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Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas
ISSN 0717 7917
Portulaca oleracea
Volumen 9, Nmero 3, Mayo de 2010

Editorial - Silveira et al. (Brazil Venezuela Chile). Revisin | Review - Bermello Crespo. (Cuba) Los recursos genticos y el conocimiento etnofarmacolgico cubanos. Su proteccin mediante patentes. Artculos originales | Original articles - Cuassolo et al. (Argentina) Aspectos de la comercializacin y control de calidad de las plantas medicinales ms vendidas en una comunidad urbana del NO de la Patagonia Argentina. - Hilgert et al. (Argentina) La medicina herbolaria en el contexto urbano. Estudio de Caso en un Barrio de la ciudad de Tandil, Argentina. - Thounaojam et al. (India) Antioxidant and free radical scavenging activity of Sida rhomboidea. Roxb methanolic extract using different in vitro models. - Prabhakaran et al. (India) Evaluation of the hepatoprotective activity of Portulaca oleracea L. on D-galactosmaine-induced hepatic injury in rats. - Oliveira et al. (Brazil) Chemical and Biological Investigations of Pilocarpus spicatus essential oils - Becerra et al. (Chile) Actividad de aceites esenciales de Canelo, Queule, Bailahun y Culn frente a hongos fitopatgenos. - Lpez Hernndez et al. (Cuba) Estudio de secado por aspersin de extractos de Plecthranthus amboinicus, Ocimun tenuiflorum, Passiflora incarnata, Matricaria recutita y Melissa officinalis. Comunicaciones | Communications - Perrotta and Arambarri (Argentina) Celtis ehrenbergiana (Celtidaceae): meristematic tissue in the thorns. - Ferreira et al. (Brazil) Effects of gamma radiation on the chemistry and antibacterial activity of artichoke leaves. - Carvalho et al. (Brazil) New Brazilian rules for herbal medicines.
Publicada por | Published by: Cooperacin Latinoamericana y Caribea en Plantas Medicinales y Aromticas Indexada por | Indexed by: SCOPUS, Science Citation Index Expanded (SCISEARCH), Journal Citation Reports/Science Edition, Biological Abstracts y BIOThomson Reuters Master Journal List , Chemical Abstracts (CAS), NAPRALERT, CAB International (CAB Abstracts), GlobalHEALTH, Index Copernicus, IMBIOMED, LATINDEX, QUALIS, REDALYC, Biblioteca Virtual da Saude (BVS).
2010 The Authors 2010 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), i BLACPMA ISSN 0717 7917 Comit Editorial | Editorial Board
EDITOR JEFE | EDITOR IN CHIEF Jos L. Martnez (Santiago, Chile) EDITOR CIENTFICO | SCIENTIFIC EDITOR Peter Taylor (Caracas, Venezuela) EDITOR EJECUTIVO | MANAGING EDITOR Dmaris Silveira (Brasilia, Brasil) EDITORES | EDITORS Carla Delporte (Santiago, Chile) Gabino Garrido (Antofagasta, Chile) Martha Gattuso (Rosrio, Argentina) Jeannette Gavilln (San Juan, Pto. Rico) Leonora Mendoza (Santiago, Chile) Horacio Olivo (Iowa, USA) Edgar Pastene (Concepcin, Chile) Vernica Rivas (Monterrey, Mxico) Gabriela Ricciardi (Chaco, Argentina) Luis A. Simeoni (Braslia, Brasil) Beatriz Varela (Buenos Aires, Argentina) EDITOR HONORARIO | HONORARY EDITOR Jorge Rodrguez Chanfreau (La Habana, Cuba) PRESIDENTE DE CLACPMA (Cooperacin Latinoamericana y del Caribe en Plantas Medicinales y Aromticas) Jos Mara Prieto (London, UK)
CONSEJO EDITORIAL ADVISORY BOARD
EDITORIAL
Julio Alarcn (Chilln, Chile) Talal Aburjai (Amman, Jordan) Arnaldo Bandoni (Buenos Aires, Argentina) Elizabeth Barrera (Santiago, Chile) Armando Cceres (Guatemala, Guatemala) Salvador Caigueral (Barcelona, Espaa) Bruce Cassels (Santiago, Chile) Geoffrey Cordell (Illinois, USA) Rosa Degen (Asuncin, Paraguay) Marco Dehesa (Quito, Ecuador) Olga Lock (Lima, Per) Rodolfo Juliani (New Jersey, USA) Patricia Landzuri (Armenia, Colombia) Norman Farnsworth (Illinois, USA) Elisabeth Williamson (London, UK) Michael Heinrich (London, UK) Peter Houghton (London, UK) Luis Kanzaki (Brasilia, Brasil) Ana Ladio (Bariloche, Argentina) Francisco Morn (La Habana, Cuba) Patrick Moyna (Montevideo, Uruguay) Pulok Mukkerjee (Jadavpur, India) Luca Rastrelli (Salerno, Italia) Vicente Martnez (Guatemala, Guatemala) John AO Ojewole (Natal, Sudfrica) Edison Osorio (Medelln, Colombia) Mahendra Rai (Maharashtra, India) Elsa Rengifo (Iquitos, Per) Jos Luis Ros (Valencia, Espaa) Lionel Robineau (Pointe Pitre, Guadalupe) Gloria Saavedra (Cochabamba, Bolivia) Marcelo Wagner (Buenos Aires, Argentina) Talal Zari (Arabia Saudita)
BLACPMA es una publicacin de la Cooperacin Latinoamericana y Caribea de Plantas Medicinales y Aromticas This is an open access article distributed under the terms of a Creative Commons Attribution-Non-Commercial-No Derivative Works 3.0 Unported Licence. () which permits to copy, distribute and transmit the work, provided the original work is properly cited. You may not use this work for commercial purposes. You may not alter, transform, or build upon this work. Any of these conditions can be waived if you get permission from the copyright holder. Nothing in this license impairs or restricts the author's moral rights. Este es un articulo de Acceso Libre bajo los trminos de una licencia Atribucin Creativa Comn-No Comercial-No trabajos derivados 3.0 Internacional. Usted es libre de copiar, distribuir y comunicar pblicamente la obra bajo las condiciones siguientes: Reconocimiento. Debe reconocer los crditos de la obra de la manera especificada por el autor o el licenciador (pero no de una manera que sugiera que tiene su apoyo o apoyan el uso que hace de su obra). No comercial. No puede utilizar esta obra para fines comerciales. Sin obras derivadas. No se puede alterar, transformar o generar una obra derivada a partir de esta obra. Al reutilizar o distribuir la obra, tiene que dejar bien claro los trminos de la licencia de esta obra. Alguna de estas condiciones puede no aplicarse si se obtiene el permiso del titular de los derechos de autor. Nada en esta licencia menoscaba o restringe los derechos morales del autor.
2010 The Authors 2010 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), ii BLACPMA ISSN 0717 7917 Nota Editorial / Editorial Note
BLACPMA, 2002 2010.

Jos Luis MARTNEZ Universidad Santo Toms, Talca, Chile.
On May 10, 2002 BLACPMA was presented for the first time at the San Martin Events Center of Buenos Aires, Argentina on the occasion of the Latin American Phytochemistry Congress. Today, I want to share with you some memories on this new BLACPMA birthday. Firstly, we must mention Jorge Rodrguez Chanfreau (CIDEM, La Habana, Cuba), who originally accompanied me with the BLACPMA idea, as well as some other old friends who are still collaborating, Arnaldo Bandoni (Argentina), Francisco Moron (Cuba), Patrick Moyna (Uruguay) and Lionel Germossen Robineau (Guadalupe), all co-founders of BLACPMA. I would like to give thanks to other friends who were important in the life of BLACPMA, Patricia Arenas (Argentina), Gabino Garrido (Cuba), Elsa Anselmi (Espaa). A special mention goes to Dr. Jos Mara Prieto (Inglaterra), the former Scientific Editor, who worked
with us for almost five years. I feel very sad for his departure, because such an important friend will be hard to replace. I want to thank those who continue to support BLACPMA: Guillermo Padrn (Cuba), Aurelio San Martin (Chile), Claudio Laurido (Chile) and Alvaro Portilla, a friend at the Ministry of Agriculture of Colombia. Over time, others will make their contribution, making BLACPMA one of the most important journals in the field of medicinal plants. Finally, I want to give thanks to all the colleagues who are sending manuscripts. This will contribute to the growth and prestige of BLACPMA thus guaranteeing a successful future.
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Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas Vol.9 (3) 2010 | ii
2010 The Authors 2010 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), 151-152 BLACPMA ISSN 0717 7917 Editorial
Regulating herbal medicine.

[Regulacin de la medicina herbal]
Dmaris SILVEIRA1, Peter TAYLOR2, Jos Luis MARTNEZ3
1
Universidad de Brasilia, Brasil. 2Instituto Venezolano de Investigaciones Cientficas, Venezuela. 3Universidad Santo Toms, Talca, Chile.
Enviado / Sent 08/05/2010.
Over the last decades, phytotherapy has attained new status in the world public health scenario. The increasing use of herbal medicines, due at least in part to the growth of the elderly population and their associated chronic diseases (Grnwald and Buettel, 1996), has made this market attractive to investors. In fact, the global market for herbal medicines stands at over USD$ 60 billion annually (Sharma et al., 2008). The World Health Organization currently recommends and encourages the inclusion of traditional herbal medicines in health care programs, as these drugs are available at low cost (WHO, 2002, 2003, 2008). Indeed, following this recommendation, and considering the worldwide trend towards such treatment, several Latin American countries have included medicinal plants and herbal medicines as major topics in their health policy agenda. On the other hand, the growth of this practice has also been cause for concern to authorities monitoring its impact on public health. Ever since the first issue, BLACPMA has played an important role in this context, publishing advances in medicinal plant research in Latin America and further afield. The special issues dedicated to the regulation of herbal medicines [BLACPMA 6(4) in 2007 and 8(10) in 2009], as well as herb-drug interactions [BLACPMA 7(2) and 7(6) in 2008] are examples of how this journal is contributing to evidence-based herbal medicine use. In this vein, the present issue of BLACPMA contains several interesting papers covering ethnomedicine, phytotherapy and herbal medicine in Latin America. One paper addresses the lack of regulation in a medicinal plant market, where several problems such as lack of quality, incorrect labeling and misidentified species were identified.
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Another recurrent situation in Latin America is the increasing use of foreign plant species by local communities, rather than native ones. The introduction of heavily advertised, and more expensive, transnational herbal preparations, has led to a decline in the use of local traditional remedies. However, advances in herbal drug research at a national level are combating this decline. Government financing agencies have helped to stimulate studies into the efficacy of native plant species and there is an effort by several research groups to scale up the production of local medicinal plants stimulating domesticated crop production and developing new techniques to improve the quality control and manufacturing processes for the production of herbal medicines derived from local species. Latin American regulatory agencies have been discussing the possibility of harmonizing the regulation of herbal medicine, within the framework of the Pan American Network of Drug Regulatory Harmonization (PANDRH). Mercosur has been promoting international seminars on herbal medicines (MERCOFITO). In the last 2 months, the Brazilian health minister has published several normative documents on herbal drugs and medicines in order to improve the quality, efficacy and safety of the products available in the Brazilian market. Nevertheless, there is still plenty of work to be done in the medicinal plant field. The editorial board of BLACPMA invites Latin American and medicinal plants researchers throughout the world to contribute to the development of effective, safe and accessible phytotherapy.
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Silveira et al.
Regulating herbal medicine
Gruenwald J, Buettel K. 1996. The European Phytotherapeutics Market/Figures, Trends Analyses. Drugs made in Germany 39(1): 6-11. Sharma A, Shanker C, Tyagi LK, Singh M, Rao CV. 2008. Herbal Medicine for Market Potential in India: An Overview. Acad J Plant Sci 1(1): 26-36.
WHO. 2002. Estrategia de la OMS sobre medicina tradicional 2002-2005. World Health Organization, Geneva. WHO. 2003. Tradicional medicine. <http://www.who.int/en/>. (Retrieved 02/09/2003. WHO. 2008. Informe sobre la salud en el mundo 2008: La atencin primaria de salud, ms necesaria que nunca. World Health Organization, Geneva.
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2010 The Authors 2010 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), 153-165 BLACPMA ISSN 0717 7917 Revisin | Review
Recursos Genticos y Conocimiento Etnofarmacolgico Cubanos. Su proteccin mediante patentes

[Cuban genetic resources and ethnopharmacological knowledge. Their protection by patents]
Addiss BERMELLO CRESPO CIDEM, La Habana, Cuba
Abstract
Within traditional human knowledge Ethnopharmacology is prominent. In Cuba, around 1170 botanical species have been documented with proven or attributed medicinal properties. In order to determine the patent protection of pharmaceutical products based on Cuban genetic resources, the databases of patents in the Cuban Office of the Industrial Property (OCPI) web site and PATENSCOPE in the World Organization of the Intellectual Property web site were consulted. The genetic resources present in the 45 recovered Cuban patents were identified; of these only 2 are autochthonous. The immense majority of the terrestrial phytogenetic resources are attributable to ethnopharmacological knowledge. Only 7 of the patents have requested foreign registration. The management of patents based on Cuban genetic resources and ethnopharmacological knowledge is poor, in spite of our great genetic wealth, biodiversity and preservation of the cultural traditions in this area. Keywords: ethnopharmacology; genetic resources; Cuban patents; medicinal plants.
Resumen
Dentro del conocimiento tradicional se destaca la Etnofarmacologa. En Cuba se han documentado alrededor de 1170 especies botnicas con propiedades medicinales comprobadas o atribuidas por la poblacin. A fin de conocer la proteccin mediante patentes de productos farmacuticos a base de recursos genticos cubanos, se consultaron las Bases de Datos de patentes en el sitio Web de la Oficina Cubana de la Propiedad Industrial (OCPI) y PATENSCOPE en el sitio Web de la Organizacin Mundial de la Propiedad Intelectual. Se identifican los recursos genticos presentes en las 45 patentes cubanas recuperadas, de los que slo 2 son autctonos. La inmensa mayora de los recursos fitogenticos terrestres pertenecen al conocimiento etnofarmacolgico. Slo 7 de las patentes han demandado su registro en el extranjero. La gestin de patentes con base a los recursos genticos y conocimiento etnofarmacolgicos es pobre, a pesar de nuestra gran riqueza gentica, biodiversidad y preservacin de las tradiciones culturales en esta temtica. Palabras Clave: etnofarmacologa; recursos genticos; patentes cubanas; plantas medicinales
Lista de abreviaciones: CIDEM Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos; OCPI - Oficina Cubana de la Propiedad Industrial; OMPI Organizacin Mundial de la Propiedad Intelectual.
Recibido | Received: January 18, 2010 Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: April 24, 2010 Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010 Declaracin de intereses | Declaration of interests: The author has no competing interests. Financiacin | Funding: none declared. This article must be cited as: Addiss Bermello Crespo. 2010. Recursos Genticos y Conocimiento Etnofarmacolgico Cubanos. Su proteccin mediante patentes. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3): 153-165. [EPub May 25, 2010}
*Contactos | Contacts: E-mail: addissbc@infomed.sld.cu
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Bermello Crespo
Recursos genticos, el conocimiento etnofarmacolgico y las patentes cubanas
INTRODUCCIN En el mundo actual se impone el desarrollo econmico basado en el conocimiento, la innovacin y la creatividad. En este contexto la Propiedad Intelectual ha asumido gran importancia, e impacta nuestras vidas con repercusiones socio-econmicas, tecnolgicas y culturales. No existe una definicin completamente reconocida para el concepto conocimiento tradicional. La Organizacin Mundial de la Propiedad Intelectual (OMPI) utiliza este trmino (Blakeney, 1999) para referirse a las innovaciones y creaciones basadas en la tradicin y que resultan de la actividad en la industria, la tecnologa, la literatura y el arte. Es un conocimiento inherentemente dinmico y sujeto a un desarrollo continuo de comprobacin, adaptacin y creacin, especialmente influenciado por la globalizacin y los procesos migratorios actuales. Este conocimiento, con frecuencia, est fuertemente vinculado con los recursos genticos (WIPO, 2006). Los recursos genticos como tal no son creaciones del intelecto, pero s lo son los conocimientos asociados a ellos, que se pueden proteger mediante las diferentes formas de la Propiedad Intelectual, fundamentalmente las patentes. Dentro del conocimiento tradicional y vinculado a los recursos genticos se destaca la Etnofarmacologa, que consiste en la observacin, identificacin, descripcin e investigacin experimental de los efectos de las drogas utilizadas en la medicina tradicional. Los recursos genticos son todos aquellos materiales de origen vegetal o animal con unidades funcionales de la herencia y con un valor actual o potencial. La diversidad biolgica constituye la variabilidad entre los organismos vivientes de todas las fuentes, es decir, los organismos terrestres y acuticos, as como los complejos ecolgicos de los que forman parte; esto incluye diversidad dentro de las especies, entre especies y de ecosistemas (Colectivo de autores, 2003). Actualmente los trpicos son cuna y museo de la biodiversidad (Jablonski et. al., 2006). En comparacin con otras reas geogrficas, en ellos se han originado el doble de las especies biolgicas y se han extinguido en menor cuanta. La mayor biodiversidad del planeta se encuentra en los pases tropicales en vas de desarrollo. La creciente demanda de los recursos genticos para su uso en la biotecnologa, los frmacos, los cosmticos, la agricultura, etc. han incrementado su valor econmico, cientfico y comercial. La utilizacin de plantas y
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animales potencialmente tiles es una opcin viable para el desarrollo sustentable, reducir la pobreza y generar riqueza en estos pases. Sin embargo, actualmente algunas especies han estado desapareciendo de manera desproporcionada: entre 50 y 100 veces por encima del ritmo natural. A ese ritmo, en mil aos no quedar ninguna, incluido el Homo sapiens. Como el ritmo de desaparicin de especies es superior al de los descubrimientos de nuevas sustancias procedentes de los recursos naturales (Vilches et. al., 2008), cada vez que desaparece una estamos perdiendo una alternativa para el futuro. Sin embargo, la amenaza ms grave a la diversidad biolgica es la degradacin y la prdida directa de los ecosistemas (bosques, humedales, arrecifes de coral, etc.) (Fuentes, 2004). El Estudio Nacional sobre la Diversidad Biolgica de la Repblica de Cuba (Vales et. al., 1998), define al archipilago cubano como el de mayor diversidad biolgica de las Antillas, con el ms alto ndice de endemismo de la regin, donde se destaca la flora por la riqueza total de especies y su endemismo. La flora cubana cuenta con cerca de 8 000 especies de plantas terrestres de las cuales entre 45 y 50% son endmicas (Serrano y Fernndez, 2005; Fuentes, 2004). En el conocimiento de las plantas medicinales cubanas existe una amplia informacin, desde los trabajos clsicos de Juan T. Roig (Roig, 1988, 1974), pasando por la sistemtica labor de la Revista Cubana de Plantas Medicinales (ISSN 1028-4796), publicada desde 1996 por la Comisin Nacional Asesora en Investigaciones de Plantas Medicinales del MINSAP. A fin de conocer la presencia de los recursos genticos y el conocimiento etnofarmacolgico en las patentes cubanas, se consult la Base de Datos de patentes concedidas en Cuba en el sitio Web de la Oficina Cubana de la Propiedad Industrial (OCPI). En la estrategia de bsqueda se solicitaron las patentes cuyos titulares fueran de Cuba y con la clasificacin internacional A61K, es decir, productos farmacuticos. La Clasificacin Internacional de Patentes (WIPO, 2009) es un sistema jerrquico de smbolos de lenguaje para la clasificacin de las patentes y los modelos de utilidad segn las diferentes reas de la tecnologa a que pertenecen. Para saber a cuales patentes de las recuperadas se les haba solicitado su registro en el extranjero, se consult la Base de Datos PATENSCOPE en el sitio Web de la OMPI, que contiene las solicitudes internacionales de patentes por la va del Tratado de Cooperacin en Materia de Patentes o PCT (Patent
Bermello Crespo
Cooperation Treaty). En la estrategia de bsqueda se solicitaron las patentes cuyo pas de origen fuera Cuba y que contuvieran la clasificacin internacional A61K. RESULTADOS En el sitio Web de la OCPI, se recuperaron 182 registros que, al analizarlos en detalle, resultaron en 45 patentes relacionadas con los recursos genticos
Tabla 1. Recursos genticos en las patentes cubanas. Nr Recurso Gentico (a) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 Allophylus cominia (L) Sw Aloe vera (L.) N.L. Burm Aloe barbadensis Mill Carapa guianensis Aubl. Catharanthus roseus (L.) G. Don Centella erecta (L.f.) Fern Chamomilla recutita (L.) Rauschert (Matricaria recutita L.) Clusia rosea Jacq Hibiscus elatus Sw Hippeastrum equestre (Aiton) Herb Justicia pectoralis Jacq;, Mangifera indica L Morinda royoc L. Mussa paradisiaca L. Orthosiphon grandiflorus Terracciano Passiflora incarnata L. Petiveria alliacea L. Pinus caribaea Morelet Piper aduncum L. s.l. Plantago major L., Rhizophora mangle L. Roystonea regia (Kunth) O.F. Cook Saccharum officinarum L. Sapium jamaicense Sw. Solanum nigrum (Solanum nigrum var. americanum Mill). Zingiber officinale Roscoe Thalassia testudinum Banks & Sol. Chlorella vulgaris Arthrospira sp Apis mellifera L. (Propleo) Apis mellifera L. (Cera) Crustceos Blomia tropicalis Dermatophagoides pteronyssinus Dermatophagoides siboney Rhopalurus Junceus Spirobolus marginatus Sabellastarte magnifica Condylactis gigantea Stoichactis helianthus Dolomitas Peloides
nacionales cuyos pormenores se describen en el Anexo 1. El texto completo de las patentes se puede obtener en el sitio Web de la OCPI. La Tabla 1 brinda informacin acerca de los recursos genticos presentes en las patentes recuperadas, que abarcan mayoritariamente plantas, algunos animales (principalmente insectos) y pocos recursos minerales.
Nombre vulgar Palo de Caja Sbila Najes Vicaria Oreja de Ratn Manzanilla Copey Majagua Amapola Tilo Mango Curamaguey, Paja de ratn, Garan, Pii pii Pltano Pasiflora, Pasionaria Anam Pino Macho Platanillo de Cuba Llantn, Llantn mayor Mangle Rojo Palma real Caa de Azcar Yerba Mora Jengibre Hierba de tortuga o Seiba. Microalga Microalga (Spirullina) Propleo Cera Crustceos caro domstico caro domstico caro domstico Alacrn Cocos (ciempis) Anlido marino Anmona marina Anmona marina Carbonatos Fangos minero-medicinales
Conocimiento Etnofarmacolgico (b) SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI
Cant. de Patentes 1 2 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 2 1 1 1 1 1 4 1 1 1 1 2 1 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1
SI
SI
a) Tropicos.org. Missouri Botanical Garden. <http://www.tropicos.org/>.(Fecha de consulta: 10 Agosto 2009) b) Fuentes VR, Expsito A. 1995.
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En la Tabla 2 se exponen los solicitantes de las patentes. La Figura 1 muestra el comportamiento en el tiempo de las solicitudes cubanas. La OCPI slo publica las patentes otorgadas, que en este caso abarcan desde 1984 hasta 2005.
Tabla 2. Solicitantes de las patentes cubanas Nr. Solicitudes Solicitante 1 5 Centro Nacional de Investigaciones Cientficas 2 4 Laboratorios Dalmer S.A 3 4 Universidad de la Habana 4 3 Instituto de Farmacia y Alimentos 5 2 Bordier, Misael; Martnez, Milagros Ma.; Salgado, Hctor; Bory, Guillermo 6 2 Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria 7 2 Instituto Superior de Medicina Militar "Dr. Luis Daz Soto" 8 2 Ministerio de Salud Pblica 9 1 Centro de Bioactivos Marinos 10 1 Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos 11 1 Centro de Investigaciones de Energa Solar 12 1 Centro de Investigaciones Pesqueras 13 1 Centro de Qumica Farmacutica 14 1 Centro Internacional de Salud "La Pradera" 15 1 Centro Nacional de Biopreparados 16 1 Centro Nacional de Termalismo Vctor Santamarina 17 1 Crdova Siveiro, Eleuterio Eugenio 18 1 Empresa Laboratorio Farmacutico "8 de marzo" 19 1 Empresa Laboratorio Farmacutico "Mario Muoz" 20 1 Facultad de Agronoma de Sabaneta 21 1 Facultad de Biologa, Universidad de La Habana 22 1 Grupo Empresarial de Producciones Biofarmacuticas y Qumicas 23 1 Instituto Politcnico "Villena - Revolucin" 24 1 Instituto Superior de Ciencias Mdicas de la Habana 25 1 Instituto Superior Politcnico "Jos Antonio Echeverria " 26 1 Lpez, Ovadys 27 1 Lpez, Ovadys; Mesa, ngel 28 1 Ministerio de las Fuerzas Armadas Revolucionarias 29 1 Unin Geolgica Minera
cubanas por subgrupos y subclases de la Clasificacin Internacional y en las Figuras 2 y 3 sus representaciones grficas.
Tabla 3. Frecuencia por subgrupos de la clasificacin internacional Subgrupo Frecuencia Subgrupo Frecuencia A61K 35/78 A23L 1/48 A61K 35/64 A61K 31/20 A61K 31/45 A61K 31/722 A61K 35/56 A61K 35/80 A61K 37/54 A23J A23L A23L 1/29 A23L 1/59 A23P 1/02 A61J 3/08 A61K 25/00 A61K 31/19 A61K 31/40 A61K 31/45 A61K 33/06 A61K 37/02 A61K 38/57 A61K 39/00 A61K 39/35 A61K 7/48 22 3 3 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 A61K 7/50 A61K 9/00 A61K 9/02 A61K 9/06 A61K 9/20 A61L 2/00 A61P 1/04 A61P 1/06 A61P 15/02 A61P 17/02 A61P 17/06 A61P 19/02 A61P 35/00 A61P 39/06 B01D 9/02 C01F 1/00 C07C 51/41 C07C 59/245 C07D 491/147 C07K 1/14 C07K 14/81 C08B 37/08 C12N 9/20 C12N 9/64 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
De la base de datos PATENSCOPE se recuperaron 111 solicitudes, de las cuales slo 6 aparecen entre las 45 patentes cubanas anteriormente referidas. En el Anexo 2 se brindan los detalles de estas patentes junto a una solicitud, an no otorgada en Cuba, por lo que no se encuentra en el Anexo 1. En la Tabla 5 se muestra la distribucin de las patentes cubanas solicitadas en el extranjero por subgrupos de la Clasificacin Internacional. Esta clasificacin ha variado en el tiempo hacindose ms detallada, por lo que la misma no coincide con la de las patentes tramitadas hace algunos aos.
Atendiendo a la Clasificacin Internacional de Patentes, en las Tablas 3 y 4 se muestra detalladamente la distribucin de las patentes
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Tabla 4. Frecuencia por subclases de la clasificacin internacional Subclase Frecuencia Subclase Frecuencia A61K A61P A23L C07C C07K C12N A23J 52 8 6 2 2 2 1 A23P A61J A61L B01D C01F C07D C08B 1 1 1 1 1 1 1
Tabla 5. Patentes cubanas solicitadas al extranjero. Solicitudes por subgrupos de la clasificacin internacional Nr. Subclase Solicitu Nr. Subclase Solicitude des s 1 A23L 1/30 1 14 A61K 36/9068 1 2 A61K 8/11 1 15 A61K 39/106 1 3 A61K 8/97 1 16 A61K 45/06 1 4 A61K 9/28 1 17 A61P 3/10 1 5 A61K 31/20 1 18 A61P 5/28 1 6 A61K 31/45 1 19 A61P 13/08 2 7 A61K 31/60 1 20 A61P 25/06 1 8 A61K 36/185 1 21 A61P 29/00 1 9 A61K 36/19 1 22 A61Q 19/00 1 10 A61K 36/28 1 23 C07C 29/76 1 11 A61K 36/42 1 24 C07C 29/88 1 12 A61K 36/53 1 25 C07C 31/02 1 13 A61K 36/68 1 26 C07C 31/125 1
En el Anexo 3 se brinda la descripcin de las claves de la Clasificacin Internacional en las patentes recuperadas.
Figura 1. Patentes cubanas de recursos genticos. Solicitudes por aos de presentacin.
9
SOLICITUDES
0 1984 1986 1988 1990 1992 1994 AOS 1996 1998 2000 2002 2004
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Figura 2. Patentes cubanas de recursos genticos. Solicitudes por subgrupos de la clasificacin internacional.
A61K 35/78 A23L 1/48 A61K 35/64 A61K 31/20 A61K 31/45 A61K 31/722 A61K 35/56 A61K 35/80 A61K 37/54 OTROS
A61K 35/78, 22
OTROS, 40 A23L 1/48, 3 A61K 35/64, 3 A61K 31/20, 2 A61K 31/45, 2 A61K 31/722, 2 A61K 35/56, 2 A61K 35/80, 2 A61K 37/54, 2
Figura 3. Patentes cubanas de recursos genticos. Subclases de la clasificacin internacional en las patentes.
8 C12N C08B C07K C07D C07C C01F B01D A61P A61L A61K A61J A23P A23L A23J
F R
0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 NMERO DE LA PATENTE
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DISCUSIN El carcter multitnico de la identidad nacional cubana, tributaria fundamentalmente de dos grandes troncos, el hispano y el africano, unido al respeto de nuestro pueblo por las tradiciones de otras etnias (chinos, caribeos, etc.) insertadas posteriormente en nuestra nacin, ha facilitado la preservacin de tradiciones culturales patrimoniales a la que no escapa la etnofarmacologa (Beyra et. al., 2004; Hernndez y Volpato, 2004; Volpato y Godinez, 2004; Volpato et. al., 2009). En la etnofarmacologa cubana el campo ms estudiado ha sido la etnobotnica, donde las encuestas realizadas han evidenciado no slo la rica tradicin popular sobre el conocimiento de las plantas medicinales, sino tambin el amplio uso que de ellas hace nuestra poblacin. En estos trabajos se han documentado alrededor de 1170 especies con propiedades botnicas medicinales comprobadas o atribuidas por la poblacin (Fuentes y Expsito, 1995; Scull et. al., 1998; Hernndez y Volpato, 2004; Godinez y Volpato, 2008; Volpato y Godinez, 2004; Volpato et. al., 2009). Algunas plantas endmicas de Cuba se citan en el conocimiento etnobotnico (Fuentes y Expsito, 1995; Hernndez y Volpato, 2004). En Cuba el inters por las plantas medicinales abarca, junto al beneficio antropolgico y farmacolgico, la necesidad de disponer de recursos propios en diferentes circunstancias relacionadas con el bloqueo de los Estados Unidos contra Cuba (Gardfield y Santana, 1997; Kirkpatrick, 1997; AAWH, 1997). A partir de 1991 se introdujo el saber tradicional en la atencin primaria de la salud (MINSAP 1992a, 1992b, 1993). Esta estrategia se fortaleci en 1999 con un programa nacional para introducir y generalizar la medicina natural y tradicional (MINSAP, 1999; Fuentes, 1996; Soler y Porto, 1997; Acosta, 2001) que se mantiene en nuestros das. El inters por la utilizacin de las propiedades bioactivas de las plantas ha trascendido tambin a otros campos como el de los plaguicidas (Pino et. al., 2008). El recurso que aparece en el mayor nmero de las patentes cubanas recuperadas, con 4, es la caa de azcar (Tabla 1), seguidos por la sbila, la vicaria, el pltano, el anam, una microalga, productos apcolas, los crustceos y cierta anmona marina, con 2 patentes cada uno. Cmo recursos autctonos se
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identificaron slo dos, una especie de pino, Pinus caribaea Morelet, y un caro domstico, Dermatophagoides siboney. La inmensa mayora de los recursos fitogenticos terrestres presentes en estas patentes pertenecen al conocimiento etnofarmacolgico. Aunque no siempre las patentes se refieren a su uso tradicional, en ocasiones, el conocimiento objeto de la patente se deriva del tradicional, pero ste no se declara en el estado del arte o la referencia es muy general. Del comportamiento en el tiempo de las solicitudes cubanas (Figura 1) podemos apreciar las pocas patentes solicitadas cada ao, con un mximo de 8 en 1998. Las 45 patentes recuperadas fueron solicitadas por 29 entidades cubanas (Tabla 2). Se destacan el Centro Nacional de Investigaciones Cientficas, con 5 solicitudes, y Laboratorios Dalmer S.A. y la Universidad de La Habana, con 4 cada una. De acuerdo a la Clasificacin Internacional de Patentes, las patentes recuperadas abarcan 49 subgrupos (Tabla 3, Figura 2), siendo el A61K 35/78 (Preparaciones medicinales de constitucin indeterminada que contiene el material de algas, lquenes, hongos o plantas, o sus derivados, por ejemplo las medicinas herbarias tradicionales) el ms recurrente, pues est presente en el 49 % de las patentes. El subgrupo A61K 35/78 se denomina actualmente como A61K 36/00. La distribucin en las patentes de las subclases de la Clasificacin Internacional (Tabla 4) permite conocer con detalle el objeto de las patentes (ver Anexo 3). A continuacin de la mayoritaria subclase A61K, le sigue la A61P, con 8 patentes con actividad teraputica de compuestos qumicos o preparaciones medicinales y la A23L con 6 en las que se protege tambin la preservacin de comidas o comestibles en general. El grfico de la Figura 3 facilita el anlisis de las semejanzas y diferencias entre las solicitudes. Se observa que muchas patentes slo poseen la subclase A61K. La solicitud Nr. 31 (ver Anexo 1) es la que abarca ms subclases con 5. Se puede tambin apreciar la semejanza en las patentes de la distribucin por subclases, por ejemplo, las solicitudes 28, 32, 38 y 39 se catalogan slo con las subclases A61K y A61P. Slo 7 de las patentes cubanas han demandado su registro en el extranjero (Anexo 2). Estas solicitudes abarcan desde 1994 hasta el 2009 y
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nicamente en el 2004 se realiz ms de una solicitud; en algunos aos no se realizaron solicitudes. Las instituciones cubanas solicitantes en el extranjero son 5, siendo los Laboratorios Dalmer S.A. la de mayor cantidad de solicitudes con 3. Las otras 4 instituciones han presentado respectivamente una solicitud. En la distribucin de las patentes cubanas solicitadas en el extranjero por subgrupos de la Clasificacin Internacional (Tabla 5), se observa que las patentes recuperadas abarcan 26 subgrupos, siendo el A61P 13/08, (Frmacos para desrdenes del sistema unitario: de la prstata), el nico presente en 2 patentes. CONCLUSIONES La gestin de patentes con base a los recursos genticos y etnofarmacolgicos es pobre en comparacin con nuestra gran riqueza gentica, biodiversidad, conocimiento y preservacin de las tradiciones culturales en esta temtica. La presencia de un alto endemismo en nuestros recursos, particularmente en la flora, potencia la importancia de esta situacin. La falta de atencin a la utilizacin y proteccin de nuestros valiosos recursos nos puede llevar a la prdida de muy probables y valiosas alternativas farmacolgicas para el presente y futuro. REFERENCIAS
Acosta L. 2001. Produccin de plantas medicinales a pequea escala: una necesidad de la comunidad. Rev Cubana Plant Med 2:6366. AAWH. 1997. Denial of food and medicine. The impact of the U.S. embargo on health and nutrition in Cuba. American Association of World Health. Washington DC. http://www.cubasolidarity.net/aawh.html. (Consultado noviembre 10, 2009) Beyra A, Len M, Iglesias E, Ferrndiz D, Herrera R, Volpato G, Godinez D, Guimarais M, Alvarez R. 2004. Estudios etnobotnicos sobre plantas medicinales en la provincia de Camagey (Cuba). An Jard Bot Madr 61(2):185-204. Blakeney M. 1999. Qu es el conocimiento tradicional? Por qu se le debe proteger? Quin debe protegerlo? Para quin?: Comprensin de la cadena de valores. http:// (Documento OMPI/IPTK/RT/99/3). www.wipo.int/edocs/mdocs/tk/es/wipo_iptk_rt_99/ wipo_iptk_rt_99_3.doc. (Consultado septiembre 25, 2009).
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Anexo 1. Patentes cubanas relacionadas con el conocimiento etnofarmacolgico y/o los recursos genticos nacionales Nr. Ttulo Fecha de Clasificacin Nr. de Solicitante Publicacin Internacional Solicitud 1 Procedimiento para la obtencin de Catharanthina y Vindolina a partir de Catharanthus roseus G. Don Procedimiento para la obtencin de Ajmalicina a partir del Catharanthus roseus G. Don Ungento de Quitina Forma farmacutica estable con efectos antiasmticos. Su procedimiento de obtencin Mtodo de obtencin de Propleo Mtodo de purificacin de inhibidores de proteasas de la anmona marina Stoichactis helianthus y el producto as obtenido 1984.09.06 A61K 35/78 36153 Empresa Laboratorio Farmacutico "8 de marzo" Empresa Laboratorio Farmacutico "Mario Muoz" Universidad de la Habana Centro Nacional de Investigaciones Cientficas Ministerio de Salud Pblica Universidad de la Habana
1986.12.17
A61K 35/78 217/86 C07D 491/147 A61K 9/06 C08B 37/08 A61K 35/78 A61K 35/64 A61K 37/54 23/88 29/88 113/88 200/88
3 4 5 6
1988.03.03 1988.03.16 1988.07.08 1988.12.12
Procedimiento para la obtencin de Fosfolipasa 1989.01.26 A2 de la anmona Stoichactis helianthus y el producto as obtenido Procedimiento para la purificacin de un polipptido con actividad anticolinrgica de la anmona marina Condylactis gigantea Extracto inyectable de Aloe barbadensis antiviral e inmunoactivador. Procedimiento de obtencin* Jarabe Vegetal Antiasmtico* 1989.02.08
C12N 9/20 A61K 37/54 C07K 1/14 A61K 37/02 A61K 35/78
23/89
Universidad de la Habana
32/89
Universidad de la Habana
1989.12.04
236/89
Instituto Superior de Medicina Militar Ministerio de Salud Pblica Centro Nacional de Investigaciones Cientficas
10 11
1989.02.13
A61K 35/78 A61K 31/045
34/89 185/90
Composicin farmacutica que contiene mezcla 1990.11.30 de alcoholes alifticos primarios superiores para el tratamiento de hipercolesterolemia y la hiperlipoproteinemia tipo II as como estimulante de la conducta sexual en animales y humanos. Forma farmacutica estable con efecto sobre sistema inmunolgico. su procedimiento de obtencin Base Universal* 1990.12.04
12
A61K 35/78
187/90
Centro Nacional de Investigaciones Cientficas Ministerio de las Fuerzas
13
1991.03.04
A61K 35/78
27/91
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Armadas Revolucionarias 14 Policonasol, una mezcla de alcoholes alifticos 1992.09.29 primarios superiores para el tratamiento de complicaciones atereoesclerticas tales como la hiperagregabilidad plaquetaria, los accidentes isqumicos, trombosis e incluso su efectividad contra lceras gstricas qumicamente inducidas y su proceso de obtencin de la caa Procedimiento de obtencin y validacin de un extracto hidroalcoholico de cuproclorofilinas a partir de microalgas y producto as obtenido Pomada de usos mltiples en la Medicina Veterinaria Productos con actividad hipoglicemiante, mtodo para su obtencin 1992.11.05 A61K 31/045 107/92 Laboratorios Dalmer S.A
15
A61K 31/40 A61K 35/80 A61L 2/00 A61K 35/78 A61K 35/78 A61K 31/19 A61K 31/45 A61K 35/64
121/92
Centro de Investigaciones de Energa Solar Facultad de Agronoma de Sabaneta Instituto Superior de Ciencias Mdicas de la Habana Laboratorios Dalmer S.A
16 17
1993.10.07 1993.10.22
88/93 95/93
18
Una mezcla natural compuesta por alcoholes 1993.11.09 alifticos primarios superiores obtenidos de la cera de abejas para el tratamiento de las lceras gstricas y duodenales que presenta tambin actividad antiinflamatoria. Composicin Antitumoral 1994.01.11
101/93
19
A61K 35/56
1994/4
Grupo Empresarial de Producciones Biofarmacuticas y Qumicas Bordier, Misael; Martnez, Milagros Ma.; Salgado, Hctor Bory, Guillermo Bordier, Misael; Martnez, Milagros Ma.; Salgado, Hctor Bory, Guillermo Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria Unin Geolgica Minera Lpez, Ovadys; Mesa, ngel Lpez, Ovadys Instituto Politcnico "Villena - Revolucin" Laboratorios Dalmer S.A
20
Composicin Fungicida
1994.01.11
A61K 35/56
7/94
21
Composicin Insecticida
1994.01.11
A61K 35/78
8/94
22 23 24 25 26
Procedimiento para la obtencin de formulaciones de Rhizophora mangle l. Obtencin de jabn de bao utilizando fangos minero medicinales o peloides Medicamento contra parsitos y bacterias en animales y humanos
1994.10.07 1995.02.10 1995.11.10
A61K 35/78 A61K 7/50 A61K 35/78 A61K 35/78 A61K 35/78 A61K 25/00 A23L 1/48 A61K 31/20
1994/115 11/95 1995/112 1995/113 1997/009
Preparacin medicinal efectiva contra escaras y 1995.11.10 ulceras externas Suplemento alimenticio de origen natural y su procedimiento de obtencin Mezcla de cidos grasos primarios de alto peso molecular obtenidos de la cera de caa de azcar y sus usos farmacuticos Composicin farmacutica para el tratamiento de los procesos inflamatorios Supositorios de Quitina 1997.01.14
27
1997.04.02
1997/035
28
1997.05.30
A61K 35/80 A61P 19/02 A61P 1/06 A61J 3/08 A61K 31/722 A61K 9/02 A61P 17/02
1997/057
Centro Nacional de Investigaciones Cientficas Instituto de Farmacia y Alimentos
29
1998.01.07
1998/1
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30
Composicin Vegetal Antisolar
1998.01.14
A61K 35/78
1998/2
Instituto Superior de Medicina Militar Dr. Luis Daz Soto Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos
31
Proceso de obtencin de citrato de calcio y 1998.06.19 magnesio a partir de dolomitas. Composiciones que lo contienen y uso como suplemento nutricional.*
C01F 1/00 A61K 33/06 A61K 9/00 C07C 51/41 C07C 59/245 A23L 1/48 A23L 1/059 A23P 1/02 A61K 31/722 A61P 1/04 A61K 9/20 A61K 35/78 A61K 7/48
1998/082
32
Tabletas de Quitina para el tratamiento de la ulcera pptica
1998.09.15
1998/129
Instituto de Farmacia y Alimentos Instituto Superior Politcnico Jos Antonio Echeverria Centro Nacional de Termalismo Vctor Santamarina Crdova Siveiro, Eleuterio Eugenio Centro de Qumica Farmacutica
33 34
Procedimiento de obtencin del polvo de pseudo 1998.11.17 tallo de pltano Formulacin cosmtica con propiedades teraputicas Procedimiento de obtencin de vino reconstituyente a partir de productos de la colmena y el producto obtenido Composiciones farmacuticas y nutricionales a partir de extractos de Mangifera indica L. 1998.12.10
1998/0176 1998/0192
35
1998.12.24
A23L A23J A61K 35/64 A61K 35/78 A23L 1/29 A23L 1/48 A61P 35/00 A61P 39/06 A61K 39/35 A61K 39/00
1998/200
36
1998.12.29
1998/203
37
Medio y mtodo de cultivo de caros del polvo domstico, para la fabricacin de vacunas de alrgenos y productos obtenidos mediante los mismos Procedimiento de obtencin de cuproclorofila, formulaciones de productos a partir del principio activo y mtodo de tratamiento Composicin farmacutica a partir de una mezcla de cidos grasos obtenida del aceite de la cera de la caa de azcar Extracto de la planta marina Thalassia testudinum con actividad antienvejecimiento, antiinflamatoria y analgsica, su obtencin y formulaciones que lo contienen Extracto de origen natural con actividad hipoglicemiante y procedimiento para su obtencin Procedimiento de aislamiento y purificacin de un inhibidor de carboxipeptidasa a partir del anlido marino Sabellastarte magnifica Extracto obtenido a partir de frutos de Roystonea regia utilizado contra la hiperplasia prosttica y la prostatitis Procedimiento para la obtencin de Nemorosona a partir de la especie Clusia rsea
1999.11.05
1999/0186
Centro Nacional de Biopreparados
38
2000.05.08
A61K 35/78 A61P 15/02 A61K 31/20 A61P 17/06 A61K 35/78
2000- 0099
Centro de Investigaciones Pesqueras Centro Nacional de Investigaciones Cientficas Centro de Bioactivos Marinos
39
2000.06.07
2000-0134
40
2000.11.07
2000- 0246
41
2001.04.13
A61K 35/78
2001- 0091
Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria Facultad de Biologa, Universidad de La Habana Laboratorios Dalmer S.A
42
2002.02.28
C12N 9/64 A61K 38/57 C07K 14/81 A61K 35/78
2002- 0046
43
2003.03.20
2003- 0062
44 45
2004.03.10
B01D 9/02 A61K 35/78
2004- 0046 2005- 0205
Instituto de Farmacia y Alimentos Centro Internacional de Salud "La Pradera"
Composicin farmacutica a base de extractos 2005.10.25 de plantas para el tratamiento y prevencin de la migraa
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Anexo 2. Patentes cubanas solicitadas va PCT relacionadas con el conocimiento etnofarmacolgico y/o los recursos genticos nacionales Nr. 1 Ttulo (WO 1994/007830) A mixture of higher primary aliphatic alcohols, its obtention from sugar cane wax and its pharmaceutical uses (WO 1998/043631) Mixture of primary fatty acids obtained from sugar cane wax (WO 2000/038699) Composiciones obtenidas a partir de Mangifera indica L.) (WO 2004/110467) Extracto de origen natural con actividad hipoglicemiante y procedimiento para su obtencin (WO 2004/082696) Composicin farmacutica y procedimiento para el tratamiento y prevencin de la hiperplasia prosttica y la prostatitis a partir de los frutos de Roystones regia (palma real) Fecha de Publicacin 14.04.1994 Nr. de Solicitud Nr. OCPI Solicitante Laboratorios Dalmer S.A.
PCT/EP1993/000 107/92 007
2 3 4
08.10.1998 06.07.2000 23.12.2004
PCT/IB1998/0008 1997/035 70 PCT/CU1999/000 1998/203 007 PCT/CU2003/000 2001- 0091 008 PCT/CU2004/000 2003- 0062 004
Laboratorios Dalmer S.A. Centro de Qumica Farmacutica Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria Laboratorios Dalmer S.A.
30.09.2004
(WO 2007/048356) Composicin 03.05.2007 farmacutica a base de extractos de plantas para el tratamiento y/o prevencin de la migraa (WO 2009/071033) Procedimiento para mejorar la estabilidad y la biodisponibilidad de extracto lipdico de semillas de Cucurbita pepo L. y composicin resultante. 11.06.2009
PCT/CU2006/000 2005- 0205 010
Centro Internacional de Salud 'La Pradera'
PCT/CU2008/000 No publicada Centro de Investigacin 010 y Desarrollo de Medicamentos
Anexo 3. Clasificacin internacional de patentes SECCIN A --- NECESIDADES HUMANAS A23 COMIDAS O COMESTIBLES; SU TRATAMIENTO, NO CUBIERTO POR OTRAS CLASES. A23L Comidas, comestibles o bebidas no alcohlicas, no cubiertas por las subclases A21D o A23B a A23J. Su preparacin o tratamiento, por ejemplo coccin, la modificacin de calidades nutritivas, el tratamiento fsico. Preservacin de comidas o comestibles en general, A23J Composiciones de protena para comestibles. Procesamiento de protenas para comestibles. Composiciones de Fosftidos para comestibles. A23P Procesamiento de comestibles, no totalmente cubiertos por otras subclases A61 CIENCIA MDICA O VETERINARIA; HIGIENE A61K Preparaciones para propsitos mdico, dental, o de higiene (dispositivos o mtodos adaptados especialmente para brindar productos farmacuticos en una forma fsica particular o de administracin). A61L Mtodos o aparatos para esterilizacin de materiales u objetos en general; Desinfeccin, esterilizacin o desodorizacin del aire; Aspectos qumicos de vendas, vendajes, almohadillas absorbentes o artculos quirrgicos; Materiales para las vendas, vendajes, almohadillas absorbentes o artculos quirrgicos. A61P Actividad teraputica de compuestos qumicos o preparaciones medicinales A61Q Uso de cosmticos o preparaciones similares de aseo. SECCIN B--- REALIZACIN DE OPERACIONES; TRANSPORTACIN B01 PROCESOS FSICOS O QUMICOS O APARATOS EN GENERAL B01D Separacin SECCIN C--- QUMICA; METALURGIA C01 QUMICA INORGNICA C01F Compuestos de los metales Berilio, Magnesio, Aluminio, Calcio, Estroncio, Bario, Radio, Torio o de metales de tierras raras. C07 QUMICA ORGNICA C07C Compuestos acclicos o carbocclicos C07D Compuestos heterocclicos www.blacpma.org Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas Vol.9 (3) 2010 | 164
Bermello Crespo
C07K Pptidos C08 COMPUESTOS ORGNICOS MACROMOLECULARES; SU PREPARACIN O PROCESAMIENTO QUMICO; COMPOSICIONES BASADAS EN SIMILARES C08B Polisacridos. Sus derivados. C12 BIOQUMICA; CERVEZA; BEBIDAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGA; ENZIMOLOGA; MUTACIN O INGENIERA GENTICA C12N Microorganismos o enzimas. Sus composiciones. Propagacin, conservacin o mantenimiento de los microorganismos; Mutacin o Ingeniera Gentica; Medios de cultivo.
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2009 The Authors 2009 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), 166-176 BLACPMA ISSN 0717 7917 Artculo Original
Aspectos de la comercializacin y control de calidad de las plantas medicinales ms vendidas en una comunidad urbana del NO de la Patagonia Argentina
[Aspects of marketing and quality control of medicinal plants most sold in an urban community of NW Patagonia, Argentina]
Florencia CUASSOLO1,2, Ana LADIO1,2, Cecilia EZCURRA1,2 1. Universidad Nacional del Comahue, Centro Regional Universitario Bariloche, Argentina, 2. CONICET-INIBIOMA, Bariloche, Argentina
Abstract
In the last decades there has been an increase in the consumption of medicinal plants worldwide. In Argentina, this increase coincides with an inefficient action of the control organisms. Semi-structured interviews were conducted to medicinal plants sellers at 13 sites in Bariloche in order to investigate general aspects of marketing. In total, 64 samples were obtained for the most traded species in the city; these were analyzed by morphological and micrographic methods, determining the degree of adulteration. The monoherbs are marketed mainly by their common name, packed in transparent cellophane bags, and the materials are mostly fragmented. About 30% of the samples showed adulteration, the main adulterant being grasses. We conclude that in Bariloche, the quality control agencies are inefficient, which can lead to health problems for people and discredit to phytomedicine. Keywords: urban ethnobotany, medicinal plants; quality control; adulteration; Patagonia
Resumen
En las ltimas dcadas se ha detectado un incremento en el consumo de plantas medicinales a nivel mundial. En Argentina, este incremento convive con un ineficiente accionar de los organismos de control. Se realizaron entrevistas semiestructuradas a expendedores de plantas medicinales en 13 sitios de venta de Bariloche con el objeto de indagar aspectos generales de su comercializacin. En total se obtuvieron 64 muestras correspondientes a las especies ms comercializadas en la cuidad, las que fueron analizadas con mtodos morfolgicos y microgrficos, determinndose su grado de pureza. Las monohierbas se comercializan principalmente por su nombre vulgar, envasadas en bolsa de celofn transparente, y el material se presenta principalmente fragmentado. Un 30% de las muestras result con adulteracin, siendo el principal elemento adulterante las gramneas. Se concluye que en Bariloche, los organismos de control de calidad son ineficientes, esto puede generar problemas de salud para la poblacin y desprestigio hacia la fitomedicina. Palabras Clave: etnobotnica urbana; plantas medicinales; control de calidad; adulteracin; Patagonia
Recibido | Received: December 12, 2009. Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: March 3, 2010. Publicado en lnea | Published online; May 25, 2010 Declaracin de intereses | Declaration of interests: authors have no competing interests. Financiacin | Funding: This work was financed by FONCYT( PICT 2007-02289 directed by Ana Ladio) This article must be cited as: Florencia Cuassolo; Ana Ladio; Cecilia Ezcurra. 2010. Aspectos de la comercializacin y control de calidad de las plantas medicinales ms vendidas en una comunidad urbana del NO de la Patagonia Argentina. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3):166-176. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: florcuassolo@crub.uncoma.edu.ar, fcuassolo@yahoo.com.ar
Cuassolo et al.
Plantas medicinales en una comunidad urbana de la Patagonia Argentina
INTRODUCCION Las plantas medicinales, de acuerdo a la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), son todas aquellas que "en una o ms partes contienen sustancias activas, que son utilizadas por el ser humano con fines teraputicos, dado que las mismas poseen una actividad biolgica alterando o modificando el funcionamiento de rganos y sistemas del cuerpo humano (Hoffmann et al., 1992; OMS, 2003; Tres, 2006; Martnez, et al., 2009). El 80% de la poblacin mundial depende del uso de plantas medicinales para atender sus necesidades de asistencia mdica primaria (OMS, 1987). La medicina herbolaria se basa principalmente en el consumo directo de plantas, por consiguiente su estudio se volvi una prioridad para varias instituciones internacionales y fue declarada de inters mundial por la OMS (OMS, 1987). A nivel mundial, numerosos estudios etnobotnicos han sido efectuados, principalmente en reas rurales de raigambre aborigen, con el objeto de recuperar los conocimientos sobre plantas medicinales que tienen los pobladores. En cambio, en zonas urbanas, aunque sigue vigente el uso de la fitoteraputica entre sus habitantes, las investigaciones son menores dada la mayor complejidad de su abordaje (Pochettino et al., 2008; Arenas, 2007; Batista de Lima et al., 2007). De este modo han prevalecido este tipo de estudios en zonas rurales de la Patagonia (Estomba et al., 2006; Ladio et al., 2007, Ochoa, 2007; Faria, 2008) y un slo trabajo, hasta el momento, ha sido llevado a cabo en zonas urbanas (Cuassolo, 2009). En todos los casos se constat que las plantas medicinales constituyen recursos muy significativos en la teraputica popular y son usadas para dolencias que se tratan en el mbito domstico. Estos estudios han revelado que los pobladores de zonas rurales y comunidades Mapuches de Patagonia utilizan ms de 100 especies medicinales, tanto de origen nativo como extico (Citarella, 1995; Funes, 1999; Ladio, 2002; Estomba et al., 2005; 2006; Ladio et al., 2007). La flora extica ha sido incorporada en su herbolaria desde tiempos de la colonizacin, y estos conocimientos y prcticas se han ido hibridando con el tiempo, mezclndose los nuevos saberes con los conocimientos previos (Ladio y Lozada, 2008; Molares y Ladio, 2009). En reas urbanas, pese a una mejor distribucin de los servicios mdicos oficiales que en regiones rurales, la utilizacin de plantas medicinales tambin
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es de uso corriente y se debe a diversos factores. Uno de ellos es la vigencia de la medicina tradicional en gran parte de la poblacin de ascendencia indgena que ha migrado a la ciudad, pero tambin se debe a la existencia del comercio de productos naturales que en los ltimos aos ha ido aumentando cada vez ms en todo el mundo (Bandoni, 1995; Balick et al., 2000). Las razones de este aumento en la venta de productos naturales se deben a diversas razones. En el presente se ha producido el resurgimiento y difusin de las medicinas naturistas o las llamadas medicinas alternativas por oposicin a la medicina aloptica. Esta tendencia se sustenta en la creencia popular que el consumo de productos naturales es inocuo y que posee cierta superioridad sobre las drogas sintticas, (Arenas, 2007; Pochettino et al., 2008). Por otra parte estn quienes relacionan de manera directa lo natural con una mejor calidad de vida. Esto ltimo podra verse unido a la insatisfaccin que encuentra el consumidor en los medicamentos y tratamientos mdicos convencionales, e inclusive en la atraccin que siente hacia las filosofas que implican un cuidado holstico (Arenas, 2007; Pochettino et al., 2008; Martnez et al., 2009). Se suma a esto que para el caso de los pases en vas de desarrollo, por razones econmicas, solo una parte de la poblacin con poder adquisitivo puede aspirar a sanarse con remedios sintticos, mientras que gran parte de la poblacin se sigue volcando hacia la fitoterapia (Hoffmann et al., 1992; Da Silva et al., 2006; Martnez et al., 2009). En Argentina, en consonancia con lo que ocurre en el mbito mundial, se ha manifestado este proceso en la amplia gama de oferta comercial de plantas medicinales y de productos derivados de ellas. Las farmacias, herboristeras, dietticas, almacenes naturistas y hasta supermercados los comercializan promoviendo su consumo, produciendo de esta forma una gran demanda en zonas urbanizadas (Arenas, 2007). Por otra parte, como consecuencia de la carencia de medios en los organismos de control, estos recursos son comercializados desprovistos de control de calidad, razn por la cual puede implicar serios peligros para la salud de la sociedad (Guaglio y Rampini, 1985; Arenas, 2007). Por ejemplo, es frecuente que no exista una correlacin entre los componentes declarados en la etiqueta y el contenido real de los productos (Arenas, 2007). Se han detectado adulteraciones y sustituciones por otras plantas de morfologa o accin fisiolgica similar, como tambin contaminaciones y presencia de
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especies txicas (Cortella et al., 2001; Arenas, 2007). Debido a esto, ha habido antecedentes de casos de intoxicacin (Akerele, 1990; Hoffmann et al., 1992; Arenas y Cortella, 1996; Arenas et al., 1997; OMS, 2003). Por ejemplo en el Partido de Baha Blanca se encontr que el 25% de los compradores de hierbas medicinales ha tenido problemas por el uso incorrecto de las mismas (Cambi y Hermann, 2001). El objetivo de este trabajo fue estudiar aspectos de la comercializacin, estado sanitario y calidad de las plantas medicinales que son vendidas en la ciudad de S.C. de Bariloche. MATERIALES Y METODOS Sitio de estudio Este trabajo se desarroll en la ciudad de San Carlos de Bariloche, provincia de Ro Negro, Argentina. Esta ciudad est situada sobre el margen SE del lago Nahuel Huapi. Cuenta con una poblacin de 100.000 habitantes segn el Censo Nacional de Poblacin y Vivienda 2001 (INDEC, 2001). La actividad econmica principal de esta ciudad es el turismo, el cual en ciertos momentos del ao (meses de invierno y verano) podra aumentar el nmero de consumidores de distintos enclaves culturales de plantas medicinales. La poblacin de Bariloche se caracteriza por una gran afinidad al uso de plantas medicinales, dado que parte de ella es de ascendencia rural-Mapuche que vive en la ciudad, como de los numerosos residentes que se manifiestan particularmente inclinados a la vida natural y sana (Cuassolo, 2009). Metodologa La informacin obtenida es parte de un estudio etnobotnico realizado en 2007-2008 que incluy un muestreo aleatorio en 30 centros de expendio de plantas medicinales (farmacias, herboristeras, almacenes naturistas y dietticas). Para este estudio solo se tomaron las muestras de 13 sitios de expendio (30 % del total), incluyendo a los comercios ms representativos de Bariloche y por ser los de mayores volmenes de venta. En cada sitio se realizaron entrevistas semiestructuradas que indagaron sobre aspectos generales de la venta, envasado y formas de conservacin del material vegetal (Alexades, 1996; Albuquerque et al., 2008). En total, se obtuvieron 64 muestras de monohierbas de las especies ms comercializadas segn los entrevistados de los centros de expendio. Las muestras fueron determinadas
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taxonmicamente utilizando mtodos morfolgicos y microgrficos (Barboza et al., 2006; Gurni, 2007); y bibliografa especializada (Correa, 1971, 1984, 1988, 1999; Boelcke, 1981; Dimitri, 1988; Bown, 1995; Wiersema y Len, 1999; Simpson y Ogorzaly, 2001; Panizza, 2002; De la Pea y Pensiero, 2004; Ezcurra y Brion, 2005; Barboza et al., 2006). Slo un 8 % de las muestras no pudieron ser identificadas taxonmicamente. Cabe aclarar que el material se encontraba principalmente molido o fragmentado, ms que pulverizado, con lo cual no fue necesario el anlisis qumico para la determinacin. Anlisis de calidad, adulteracin y reglamentacin Cada muestra fue revisada en su totalidad y pesada con balanza analtica. Posteriormente se separ la materia extraa y se estim el porcentaje de adulteracin utilizando el criterio establecido por la OMS (1998) del 1 % como mximo de materia extraa. Como materia extraa se entiende a aquellas partes de la planta o de otras plantas, parte o producto de un organismo y partes minerales, como suelo o piedras, que no han sido especificadas en los rtulos del material vegetal concerniente (OMS, 1998). Se realiz un anlisis de la informacin presente en el envase de cada muestra (rtulos) y se compar con la reglamentacin vigente para drogas vegetales de la ANMAT (Especialidades Medicinales, Disposicin 2673/99, inciso 10: Condiciones de Venta). Para este fin se utiliz una clasificacin modificada de Pochettino et al. (2008) segn las irregularidades halladas en los rtulos: SNC: sin nombre cientfico o mal escrito, SFE: sin fecha de envasado, SFV: sin fecha de vencimiento, SIU: sin indicaciones de uso, SP: sin posologa. Adicionalmente, se registr la ausencia de fecha de recoleccin en el rtulo (SFR). Este criterio si bien no es exigido por la reglamentacin vigente, fue considerado en este trabajo debido a la importancia de esta fecha en la durabilidad de las drogas vegetales (Costaguta, 2006). Las muestras fueron depositadas en el Herbario de la Universidad Nacional del Comahue, en el Centro Regional Universitario Bariloche (BCRU). Anlisis de datos Cada muestra fue categorizada en adulterado y no adulterado utilizando el criterio de la OMS mencionado anteriormente.
Cuassolo et al.
Figura 1: Sitio de estudio, Ciudad de San Carlos de Bariloche, Rio Negro, Argentina.
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Tabla 1. Plantas medicinales comercializadas en S. C. de Bariloche. Descripcin y composicin de las muestras analizadas Muestra MO8 Especie declarada en rtulo manzanilla Especie hallada Matricaria recutita Matricaria recutita Partes halladas Fl y T Tipo de materia extraa gran cantidad de hojas de gramneas hojas y flores de sp. indeterminada, insectos (dpteros) barro, caros vivos Materia extraa Resultado (%) 92 adulterado
CR3
manzanilla
Fl y H
adulterado
BO2 IB0
Valeriana officinalis yerba de la piedra
Valeriana officinalis? Usnea hieronymi
R talo fruticoso
piedras y tierra tallos, corteza, parasitado con hongos, trozos de sustrato, 2 spp. de lquenes foliosos indeterminados tallos, hojas de gramneas, hojas sp. Indeterminada, piedras
5 4
adulterado adulterado
DMO9
carqueja
Baccharis crispa
PA
adulterado
MO9 BA7
cola de caballo Malva silvestris
Equisetum giganteum Malva sylvestris
T y Fl H, T y S
tallos, piedras, tierra hojas de gramneas, flores sp. indeterminada, insectos piedras, tierra, insectos, pluma. hojas sp. indeterminada, hongos en las hojas troncos, tallos y semillas de spp. indeterminadas piedras, pelos, tallos de sp. indetreminada piedras, barro, hojas de gramneas, hojas sp. indeterminada
4 4
HNJ0 BO2
boldo pasionaria
Peumus boldus Passiflora caerulea
HyT PA
2 2
FAR4
boldo
Peumus boldus
HyT
adulterado
ON1 LP1
paico Valeriana officinalis
Chenopodium ambrosioides Valeriana officinalis?
H, T, Fl y Fr R
2 2
AR3
Fucus
Fucus vesiculosus
talo fucoide restos de gasterpodos marinos, trozos de balanus, rocas marinas
adulterado
AL2
sen
Cassia angustiflia
H, Fl, Fr
hojas sp. indeterminada, pelos, piedras
adulterado
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NJ0
yerba del pollo
Alternanthera pungens
Fl, T, H
piedras, hojas de gramneas, alambre, trozo de ladrillo hojas de sp. Indeterminada, hongos hojas de gramneas, tallos sp. indeterminada tallos y hojas sp. indeterminada hojas de gramneas y de sp. indeterminada piedras, tierra, fruto sp. indeterminada hojas sp. indeterminada hojas de gramneas hojas de gramneas y de sp. indeterminada, fragmento bolsa nylon
adulterado
AR4
ruda sp.
Ruta chalepensis
PA
adulterado
NJ0
poleo
Lippia turbinata
H, T, Fl
adulterado
FAC1
Cecropia pachystachia carqueja
Cecropia pachystachya Baccharis aff. salicifolia Aloysia polystachya Matricaria recutita Malva parviflora Cecropia pachystachya
HyT
adulterado
FCR3
H, T y Fl
adulterado
FDH1
Aloysia polystachya
H, T y Fl
0.8
no adulterado
LP1 AL2 FDT1
Chamomille recutita malva Cecropia pachystachia
Fl HyT HyT
0.7 0.7 0.7
no adulterado no adulterado no adulterado
AC1 NJ0
Buddleja globosa manzanilla
Buddleja globosa Matricaria recutita
H, T y Fl Fl y T
hojas de gramneas, insectos, pelos hojas de gramneas, dpteros, hojas sp. indeterminada tallos de sp. indeterminada, piedras hojas sp. indeterminada hojas de gramneas y de sp. indeterminada hojas de gramneas hojas de gramneas, insectos hojas de gramneas trozos de sustrato fragmentos de lquen insectos, piedras
0.6 0.5
no adulterado no adulterado
ON1 NJ0 DH1
ruda tilo Dorstenia brasilensis yerba del pollo manzanilla Matricaria chamomilla Usnea hieronymi palo pichi yerba del pollo
Ruta chalepensis Tilia sp. Trichocline aff. Reptans Alternanthera pungens Matricaria recutita Matricaria recutita Usnea hieronymi Fabiana imbricata? Alternanthera pungens
T, H, Fr, S Fl H, Fl y R
0.5 0.5 0.5
no adulterado no adulterado adulterado
AR3 AL2 BA7 ON7 BO2 CR3
PA Fl y T Fl y T talo fruticoso C PA
0.5 0.5 0.5 0.4 0.4 0.4
no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado
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HNJ0
carqueja
Baccharis crispa
T y Fl
hojas y tallos de sp. indeterminada hojas de gramneas hojas y semillas spp. indeterminadas, insectos hojas de gramneas piedras, hojas de gramneas hojas sp. indeterminada hojas de gramneas tallos, hojas de gramneas, poliquetos tallos sp. indeterminada hojas sp. indeterminada, tallos hojas de gramneas, plumas, pelos spp. indeterminadas hojas de gramneas, insectos insecto vivo, piedras
0.3
no adulterado
DAL2 DT6
boldo Matricaria chamomilla Alternanthera pungens paico Cecropia palmata
Peumus boldus Matricaria recutita Alternanthera pungens Chenopodium ambrosioides Cecropia pachystachya y C. palmata Malva parviflora Buddleja globosa Cecropia pachystachya Baccharis articulata Cassia angustifolia Aloysia citriodora Artemisia annua? Artemisia douglasiana Eucalyptus aff. camaldulensis Baccharis articulata Baccharis articulata Centella asiatica Quassia amara? Eucaliptus aff. camaldulensis Buddleja globosa Gunnera tinctoria? Valeriana carnosa?
HyT Fl, T y H
0.3 0.3
LP1 NJ0 FBA7
H, T, Fl, S H, T, Fl y S HyT
0.3 0.2 0.2
no adulterado no adulterado no adulterado
AC1 BO2
Malva parviflora matico
HyT H, T, Fl y Fr HyT T y Fl
0.2 0.1
HNJ0 FON1
ambay carqueja
0.1 0.1
AC1
Cassia angustifolia
H, Fl, Fr
0.1
no adulterado
NJ0 FON0
cedrn ajenjo
HyT PA
0.1 0.1
AR4 AR5 FLP1 FAC1 BA7 DT1 NJ0 LP1
matico Eucaliptus Baccharis articulata Baccharis articulata centella asiatica Quassia amara Eucaliptus Buddleja globosa
H, T y Fl H, T y Fr H,T y Fl H, T y Fl PE C H, T y Fr H, T, Fl y Fr R R
caros vivos, hojas de gramneas fragmento de nylon 0 0 0 0 0 0
0.1 0.1 0 0 0 0 0 0
no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado
NJ0 NJ0
nalca ancolahuen
0 0
0 0
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Cuassolo et al.
DT1 BA7 MO9 NJ0 DT1 DH1 AR4
Chenopodium ambrosioides palo pichi palo pichi palo pichi Fabiana imbricata no declarado tilo
Chenopodium ambrosiodes Fabiana imbricata? Fabiana imbricata? Fabiana imbricata? Fabiana imbricata? Quillaja saponaria? Tilia sp.
HyT C C C C C Fl
0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0
no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado no adulterado
(N=64, en orden decreciente del % de materia extraa). Abreviaturas usadas: Contenido hallado: H= hojas, T=tallos y pecolos, Fl=flores o estrbilos, Fr=frutos, S=semillas, C=cortezas, leos, maderas, R= races o rizomas, PA= partes areas, PE= planta entera, ?= no se pudo determinar por caracteres anatmico-morfolgicos. Materia extraa (%)= porcentaje de m.e. en relacin al peso total en g. Adulteracin: cuando la muestra posee ms del 1% del peso en m.e.
RESULTADOS Y DISCUSION Comercializacin La mayora (64%) de las plantas medicinales que se comercializan en S.C. de Bariloche se expenden bajo el nombre vulgar y solo en un 36% de las muestras el nombre cientfico est presente en los rtulos. Esto ocasiona numerosos inconvenientes dado que un mismo nombre vulgar puede corresponder a especies totalmente diferentes (De la Pea y Pensiero, 2004) e inclusive que sus aplicaciones teraputicas sean totalmente opuestas (Pochettino et al., 2008; Arenas, 2007). Coincidentemente, en este trabajo se encontr que varios nombres vulgares distintos fueron aplicados a una misma especie, o un mismo nombre vulgar fue aplicado a especies muy diferentes entre s (Tabla 1). Por ejemplo, bajo el nombre vulgar matico podemos encontrar a dos especies: Artemisia douglasiana (Asteraceae) oriunda del centro de Argentina (Barboza et al., 2006); y a Buddleja globosa (Buddlejaceae) que crece en la zona de los bosques templados del sur de Argentina y Chile (Hoffman et al., 1992), ambas utilizadas para lceras estomacales y en particular Buddleja globosa tiene usos heptico, cicatrizante, desinfectante, para quemaduras e infecciones en piel y para el dolor de muelas. En el otro caso, seis muestras con nombre vulgar carqueja correspondieron a tres especies del genero Baccharis diferentes, de las cuales dos tienen uso hepatoprotector y digestivo, mientras que la otra es antirreumtica, antiinflamatoria y tiene actividad antibacterial (Tabla 1). Es decir que el consumidor de esta especie no se
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encontrar con el efecto deseado a menos que d con la especie que lo posee, segn donde compre sus especies medicinales. Acordando con Costaguta (2006), esta situacin irregular y hasta azarosa en Bariloche puede producir serios problemas de salud en la poblacin, originando adems, descreimiento y opiniones de menosprecio hacia las medicinas herbales. En este sentido, para minimizar este problema, es sabido que los mdicos de la ciudad que practican la fitomedicina, recomiendan a sus pacientes barilochenses recolectar ellos mismos sus plantas o les aconsejan sitios seguros de expendio. En el 100 % de las muestras, el material se presenta seco y con distinto grado de molido o fragmentado. Se venden en general paquetes de 50, 25 10 gramos, y en algunos casos donde el material se expende suelto, las cantidades pueden variar a pedido. El envasado consiste en bolsas de celofn o nylon (66%) y en menor proporcin en bolsas de papel madera (34%). En los casos donde la modalidad de venta fue todo suelto el almacenamiento en el comercio vari entre frascos de color caramelo (en un solo caso), tachos de pintura de 20 litros (4 casos), y bolsas de arpillera o bolsas de papel (9 casos). Segn Costaguta (2006), el envasado en bolsas transparentes permeables a la luz promueve la condensacin de humedad al recibir calor o sol directo, esto se produce porque las plantas conservan un porcentaje de humedad an despus de realizarse correctamente su secado, lo cual afecta directamente la eficacia de una droga vegetal. En este sentido se observ que el 30% de los sitios de expendio posean los exhibidores de plantas medicinales de cara al sol. De los sitios de muestreos analizados,
Cuassolo et al.
aproximadamente el 23% comercializaba plantas obtenidas por recolectores locales, mientras que la mayora (76%) solo vendan productos provenientes de laboratorios de marcas reconocidas. En cuanto a los precios, stos variaron desde 2,6 dlares a 76 dlares el kilogramo (aproximadamente) de planta deshidratada, sobre todo para el caso de las especies importadas. Con respecto a la demanda, segn los expendedores las especies ms solicitadas son las especies exticas: manzanilla (Matricaria recutita), malva (Malva parviflora y M. sylvestris), eucalipto (Eucalyptus sp.) y la cuasia amarga o palo amargo (Quassia amara= Picrasma excelsa), entre otras (mayores detalles en Cuassolo, 2009). Estos resultados evidencian la importancia de la farmacopea cosmopolita en las tendencias de consumo de los habitantes barilochenses. Control de calidad El 30% del material analizado present evidencias de adulteracin con diferentes tipos de materia extraa, principalmente con hojas de gramneas (Tabla 1 y Fig. 2). Estas muestras en su mayora corresponden a siete marcas comerciales diferentes y en menor medida a plantas que provienen de recolectores locales. Del total del material adulterado, un 70 % correspondi a muestras provenientes de laboratorios medicinales. En cuanto al estado de pureza se encontr como materia extraa a partes vegetales de otras especies de plantas, insectos y caros vivos y muertos, trozos de alambre, de nylon, tierra, piedras, hongos, etc. (Tabla 1). Estos hallazgos ponen de manifiesto no slo que las muestras estn adulteradas, sino que presentan contaminaciones de carcter muy peligroso para la salud. El grado de adulteracin en las muestras analizadas en este estudio es similar al encontrado en otros centros urbanos de la Argentina. Pochettino et al., (2008) observaron en un centro urbano de la Pcia. de Buenos Aires (Argentina), que en 11 muestras analizadas bajo el mismo nombre vulgar, encontraron 5 especies distintas que adulteraban o sustituan a otras de morfologa o accin fisiolgica similar. Estudios llevados a cabo por Betancour y Gutirrez (1999) en Mxico reconocen que es cada vez ms frecuente la adulteracin o sustitucin de plantas enteras o de partes de stas, especialmente de aquellas con alto valor comercial y escasez en el mercado. Varios autores (Betancour y Gutirrez, 1999; Costaguta,
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2006; Martnez, 2005; Pochettino et al., 2008) atribuyen la adulteracin tanto a causas involuntarias como intencionales buscando lograr mayores beneficios econmicos, siendo las principales razones mencionadas por estos autores: los precios altos para algunas especies, el aumento de la demanda y la escasez o disminucin de las poblaciones silvestres, entre otras. Los resultados expuestos pueden ser interpretados como una situacin generalizada para toda la Argentina, principalmente porque se comparten distribuidores y marcas en todo el pas. A partir de estos hallazgos se hace evidente la falta de controles de calidad, lo cual sugiere, en parte, que las intoxicaciones existentes en el pas, no slo se deben a un mal uso de estos fitoteraputicos por parte de los usuarios, sino que los mismos estn accediendo a recursos no seguros para su salud en los comercios habilitados (Akerele, 1990; Hoffmann et al., 1992; Arenas y Cortella, 1996; Arenas et al., 1997; OMS, 2003).
Figura 2. Principales elementos adulterantes hallados en las muestras analizadas.
Irregularidades en rtulo En general, las muestras revelaron diferentes tipos de irregularidades en los rtulos (Fig. 3), como falta de precisin en el nombre cientfico, la fecha de envasado, la fecha de vencimiento, las indicaciones de uso y la posologa. Es decir que muchas de estas muestras no cumplen con la disposicin 2673/99 de Especialidades Medicinales, propuesta por la ANMAT que es el organismo de Administracin Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnologa Mdica de Argentina. En la Figura 3, se muestra que SFR (sin fecha de recoleccin) contribuye con un 20 % del total. Siendo este carcter no exigido por el ANMAT, no puede aseverarse como irregularidad en este
Cuassolo et al.
aspecto, pero consideramos que el mismo debe ser tenido en cuenta por los profesionales encargados de la venta de plantas medicinales y por los mismos usuarios. El tiempo transcurrido entre la recoleccin y el envasado es crucial en la efectividad de las drogas vegetales, por lo que recomendamos su inclusin rotulada como elemento de control de calidad.
Figura 3. Principales irregularidades halladas en rtulos
Dado el valor otorgado a las medicinas de origen vegetal por la OMS en 1987 y siendo considerada una alternativa teraputica en la atencin primaria de la salud, consideramos que los centros de expendio de plantas medicinales son contextos de suma importancia en los ambientes urbanos. Estos sitios son lugares donde se genera un flujo de informacin que se transmite socialmente y forma redes de saberes que mantienen vigente conocimientos locales sobre las plantas medicinales. Es por ello que, ante la ausencia de controles por parte del Estado, necesitan de la labor responsable de sus expendedores en cuanto a una mayor verificacin de los productos que comercializan y su estado sanitario. Adicionalmente, creemos que los estudios etnobotnicos urbanos en relacin a estos centros son una herramienta para registrar el conocimiento tradicional en continuo proceso de cambio y, por qu no, de fusin con las sociedades modernas. AGRADECIMIENTOS
Irregularidades en rtulo segn regulacin ANMAT: SNC: sin nombre cientfico o mal escrito, SFR: sin fecha de recoleccin, SFE: sin fecha de envasado, SFV: sin fecha de vencimiento, SIU: sin indicaciones de uso, SP: sin posologa.
CONCLUSIONES A partir de estos resultados se pone en evidencia la ausencia de cumplimiento de la reglamentacin vigente para la Argentina en relacin a las plantas medicinales, particularmente porque los fitoterpicos deberan ser dispensados solo en farmacias y herboristeras, bajo la supervisin de un especialista farmacutico. Las numerosas infracciones detectadas tanto en rtulos como en contenido pone en claro la necesidad de hacer cumplir dicha reglamentacin. Al igual que en todo el pas, las plantas se comercializan principalmente por sus nombres vulgares. Esto propicia el mal uso o errores en el empleo de estos medicamentos y sus consecuentes peligros para la salud de la poblacin. Garantizar la identidad de las plantas medicinales es el primer paso para contribuir con la calidad y seguridad de su uso racional, sobre todo considerando que son drogas vegetales de venta libre, es decir que no se necesita una receta mdica para adquirirlas. La correcta identificacin constituye una herramienta clave al momento de promover el consumo de estos productos en perfectas condiciones de calidad y por consiguiente, seguridad para la salud de la poblacin.
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A los expendedores de plantas medicinales de la ciudad de Bariloche. A la UNComahue, en especial a las Dras. Cecilia Brion, Maria Damascos, Susana Calvelo, Laura Lorenzo y al Dr. Javier Puntieri por sus valiosos aportes en este trabajo. REFERENCIAS
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2010 The Authors 2010 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), 177-190 BLACPMA ISSN 0717 7917 Artculo Original | Original Article
La medicina herbolaria en el contexto urbano. Estudio de caso en un barrio de la ciudad de Tandil, Argentina
[Herbal medicine in the urban context. Case study in a neighborhood of the city of Tandil, Argentina]
Norma Ins HILGERT1, Mariela de Lourdes HIGUERA2, Mara Julia KRISTENSEN2, 3
1 Centro de Investigaciones del Bosque Atlntico (CeIBA), Instituto de Biologa Subtropical , UNaM, CONICET, Yapey 94. CC 8, (3370) Puerto Iguaz, Misiones, Argentina.2Centro de Investigaciones y Estudios Ambientales (CINEA), Univ.Nac. del Ctro. de la Pcia. de Bs As, Campus Universitario A Seco s/n, (7000) Tandil, Buenos Aires, Argentina. 3Facultad de Ciencias Naturales y Museo, Universidad Nacional de la Plata, Paseo del Bosque s/n, (1900) La Plata, Buenos Aires, Argentina.
Abstract
Herbal medicine used by people in a suburban neighborhood from Tandil city (Bs. As.) was studied. The species used by the population and their relative importance, the ailments treated, the places were herbal remedies were obtained and their relationship with Public Medicine were analyzed. Semi structured interviews in 40 domestic units and herbal medicine outlets interview were conducted. 83% of the interviewed used medicinal plants within a total of 46 species in 22 therapeutic applications for 11 body systems diseases. Species are collected in orchards and gardens (47,5%); bought /obtained in shops (25%), gathered from hills (15%) and vacant lots (12,5%). Orchards and vacant lots provide exclusive species and complement each other as places for the obtention of species with greater relative importance; the other species come mainly from shops. It was found that the folk medicine and the formal one are complementary. Keywords: medicinal plants; Relative Importance index; herbal shops-pharmacy; homegardens; Ethnobotany;exotic plants.
Resumen
Se estudi la medicina herbolaria utilizada por la poblacin de un barrio periurbano de la ciudad de Tandil (Buenos Aires). Se analizan las especies usadas por la poblacin, las dolencias tratadas, la importancia relativa de las mismas, los espacios de obtencin de los recursos herbolarios y su relacin con la medicina pblica. Se realizaron 40 entrevistas semiestructuradas en unidades domsticas y censos en sitios de expendio de fitoterpicos. El 83% utiliza plantas medicinales, se hall un total de 46 especies (5,7 por persona), 22 usos teraputicos para dolencias de 11 sistemas corporales. El 47,5% son recolectadas en huertas o jardines, el 25% son obtenidas de comercios, el 15% se extraen de las sierras y el 12,5% en terrenos baldos. Huerta y baldo aportan especies exclusivas y se complementan como sitio de obtencin de las especies con mayor importancia relativa; el resto proviene principalmente de los comercios. Se observ que la medicina folklrica y la formal se complementan. Palabras Clave: plantas medicinales; ndice de importancia relativa; farmacias y herboristeras; huertas; etnobotnica; plantas exticas
Recibido | Received: December 4, 2009 Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: March 17, 2010 Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010 Declaracin de intereses | Declaration of interests: the authors have no competing interests. Financiacin | Funding: none declared This article must be cited as: Norma Ins Hilgert, Mariela de Lourdes Higuera, Mara Julia Kristensen. 2010. La medicina herbolaria en el contexto urbano. Estudio de caso en un barrio de la ciudad de Tandil, Argentina. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3): 177-190. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: normahilgert@yahoo.com.ar
Hilgert et al.
Medicina herbolaria urbana
INTRODUCCIN La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) y la Organizacin Panamericana de la Salud (OPS) reconocen la importancia de la medicina tradicional o folklrica y estn abocadas a disear estrategias nacionales para su regulacin e incorporacin al sistema mdico formal, con resultados an deficientes (Hilgert, 2009). El uso de plantas, dentro de esta modalidad de la medicina, est muy difundido en toda Latinoamrica. Habitualmente las reas donde se desarrolla y conserva son las rurales, no obstante con la inmigracin de la poblacin a las grandes urbes su uso se expande y difunde en un nuevo mbito (Nigenda et al., 2001). A nivel mundial se observa una tendencia al establecimiento de las poblaciones en contextos urbanos; se estima que alrededor de la dcada del 30 del presente siglo el 85% de la poblacin latinoamericana se concentrar en las ciudades. Dentro de stas, las reas periurbanas son las que presentan mayor tasa de migraciones, tanto desde zonas rurales como desde otras ciudades (UN, 1998 en Kuchelmeister, 2000/1-). Es altamente probable, en consecuencia, hallar en esos espacios mosaicos pluriculturales con distinto tiempo de permanencia y con diferente historia de apropiacin y transmisin en sus conocimientos y valores culturales originarios (Pochettino et al., 1997). Del mismo modo, tambin es probable que all se conserven ambientes ruderales y/o naturales con distinto grado de modificacin que alberguen recursos vegetales con valor utilitario de procedencias variadas. La utilidad de un recurso para un individuo o una sociedad dada depende del modo de percibir el entorno, percepcin que se forja a partir de la combinacin de factores biofsicos y socioculturales (Cotton, 1996). Es fundamental identificar los dominios culturales que intervienen en esta accin, tratar de entender por qu un grupo usa algunos recursos de su entorno y no otros. Del mismo modo es crucial interpretar las decisiones basadas en la informacin acumulada a travs de las generaciones y aquellas tomadas en funcin de la necesidad de adaptarse a nuevas circunstancias, que resultan de la creatividad e iniciativas propias de los individuos (Vickers, 1994, Neis et al., 1999, Berkes et al., 2000, Davidson- Hunt, 2006, Murray et al., 2006). Uno de los modos de interpretar estas decisiones es analizando la importancia cultural del recurso (Bennet & Prance, 2000, Garibay-Orijel et al., 2007). Se ha propuesto que la inclusin y el
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aprovechamiento de especies exticas pueden deberse a una estrategia de diversificacin (Albuquerque, 2006), es decir que han sido intencionalmente introducidas para cubrir demandas que las nativas no cubran. Del mismo modo, se considera que la versatilidad, en trminos de categoras de usos y disponibilidad, favorecen el uso de un determinado recurso en lugar de otro tambin disponible (Albuquerque & Lucena, 2005, Albuquerque, 2009). Para comprender estos procesos en un contexto urbano, es aceptable pensar que los patrones de apropiacin, uso y transmisin de los conocimientos son particulares y difieren de los descriptos para comunidades tradicionales y rurales. En estos espacios nuevos cambian los mecanismos de transmisin y adquisicin del conocimiento, se complica la red de relaciones, se desdibujan los modeladores y, fundamentalmente, se descontextualiza el conocimiento del entorno natural que stas prcticas habitualmente incluan. En efecto, el viejo conocimiento emprico familiar, en ocasiones es reemplazado por el consejo de un vendedor o de anuncios publicitarios. De pronto la gente conoce la utilidad de una droga vegetal aunque ignora qu planta o plantas la componen o, en el caso de saberlo, son incapaces de reconocerlas en estado natural (Hermann et al., 2001, Pardo de Santayana y Gmez Pellon, 2003, Pochettino et al., 2008, Arenas, 2007). Se ha sealado la importancia de la comercializacin de recursos herbolarios en el contexto urbano (Bye & Linares, 1983, 1990, Cortella et al., 2001). En las ciudades, los mercados y las pequeas huertas domiciliarias, constituyen los sitios donde obtener estos recursos reemplazando el entorno natural donde esas personas los hubiesen recolectado. La relacin entre la medicina herbolaria y los alimentos medicinales es otro aspecto que viene siendo objeto de estudio desde hace unos aos (Etkin & Ross, 1982, 1994, Cox, 1994, Moerman, 1994, Pochettino, 2003, Grivetti, 2006, Pardo de Santayana et al., 2006, Pieroni & Quave, 2006). Es comn que algunos alimentos se consuman en diferentes momentos de la vida de la persona con el objeto de propiciar la conservacin de la salud o su restauracin. Por ejemplo el consumo de alimentos fuertemente condimentados con organo durante el puerperio, en comunidades rurales del noroeste argentino (Hilgert & Gil, 2007). En el presente trabajo analizamos el elenco de especies medicinales
Hilgert et al.
usadas en el Barrio las Tunitas de la ciudad de Tandil y la importancia de las mismas en el sistema de salud folklrico. Identificamos y analizamos el rol de los diferentes espacios de obtencin de estos recursos. Analizamos el rol de la medicina herbolaria domstica y el de la medicina formal en los hogares visitados. Y el tipo de dolencias que son tratadas con recursos herbolarios adquiridos en mercados en relacin al total de dolencias atendidas en el contexto domstico. Dada la proximidad a las serranas y la disponibilidad de espacios ruderales, jardines y/o huertas esperamos hallar que los recursos utilizados provengan principalmente de materiales frescos recolectados o cultivados en sitios prximos. No obstante, para algunos usos teraputicos fuertemente asociados a los contextos urbanos, esperamos hallar un patrn diferente. Del mismo modo, suponemos que hay una complementariedad entre el sistema de salud formal y el hogareo. Se analiza la medicina herbolaria en un barrio perifrico de la ciudad de Tandil, considerando las especies involucradas, su modo de obtencin y su relacin con la medicina del sistema pblico. Para ello se: Identifican las plantas que se usan como medicinales en el barrio las Tunitas y se estima la Importancia Relativa de las mismas. Analiza el rol de los distintos espacios de obtencin de los recursos herbolarios empleados en la medicina domstica. Analiza la comercializacin de plantas medicinales en farmacias y herboristeras. Comparan las dolencias tratadas en la medicina herbolaria y en el centro mdico del barrio. rea de estudio La poblacin estudiada se localiza en la zona 5 (INDEC 2001) del barrio Las Tunitas, ubicado en la periferia de Tandil. Esta ciudad est inserta en valles
que descienden desde las Sierras de Tandil (Sistema de Tandilia) hacia la Depresin del ro Salado, en el sudeste de la provincia de Buenos Aires, entre los 37 10 y 37 30 S y los 59 a 59 15O. Posee 168.086 habitantes (INDEC, 2001) y en los 90 su casco urbano ocupaba una superficie de 22,07 km2 y el suburbano de 30,27 km2. El barrio Las Tunitas se ubica en el sector sudoeste de la planta urbana de la ciudad, con su vrtice norte a poco ms de diez cuadras de la plaza principal; corresponde al casero asentado en las laderas de los cerros ubicados entre las Avenidas Daz Vlez, Estrada y las calles Granaderos y Uspallata (Figura 1). Segn el censo poblacional de 2001, cuenta con 1367 personas en 334 hogares. La mayor parte de las personas (85%) es oriunda de Tandil, un 1,3% proviene de otros lugares de la provincia de Buenos Aires, un 1,45% de otras provincias argentinas y el resto nacieron en otros pases, pero vivieron gran parte de su vida aqu (INDEC, 2001). Estimamos que los pobladores del barrio por proximidad tienen posibilidades de mantener contacto con el entorno natural, hacer uso de los recursos naturales disponibles y contar con un espacio para huertas familiares, en concordancia con lo observado por Pardo de Santayana y Gmez Pelln en Espaa (2003). Esta situacin particular, dentro de la vida urbana, es la que nos llev a considerar el barrio como una unidad de estudio. El ambiente natural, con modificaciones antrpicas por la urbanizacin y la actividad agrcola, se enmarca desde el punto de vista biogeogrfico en el Dominio Chaqueo, Provincia Pampeana, Distrito Oriental. La vegetacin local son pastizales o seudoestepas formadas por hierbas que no superan un metro de altura alternando con subfrtices y arbustos (Cabrera y Willink, 1980).
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Hilgert et al.
Figura 1: rea estudiada: ubicacin del Barrio Las Tunitas
El 43 % de los habitantes de Las Tunitas cuenta con alguna obra social para atender sus problemas de salud (INDEC, 2001). El servicio de salud pblico tiene en el barrio un Centro de Atencin Primaria de Salud (CAPS). La misma dispona en el momento del trabajo de campo de consultorios, enfermera farmacia y cuenta con 2 enfermeras, 2 mdicos y un odontlogo. Segn las estadsticas de la propia sala, en el ao 2005 la mayor cantidad de pacientes atendidos fueron los nios de 1 a 4 aos, y los
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jvenes de 15 a 24 aos, que coincidentemente son los grupos etarios ms populosos (Fuente: Centro de Atencin Primaria de Salud del barrio -Zona 5-). Los motivos de consulta ms frecuentes son las infecciones respiratorias, los cuidados del embarazo, las mialgias y artralgias (Tabla 1).
Hilgert et al.
Tabla 1. Frecuencia relativa (FR) de motivos de consultas efectuados por pacientes atendidos en 2005 Motivos de consulta Infecciones respiratorias, tos y catarro Control general de salud Otros Infecciones drmicas, heridas Mialgias, lumbalgias y artralgias (dolor muscular/articular) Cuidados de embarazo, parto y puerperio Anticoncepcin Dolor abdominal Hipertensin Asma bronquial Miantisis, pediculosis, sarna Desrdenes menstruales Vaginitis Otitis media aguda Infeccin urinaria Reaccin alrgica (Fuente: Centro de Atencin Primaria de Salud) Frecuencia relativa (%) 31,4 19,4 7,6 5,9 5,2 4,2 3,9 2,9 2,9 2,7 2,7 2,4 2,2 2,0 1,4 1,4
MATERIALES Y MTODOS Se relev la informacin disponible en el CAPS del barrio y en las estadsticas oficiales sobre la salud local de la zona 5 (INDEC, 2001), las caractersticas socioculturales de los pobladores y su procedencia. La unidad de muestreo fue la unidad domstica entendida como una unidad compleja que incluye tres componentes: social -grupo de personas que comparten la residencia-, espacial -el espacio fsico que habitan-, y econmico -actividades de subsistencia del grupo que se realizan parcial o totalmente en ese mbito- segn lo propuesto por Crivos y Martnez (1996). Entre el 2005 y 2006 se visit la totalidad de las casas del barrio (334) y se trabaj con aquellas familias donde alguno de sus integrantes accedi a participar del presente estudio (52 hogares, 15% del total). Se realizaron entrevistas semiestructuradas. Inicialmente se realizaron dos enlistados libres, 1) lista de las enfermedades que son tratadas con herbolaria en la unidad domstica y 2) lista de hierbas empleadas. Con esta base, se analizaron de modo
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particular, mediante entrevistas semiestructuradas, las plantas y dolencias enlistadas. Se pregunt sobre la procedencia y/o modo de obtencin de las plantas usadas, las partes empleadas, los mtodos de preparacin, la enfermedad que es tratada y cul es la accin de esa medicina (propiedad teraputica reconocida por el usuario). Adems se consign la edad y, cuando fue posible, origen tnico o nacionalidad de quien se ocupa de la medicina casera en la unidad domstica encuestada, de modo de tener un indicador del grupo cultural al que adscribe el mismo. La informacin se organiz en planillas Excel de acuerdo a los diferentes aspectos analizados. Se recolectaron muestras de herbario de las plantas utilizadas en el sitio de donde las obtienen y junto a algunos de los encuestados y/o muestras de lo adquirido en los comercios. El material fresco fue identificado por Carla Irureta y lo expendido por Mariela Higuera; se encuentra depositado en el Centro de Investigaciones y Estudios Ambientales (CINEA) de Tandil. La nomenclatura utilizada corresponde a la de la base de datos Iris del Instituto Darwinion (www.darwinion.edu.ar) y en el caso de taxones exticos, a la de Tropicos del Missouri Botanical Garden; las clasificaciones de estatus y hbitat se hicieron siguiendo a Cabrera (1963-1970), Frangi (1973, 1975) y Zund (1977). Se consideran exticas todas aquellas que no son propias de la vegetacin local. Para indagar acerca del comercio de las plantas medicinales en la ciudad de Tandil, se identificaron los sitios de expendio de productos fitoterpicos (plantas medicinales y derivados) en el macro centro comercial de la ciudad a partir de informacin propiciada por la Direccin de Rentas de la Municipalidad de Tandil. Se censaron 13 farmacias y 7 herboristeras y/o dietticas, en las que se consult acerca de las especies vendidas, la procedencia del recurso y la frecuencia de venta. Con el objeto de cuantificar la importancia relativa de cada especie reportada, se emple el estimador RI propuesto por Bennet & Prance (2000) el que evala el estatus de cada especie en el sistema cultural en estudio. Este ndice se calcula en funcin del nmero normalizado de propiedades farmacolgicas atribuidas localmente a cada especie y el nmero normalizado de tipo de dolencias tratadas con cada una. Por otra parte, analizamos la correlacin entre el orden de menciones de las especies dado en el enlistado libre por los entrevistados y el RI, para ello usamos el coeficiente
Hilgert et al.
Gamma diseado para datos ordinales y que es preferible al de Spearman y Kendall cuando hay muchos casos pareados. Para esta comparacin usamos el orden de los valores de RI de mayor a menor y el orden de mencin de menor a mayor, para que ambos denoten la importancia en el mismo sentido y consideramos slo las especies con un RI mayor o igual a 50. Examinamos las relaciones entre las dolencias tratadas en el CAPS y en los hogares; la relacin entre el nmero de menciones de las propiedades teraputicas de los recursos comprados en los comercios y las de los empleados en la medicina casera. Para ambos anlisis se realizaron correlaciones de Spearman. Para todos los casos se utiliz el programa STATISTICA (StatSoft, Inc. 2004). RESULTADOS La medicina herbolaria Se citaron 46 taxones (41 exticos) usados como medicinales pertenecientes a 46 gneros y 30 familias botnicas. Las familias ms representadas fueron: Lamiaceae (14,28%), Asteraceae (8,16%); Apiaceae, Alliaceae, Myrtaceae, Rutaceae, Simarubaceae, Solanaceae, Urticaceae y Verbenaceae incluyen 2 taxones, y del resto uno solo. Entre las especies usadas se hallaron 4 formas de vida: hierbas (56%), arbustos (23%), rboles (19%) y un liquen. La parte con ms usos registrados fueron las hojas (34 taxones) seguidas de la parte area (5), races y partes reproductivas (4), corteza (2) y ltex (1). En cuanto a la forma de preparacin las infusiones (36) son las ms frecuente , seguidas de las compresas y decocciones (9), jarabes y tpicos (3), baos de asiento, buches e ingestin (2) y, finalmente, lavajes y sahumerios (1) (Tabla 2). El nmero de especies citadas por persona en promedio fue 5,7 (DS= 3,1). En efecto, se ha hallado una gran heterogeneidad en el uso de los recursos entre las unidades domsticas (un 50% de las especies tiene un solo reporte y un 25% dos). Con respecto al ndice de Importancia Relativa el Aloe spp. (aloe vera) fue la especie con RI ms elevado 100, seguida de Ruta chalepensis (ruda), Rosmarinus officinalis (romero), Marrubium vulgare (malva rubia) y Matricaria recutita (manzanilla) (Tabla 2).
Al comparar el orden de menciones de las especies en el enlistado libre con el RI calculado, encontramos una correlacin positiva (Gamma = 1, Z = 2.18, p= 0.029). Las dolencias tratadas con plantas medicinales corresponden a 11 sistemas corporales o sistemas de dolencias (e.g. respiratorio, circulatorio) y se reconocieron 22 usos teraputicos. El mayor nmero de reportes fue para el sistema digestivo (41) seguido de sistema drmico y respiratorio (13), urinario (10); y las propiedades farmacolgicas ms citadas fueron tnico digestivo (15), analgsico (11), cicatrizante (11) y hepato-protectores (10). A su vez, entre los usos teraputicos los ms citados fueron tnico digestivo (15), analgsico (11), antitusivo (8) y diurtico (7). Al analizar que relacin hay entre los porcentajes de las dolencias tratadas en el CAPS y en los hogares hallamos que no hay asociacin (R = 0.260842, t = -1.35098, p = 0.188803). Es decir que hay dolencias que se tratan de modo exclusivo en uno de los sistemas y otros son susceptibles de ser tratadas en ambos espacios. De este modo, alergias, asma, hipertensin, dolores musculares y articulares, cuidados de embarazo, parto y puerperio, anticonceptivos e infecciones urinarias prcticamente se atienden slo en el CAPS. En cambio, las infecciones drmicas, respiratorias y ginecolgicas, las diarreas y el dolor de estmago se tratan tanto en el hogar como en el puesto. Finalmente para los problemas circulatorios, hepticos y nerviosos, los parsitos intestinales, las conjuntivitis, las jaquecas y para el control de la natalidad se emplea la medicina domstica. Teniendo en cuenta las propiedades teraputicas (22) asignadas a los recursos, comparamos el nmero de tems de los productos vendidos para cada una, con el nmero de usos registrados en la medicina domstica. Hallamos que slo 8 propiedades teraputicas estn asignadas a los productos vendidos en los comercios y no encontramos una relacin estadstica entre dichas frecuencias (R=0.204467, t= 0.934139, p=0.361374).
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Tabla 2. Taxones usados por la poblacin de las Tunitas: Importancia relativa (RI), uso asignado, modo de administracin, partes usadas, status y hbito.
Procedencia
Alliaceae, Allium cepa L. (Cebolla) Alliaceae, Allium sativum L. ( Ajo)
Co Co
1 1
16 Para la tos 35 1) Para los parsitos
Infusin
Bulbo Bulbo
1) Ingestin. Se come crudo en ayunas mezclado con vinagre 2) Para el dolor de muelas. Para bajar la presin. 2) Compresas. Se parte en 2 formando una Para mejorar la circulacin cruz y se ata en mano contraria al dolor de muelas Infusin
Amaranthaceae, Alternathera pugens Kunth (Yerba del pollo) Apiaceae, Apium graveolens L. (Apio) Apiaceae, Foeniculum vulgare Mill. (Hinojo) Apiaceae, Pimpinella anisum L. (Ans) Asteraceae, Achyrocline satureioides (Lam.) DC. (Marcela) Asteraceae, Artemisia absinthium L. (Ajenjo) Asteraceae, Baccharis articulata (Lam.) Pers. (Carqueja) Asteraceae, Matricaria recutita L. (Manzanilla) Bignoniaceae, Tabebuia impetiginosa (Mart. ex DC.) Standl. (Lapacho) Bombacaceae, Ceiba insignis (Kunth) P.E. Gibas & Semir (Palo borracho) Cecropiaceae, Cecropia pachystachya Trcul (Ambay) Chenopodiaceae, Chenopodium quinoa Willd. (Quinoa) Clusiaceae, Hypericum connatum Lam. (Cucharera) Crassulaceae, Sedum cf. spectabile Boreau (Blsamo)
Co
16 Para el empacho; para problemas digestivos
Hojas
N H
Co Sa Ba Co Sa Hu Sa Co Sa
1 2 1 4
16 Para los gases en los bebs 16 Para los parsitos 16 Para los gases
Infusin Infusin Infusin
Parte area E H Hojas E H
Semillas E H Parte area N a
50 Para problemas de hgado, estmago y para el Infusin concentrada empacho 35 Para abortar; para los parsitos; para la diabetes Infusin poco concentrada 31 Para orinar y problemas de vescula Infusin
3 2
Hojas Hojas
N A
Sa Ba Co
57 1)Para los enfriamientos; contra la diarrea y 1) Infusin gases en bebes 2) Para el cuidado del cabello 2) Decoccin 31 Para problemas de corazn y rin Infusin
Flores y hojas Corteza
Co
16 Para los piojos
Decoccin
Hojas
Co
19 Para problemas bronquiales
Infusin. Se mezcla con anacahuita
Hojas, E A cogollos Hojas E H
Ba
16 Para cicatrizar y desinfectar las quemaduras
Compresas
Sa
16 Para el corazn
Infusin
Parte area N a
Hu
20 Para desinfectar y calmar el dolor en heridas
Compresas. Se prepara con azcar o azufre rallado
Hojas
Euphorbiaceae, Euphorbia Co serpens Kunth (Yerba meona) Geraniaceae, Erodium cicutarium (L.) L'Hr. ex Aiton (Alfilerillo) Hu
16 Para problemas de rin, clculos y orinar Infusin mejor 16 En lceras varicosas Compresas, se aplican con paos limpios
Hojas
N H
Hojas
Lamiaceae, Lepechinia Hu vesiculosa (Benth.) Epling (Salvia)
16 Para dolores menstruales
Infusin
Hojas
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Status Hbito
E H E H E a E H E A E A E H E H E a
Familia , nombre cientfico (nombre vulgar)
RI Uso medicinal
Modo administracin
Parte usada
N reportes
Hilgert et al.
Lamiaceae, Marrubium vulgare L. (Malva rubia ) Lamiaceae, Mentha x piperita L. (Menta negra) Lamiaceae, Mentha x rotundifolia (L.) Huds. (Menta) Lamiaceae, Ocimum basilicum L. (Albahaca) Lamiaceae, Origanum vulgare L. (Organo) Lamiaceae, Rosmarinum officinalis L.(Romero)
Ba
63 1) Hemorroides 2) Problemas de garganta 3) Para cicatrizar heridas. Para el estmago 20 Para el estmago; para los parsitos.
1) Baos de asiento 2) Buches 3) Compresas Infusin amarga
Hojas
E H
Hu Hu
2 3
Hojas Hojas
E H E H
41 1) Para el hgado y para acelerar la digestin; 1) Infusin Como refrescante estomacal; para la tos. 2) Para el dolor de muelas 2) Se frota una hoja sobre la mejilla contigua varias veces durante el da 16 Para dolor de estmago e inflamacin intestinal Infusin. Se prepara junto con organo 41 1) Para la tos 1) Infusin. Con tomillo 2) Para la inflamacin de estmago e intestino, 2) Infusin dolores intensos y gases 66 1) Para el estmago; molestias intestinales; 1) Infusin dolor de cabeza; dolor de hgado 2) Para el cuidado del cabello 2) Decoccin fra 3) Para cicatrizar heridas 3) Compresas 4) Jarabe. Con eucaliptus, cscara de naranjas 4) Para la tos y azcar negra o miel. No deben tomar las embarazadas ni se debe tomar de noche porque quita el sueo 16 Para la tos Infusin. Con azcar y organo
Co Co
1 5
Hojas Hojas
E H E H
Hu
Ramas tiernas
E a
Lamiaceae, Thymus vulgaris L. (Tomillo)
Co
1 2
Hojas Hojas
E a E A
Lauraceae, Laurus nobilis Sa L. (Laurel) Ba Liliaceae, Aloe spp. (Aloe vera) Hu
20 1) Para la suerte (alejar las malas ondas que te 1) Decoctado, hervir martes y jueves enferman) 2) Para la tos 2) Jarabe
15
100 1) Para cicatrizar y desinfectar heridas y 1) Compresas Pencas sin E H quemaduras; vrices; hemorroides; cansancio de piel pies 2) Para el cutis, el acn; para los piojos; detiene 2) Tpico. Se macera y se prepara una crema la cada del cabello con un poco de alcohol para que se conserve 3) Empacho 3) Decoccin 4) Para adelgazar; para el estreimiento y en 4) Ingestin. Se come como verdura en guiso. lceras internas Se macera con miel y cualquier bebida espirituosa, para que el alcohol conserve el preparado, se mezcla y se toma una cucharada todas las maanas en ayunas 16 Para el estmago Infusin Hojas E H
Monimiaceae, Peumus boldus (Mol) Looser (Boldo)
Co
Moraceae, Ficus carica L. Hu (Higuera) Myrtaceae, Eucalyptus spp. (Eucalipto) Ba
1 4
16 Para eliminar verrugas 25 1) Desinfeccin de ambientes 2) Para la tos y la gripe; en resfros
Tpico. Se aplica la leche la mayor cantidad de veces posible 1) Sahumerio, se deja hervir en agua sobre el fuego para purificar el ambiente 2) Jarabe con romero, cscaras de naranja y azcar Infusin. Con ambay
Ltex Hojas
E A E A
Myrtaceae, Blepharocalyx Co salicifolius (Kunth) O. Berg (Anacahuita) Phytolaccaceae, Phytolacca dioica L. (Omb) Poaceae, Zea mays L. (Barba de choclo) Polygonaceae, Rumex crispus L. (Lengua de vaca) Rutaceae, Ruta chalepensis L. (Ruda) Co
19 Para la tos
Hojas
N A
16 Para cicatrizar heridas
Compresas con decoccin
Hojas
N A
Co Ba
1 1
16 Para orinar mejor 16 Para abortar
Infusin Decoctado. Se hierve la raz en 2 lts de agua, hasta que quede 1lt.
Estigmas E H Raz E H
Hu
90 1) Para los piojos y la sarna
1) Decoccin mezclada con vinagre: Se lava Parte area E a la cabeza 2 veces al da 2) Infusin 2) En infecciones vaginales 3) Para abortar; para regular el ciclo menstrual 3) Baos de asiento cuando hay atraso. En problemas y dolor de estmago. Enfriamientos. Detiene la diarrea. Mejora la circulacin
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Rutaceae, Citrus limon L. Burm. f. (Limn)
Co
41 1) Problemas de hgado 2) Para la tos
1) Infusin 2) Infusin. Con romero y miel
Jugo
E A
Simarubaceae, Quassia amara L. (Aquacia) Solanaceae, Nicotiana glauca Graham (Palanpalan) Solanaceae, Solanum sisymbriifolium Lam. (Espina colorada)
Co
16 Para los piojos
Decoccin mezclada con alcohol, se lava la Corteza y E A cabeza varias veces al da partes leosas Decoccin Hojas N a
Co
16 Para el estreimiento
Ba
16 Para orinar mejor. En problemas del rin
Infusin
Hojas
N H
Teaceae, Camellia sinensis Co L. Kuntze (T verde) Teaceae, Camellia sinensis Co L. Kuntze (T comn) Tiliaceae, Tilia sp.(Tilo) Urticaceae , Parietaria officinalis L.(Buscapina)* Urticaceae, Urtica urens L. (Ortiga) Usneaceae, Usnea hieronymii Kremphl. (Yerba de la piedra, barba de la piedra) Co Hu Ba
1 4 1 1 2
25 Mejora la digestin. Calma los nervios. Para Infusin orinar mejor 16 Para la conjuntivitis 16 Para calmar los nervios 16 En problemas del estmago 20 Detiene la cada de cabello Tpico. Se prepara la infusin, y cuando est tibia se lava varias veces al da Infusin Infusin Lavajes. Se hace una decoccin, se filtra y lava la cabeza con el preparado 2 o 3 veces por semana
Hojas Hojas Hojas Hojas Hojas
E a E a E A E H E H
Sa
35 1) Para orinar mejor. En problemas de rin. 1) Infusin Para la memoria 2) Dolores de garganta 2) Buches 41 Para el estmago. Para el hgado. Contra el Infusin. Como bajativo luego de las comidas. estreimiento. Calma los nervios Se colocan algunas hojas en el mate 16 Dolores de estmago. Contra el estreimiento. Infusin. Se colocan hojas en el mate. Despus de comer Mejora la digestin 31 Para la digestin. Mejora la circulacin y los Infusin concentrada problemas para orinar
Talo
N L
Verbenaceae, Aloysia Hu citriodora Palau (Cedrn) Verbenaceae, Lippia turbinata Griseb. (Poleo) Zingiberaceae, Zingiber officinale Roscoe (Jengibre) Hu Co
5 1 2
Hojas Hojas Raz
E a N a E H
Referencias: Comprada (Co); Sierras (Sa); Huerta (Hu); Baldo (Ba); Extica (E); Nativa (N); Hierba (H); rbol (A); Arbusto(a); Liquen (L); Enredadera (E)* Material no colectado,* identidad probable a partir de lo hallado por Prez y Pochettino (2009).
En cuanto a la procedencia de los recursos herbolarios utilizados, algunas especies se pueden obtener de 2 o ms formas. El 47,5% son recolectadas en huertas o jardines propios o de familiares, el 25% son obtenidas de comercios, el 15% se extraen de las sierras y el 12,5% en terrenos baldos. En un solo caso se hall cultivada una especie serrana nativa, la marcela (Achyrocline satureoides). No se registr la venta de recursos herbolarios locales. De las especies citadas como medicinales, 15 prosperan en las serranas aledaas a la ciudad, 5 son nativas y el resto estn asilvestradas. De ellas, slo 3 (todas nativas) son obtenidas exclusivamente de ese ambiente (Usnea hieronymi; Hypericum connatum y Baccharis articulata); en tanto que otras 4 son colectadas adems en baldos o jardines. Slo una de las plantas disponibles en el entorno no ha sido citada como colectada sino como comprada (Tilia sp.). Al considerar los diferentes espacios de obtencin de los recursos segn la importancia de los
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mismos se puede observar que ninguna de las 7 especies con RI igual o mayor a 50 se compra, y que huerta y baldo son indispensables ya que tienen especies exclusivas y se complementan perfectamente, el resto de las fuentes es prescindible. En efecto, el huerto provee 5 de estas 7 especies y las otras dos se colectan en los baldos. En el caso de la marcela y la manzanilla, adems de la huerta y el baldo respectivamente, pueden ser recolectadas en las sierras (Tabla 2). Para el resto de las especies (con RI menor a 50), en este sentido hay una complementariedad muy grande, ya que casi todas se obtienen de un nico espacio. En este grupo de plantas, los comercios son los que aportan ms especies exclusivas (Tabla 3). Entre los comercios y las huertas se obtienen el 75% de las especies usadas, son las dos procedencias ms complementarias. La sierra es la que menos complementa al resto aportando slo 2 especies exclusivas.
Hilgert et al.
Tabla 3. Procedencia de las especies con RI menor a 50. Spp. Procedencia Spp. totales exclusivas (% del total) Compra Huerta Baldo Sierras 23 10 9 7 22 9 6 2 Spp. compartidas 1 (Sa) 1 (Sa) 3 (Sa) 5 (Co, Hu, Ba)
Comprada (Co); colectada en las Sierras (Sa); Huerta (Hu); Baldo (Ba).
El 17 % de los hogares encuestados no utiliza plantas con fines medicinales. En relacin a la procedencia de las personas, en dos de las unidades domsticas encuestadas los informantes eran extranjeros (una seora chilena y un matrimonio espaol) y en otras tres trabajamos con integrantes de descendientes de tres etnias diferentes: Mapuches, Guaranes y Tehuelches. Las unidades domsticas integradas por descendientes de nativos americanos forman parte de los hogares que citaron ms plantas tiles y usos ms diversos. Evaluacin del comercio de la flora medicinal En la ciudad de Tandil existen 40 farmacias y 5 dietticas registradas (comercios donde entre otras cosas se expenden productos fitoterpicos). Aunque no todas las farmacias los venden. Algunas dietticas estn inscriptas en otros rubros, como mini mercados o poli rubros, por lo que no podemos precisar el total de comercios dedicados a este rubro. En las encuestas realizadas a estos centros formales de venta de plantas medicinales y productos elaborados a partir de ellas (tinturas madres, pastillas, cpsulas) se hall que en ninguna se expenden plantas extradas, cultivadas y/o fraccionadas en la zona. Los materiales provienen, en su mayora, de la Ciudad Autnoma de Buenos Aires o del Gran Buenos Aires, donde estn radicadas las plantas fraccionadoras o procesadoras. En ocasiones, el material a la venta lleva explcita la procedencia de la droga vegetal (se han podido detectar algunas provenientes de Crdoba y Misiones). Al compilar los registros de las ventas de un mes del invierno del 2006 se computaron 341 eventos; los que incluyen 43 especies. Entre ellos las especies ms mencionadas fueron Tilia ssp. (tilo), Malva sylvestris
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(malva), Matricaria recutita (manzanilla), Cecropia pachystachya (ambay), Ginkgo biloba (ginkgo), Senna acutifolia y S. angustifolia (sen), Valeriana officinalis (valeriana), Aesculus hippocastanum (castao de indias), Cymbopogon citratus (cedrn), Blepharocalyx salicifolius (anacahuita), Passiflora coerulea (pasionaria), Hydrocotyle asiatica (centella asitica), Hamamelis virginiana (hamamelis), Hypericum perforatum (hiprico), Mentha x piperita (menta piperita), Alternathera pugens (yerba del pollo), Poemus boldus (boldo), Melissa officinalis (melisa), Zea mays (barba de choclo), Silybum marianum (cardo mariano), Rosmarinus officinalis (romero) y Thea sinensis (t verde). Los usos ms frecuentes fueron especies sedantes, digestivas y circulatorias (Figura 2).
Figura 2. Usos ms frecuentes en comercios encuestados.
diurtico hipotensor hepatoprotector Propiedades farmacolgicas adelgazante laxante circulatorio digestivo
0 10 20 30
sedante
Porcentaje de uso
Frecuencia de usos de los productos fitoterpicos vendidos (total = 341) en los comercios encuestados (n = 20) durante un mes de invierno, ordenados segn sus propiedades farmacolgicas. N=341.
DISCUSIN El nmero de especies empleadas es menor al citado para otros trabajos realizados en la regin (Pochettino et al., 1997, Cambi et al., 1999, Hermann et al., 2001). En todos los casos, al igual que en nuestra rea, el mayor nmero de citas fue para dolencias del sistema digestivo. En Baha Blanca tambin fue el aloe la especie ms usada (Hermann et al., 2001). En este mismo trabajo, se citan ms usos teraputicos a los hallados en el presente, no obstante, dado que Hermann et al. (op cit.) no mencionan la totalidad de usos considerados, es imposible analizar si las diferencias se basan, por ejemplo, en el modo de categorizarlos. Hallamos un mayor nmero de especies exticas empleadas, gran parte ruderales, lo que coincide con lo citado por numerosos autores (Cambi et al., 1999,
Hilgert et al.
Bennet & Prance, 2000, Hermann et al., 2001). Por otra parte, los usuarios no las distinguen u organizan conceptualmente segn su origen, lo que puede ser interpretado como una adaptacin cultural a especies con gran disponibilidad en ambientes peri domsticos y en reas disturbadas (Voeks, 1996, Hilgert & Gil, 2006). Teniendo en cuenta los usos potenciales de estos recursos, cabe sealar que 25 de estas especies son adems comestibles (Alonso, 1998), 13 de las cuales fueron incluidas en el listado de malezas comestibles del cono sur (Rapoport et al., 2009). De stas, una sola es nativa de la regin y dos ms son alimentos americanos (el maz y la quinua) el resto son todas especies que provienen del viejo mundo con antiguos datos de usos tanto comestibles como medicinales. Es probable por lo tanto, que su inclusin en la regin, cuando no accidental, haya sido con diferentes fines, algunas como alimenticias, otras como ornamentales y solo algunas como teraputicas, en concordancia con lo propuesto por Bennet & Prance (2000). Sera muy interesante indagar sobre estos potenciales usos con doble finalidad (alimentos nutracuticos o medicina alimentaria) y generar iniciativas que incentiven la inclusin de ese recurso en la culinaria local, teniendo en cuenta principalmente la importancia de la diversidad en la dieta y las limitantes econmicas de los habitantes del barrio. En relacin al modo de obtencin, el rol que juegan los diferentes espacios cambia segn la importancia del recurso. Para las especies con RI ms alto es fundamental la presencia de huertos o baldos, en cambio para el resto las especies los diferentes espacios se complementan. Dentro de este segundo grupo los comercios cobran gran importancia. Lo que podra reflejar que estas especies son las de ms reciente incorporacin en la farmacopea familiar (por ello an tienen una importancia relativa baja y se obtienen en el espacio ms urbano conceptualmente hablando). Por otra parte, al comparar con otros resultados de la regin, el hecho que las especies empleadas provengan principalmente de huertos muestra una diferencia con lo hallado por Cambi et al. (1999) y Hermann et al. (2001) para poblaciones cntricas y aledaas a Baha Blanca, donde la principal fuente son los comercios. Dada la ausencia de materiales nativos locales en los comercios y, a pesar que la recoleccin se realiza con mayor intensidad en las sierras que en terrenos baldos, consideramos probable que la recoleccin de especies medicinales no implica un riesgo para la
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conservacin local y que no hay problemas de sobreexplotacin asociados a estos usos, semejantes a los reseados para otras regiones de Argentina (Lagrottera de Galn et al., 1986, Martnez 2005). Si bien debera realizarse una investigacin especial al respecto. Una sola especie disponible en el arbolado urbano no es colectada sino comprada, se trata del tilo el cual es extico-. Esto puede deberse a distintos factores, quizs los usuarios no reconocen el rbol. Respecto a la heterogeneidad en el uso de los recursos hallada entre las unidades domsticas, podra deberse a una erosin en estos saberes o a un enriquecimiento activo, fruto de la interaccin de personas con distintas bases culturales y de las influencias propias del ambiente urbano. Conocer el modo de transmisin y de generacin de cambios en los conocimientos de un grupo dado, nos permite predecir su variabilidad y estabilidad cultural a lo largo del tiempo y del espacio. Al respecto, se han definido diferentes formas de transmisin: horizontal -entre individuos de una misma generacin-, vertical -de padres a hijos- y oblicua -entre lneas genealgicas emparentadas-. Y, si se consideran el nmero de emisores y receptores del saber, se reconocen dos modos: desde una persona hacia muchas (eg. un maestro hacia sus alumnos) y desde muchos hacia una persona (e.g. un inmigrante frente a la comunidad donde se inserta) (Hewlett & CavalliSforza, 1986, Aunger, 2000, Lozada et al., 2006). Estos mecanismos cobran diferente importancia segn el contexto sociocultural en el que se insertan. Estudios previos analizan las caractersticas del sistema mdico de grupos inmigrantes en grandes ciudades, el modo en que se reorganizan las prcticas y los saberes tradicionales en estos ambientes donde la interaccin de humanos entre s es mayor que con el entorno natural (Pieroni et al., 2005, Pieroni & Quave, 2005, Verma et al., 2007). En nuestro caso, 74 especies reportadas en la bibliografa como medicinales estn disponibles en las serranas locales y no son reconocidas, o al menos no fueron mencionadas como recurso medicinal (Higuera, 2007). Gran parte de stas son nativas; que no sean utilizadas como medicamento ni reconocidas como tales, podra reflejar una dinmica de relacin con el entorno natural diferente a la de los asentamientos rurales. Probablemente cada familia o grupo familiar inmigrante al entorno urbano del barrio haya aportado al llegar un bagaje de informacin
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transmisin vertical y oblicua- y haya trado los recursos susceptibles de ser trasladados y cultivados. Luego, cada generacin fue incorporando nuevos saberes transmisin horizontal- y soslayando otros, y, fundamentalmente primaron las relaciones y los intercambios con los vecinos que la exploracin y bsqueda con el ambiente que los alberga. Probablemente sea ms apropiado en estos espacios multiculturales pensar que un proceso de globalizacin del conocimiento ms que de prdida. Sera interesante analizar los mecanismos locales de transmisin del conocimiento, suponemos que en este contexto, a diferencia de lo comnmente hallado, los principales modeladores son los intercambios horizontales y oblicuos. Finalmente, al analizar el tipo de dolencias tratadas en la medicina domstica y en el puesto de salud, observamos un uso complementario de ambos sistemas de salud. CONCLUSIONES Con el desarrollo de este trabajo se aporta informacin sobre las caractersticas de la medicina herbolaria de un barrio periurbano de la ciudad de Tandil (Buenos Aires). Se hall que huertas y baldos son los principales sitios de obtencin de las especies utilizadas. Esto pone en evidencia la necesidad de planificar el futuro desarrollo urbano de la ciudad, de modo de asegurar la conservacin de espacios destinados a huertas y jardines familiares y/o comunitarios. Por otra parte, dada la complementariedad hallada entre la medicina herbolaria domstica y la medicina formal, es importante que las polticas y acciones de salud acerquen y contemplen a ambos sistemas. AGRADECIMIENTOS A los pobladores de las Tunitas por su amabilidad y colaboracin. A G. Gil por su ayuda con el anlisis matemtico y estadstico de los datos; C. Irureta que identific las plantas recolectadas; C. Gutirrez, P. Cichero, M.L. Pochettino y los revisores annimos por sus comentarios que ayudaron a mejorar la presentacin de este trabajo. REFERENCIAS
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Antioxidant and free radical scavenging activity of Sida rhomboidea. Roxb methanolic extract determined using different in vitro models
[Actividades antioxidante y neutralizante de radicales libres del extracto metanlico de Sida rhomboidea. Roxb determinadas por diferentes modelos in vitro]
Menaka C THOUNAOJAM, Ravirajsinh N JADEJA, Ranjitsinh V DEVKAR*, AV RAMACHANDRAN Division of Phytotherapeutics and Metabolic Endocrinology,Department of Zoology, Faculty of Science, The M.S. University of Baroda,Vadodara-390002, Gujarat, India
Abstract
Antioxidant potential of Sida rhomboidea.Roxb methanol extract (MESR) was evaluated using in vitro models such as lipid peroxidation, metal chelation and reducing potential. Its free radical scavenging ability was also examined using in vitro assays for 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazil (DPPH,) superoxide (.O2), hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO.) and hydroxyl radical (HO.) radical scavenging. MESR recorded dose dependent effect on inhibition of lipid perodixation (IC50= 92.151.21g/ml), effective metal chelation (IC50=65.691.22g/ml) and higher reducing potential (ODmax=1.200.27). MESR could efficiently scavenged DPPH (IC50=63.231.59g/ml), .O2 (IC50=142.362.59g/ml), H2O2 (IC50=125.963.00 g/ml), NO . (IC50=85.362.01 g/ml) and HO. (IC50=90.451.88 g/ml) radicals in a dose dependent manner. Results obtained herein can be attributed to the presence of polyphenols (35.601.20 mg/ml gallic acid equivalent-polyphenols), flavanoids (26.940.94 mg/ml quercetin equivalent-flavanoids) and ascorbic acid (28.711.14 mg/ml ascorbic acid) in MESR. These observations suggest antioxidant and free radical scavenging potentials of MESR that adds a new dimension to its already established therapeutic uses. Keywords: antioxidant, free radical, Sida rhomboidea Roxb.
Resumen
El potencial antioxidante del extracto metanlico de Sida rhomboidea.Roxb (MESR) fue evaluada por modelos in vitro tales como peroxidacin lipdica, quelacin de metales y potencial reductor. Su capacidad de neutralizar radicales libres fue determinada in vitro en ensayos de DPPH, superxido (.O2), perxido de hidrgeno (H2O2), xido ntrico (NO.) and el radical hidroxil (HO.). MESR mostr una inhibicin dosis dependiente de la peroxidacin lipdica, (IC50= 92.151.21 g/ml), una quelacin efectiva de metales (IC50=65.691.22 g/ml) y un alto potencial reductor (ODmax=1.200.27). MESR neutraliz eficientemente el DPPH (IC50=63.231.59 g/ml), .O2 (IC50=142.362.59 g/ml), H2O2 (IC50=125.963.00 g/ml), NO. (IC50=85.362.01 g/ml) y HO . (IC50=90.451.88 g/ml) de una manera dosis dependiente. Los resultados pueden ser atriuidos a la presencia en el MESR de polifenoles (35.601.20 mg/ml polifenoles equivalentes al cido glico), flavanoides (26.940.94 mg/ml flavanoides equivalentes a la quercetina) y cido ascrbico (28.711.14 mg/ml). Estas observaciones sugieren actividades antioxidante y neutralizante de radicales libres en MESR que aaden una nueva dimensin a sus conocidas aplicaciones teraputicas. Palabras Clave: antioxidante, radical libre, Sida rhomboidea Roxb.
Recibido | Received: February 23, 2010 Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: April 24, 2010 Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010 Declaracin de intereses | Declaration of interests: Authors have no competing interests. Financiacin | Funding: University Grants Commission, New Delhi This article must be cited as: Menaka C Thounaojam, Ravirajsinh N Jadeja, Ranjitsinh V Devkar, AV Ramachandran. 2010. Antioxidant and free radical scavenging activity of Sida rhomboidea. Roxb methanolic extract determined using different in vitro models. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3): 191-198. {EPub May 25, 2010}
*Contactos | Contacts: Phyto_met@yahoo.com
Thounaojam et al.
Antioxidant and free radical scavenging activity of Sida rhomboidea
INTRODUCTION Reactive oxygen species (ROS) or free radicals (FR) are formed as an essential part of aerobic life and metabolism in any living system. These FR are however scavenged by inherent enzymatic and nonenzymatic antioxidant defense systems in the body to keep oxidative damage under check. But, excessive production of FR induces damage to biomolecules such as carbohydrates, protein, lipids and DNA (Halliwell, 1994) thus inducing the onset of diseases. Increased intracellular generation of ROS has been proposed as a mechanism of tissue injury associated with a variety of pathological manifestations like diabetes, cancer, neurodegenerative disease, inflammation, atherosclerosis and thrombosis (Jadeja et al., 2009). Many synthetic antioxidants like butyrated hydroxyanisole, butylated hydroxytoluene (BHT) and tert-butylhydroquinone (TBHQ) are commercially available but studies have shown that these synthetic antioxidants are prone to cause negative health effects (Stich, 1991). Hence, an alternative antioxidant with less toxic effects is desirable. Sida rhomboidea. Roxb. (SR; fam. Malvaceae) is a weed found in marshy places throughout India. In Ayurveda it is known as Mahabala and is useful against fever, heart diseases, burning sensations, urinary disorders, piles and all kinds of inflammation (Puri, 2002). In North Eastern parts of India, decoctions prepared from leaves of SR are consumed for its therapeutic potential against various ailments including obesity and diabetes. It has been shown to have significant analgesic activity (Venkatesh et al., 1999). Recent studies from our laboratory have documented its hypolipidemic (Thounaojam et al., 2009a,b), antidiabetic (Thounaojam et al., 2010a) and cardioprotective (Thounaojam et al., 2010b) properties. Chronic oral administration of SR in mice is non toxic up to 3000mg/kg bodyweight dose (Thounaojam et al., 2010c). There are no pharmacological studies highlighting the role of SR extract as a natural antioxidant. Large diversity of analytical methods is now available to determine antioxidant capacity of various herbs, spices, fruits etc. These assays differ from each other in terms of their mechanisms and expression of results for specific free radicals and their reaction conditions (Visavadiya et al., 2010). Since, these methods are widely used in physiology, pharmacology, nutrition and agro chemistry, it is difficult to select the most appropriate method(s) so
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as to avoid inappropriate applications and misinterpretation of the results (Cao and Prior, 1998; Magalhaes et al., 2008). In this context, it is advantageous to choose the most appropriate and commonly employed assay for the assessment of antioxidant property of a phytochemical extract in question. Hence, the present inventory encompasses an array of analytical methods to understand the biological activity of SR as a natural antioxidant. MATERIALS AND METHODS Plant material Fresh leaves of SR were collected from the natural habitats of North East India, identified by Dr. Hemchand Singh, a taxonomist in the Department of Botany, D.M college of Science, Manipur University, Imphal and herbarium (voucher specimen No-216) was deposited at Department of Botany, D.M college of Science, Manipur University, Imphal. Extraction Leaves of SR were collected in the month of June, shade-dried and grinded to fine powder. Hundred grams of this powder was subjected to extraction using methanol in a Soxhlet apparatus and the resultant filtrate was concentrated under reduced pressure by rotary evaporator (Buchi, Germany). A semi solid paste obtained was later stored at 00C. The extractive value of MESR was 21 % w/w, which was later dissolved in Milli Q water (Millipore India Pvt Ltd) and subjected to antioxidant and free radical scavenging assays. Total polyphenol estimation Total polyphenolic compounds were determined as per Chandler and Dodds (1993). MESR (1 ml) was mixed with 1 ml of 95% ethanol, 5 ml of distilled water and 0.5 ml of 50% Folin Ciocalteu reagent. This mixture was allowed to react for 5 min and later 1 ml of 5% Na2CO3 was added. Thereafter, it was thoroughly mixed and placed in dark for 1 h and the absorbance was determined at 725 nm. The calibration curve was prepared using gallic acid solution at various concentrations in methanol. Concentration of polyphenols was expressed in terms of mg/ml equivalent-gallic acid/100 mg plant extract. Total ascorbic acid estimation SR powder (5 gm) was taken into an extraction tube and 100 ml of EDTA: TCA (2:1) extracting
Thounaojam et al.
solution was added and the mixture was shaken for 30 min on a shaking platform, and then centrifuged at 800 X g for 20 min. Its volume was adjusted to 100 ml in a volumetric flask with EDTA: TCA (2:1) solution. 20 ml of this solution was taken and 1% starch indicator (2-3 drops) was added and titrated against 20% CuSO4 solution with appearance of dark brown colour indicating the end point (Barakat et al., 1973). The amount of ascorbic acid was expressed as mg/ ml/100 mg plant extract. Total flavanoids estimation Total flavanoid content was determined using aluminum chloride colorimetric method (Chang et al., 2002). 1 ml of MESR was mixed with 3 ml of methanol, 0.2 ml of 10% aluminum chloride, 0.2ml of 1 M potassium acetate and 5.6 ml of distilled water. The reaction mixture was allowed to stand at room temperature for 30 min and later absorbance was obtained at 415 nm. Calibration curve was prepared using quercetin solution at various concentrations in methanol. The concentration of flavanoids was expressed in terms of mg/ml equivalent- quercetin/100 mg plant extract. Lipid peroxidation assay A modified thiobarbituric acid reactive species (TBARS) assay was performed to determine the amount of lipid peroxide formed (Ruberto et al., 2000). Egg yolk homogenate (0.5 ml of 10% v/v) and 0.1 ml of MESR or ascorbic acid (AA) were added to a test tube and made up to 1 ml with distilled water. 0.05 ml of FeSO4 (0.07 M) was added to induce lipid peroxidation and the mixture was then incubated for 30 min. 1.5 ml acetic acid (20%) and 1.5 ml thiobarbituric acid (0.8% w/v in 1.1% sodium dodecyl sulphate) were added and the resultant mixture was vortexed and heated at 95 C for 60 min. 5.0 ml of butanol were added to each tube and centrifuged at 1000 X g for 10 min. Absorbance of the upper layer was obtained at 532 nm. Metal iron chelating activity The metal chelating activity of MESR and AA were estimated as per the method of Dinis et al. (1994). MESR extract (0.94 ml) or EDTA (at varying concentrations) was added to 0.02 ml FeCl2 (2 mM) and adding 0.04 ml ferrozine started the reaction. The contents were mixed thoroughly and allowed to stand for 10 min and later absorbance was obtained at 562 nm.
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Assay of total reducing power The antioxidant activity was evaluated in terms of reducing power as per the method of Oyaizu (1986). MESR (2.5 ml) or AA (at varying concentration) was mixed with 2.5 ml of phosphate buffer (200mM, pH 6.6) and 2.5ml of 1% potassium ferricyanide. This mixture was placed in a water bath at 50C for 20 min. The resulting solution was cooled rapidly on ice, mixed with 2.5 ml of 10% trichloroacetic acid and centrifuged at 1000 X g for 10 min. 5.0 ml supernatant was mixed with 5 ml of distilled water and 1ml of 1% ferric chloride. Absorbance of the resultant mixture was obtained after 10 min at 700 nm. Increased absorbance is indicative of increased reducing power. DPPH radical scavenging activity Free radical scavenging activity of MESR or AA was measured by DPPH (1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazil) as per Yokozawa et al. (1998). 1 ml of DPPH (0.08mM) was added to 0.3 ml of MESR or AA (at varying concentrations). The reaction mixture was mixed thoroughly and allowed to stand at room temperature for 30 min, and later absorbance was obtained at 517 nm. Superoxide (.O2) radical scavenging activity The assay was based on the capacity of the sample to inhibit blue formazan formation by scavenging the superoxide radicals generated in riboflavin-light-NBT system (Beauchamp and Fridovich, 1971). 50 mM phosphate buffer (pH 7.6), 20 g riboflavin, 12 mM EDTA, and NBT (0.1 mg/3 ml) were mixed and the resultant mixture was exposed to direct sunlight for 150 sec and later, absorbance was obtained at 590 nm. This process was repeated with various concentrations of MESR and AA. Hydrogen peroxide (H2O2) radical scavenging activity The ability of MESR or AA to scavenge hydrogen peroxide was determined (Ruch et al., 1989). 40 mM solution of hydrogen peroxide (H2O2) was prepared in phosphate buffer solution (PBS, pH 7.4). Various concentrations of 0.5 ml of the MESR or AA were added to 1ml of H2O2 solutions in PBS. After 10 min, the absorbance was obtained at 230 nm.
Thounaojam et al.
Nitric oxide (NO.) radical scavenging activity Nitric oxide generated from sodium nitroprusside was measured by the Griess reagent (Green et al., 1982). Various concentrations of MESR or AA were mixed with sodium nitroprusside (1mM in PBS) and incubated at 25C for 150 min. 0.5ml of this solution was mixed with equal volume of Griess reagent (1% sulfanilamide, 2% orthophosphoric acid, and 0.1% naphthalene ethylene diamine dihydrochloride) and absorbance was obtained at 546 nm. Hydroxyl radical (HO) scavenging activity Hydroxyl radicals generated by the Fenton reaction were measured as per Chung et al. (1997). The Fenton reaction mixture constituted of 0.2ml FeSO47H2O (10mM), 0.2ml EDTA (10mM) and 0.2ml 2-deoxyribose (10mM) mixed with 1.2 ml phosphate buffer (0.1 M, pH 7.4). MESR (0.2ml) or AA (at varying concentrations) was added to Fenton reaction mixture followed by 0.2ml H2O2 (10 mM) and incubation at 37 C for 4h. Later, 1ml TCA (2.8%) and 1ml TBA (1%) were added in reaction mixture and placed in a boiling water bath for10 min. The resultant mixture was brought to room temperature and centrifuged at 395 X g for 5min and absorbance was obtained at 532 nm. Statistical analysis Data were expressed as mean S.D for three parallel measurements using Graph Pad Prism version 3.0 for windows, Graph Pad Software, San Diego, California, USA. Statistical analysis was done by students t test and p<0.05 considered as significant. The 50 % inhibitory concentration (IC50) was calculated from the dose response curve (Graph Pad Prism Version 3.0) obtained by plotting percentage inhibition versus concentrations. Linear regression analysis was done for total reducing power assay. Percentage (%) inhibition was calculated as: [(absorbance of control absorbance of test sample) absorbance of control] 100. RESULTS Quantitative phytochemical analysis revealed the presence of 35.601.20 mg/ml gallic acid equivalent-polyphenols, 26.940.94 mg/ml quercetin equivalent-flavanoids and 28.711.14 mg/ml ascorbic acid per 100 mg MESR.
Lipid peroxidation assay showed a dose dependent (50-600 g/ml) response of MESR (p<0.05) with 600 g/ml being the optimal concentration (Figure.1).
Figure 1. Effect of MESR and AA on inhibition of lipid peroxidation
Data expressed as mean S.D for three measurements. **p<0.001 compared to control
IC50 value for MESR was 92.151.21g/ml whereas that of AA was 62.361.09 g/ml indicating that the lipid peroxidation inhibitory activity of MESR was less than AA (Table. 1).
Table 1. Fifty percent inhibitory concentration (IC50) of MESR and AA. IC50 (g/ml) Assay MESR AA Inhibition of lipid peroxidation 92.151.21 62.361.09 Metal chalation 65.691.22 43.260.98 DPPH radical scavenging 63.231.59 60.471.42 Superoxide radical scavenging 142.362.59 40.231.00 Hydrogen peroxide radical 125.963.00 50.191.37 scavenging Nitric oxide radical scavenging 85.362.01 39.091.21 Hydroxyl radical scavenging 90.451.88 90.451.88
Ferrozine induced metal chelating assay revealed that MESR showed a dose dependent (50500 g/ml) metal chelating property (p<0.05) (Figure.2).
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Figure 2. Effect of MESR and AA on metal chelation.
Data expressed as mean S.D for three measurements. **p<0.001 compared to control. Figure 3. Reducing potential of MESR and AA
IC50 values of MESR (65.691.22 g/ml) and that of AA (43.260.98 g/ml) were comparable (Table.1). Antioxidant potential in form of inhibition of metal chelation was superior to inhibition of LPO (65.691.22 g/ml vs. 92.151.21g/ml). MESR recorded linear increase in optical density (r2=0.95) with increase in concentration (50-800 g/ml) with maximum absorbance being 1.20 (800 g/ml). Ascorbic acid recorded relatively higher absorbance values (Figure.3). The DPPH free radical scavenging assay revealed a dose dependent potential (p<0.05) of MESR (50-500 g/ml) (Figure.4A), with IC50 value being 63.231.59 g/ml whereas, that of AA was 60.471.42 g/ml (Table.1). Similarly, scavenging assays for .O2, H2O2 and NO. radicals were performed in which MESR recorded a dose dependent response (p<0.05) (Figure.4B,4C and 4D). The IC50 values of MESR for O2, H2O2 and NO. radicals vs. IC50 values of AA were recorded to be 142.362.59 g/ml vs. 40.231.00 g/ml, 125.963.00 g/ml vs. 50.191.37 g/ml and 85.362.01 g/ml vs. 39.091.21 g/ml respectively (Table.1). HO. scavenging assay also recorded a dose dependent effect (p<0.05) of MESR (50-600 g/ml) (Figure.4E), with an IC50 value of 90.451.88 g/ml that was comparable with IC50 value of 90.451.88 g/ml observed in AA (Table.1).
Data expressed as mean S.D for three measurements. **p<0.001 compared to control. Figure 4. DPPH (A), superoxide (B), hydrogen peroxide (C), nitric oxide (D) and hydroxyl radical scavenging potential of MESR and AA.
Data expressed as mean S.D for three measurements. **p<0.001 compared to control
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DISCUSSION Present study investigates antioxidant and free radical scavenging potential of MESR based on its ability to (i) inhibit/promote various biological processes such as lipid peroxidation, metal chelation and reducing potential (ii) scavenge biologically important oxidants such as NO, .O2 , HO. and H2O2 and (iii) scavenge non biological stable free radicals (DPPH). Lipid peroxidation is initiated by the abstraction of a hydrogen atom in an unsaturated fatty acyl chain and later propagated as a chain reaction (Droge, 2002; Kohen and Nyska, 2002). Lipid peroxides are involved in numerous pathological events, including inflammation, metabolic disorders and cellular aging (Oyaizu, 1986). Therefore, inhibition of lipid peroxidation is of great importance in the induction/onset of diseases involving free radicals. Egg yolk lipids undergo a non-enzymatic lipid peroxidation when incubated with ferrous sulphate yielding a carbonyl product such as malonaldehyde (MDA). We recorded dose dependent inhibition of MDA formation by MESR. Metal chelating capacity is an important antioxidant mechanism because it reduces concentration of catalyzing transition metal during lipid peroxidation (Diplock, 1997). In the present study, we recorded significant dose dependent metal chelating potential of MESR. Hence, results obtained from metal chelating capacity assay using MESR further validate results obtained in lipid peroxidation assay. Previous studies have reported a direct correlation between antioxidant activities and reducing power of certain plant extracts (Jadeja et al., 2009). In the reducing power assay, the presence of antioxidants in the sample reduced Fe3+/ferricyanide complex to the ferrous form. Inhibitory effect on lipid peroxidation, effective metal chelation and higher reducing potential of MESR recorded in this study suggests that MESR has a strong antioxidant property. Previous studies have correlated the reducing capacity of phytocompounds to its electron-donating ability (Aruoma, 2003; Roginsky and Lissi, 2005). Hence it can be assumed that effective electron donating ability attributed to the observed overall antioxidant property of MESR. Free radicals are produced in living system during normal metabolic process or in presence of xenobiotics that initiates oxidative damage. MESR could quench DPPH free radicals in a dose dependent
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manner and the IC50 value was also comparable to that of AA. These observations suggest that MESR has free radical scavenging ability. DPPH radical is a stable FR that has been widely used to evaluate the FR scavenging ability of natural antioxidant (Ruch et al., 1989). Antioxidants, on interaction with DPPH, either transfer an electron or hydrogen atom to DPPH, thus neutralizing its FR character (Oyaizu, 1986). In keeping with our previous assumption of effective electron donating ability of MESR, observations on stabilizing DPPH free radicals observed herein are further validated. NO. radical plays multiple roles in a variety of biological processes viz. as an effector molecule, neuronal messanger, vasodilator, antimicrobial agent, etc (Hagerman et al., 1998). It has been reported to react with .O2 radical to form peroxynitrite radicals (ONOO-) that cause toxicity to biomolecules such as proteins, lipids and nucleic acids (Yermilov et al., 1995). During the process of inflammation, cells of the immune system generate superoxide radicals in which NADPH oxidase plays an important role in induction of vascular complications (Droge, 2002; Kohen and Nyska, 2002). .O2 further decomposes into singlet oxygen and HO. that results in massive mitochondrial damage. MESR significantly inhibits generation of NO. and HO. radicals in a dose dependent manner. These observations further highlight the importance of MESR in preventing physiological deletoriation caused by NO. and .O2 radicals. HO. radical is the most reactive among ROS that causes peroxidation of membranes lipids and is known to be highly mutagenic and carcinogenic (Miyake and Shibamoto, 1997). H2O2 radical is also known to produce OH. radical by crossing cell membrane rapidly and by reacting with Fe2+ and Cu2+ ions. The same has been related to the initiation of many toxic effects (Miller et al., 1993). It is therefore biologically advantageous for cells to control the accumulation of H2O2. MESR was found to be highly potent in scavenging H2O2 radical thus validating previous observations pertaining to its antioxidant potential. These results suggest that in vitro FR scavenging activity of MESR was evident from the results obtained in DPPH, NO., .O2, OH. and H2O2 scavenging assays. Quantitative assay of phytocompounds of MESR revealed high contents of total polyphenols, flavanoids and ascorbic acid. Plant polyphenols are
Thounaojam et al.
multifunctional and act as hydrogen-donating antioxidants and metal chelators. Velioglue et al. (1998) reported a high correlation between total phenolic content and antioxidant potential in some fruits, vegetables and grain products. Hence, high phenolic content observed in MESR can be attributed to its FR scavenging ability. Also, the presence of flavanoids and ascorbic acid in the MESR could be a possible reason for its significant antioxidant property (Jadeja et al., 2009). CONCLUSIONS It can be concluded from the present study that MESR possesses potent antioxidant and FR scavenging properties that have been demonstrated using a variety of in vitro experimental models. Hence, this study makes valuable addition to the existing wealth of information on this indigenous natural antioxidant. ACKNOWLEDGEMENTS The authors are grateful to University Grants Commission, New Delhi for providing Financial Assistance in the form of JRFSMS scholarship. REFERENCES Aruoma O I. 2003. Methodological considerations for characterizing potential antioxidant actions of bioactive components in plant foods. Mutation Res 523-524: 9-20. Barakat MZ, Shehab SK, Darwish N, Zahermy EI. 1973. Determination of ascorbic acid from plants. Anal Biochem 53:225-247. Beauchamp C, Fridovich I. 1971. Superoxide dismutase: Improvedassays and an assay applicable to acrylamide gels. Anal Biochem 44: 276-277. Cao G, Prior RL. 1998. Comparison of different analytical methods for assessing total antioxidant capacity of human serum. Clin Chem 44: 13091315. Chandler SF, Dodds JH. 1993. The effect of phosphate, nitrogen, and sucrose on the production of phenolics and solasidine in callus cultures of Solanum laciniatum. Plant Cell Rep 2:105-110. Chang C, Yang M and Wen H. Chern J. 2002. Estimation of total flavonoid content in propolis by two complementary colorimetric methods. J Food Drug Anal 10: 178-182.
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2010 The Authors 20xx Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), 199-205 BLACPMA ISSN 0717 7917 Artculo Original | Original Article
Evaluation of the hepatoprotective activity of Portulaca oleracea L. on D-galactosmaine-induced hepatic injury in rats
[Evaluacin de la actividad hepatoprotectora de Portulaca oleracea L. en el dao heptico inducido por Dgalactosamina en ratas]
Vunta PRABHAKARAN a, Bagepalli Srinivas ASHOK KUMAR b*, Devangam SHESHADRI SHEKAR c, Rudrappa NANDEESH d, Peta SUBRAMANYAM e, Divati RANGANAYAKULU e Department of Pharmacognosy, S.V. Polytechnique College, Tirupathi, Andhra Pradesh (India). bDepartment of Pharmacognosy, Sri K.V.College of Pharmacy, Chickballapur, Karnataka (India), c Sri K.V. College of Pharmacy, Chickballapur, Karnataka (India), d Department of Pharmacognosy, Sree Siddhaganga College of Pharmacy, Tumkur, Karnataka (India). eDepartment of Pharmacology, Sri Padmavathi School of Pharmacy, Tiruchanoor, Tirupathi (India).
a
Abstract
The suspensions of methanol and petroleum ether extracts of entire plant of Portulaca oleracea in carboxy methyl cellulose (CMC) were evaluated for hepatoprotective activity in Wister albino rats by inducing hepatic injury with D-galactosamine (400 mg/kg). D-galactosamine induced hepatic damage was manifested by a significant increase in the activities of marker enzymes. Biochemical data exhibited significant hepatoprotective activity of Methanol extract of Portulaca oleracea at oral dose of 200 and 400 mg/kg against D-galactosamine. Silymarin was used as reference standard also exhibited significant hepatoprotective activity against D-galactosamine. The biochemical observations were supplemented with histopathological examination of rat liver sections. Phytochemical analysis of both pet ether and methanol extracts of Portulaca oleracea was also carried out. Keywords: Portulaca oleracea; Silymarin; carboxy methyl cellulose; D-Galactosamine; hepatoprotective activity
Resumen
Las suspensiones de los extractos en methanol y eter de Portulaca oleracea (planta complete) en carboxi-metil celulosa (CMC) fueron evaluadas por su actividad protectora en ratas Wister albino contra el dao heptico inducido con D-Galactosamina. El dao causado por la D-Galactosamina se manifest como un aumento significativo en la actividad de los marcadores enzimticos. Los resultados bioqumicos mostraron un efecto protector importante del extracto metanlico de Portulaca oleracea contra dosis orales de 200 and 400 mg/kg de D-Galactosamina. La droga de referencia, silimarina, tambin mostr un efecto protector importante. Las observaciones bioqumicas fueron suplementadas con la evaluacin histopatolgica de secciones de hgado. Se efectu un anlisis fitoqumica de ambos extractos. Palabras Clave: Portulaca oleracea; silimarina; carboxi-metil celulosa; D-Galactosamina; actividad hepatoprotectora
Recibido | Received: December 7, 2009 Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: April 24, 2010 Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010 Declaracin de intereses | Declaration of interests: authors have no competing interests. Financiacin | Funding: This work was self financed. This article must be cited as: Evaluation of the hepatoprotective activity of Portulaca oleracea L. on D-galactosmaine-induced hepatic injury in rats. 2010. Vunta Prabhakaran, Bagepalli Srinivas Ashok Kumar, Devangam Sheshadri Shekar, Rudrappa Nandeesh, Peta Subramanyam, Divati Ranganayakulu. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3): 199205. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: E-mail: ashok4vani@gmail.com. Phone: +91-9986946780: Department of Pharmacognosy, Sri K.V.College of Pharmacy, Chickballapur, Karnataka (India).
Prabhakarn et al.
Hepatoprotective activity of P. oleracea on D-galactosamine-induced hepatic injury in rats
INTRODUCTION Hepatitis is common disease in the world especially in the developing countries. Despite considerable progress in the treatment of liver diseases by oral hepatoprotective agents, search for newer drugs continues because the existing synthetic drugs have several limitations. Hence, there are many researchers of traditional medicines attempting to develop new drugs for hepatitis (Liu 1989). Portulaca oleracea L. ((Portulacaceae) is a warm-climate annual, it is known as Lonika in Sanskrit, Peddapayilikura in Telugu. The plant is succulent, herbaceous, erect or decumbent growing up to 30 cm height with cylindrical stem of 2-3 mm in diameter. P. oleracea used traditionally for alleviating pain and swelling (Okwuasaba et al., 1987). The entire plant is usually cut into small pieces and eaten with salt; applied topically to soothe skin (Ghazanfar 1994). It also exhibits a wide range of pharmacological effects, including antibacterial (Zhang et al., 2002), analgesic, antiinflammatory (Chan et al., 2000), and skeletal muscle- relaxant activities (Parry et al., 1987; Parry et al., 1993). A bronchodilatory effect in asthmatic patients, skeletal muscle relaxant, and antifertility effect were also reported for P. oleracea (Elkhayat et al., 2008). It is also consumed as a vegetable, widely sold in United Arab Emirates and Oman (Miller and Morris, 1988) and has been reported to be rich in linolenic acid and -Carotene (Liu et al., 2000). In addition to flavonoids, coumarins (Awad, 1994) and monoterpene glycoside (Sakai et al., 1996), it also contains neither N-Transferuloyltyramine (Mizutani et al., 1998), dopamine, dopa, high concentrations of noradrenaline (Feng et al., 1981), ferulic acid (Chen, 2000), adenosine (Meng et al., 1981) and portulene (Elkhayat et al., 2008). This plant species is also a popular remedy in Trinidad and Tobago for urinary problems, "cooling" and high cholesterol. The hepatoprotective activities of hydroalcoholic extract of stems and leaves of P. oleracea in rats treated with CCl4- (Elkhayat et al., 2008) or rifampicin (Kulkarni et al., 2007) were previously reported. The present study was
designed to investigate the hepatoprotective activity of petroleum ether and methanol extract of P. oleracea against D-galactosamine induced hepatotoxicity in rats. MATERIAL AND METHODS Plant material The whole plant of P.oleracea was collected from surrounding Tirumala hills, Tirupathi, Andhra Pradesh in the month of November. The plant was authenticated by comparing with the specimen by Dr. K. Madhava Setty, Department of Botany, Sri Venkateshwara University, Tirupathi, Andhra Pradesh. A specimen voucher (KVCP103) has been deposited in the herbarium of department of Pharmacognosy, Sri K.V. College of Pharmacy, Chickballapur, India. The plant was cut into small pieces and coarsely powdered. The coarse powder was passed through a No. 10 mesh and used for extraction. Preparations of plant extracts The coarsely powdered plant material was extracted with petroleum ether and methanol by using Soxhlet apparatus sequentially. Both extracts were concentrated to dryness in vacuum using a rotary flash evaporator and yield of methanol and petroleum ether extracts were 3.13 %w/w and 1.90 %w/w. Extracts were dried in a desiccator and preserved in refrigerated condition. Both petroleum ether and methanol extracts were suspended in 0.3 % CMC just before administration to rats. Preliminary phytochemical screening A preliminary phytochemical screening for steroids, flavonoids, glycosides, tannins, phenolic compounds, proteins and carbohydrates were carried out using a standard procedure described by Kokate (1986). Animals Male albino rats of Wister strain weighing about 150-200 g of either sex were acclimatized to the experimental room temperature 23 2 C, controlled humidity conditions (50-55 %) and 12 h light and 12 h dark cycle. They were caged
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with a maximum of two animals in each polypropylene cage and were fed with standard food pellets (Kamadenu Enterprises, Bangalore) and water ad libitum. The study was conducted after obtaining ethical committee clearance from the institutional animal ethical committee of J.S.S. C P, J.S.S. College of Pharmacy, Ootacamund, Tamilnadu (India) No. IAEC/JSSCP/02/2004-2005. Acute toxicity studies Petroleum and methanol extracts of P. oleracea were studied for acute oral toxicity as per OECD (Organization for Economic Cooperation and development) guidelines No. 423, (2000). The extract was devoid of any toxicity in rats when given in dose up to 2000 mg/kg by oral route. Hence, for further studies 200- 400 mg/kg doses of extract were used. Hepatoprotective activity Rats were randomly divided into seven groups of six animals each. Group I: Served as control and received CMC (1 ml/kg p.o.) for a period of days. Group II: Received Dgalactosmaine (400 mg/kg, i.p.) on 14th day. Group III: Received silymarin (25 mg/kg p.o.) for 14 days and hepatotoxicant on 14th day intraperitonially. Group IV and V: Received petroleum ether extract P. oleracea (200 and 400 mg/kg p.o.) for 14 days and hepatotoxicant on 14th day intraperitonially. Group VI and VII: Received methanol extract at dose P. oleracea (200 and 400 mg/kg p.o.) for 14 days and hepatotoxicant on 14th day intraperitonially. After 24 h of administration galactosamine, animals were anaesthetized with pentathol sodium. Blood was collected by Sino-orbital puncture, and rats were sacrificed after the collection of blood samples and the livers were excised immediately for histopathological examination. The blood samples were allowed to clot for 30-40 min. Serum was separated by centrifugation for 15- 20 min at 2000 rpm was used for estimation of various biochemical parameters (Deshpande, et al., 2003).
Biological assays The activities of serum asparatate amino transferase (ASAT, GOT), alanine amino transferase (ALAT, GPT) (Reitaman and Frankel, 1957), alkaline phosphatase (ALP) (King and Armstrong, 1934), total bilirubin (TB) (Malloy and Evelyn, 1987), total cholesterol (TC), total protein (TP), albumin triglycerides (TGL) (Foster and Dunn, 1973) were carried out. Histopathology Small pieces of liver tissues were collected in 10% formal saline for proper fixation. These tissues were processed and embedded in paraffin wax. They were cut into section of 5 to 6 microns in thickness were cut and stained with hematoxylin and eosin (Luna, 1966). Statistical analysis The data were expressed as mean S.E.M. The differences were compared using one-way ANOVA followed by Dunnetts test using PRISM software (version 4). The results were considered significant when p<0.05. RESULTS Petroleum ether and methanolic extracts of P.oleracea showed the presence of alkaloids, flavonoids, steroids, saponins, fixed oils and tannins and phenolics. Table 1 showed effect of D-galactosmaine (group II) developed hepatocellular damage as evident from a significant elevation (P<0.01) in serum activities of AST, ALT, ALP, TGL, TP, Albumin and TB level when compared with control. The pet ether and methanolic extract of P. oleraceas showed significant restoration of the altered biochemical parameters (p<0.01 and p<0.05) at both the dose levels (200 and 400 mg/kg) when compared to d-galactosamine treated group. Silymarin also showed similar effect.
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Figure 1. Histopathological observations.
Group 1. Rats treated with CMC solvent showing structure of normal liver (H&E 400x).
Group 2. Rats treated with D-galactosmaine showing severe periportal inflammation necrosis of zone1 hepatocytes and bile duct hyperplasia (H&E 400x).
Group 5. Rat treated with D-galactosmaine and 200 mg of methanol extract of P.oleracea showing foamy degeneration of hepatocytes and regenerative activity (H&E 400x).
Group 3. Rat treated with D-galactosmaine Silymarin showing focal necrosis and periprotal inflammation (H&E 400x).
Group 6. Rat treated with D-galactosmaine and 400 mg of pet ether extract of P. oleracea showing foamy degeneration of hepatocytes (H&E 400x).
Group 4. Rat treated with D-galactosmaine and 200 mg/kg of pet ether extract of P. oleracea showing foamy degeneration of hepatocytes (H&E 400x).
Group 7. Rat treated with D-galactosmaine and 400 mg of methanol extract of P. oleracea showing foamy
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Table 1. Effect of the petroleum ether and methanol extracts of P. oleracea on D-galactosmaine induced hepatotoxicity in rats. Sample Dose (mg/kg) TB (mg/dl) ASAT (U/L) ALAT (U/L) TGL (mg/dl) TC (g/dl) Albumin (g/dl) TP (g/dl) ALP Solvent 0.780.10 28.331.48 18.830.60 79.830.87 48.01.21 5.180.11 9.900.15 197.686.82 D(+)galN 400 4.030.07 73.333.40 84.833.44 25.671.76 1742.96 3.550.16 5.350.40 373.3317.7 Silymarin 25 1.620.09** 31.832.02 23.170.95 71.172.27* 72.172.75** 1.420.14** 80.12** 215.176.46** Pet ether extract 200 3.430.19** 68.832.81** 74.671.89** 31.52.14** 172.834.21** 3.230.15** 4.330.23** 447.5018.22** 400 4.120.09** 75.832.77** 76.172.46** 36.670.88** 167.676.22** 2.306.22** 4.380.31** 415.834.32** Methanol extract 200 2.80.07** 37.673.18** 38.401.36** 69.671.89** 106.675.94** 6.370.11** 2.60.23** 287.334.06** 400 1.920.07** 45.672.60** 361.21** 79.331.82 91.831.25** 2.50.21** 7.430.17** 244.335.28*
Mean S.E.M.; (n=6); *P<0.05, **P<0.01 as compared with control (CMC) Dunnetts test. TB: Total bilirubine. ASAT: asparatate amino transferase. ALAT: alanine amino transferase. TGL: triglycerides. TC: Total cholesterol. TP: Total proteins. ALP: alkaline phosphatase
Histology of the liver sections of normal control animals (Group I) showed normal liver architecture The liver section of galactosmine treated (Group II) showed hepatic cells with severe toxicity characterized by inflammatory cell collection, scattered inflammation across liver parenchyma, focal necrosis and swelling up of vascular endothelial cells. Petroleum ether and methanol extracts of P.oleracea appeared to significantly prevent the galactosmine toxicity as revealed by the hepatic cells with well-preserved cellular architecture (Group IIIVII). DISCUSSION Galactosamine induced experimental model system in rats is recognized to be much like viral hepatitis in humans from both morphological and functional points of view (Keppler et al., 1968). Galactosamine has great liver specificity because hepatocytes have high levels of galactokinase and galactose-1-uridyltransferase. Galactosamine does not affect other organs (Maley et al., 1986 and Keppler et al., 1970). Galactosamine causes hepatic injury with spotty hepatocyte necrosis and marked portal and parenchymal infiltration (Keppler and Decker, 1969). Galactosamine also causes depletion of uridine diphosphate (UDP) by increasing the
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formation of UDP-sugar derivatives, which results in inhibition of RNA and protein synthesis leading to cell membrane deterioration (Decker et al., 1973; ElMofty et al., 1975). Galactosamine administration in rats disrupts the membrane permeability of the plasma membrane causing leakage of the enzymes from the cell, which leads to elevation in levels of serum enzymes (Mitra et al., 2000). Elevated serum enzymes are indicative of cellular leakage and loss of functional integrity of the cell membrane in liver (Drotman and Lawhorn, 1978). Hence significant rise in the transaminase levels could be taken as an index of liver damage. Further, intense galactosamination of membrane structure is thought to be responsible for loss of activity of ionic pumps. The impairment in the calcium pump, with consequent increase in the intracellular calcium is considered to be responsible for cell death (Tsai et al., 1997). The rise in ALAT activity is almost always due to hepatocellular damage and is usually accompanied by rise in ASAT (Rao et al., 1989). An increase in ALP reflects the pathological alteration in biliary flow (Plaa and Hewitt, 1989). Determination of serum bilirubin represents an index for the assessment of hepatic function and any abnormal increase in the levels of bilirubin in the serum indicate hepatobiliary disease and server disturbance of hepatocellular function
Prabhakarn et al.
(Martin and Friedman, 1992). Increased levels of bilirubin in this study are in agreement with previous reports showing that d-GalN induced hepatitis is characterized by increased levels of bilirubin in serum (Sree Ramamurthy and Srinivasan, 1993; Maezona et al., 1996).The extract-mediated suppression of the increased bilirubin level suggests the possibility of the extract being able to stabilize biliary dysfunction. Hepatocellular damage due to alcohol, virus and drug induced hepatitis causes a modest hypertriglyceridemia (Glickman and Sebesin, 1982) which is due to the biochemical changes inferring with the transport of triglycerides out of liver. Our study also showed an increased accumulation of triglycerides in D (+) galactosamine induced rats, which is in agreement with previous reports (Koff et al., 1971; Cartwright et al., 1982). Pre treatment with methanol extract of P. oleracea and Silymarin for 14 days protected the rat livers from D-galactosamine induced histopathological changes. CONCLUSION The results suggest that extracts from P. oleracea possess significant protection against galactosamine induced hepatotoxicity in rats. ACKNOWLEDGEMENTS The authors wish to thank the management, Sri K.V.College of Pharmacy, Sri K.V. Naveen Kiran, Chairman, K.V.and Panchgiri Trust, Chickballapur, Karnataka (India) for providing necessary facilities and support for the completion of this work. REFERENCES
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2010 The Authors 2010 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), 206-211 BLACPMA ISSN 0717 7917
Artculo Original | Original Article
Chemical and Biological Investigations of Pilocarpus spicatus essential oils

[Estudios qumicos y biolgicos del aceite esencial de Pilocarpus spicatus]
Adriana P. OLIVEIRA1*, Rodrigo A. S. CRUZ1, Gisele S. BOTAS1, Marcelo S. GONZALEZ3, Marcelo G. SANTOS4, Lenise A. TEIXEIRA2, Leandro M. ROCHA1. 1. Laboratrio de Tecnologia de Produtos Naturais, Faculdade de Farmcia, Universidade Federal Fluminense, Rua Mrio Viana 523, Santa Rosa, CEP 24241-000, Niteri, RJ, Brazil. 2. Laboratrio de Controle Microbiolgico, Faculdade de Farmcia, Universidade Federal Fluminense, Rua Mrio Viana 523, CEP 24241-000, Niteri, RJ, Brazil. 3. Departamento de Biologia Geral, Universidade Federal Fluminense, Morro do Valonguinho S/N, Centro, CEP 24020-140, Niteri, RJ, Brazil. 4. Departamento de Cincias, Faculdade de Formao de Professores, Universidade Estadual do Rio de Janeiro, Dr. Francisco Portela 794, CEP 24435-000, So Gonalo, RJ, Brazil.
Abstract
Essential oil was obtained by steam distillation of aerial parts of Pilocarpus spicatus Saint-Hilaire (Rutaceae) from the northern coast of Rio de Janeiro State and examined by GCMS. A total of 17 components were identified accounting for 96,06% of the oil composition. The major components were limonene (41,87%), 2-undecanone (11,0%) and sabinene (10,78%). P. spicatus essential oil had inhibitory effects on the growth of bacteria (Escherichia coli and Staphylococcus aureus) and showed anticholinesterase activity in TLC assay. In addition, the volatile oil was toxic to larvae of the brine shrimp. Keywords: Pilocarpus spicatus; antibacterial activity; anticholinesterase activity; cytotoxic activity; essential oil
Resumen
El aceite esencial fue extraido por arraste de vapor de las partes areas de Pilocarpus spicatus Saint-Hilaire (Rutaceae) de la costa Norte del estado de Rio de Janeiro y examinado por GC-MS. Fueron identificados 17 componentes que corresponden al 96,06% de la composicin qumica del aceite. Los componentes mayoritarios fueron el limoneno (41,87%), 2 undecanona (11,0%) y sabineno (10,78%). El aceite esencial de P. spicatus tiene efecto inhibitorio sobre el crecimiento bacteriano (Escherichia coli y Staphylococcus aureus) y presentando tambin actividad anticolinesterasa en ensayo de TLC. Adicionalmente el aceite voltil ha demostrado ser txico para las larvas de Artemia salina. Palabras Clave: Pilocarpus spicatus; actividad antibacteriana; actividad anticolinesterasa; actividad citotxica; aceite esencial
List of abbreviations: CG-MS - Gas chromatography-mass spectrometry, TLC thin layer chromatography
Recibido | Received: June 25, 2009 . Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: April 28, 2010. . Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010. . Declaracin de intereses | Declaration of interests: the authors have no competing interests. . Financiacin | Funding: none declared. This article must be cited as: Adriana P Oliveira, Rodrigo AS Cruz, Gisele S Botas, Marcelo S Gonzalez, Marcelo G Santos, Lenise A Teixeira, Leandro M Rocha. 2010. Chemical and Biological Investigations of Pilocarpus spicatus essential oils. Bol Latinoamer Caribe Plant Med Aromat 9(3): 206-211. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: passosoliv@hotmail.com
Oliveira et al.
Chemical and biological investigations of Pilocarpus spicatus essential oils
INTRODUCTION Pilocarpus spicatus Saint-Hilaire (Rutaceae) is one of the various Pilocarpus spp. called jaborandi. Nowadays, the great importance of Pilocarpus spp. is due to the extraction of the alkaloid pilocarpine from the leaves (Pinheiro, 2002). The Rutaceae has secretory cavities lysigenous and schizo-lysigenous containing essential oils (Simes and Spitzer, 1999). The leaves of Pilocarpus microphyllus Stapf ex Wardleworth and Pilocarpus pennatifolius Lem produce 0.25-0.50% of essential oil (Lorenzi and Mattos, 2002). In this way, a lot of essential oils from different species of the Pilocarpus genus have been analyzed and chemical substances as terpenoids, alcohols, aldehydes, hydrocarbons aliphatic and aliphatic ketones have been described (Craveiro et al., 1979; Santos et al., 1997; Andrade-Neto et al., 2000, 2002; Santos et al., 2004). In addition, chalepin is a coumarin extracted from P. spicatus essential oil. Experiment in vitro showed that binding of chalepin to glycosomal glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase of T. cruzi, a protozoan exclusively transmitted by hematophagous triatomines (Rhodnius prolixus), disrupted flagellate development (Mafezoli et al., 2000; Pavo et al., 2002). Moreover, we observed a variety of effects of P. spicatus essential oil on Rhodnius prolixus -a vector of Chagas disease -which indicates their secondary metabolites, nowadays under investigation in our laboratory, as good candidates for the study of insect physiology, vector control population and perhaps, blockage of protozoan development in triatomine hosts (Melo et al., 2007). It has well established that P. spicatus essential oil collected in the state of Cear (Brasil) displays in vitro antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus (Santos et al., 1997). However, the chemical composition of P. spicatus essential oil showed qualitative and quantitative variation by the influence of local environmental conditions of soil and seasonal period of collections (Taveira et al., 2003). A variety of plants has been reported to show acetylcholinesterase (AChE) inhibitory activity and so may be relevant to the treatment of neurodegenerative disorders such as Alzheimers disease (AD). (Mukherjee et al., 2007). Numerous essential oils and their monoterpene constituents have been investigated for their effects on AChE, and have
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shown inhibitory activity. Although, several extracts of plants and essential oils already have been investigated, this is the first account in the Pilocarpus genus. The brine shrimp lethality test (BST) is a simple and efficient method used to predict compounds or extracts as cytotoxic agents and that may have anticancer activity (Meyer et al., 1982). Although several essential oils have been tested against brine shrimp, P. spicatus essential oil cytotoxicity has not been investigated yet. In this work, studies were carried out to elucidate the chemical composition and analyses antibacterial, anticholinesterase and cytotoxicity activities in vitro of P.spicatus essential oil from Rio de Janeiro State (Brazil). MATERIALS AND METHODS Plant material Aerial parts of P. spicatus Saint-Hilaire (Rutaceae) was collected in Sandy Coastal Plains (Restinga de Jurubatiba National Park) located on the northern coast of Rio de Janeiro State, Brazil (October 2004) and was identified by Dr. Marcelo Guerra Santos. The dried specimens were deposited in the herbarium of the Faculdade de Formao de Professores, UERJ (M. Guerra Santos 1.824) and of the Museu Nacional, UFRJ (M. Guerra Santos 1.406). Extraction of the essential oil The essential oil was obtained by steam distillation (1.37 kg of fresh plant) during 4 h in a Cleavenger-type apparatus (yield 0,42% v/w), and stored at 4C until tested and analyzed. Gas chromatography/mass spectrometry analysis Essential oil was analyzed by a GCMS-QP5000 (SHIMADZU) gas chromatograph equipped with a mass spectrometer using electron ionization. The gaschromatographic (GC) conditions were as follows: injector temperature, 260C; FID temperature, 280C; carrier gas (Helium), flow rate 1 mL/min and split injection with split ratio 1:40. Oven temperature was initially 60C and then raised to 240C at a rate of 3C/min. One microliter of each sample, dissolved in CH2Cl2 (1:100 mg/L), was injected at ZB5MS column (i.d. = 0.25 mm, length 30 m, film thickness = 0.25 mm) column was used. The mass spectrometry (MS) conditions were ionization
Oliveira et al.
voltage, 70 eV and scan rate; 1 scan/s. The percentage composition of the oils was computed by the normalization method from the GC peak areas. The identification of compounds was performed by comparison of Kovats index (KI), determined relatively to the retention times of a series of nalkanes, with corresponding reference data (Adams, 1995) and MS fragmentation pattern was checked with NIST mass spectra libraries. Microbial strain Staphylococcus aureus ATCC25923 and Escherichia coli ATCC36298 obtained from the culture collections of the Laboratrio de Controle Microbiolgico, Faculdade de Farmcia, Universidade Federal Fluminense, were used for the antibacterial activity experiments. Overnight cultures were prepared by inoculating approximately 2 mL Tryptic soy broth (TSB; Difco) with 2-3 colonies of each organism. Bacterial strains were cultured overnight at 37C. Inocula were prepared by diluting overnight cultures in saline to approximately 108 CFU/mL. Antibacterial activity Antimicrobial tests were carried out by disk diffusion method (CLSI, 2006). Briefly, a suspension of microorganism (108 UFC/mL) was spread on the solid media plates of Tryptic soy agar (TSA; Oxoid). The disks (6 mm in diameter) were impregnated with the essential oil until saturation was reached and placed on the inoculated agar. Vancomycin (30 g) and ampicillin (30 g) were used as positive reference standards of the test. The inoculated plates were incubated at 37C for 24 h. Antimicrobial activity was evaluated by measuring the zone of inhibition against the test organisms. Each experiment was repeated three times. TLC assay for acetylcholinesterase inhibitors TLC assay for acetylcholinesterase inhibitors was done as described by Marston et al. (2002) with modifications. Sample of essential oil was dissolved in toluene (1:1) and 1L was applied on the silica gel Alugram SIL G UV254 for TLC (MACHEREY NAGEL). Physostigmine (Sigma, 1L at 5mM) was used as positive control. After the chromatographic run of the plate with toluene-ethyl acetate mixture (93:7), it was sprayed with DTNB/ATCI (Sigma)
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reagent (1:1 solution of 0.4 mM 5,5-dithiobis(2nitrobenzoic acid) in phosphate buffer (pH 7.4) and 2.0 mM acetylthiocholine iodide in water) until saturation of the silica. The plate was allowed to dry for 5 min, and then 1.5 U/mL of enzyme suspension of the rat brain was sprayed. After a while, a yellow background appeared, with white spots showing the inhibitory compounds. To confirm the result, it was done another plate under the same conditions (Rhee et al, 2003). It was used 1L of p-anisaldehyde 10% as false inhibitor reference compound. Finally, DTNB solution was applied and after thiocholine solution obtained from enzymatic hydrolysis. Acetylcholinesterase origin Acetylcholinesterase enzyme suspension of the rat brain was obtained as it described to Cunha Bastos et al (1991) and Lima et al (1996) with modifications of Moura (1998). Brine shrimp lethality test The protocol established by McLaughlin and Rogers (1998) was employed with modifications. Essential oil dilutions at 50, 10, 1 and 0.1 mg/mL were prepared in DMSO and 50L were transferred to vials. Seawater (5 mL) was added to each vial, resulting in final concentrations of 1000, 500, 100, 10 and 1 g/mL, respectively. Second instar larvae of A. salina (ten per vial) were added. After 24 h contact, the survivors were counted and the LC50 calculated using the Trimmed Spearman-Karber method (Hamilton et al., 1977). Positive control test was done using sodium lauryl sulfate. All these experiments were performed in triplicate. Statistical analysis All experiments were performed in triplicate. The mean, standard deviation and coefficient of variation (CV) of the three experiments were determined. The CV values of 15.0 or height were considered statistically significant. The VC values were calculated using the Microsoft Excel program. RESULTS The chemical composition of P. spicatus essential oil was analysed by GC/MS and 17 components were identified, as shown in Table 1. The major components were limonene (41.87%), 2undecanone (11.0%) and sabinene (10.78%).
Oliveira et al.
Table 1. Chemical composition of Pilocarpus spicatus essential oil Compounds a 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 -Pinene Sabinene -Pinene -Myrcene -Terpinene Limonene (Z)--Ocimene (E)--Ocimene -Terpinene Terpinolene Terpinen-4-ol Undecanone-2 Germacrene D Viridiflorene -Cadinene -Cadinene Elemol RI(min.) b 6.613 7.983 8.162 8.570 9.679 10.275 10.472 10.915 11.432 12.626 17.086 22.384 30.650 31.261 32.230 32.412 33.493 KI c 935 974 979 989 1017 1031 1037 1047 1059 1083 1180 1292 1477 1491 1514 1519 1545 % 5.08 10.78 1.43 4.95 2.04 41.87 1.05 0.97 2.70 1.84 7.90 11.00 1.34 1.13 0.67
In the chromatographic assay for acetylcholinesterase inhibitors, two white spots were seen, one on the base (false positive) and other on the middle of the plate (a true inhibitory result). P. spicatus essential oil showed toxicity against brine shrimp nauplii (Artemia salina L.) with a lethal concentration 50% (the concentration of test compound that kills 50% of A. salina) value of 3.98 g/mL. Positive control test was done using sodium lauryl sulfate whose LC50 is approximately 22 g/mL and the blank test (50 L DMSO) no lethality of brine shrimp was observed. DISCUSSION P. spicatus essential oil from Rio de Janeiro State presents monoterpenoids, sesquiterpenoids and aliphatic ketones. Regarding the previously reported chemical composition of many essential oils of Pilocarpus genus has been described (Craveiro et al., 1979; Santos et al., 1997; Andrade-Neto et al., 2000, 2002). However, here we note that (Z)--ocimene and viridiflorene were detected for first time in P. spicatus. About this, it is necessary to point out that environmental factors strongly influence the chemical composition of essential oil (Kaastra, 1982) P. spicatus essential oil collected in the state of Cear (Brasil) displays in vitro antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus but no activity against E. coli was reported (Santos et al., 1997). It is not clear whether the antibacterial effect may be caused mainly by a single active constituent or by the combined action of the many active constituents found in essential oil. Terpenoids are active against bacteria but the mechanism of action of terpenes is not fully understood although is speculates to involve membrane disruption by lipophilic compounds (Cowan, 1999). It has been reported by Sacchetti et al. (2005) that essential oil with high terpenoids percentages was probably more effective, as a consequence of higher specificity of the assay for lipophilic compounds. Several monoterpenes and other terpenoids are known to inhibit AChE (Houghton et al, 2006). The principal monoterpene identified in P. spicatus essential oil is limonene (41.87%), which is known to be an inhibitor of AChE (Miyazawa et al, 1997). In this oil, there are others monoterpenes that have anticolinesterase activity as -Pinene, -Pinene (Miyazawa and Yamafuji, 2005), -Terpinene
0.60 0.71 Total 96.06 a Compounds listed in order of elution from a ZB-5 MS column. b Retention time (minutes). c Kovats Index on ZB-5 MS column in reference to n-alkanes (Adams,1995).
The in vitro antibacterial activity of P. spicatus essential oil in comparison with the reference standard included in the study, are shown in Table 2. All the tested strains were sensitive to the essential oil. The differences in inhibition zones diameters of S. aureus (CV = 5.0%) and E. coli (CV = 3.9%) were not statistically significant.
Table 2. Antibacterial activity of Pilocarpus spicatus essential oil Microorganisms Essential oil DDa 12 Antibiotics Vancomycinb 20 Ampicillinc nt
Staphylococcus aureus ATCC25923 Escherichia coli ATCC36298

a
14
nt
32
Zone of inhibition (mm). nt - not tested. b Vancomicin 30 (g/disc), cAmpicilin 10 (g/disc).
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Oliveira et al.
(Miyazawa et al, 1997), -Terpinene (Perry et al, 2002) and sesquiterpene alcohol elemol (Miyazawa et al, 1997). P. spicatus essential oil showed LC50 = 3.98 g/mL that is a value less than 1000 L/mL, which suggests good cytotoxic activity potential and indicating that they may possess a significant antitumor activity since McLaughlin et al (1998). The cytotoxic activity showed the P. spicatus essential oil should be more studied as regards a possible antitumoral activity. CONCLUSION The present study is the first report of (Z)-ocimene and viridiflorene for P. spicatus essential oil. In addition, showed antibacterial activity against Gram-negative (E. coli) and Gram-positive (S. aureus), anticholinesterase activity and cytotoxic activity in the BST. So, P. spicatus essential oil might represent a valuable source for pharmaceutical applications. REFERENCES
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Actividad de aceites esenciales de Canelo, Queule, Bailahun y Culn frente a hongos fitopatgenos
[Activity of essential oils of Canelo, Queule, Bailahuen y Culen against phythopatogenic fungi]
Julio BECERRA*, Magalis BITTNER, Victor HERNNDEZ, Carolina BRINTRUP, Jos BECERRA, Mario SILVA. Laboratorio de Qumica de Productos Naturales. Facultad de Ciencias Naturales y Oceanogrficas. Universidad de Concepcin.
Abstract
Phytopatogenic fungi are the most harmful agents for plants. In this context, we tested the effect of four economically relevant Chilean species -Drimys winteri (Canelo), Psoralea glandulosa (Culn), Gomortega keule (Queule) y Haplopappus baylahuen (baylahun)- on several fungi on the disk difussion assay. We obtained values of inhibition of P. glandulosa vs. Aspergillus nigra, G. keule vs.Rhizopus arrhizus, H. baylahuen vs. Fusarium oxysporum y D. winteri vs. Botritys cinrea. The growth of A. nigra in the presence of a 1% of the essential oils shown diverse effects on the fungi for each of the oils, resulting el the essential oils of G. keule the most active (54% inhibition), followed by H. baylahuen (38%), P. glandulosa (39%), and D. winteri (36%). Keywords : Gomortega keule; Drimys winteri; Psoralea glandulosa; Haplopappus baylahuen; phythopatogenic fungi.
Resumen
Los agentes dainos ms comunes en las plantas son los hongos fitopatgenos. En este contexto se realizaron ensayos para determinar el porcentaje de inhibicin de crecimiento de los hongos fitopatgenos al ser expuesto a aceites esenciales de cuatro plantas nativas chilenas: Drimys winteri (Canelo), Psoralea glandulosa (Culn), Gomortega keule (Queule) y Haplopappus baylahuen (bailahun). Se realizaron ensayos cuantitativos por difusin en agar de P. glandulosa sobre Aspergillus nigra, G. keule sobre Rhizopus arrhizus, H. baylahuen sobre Fusarium oxysporum y D. winteri sobre Botritys cinrea. El crecimiento de A. nigra en placa con aceites esenciales al 1% demostr que el modo de accin sobre el hongo vara con cada aceite, resultando el aceite esencial de G. keule ms activo inhibiendo un 54%, seguido de P. glandulosa (39%), H. baylahuen (38%) y D. winteri (36%). Palabras Clave : Gomortega keule; Drimys winteri; Psoralea glandulosa; Haplopappus baylahuen; hongos fitopatgenos.
Recibido | Received: August 7, 2009. Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: April 29, 2009. Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010 Declaracin de intereses | Declaration of interests: authors have no competing interests. Financiacin | Funding: This work was financed by Proyect Anillo PBCT ADI-38 (Universidad de Concepcin, Chile), Proyect INNOVA CHILE 06FFCOIFC-48 VI region and Intern Proyect P.I. 209.111.055-1.0 (Universidad de Concepcin, Chile). This article must be cited as: Julio Becerra, Magalis Bittner, Victor Hernndez, Carolina Brintrup, Jos Becerra, Mario Silva. 2010. Actividad de aceites esenciales de Canelo, Queule, Bailahun y Culn frente a hongos fitopatgenos. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3): 212-215. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts : E-mail: jbecerr@udec.cl Nota: El presente trabajo original es publicado como Premio de la Cooperacin Latinoamericana y Caribea de Plantas Medicinales y Aromticas , entidad publicadora del Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, al Sr. Julio Becerra, ganador del Concurso al Mejor Investigador Joven BLACPMA 2009 y que fue presentado por el susodicho autor durante el 1 Congreso Internacional de Farmacobotnica de Chile realizado entre el 6-9 de enero 2009 en la ciudad de Chilln, Chile.
BLACPMA es una publicacin de la Cooperacin Latinoamericana y Caribea de Plantas Medicinales y Aromticas This is an open access article distributed under the terms of a Creative Commons Attribution-Non-Commercial-No Derivative Works 3.0 Unported Licence. (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/ ) which permits to copy, distribute and transmit the work, provided the original work is properly cited. You may not use this work for commercial purposes. You may not alter, transform, or build upon this work. Any of these conditions can be waived if you get permission from the copyright holder. Nothing in this license impairs or restricts the author's moral rights. Este es un articulo de Acceso Libre bajo los trminos de una licencia Creative Commons Atribucion-No Comercial-No trabajos derivados 3.0 Internacional (http://creativecommons.org/licenses/by-ncnd/3.0/deed.es) Usted es libre de copiar, distribuir y comunicar pblicamente la obra bajo las condiciones siguientes: Reconocimiento. Debe reconocer los crditos de la obra de la manera especificada por el autor o el licenciador (pero no de una manera que sugiera que tiene su apoyo o apoyan el uso que hace de su obra). No comercial. No puede utilizar esta obra para fines comerciales. Sin obras derivadas. No se puede alterar, transformar o generar una obra derivada a partir de esta obra. Al reutilizar o distribuir la obra, tiene que dejar bien claro los trminos de la licencia de esta obra. Alguna de estas condiciones puede no aplicarse si se obtiene el permiso del titular de los derechos de autor Nada en esta licencia menoscaba o restringe los derechos morales del autor.
Becerra et al.
Actividad de Aceites esenciales de Canelo, Queule, Bailahun y Cul n frente a hongos fitopatgenos
INTRODUCCION Los agentes dainos ms comunes en las plantas son los hongos fitopatgenos. A nivel mundial estos hongos originan prdidas que ascienden a miles de millones de dlares al ao. El dao que ocasionan no slo se refiere a las prdidas de produccin econmica, sino tambin a las prdidas en la produccin biolgica, es decir a la alteracin que existe en el crecimiento y desarrollo de las plantas hospedantes atacadas por estos microorganismos (Agrios, 1988). En la ltima dcada han proliferado los estudios en bsqueda de nuevos agentes naturales provenientes de plantas en contra de organismos patgenos (Webster et al., 2008), muchos de estos estudios se estn realizando en aceites esenciales, dada su accin ya que estn conformadas por mezclas de un nmero variable de sustancias orgnicas olorosas y voltiles, que qumicamente estn constituidos por terpenos de bajo peso molecular, asociado a diversos grupos funcionales (Bittner et al., 2001). Los aceites esenciales son obtenidos de distinto tipo de planta siendo de vital importancia conocer la actividad de los aceites esenciales de especies nativas. En este contexto se realizaron ensayos para determinar el porcentaje de inhibicin de crecimiento de los hongos fitopatgenos al ser expuesto a aceites esenciales a distintas concentraciones de plantas nativas chilenas. MATERIAL Y MTODOS Material Vegetal Para la obtencin de los aceites esenciales Se colectaron Hojas de arboles desde distintas localidades de la Octava Regin. Las especies colectados fueron Drimys winteri (Canelo), Psoralea glandulosa (Culen), Gomortega keule (Queule) y Haplopappus baylahuen (Bailahun), para su identificacin se compar con material del Herbario de la Universidad de Concepcin, Chile (CONC) y fue clasificado por el Dr. Roberto Rodrguez Taxnomo del departamento de Botnica de la Universidad de Concepcin. Obtencin del aceite esencial Las muestra colectadas (1000 g) fueron sometidas a hidrodestilacin durante 4 horas, usando un aparato tipo Clevenger (Montes et al., 2001). El aceite esencial obtenido se sec sobre sulfato de sodio anhidro y se guard bajo refrigeracin (4C) en oscuridad.
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Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas (CG-EM) La composicin de los aceites esenciales fue determinada en un cromatgrafo de gas con espectrmetro de Masa (GC-MS) (Agilent 7890) equipado con un inyector automtico Agilent y usando una columna capilar HP-5 (30 m x 0,25 mm id, con una pelcula de 0,25 m de espesor). La temperatura del bloque de inyeccin fue de 200C. La temperatura del horno del GC fue programada como sigue: temperatura inicial 60C, se aplic luego un incremento de 4 C min-1 hasta una temperatura final de 260C. Los porcentajes relativos de los componentes de los aceites esenciales fueron obtenidos para cada especie usando helio como gas portador con un flujo de 1.0 ml/min a volumen constante en un detector de masa (Agilent 5975). Para la identificacin de los aceites esenciales se inyect una muestra de 1.0 l de 2% de solucin de aceite en nheptano con un reparto de 100:1. La identificacin de los componentes de la esencia fue establecida utilizando la base de datos Nist/EPA/NIH MASS 2005 Espectral Library (Nist 05) Actividad antifngica Para realizar los test frente a hongos se us un test de difusin de aceite esencial por superficie en agar, a distintas proporciones usando como solvente del aceite DMSO, las soluciones preparadas fueron a 1%, 10%, 20%, 40%, 80% y 100%. Como control se uso una solucin de ketoconazol 10 mg/ml DMSO y cultivo del hongo sin presencia de ninguna solucin. Los hongos ensayados correspondieron a Botritys cinerea, Rhizopus arrhizus, Fusarium oxysporum, Aspergillus nigra. Las placas fueron cultivadas a 27C, durante 10 das en ausencia de luz. Al trmino del ensayo se evalu la actividad de los extractos frente a los hongos determinando el crecimiento en milmetros. Este ensayo se realizo por triplicado y los valores presentados corresponden a los valores promedios del ensayo. RESULTADOS En las tablas se muestran la composicin de los aceites esenciales identificados mediante anlisis de CGM, para la especie de Drimys winteri Canelo (Tabla 1), Gomortega keule Queule (Tabla 2), Haplopappus baylahuen Baylahuen (Tabla 3), y Psoralea glandulosa Culn (Tabla 4).
Becerra et al.
Tabla 1. Composicin de aceite esencial de Drimys winteri Compuestos Benzocicloheptano Shyobunona Azuleno Naftaleno Kaureno Ciclohexadieno Total RT(min.) 8,3 8,7 8,7 10,2 14,6 9,2 % 39,0 4,2 7,6 17,4 2,8 9,1 80,1
de la actividad del aceite de canelo frente a Botritys cinerea se expresan en la Tabla 5, los resultados de la actividad de aceite esencial de Bailahun frente a Fusarium oxysporum se resumen en la Tabla 5, los resultados de la actividad del aceite esencial de queule frente a Rhizopus arrhizus se resumen en la Tabla 5, los resultados de la actividad del aceite esencial de culn sobre Aspergillus nigra se resumen en la Tabla 5.
Tabla 5. Actividad de los aceites esenciales sobre los hongos Aceite Actividad de Actividad de Actividad de Actividad de Canelo sobre Bailahun Queule sobre Culn B.cinerea sobre R. arrhizus sobre A. F.oxysporum nigra I% I% I% I% 0 29 33 54 65 100 0 15 0 54 65 67 67 69 78 31 51 0 0 44 96 97 100 100 0 6 0 29 33 52 64 86 100 0 14 0
Tabla 2. Composicin de aceite esencial de Gomortega keule. Compuestos Isoledano Naftaleno Kaureno Azuleno Antraceno Total RT(min.) 8,6 9,2 14,4 8,8 10,1 % 3,2 57,0 20,7 5,3 4,5 90,7
% 1 10 20 40
Tabla 3. Composicin de aceite esencial de Haplopappus (baylahuen) Compuestos Naftaleno Azuleno Pineno alfa-Cadinol Benzeno Ciclohexadieno Bergamotol Eicosano Total RT(min.) 8,9 9,7 9,8 10,5 10,7 12,0 13,3 16,6 % 5,3 9,7 1,9 5,5 17,8 13,7 2,2 5,2 61,3
80 100 DMSO Keto Control
Tabla 4. Composicin del aceite esencial de Psoralea glandulosa Compuestos Cariofileno Naftaleno Ledol Fenol,4-(3,7 dimetil) Fitol Eicosano Octadecano Total RT(min.) 8,2 9,0 10,0 15,1 15,1 14,9 21,4 % 21,8 9,7 2,2 30,6 3,5 3,8 3,9 75,5
Figura 1. Crecimiento de Aspergillus nigra en placa con aceites esenciales al 1%. A Haplopappus baylahuen 1% B Psoralea glandulosa 1%
Keto= ketoconazol 10 mg/ml; DMSO= Dimetilsulfxido; Gk= Gomortega keule; Pg= Psoralea glandulosa; Dw= Drimys winteri; Hb= Haplopappus baylahuen
C Drymis winteri 1%
D Gomortega keule 1%
El rendimiento y la densidad de los aceites esenciales obtenidos de las distintas especies estudiadas fue de 1,12% v/w y d=0,938 g/ml para Canelo, 1,37% v/w y d=0.932 g/ml para Queule, 1,43% v/w y d=1.015 g/ml para Bailahun, 1,42 % v/w y 1.042 g/ml. para Culn. El efecto de los aceites esenciales se expresa en el porcentaje de disminucin del crecimiento usando un ndice antifngico (Wang et al., 2005). Los resultados
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Becerra et al.
El efecto de los aceites esenciales frente al hongo A. nigra a la concentracin mnima ensayada de 1% se ilustra en la Figura 1, siendo el aceite esencial de G. keule el ms activo inhibiendo un 54%, seguido de H. baylahuen (38%), P. glandulosa (39%), D. winteri (36%). DISCUSIN Y CONCLUSIONES Los ensayos realizados con las soluciones de aceite esencial frente a las distintas cepas de hongos muestran una interesante actividad de inhibicin de todos los aceites esenciales, la cual vara cuantitativamente (Tabla 5) y cualitativamente (Figura 1) (Bittner et al., 2009), ya que segn el aceite se observan claras diferencias en el crecimiento de Aspergillus nigra al tratarlo con distintos aceites esenciales. El aceite esencial de canelo mostr una actividad frente a B. cinrea sobre el 10%, lo que demuestra porque este rbol presenta muchos usos como rbol sagrado del pueblo mapuche (Monslvez et al., 2009). Al defenderse los hongos de la accin de los aceites esenciales producen cambios en su forma de crecimiento, as como tambin cambios de color y forma, que se interpretan como estrategias usadas por los hongos para adaptarse a las condiciones desfavorables en que se encuentran en los ensayos frente a los aceites esenciales. AGRADECIMIENTOS Se agradece el financiamiento entregado para la realizacin de este trabajo del Proyecto Anillo PBCT
ADI-38, de la Universidad de Concepcin, al centro de Investigacin y Capacitacin Forestal VI Regin Financiado con el proyecto INNOVA CHILE 06FFCOIFC-48 y al Proyecto Interno P.I. 209.111.055-1.0 de la Universidad de Concepcin. REFERENCIAS
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Estudio de secado por aspersin de extractos de Plectranthus amboinicus, Ocimum tenuiflorum, Passiflora incarnata, Matricaria recutita y Melissa officinalis
[Spray drying study of Plectranthus amboinicus, Ocimum tenuiflorum, Passiflora incarnata, Matricaria recutita and Melissa officinalis]
Orestes D. LPEZ HERNNDEZ*, Rosa A. MENNDEZ CASTILLO, Caridad Margarita GARCA PEA, Mara L. GONZLEZ SANABIA, Antonio NOGUEIRA MENDOZA Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM), Ave. 26 No. 1605 e/ Puentes grandes y Boyeros, Plaza. La Habana. Cuba. C.P. 10600
Abstract
The use of dried plant extracts is increasingly common in the pharmaceutical industry for the preparation of different forms of medication. The powder form is prepared by spray drying. This method furthermore provides various advantages over conventional extracts and tinctures, such as the absence of ethyl alcohol, easy storage, manipulation, transportation, and stability. The scaling up of unit operations before the industrial level, allows the study of the products and processes behaviour, avoiding a loss of resources when intermediate stages are omitted. This work present the results of spray drying studies of Plectranthus amboinicus, Ocimum tenuiflorum, Passiflora incarnata, Matricaria recutita, Melissa officinalis extracts and describes the feasibility of scaling up production while maintaining physicochemical and microbiologic quality. Keywords: Plant extracts, spray drying
Resumen
La utilizacin de los extractos secos, se difunde cada vez ms en la industria Farmacutica para la elaboracin de diferentes formas terminadas de medicamentos. Para su obtencin en forma de polvo, se emplea el secado por aspersin. Este mtodo, proporciona adems a este tipo de producto, numerosas ventajas frente a los convencionales extractos fluidos y tinturas, como la de no contener alcohol etlico, fcil almacenamiento, manipulacin, transportacin y superior estabilidad. El escalado de las operaciones unitarias en los diferentes niveles que preceden al industrial, permite estudiar el comportamiento de los productos y procesos, evitando la prdida de recursos que se ocasiona cuando se violan las escalas intermedias. En este trabajo se presentan los resultados de los estudios de secado por aspersin de extractos de Plectranthus amboinicus, Ocimum tenuiflorum, Passiflora incarnata, Matricaria recutita y Melissa officinalis, as como la factibilidad de ser escalados, obtenindose productos de adecuada calidad fisicoqumica y microbiolgica. Palabras Clave: Extractos de plantas, secado por aspersin
Recibido | Received: July 2, 2009. Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: April 28, 2010. Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010. Declaracin de intereses | Declaration of interests: the authors have no competing interests. Financiacin | Funding: none declared This article must be cited as: Orestes D Lpez Hernndez, Rosa A. Menndez Castillo, Caridad Margarita Garca Pea, Mara L Gonzlez Sanabia, Antonio Nogueira Mendoza. 2010. Estudio de secado por aspersin de extractos de Plecthranthus amboinicus, Ocimun tenuiflorum, Passiflora incarnata, Matricaria recutita y Melissa officinalis. Bol Latinoamer Caribe Plant Med Aromat 9(3): 216-220. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: oresteslh@infomed.sld.cu
Lpez Hernndez et al.
Secado por aspersin de extractos de plantas
INTRODUCCIN Las materias primas obtenidas a partir de extractos de plantas se presentan en forma lquida como extractos o tinturas, las cuales tienen un elevado contenido alcohlico para su preservacin de la contaminacin por microorganismos, esta concentracin de alcohol provoca reacciones adversas en estos productos. La obtencin de extractos acuosos en polvo mediante secado por aspersin trae ventajas para la industria farmacutica como su fcil almacenamiento, manipulacin y transportacin, superior durabilidad y versatilidad adems de no contener alcohol. (Masters, 1991, Sharapn et al. 2000, De Sousa et al. 2000, De Medeiros et al. 2002, Shierstedt, 2002 y Candelas et al. 2003) La presencia de compuestos de bajo peso molecular, ocasiona prdidas en el proceso por adhesin a las superficies internas del equipo, lo que trae como consecuencia baja recuperacin de producto. Para contrarrestar este efecto negativo, se emplean aditivos inertes que actan como coadyuvantes del secado. (Lpez et al. 2008) Con el objetivo de obtener materias primas en polvo a partir de extractos de plantas, se utilizaron extractos acuosos de Plectranthus amboinicus (Organo francs), Ocimum tenuiflorum (Albahaca morada), Passiflora incarnata (Pasiflora), Matricaria recutita (Manzanilla), Melissa officinalis (Melisa). MATERIALES Y MTODOS Preparacin de las muestras Se utilizaron extractos acuosos de P. amboinicus, O. tenuiflorum, preparados por extraccin con agua a temperatura de reflujo. Los restantes fueron preparados por repercolacin segn las normas ramales de M. officinalis, P. incarnata y M. recutita (NRSP 311). Todos a partir del material vegetal recolectado en la Estacin experimental de plantas medicinales Dr. Juan Toms Roig. Como aditivos coadyuvantes del secado se emplearon almidn soluble (Riedel de Han 10020), maltodextrina DE < 20 (Roig Farma 0511620) y celulosa microcristalina MC 102 (Blanver 1343/00). Para el secado por aspersin se utilizaron en las diferentes escalas equipos de flujo de alimentacin y aire de secado en paralelo, de atomizador de tipo tobera de dos fluidos en la escala de laboratorio y de
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disco centrfugo para las escalas superiores. Los equipos utilizados fueron: Escala de laboratorio Mini spray dryer Bchi B-191, escala de Banco Nyro Atomizer Mobile Minor y escala piloto Nyro Atomizer Production Minor. Se emplearon temperaturas de entrada y salida de 120 y 80C respectivamente. Evaluacin de las muestras Los extractos obtenidos despus de realizar el secado por aspersin fueron evaluados teniendo en cuenta los siguientes parmetros: humedad, cenizas, conteo microbiolgico, el contenido de polifenoles en el extracto seco de P. amboinicus y la determinacin de flavonoides totales en base a apigenina y quercetina en los extractos de P. incarnata, M. recutita y M. officinalis. La determinacin de el contenido de humedad, de las cenizas y el conteo microbiolgico fueron realizados por los mtodos generales reportados en la Farmacopea de los Estados Unidos USP 30, 2007. La determinacin de apigenina y quercetina se realiz empleando un mtodo espectrofotomtrico, determinndose la apigenina a 336 nm y la quercetina a 370 nm. Las sustancias de referencias qumicas utilizadas fueron preparadas en solucin etanlica al 50 % a una concentracin 8 mg/mL. Mientras que las muestras fueron preparadas pesando primeramente 0,2 g de extracto, se trasvasaron a un baln posteriormente se adicionaron 3 mL de etanol al 96 % y 10 mL de cido sulfrico al 10 %, reflujndose durante 30 minutos. Posteriormente se realiz la extraccin del extracto acuoso con acetato de etilo (5 veces por 15 minutos) se reunieron las fracciones y se secaron con sulfato de sodio anhidro, seguidamente se filtraron y evaporaron hasta sequedad bajo presin reducida y se disolvieron en 50 mL con etanol al 96 %, y se trasvas a un volumtrico de 100 mL completando volumen con la misma solucin. Posteriormente se tomaron 5 mL y se trasvas a un volumtrico de 25 mL para la determinacin de quercetina. Se tomaron 2 mL y se trasvas a un volumtrico de 10 mL para la determinacin de apigenina. La determinacin de polifenoles totales se realiz empleando un mtodo espectrofotomtrico, determinndose a 700 nm La solucin de referencia se prepar pesando con exactitud 25 mg de cido tnico (previamente desecado a 100 C durante 2 h) en un matraz aforado
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de 100 mL. Para preparar la solucin desarrolladora de color, se pes 10 g de tungstato de sodio hidratado y 0,2 g de cido fosfomolbdico, se trasvasaron a un baln de 250 mL, se adicion 5 mL de cido fosfrico al 85 % en 75 mL de agua destilada, se refluj durante 2h, se enfri y se almacen a temperatura ambiente. Se transfiere 3 mL de la solucin de referencia a un matraz de 25 mL y aadir 2 mL de agua destilada y 2 mL . Se agitar y deja en reposo durante 5 minutos. Se toman 2 porciones de 2 mL de muestra y se diluyen a 25 mL adicionar 4 mL de agua destilada, 2 mL de la solucin de desarrollo del color. Agitar y dejar en reposo durante 5 minutos. Despus de reposar los 5 minutos, adicionar 1 mL de solucin de carbonato de sodio al 20% a cada uno de los matraces, agitar, luego enrasar a 25 mL con agua destilada y homogenizar. Se leen las absorbancias de la solucin de referencia y de las muestras a 700 nm utilizando la solucin blanco en un trmino no mayor de 2 minutos.
Figura 1. Estudio de secado de O. tenuiflorum.
RESULTADOS En la Figura 1 se muestran los grficos del estudio de secado por aspersin del extracto acuoso de O. tenuiflorum. La Figura 2 en la parte superior muestra igualmente el estudio de secado por aspersin de los extractos de P. incarnata y M. recutita, y en la parte inferior los ensayos de secado realizados con el extracto de M. officinalis.
Figura 2. Estudio de secado de P. incarnata, M. recutita y M. officinalis
Pasiflora incarnata
80 60
Rend
40 20 0 0 35 40 45
Aditivo Matricaria recutita

79 69
Rend
59 49 39 29 0 35 40 45
Aditivo
Melissa officinalis
100
Rendimiento
95 90 85 80 75 70 100/60 120/80
Tem peratura
En la Tabla 1, se muestran de forma comparativa los resultados para las diferentes escalas del rendimiento, la humedad as como el contenido de los principales compuestos que se determinan a estos extractos y el conteo total de microorganismos en los obtenidos a escala de banco. Se excluy el extracto de O. tenuiflorum por no haberse continuado el estudio en las escalas superiores.
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Tabla 1. Resultados tecnolgicos, fisicoqumicos y microbiolgicos en las diferentes escalas Extracto Escala Laboratorio Banco Piloto Laboratorio Banco Laboratorio Banco Rendimiento 62,20 78,15 95,40 94,20 97,56 96,40 73,14 Humedad (%) 10 % 6,15 7,99 7,73 3,60 1,80 3,00 2,70 Polifenoles (%) 3% 5,08 5,98 4,13 NA NA NA NA Cenizas (%) 40 % 36,15 32,97 27,12 NA NA NA NA Quercetina (%) NA NA NA 1,16 1,95 1,09 1,69 Apigenina (%) Conteo de Conteo de bacterias Hongos 7 10 103 UFC/g UFC/g NA NA NA NA 104 < 10 NA 105 < 10 NA 104 NA 104 NA < 10 NA < 10
P. amboinicus P. incarnata M. recutita
1,78 3,00 3,02 3,44
NA NA NA Laboratorio 96,50 4,10 20,4 2,50 5,11 NA NA NA Laboratorio 97,70 5,50 23,3 2,04 4,02 NA Banco 94,70 5,50 20,2 2,18 3,97 103 < 10 NA No aplicable. Se refiere en el caso de Quercetina y Apigenina a que no se le determina al extracto de P. amboinicus, en el caso de los Polifenoles, a que no se le determina a los extractos restantes y en las columnas de conteo de bacterias y hongos a que no se realiza esta determinacin en la escala de laboratorio por la pequea cantidad de muestra que se obtiene. M. officinalis
DISCUSIN Como se observa en la Figura 1, los rendimientos alcanzados con almidn soluble (A) en concentraciones de 10 y 15 % respecto a los slidos del extracto y con maltodextrina (M) en concentraciones de 15 y 20 %, empleando un juego de temperatura de entrada y salida de 100 y 60 C respectivamente, son muy bajos, siendo el mayor cercano a 60 % con un 15 % de maltodextrina, el incremento de las temperaturas de entrada y salida a 120 y 80 C respectivamente provoc un pequeo incremento del rendimiento pero significativamente diferente para un 95 % de confianza. El estudio con este ltimo juego de temperaturas empleando entonces como aditivo la celulosa microcristalina caus un incremento del rendimiento apreciable, siendo la concentracin de 25 % significativamente diferente al resto de las concentraciones estudiadas, logrndose alcanzar un mximo rendimiento superior a 75 % lo cual garantiza que en escalas superiores se obtengan rendimientos superiores al 80 %. En la Figura 2 se observa para el caso de la P. incarnata y M. recutita que el mximo valor de rendimiento se alcanza con 40 % de almidn soluble, para estos dos extractos solamente se estudi este aditivo por ser el ms apropiado para extractos hidroalcohlicos. En el caso del extracto de M. officinalis solamente se estudiaron dos juegos de temperaturas, observndose que con el ms bajo ya se alcanza un rendimiento de 70 % lo que indica que no es necesario el empleo de coadyuvantes del secado y
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con el segundo juego de temperaturas el rendimiento es de 95 % lo que garantizar un elevado rendimiento en escalas superiores. En la Tabla 1, se observa de forma comparativa para las diferentes escalas que se alcanzan elevados valores de rendimiento, lo que demuestra la reproducibilidad de los resultados obtenidos a escala de laboratorio. El contenido de humedad es de gran importancia en estos productos por ser altamente higroscpicos y en todos los casos se encuentran por debajo del 10 %, lmite mximo establecido como parmetro de control de calidad en extractos secos. Los valores obtenidos en los extractos analizados demostraron que el contenido de cenizas se encuentra dentro de los lmites establecidos, por debajo de 40 %. Los resultados del conteo total de microorganismos demuestran que se encuentran dentro de los valores normados en la bibliografa reportada, ya que los valores del conteo de bacterias estn por debajo de 107 UFC/g y los de los hongos 103 UFC/g. El contenido de polifenoles evaluados en el extracto seco de P. amboinicus fue mayor de 3 %, lmite establecido como parmetro de control de calidad del mismo. Mientras que los valores obtenidos en la determinacin de los flavonoides totales en base a apigenina y quercetina, en los extractos secos de P. incarnata, M. recutita y M. officinalis, se observan valores similares en las diferentes escalas, demostrndose que no existen diferencias entre las escalas analizadas pero an no se
han definido sus lmites para establecer especificaciones de calidad del mismo. CONCLUSIONES
las
El empleo del proceso de secado por aspersin aplicado a extractos de plantas, requiera o no de coadyuvantes del secado, proporciona la obtencin de productos de calidad fisicoqumica y microbiolgica adecuada con posibilidad de ser introducidos en la industria de productos fitoteraputicos. REFERENCIAS
Candelas MG, Alans M G. 2003. Estabilidad del licopeno bajo diferentes condiciones de operacin de secado por aspersin de jugo de tomate. Salud Pblica y nutricin. No. 3. Nuevo Len. Mxico. De Medeiros ACD, De Medeiros IA, Macedo RD. 2002. Termal studies of albizia Inopinata crude extract in the presence of cyclodextin and aerosil by TG and DSC coupled to the fotovisual system. Acta Thermochim 392-393: 93-98.
De Sousa KC, Petrovick PR, Basan VL, 2000. The adjuvants aerosil 200 and gelita- sol- P influence on the technologicals characteristics of spray drier powders from Passiflora edulis var flavicarpa. Drug Dev Ind Pharm 26(3): 331- 336. Lpez OD, Torres L, Salomn S, Gonzlez M, Chvez D. 2008. Secado por aspersin de extracto acuoso de Bidens alba L. a escalas de laboratorio y banco. Rev Cub Plant Med 13(4). Masters K. 1991. The spray drying Handbook. Longman Scientific Publication, New York. Sharapin N, Pinsn SR. 2000. Fundamentos de tecnologa de productos fitoteraputicos. Sta. Fe de Bogot, DC, Colombia. pp. 57145. Shierstedt D. 2002. Medicinal plant dry extract. United States Patent US 6 472 439. United States Pharmacopoeial convention USP 30. 2007. Validation of Compendial Methods. 30 ed. Rockville: Mack Printing; versin electrnica. Farmacopea Europea. 2004. Determination of Tannins in herbal drugs. pp. 187.
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Anlisis de la calidad de los frutos de Salvia hispanica L. (Lamiaceae) comercializados en la ciudad de Rosario (Santa Fe, Argentina)
[Quality tests of Salvia hispanica L. (Lamiaceae) fruits marketed in the city of Rosario (Santa Fe province, Argentina)]
Mirian BUENO1, Osvaldo DI SAPIO2, Melisa BAROLO3, Hctor BUSILACCHI1, Mirta QUIROGA4, Cecilia SEVERIN*3
1 Biologa y 3Fisiologa Vegetal, Facultad de Ciencias Agrarias, CC 14, (S2125ZAA) Zavalla. 2rea Biologa Vegetal, Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas, Suipacha 531 (S2002LRK) Rosario. *CIUNR. Universidad Nacional de Rosario. 4Plantas Vasculares, Facultad de Ciencias Naturales, Universidad Nacional de Salta.
Abstract
The fruits of Salvia hispanica L. (cha) usually called "seeds", conteins linoleic and -linolenic acids, representing the largest natural source of omega6 and omega-3 fatty acids, respectively. These acids are important in human nutrition because they reduce the risk of cardiovascular diseases. The seeds have a high content of antioxidants; in adition, they are fiber-rich and do not contain gluten. The objective of this work was to evaluate the quality of commertial lots of chia seeds. Physico-botanical purity, weight of 1000 seeds, physiological germination and fatty acids were estimated. Seeds of other species were identified. Physico-botanical purity of the seeds ranged between 0 and 98,6 %, and germination percentage was between 23 and 92 %. There were no differences in the fatty acid content between lots. The analysis applied determined that the lots of chia seeds marketed in Rosario city are adulterated in whole or in part by seeds of other species. Keywords: germination; physiological quality; Salvia hispanica L..
Resumen
Los frutos (clusas) de Salvia hispanica L. (cha) habitualmente llamados semillas, contienen cido linoleico y -linolnico, que representan la mayor fuente natural de cidos grasos omega-6 y omega-3 y son muy importantes en la nutricin humana por reducir los riesgos de padecer enfermedades cardiovasculares. Las semillas poseen alto contenido de antioxidantes, son ricos en fibras y no contienen gluten. Se plante como objetivo, determinar la calidad de las semillas de cha comercializadas en la ciudad de Rosario. Se determin: porcentaje de pureza fsico-botnica, peso de 1000 semillas, germinacin fisiolgica y cidos grasos. Se identificaron semillas de otras especies. El porcentaje de pureza vari entre 0 y 98,6 % y el de germinacin entre 23 y 92 %. No hubo diferencias en el contenido de cidos grasos entre los lotes analizados. Con este relevamiento se comprueba que en la ciudad de Rosario se comercializan lotes de cha de variada calidad, algunos con adulteracin parcial o total con semillas de otras especies. Palabras Clave: germinacin; calidad fisiolgica; Salvia hispanica L.
Recibido | Received: August 25, 2009 . Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: May 17, 2010 . Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010 . Declaracin de intereses | Declaration of interests: the authors have no conflicting interests. Financiacin | Funding: Subsidio Fundacin Ciencias Agrarias. This article must be cited as: Mirian Bueno, Osvaldo Di Sapio, Melisa Barolo, Hctor Busilacchi, Mirta Quiroga, Cecilia Severin*. 2010. Anlisis de la calidad de los frutos de Salvia hispanica L. (Lamiaceae) comercializadas en la ciudad de Rosario (Santa Fe, Argentina). Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3): 221-227. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: severin.cecilia@gmail.com
Bueno et al.
Anlisis de la calidad de los frutos de Salvia hispanica L. (Lamiaceae)
INTRODUCCIN La familia Lamiaceae cuenta con unos 170 gneros y ms de 3000 especies de amplia distribucin en regiones tropicales y templadas. En Argentina existen alrededor de 26 gneros (Burkart, 1979). Son hierbas anuales o arbustos perennes, contienen aceites esenciales en pelos glandulares de las hojas y los tallos, por lo que han sido domesticadas para ser utilizadas como condimentos y en perfumes. Segn Len (1987), la mayora de las especies cultivadas se originan en la regin mediterrnea: Rosmarius officinalis, Lavandula angustifolia, L. latifolia, Salvia spp., Mentha spp., Origanum vulgare, O. majorana, Ocimum basilicum, Thymus vulgaris y otros. Muchas labiadas se cultivan por el follaje ornamental, como Coleus spp., o por sus flores, tal es el caso de Salvia. En frica y Asia se comen los tubrculos de Plectranthus y Solonostemon. En Mesoamrica las semillas de ciertos Hyptis y Salvia, se usan en la preparacin de refrescos (Len, 1987). El gnero Salvia incluye unas 900 especies y se distribuye extensamente en varias regiones del mundo, como Sudfrica, Amrica Central, Amrica del Norte, Sudamrica y Asia Sur-Oriental. Las plantas pueden ser herbceas o leosas, y sus flores muy atractivas en varios colores. Salvia hispanica L., conocida como salvia espaola, artemisa espaola, cha mexicana, cha negra o simplemente cha, es una planta herbcea anual, originaria de las reas montaosas del oeste y centro de Mxico (Beltrn-Orozco y Romero, 2003). Para los Mayas era uno de los cultivos bsicos y fue perseguida hasta casi su extincin por considerrsela sacrlega, debido a que se ofrendaba a los dioses aztecas durante las ceremonias religiosas. A fines del siglo pasado resurgi el inters por la cha, ya que se la considera una buena fuente de fibra, protenas y antioxidantes. Las flores son hermafroditas, purpreas a blancas y aparecen en cimas terminales; la floracin se produce entre julio y agosto en el hemisferio norte. Los frutos, en grupos de 1-4 clusas, fueron utilizados por los habitantes precolombinos de Mesoamrica como fuente de alimentos y como medicina. Los frutos (clusas) habitualmente llamados semillas son indehiscentes, monosprmicos, ovales, suaves y brillantes, de color negro grisceo con manchas irregulares rojizas en su mayora y algunos blancos;
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remojados en agua originan un lquido gelatinoso debido a la presencia de muclagos en su superficie. La forma de propagacin de esta especie es a travs de sus semillas (Ayerza y Coates, 2006). Ayerza (1995) midi la cantidad de aceite presente en semillas de cha y comprob que representan la fuente natural ms rica en cidos grasos omega-3 comparada con el aceite de pescado y de algas, con la ventaja que no contienen colesterol. Las semillas, tienen entre sus componentes principales cido linoleico y -linolnico, representando la mayor fuente natural de cidos grasos omega-6 y omega-3, importantes en la nutricin humana por reducir los riesgos de padecer enfermedades cardiovasculares. Poseen un 33 % de aceite, del cual el cido linolnico representa el 62 % y el linoleico el 20 % (Bushway et al., 1981). La ingesta de cantidades suficientes de omega-3 aporta mltiples beneficios para la salud, disminucin del riesgo cardiovascular, prevencin de enfermedades del sistema nervioso y tambin disminucin de los sntomas de enfermedades inflamatorias, como la artritis reumatoidea (Simopoulos, 1999). Poseen un alto contenido de antioxidantes (principalmente flavonoides), son ricos en fibras y no contienen gluten (Chen et al., 1984; Taga et al., 1984; Song et al., 2000). La cantidad de trabajos cientficos que informan sobre las ventajas nutricionales de la cha con respecto a las otras fuentes de omega-3 y la comercializacin de productos que la incluyen estn creciendo rpidamente alrededor del mundo. Se la utiliza como ingrediente para hacer pan, barras energticas, suplementos dietticos para personas, alimentos para caballos, cerdos, gatos y perros, en dietas de aves para produccin de huevos y carne, y en dietas de vacas lecheras para produccin de leche, entre otros (Ayerza, 1995). La calidad es un requisito bsico de un producto, no slo por su significacin intrnseca, sino porque constituye la base sobre la que reposa la reproducibilidad de los parmetros de seguridad y eficacia. El control de calidad es necesario para evitar adulteraciones y falsificaciones, as como para garantizar que un producto rena las caractersticas necesarias para ser seguro y eficaz. Los objetivos del control de calidad son, confirmar la identidad y pureza de una muestra, as como tambin valorar su contenido en principios activos (Busse, 2000; Caigueral, 2002). Para dicho control de la calidad se deben emplear mtodos de ensayos morfoanatmicos, mtodos fsico-qumicos y mtodos
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biolgicos La incidencia de efectos adversos se ve favorecida en pases con un bajo nivel de exigencia en el control de calidad. La Organizacin Mundial de la Salud indica la conveniencia de que cada pas conforme un Comit Nacional de Expertos, el cual debe preparar un listado de especies vegetales, con sus respectivos requisitos de registro, evaluacin de adversidades, procesos de cultivo, recoleccin, produccin local, procesamiento de cada especie en cuestin, etc., y que tenga directa relacin con el Ministerio de Salud (WHO, 1998). Consideramos importante estudiar una serie de requisitos que conformen un manual de BMP (Buenas Prcticas de Manufactura), destinado a productores, elaboradores e industriales, que tiendan a orientarlos para lograr una calidad constante del producto, a travs de un sistema de organizacin adecuado, para brindar seguridad al consumidor. En consecuencia y dado que se encuentran a la venta lotes de semilla de cha adulterados con semillas de otras especies, se ha credo conveniente plantear como objetivo del presente estudio, determinar la calidad de las semillas de Salvia hispanica L., comercializadas en la ciudad de Rosario (Santa Fe, Argentina). MATERIALES Y MTODOS Se utilizaron 8 lotes de semillas de Salvia hispanica L., adquiridos en distintas herboristeras y/o dietticas ubicadas en diferentes zonas de la ciudad de Rosario (Santa Fe, Argentina). Siguiendo la metodologa de ISTA 2003, se realizaron las siguientes determinaciones: Pureza fsico-botnica Se realiz sobre 10 g de cada una de las muestras y consisti en separar, con ayuda de una pinza histolgica las semillas intactas y las rotas, otras semillas, impurezas e inertes. Se pesaron las semillas puras y se expres en porcentaje segn la siguiente frmula:
Peso semillas puras Pureza (%) = Peso total de la muestra x100
Peso de 1000 semillas Se determin tomando 10 submuestras compuestas por 100 semillas cada una, se pesaron y se calcul el promedio. Germinacin Esta especie no est listada en los manuales de tecnologa de semillas para los protocolos de germinacin, pero existen recomendaciones para algunos gneros de la familia Lamiaceae que se utilizaron como referencias bsicas (ISTA 2003). Para cada uno de los lotes de semillas, se realiz el test en cajas de Petri con algodn y papel de filtro humedecido, el nmero de repeticiones fue de 4 cajas con 25 semillas cada una, para cada uno de los lotes elegidos. El material se incub en oscuridad, en cmara de crecimiento a 23 2 C y a los 21 das se evalu la germinacin a travs del recuento de semillas con protrusin visible de la raz primaria. Se aplic anlisis de la variancia, los resultados se expresaron en porcentaje y los datos se transformaron para su normalizacin mediante raz cuadrada. Las medias de los tratamientos se compararon a travs de Tukey al 0,001. cidos grasos A travs de anlisis qumicos realizados en el laboratorio de la Bolsa de Comercio de Rosario, se determinaron los cidos grasos presentes en los distintos lotes de semillas. La extraccin de la materia grasa se realiz por el mtodo Butt (Norma ISO 659), el aceite se extrajo de una porcin de muestra molida con hexano p.a., se evapor el hexano y se obtuvo el aceite para su posterior anlisis. Se realiz la determinacin de acidez segn Norma ISO 660. Este mtodo consiste en determinar el contenido de cidos grasos libres presentes en la muestra, por la tcnica con etanol caliente e indicador. Como titulante se utiliz una solucin acuosa de hidrxido de sodio o potasio 0,1N o 0,01N. Se realiz la preparacin de los esteres metlicos de cidos grasos para su aplicacin en cromatografa en fase gaseosa segn Norma ISO 5509. Dependiendo de la acidez obtenida es el mtodo a aplicar para la obtencin de los esteres metlicos. Se realiz la determinacin de los esteres metlicos de cidos grasos por cromatografa gaseosa segn Norma ISO 5508.
Se identificaron botnicamente las semillas de otras especies presentes en cada uno de los lotes.
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Se emplearon: inyector para columna capilar en modo Split: 1/100; columna Capilar DB-23 (30 metros de longitud, 0,32 mm de dimetro interno y film de 0,25 um); Detector: FID; temperatura del inyector 250 C; temperatura del horno 175 C; temperatura del detector 300 C; gas Carrier: Nitrgeno 5,0. La determinacin se realiz de manera isotrmica. RESULTADOS Y DISCUSIN Consultados los comerciantes sobre la distribucin de semillas de cha manifestaron desconocer cuantos y quienes son los proveedores
primarios en la ciudad de Rosario y de qu zonas del pas proviene el material vegetal. Sera importante disponer de esta informacin para conocer los lotes de procedencia y sus zonas geogrficas, lo cual contribuira a establecer mejor la trazabilidad de las semillas que se comercializan. Como resultado del anlisis de pureza fsicobotnica, se determin que cinco lotes presentaron una pureza superior al 95%, un lote mostr muy baja pureza: 21,6%, mientras que en los dos restantes se observ ausencia total de semillas de cha (Tabla 1 y Figura 1).
Tabla 1. Pureza fsico-botnica, germinacin y peso de 1000 semillas de S. hispanica Lotes Pureza fsico-botnica (%) Peso 1000 semillas (g) 95,409 0,9703a I II III IV V VI VII VIII 96,944 98,135 21,640 95,980 ausente ausente 98,645 1,1019b 0,9410a 1,2106c 1,2536cd ausente ausente 1,2941
d
Germinacin (%) 27b 26b 23b 92a 87a ausente ausente 33b
Medias seguidas de igual letra en la vertical no difieren significativamente al 0,001 % de probabilidad (Tukey)
Figura 1. Semillas de S. hispanica intactas, rotas e inertes y semillas de otras especies en los 8 lotes comerciales.
10 8 6 4 2 0 I I II I V V VI VII
Pureza
Otras especies Rotas e inertes Semillas puras
Nmero de muestra
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Tabla 2. Determinacin de cidos grasos en 4 lotes de semillas de S. hispanica

cidos grasos (%) cido mirstico cido miristoleico cido pentadecanico cido pentadecenico cido palmtico cido palmitoleico cido margrico cido margaroleico cido esterico cido oleico cido linoleico cido linolnico cido nonadecanico cido nonadcenoico cido araqudico cido gadoleico cido eicosadienico cido araquidnico cido behnico cido ercico cido lignocrico I 0,00 0,00 0,00 0,00 7,90 0,10 0,10 0,00 3,40 8,10 21,50 57,60 0,10 0,20 0,30 0,20 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 Lotes II 0,10 0,00 0,00 0,00 8,50 0,10 0,10 0,00 3,40 7,80 22,00 56,60 0,10 0,20 0,30 0,20 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 III 0,10 0,00 0,00 0,00 8,40 0,00 0,10 0,00 3,40 7,90 21,70 57,00 0,10 0,20 0,30 0,20 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 VIII 0,00 0,00 0,00 0,00 6,10 0,10 0,00 0,00 2,80 7,20 20,30 62,70 0,20 0,10 0,30 0,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Las semillas de otras especies presentes en los lotes correspondieron a: Echinocloa crus-galli L. Beauv., Anthemis cotula L., Panicum coloratum L., Lepidium bonariense L., Plantago lanceolata L., Chenopodium album L., Amaranthus quitensis K., Brassica napus L., Ammi majus L. y A. visnaga L., Polygonum aviculare L., Trifolium spp., Plantago spp. y algunas otras semillas no identificadas. En la Figura 1 se presenta la cantidad de semillas de otras especies, presentes en cada lote. Segn Applequist (2006), se ha informado en la literatura farmacognstica que diferentes rganos de ciertas especies se encuentran inapropiadamente presentes en materiales vegetales que son ofrecidos como genuinos. Puede ser por una sustitucin accidental (la planta es identificada errneamente como la correcta o ser intercambiable con sta), contaminacin accidental (alguna parte de la planta errnea es colectada junto con la correcta) o fraude (la planta es deliberadamente sustituida por mezcla con las especies correctas). La adulteracin puede tambin involucrar el uso de partes inapropiadas de la planta correcta, por ejemplo, la inclusin de tallos en un producto donde se usan solamente las hojas. En el lenguaje comn, la adulteracin implica la manufactura deliberada de productos de baja calidad. En la industria botnica, el trmino adulteracin es usado genricamente para referirse a cualquier inclusin de especies vegetales incorrectas o partes
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de plantas en excesiva cantidad, ya sea deliberadamente o por accidente. Coates y Ayerza (1998) atribuyeron el porcentaje de impurezas en muestras de cha (4,539%) a la habilidad para la limpieza, a las condiciones de la cosecha y a las malezas presentes en los cultivos. En el caso del material adquirido en la ciudad de Rosario, en los lotes IV y V, las semillas de otras especies probablemente hayan sido recolectadas junto con las de cha, mientras que en los lotes VI y VII, se determin la sustitucin total de cha por elevados porcentajes de semillas de Trifolium spp. (88,25%), adems de otras especies. Esto demuestra que deberan implementarse mtodos de control de calidad en toda la cadena de comercializacin de los productos dietariomedicinales. La presencia de semillas de otras especies e inclusive la sustitucin total de las mismas en los lotes de cha analizados, indica que el comprador final de este producto dietario, desconoce exactamente qu est consumiendo, si el mismo es inocuo o puede ocasionarle algn problema a su salud. Por tanto, a pesar de que las drogas vegetales y sus derivados suelen presentar un margen teraputico amplio, no estn exentas de posibles efectos adversos, interacciones y contraindicaciones. De ah que la evaluacin de su seguridad deba realizarse a la luz de los criterios aplicados a los otros fitofrmacos y sustentarse, siempre que sea posible, en la
Bueno et al.
existencia de documentacin cientfica relevante (Carballo et al., 2005). El peso de 1000 semillas pareciera ser una variable de gran amplitud; en este trabajo vari entre 0,94 y 1,29 g y no se discrimin entre semillas de distinto color, aunque la mayor proporcin observada fue de color oscuro; las diferencias entre los lotes fueron estadsticamente significativas. Ixtaina et al. (2008) informaron que un peso de 1,323 g para las semillas oscuras fue significativamente superior a 1,301g para las blancas. Coates y Ayerza (1998) obtuvieron pesos entre 0,32 y 0,46 g, pero sin distincin de color. Segn Ferguson (1995), la prueba de germinacin ofrece informacin suficiente sobre el desempeo de un lote de semillas, cuando este es de baja calidad. Determin adems que un lote que no presente dormicin y con 70% de germinacin, se deteriorar rpidamente en el almacenamiento en condiciones desfavorables. En el presente trabajo, se encontraron diferencias significativas entre los distintos lotes de cha. En la Tabla 1 se observa que slo dos de los mismos presentaron altos porcentajes de germinacin: lote IV (bajo porcentaje de pureza y 87% de germinacin) y lote V (alta pureza y 92% de germinacin); estos valores de germinacin fueron superiores a los obtenidos por Coates y Ayerza (1998), que obtuvieron entre 75 y 79% de germinacin, en semillas provenientes de cultivos ubicados en distintas localidades del Noroeste de Argentina (Catamarca, Salta, Jujuy, Tucumn y Santiago del Estero), regin geogrfica del pas que rene condiciones climatolgicas muy favorables para su cultivo y similares, a las de las regiones de origen. Las diferencias en los porcentajes de germinacin de semillas, se podran atribuir a las condiciones del ensayo o a las variaciones en las condiciones ambientales durante la maduracin de las mismas. La calidad de las semillas disminuye tambin con el transcurso del tiempo y la tasa de deterioro depende de las condiciones ambientales durante el almacenamiento y el tiempo en que estas permanecen almacenadas. En nuestro caso, se desconoce el origen de las semillas de cha que se comercializan en la ciudad de Rosario, como as tambin, la fecha de su cosecha y las condiciones de almacenamiento de las mismas hasta su venta. Se determin adems y de forma aleatoria el contenido de cidos grasos en semillas de cha pertenecientes a los lotes I, II, III y VIII (Tabla 2).
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Segn datos bibliogrficos, las semillas de cha contienen 80,30% de cidos grasos poliinsaturados (Beltrn-Orozco y Romero, 2003). Ferguson (1995), determin que la composicin qumica de las semillas de soja, tambin con elevado contenido de cidos grasos poliinsaturados, sufren importantes reducciones en su calidad fisiolgica, en relativamente cortos perodos de tiempo. En este trabajo, el contenido de los cidos linoleico y linolnico estuvieron dentro de los valores informados por Ayerza (2002) y no se observaron diferencias significativas en los resultados obtenidos entre los distintos lotes analizados. CONCLUSIONES Con este relevamiento se comprueba que en la ciudad de Rosario (Santa Fe, Argentina), se comercializan lotes de semillas de cha de variada calidad, comprendiendo aqullos en los que la adulteracin parcial o total se realiza con semillas pertenecientes a otras especies. Este trabajo permite inferir que las diferentes muestras de semillas de cha de elevada pureza y bajo porcentaje de germinacin que se analizaron, no presentan alteraciones en el contenido de los cidos grasos, pero s se ve alterada la capacidad dietaria y medicinal, al encontrarse que algunos lotes fueron adulterados con semillas de otras especies. AGRADECIMIENTOS El presente trabajo fue financiado por la Fundacin Ciencias Agrarias. REFERENCIAS Applequist W. 2006. The Identification of medicinal plants. A handbook of the Morphology of Botanicals in Commerce. Missouri Botanical Garden Press. p. 12. Ayerza R 1995. Oil content and fatty acid composition of Chia (Salvia hispanica L.) from five Northwestern Locations in Argentina. J Amer Oil Chem Soc 72: 1079-1081. Ayerza R, Coates W, Lauria M 2002. Chia seed (Salvia hispanica L.) as an -3 fatty acid source for broilers: influence on fatty acid composition, cholesterol and fat content of white and dark meats, growth performance, and sensory characteristics. Poultry Sci 81:826-837
Bueno et al.
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2010 The Authors 2010 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 9 (3), 228-231 BLACPMA ISSN 0717 7917 Comunicacin | Communication
Celtis ehrenbergiana (Celtidaceae): meristematic tissue in the thorns

[Celtis ehrenbergiana (Celtidaceae): tejido meristemtico en las espinas]
Vanesa G. PERROTTA and Ana M. ARAMBARRI* Ctedra de Morfologa Vegetal, Departamento de Ciencias Biolgicas, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Universidad Nacional de La Plata, Calle 60 y 119, C.C.31 1900 La Plata, Argentina
Abstract
The goal of this research is to establish the presence of meristematic tissue (buds) in the thorns of tala (Celtis ehrenbergiana). This species has been mentioned as having medicinal properties, and this tree has high ecological value since it protects the environment. Thorn samples have been processed by standard light microscope techniques. Only one of the two geminate thorns located at the apex of actively growing branches has two buds: one in the apical and the other in a lateral subapical position. It would be interesting to assay these portions which have numerous meristematic cells with division capacity using in vitro micropropagation technology. Keywords: anatomy; Celtis ehrenbergiana; Celtidaceae; conservation; medicinal plants; thorns.
Resumen
El tala ( Celtis ehrenbergiana) es un rbol con espinas que posee propiedades medicinales, brinda alimento y refugio a otras especies y protege el ambiente. Se realiz el estudio anatmico de las espinas de tala a fin de establecer la presencia de tejido meristemtico (yemas). Las muestras de espinas fueron procesadas empleando tcnicas estndares para microscopa ptica. Solamente una de las dos espinas geminadas localizadas en la proximidad del pice de ramas en activo crecimiento presenta dos yemas: una apical y otra lateral en posicin sub-apical. Sera interesante ensayar estas porciones con clulas meristemticas en activa divisin con tcnicas de micropropagacin in vitro. Palabras Clave: Celtis ehrenbergiana; Celtidaceae; conservacin, espinas; plantas medicinales
Recibido | Received: December 4, 2009. Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: March 17, 2010. Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010 Declaracin de intereses | Declaration of interests: authors have no competing interests. Financiacin | Funding: none declared. This article must be cited as: Celtis ehrenbergiana (Celtidaceae): meristematic tissue in the thorns. 2010. Vanesa G Perrotta, Ana M. Arambarri. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3): 228-231. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: anaramba@yahoo.com.ar
Perrotta y Arambarri
Celtis ehrenbergiana buds in the thorns
INTRODUCTION The tala is also known by the common names: churqui tala, desert hackberry, huasteco, ibir yuaz, shiny hackberry, spiny hackberry, tala amarillo, tala rbol, tala blanco, yoas, yoas-y guaz. It has a widespread distribution in the New World, the South of the United States, Mexico, Haiti, Puerto Rico, Brazil, Bolivia, Paraguay, Uruguay and Argentina. This tree has many applications, for example in Argentina, where native people use it for shade and firewood due to its high calorific power; its hard and heavy wood is used to make farm tools. In medicine, leaf infusion with honey is used to cure coughs, colds, headaches, chest pain, and acts as an expectorant, a hepatic protector, a digestive aid and may be used to control cholera (Hieronymus, 1882; Toursarkissian, 1980; Lahitte et al., 1995, 1998; Demaio et al., 2002; Barboza et al., 2006; PeaChocarro et al., 2006; Hernndez et al., 2009). It has calcifying properties (Carrizo et al., 2005). The decoction of its leaves and branches is drunk in case of poisoning, and the decoction of the bark may be used for appetite stimulation, wound washes and disinfection (Martnez Crovetto, 1981). The root has tinctorial properties, giving a brown color resistant to water and sunshine (Del Valle Perea et al., 2007). The fruits are edible (Lahitte et al., 1998; Arenas, 2003). This native tree has educational, cultural, and ecological importance, contributing to the conservation of the environment. In Argentina, Buenos Aires province, with the objective to protect the monte of tala, also known as talar, the Gestin Talares Bonaerenses was created. These talares are very important, e.g., as a part of birds and several insect species diets, soil erosion control, and ecological balance preservation (Mrida and Athor, 2006; Arambur et al., 2009). The talar is reducing its distribution area due to the agricultural frontier expansion; its seeds have lower germination ability, and the shoots present difficulty growing (Abedini and Ruscitti, 1996; Abedini et al., 2000). Cell culture technology is one way to contribute to species conservation. Some assays of in vitro micropropagation had been carried out (Abedini et al., 2000; Adema et al., 2007), however when stems and thorns were used, difficulties were found in promoting new shoot development (Adema et al., 2007). According to Romanczuk (1976), the thorns of genus Celtis may have one node or a small number of nodes. Hunziker and Dottori (1976) distinguished between leafless thorns and leafy thorns. Romanczuk
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and del Pero de Martnez (1978) on the basis of thorn characteristics recognized two groups of species: one having thorns with invisible nodes, and the other comprising species with visible nodes as they produce small branches with leaves on them. On the basis of these observations we believe that thorns have areas (buds) with meristematic cells, and locating these areas with meristematic activity might be useful for the multiplication of this species. Our objective was to analyze the anatomy of thorns and find one or more specific areas with meristematic tissue (buds). MATERIALS AND METHODS Family Celtidaceae (= Ulmaceae), Celtis ehrenbergiana (Klotzsch) Liebm. Synonyms: C. tala Gillies ex Planch., Momisia ehrenbergiana Klotzsch, M. integrifolia Wedd., M. lancifolia Wedd., Celtis tala Gillies ex Planch. var. weddelliana Planch., C. sellowiana Miq., C bonplandiana Planch., C. tala Gillies ex Planch. var. gaudichaudiana Planch., C. tala var. tala (= var. gilliesiana Planch.) f. obtusata Chodat & Hassl., C. pallida Torr., C. tala Planch. var. pallida (Torr.) Planch., C. spinosa Spreng. var. pallida (Torr.) M. C. Johnst., C. flexuosa Wedd. var. glabrifolia Griseb., C. tala Planch. var. chichape (Wedd.) Planch. f. subpilosa Kuntze, C. tala Planch. var. chichape (Wedd.) Planch. f. subtomentosa Kuntze, Sarcomphalus punctatus Urb. & Ekman, Celtis punctata (Urb. & Ekman) Urb. & Ekman (Berg and Dahlberg, 2001; Zuloaga et al., 2008). It is a shrub or a tree up to 4-12(-15) m tall, with arching branches, and straight thorns, solitary or geminate, up to 2-8(-20) mm long. Leaves are simple and positioned one per node in an alternate arrangement. Petiole 2-8 mm in length, and ovate, elliptic or oblong leaf blade shapes up to 1-5(-10) x 0.5-3(-7) cm, with asymmetrical base, acute or obtuse apex and irregularly dentate margin; chartaceous to subcoriaceous consistency. Glandular (pluricellular) and non-glandular trichomes (cystoliths) are present all over the surfaces. Pocket domatia are found on the abaxial surface in the main vein axils (Dottori, 1976). Stipules are deciduous. Inflorescences have imperfect and perfect flowers. Fruit is a yellow to orange rounded drupe in fall; 0.4-1 cm long and 6 mm diam. (Romanczuk, 1987; Biloni, 1990; Berg and Dahlberg, 2001). The study was performed using living thorn samples collected from trees growing in the Arboretum and Botanical Garden C. Spegazzini, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales,
Universidad Nacional de La Plata, Argentina, where the LPAG herbarium and the laboratory are located and in which the study was carried out. Other specimens from the LP herbarium were also surveyed (acronym according to Holmgren et al. 1990). ARGENTINA. Buenos Aires province, Pdo. La Plata: City of La Plata, Oct-2008, A. M. Arambarri 301 (LPAG). San Luis province. La Capital: Alto Pencoso, Feb 1914, Rodrigo s.n. (LP 027957). Santa Fe province, Dpto. 9 de Julio: Tostado, Feb 1936, M.M. Job s.n. (LP 30395). Santiago del Estero province, Dpto. Guasayn: Cerrillos, Jan 1950, M.M. Job 2818 (LP 905690). To analyze the thorn, freehand longitudinal semithin sections were obtained. Some thorn samples were cleared to complement the study using the method of Dizeo de Strittmatter (1973). Slides have been made with the sections and cleared thorn material stained with Safranin O in 80% ethanol and mounted in gelatin-glycerine. The microscopic slides were observed under light microscope (LM) Gemalux. LM images were captured by means of a color PAL CCD camera attached to an LM, and they were digitalized by means of Hyper Media Center software.
Figure 1. Celtis ehrenbergiana.
thorns of Celtis ehrenbergiana are straight and without nodes. However, buds were found in the anatomy study, and node presence can be deduced. The presence of these thorns with conspicuous buds is in agreement with the description of Romanczuk and del Pero de Martnez (1978) about the existence of thorns giving branches which grow in zig-zag pattern. In the light of our results, only some thorns have active meristematic tissue (buds) and develop shoots. Perhaps this was one reason for new undeveloped shoots in the material assayed by Adema et al. (2007). It means that the selection of thorns is important when they are used in assays of in vitro micropropagation. CONCLUSIONS Only some thorns develop shoots. One of the two geminate thorns located at the apex of actively growing branches has two buds. Therefore, these portions which have numerous meristematic cells with division capacity might be assayed with cell culture technology. ACKNOWLEDGEMENTS We are indebted to Nstor D Bayn for valuable suggestions upon the manuscript and Romina Ywatani for the English translation. We wish to thank to Curators of LP and LPAG herbaria and anonymous reviewers. REFERENCES
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Thorn longitudinal view. A, longitudinal section: vt, vascular tissue of lateral bud; ab, apical bud; lb, lateral bud. B, thorn view at a more developed stage: vt, vascular tissue irrigating both buds; ab, dominant apical bud, with conspicuous leaves primordium; lb, lateral bud. Scales: A, 100 m, B, 500 m.
RESULTS AND DISCUSSION The thorn longitudinal section (Fig. 1A) and the longitudinal cleared thorn (Fig. 1B) show two buds: one in the apical and the other in a lateral subapical position. From an exomorphological point of view, the
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Effects of gamma radiation on the chemistry and antibacterial activity of artichoke leaves
[Efecto de la radiacin gamma sobre la qumica y actividad antibacteriana de las hojas de alcachofa (Cynara scolymus L.)]
Alexandre A. FERREIRA1, Alexandre S. LEAL2, Vany P. FERRAZ1, Yuri MACHADO1, Jacqueline A. TAKAHASHI1*
Departamento de Qumica, Instituto de Cincias Exatas, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Antnio Carlos 6627 Pampulha, Belo Horizonte, M.G., Brazil, 2Comisso Nacional de Energia Nuclear CNEN, Centro de Desenvolvimento da Tecnologia Nuclear - CDTN, Universidade Federal de Minas Gerais, M.G. , Brazil
Abstract
Gamma-irradiation has been widely used as a first choice sterilization method of raw medicinal plants to be used in the phytotherapic industry worldwide. A comparative evaluation of HPLC profiles of both irradiated and non-irradiated plants is useful to comply on the reliability of this methodology. In this work, a widely used medicinal plant, artichoke, was investigated before and after being gamma-irradiated on several doses, and HPLC profile of all samples was obtained. Also, chlorogenic acid content was measured and the antibacterial activity of extracts irradiated was tested by disc diffusion test. Results showed good stability of artichoke active constituents over gamma-irradiation, but the HPLC profile showed absence of some minor compounds after irradiation as well as different results on antibacterial assays, suggesting need of further studies in order to assure safety and pharmacological effects in gamma irradiated phytotherapics.
Keywords: Artichoke; Chlorogenic acid; Antibacterial activity; gamma Irradiation.
Resumen
La radiacin gamma ha sido ampliamente utilizada como el mtodo de eleccin para la esterilizacin de las plantas medicinales para su uso en la industria fitoterpica en todo el mundo. Una evaluacin comparativa de los perfiles por HPLC de plantas irradiadas y no irradiadas, es til para demostrar la seguridad de este mtodo de esterilizacin. En este trabajo, una planta medicinal muy utilizada industrialmente, la alcachofa, fue investigada antes y despus de ser irradiada con diferentes dosis de radiacin gamma y se obtuvieron los perfiles por HPLC de todas las muestras. Se ha medido el contenido de cido clorognico y tambin la actividad antibacteriana de los extractos irradiados. Los resultados mostraron una buena estabilidad de los componentes activos de la alcachofa, despus del tratamiento con radiacin gamma, pero el perfil del HPLC demostr la ausencia de algunos compuestos de menor importancia despus de la irradiacin as como diversos resultados en anlisis bactericidas, sugiriendo la necesidad de otros estudios para garantizar la seguridad y efectos farmacolgicos en fitoterpicos irradiados con irradiacin gamma.
Palabras Clave: alcachofa; acido clorogenico; actividad antibacteriana; irradiacin gamma. List of Abbreviations: 2-dodecylcyclobutanone (2dDCB)
Recibido | Received: April 4, 2010. Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: April 28, 2010. Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010 Declaracin de intereses | Declaration of interests: authors have no competing interests. Financiacin | Funding: This work was financed by FAPEMIG (Brazil) and IFS (Sweden). This article must be cited as: Alexandre A Ferreira, Alexandre S Leal, Vany P Ferraz, Yuri Machado, Jacqueline A Takahashi. 2010. Effects of gamma radiation on the chemistry and antibacterial activity of artichoke leaves. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3):232-237. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: jat@qui.ufmg.br
Ferreira et al.
Effects of gamma irradiation on artichoke leaves
INTRODUCTION The scientific use of phytotherapeutic medicines is increasing as well as the consumer attention towards the safety of plant based products. Microbial contamination in raw plant materials is a very common problem to be addressed, and the gamma irradiation process is nowadays the most used technique for microorganisms reduction (Koseki et al. 2002). However, some doubts have been considered on the safety of this methodology. A recent investigation to elucidate the genotoxic potential of 2-dodecylcyclobutanone (2dDCB) generated by gamma irradiation of plants and food containing from palmitic acid showed that 2dDCB was clearly toxic to healthy human colon epithelial cells and in cells presenting preneoplastic colon adenoma (Knoll et al., 2006). On the other hand, the literature there is no evidence that 2alkylcyclobutanone occurs in non-irradiated foodstuffs (Delince et al., 2002; Horvatovich et al., 2002). Therefore, the investigation of the qualiquantitative contents of active compounds in herbal materials used as medicinal products, by means of analytical techniques, is of increasing interest to guarantee safety, efficacy, and quality of phytotherapeutic medicines (Mulinacci et al., 2004). These analytical techniques, besides providing chemical evidence on the safety of the radiosterilized products would also provide methods for their quality control and sanitary inspection. HPLC has been widely used as a rapid, efficient and accurate method able to completely characterize and quantify complex matrices such as plant raw materials. Cynara scolymus L. (artichoke) is an ancient herbaceous plant, originating from the Mediterranean area, widely cultivated all over the world and its head constitutes a much appreciated exotic food. Artichoke leaf extracts are also widely used to prepare herbal medicinal products and teas. The chemical components of artichoke leaves and heads are usually polyphenolic compounds, with caffeoylquinic acids and flavonoids as the major chemical components (Mulinacci et al., 2004; Wang et al., 2003), being documented as the active principles of this plant. Several clinical investigations showed the efficacy and safety of artichoke extracts in the treatment of hepato-biliary dysfunction and digestive complaints, such as loss of appetite, nausea, and abdominal pain (Wegener and Fintelmann, 1999). Antioxidant and
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antimicrobial activities of artichoke extracts and isolated phenol constituents have also been reported (Zhu et al., 2004). Using antimicrobial disc assay, Zhu and co-workers showed that the n-butanol fraction exhibited a very significant antimicrobial activity against seven bacteria species, four yeasts, and four molds. Eight phenolic compounds, chlorogenic acid, cynarin, 3,5-di-O-caffeoylquinic acid, and 4,5-di-O-caffeoylquinic acid, luteolin-7rutinoside, cynaroside, apigenin-7-rutinoside, and apigenin-7-O--D-glucopyranoside were isolated and also showed antimicrobial activities (Zhu et al., 2004). On a systematic antioxidant activity-directed fractionation of the artichoke heads, chlorogenic acid, cynarin and other five active polyphenol compounds were isolated (Wang et al., 2003). In 2004, to face international market demands, the Brazilian Sanitary Surveillance Agency (ANVISA) established new procedures for phytotherapic drugs registration, where inclusion of a complete description of sterilization method and the eventual alterations of active compounds is necessary (RDC n 48, 2004). In the case of artichoke, a minimum concentration of total caffeoylquinic acid expressed as chlorogenic acid has been established. The gamma irradiation method is a sterilization form allowed in Brazil and in more than 37 other countries of the world, which has been frequently used for herbs sterilization (RDC n 21, 2001). In the present work, the safety of gamma-irradiation on artichoke was studied by a using a simplified HPLC method and, indirectly, by comparative measurement of the antibacterial activity of irradiated and non-irradiated artichoke extracts. MATERIAL AND METHODS Plant Material C. scolymus L. (Artichoke) powdered leaves not sterilized by gamma-irradiation were kindly supplied by Mr. Wantuir A. Gontijo (Melcorpo, Betim, MG, Brazil). Chemicals and General Procedures A HPLC system Shimadzu Class-VP with an LC workstation system controller (Class-LC10) coupled to a 7725-type manual injector through a 5 m Shimpack (Shimadzu, Kyoto, Japan; 250 mm x 4.6 mm i.d.) ODS column was used. Detector was a multichannel photodiode-array detector (SPDM10AVP) operating at 200 to 500 nm. The solvents
Ferreira et al.
used were of HPLC grade (Sigma-Aldrich Chemical Co.); chlorogenic acid was of USP grade (Sigma Chemical Co) and other solvents and chemicals were of analytical grade (Synth, Brazil). Irradiation Six aliquots of the plant material (50 g each) were irradiated in polyethylene vials on a 60Co gammacell, installed at the Centro de Desenvolvimento da Tecnologia Nuclear (CDTN, Belo Horizonte, Brazil). The radiation doses applied to each sample were 5, 10, 15 and 30 kGy at room temperature. A non irradiated sample was stored to be used as a control. Extraction procedure Upon irradiation, artichoke samples (1 g) were extracted with 20 mL of an ethanol/water solution (1:1) under magnetic stirring, at room temperature, for 30 min, filtered and the solvent was removed at 40 C. The extracts obtained were weighted and the corresponding yields were calculated. HPLC / DAD analysis The extracts were dissolved in 2 mL of a methanol/water solution (1:1) and filtered in Sepack filters (0.45 m); 20 L of this solution were injected in the high pressure liquid chromatograph. Separations were carried out on a 250 mm x 4.6 mm reversed-phase column Shim-pack (5 m) using a mobile phase of water-phosphoric acid 0.01% (solvent A) and acetonitrile (solvent B) at a constant solvent flow rate of 1 mL/min. A general elution method was developed using the following gradient: 0 min A 95%; 10 min A 80; 20 min A 70%; 40 min A 60%.; 50 min A 10%. The chromatograms were monitored on-line at 200 to 500 nm. HPLC / DAD quantitative procedure The external standard method was applied to quantify the content of chlorogenic acid and its derivatives in artichoke leaves. Quantification of chlorogenic acid was performed using a six-point regression curve, developed through the use of authentic standard, operating in the range of 2.3475.00 g/mL. Total caffeoylquinic acids were expressed as chlorogenic acid on the basis of their regression curve and in the sum of the peaks areas, identified by comparison of their UV spectra with those obtained for chlorogenic acid. Measurements
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were performed at 326 nm. The r2 value obtained for chlorogenic acid was 0.9994 in the range of concentrations from 2.34 to 75.0 mg/L. The HPLCDAD quantitative data were expressed as milligram per kilogram of dried extract. Antimicrobial activity test Antibacterial activity was detected by the disc diffusion method (Bauer et al. 1966) for Grampositive bacteria Staphylococcus aureus (ATTC 29213) and Lysteria monocytogenes (ATCC 15313) and Gram-negative Shigella sommei (ATCC 25931) and Proteus mirabilis (ATCC 25933). Chloramphenicol (30 g) and distilled water were used as positive and negative controls, respectively (Takahashi et al., 2006). Experiments were run in triplicate and the results represent mean values of the three measurements. RESULTS Samples of artichoke leaves (1 g each, dry weight) were irradiated at doses of 5, 10, 15 and 30 kGy. Organoleptic analysis of irradiated samples did not show any alteration on the color, flavor or physical aspect. The extracts obtained were weighted and the corresponding yields were calculated to be 18.8% for the non-irradiated sample and 18.6, 18.6, 19.2, 20.6%, for the samples irradiated with 5, 10, 15, and 30 kGy, respectively. A slight raise on the yield was observed for the higher irradiation doses that may have been caused by the breakage of labile bounds as result of the radiation. Some polar molecules, barely soluble in organic solvents, can break into smaller molecules, raising the extractable content. Due to this increase on the extracts yield, access to stability of active compounds was accomplished by performing a HPLC analysis.
Table 1. Chlorogenic acid and total caffeoylquinic acids concentrations on hydroalcoholic extracts prepared from irradiated artichoke leaves. Dosis (kGy) 0 5 10 15 30 Extraction yield (%) 18.8 18.6 18.6 19.2 20.6 Chlorogenic acid (%) 246 288 197 244 230 Total caffeoylquinic acid derivatives (mg/kg ) 1099 1229 1141 1265 1111
Ferreira et al.
Several HPLC methodologies for quali and quantitative analyses of polyphenol compounds in artichoke leaves and heads were described so far (see, for example, Mulinacci et al., 2004; Wang et al., 2003), but it seems that none of them has been used to compare irradiated and non-irradiated artichoke. In this work, the retention time for the active component of the extract (Schtz et al., 2006), chlorogenic acid (standard sample), was observed in approximately 21.20 min (Figure 1, peak 1).
Figure 1. HPLC profile of hydroalcoholic extract from irradiated (30 kGy) and non irradiated (0 kGy) artichoke leaves.
The remaining caffeoylquinic acid derivatives peaks (Figure 1, peaks 2 and 3) were identified on the basis of comparison of their UV spectra with that one obtained for chlorogenic acid (Figure 2).
Figure 2. UV spectra of authentic chlorogenic acid (a) and of caffeoylquinic acid derivative (peak 2 of artichoke hydroalcoholic extract chromatogram) (b).
Chlorogenic acid 1; caffeoylquinic acid derivatives: 2 and 3. In the region of 28 min there were observed peaks present only in the HPLC profile of non-irradiated (0kGy) artichoke.
HPLC chromatograms of artichoke from both irradiated and non-irradiated samples were very similar concerning the major compounds profile. However, modifications on the minor compounds, as exemplified on Figure 1 (peaks at 28 minutes), were observed. Quantification of chlorogenic acid was performed using a six-point regression curve (Figure 3), developed through the use of authentic standard. Calibration curve of HPLC peak areas was constructed against the marker concentrations. Linear regression analysis was used to calculate the slope, intercept and the correlation coefficient (r2) of calibration line. Total caffeoylquinic acids contents were determined (Table 1). The chlorogenic acid concentration in non irradiated artichoke samples was determined as 246 mg/kg of dried extract, and total caffeoylquinic acids were calculated as 1099 mg/kg (Figure 1). Chlorogenic acid concentrations of irradiated samples were determined in the range of 197-288 mg/kg. A good agreement in the content of chlorogenic acid and derivatives among nonirradiated and irradiated samples was found, inferring that these compounds were stable and were not decomposed by the irradiation. However, differences in minor compounds and in the quantity of major compounds observed in the HPLC profiles were noticed (Figure 1). Since plant matrices are very complex, it seemed interesting to compare the biological response of irradiated and non-irradiated artichoke samples, as small changes like those observed in the HPLC profiles at the chromatographic conditions used in
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Ferreira et al.
these experiments, can be enough to interfere on the extract bioactivity (Byun et al., 1999). Antibacterial assay was chosen as it is a rapid and reliable assay and artichoke has been showed to be active in this test (Zhu et al., 2004). Extracts of irradiated artichoke were tested in vitro against four bacteria, and compared to a non-irradiated sample extract. Bacteria were chosen in order to cover a broad spectra of activity, being two Gram-positive and two Gram-negative. Antibacterial activity was noticed only against Listeria monocytogenes, a Gram-positive bacterium. Non-irradiated artichoke and artichoke irradiated up to a doses of 15 kGy showed the same inhibitory activity (9 0 mm inhibition zone in all three measurements), but samples irradiated with 30 kGy repeatedly showed no activity towards L. monocytogenes. This is worth noticing, since it was expected that all samples would present the same activity against the tested bacteria. In this way, biological tests may be a strong argument in favour of the need of deeper studies not only for artichoke but in order to guarantee the safety and quality of raw plant material when gammairradiation is used as the sterilization procedure. DISCUSSION Since plant matrices are very complex mixtures of compounds, it seemed interesting to compare the biological response of irradiated and non-irradiated artichoke samples, besides the HPLC profile, since small changes such as those observed at the chromatographic conditions used in these experiments can be enough to interfere on the extract bioactivity. Extracts of irradiated artichoke were tested in vitro against four bacteria, in comparison to a nonirradiated sample extract. None of them presented antibacterial effect against S. aureus, S. sommei and P. mirabilis. Antibacterial activity was noticed only against L. monocytogenes, a Gram-positive bacterium. Non-irradiated artichoke and artichoke irradiated up to a doses of 15 kGy showed the same inhibitory activity (9 mm inhibition zone), but samples irradiated with 30 kGy repeatedly showed no activity towards L. monocytogenes. This was an interesting finding since it was expected that all samples would present the same activity against the tested bacteria (Byun et al., 1999). In this way, biological tests results may be a strong argument in favor on the need of wider studies including other medicinal plants in order to guarantee safety and
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quality of raw plant material when gamma-irradiation is used as the sterilization procedure. CONCLUSIONS HPLC analyses of chlorogenic acid and its derivatives contents on artichoke leaves both gamma irradiated and non-irradiated showed the same profile in terms of major compounds. However, some discrepancies were noticed concerning to the absence of peaks corresponding to some minor compounds and also when biological activity of such samples was investigated. In this way, it seems that complimentary techniques for the evaluation on the gamma irradiation effects of raw plant material should be developed in order to assure the users that this is a consumer-friendly technique, guaranteeing both safety and pharmacological effects of phytotherapics prepared by using gamma-irradiated plants. ACKOWLEDGEMENTS The authors wish to thank the financial support of FAPEMIG, IFS and CNPq. REFERENCES
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New Brazilian rules for herbal medicines

[Nuevas normas brasileas para fitoterpicos]
Ana Ceclia BEZERRA CARVALHO1,2, Joo Paulo SILVRIO PERFEITO1,2, Leandro Viana COSTA E SILVA1,2, Livia SANTOS RAMALHO1,2, Robelma France de OLIVEIRA MARQUES1, Dmaris SILVEIRA2* Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. ANVISA. SIA, Trecho 5, rea Especial 57, Braslia, DF, Brasil. CEP 71205-050. 2Faculdade de Cincias da Sade da Universidade de Braslia. Campus Universitrio Darcy Ribeiro, Asa Norte, Braslia, DF. CEP 70910-900.
1
Abstract
Brazil has republished several normative instructions for the last months related to medicinal plants and herbal medicines in accordance to public policies which encourage the use of herbal medicines that present safety, efficacy, and quality patterns. This article reports the last published rules and their major changes comparing to the previous ones. Keywords: phytotherapy, herbal medicine, medicinal plants, regulation
Resumen
Brasil acaba de publicar varias normas relacionadas con las plantas medicinales y fitoterpicos con el fin de satisfacer las demandas de las polticas pblicas vigentes en el pas y fomentar la entrada de medicamentos a base de hierbas con la seguridad, eficacia y calidad para la poblacin. Este artculo presenta las normas recientemente publicadas y presenta los cambios ms importantes. Palabras Clave: fitoterpico, medicamento herbolario, plantas medicinales, regulacin.
Recibido | Received: May 5, 2010. Aceptado en versin corregida | Accepted in revised form: May 14, 2010. Publicado en lnea | Published online: May 25, 2010. Declaracin de intereses | Declaration of interests: the authors have no competing interests. Financiacin | Funding: none declared. This article must be cited as: Ana Ceclia Bezerra Carvalho, Joo Paulo Silvrio Perfeito, Leandro Viana Costa e Silva, Livia Santos Ramalho, Robelma France de Oliveira Marques, Dmaris Silveira. 2010. New Brazilian rules for herbal medicines. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 9(3): 238-241. {EPub May 25, 2010}.
*Contactos | Contacts: damaris@unb.br
Carvalho et al.
Since 1967, Brazilian health policies have recognized the role of medicinal plants in the Public Health scenario, publishing specific regulations for herbal medicines regarding certain aspects such as
safety, quality, and efficacy (BRASIL, 1967). Table 1 summarizes the most important Brazilian published documents.
Table 1. Mainly Brazilian specific guidelines about medicinal plants regulation Category Legal Basis Main features Medicinal Plants Law Controls medicines trade, 5991/1973 pharmaceuticals and related supplies Medicinal Plants; Herbal medicines Medicinal Plants; Herbal medicines Sanitary Surveillance MS/GM 971/2006 Decree 5813/2006 Decree 79094/1977 Approves the national complementary practices policy of
Link http://www.anvisa.gov.br/legis/consolidada/lei_5991_73. htm http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/PNPIC.pdf http://www.planalto.gov.br/ccivil_03/_Ato20042006/2006/Decreto/D5813.htm http://www.anvisa.gov.br/legis/consolidada/decreto_7909 4_77.pdf
Approves the national policy of medicinal plants and herbal medicines Determines monitoring of medicines, pharmaceutical supplies, drugs, cosmetics, toiletries, sanitizing and others. Regulates herbal medicines register List of references to evaluate safety and efficacy of herbal medicines List of plants with simplified register
Herbal medicines Herbal medicines Herbal medicines
RDC 14/2010 IN 05/2010 IN 05/2008
http://bvsms.saude.gov.br/bvs/saudelegis/anvisa/2010/res 0014_07_01_2010.html http://www.in.gov.br/imprensa/visualiza/index.jsp?data= 05/04/2010&jornal=1&pagina=91&totalArquivos=160 ftp://ftp.saude.sp.gov.br/ftpsessp/bibliote/informe_eletron ico/2008/iels.dez.08/iels236/U_IN-ANVISA5_111208.pdf http://www.abrafito.org.br/legislacao.shtml#005 http://www.abrafito.org.br/legislacao.shtml#005 http://bvsms.saude.gov.br/bvs/saudelegis/anvisa/2010/res 0017_16_04_2010.html
Herbal medicines Herbal medicines Pharmaceuticals
RE 90/2004 RE 91/2004 RDC 17/2010
Guide to toxicological test to herbal medicines Guide for changes on herbal medicines register GMP for medicines
Herbal medicines RDC 10/2010 Herbal drugs notification http://www.brasilsus.com.br/legislacoes/rdc/103202-10 MS: Health Ministry; GM: ANVISA Pharmaceuticals Bureau; RDC: Resolution; IN: Normative Instruction; RE; Resolution from ANVISA Council
Therefore, the regulation of herbal medicine and medicinal plants largely evolved in the last decade, stimulated by the foundation of the Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria - ANVISA, and by the implementation of the National Policy of Integrative and Complementary Practice and National Policy of Medicinal Plants and Herbal Medicines (BRASIL, 2006a, 2006b; Carvalho et al., 2007; Carvalho et al., 2008). One of the most recent regulations is the RDC number 14, published on April 05th, 2010 (BRASIL, 2010d), which updated the technical requirements for industrialized herbal medicine registration. Indeed, few changes can be noted when comparing the latter to the previous guideline (RDC 48/2004) (BRASIL, 2004) concerning the requirements to prove efficacy and safety patterns. The demand on safety and
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efficacy patterns still remains and they must be preceded by pre-clinical and clinical tests. The results must also be supported by scientific literature or traditional use of the plant species. A list of references that support the plants safety and efficacy patterns was published again as IN 05/10 (BRASIL, 2010c). However, the new document includes innovations in the requirements for quality control. The Biological control is a new alternative to replace the chemical marker control for in vivo, ex vivo or in vitro validated tests, controlling the activity of the herbal medicine. Other inclusions refer to the need to evaluate the aflatoxins as recommended by the WHO magazine reports (WHO, 2007).
Carvalho et al.
One innovative inclusion is the requirement to register alga and multicellular fungus based products as ANVISA is defining the specific guidelines for this purpose. There was a lack of requirements in order to register these sorts of products and the RDC 14/2010 filled in this gap. Another innovation is the possibility for an herbal drug to become the active substance in the herbal medicine, if its efficacy can be clinically tested and proved. Herbal drug registration was prohibited by the preceding rule (RDC 48/2004). One of the several aspects that show the evolution of the Brazilian regulation in this field is the obligation to present pharmacologic surveillance reports for renewing herbal medicine registration in order to monitor adverse effects related to the herbal medicine in question. The new regulation norms also affect imported herbal medicines. The authorization to import samples of herbal medicines can be done prior to their registration in order to process batch-to-batch quality analyses and clinical tests. Such analyses can be done by a third party Quality Control laboratory in Brazil instead of by a laboratory from the samples home country as long as the laboratory hired to perform these tests has herbal medicine certifications from Good Laboratory Practices GLP and Good Manufacturing Practices - GMP (BRASIL, 2010b). Good Manufacturing Practices guideline was also updated on April 19th by RDC number 17/2010. This guideline brings specific requirements for herbal medicine industries. The normative requires technical qualification on herbal medicine aspects for all those involved in the manufacturing/inspection/liberation of these products. Other innovations added to this guideline are the mandatory control of pesticides and fumigant residues in final products and the rules about genetically modified herbal drug manufacturing (BRASIL, 2010a) Two other guidelines were recently published. The RDC 47/2009 defines the rules on elaborating, harmonizing, improving, and publishing literature to inform patients and health professionals about herbal medicines and their rational use (BRASIL, 2009a). The other guideline, RDC 71/2009, defines the requirements of labeling all pharmaceutical products that are registered and sold. The labels must also be written in Braille and must have a tracking system, along with other requirements (BRASIL, 2009c).
Another newly published regulation, the RDC 10/2010, from March 10th, deals with herbal drugs that are used in medicinal teas and has, therefore, filled in another gap in the Brazilian regulation. With this norm, the industries can now register their herbal drug productions based on a list of 66 traditionally recognized as efficient and safe herbal species (BRASIL, 2010b). CONCLUSIONS All these new rules present an evolution to the Brazilian Regulation. However, even though the innovated sanitary regulation meets the Public Health Policies for Industries it is mandatory to carry on researches in order to appraise the Brazilian medicinal plants accordingly, as established by the Relao Nacional de Plantas de Interesse para o Sistema nico de Sade (RENISUS) (BRASIL, 2009b). REFERENCES
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Portulaca oleracea Descripcin BLACPMA es una revista cientfica dedicada a las plantas medicinales, aromticas, y econmicas y a los productos naturales bioactivos. Publica contribuciones originales en ocho reas importantes: 1. Caracterizacin de los ingredientes activos de las plantas medicinales 2. Desarrollo de mtodos para la estandarizacin para los extractos bioactivos y los productos naturales de la planta. 3. Identificacin de la bioactividad de productos naturales vegetales. 4. Identificacin de blancos y mecanismo de la actividad de productos naturales. 5. Produccin y caracterizacin genmica de la biomasa de especies medicinales. 6. Qumica y bioqumica de productos naturales bioactivos. 7. Revisiones crticas de la personalidad histrica, clnica y jurdica de plantas medicinales. 8. Aspectos agrcolas de plantas medicinales y aromticas. Descargue el MODELO DE ARTCULO con las instrucciones de autor (Espaol / English) Detalles Bibliogrficos ISSN: 0717 7917 Publicado por CLACPMA 6 numeros / 1 Volumen ao Licencia Creative Commons Atribucion-No Comercial-No trabajos derivados 3.0 Internacional Precio y Encargos Los artculos publicados electrnicamente son gratuitos. Visite nuestro sitio web www.blacpma.org Separatas impresas pueden ser encargadas a editorial@blacpma.org (10 separatas: USD $25 + cargas postales) Audiencia Farmaclogos, Etnofarmaclogos, farmacuticos, fitoqumicos, qumicos orgnicos, toxiclogos, botnicos y antroplogos, entre otros. Impacto 2009: 9.00 Index Copernicus; La evaluacin del Journal Citation Reports (Thomson Reuters) EST EN CURSO.
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Volumen 9, Nmero 3, Mayo de 2010

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Recursos genticos, el conocimiento etnofarmacolgico y las patentes cubanas

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Conocimiento Etnofarmacolgico (b) SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI SI

Recursos genticos, el conocimiento etnofarmacolgico y las patentes cubanas

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Recursos genticos, el conocimiento etnofarmacolgico y las patentes cubanas

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1988.03.03 1988.03.16 1988.07.08 1988.12.12

A61K 35/78 A61K 31/045

Centro Nacional de Investigaciones Cientficas Ministerio de las Fuerzas

Recursos genticos, el conocimiento etnofarmacolgico y las patentes cubanas

1994.10.07 1995.02.10 1995.11.10

1994/115 11/95 1995/112 1995/113 1997/009

Centro Nacional de Investigaciones Cientficas Instituto de Farmacia y Alimentos

Recursos genticos, el conocimiento etnofarmacolgico y las patentes cubanas

Composicin Vegetal Antisolar

Tabletas de Quitina para el tratamiento de la ulcera pptica

Centro Nacional de Biopreparados

C12N 9/64 A61K 38/57 C07K 14/81 A61K 35/78

B01D 9/02 A61K 35/78

2004- 0046 2005- 0205

Instituto de Farmacia y Alimentos Centro Internacional de Salud "La Pradera"

Recursos genticos, el conocimiento etnofarmacolgico y las patentes cubanas

PCT/EP1993/000 107/92 007

08.10.1998 06.07.2000 23.12.2004

PCT/CU2006/000 2005- 0205 010

Centro Internacional de Salud 'La Pradera'

PCT/CU2008/000 No publicada Centro de Investigacin 010 y Desarrollo de Medicamentos

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*Contactos | Contacts: florcuassolo@crub.uncoma.edu.ar, fcuassolo@yahoo.com.ar

Plantas medicinales en una comunidad urbana de la Patagonia Argentina

Plantas medicinales en una comunidad urbana de la Patagonia Argentina

Plantas medicinales en una comunidad urbana de la Patagonia Argentina

Plantas medicinales en una comunidad urbana de la Patagonia Argentina

Valeriana officinalis yerba de la piedra

Valeriana officinalis? Usnea hieronymi

cola de caballo Malva silvestris

Equisetum giganteum Malva sylvestris

Peumus boldus Passiflora caerulea

paico Valeriana officinalis

Chenopodium ambrosioides Valeriana officinalis?

talo fucoide restos de gasterpodos marinos, trozos de balanus, rocas marinas

hojas sp. indeterminada, pelos, piedras

Plantas medicinales en una comunidad urbana de la Patagonia Argentina

yerba del pollo

Cecropia pachystachia carqueja

LP1 AL2 FDT1