) - ^ Saiki, RK (1985). "Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia". Science. 230 (4732): 1350-4. doi:10.1126/science.2999980. PMID 2999980. Arkiveret fra originalen 19. december 2008. Hentet 3. februar 2009.
{{cite journal}}: Ukendt parameter|coauthors=ignoreret (|author=foreslået) (hjælp) - ^ a b Lawyer FC; et al. (1993). "High-level expression, purification, and enzymatic characterization of full-length Thermus aquaticus DNA polymerase ...". PCR Methods Appl. 2: 275-287. PMID 8324500.
{{cite journal}}: Eksplicit brug af et al. i:|author=(hjælp) - ^ Tindall KR and Kunkel TA (1988). "Fidelity of DNA synthesis by the Thermus aquaticus DNA polymerase". Biochemistry. 27: 6008-6013. doi:10.1021/bi00416a027. PMID 2847780.