GENERALIDADES DE VIROLOGIA

Microbiologa 2 Ctedra 2 Facultad de Medicina, UBA

Qu es un virus?

Virus

Son parsitos intracelulares obligatorios, no pueden sintetizar ATP ni protenas independientemente de la clula. Los virus no son seres celulares. El genoma viral puede ser ARN o ADN, pero no ambos. Los virus poseen una cpside protica y algunos una envoltura. Los componentes virales se ensamblan y no se replican por division.

Son seres vivos?

Una entidad viva es aquella capaz de multiplicar sus estructuras pero adems, tiene la capacidad potencial de generar nuevas estructuras de mayor complejidad. La seleccin de dichas estructuras (perpetuacin) esta dada por la Seleccin Natural. La evolucin define la condicin de materia viva, los virus son materia viva.

Porqu es importante el estudio de los virus?

Importancia clnica. Son los causantes de numerosas enfermedades. Son importantes herramientas en investigacin. Utilizando virus se ha avanzado en la Biologa Molecular, conocimiento de genes, de mecanismos de replicacin, trascripcin, c. nucleicos, etc.
Importancia biolgica. Todos los seres vivos del planeta tienen virus que los parasitan.

Componentes del virin

Tamao

1 m= 0,000000001 nm Aprox: 20 a 250 nm

Genoma viral

ADN o ARN
Informacin para la replicacin viral y formacin de nuevos viriones Tamao de genoma variable

Haploides
Monocatenarios (sc): 1 sola cadena de nucletidos Bicatenarios (dc): 2 cadenas de nucletidos Molcula continua: lineal o circular Segmentado

Genoma viral

DNA: - doble cadena - lineal (Herpesvirus) - circular (Papovavirus) - simple cadena - lineal (Parvovirus) - circular (v. bacterianos)

RNA: mayora simple cadena y lineal - genoma fragmentado o segmentado Ej. Virus de la gripe (sc)

Polaridad del ARN

ARN Polaridad (+): codifica como ARNm, se traduce a protena. ARN Polaridad (-): debe pasar a ARN (+) para poder traducirse a protena Polaridad mixta o bisentido: arenavirus

Capside

Es una estructura que rodea y protege al genoma vrico y est formado por protenas codificadas por genes del virus.
Estas protenas que forman la cpside se denominan protmeros. Simetra es la forma que adopta un virus en el espacio, esta dada por la estructura de la Nucleocpside.

Simetra Helicoidal

Desnudo
Ej: mosaico del tabaco

Envuelto Ej: Ortomixovirus

Nucleocpside cilndrica que puede extendida o enrrollada sobre si misma.

estar

Simetra Icosadrica

Desnudo
Ej: Adenovirus

Envuelto Ej: Herpesvirus

Son icosaedros regulares, triangulares, 12 aristas.

de

20

caras

Binaria y Compleja

Complejo Binaria

Cabeza icosadrica y cola helicoidal.

Nucleocpside helicoidal o icosadrica recubierta por una envoltura laxa. Ovoides, esfricos o pleomorficos

Envoltura

Es una capa membranosa que rodea la nucleocpside de diferentes virus. Esta envoltura tiene estructura de membrana, con bicapa lipdica con protenas:

Los lpidos de la envoltura proceden de las membranas de la celula hospedadora.

Las protenas estan codificadas por genes del virus - Glicoprotenas: tiene unidos azucares. Sobresalen de la membrana. Espculas o peplmeros.

Fn: Unin a clula hospedadora Actividad enzimtica

Protenas

Constituyen del 50 al 90% de la partcula viral

Estructurales: estan presentes en el virin en una proporcin importante y mantienen la estructura del mismo. Superficie: constituyen los capsmeros y peplmeros (proyecciones de la envoltura, glicoprotenas, ej: Hemaglutinina y Neuraminidasa) Internas: ubicadas en la cara interna de la envoltura, entre capas de capsmeros, en el centro del virin. No Estructurales: enzimas requeridas para el ciclo de replicacin, que se sintetizan en la fase temprana de la replicacin.

Clasificacin viral: Criterios

1.

Tipo de cido nuclico, mecanismos de replicacin.

caractersticas

del

mismo

2.

Tamao del virin y simetra de la cpside. N de capsmeros en los virus desnudos o dimetro de la hlice en los helicoidales. Presencia o no de envoltura. Lugar de ensamble citoplasma). de las partculas virales (ncleo o

3.

4.

5.

6.

Forma de salida de la clula husped (por lisis o brotacin).

Clasificacin ICTV

El Comit Internacional de Taxonoma de Virus (ICTV): La estructura general de la taxonoma es la siguiente:

Taxn Orden Familia Subfamilia Gnero Especie Terminacin -virales -viridae -virinae -virus virus N 5 82 11 307 2083

Los rdenes son: caudovirales, herpesvirales, mononegavirales, nidovirales y picornavirales. El comit no distingue formalmente entre subespecies, cepas y aislamientos. Existen unos 3.000 tipos que an no han sido clasificados.

Clasificacin ICTV
El ICTV estableci la base de datos de virus universal de la ICTV (ICTVdB), disponible en internet. http://www.phene.cpmc.columbia.edu/index. htm http://www.ictvonline.org/index.

Familias de virus ADN y algunos miembros importantes

Family POXVIRIDAE Members Smallpox virus, vaccinia virus, monkeypox, molluscum contagiosum Herpes simplex virus types 1 and 2, varicella-zoster virus, Epstein-Barr virus, cytomegalovirus, human herpesviruses 6, 7, 8 Adenovirus Papilloma virus JC virus, BK virus, SV40 Hepatitis B virus Parvovirus B19, adeno-associated virus

Herpesviridae Adenoviridae Papilloma viridae Polyoma viridae Hepadnaviridae Parvoviridae

Family PARAMYXOVIRIDAE

Members Parainfluenza virus, sarampion, parotiditis, virus respiratorio sincicial virus, metapneumovirus

ORTHOMYXOVIRIDAE Influenza virus types A, B, and C CORONAVIRIDAE Coronavirus, SARS (sindrome respiratorio severo y agudo) Lassa fever virus, Tacaribe virus complex (Junin and Machupo viruses), lymphocytic choriomeningitis virus Rabia Ebola, Marburg California encefalitis virus, virus fiebre hemorrgica, Hanta virus Human T-cell leukemia virus types I and II, HIV Rotavirus Rhinovirus, poliovirus, echoviruses, coxsackievirus, hepatitis A virus Rubeola ; virus de la encefalitis del oeste, este, y equina Venezuela Virus de fiebre amarrilla , dengue, virus de encefalitis de San Luis, West Nile virus, virus hepatitis C Norwalk virus, calicivirus

Arenaviridae
Rhabdoviridae Filoviridae Bunyaviridae Retroviridae Reoviridae Picornaviridae Togaviridae Flaviviridae Caliciviridae

Etapas de la replicacin viral I

1.

Iniciacin:
a) Adsorcin: es la unin especfica de la protena viral de superficie con el receptor de la membrana celular. Tropismo. b) Penetracin: Endocitosis mediada por receptor (EMR), o fusion c) Desnudamiento: del genoma viral. Citoplasma o enlos poros de la membrana nuclear.

2.

Expresin y replicacin del genoma:

Genomas virales poseen diferentes estrategias de multiplicacin viral. ARNm viral. Sntesis de protenas virales. a) Protenas que interfieren con el metabolismo celular b) Polimerasas: sntesis de cidos nuclicos virales c) Estructurales: formaran la estructura de los viriones

Etapas de la replicacin viral II

3.

Ensamble, maduracin y egreso de la clula infectada

a) Intracelular: - en el citoplasma celular - ncleo celular b) Ensamble es simultneo al egreso de la clula. - Membrana citoplasmtica - virus emergen por brotacin. - lisis celular o casi no citolticos (retrovirus). c) Ensamble en el ncleo celular: herpesvirus.

Herpesvirus DNA, envuelto

Picornavirus: RNA (+) desnudo

Diferentes vas para la sntesis de ARNm viral

Replicacin genmica de virus con diferentes tipos de cidos nuclicos

Curva de crecimiento de un nico ciclo de multiplicacin viral

Patognesis

Patognesis del virus es el proceso por el cual los virus producen enfermedad en el husped. La produccin de la enfermedad, que es el foco de la patognesis, es en realidad un resultado relativamente inusual de la infeccin viral de un husped.

Virulencia

La virulencia de un virus es su capacidad, en comparacin con otros virus estrechamente relacionados, para producir enfermedad en un husped.
La virulencia depende de una variedad de factores: virales: - dosis de virus - va de entrada husped: - edad del husped - sexo - estado inmunolgico - especies

Tropismo

La relacin virus husped es especfica: dada por la unin de protenas virales a receptores de la membrana celular. Cada virus afecta a un grupo: humanos, animales, vegetales o bacterias y dentro de ellos, solamente a algunas clulas (dermotropos, neumotropos, hepatotropos, neurotropos y pantotropos). Ej: sarampin.

Virus que producen zoonosis: Rabia, arenavirus (Fiebre hemorrgica Argentina).

El mdico debe contemplar la clasificacin y el tropismo de cada virus ya que la accin patgena viral depende de este ltimo, as se orientar dentro de un espectro limitado de virus causantes de la patologa.

Patogenia de las infecciones virales

Estados: 1. Infeccin inicial del husped: el virus se adsorbe a clulas susceptibles y luego penetra en el tejido. Puertas de entrada.
2.

Diseminacin de la infeccin: multiplicacin y diseminacin local a travs del cuerpo. Eliminacin de virus al exterior. Relacionado con la transmisin viral.

3.

Puertas de entrada
Organo Piel Virus Rabia Arbo=Fiebre amarilla HBV, HVC, HIV, EBV, CMV Papiloma Tracto respiratorio Influenza, Parainflueza, Sarampin Orofaringe y tracto entrico Tracto genitourinario Va conjuntival EV, Rotavirus, ADV 40 y 41 ADV 11y21, BK, HSV1y2, HIV, HBV,Papiloma ADV 8, EV 70 Mecanismo Mordedura por perros y zorros Picadura de artrpodos (Aedes aegypty) Transfusiones, inyecciones Verruga en piel Va aerea, intensidad de las secreciones por boca o nariz, contaminacin manos, etc Contaminacin fecal-oral Relaciones sexuales, canal de parto

Contacto con objetos contaminados

Vas de diseminasin

Transmisin de virus al exterior del organismo

Liberacin viral de la clula, salida del husped, transporte a travs del medio ambiente en forma viable y entrada apropiada a un nuevo husped susceptible.
Factores que intervienen:
Cantidad de virus. Estabilidad viral en el medio ambiente Presencia de vectores transmisores Disponibilidad de huspedes susceptibles Constitucin gentica del virus y el husped

1. 2. 3. 4. 5.

Fuentes de transmisin: secreciones respiratorias, saliva, heces, orina, secreciones genitales, leche, sangre o piel.

Efecto de la infeccin viral sobre la clula

El resultado de la accin viral sobre la clula puede detectarse por la observacin del Efecto Citoptico, producido de distintas maneras:
Lisis celular: Interferencia de la biosntesis de macromolculas celulares Alteracin de la funcin de la membrana plasmtica Liberacin de enzimas hidrolticas degradativas desde las membranas lisosomales. Formacin de sincicios gigantes: fusin de membranas celulares, se forma una masa citoplasmtica que puede contener mltiples ncleos

1.
2. 3.

Cuerpos de inclusin: acmulos cristalinos de partculas virales , se observan inclusiones intranucleares (HSV o parvovirus), Cuerpos de Negri (Rabia), depsitos de Ag virales.

Tipos de infecciones virales

Cuasiespecies

La mezcla de virus presente en el husped en un momento dado es una cuasiespecies. Las ARN y ADN polimerasas virales producen errores generando cepas mutantes durante la infeccin viral. La mutacin es un fenmeno mas importante en los virus ARN ya que sus polimerasas son menos fieles que las de los virus de ADN. La cuasiespecie se encuentra sometida a las presiones selectivas complejas y poderosas en el husped, y algunos virus pueden tener una ventaja fsica sobre los dems.

La naturaleza de estas presiones selectivas y el potencial patgeno de los virus seleccionados son determinantes importantes de la patogenia viral.

Efecto de agentes fisicoqumicos sobre los virus I

El conocimiento de la sensibilidad de los virus a las condiciones ambientales es importante para:

Determinar la viabilidad de muestras para el diagnstico virolgico. clnicas

La conservacin de vacunas virales a virus vivo. Estimar la infectividad a temperatura ambiente. Decontaminar materiales. Efectuar un tratamiento adecuado para el agua potable.

Efecto de agentes fisicoqumicos sobre los virus II

Temperatura: los virus son lbiles al calor. En general se inactivan 1 hs a 60C.

pH y medio inico: mejor conservacin en medios isotnicos y pH fisiolgico. Excepcin: enterovirus estables a pH 3. Radiaciones: UV y ionizantes (rayos X y gamma) inactivan a los virus por su accin sobre el genoma viral. Solventes lpidos: los virus envueltos son sensibles a ter, cloroformo, sales biliares, detergentes aninicos. Los virus desnudos son resistentes a los solventes lipdicos. Ej. Enterovirus.

DIAGNSTICO VIROLGICO

Para qu sirve?

Diagnstico individual en un caso clnico. Intervencin teraputica: tratamiento especfico. Para definir un pronstico en la evolucin del paciente Indicar la necesidad de una vacunacin. Vigilancia epidemiolgica: incidencia de enfermedades, cepas circulantes de virus. Para adoptar medidas de salud pblica en la comunidad.

Calidad de la Muestra

La calidad del diagnstico virolgico est condicionado por la calidad de la muestra. Tipo de muestra: depende de la patologa y el virus Tiempo de toma de muestra: dentro de los 7 das de
Calidad: -Viabilidad viral
- Integridad genoma viral - Presencia de inhibidores - Biopsias del lugar del foco

iniciado el cuadro clnico, para serologa tambin a los 14 o 21 das.

Cantidad: 0,5 ul

- PCR 100-200 ul - Cultivo 200 ul

Tiempo y condiciones de transporte

Tipos de muestras
Manifestaciones Infeccin del SNC Infeccin respiratoria baja Agentes EV, HSV, Rabia, Sarampin, Arbovirus Influenza, Parainfluenza, Sincicial respiratorio, ADV Muestras LCR, orina, sangre ANF

Infeccin respiratoria alta

Piel y mucosas Exantma Conjuntivitis Sistmica Diarrea infantil Hepatitis, SIDA

Rinovirus, Adenovirus, EV, Reovirus

Viruela, Vaccinia, Varicela, HSV, EV Rubela HSV, Adenovirus, EV70 CMV, Adenovirus, CAV-B Rotavirus HAV, HBV, HIV

H. Nasal, H. Farngeo, ANF, heces

H. Farngeo, raspado base vescula Sangre heparinizada, LCR, H. Farngeo H. Ocular Orina, sangre, H. Farngeo, LCR Materia fecal Suero

Recoleccin y Conservacin
Muestra
Suero, sangre entera, plasma, leucocitos Hisopados Fudos Biopsias y necropsias LCR Materia Fecal

Recoleccin
3-10 ml, tubo estril Tubo con medio de transporte Tubo estril Tubo estril con medio de transporte Tubo estril 4 grs, frasco limpio

Conservar en fro (4C). Evitar el congelamiento y descongelamiento. Procesar en forma inmediata.

Curvas de deteccin de virus y Ac

Mtodos de Diagnstico Directos

1.

Detectan la presencia de virus en muestras clnicas. Deteccin del virus como agente infeccioso: Aislamiento viral
Deteccin de partcula viral: Microscopa electrnica Antgenos virales: IF, IP, EIA

2.

3.

4.

Genomas virales: PCR, rtPCR. Mtodos moleculares

Aislamiento Viral

Es el mtodo de diagnstico clsico. Es un sistema de amplificacin, que incrementa la cantidad de virus presente en la muestra. Producto: virus viable. La cepa aislada puede conservarse. Permite la posterior caracterizacin del virus. Permite la deteccin de diferentes agentes virales, incluso aquellos no sospechados inicialmente.

Tipo de cultivo Primario

Lnea celular Rin de mono Rin de conejo

Virus Influenza, Parainfluenza, EV HSV

Rin de embrin humano Diploide

Continuos

ADV, EV HSV, CMV, VZV, ADV, RSV, PAR, BK, Rinovirus

ADV, HSV, PAR, RSV, Parainfluenza y EV (algunos) HSV, ADV, EV

Fibroblastos
Hep-2 A549

MDCK
Vero

Influenza
HSV, VZV, PAR

Rd L20b

Polio, Echo, CAV Poliovirus

Efecto Citoptico (ECP)

ECP: es el cambio morfolgico producido en las clulas infectadas que puede visualizarse microscpicamente. Cuerpos de inclusin Clulas multinucleadas Sinsicios celulares Vacuolizacin citoplasmtica

ECP HSV

Fibroblastos normales

Fibroblastos infectados con HSV

Foco en Vero

IFI HSV

Desventajas del Aislamiento Viral

Baja sensibilidad Deben utilizarse combinaciones de lneas celulares. Siempre requiere confirmacin. Existen virus que son difciles de aislar (CAV) son de lento crecimiento (CMV). Demora de resultados: 6 7 das hasta 14 das o ms. Laboriosa, personal altamente entrenado, infraestructura especial de laboratorio.

Se debe trabajar en condiciones de esterilidad (cabina con flujo de aire laminar).

Microscopa electrnica

Visualizacin directa de partculas virales en muestras Rpido No requiere virus viable Procedimiento abierto Costo y el mantenimiento del microscopio electrnico es complejo Sensibilidad: relacionada con la alta concentracin de partculas virales (105 a 106/L) Usos: - Muestras de materia fecal en gastroenteritis virales. Ej: Rotaviruses, Adenovirus 40 y 41, Norovirus y Astroviruses. - Lquido de ampollas: HSV, Poxvirus, Marburg, Ebola - tejidos fijados obtenidos por biopsia o autopsia - identificacin de virus en cultivos celular

Fotografa electrnica de virus entricos

ADENOVIRUS ASTROVIRUS

ROTAVIRUS

ENTEROVIRUS

Fotografa electrnica de Herpesvirus

Deteccin de ANTGENOS VIRALES

a)

El Ag viral se expresa y esta presente en la muestra

Existencia de un Ac (monoclonal o policlonal) apropiado Variabilidad antignica no excluye el reconocimiento de los reactivos inmunolgicos de las diferentes cepas del virus blanco El antgeno a detectar es estable y no se degrada durante el transporte y procesamiento de la muestra.

b)

c)

d)

Mtodos: Inmunoflorescencia
1.

Inmunofluorescencia (IF): isotiocianato de fluorescena (FITC) - Directa: Fcil de usar, conjugacin de cada Ac antiviral - Indirecta:Ms sensible y ms verstil. - Microscopio de fluorescencia (luz UV)

Mtodos: Inmunoperoxidasa

Coloracin con peroxidasa de rbano picante. Se incuba Ac-Peroxidasa con muestra (Ag) + sustrato: cambio de color Microscopa de luz
Venta: tejido intacto (tcnicas histoqumicas), lo que permite el exmen de la relacin espacial entre antgenos virales y las estructuras celulares. Desventaja: es ms complicado y peroxidasas endgenas puede producir tincin de fondo. Ej: Herpes

Mtodos: ELISA
3. Enzima Inmunoensayo

Formato de anticuerpos doble sandwich Cambio de color indica presencia de antgeno del virus

Propiedades deteccin Ag

Verstil
En fase slida o lquida. Integridad de la muestra no es tan importante, ventajoso para transporte de muestra prolongado.

Aplicacin a muestras diversas

Posibilidades de automatizacin. Instrumentos de laboratorio estn disponibles que puede realizar EIA para detectar tanto antgenos o anticuerpos.

Aplicaciones de deteccin de Ag
Muestra Virus

Respiratorias (ANF, HF, H Nasal, BAL)

Respiratorio sincicial Influenza A,B Parainfluenza 1,3 Adenovirus Parotidtis

HSV, VZV HSV, ADV CMV (pp65) HBV (Ag superficie) HIV (p24) Rotavirus Adenovirus (entrico)

Piel o hisopado mucosa Conjuntiva o hisopado cornea Sangre

Materia Fecal

Genoma virales: el blanco para mtodos moleculares

Deteccin de genoma viral: PCR

Reaccin en Cadena de la Polimerasa: amplificacin enzimtica in vitro de un fragmento de ADN ARN en forma exponencial. Proceso repetitivo de ciclos: cada ciclo consta de los siguientes pasos. Desnaturalizacin Annealing Extensin Cada paso se produce a una temperatura determinada

Formatos de PCR

RT-PCR: Virus RNA: - Retrotranscripcin: ARN a ADNc

(37 o 42 C)

Nested: reaccin de PCR anidada. Mayor sensibilidad. Mltiplex PCR: permite la deteccin de diferentes virus en una nica reaccin. Los fragmentos amplificados deben tener tamaos diferentes.

Etapas de la PCR
1.
2.

3. 4.

Preparacin de mezclas: enzimas, iniciadores, nucletidos, buffer Extraccin de cidos nuclicos: Isotiocianato de guanidinio: DNA y RNA Trizol: RNA Columnas (slica) PCR: amplificacin del target Visualizacin del producto amplificado: Electroforsis en gel de agarosa

Ventajas de la PCR

Rpida: resultados en el da Elevada sensibilidad y especificidad No requiere la viabilidad del virus

Desventajas de la PCR
RNA es fcilmente degradable Inhibicin de la reaccin (falsos negativos) Contaminacin (falsos positivos)

PCR Multiple Virus Neurotrpos

Blancos amplificados: DNA polimerasa (HSV) y 5NCR (EV) Sensibilidad: - HSV, EBV: 1-5 molculas - VZV: 5-50 molculas - CMV, HHV6: 50-100 molculas - EV: 0.01 0.001 TCDI50

PCR en Tiempo Real

PCR: procesos de amplificacin y deteccin ocurren en forma simultnea. Deteccin: mide fluorescencia emitida, la cual es proporcional al ADN sintetizado. Sistemas fluorescentes: Agentes intercalantes: SYBER Green I Sondas especficas marcadas con fluorocromos: Taq Man

TAQ MAN

Caractersticas de PCR Tiempo Real

Deteccin en tiempo real del producto amplificado. Sistema de amplificacin y deteccin integrados. Bajo riesgo de contaminacin, sin manipulacion postamplificacin Cuantitativa Rpida Reproducible Altamente especfica: iniciadores y sonda No utiliza Bromuro de Etidio Fcil de automatizar Sensibilidad similar a Nested-PCR Reactivo dependiente Costo

Deteccin de cidos nuclicos aplicados al diagnstico viral I

Virus
HIV
HIV HSV, VZV

Muestra
Plasma LCR, fluido ocular, hisopados de lesiones mucocutneas Sangre (entera, luecocitos o plasma), LCR, fluido ocular, lquido amnitico

Aplicacin
Carga viral (pronstico, respuesta al tratamiento) Encefaltis, meningitis, retinitis, lesiones mucocutneas Infeccin sistmica post-transplante, encefalitis, infeccin congnita, ensayo cuantitativo para monitorear severidad de la infeccin y respuesta a la terapia

Leucocitos del RN de madre HIV Infeccin perinatal

CMV

EBV

LCR, Sangre (entera, luecocitos Linfoma primario de SNC adquirido por o plasma) SIDA, post-transplante, desorden linfoproliferativo Sangre, LCR Infeccin sistmica, encefalitis

HHV-6,7

Deteccin de cidos nuclicos aplicados al diagnstico viral II

Virus HHV-8 ADV Parvo B19 JC BK HPV EV Muestra Sangre, lquido pleural o pericardial Sangre, secreciones respiratorias Suero, lquido aminitico LCR Orina, plasma Secreciones genitales LCR, sangre (entera, suero, plasma) Aplicacin Diagnsitco de linfoma Infeccin respiratoria, diseminasin de infeccin en inmunosuprimmidos Infeccin crnica de parvovirus B19, crissi aplsica, infeccin congnita Leucoencefalopata multifocal progresiva Riesgo de nefropata posttransplante renal Tipo viral asociado a carcinoma cervical Meningitis o infeccin sistmica

Deteccin de cidos nuclicos aplicados al diagnstico viral III

Virus Muestra Aplicacin

WestNile LCR, sangre

HepC HepB Plasma Suero

Infeccin SNC (IS), screening en sangre de infeccin presintomtica

Infeccin. Ensayo cuanti para evaluar la respuesta a la terapia Infeccin cuando serologa es ambigua. Infeccin activa. Ensayo cuanti para evaluar la respuesta a la terapia y emergencia de resistencia Diagnsitco de rabia Elevada sensibilidad, incluyendo agentes no cultivables Elevada sensibilidad, incluyendo agentes no cultivables

Rabia V. Resp Gastro

Saliva, LCR Muestras respiratorias Materia Fecal

Secuenciacin genmica viral

Secuenciacin nucleotdica de productos de PCR

Deteccin de resistencia a los antivirales en VIH (plasma) y CMV Identificacin de serotipos: EV Deteccin de cepas mutantes: cepas derivadas de la vacuna Sabin con capacidad patognica. Deteccin de cepas recombinantes Aplicaciones epidemiolgicos

Relaciones filogenticas
84 BAlp167-ARG04 56 30 17

Mza159-ARG04 BAm717-ARG03 Mza162-ARG04 BAm715-ARG03

Mza143-ARG04

Mza124-ARG04 31 61 Mza152-ARG04
25

BA22-ARG04 BA107-ARG04

237 31 26

BAc29-ARG04 BAsm91-04 Mza130-ARG04

79 BA334-ARG04

B2 2006 y Brote 2003-2004

36 97

Chaco343-ARG04 Tu296-ARG04

74 Tu283-ARG04 47 72 75 42 92 59

Cba286-ARG04 Cba314-ARG04 Cba1551-ARG06 Cba182-ARG04 Cba275-ARG04 Chaco69-ARG04

76 BAz549-ARG03

TF59-ARG04
37 99 48 99 82

BAz551-ARG03 BAz499-ARG03 BAz500-ARG03

B1 Zarate 2003 y TF

CapFed55-ARG01 BA13-ARG03
88 73 75 99 99 44 99

SF40-ARG03 BA173-ARG03 BAta1261-ARG06 Chaco61-ARG07 Mis116-ARG04 Mza147-ARG04 ER108-ARG01 SF187-ARG03

B3 2003 2006-07

A2 2001 y Brote 2003-2004

91 76 99 68

SF49-ARG03 Mza305-ARG98 Mza311-ARG98 373-ARG97

Ch341-ARG98 99 62 Ch345-ARG98
89 Ch336-ARG98 47 Ch337-ARG98 25 Ch339-ARG98

A1 1997 y Brote 1998

BastianniVP1

0.02

Mtodos de Diagnstico Indirectos

Serologa: deteccin de anticuerpos antivirales en el suero del paciente.

especficos

Conversin serolgica: aparicin o aumento de 4 o ms veces del ttulo de Ac entre 2 muestras pareadas de suero, fase aguda y convalesciente (14 a 21 das). IgG.

Presencia de IgM especfica: en una sola muestra de perodo agudo o convalescencia temprana
ELISA, RIA, Western Blot

Serologa: Curva de deteccin de Ac

Diagnstico serolgico se basa en la cintica de la respuesta de Ac a la infeccin viral.

Aplicacin de la serologa
Infeccin aguda Epstein-Barr Estado inmune Varicela Zoster

Citomegalovirus (S. Mononucleosis) Hepatitis viruses (A-B) Paperas

Rubola Parotiditis Parvovirus B19 Encefalitis virus Rabia Fiebre Hemorrgica Dengue HIV HTLV-1/2

Herpesvirus Citomegalovirus Epstein Barr

Paperas Rubola Parotiditis Parvovirus B19 Hepatitis viruses (A-B)

Bibliografa

Fields Virology 5 edicin. Lippincott Willams-Wilkins www.who/int/es www.paho.org www.cdc.gov www.msal.gov.ar www.anlis.gov.ar