P4 Metabolismo Microbiano

Pruebas Microbiolgicas para E.
coli
Ms de un estudiante ha pasado por la situacin, de no conocer exactamente que medios son los
indicados para identificar
E. coli Salmonella Shigella Agar

una cepa bacteriana especficamente, aunque haya revisado el tema en clases recientes. Por ello
es prctico conocer sobre qu tipo de medios las bacterias se diferencian de otras cepas aunque
sean metablicamente muy similares. En este apartado revisar las pruebas ms relevantes para
identificar a la muy estudiada Escherichia coli.
Cuando recibimos una muestra es importante definir el algoritmo de pruebas que debe manejarse
para lograr identificar el microorganismo de inters. La tincin de Gram nos permite definir si el
microorganismo es Gram positivo o Gram negativo en este caso en el frotis debemos observar
bacilos Gram negativos para seguir a las siguientes pruebas de caracterizacin.
E. coli - MacConkey
La mayora de los microorganismos pueden cultivarse sobre substratos nutritivos para el estudio
de sus propiedades o para la utilizacin de ciertas propiedades en condiciones controladas. La
proliferacin de bacterias es el resultado de una interaccin compleja de diferentes sustancias
alimenticias y principios activos dnde intervienen factores fsicos como: temperatura, pH, el
factor redox entre otras.
Al momento de tener una muestra en donde se desee identificar la presencia de E. coli hay definir
que medios de cultivo son selectivos para enterobacterias. Los medios selectivos son muy
utilizados cuando se trabaja con muestras que provienen de reas que poseen una flora
abundante.
Los medios selectivos incorporan sustancias inhibidoras de la propagacin de un grupo bacteriano
que no sea de inters pero en cambio permite el crecimiento de otros grupos.
Para microorganismos entricos, los medios usados de modo habitual contienen ciertos colorantes
e ingredientes que inhiben los organismos gram positivos y permite la propagacin de los bacilos
entricos Gram negativos.
E. coli- Agar EMB

Otra tipos de medio que es una gran herramienta a la hora de la identificacin de
microorganismos entricos como la E. coli son los medios diferenciales que poseen componentes
qumicos e indicadores que permiten identificar con cierta facilidad algunos gneros o especies
bacterianas por el aspecto caracterstico que toman sus colonias. Muchos medios selectivos son
tambin diferenciales por ejemplo podemos mencionar:
Agar Salmonella Shigella: Se utiliza para aislar bacterias lactosa negativa

como Salmonella y Shigella. Especies de la familia Enterobacteriaceae lactosa positivas,
como Escherichia coli, presentan colonias rosadas en este tipo de medio.
Agar Tergitol 7: Este medio permite diferenciar especies fermentadoras de la lactosa de

las especies no fermentadoras. En este medio Escherichia coli presenta colonias amarillas.
Agar MacConkey: Al igual que el anterior separa las bacterias fermentadoras de la

lactosa.Escherichia coli produce colonias rosadas.
Agar Eosina Azul de Metileno (EMB) de Levine: Permite la diferenciacin de especies

fermentadoras de la lactosa. Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli presentan colonias
que varan del prpura a verde metlico.
Pruebas Bioqumicas son la forma ms convincente del diagnstico de las enfermedades

infecciosas, mediante este proceso se determinan el gnero y las especies bacterianas de inters.
Cada tipo bacteriano tiene un cuadro de reacciones especficas donde se comprueba el resultado
de las reacciones y son la base de la identificacin de los diferentes agentes bacterianos. En
general para la identificacin de enterobacterias se sugiere realizar las siguientes pruebas:
Agar TSI: Es un medio de cultivo diferencial basado en la capacidad de los bacilos gram
negativos de fermentar carbohidratos, de producir H2S y producir gas.
Prueba de orto-nitrofenil--galactopiransido (ONPG): Esta prueba detecta la produccin

de la enzima -galactosidasa y permite diferenciar organismos de lenta utilizacin de la
lactosa de aquellos que no la utilizan. La enzima -galactosidasa es codificada por el gen
lacZ del opern lactosa, el cual es inducido en presencia de lactosa y ausencia de glucosa.
Por lo tanto, se requiere que las bacterias hayan sido crecidas en un medio con lactosa
como el Agar TSI o el Agar MacConkey.
esta prueba es negativa para cepas de E. coli.
Prueba de fenilalanina desaminasa: La determinacin de la enzima fenilalanina

desaminasa
es
til
para
diferenciar
inicialmente
a
las
especies
de: Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos gram negativos.
99% de positividad para cepas de E. coli.
Prueba de Voges Proskauer (VP): En esta prueba se detecta la produccin de acetilmetilcarbinol (acetona), el cual se convierte a diacetilo en presencia de KOH y O2
atmosfrico. El diacetilo es convertido posteriormente en un complejo rojo en presencia
de -naftol y creatinina. La produccin de acetona es una va alternativa del metabolismo
del cido pirvico, donde se producen cantidades pequeas de cidos mixtos que pueden
ser insuficientes para dar una prueba RM positiva. Por este motivo, la mayora de las
especies de la familia Enterobacteriaceae son VP positivo y RM negativo y viceversa.
E. coli es negativa para esta prueba
Prueba de rojo de metilo (RM): Identifica especies de bacterias que producen cidos a
partir de glucosa.
Prueba de gelatinasa: Determina la produccin de la enzima gelatinasa, la cual produce la

hidrlisis de la gelatina.
E. coli es positiva para esta prueba
Prueba de movilidad: Esta prueba determina la movilidad de los bacilos fermentadores.
Se observa en el tubo el pico y el fondo cido, hay 1% de positividad para la

produccin de H2S en cepas de E. coli.
Produccin de descarboxilasas y dehidrolasas de aminocidos: Muchas especies

bacterianas poseen enzimas que tienen la capacidad de descarboxilar o de hidrolizar
aminocidos especficos entre ellos la arginina, lisina, ornitina en pruebas especficas,

liberando animas de reaccin alcalina y CO2.
17% de positividad para Arginina.
90% de positividad para Lisina.
65% de positividad para Ornitina.
Prueba de Ureasa: Los microorganismos que hidrolizan la urea a travs de la enzima

ureasa, liberan amonaco lo cual produce un cambio de color rojo en el medio. El agar urea
de Christensen permite la deteccin de menores cantidades de amonaco para aquellos
microorganismos que producen menores cantidades de ureasa se evalan con este
mtodo.
Produccin de Indol: El indol es uno de los productos de la degradacin del aminocido

triptofano. Para su deteccin la bacteria es cultivada en caldo triptona y posteriormente
se utiliza el reactivo de Ehrlich, el cual es ms sensible que el reactivo de Kovacs cuando se
estudian bacilos no fermentadores o anaerobios cuya produccin de indol es mnima.
Prueba de reduccin de nitratos: Determina la capacidad de reducir el nitrato a nitrito o

gas. Es til en la identificacin de la familia Enterobacteriaceae y en la diferenciacin de
especies de muchos otros grupos de microorganismos.
Utilizacin de malonato: Esta prueba determina la capacidad de algunas bacterias de

utilizar el malonato como fuente de carbono y energa.
98% de positividad para esta prueba en E. coli.
Utilizacin de citrato: Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo de

utilizar el citrato de sodio como nica fuente de carbono para el metabolismo y
crecimiento.
1% de positividad para esta prueba en E. coli.
E. coli es negativa para esta prueba
Prueba de fermentacin de carbohidratos: Se recomienda el uso del caldo de base

prpura de bromocresol conteniendo un determinado sustrato a una concentracin del
1% para la determinacin de la fermentacin de carbohidratos y alcoholes para especies
de la familia Enterobacteriaceae.
D-Sorbitol 94% de positividad.
Lactosa 95% de positividad.
Sacarosa 50% de positividad.
D-Manitol 98% de positividad.
D-Adonitol 5% de positividad.
L-Arabinosa 99% de positividad.
Maltosa 96% de positividad.
Fuente:
Rojas N, Chaves E, Garca F (2006) Bacteriologa Diagnstica, Costa Rica, Universidad de Costa Rica,
Facultad de Microbiologa.
Garca R, Crdoba R, (1988) Manual Ilustrado para Laboratorio de Bacteriologa y Micologa
Veterinaria
Imgenes:
Cabronio
5.9,
Medios
de
Cultivo
y
Pruebas
Bioqumicas, http://es.scribd.com/doc/5203044/Medios-de-Cultivo-y-Pruebas-Bioquimicas

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Pruebas Microbiolgicas para E.

E. coli Salmonella Shigella Agar

E. coli- Agar EMB

Agar Salmonella Shigella: Se utiliza para aislar bacterias lactosa negativa

Agar Tergitol 7: Este medio permite diferenciar especies fermentadoras de la lactosa de

Agar MacConkey: Al igual que el anterior separa las bacterias fermentadoras de la

Agar Eosina Azul de Metileno (EMB) de Levine: Permite la diferenciacin de especies

Pruebas Bioqumicas son la forma ms convincente del diagnstico de las enfermedades

Prueba de orto-nitrofenil--galactopiransido (ONPG): Esta prueba detecta la produccin

esta prueba es negativa para cepas de E. coli.

Prueba de fenilalanina desaminasa: La determinacin de la enzima fenilalanina

99% de positividad para cepas de E. coli.

E. coli es negativa para esta prueba

95% de positividad para cepas de E. coli.

Prueba de gelatinasa: Determina la produccin de la enzima gelatinasa, la cual produce la

E. coli es positiva para esta prueba

Prueba de movilidad: Esta prueba determina la movilidad de los bacilos fermentadores.

Se observa en el tubo el pico y el fondo cido, hay 1% de positividad para la

0% de positividad para cepas de E. coli.

Produccin de descarboxilasas y dehidrolasas de aminocidos: Muchas especies

aminocidos especficos entre ellos la arginina, lisina, ornitina en pruebas especficas,

17% de positividad para Arginina.

90% de positividad para Lisina.

65% de positividad para Ornitina.

Prueba de Ureasa: Los microorganismos que hidrolizan la urea a travs de la enzima

Produccin de Indol: El indol es uno de los productos de la degradacin del aminocido

95% de positividad para cepas de E. coli.

Prueba de reduccin de nitratos: Determina la capacidad de reducir el nitrato a nitrito o

1% de positividad para cepas de E. coli.

Utilizacin de malonato: Esta prueba determina la capacidad de algunas bacterias de

98% de positividad para esta prueba en E. coli.

Utilizacin de citrato: Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo de

1% de positividad para esta prueba en E. coli.

E. coli es negativa para esta prueba

Prueba de fermentacin de carbohidratos: Se recomienda el uso del caldo de base

D-Sorbitol 94% de positividad.

Lactosa 95% de positividad.

Sacarosa 50% de positividad.

D-Manitol 98% de positividad.

L-Arabinosa 99% de positividad.

Maltosa 96% de positividad.

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