Laboratorio de Tcnicas Citolgicas

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE BIOANLISIS
REGIN VERACRUZ

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

CATEDRTICA:

Dra. Martha Elva Daz Viveros

Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas

Prctica No. 1 DESCRIPCION, MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO E ILUMINACIN DE KHLER * FUNDAMENTO:

El microscopio como su nombre lo indica, es un instrumento ptico que amplifica la imagen de un objeto pequeo, las imgenes microscpicas pueden aumentar de 100 a 2000 veces el tamao original. No obstante, la funcin ms importante del instrumento no es solo ver los objetos pequeos sino interpretar lo que se ve, debido a esto, el empleo del microscopio exige ms que en ningn otro caso, un gran conocimiento del instrumento y su adecuado manejo para lograr imgenes amplificadas con la menor cantidad posible de defectos pticos y el logro de contraste adecuado. El microscopio es el instrumento que ms se usa en los laboratorios que estudian imgenes pequeas. Actualmente existen dos tipos de microscopios: el ptico y el electrnico. En el microscopio ptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El microscopio electrnico utiliza un rayo de electrones controlado por un campo magntico. A nivel del laboratorio, en donde el Qumico Clnico desempea su principal funcin, el microscopio es un instrumento fundamental de trabajo, por lo anterior, se considera necesario que en la formacin del Qumico Clnico se ponga principal inters en su enseanza. El microscopio compuesto es un instrumento ptico que se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas: a. El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque. b. El sistema ptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas c. El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio. La parte mecnica del Microscopio

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La parte mecnica del microscopio comprende: el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el carro, el tornillo macromtrico y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin, adems permite los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto. El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular El tubo. Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares. El revlver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, la cual se nota por el ruido de un pin que lo fija. La columna, llamada tambin asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie. La platina. Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto que se va a observar. Presenta un orificio en el eje ptico del tubo que permite el paso de los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares. Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a izquierda. El tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin. El tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos. Sistema ptico El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Los oculares. Los oculares estn constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un tubo corto. Los oculares generalmente ms utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos.

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Los objetivos. Los objetivos producen aumento de las imgenes de los objetos y organismos y, por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersin. Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos. As por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su abertura numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X. El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 1 OOX y se distingue por uno o dos crculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior. Los objetivos se disponen en una pieza giratoria denominada revlver. Sistema de Iluminacin Dirige la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio. Comprende los siguientes elementos: El espejo. Tiene dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para iluminacin natural (luz solar). Modernamente se prescinde del espejo en la fabricacin de microscopios, ya que stos traen incorporada una lmpara colocada en el eje del microscopio. Condensador. El condensador est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin. El condensador se halla debajo de la platina. Puede deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo que determina su movimiento ascendente o descendente. Diafragma. Generalmente, el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a travs del condensador. Trayectoria del Rayo de Luz a travs del Microscopio El haz luminoso procedente de la lmpara pasa directamente a travs del diafragma al condensador. Gracias al sistema de lentes que posee

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el condensador, la luz es concentrada sobre la preparacin a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo hasta llegar el ocular, donde es captado por el ojo del observador
* MATERIAL: Microscopio Compuesto de campo claro. * METODOLOGA: El microscopio es un instrumento ptico de precisin que proporciona la amplificacin de las imgenes de los objetos, lo que hace posible, ver con detalles y claridad sus estructuras pequeas o invisibles a la vista humana, facilitando de esta manera su estudio. Esta integrado por tres sistemas; ptico, mecnico y de iluminacin, a su vez cada sistema esta constituido por varios componentes y cada uno tiene funciones especificas, las que son necesarias conocer para su buen funcionamiento.

1. 2. 3. 4.

Identifique las partes del sistema mecnico del microscopio. Identifique las partes del sistema ptico del microscopio. Identifique las partes del sistema de iluminacin del microscopio. Describa las principales caractersticas de cada uno de los componentes que integran el sistema mecnico, ptico y de iluminacin del microscopio. 5. Describa la funcin que tienen cada una de las partes que integran los sistemas antes mencionados.
1. Colocar el microscopio en una mesa que permita una cmoda observacin a travs del ocular. 2. Limpiar el sistema ptico y el de iluminacin. 3. Subir el condensador hasta el tope y cerrar el diafragma iris aproximadamente a la mitad.

4. Seleccionar con el revolver el objetivo de menor aumento (10 X).

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Bajar la platina y colocar la preparacin (fijarse que quede firmemente sujeta al carro, y que el cubre objetos y el objeto estn situados hacia arriba) acomodando la porcin de la preparacin que se va examinar en la apertura central de la platina

5.

Mirando por los extremos subir la platina hasta el tope, si no hay tope acercar la platina lo ms cerca posible a la lente objetiva, hasta apoyarlo levemente sobre la preparacin. Normalmente los microscopios convencionales poseen un tope que impide su ascenso por arriba de cierta marca. Sin embargo, puede darse el caso que tal tope no exista. (este tope solo existe en la lente objetiva de 10X) Mirando por los oculares bajar la platina con el tornillo macromtrico hasta que empiecen a distinguirse los detalles de la preparacin.

6.

7. Afinar los detalles de la imagen moviendo el tornillo micromtrico. 8. Ajustar la distancia interpupilar ( distancia entre los ojos).

9.

Ajustar dioptras (agudeza visual) en el porta ocular izquierdo, o bien con el ocular enfocable izquierdo

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas Una vez conseguido el enfoque correcto, recorra todo la preparacin, a fin de ir reconociendo imgenes que le sean familiares. recordar que el objetivo de 10X permite ver la visin panormica del preparado. Es decir, los tejidos, su ubicacin, y sus relaciones (funcin importante al inicio del estudio que ahorrar tiempo dedicado al anlisis de la muestra). 11 Cambiar a un objetivo de ms aumento (sin bajar la platina con el tornillo macromtrico) y enfocar nicamente con el tornillo micromtrico. 12 Para usar el objetivo de 100X, aleje la lente de la muestra, deposite una gota de aceite de inmersin en el portaobjetos (sin quitar la laminilla de la platina) en el punto de mayor concentracin luminosa, acerque la lente de 100 lentamente hasta que esta se encuentre en contacto con el aceite (observar lateralmente ste movimiento). Observe por el ocular y mueva ligeramente el tornillo micromtrico hasta encontrar la imagen. 13 Recordar que los objetivos de 40X y 100X, permiten ver detalles de una clula, o la conformacin celular de una estructura. Se puede observar la forma y tamao de clulas o grupo de ellas, aspecto que permite analizar la muestra de manera eficiente.
10 14 Al finalizar su observacin, apague la fuente de luz, colocar la lente de menor aumento. Aleje la platina del objetivo. Retire la laminilla y limpie las lentes objetivas y la platina.

MICROSCOPIO COMPUESTO

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* OBSERVACIONES Y RESULTADOS: El microscopio, es uno de los instrumentos de uso ms frecuente en los laboratorios clnicos, muchos de los errores diagnsticos no tienen su base en el preparado, sino en la errnea manipulacin del instrumento. El uso adecuado de los recursos pticos del microscopio permitir reconocer detalles y variaciones tintoriales, que ayudarn al correcto diagnstico, es por eso importante, que para su manejo, se cuente con tcnicas adecuadas que permitan obtener imgenes claras en el menor tiempo posible y que adems, mantengan al instrumento en buenas condiciones. El microscopio es un instrumento ptico de precisin, mediante un sistema de lentes y fuentes de iluminacin puede hacer visible un objeto microscpico y proporciona la amplificacin de las imgenes de los objetos, lo que hace posible, ver con detalles y claridad sus estructuras pequeas o invisibles a la vista humana, facilitando de esta manera su estudio. Las lentes de un microscopio ptico se encuentran en el condensador, el objetivo y el ocular. El condensador se utiliza para enfocar la luz sobre la preparacin. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una posicin que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite al ocular, donde se realiza el aumento final. En los microscopios modernos el tubo ptico tiene una medida estndar y produce aumentos de 1x, no obstante este aumento varia de acuerdo a su medida. Por lo tanto, el aumento total de un microscopio compuesto se debe calcular tomando en cuenta el producto del aumento de su objetivo, tubo ptico y de su ocular.

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Prctica No. 2 TOMA DE ESTUDIO CITLOGICO CRVICO-VAGINAL PARA DOC * FUNDAMENTO: El cncer crvico-uterino es la neoplasia maligna ms frecuente en Mxico. El estudio citolgico crvico-vaginal anual es la forma ms adecuada, sencilla y de bajo costo para detectar este tipo de cncer. Para un diagnstico correcto es fundamental abarcar la zona escamocolumnar. El estudio al microscopio de las clulas exfoliadas del aparato genital femenino es un complemento diagnstico de primordial importancia en ginecologa y obstetricia. La principal utilidad de la citologa exfoliativa ginecolgica es la deteccin precoz de lesiones precursoras del carcinoma de cuello uterino. Mediante la organizacin de programas de deteccin masiva en mujeres asintomticas, con el procedimiento de Papanicolaou y el tratamiento y control adecuado de los casos diagnosticados, se ha logrado, en algunos pases del mundo, reducir la incidencia y, la mortalidad por cncer invasor del cuello uterino. La citologa exfoliativa tambin puede tener utilidad en el diagnstico de tumores de la vagina, endometrio y ovario. La citologa hormonal puede ser empleada para evaluar ciertos aspectos de la condicin hormonal en la mujer. El estudio de la citologa exfoliativa del aparato genital de la mujer fue especialmente desarrollado por George Papanicolaou, quien, adems de describir las caractersticas morfolgicas de las clulas exfoliadas, desarroll una tcnica de fijacin y tincin de los extendidos que se mantiene hasta hoy y que permite un adecuado estudio citolgico. En su honor se denomina, prcticamente en todo el mundo, examen de Papanicolaou (PAP) al estudio de la citologa exfoliativa diagnstica del aparato genital femenino, especialmente a la proveniente del cuello uterino. En la actualidad ya est demostrado que el Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas uso del PAP no slo es til en la deteccin del cncer en la citologa ginecolgica sino en otros tipos de patologas. El Dr. George Papanicolaou en 1941 propuso por primera vez la evaluacin citolgica de clulas obtenidas del cervix y vagina como mtodo para detectar cncer cervical y sus precursores. Posteriormente la citologa cervical ha sido aprobada como el mtodo ms eficaz y efectivo para la deteccin del cncer y sus precursores. A pesar de la probada efectividad de los frotis de PAP en la reduccin de la incidencia del cncer cervical, muchos se han preocupado de la precisin de esta prueba diagnstica, la cual depende de su especificidad y sensibilidad para detectar. La citologa es extremadamente especfica para detectar cncer cervical y NIC de alto grado, pero es mucho menos especfica para diagnosticar NIC de bajo grado. En contraste a su alta especificidad para detectar alto grado de NIC y cncer invasor el PAP no es muy sensitivo, pues los resultados falsos negativos ocurren entre el 8 y 50%. Cuando los frotis de PAP fueron introducidos por Papanicolaou las muestras eran tomadas solo del fondo de saco vaginal y prontamente pareci que este mtodo era inadecuado resultando una proporcin alta de falsos negativos, Ayre en 1947 report el uso de esptula de madera para raspar la superficie del cervix para obtener las clulas del rea en que se inician y desarrollan las NIC y cnceres muy conocida como la Zona de Transformacin, la muestra puede ser tornada con un aspirador endocervical, un hisopo de algodn humedecido con solucin salina o con escobilla endocervical (citobrush). Con esta ltima se obtiene 10 veces ms clulas endocervicales que con el hisopo de algodn, mejorando la eficacia del PAP. Estudios que usan una combinacin de esptula de madera y escobilla endocervical reportan alrededor de 20% de falsos negativos. Otros factores importantes para reducir la proporcin de falsos negativos son la fijacin rpida de clulas para prevenir cambios secundarios artificiales debidos a la sequedad por aire y tambin el uso de un laboratorio citolgico con normas rigurosas de control de calidad. Es necesario cumplir simples lineamientos. La paciente debe ser instruida a no usar ducha o lavado vaginal y no tener coito por 24 horas antes de la obtencin de la muestra. El PAP no debe ser obtenido durante la regla o menos de una semana despus de cesar antibiticos intravaginales o agentes antimicticos. Debe ser tomado antes del examen bimanual usando una pequea cantidad o no de lubricante. cido actico no debe ser aplicado al cervix antes de tomar el frotis. Una esptula de madera tipo Ayre deber ser usada y rotada alrededor del cervix dos veces con presin firme, Una escobilla endocervical, inmediatamente colocada en el orificio externo, rotada 180 solamente y retirada. Las clulas obtenidas con ambos mtodos son colocadas en la misma lmina. La muestra es inmediatamente fijada y etiquetada con el nombre de la paciente.

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas * MATERIAL: Mesa de exploraciones. Espejo vaginal estril y sin lubricantes. Guantes estriles. Citobrush, esptula de Ayre o hisopo sin algodn. Citospray o alcohol de 96. Laminillas portaobjetos. Lpiz diamante.

* METODOLOGA: Con la paciente en posicin ginecolgica, se introduce el espejo vaginal cerrado verticalmente caba adentro y ligeramente hacia abajo, rotndolo hasta quedar dentro y horizontal. Se abre el espejo, se observa el cerviz y se procede a la toma del estudio mediante el citobrush o esptula de Ayre, introduciendo la parte convexa dentro del orificio cervical y rotndola 360. Se coloca la muestra sobre el portaobjetos previamente identificado con los datos de la paciente ponindola a continuacin de la muestra o la toma exocervical. Se fija con el citospray rocindola a 30 cm de distancia. * OBSERVACIONES: Se debe tratar de localizar el cerviz siempre, con el mnimo de molestias para la paciente. En caso de no contar con material adecuado, puede usarse el abatelenguas junto con el hisopo sin algodn. En caso de carecer del citospray puede sustituirse por alcohol de 96. Se debe procurar que no pasen ms de 10 segundos entre la toma y la fijacin. * RESULTADOS: Se obtendrn as las laminillas con material celular adecuado y fijado, listas para ser teidas y observadas al microscopio. * ESQUEMAS

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Frotis de Papanicolaou

El examen de Papanicolaou es un procedimiento simple y relativamente econmico que puede detectar con facilidad condiciones cancerosas o precancerosas.

Prctica No. 4 OBSERVACIN DE CLULAS CERVICOVAGINALES NORMALES * FUNDAMENTO: La muestra citolgica habitual se obtiene del cuello uterino de la unin escamocolumnar y del fondo de saco posterior de la vagina para diagnstico oncolgico y de pared lateral de la vagina para diagnstico hormonal. Con este procedimiento se obtienen fundamentalmente clulas exfoliadas del epitelio pavimentoso cervicovaginal y del epitelio cilndrico endocervical, en ocasiones tambin se encuentran clulas endometriales y, excepcionalmente, clulas del epitelio de la trompa y del ovario, Adems pueden encontrarse eritrocitos, clulas inflamatorias, microorganismos y elementos de contaminacin. Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

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El Frotis Citolgico se tie generalmente con el mtodo de Papanicolaou. Este mtodo emplea hematoxilina para teir el ncleo de color azul oscuro o violeta oscuro y un conjunto de substancias que colorea el citoplasma en forma diferente segn la maduracin celular. El citoplasma de las clulas inmaduras y en general de las metablicamente activas, se tie de color azul plido o azul verdoso porque capta el light green, que es un colorante bsico, estas clulas se denominan basfilas o cianfilas. Las clulas con citoplasma acidfilo toman el color rosado de la eosina y se denominan eosinfilas. Tambin es eosinfilo el nucleolo. Las clulas que contienen grnulos de queratina tienen avidez por el colorante Orange G, que tie el citoplasma de color anaranjado o amarillo. Aqu se describen los rasgos morfolgicos esenciales de los componentes del extendido cervicovaginal, como se observan con la tincin de Papanicolaou. Clulas exfoliadas del epitelio pavimentoso estratificado.- El epitelio que reviste la vagina y porcin vaginal del cuello uterino de la mujer sexualmente madura es un epitelio pavimentoso estratificado, llamado tambin epitelio escamoso. Mide aproximadamente 0,2 mm de espesor y est formado por estratos histolgicamente bien diferenciables: El estrato basal est formado por una sola capa de clulas de tipo cilndrico dispuestas en empalizada sobre la membrana basal. Las clulas germinativas (aquellas cuya funcin es producir clulas de la especie) son redondas u ovaladas, con ncleo grande, ovalado y central, que ocupa gran parte de la clula. El proceso de regeneracin del epitelio se efecta a partir de esta capa celular, el resto de los estratos representan etapas del proceso de maduracin y diferenciacin celular para, finalmente, descamarse en la superficie. El estrato parabasal est compuesto de varias capas de clulas redondeadas o polidricas, de ncleo central, citoplasma grueso, con puentes intercelulares (estrato espinoso profundo). El estrato intermedio tambin presenta puentes intercelulares (estrato espinoso superficial) y est formado, por numerosas capas de clulas aplanadas, con citoplasma rico en glucgeno, ncleos relativamente pequeos, centrales y vesiculosos. El estrato superficial consta de varias capas de clulas aplanadas grandes, de forma poligonal, de citoplasma delgado y claro, sin puentes intercelulares y con ncleo picntico central. El epitelio escamoso tiene la capacidad de exfoliar diversos tipos celulares segn el grado de maduracin alcanzado. Habitualmente las clulas que se exfolian provienen de los estratos superiores, a menos que existan lceras o que la muestra se tome con excesiva energa. Los tipos celulares del epitelio escamoso que se reconocen en el extendido citolgico son los siguientes: Clulas superficiales:

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas Las clulas exfoliadas del estrato superficial miden 40 a 60 micrones de dimetro. Son aplanadas, delgadas, de contorno generalmente poligonal. La mayora de ellas tienen citoplasma eosinfilo, pero puede ser cianfilo. El ncleo es central, circular y pequeo, mide menos de 6 micrones de dimetro. Es picntico, denso, homogneo y no se reconoce en l estructura cromatnica. Clulas intermedias: Las clulas exfoliadas del estrato intermedio son del mismo tamao o ligeramente menores que las superficiales. Tienen forma redondeada o poligonal, algunas con el borde plegado, el citoplasma es algo ms grueso que el de las clulas superficiales, generalmente basfilo, pudiendo ser eosinfilo. El ncleo es central, redondo y mide alrededor de 8 micrones; la cromatina nuclear tiene disposicin reticular. Existen algunas variedades de clulas intermedias. Las clulas intermedias superficiales son ms grandes y poligonales que las clulas intermedias profundas, que tienen un contorno ms ovalado. Las clulas naviculares presentan dos extremos aguzados que le confieren la forma de un bote; por su contenido de glucgeno, su citoplasma puede aparecer vaco y el ncleo desplazado hacia un borde. Clulas parabasales: En el frotis normal de una mujer en edad frtil no constituyen ms del 5% de las clulas exfoliadas del epitelio pavimentoso. Miden 15 a 25 micrones, son generalmente redondeadas, con citoplasma grueso cianfilo. El ncleo es central, redondo o elptico, con un dimetro mayor que el de las clulas intermedias; la cromatina se dispone en forma de finos grnulos. Las clulas bsales prcticamente no aparecen en los frotis. Clulas exfoliadas del epitelio endocervical: La mucosa endocervical est revestida por epitelio cilndrico simple muco secretor. Estas clulas cilndricas pueden descamarse aisladamente o en grupos. Las clulas aisladas observadas de perfil, presentan el ncleo cerca de uno de los extremos que corresponde al polo basal. En este extremo se reduce el dimetro de la clula a manera de un tallo. El ncleo es redondo u ovalado, con la cromatina granular fina y dispersa. Cuando las clulas endocervicales descamadas en grupos se observan desde el polo superior, presentan un aspecto semejante a un panal de abejas, porque muestran su borde citoplasmtico ntido, de forma hexagonal; cuando se observan lateralmente presentan un caracterstico aspecto en "empalizada". Clulas exfoliadas del endometrio: Aproximadamente el 2% de los frotis obtenidos por aspirado endocervical contienen clulas endometriales. Las clulas endometriales recogidas habitualmente en el frotis cervicovaginal suelen presentar signos de degeneracin. Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

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Otros tipos de clulas: Rara vez aparecen en el frotis clulas epiteliales cilndricas exfoliadas del epitelio tubrico; cuando ello ocurre, pueden ser confundidas con clulas endocervicales. Tambin es excepcional observar clulas de la decidua o del trofoblasto (postaborto, placenta previa). Los histiocitos o macrfagos generalmente se encuentran aislados. Miden entre 10 y 25 micrones de dimetro, segn el estado funcional. Son redondeados u ovalados, el citoplasma es semitransparente, finamente vacuolado o con grandes vacuolas restos de clulas fagocitadas. El ncleo es oval o reniforme con la cromatina fina y granular, el nuclolo es pequeo. Los histiocitos se presentan comnmente alrededor del perodo menstrual, en el embarazo, en el post parto y en los procesos inflamatorios del endometrio. En algunos procesos inflamatorios y en la menopausia se pueden observar histiocitos gigantes multinucleados. Los leucocitos polimorfonucleares pueden encontrarse en el frotis normal. Miden alrededor de 10 micrones, tienen citoplasma poco definido y a menudo transparente. En los procesos inflama torios pueden llegar a ser tan abundantes que impiden ver las clulas epiteliales. Los linfocitos y plasmocitos se observan en las inflamaciones crnicas cervicovaginales. Es frecuente observar eritrocitos, son considerados como componentes anormales. * MATERIAL: * Microscopio * Aceite de inmersin * Laminillas fijadas y teidas por la tcnica de Papanicolaou. * METODOLOGA: Una vez fijada y teidas (tincin modificada de Papanicolaou) nuestras muestras de estudio citolgico crvico-vaginal, se procede a la observacin de las mismas, para lo cual se requiere de un microscopio ptico., el cual deber estar limpio y con la iluminacin regulada, posteriormente se coloca la laminilla en la platina y se enfoca la muestra con el objetivo de 10 X , despus, se procede a la observacin con el objetivo seco fuerte (40 X), la cual debe realizares de manera sistemtica y precisa para dar un resultado preciso. * OBSERVACIONES:

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Clulas superficiales

RESULTADOS: Se observ la morfologa cervicovaginal normal, lo cual es muy importante para poder diferenciar entre las clulas normales y las clulas malignas. El conocimiento detallado de la morfologa celular normal nos ayuda para que un momento dado podamos establecer la diferencia entre una clula normal y una clula maligna, de acuerdo a las caractersticas morfolgicas de las clulas. Prctica No. 6 OBSERVACIN DE DISPLASIAS: LEVE, MODERADA Y GRAVE * FUNDAMENTO: La displasia se puede definir como la presencia de alteraciones nucleares, cambios en la relacin ncleo/citoplasma y de las caractersticas citoplasmticas de una clula cualquiera. La intensidad de la displasia puede ser leve, moderada o avanzada. En la displasia del epitelio escamoso las clulas se exfolian generalmente aisladas; las que se descaman en grupos, presentan lmites netos. A mayor diferenciacin de la lesin, los lmites celulares de los grupos exfoliados son menos distinguibles. La forma y tamao de las clulas depende del grado de maduracin que alcanza el epitelio. En 1973 fue propuesto el trmino de Neoplasia Intraepitelial Cervical (NIC) para incluir todas las formas de lesiones precursoras de cncer cervical, incluyendo displasia y carcinoma in situ; el NIC se divide en tres grupos: NIC 1 corresponde a displasia leve; NIC 2 corresponde a displasia moderada. Dado que los patlogos no pueden distinguir la reproducibilidad entre displasia severa y carcinoma in situ, NIC 3 abarca ambas lesiones. Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas En diciembre de 1988, el Instituto Nacional de Cncer (NCI) propuso un nuevo sistema de nomenclatura, el Sistema Bethesda (TBS), en donde las displasias leves (NIC 1) estn dentro del grupo de Lesiones Escamosas Intraepiteliales de Bajo Grado, y las displasias moderada, severa (NIC 1, NIC 2) y cncer in situ se encuentran en las Lesiones Escamosas Intraepiteliales de Alto Grado. Displasia Leve, Neoplasia Intraepitelial Cervical 1 (NIC I), Lesin Escamosa Intraepitelial de Bajo Grado (LIE BG). Las clulas exfoliadas de una displasia leve corresponden a clulas poligonales de tipo intermedio o superficial, con ncleo levemente aumentado de tamao y discreto aumento de la relacin ncleo/citoplasma. Generalmente el ncleo ocupa menos de 1/3 del rea celular. Existe leve variacin del tamao y forma de los ncleos, algunos de los cuales pierden su contorno perfectamente redondo u ovalado al ser observados al microscopio de luz. El ncleo es hipercromtico, con la cromatina dispuesta en forma reticular o finamente granular. Displasia Moderada, Neoplasia Intraepitelial Cervical 2 (NIC II), Lesin Escamosa Intraepitelial de Alto Grado (LIE AG). En el extendido obtenido de una displasia moderada las clulas corresponden en general a clulas intermedias profundas, con mayor variacin en la forma celular. Algunas clulas son poligonales u ovaladas; otras presentan caractersticas citoplasmticas de metaplasia inmadura. Tambin se pueden encontrar clulas fusadas y de formas bizarras. La variacin en la forma y tamao de los ncleos y la alteracin de la relacin ncleo/citoplasma es mayor que en la displasia leve. Existe mayor hipercromatismo, pero la cromatina an se dispone en grnulos finos uniformes. Nuclolos ausentes. En la actualidad los cambios citopticos producidos por la infeccin por VPH son considerados dentro de este grupo. Displasia Severa, Neoplasia Intraepitelial Cervical 3 (NIC III), Lesin Escamosa Intraepitelial de Alto Grado (LIE AG). Las alteraciones descritas son ms marcadas en la displasia avanzada, en la que se observan numerosas clulas de tipo parabasal, siendo posible reconocer clulas poligonales y aun, en ocasiones, clulas aplanadas queratinizadas de citoplasma anaranjado, signo de que persiste tendencia a la diferenciacin del epitelio. La relacin ncleo/citoplasma es mayor a 2/3. Puede haber nuclolos eosinoflicos, aunque generalmente estn oscurecidos por la cromatina densa. La buena salud tambin puede prevenir o disminuir la displasia. Un sistema inmunolgico sano puede ayudar a prevenir la displasia. Las mujeres con la infeccin del VIH tienen ms probabilidades de desarrollar displasia. La displasia es ms comn en mujeres que: * Fuman * Presentan infecciones por VPH. * Tienen ms de un(a) compaero(a) sexual

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas * Tienen relaciones sexuales por primera vez a una edad muy temprana * Tienen deficiencias de vitaminas y mala nutricin * MATERIAL: * Microscopio * Aceite de inmersin * Laminillas fijadas y teidas por la tcnica de Papanicolaou. * METODOLOGA: Una vez fijada y teidas (tincin modificada de Papanicolaou) nuestras muestras de estudio citolgico crvico-vaginal, se procede a la observacin de las mismas, para lo cual se requiere de un microscopio ptico., el cual deber estar limpio y con la iluminacin regulada, posteriormente se coloca la laminilla en la platina y se enfoca la muestra con el objetivo de 10 X , despus, se procede a la observacin con el objetivo seco fuerte (40 X), la cual debe realizares de manera sistemtica y precisa para dar un resultado preciso. * OBSERVACIONES: Displasia leve Displasia grave Displasia moderada

RESULTADOS: Despus de haber hecho una revisin y observacin detallada de las muestras, se obtuvieron los siguientes resultados: Displasia leve: Flora bacteriana cocoide (+ +). Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas Reaccin inflamatoria (+ +). Eritrocitos (+ +). Clulas del epitelio crvico-vaginal con alteraciones de Displasia Leve, asociada a infeccin por VPH y Gardnerella vaginalis. Papanicolaou Negativo Clase III. NIC I. LIE Bajo grado. Displasia moderada: Flora bacteriana cocoide (+ +). Reaccin inflamatoria (+ + +). Lectura hormonal no fue posible. Clulas del epitelio crvico-vaginal con alteraciones de displasia moderada. Papanicolaou Negativo Clase III. NIC II. Displasia grave + VPH: Flora bacteriana bacilar (+ +). Reaccin inflamatoria (+). Lectura hormonal no fue posible. Clulas del epitelio crvico-vaginal con alteraciones de discariosis, pleomorfismo y coilocitosis que integran el diagnstico de Displasia Grave, asociada a infeccin por VPH. Papanicolaou Negativo Clase III. NIC III. LIE Alto grado.

Practica No. 7 OBSERVACIN DE CNCER IN SITU Y CNCER INVASOR * FUNDAMENTO:

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas Existen alteraciones morfolgicas, que en conjunto caracterizan a las clulas tumorales malignas. Estas alteraciones se conocen como criterios de malignidad (Frost, 1979). Sin embargo, es indispensable precisar que no existe un signo morfolgico patognomnico de cncer. Por otra parte, no siempre todos los signos de malignidad se encuentran en cada clula cancerosa. Por estos hechos la citologa, como mtodo de colaboracin diagnstica, requiere de gran experiencia y ponderacin. Los criterios de malignidad se clasifican en: alteraciones de la clula, alteraciones del ncleo y alteraciones de la relacin entre las clulas. *Alteraciones de la clula: Las clulas cancerosas exfoliadas presentan variaciones en el tamao (anisocitosis) y en la forma (polimorfismo), la que en ocasiones puede ser muy anormal, como en las clulas en forma de fibra o de raqueta. El citoplasma puede ser cianfilo (signo de menor diferenciacin), pudiendo presentar caractersticas de diferenciacin anmala (queratinizacin intensa o gran acumulacin de mucus en una gran vacuola que desplaza al ncleo hacia la periferia). Pueden presentar numerosas mitosis; siendo el hallazgo ms importante, pero poco frecuente, las mitosis atpicas. *Alteraciones del ncleo Son las de mayor valor en la estimacin de malignidad. Los ncleos presentan variaciones de tamao (anisocariosis); generalmente son mayores que los de las clulas normales. El aumento del ncleo es proporcionalmente mayor que el de la clula, por lo que la relacin ncleo/citoplasma est aumentada. En algunas clulas tumorales el citoplasma es reducido a una delgada banda alrededor del ncleo, que slo se ve con los mayores aumentos del microscopio. Se observan tambin alteraciones en la forma del ncleo (polimorfismo): el borde nuclear puede tener angulaciones y pliegues y la membrana nuclear presentar grosor irregular. La densidad de la cromatina puede estar aumentada (hipercromatismo), ya sea en forma difusa o en gruesos grumos que alternan con espacios pticamente vacos Los nuclolos pueden estar aumentados en nmero y tamao; a menudo de contorno irregular y angulado. Puede haber multinucleacin, *Alteracin de la relacin entre las clulas La cohesin entre las clulas es menor en los tumores malignos, por eso en general se exfolian abundantes clulas y una gran proporcin de ellas se desprenden aisladas o en grupos pequeos. A diferencia de los conjuntos de clulas normales, que se desprenden, estos grupos son irregulares, por lo cual, el extendido se observa superposicin de ncleos y pueden no observarse los bordes celulares. En algunos frotis obtenidos de tumores malignos, las clulas forman estructuras que normalmente no existen en el rgano de origen; por ejemplo, clulas endometriales dispuestas en forma de papilas. Cncer se define como crecimiento desordenado de un tejido. El cncer cervicouterino, es una enfermedad en la cual se encuentra clulas Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas cancerosas (malignas) en los tejidos del cuello uterino. El cuello uterino es la abertura del tero, el rgano hueco en forma de pera donde se desarrolla el feto, y lo conecta con la vagina (canal de nacimiento). El cncer cervicouterino suele crecer lentamente por un perodo de tiempo. Antes de que se encuentre clulas cancerosas en el cuello uterino, sus tejidos experimentan cambios y empiezan a aparecer clulas anormales (proceso conocido como displasia). La prueba de Papanicolaou generalmente encuentra estas clulas. Posteriormente, las clulas cancerosas comienzan a crecer y se diseminan con mayor profundidad en el cuello uterino y en las reas circundantes. Ya que en general no hay sntomas asociados con el cncer cervicouterino, el mdico debe hacer una serie de pruebas para buscar el cncer. La primera prueba es la de Papanicolaou, que se lleva a cabo usando un pedazo de algodn, un cepillo o una esptula de madera pequea para raspar suavemente el exterior del cuello uterino con el fin de recoger clulas. Si se encuentra clulas anormales, el mdico tendr que extraer una muestra de tejido (este procedimiento se conoce con el nombre de biopsia) del cuello uterino y lo observar a travs del microscopio para ver si hay clulas cancerosas. El pronstico (posibilidades de recuperacin) y la seleccin del tratamiento dependen de la etapa en que se encuentra el cncer (si se encuentra en el cuello uterino o si se ha diseminado a otros lugares) y el estado de salud en general de la paciente. * MATERIAL: * Microscopio * Aceite de inmersin * Laminillas fijadas y teidas por la tcnica de Papanicolaou. * METODOLOGA: Una vez fijada y teidas (tincin modificada de Papanicolaou) nuestras muestras de estudio citolgico crvico-vaginal, se procede a la observacin de las mismas, para lo cual se requiere de un microscopio ptico., el cual deber estar limpio y con la iluminacin regulada, posteriormente se coloca la laminilla en la platina y se enfoca la muestra con el objetivo de 10 X , despus, se procede a la observacin con el objetivo seco fuerte (40 X), la cual debe realizares de manera sistemtica y precisa para dar un resultado preciso. * OBSERVACIONES:

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* RESULTADOS: Despus de haber hecho una revisin y observacin detallada de las muestras, se obtuvieron los siguientes resultados Cncer In situ: Flora bacteriana cocoide (+ +). Reaccin inflamatoria (+ + +). Clulas del epitelio crvico-vaginal con alteraciones de hipercromasia, prdida de la relacin ncleo-citoplasma, que integran el diagnstico de Cncer Epidermoide In situ asociado a infeccin por VPH. Papanicolaou Positivo Clase IV. LIE Alto grado. NIC III. Cncer Invasor de clulas pequeas: Flora bacteriana cocoide (+). Reaccin inflamatoria (+ +). Eritrocitos (+ +). Lectura hormonal no posible. Clulas del epitelio crvico-vaginal con alteraciones de Cncer epidermoide invasor de clulas pequeas. Papanicolaou Positivo Clase V. OBSERVACIONES: Se recomienda toma de biopsia por colposcopa para iniciar tratamiento. Cncer invasor: Flora bacteriana mixta (+ +). Reaccin inflamatoria (+ +). Clulas del epitelio crvico-vaginal con alteraciones de hipercromasia, pleomorfismo, prdida de la relacin ncleo-citoplasma, clulas fibroideas y clulas en raqueta, que integran el diagnstico de Cncer Epidermoide invasor. Papanicolaou Positivo Clase V.

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Prctica No. 5 AGENTES BIOLGICOS VIRUS, BACTERIAS, HONGOS Y PARSITOS * FUNDAMENTO: Mediante el examen citolgico podemos diagnosticar enfermedades infecciosas como las ocasionadas por: virus, bacterias, hongos y parsitos. VIRUS: La identificacin de estas infecciones tiene implicaciones de tipo venreo, perinatal y neoplsico. Ejemplos: Herpes, condiloma, varicela, citomegalovirus. Virus de Papiloma Humano (VPH): Los papilomavirus son virus DNA y de los 41 tipos identificados, el 16, 18, 45, 56, se relacionan con el cncer cervicouterino. El 6 y el 11 se encontraron en el condiloma acuminado y neoplasia leve, mientras que el 16 y el 18 se relacionan con lesiones premalignas de alto grado de cncer invasor. Patrn clnico en la infeccin por VPH: * Coliocitosis * Macronucleosis * Binucleacin * Anfofilia * Distribucin irregular de la cromatina. Herpes.- Es un virus de DNA transmitido habitualmente por relacin sexual. Periodicidad de 1 a 3 meses, relaciones prolongadas despus de 7 aos. Presenta imagen citolgica en Vidrio esmerilado, ncleo con aumento de tamao y multinucleacin; apariencia en bolsa de canicas. Entre las bacterias que ms frecuentemente causan infecciones del tracto genital femenino, se encuentran: Chlamydia trachomatis.- Interviene de manera importante en la etiologa de cervicitis mucopurulenta, en la enfermedad plvica inflamatoria aguda y LGV.
BACTERIAS:

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas Vacuolizacin en clulas basales (grandes burbujas en el citoplasma). No se puede establecer un diagnstico certero mediante la tcnica de Papanicolaou. Gardnerella vaginalis.- Puede aparecer en forma de cocos o bacilos; presencia de clulas indicio (clue). Cuadro clnico vulvovaginitis. Lepthrotrix actinomyces.- Grandes bacilos que se entrelazan y dan una apariencia de madejas de cabellos. Candida albicans.- Ms frecuente en mujeres embarazadas, diabticas, que toman anticonceptivos orales. En el frotis se observan como hifas o esporas, que se tien en color pardo rojizo y se ven refringentes al microscopio. Entre los protozoarios que infectan al aparato reproductor femenino se encuentran las Tricomonas y las amebas. Trichomonas vaginalis.- tiene forma oval o de pera; la imagen citologica es de color gris o verde con ncleo oval o redondo excntrico.
PARSITOS:

* MATERIAL: * Microscopio * Aceite de inmersin * Laminillas fijadas y teidas por la tcnica de Papanicolaou. * METODOLOGA: Una vez fijada y teidas (tincin modificada de Papanicolaou) nuestras muestras de estudio citolgico crvico-vaginal, se procede a la observacin de las mismas, para lo cual se requiere de un microscopio ptico., el cual deber estar limpio y con la iluminacin regulada, posteriormente se coloca la laminilla en la platina y se enfoca la muestra con el objetivo de 10 X , despus, se procede a la observacin con el objetivo seco fuerte (40 X), la cual debe realizares de manera sistemtica y precisa para dar un resultado preciso. * OBSERVACIONES:
VPH HERPES

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CHLAMYDIA TRACHOMATIS

GARDNERELLA VAGINALIS

CANDIDA ALBICANS

LEPTHOTRIX ACTYNOMICES

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CNDIDA ALBICANS ERITROCITOS

ENTAMOEBA HISTOLYTICA. DIGIRIENDO

* RESULTADOS: Se observaron laminillas que presentan diversas alteraciones celulares debida a agentes biolgicos tales como: virus, bacterias, hongo y parsitos. Despus de haber hecho una revisin y observacin detallada de las muestras, se obtuvieron los siguientes resultados: VPH Flora bacteriana mixta +++ Rx. Inflamatoria ++ Lectura hormonal no posible CECV con alteraciones inflamatorias especficas por VPH Papanicolaou negativo. Clase II. LIE bajo grado. HERPES Flora bacteriana mixta ++ Rx. Inflamatoria +++ Lectura hormonal no posible CECV con alteraciones inflamatorias especficas por infeccin viral (herpes) Papanicolaou negativo. Clase II Gardnerella vaginalis Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas Flora bacteriana mixta ++ Rx. Inflamatoria ++ ndice de Frost 0/70/30= 68 de valor estrognico CECV con alteraciones inflamatorias especficas por infeccin viral (herpes) Papanicolaou negativo. Clase II Leptothrix actynomices Flora bacteriana mixta ++ Rx. Inflamatoria ++ ndice de Frost 0/100/0= 55 de valor estrognico CECV con alteraciones inflamatorias especficas por Leptothrix actynomices Papanicolaou negativo. Clase II Cndida albicans Flora bacteriana bacilar ++ Rx. Inflamatoria + ndice de Frost 0/80/20= 64 de valor estrognico CECV con alteraciones inflamatorias especficas por Cndida albicans Papanicolaou negativo. Clase II Trichomonas vaginalis Flora bacteriana cocoide +++ Rx. Inflamatoria ++ ndice de Frost 0/40/60= 82 de valor estrognico CECV con alteraciones inflamatorias especficas por T. vaginalis Papanicolaou negativo. Clase II Prctica No. 3 TINCIN DE PAPANICOLAOU * FUNDAMENTO: La constante exfoliacin de clulas de los estratos tisulares mas superficiales del epitelio de revestimiento mezclados con otros elementos celulares de la sangre y liquido intersticial o moco secretado, es la base del mtodo. El citograma ser diferente de acuerdo con el rgano del cual se obtuvo el material a examinar. Se deben considerar: 1.- Recoleccin del material 2.- Preparacin de los extendidos 3.- Manejo del material obtenido 4.- Tincin de los extendidos 5.- Interpretacin microscpica

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas Recoleccin del material: El rgano que se va a estudiar debe estar en condiciones fisiolgicas, sin manipular, sin lavar, y sin medicamentos; si esto no se puede evitar debe informarse por escrito en la solicitud de estudio. Adems la recoleccin del material a examinar ser diferente para cada rgano. Preparacin de los extendidos: El material que ser objeto de estudio debe llegar al laboratorio de citologa lo ms pronto posible para ser procesado debidamente. En forma ideal, el clnico debera conocer los primeros pasos y llevarlos a efecto en el momento de la toma. El material a examinar se toma sobre una laminilla portaobjeto limpia y seca; se hace un extendido delgado y uniforme de la muestra representativa; se sumerge en alcohol etlico de 96 o se roca con lquido fijador a base de polietileglicol e isopropil (spray normal). Si se usa el alcohol las laminillas deben permanecer dentro del fijador durante 10 minutos como mnimo. Manejo del material obtenido: El material, una vez fijado, puede ser transportado a cualquier distancia en estuches que prevean su destruccin. Las laminillas deben identificarse con nombre, fecha o nmero en un extremo utilizando lpiz diamante. Se puede utilizar plomo si las lminas tienen extremo mate. Tincin de los extendidos: Existen varias coloraciones. No obstante, la mas utilizada es la tincin de Papanicolaou modificada, ya que resulta ser mas til tanto para el diagnostico de alteraciones tisulares como para la valoracin hormonal. Y se basa en la reaccin qumica de los colorantes con los elementos celulares; su captacin vara de acuerdo con el pH del medio intracelular. Es tricrmica a base de: hematoxilina, Orange G y EA 50. La primera tie los ncleos, la segunda los citoplasmas transparentes y la tercera los citoplasmas mas densos. Interpretacin microscpica: Todo citlogo antes de revisar una laminilla debe conocer los datos aportados por el clnico en la solicitud; edad, sexo, diagnostico clnico probable, rgano del cual se obtuvo el material, hallazgos durante el examen clnico, tratamiento previo y diagnostico citolgico anterior. El medico solicitante debe conocer las posibilidades y limitaciones de la citologa para que pueda aprovechar en su diagnostico y tratamiento los datos proporcionados por el citlogo. La evaluacin de los extendidos requiere experiencia. La toma del producto puede hacerla el citloga o el medico en el consultorio, siempre que este conozca perfectamente las tcnicas y posibles causas de error. El 50% del xito en el diagnostico depender de la toma y fijacin de la muestra. El envo de ella puede hacerse en el fijador o bien sacando la laminilla y cubrindola con una gota de glicerina y otro portaobjeto. La laminilla debe observarse a seco dbil recorrindola en zigzag, de tal manera que el circulo luminoso del ocular corresponda al principio del circulo Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas del campo siguiente a observar; no deber pasarse sin observar ningn campo de la preparacin. * MATERIAL: * * * * Portaobjetos Aplicadores y espatulas Cubreobjetos Microscopio

* REACTIVOS: * * * * * * Los siguientes colorantes: hematoxilina de Harris, OG-6 y EA-50. Alcohol de 96 Alcohol cido Xilol Alcohol absoluto Resina sinttica

* METODOLOGA: Inmediatamente que se toma la muestra, y se extiende sobre el portaobjetos, se introduce dentro de alcohol de 96. Y se procede con la tincin: 1.- Se introduce en una tina con hematoxilina de Harris durante 3 minutos. 2.- Se lava con agua corriente. 3.- Se introduce en alcohol cido (un bao). 4.- Se enjuaga con agua corriente. 5.- Se introduce en alcohol de 96 (10 baos) 6.- Se introduce en alcohol de 96 (10 baos) 7.- Se introduce dentro del colorante OG-6 durante 30 segundos y no se enjuaga. 8.- Se introduce en una tina con alcohol (10 baos) 9.- Se introduce en una tina con alcohol (10 baos) 10.- Se introduce en una tina con alcohol (10 baos) 11.- Se introduce en una tina con el colorante EA-50 durante minuto y medio. 12.- Se introduce en alcohol (10 baos) 13.- Se introduce en alcohol (10 baos) 14.- Se introduce en alcohol (10 baos) 15.- Se introduce en xilol (10 baos) 16.- Se introduce en xilol (10 baos) 17.- Se deja secar. 18.- Se le coloca resina sinttica y se le pone un cubreobjetos. * OBSERVACIONES: Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

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Inmediatamente se toma la muestra, se debe realizar el extendido e introducir en alcohol de 96, es decir, no se debe esperar a que seque la muestra. Los colorantes utilizados dentro de la tincin de Papanicolaou son: Hematoxilina de Harris: tie los ncleos de las clulas. OG-6: tie los citoplasmas de las clulas superficiales e intermedias. EA-50: tie los citoplasmas de las clulas basales y parabasales. * RESULTADOS: Se obtiene una lmina perfectamente teida por Papanicolaou, lista para ser leda al microscopio.

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Un cncer incipiente y no invasivo (carcinoma in situ) puede ser tratado con una operacin mnima, mientras que un cncer invasivo suele requerir una histerectoma (extirpacin de crvix y tero y posiblemente de otros rganos de la pelvis.

Colposcopa: Tcnica para estudiar el crvix o cuello del tero mediante la visin) para examinar las clulas cervicales ms detalladamente con aparatos de aumento especiales. Conizacin, una forma ms extensiva de biopsia en la cual se extrae una cua del crvix.
CNCER CERVICAL.-El

cncer cervical o de crvix uterino es uno de los ms comunes, y en Mxico es el ms frecuente. En el pasado era una de las mayores causas de muerte por cncer, pero gracias a los nuevos conocimientos sobre la enfermedad y a los avances hechos para detectarlo en su primera etapa, es hoy uno de los ms curables. El cncer cervical se desarrolla en cualquier lugar del crvix o en la porcin inferior del tero. El cncer cervical, como su nombre indica, se sita en el crvix uterino, porcin inferior y estrecha del tero que desemboca en la vagina. En este lugar, las clulas del crvix se malignizan originando el cncer. SIGNOS Y SNTOMAS Hemorragia anormal Aumento de flujo vaginal Dolor en el pubis Dolor durante el coito Cncer cervical .-El desarrollo del cncer cervical es gradual y se inicia como una condicin pre-cancerosa que se denomina displasia. Por lo general, es un cncer de lento crecimiento y si se detecta de manera temprana puede tratarse con xito. La realizacin de exmenes rutinarios de Papanicolaou puede detectar en forma temprana los cambios celulares en el cuello uterino, lo que permite una deteccin a tiempo del cncer cervical. Los principales factores de riesgo identificados en la aparicin del cncer cervicouterino son:

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas Clase I: negativa Clase II: atipias Clase III: sospechoso Clase IV: muy sugestivo de malignidad Clase V: conclusivo de malignidad Con el paso de los aos la clasificacin evolucion y el reporte se informaba como: PAP I: negativo PAP II: atipias benignas Atipias severas o metaplasia escamosa PAP III: displasia ligera, moderada o severa PAP IV: carcinoma in situ PAP V: carcinoma invasor En el ao 1966 R. Richart propuso adoptar el sistema NIC (Neoplasia Intraepitelial Cervical), que se reporta as: NIC I: displasia leve NIC II: displasia moderada NIC III: displasia severa Carcinoma in situ Carcinoma de clulas escamosas Luego aparece el sistema Bethesda que se reporta as: Normal Normal inflamatorio LIE bajo grado LIE alto grado Clulas sospechosas de cncer invasor Un informe citolgico debe contener: Descripcin de la muestra como adecuada o inadecuada Descripcin de cambios reparativos o reactivos Diagnstico de la flora microbiana como hongos, bacterias, protozoos, virus. Descripcin de las anormalidades epiteliales de las clulas escamosas. Etapas del cncer cervicouterino Una vez detectado (diagnosticado) el cncer cervicouterino, se harn ms pruebas para determinar si las clulas cancerosas se han diseminado a otras partes del cuerpo. Este proceso se conoce como clasificacin por etapas. El mdico necesita saber la etapa de la enfermedad para planear el tratamiento adecuado. Las siguientes etapas se usan en la clasificacin del cncer cervicouterino: Etapa 0 o carcinoma in situ El carcinoma in situ es un cncer en su etapa inicial. Las clulas anormales se encuentran slo en la primera capa de clulas que recubren el cuello uterino y no invaden los tejidos ms profundos del cuello uterino. Etapa I El cncer afecta el cuello uterino, pero no se ha diseminado a los alrededores. etapa IA: una cantidad muy pequea de cncer que slo es visible a travs del microscopio se encuentra en el tejido ms profundo del cuello uterino Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas etapa IB: una cantidad mayor de cncer se encuentra en el tejido del cuello uterino Etapa II El cncer se ha diseminado a regiones cercanas, pero an se encuentra en la regin plvica. etapa IIA: el cncer se ha diseminado fuera del cuello uterino a los dos tercios superiores de la vagina etapa IIB: el cncer se ha diseminado al tejido alrededor del cuello uterino Etapa III El cncer se ha diseminado a toda la regin plvica. Las clulas cancerosas pueden haberse diseminado a la parte inferior de la vagina. Las clulas tambin pueden haberse diseminado para bloquear los tubos que conectan los riones a la vejiga (los urteres). Etapa IV El cncer se ha diseminado a otras partes del cuerpo. etapa IVA: el cncer se ha diseminado a la vejiga o al recto (rganos cercanos al cuello uterino) etapa IVB: el cncer se ha diseminado a rganos distales como los pulmones Recurrente La enfermedad recurrente significa que el cncer ha vuelto (reaparecdo) despus de haber sido tratado. Puede volver al cuello uterino o a otro lugar. PRACTICA No. 10 CANCER BRONQUIAL El cncer bronquial constituye el 30% de todas las neoplasias del ser humano. La mortalidad por cncer bronquial ha aumentado en las ltimas dcadas y en Chile se estima en 18 hombres y 5 mujeres por 100.000 habitantes. Afecta con mayor frecuencia a hombres de edad promedio 60 aos. La frecuencia ha aumentado especialmente en mujeres y en estrecha relacin con el hbito de fumar. La sobrevida a un ao del diagnstico es de 20% y a los 5 aos de 5%. Para los casos con tumor extirpable quirrgicamente puede aumentar a 35% a los 5 aos. ETIOLOGIA hay que considerar factores ocupacionales, hereditarios, contaminacin ambiental y hbitos personales. Los trabajadores de industrias convencionales y nucleares en que se utilizan sustancias qumicas para la manufactura de materiales, instrumentos, maquinarias, etc tienen mayor incidencia de cncer bronquial. En estas condiciones los trabajadores estn expuestos a radiaciones y sustancias tales como uranio, nquel, hierro metlico, sales de cromo, xidos de hierro, asbesto, arsnico, berilio, gas de mostaza, etc. En el aire contaminado de las grandes ciudades se encuentran adems de los irritantes comunes, sustancias carcingenas tales como 3,4- benzopireno, 1,12benzoperileno, xido arsenioso, trazas de elementos radiactivos, gases de aceite de petrleo, ozono, polvo de asbesto, trazas de nquel, cromo, Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas compuestos de arsnico, xido de nitrgeno, formaldehdo, hidrocarburos aromticos y alifticos. Sin embargo, estos factores representan una proporcin infinitesimal de causas cuando se comparan con el cigarrillo Est comprobada la relacin causal entre humo de cigarrillo y cncer bronquial (pipa y cigarro tambin). El humo del cigarrillo contiene benzopireno y otros cancergenos, as como irritantes. Existira una relacin entre dao epitelial y el efecto de los irritantes, tales como cianuro, acrolena, formaldehdo y xido nitroso. El epitelio bajo y el metaplsico, que reemplazan al epitelio respiratorio destrudo por los irritantes del humo del cigarrillo, son ms sensibles a la accin de los carcingenos y la ausencia de factores defensivos mecnicos y funcionales favorece la penetracin de los carcingenos y el contacto de stos con las clulas en fase proliferativa. LESIONES PRECURSORAS Se consideran lesiones precursoras (precancerosas) de la mucosa bronquial : hiperplasia de clulas basales y de clulas caliciformes, metaplasia epidermoide, displasia y carcinoma in situ. En la hiperplasia el epitelio est engrosado (ms de 50 m), debido a un aumento en el nmero de clulas basales, de clulas caliciformes o de ambas. En la metaplasia epidermoide el epitelio respiratorio normal est reemplazado por uno plano estratificado maduro. Se distinguen tres grados de displasia: leve, moderado y avanzado, segn la intensidad de las atipias y la extensin de la distorsin arquitectural del epitelio. Las alteraciones estructurales son estratificacin, espesor irregular, reemplazo total o parcial de las clulas normales por las atpicas y discontinuidades de la membrana basal. En el carcinoma in situ las alteraciones citolgicas e histolgicas mencionadas alcanzan su mxima expresin. Todo el espesor del epitelio est reemplazado por clulas atpicas, habitualmente es un foco pequeo, con irregularidades y discontinuidades evidentes de la membrana basal. En la mucosa adyacente al carcinoma in situ hay frecuentemente signos de displasia y metaplasia. En casos de carcinoma bronquial manifiesto, en las zonas vecinas se encuentran la hiperplasia y la metaplasia casi en el 90% de los casos, displasia en alrededor del 40% y carcinoma in situ en 20-30%. El tiempo de transformacin calculado citolgicamente para la fase displasia moderadacarcinoma invasor es de 3,2 aos. CLASIFICACIN HISTOLGICA DEL CNCER BRONQUIAL Existe una gran variedad de tumores, siendo los ms frecuentes los carcinomas. Los tipos histolgicos de este grupo, segn la clasificacin de la OMS, son: Carcinoma epidermoide o escamoso.-Es el prototipo del carcinoma bronquial. Se origina aparentemente en los bronquios mayores y medianos. Es el tipo histolgico ms frecuente en las biopsias (cerca del 45% de todas las biopsias bronquiales positivas). Es ms frecuente en el hombre y la sobrevida a los 5 aos es de 22%. Histolgicamente son carcinomas slidos con diferenciacin crnea (perlas crneas y disqueratosis) o presencia de Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas abundantes puentes intercelulares, o ambas. Tiende a ser multifocal en un 20%. Carcinoma indiferenciado de clulas pequeas.-Representa alrededor del 20% de todos los carcinomas bronquiales y el 40% de todas las biopsias positivas. Afecta predominantemente a hombres en proporcin de 19 : 1. Al momento del diagnstico mas del 80% tiene extensin extratorcica. La sobrevida a los 5 aos es de 2%. Es un tumor constituido por clulas uniformemente pequeas (10-15 m), de escaso citoplasma, ncleos pequeos, redondos o fusados, de cromatina fina y en grumos regulares, con o sin focos de diferenciacin glandular o crnea. Las clulas tumorales pueden ser argentafines. Adenocarcinoma .-Representa alrededor del 10% de los carcinomas en el hombre y el 50% en las mujeres. Es predominantemente perifrico. Sobrevida a los 5 aos es de 10%. Es el tipo ms frecuente en no fumadores. Se asocia en 45-65% de los casos a cicatrices de infarto, tuberculosis y otros granulomas. Los criterios histolgicos son presencia de secrecin mucosa, estructuras glanduliformes o papilares y vacuolas citoplasmticas con mucus. El carcinoma bronquoloalveolar es una variedad de adenocarcinoma, que tiende a ser multicntrico, multinodular, de aspecto bronconeumnico. Carcinoma indiferenciado de clulas grandes .-Se presenta como un carcinoma slido, constituido por clulas uniformemente grandes (20 m o ms), de ncleos polimorfos y frecuente canibalismo celular. Histolgicamente, no presentan ninguno de los caracteres histolgicos mencionados en los otros tipos. Es un diagnstico de exclusin. Carcinoma combinado adeno-epidermoide o adeno-escamoso .-Corresponde a un tumor en cuya masa coexisten un carcinoma epidermoide y un adenocarcinoma. Constituye el 0,4 - 3% de los casos.

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PRACTICA 9 CANCER MAMARIO El cncer de mama, que por lo general se presenta en mujeres, es una enfermedad en la que clulas malignas (cancerosas) crecen dentro del tejido mamario. Cada mama contiene entre 15 y 20 lbulos, los que poseen secciones menores llamadas lobulillos. Los lbulos y lobulillos estn conectados por conductos llamados ductos. El tipo ms frecuente de cncer mamario nace en los ductos a partir de clulas ductales. Los que surgen en los lbulos o lobulillos son llamados cnceres lobulillares. stos afectan con mayor frecuencia ambas mamas, a diferencia de otros tipos de tumores. El cncer inflamatorio de la mama es una clase especial de cncer de mama, bastante poco frecuente. El aspecto de la mama se parece a una inflamacin o quemadura de sol. Se ve inflamada, roja y caliente. Tiende a avanzar con rapidez. Lo ms importante es no confundirlo con una mastitis, Existen formas hereditarias de cncer mamario, que representan alrededor del 5-10% de todos los casos. Por otro lado, la mayora de los casos corresponde al llamado cncer espordico de mama, en donde no existe una alteracin gentica heredada que sea responsable de su aparicin. Tambin hay otros factores relacionados con el cncer de mama como nuliparidad, primera menstruacin precoz y menopaucia tarda, entre otros. Algunos estudios sugieren que el uso de terapia de sustitucin hormonal se asocia a un riesgo un poco mayor de desarrollar cncer mamario. Se debe consultar a un especialista si se notan cambios de coloracin en la piel de la mama, un ndulo o retraccin del pezn. Una radiografa especialmente diseada para la mama que es capaz de detectar ndulos que no son palpables. Dependiendo de las caractersticas del ndulo, con frecuencia es necesaria una muestra de ese tejido para ser analizada bajo el microscopio, procedimiento que se llama biopsia. La muestra de tejido se puede obtener usando una aguja especial o mediante una pequea operacin. Las probabilidades de mejora (pronstico) y la eleccin del tratamiento dependen del estado de avance de la enfermedad (si se ubica en la mama o se ha extendido fuera de la glndula); del tipo de cncer de que se trate; de algunas caractersticas de las clulas tumorales que tienen que ver con la agresividad del tumor, y de si est comprometida una o las dos mamas. La edad, el peso, el estado menstrual y las condiciones generales de salud tambin afectan el pronstico y el tratamiento necesario. - Estadio 0: Es la forma ms temprana que puede tener un cncer de mama. Existen dos tipos: carcinoma in situ ductal (carcinoma intraductal) y el carcinoma in situ Facultad de Bioanlisis, Regin Veracruz.

Laboratorio de Tcnicas Citolgicas lobulillar. El carcinoma lobulillar in situ NO es realmente un cncer sino ms bien un indicador del riesgo de desarrollarlo (25% de probabilidades de tener un cncer en un plazo de 25 aos; puede afectar a cualquiera de las dos mamas). - Estadio I: El tumor se encuentra confinado a la mama y es menor de 2 cms. de dimetro mximo. - Estadio II: Incluye las siguientes situaciones: - El tumor mide menos de 2 cms. Pero existen metstasis en los ganglios de la axila. - El tumor mide entre 2 y 5 cms., con o sin metstasis en los ganglios de la axila. - El tumor mide ms de 5 cms., y NO existen metstasis en los ganglios de la axila. - Estadio III: Se divide en IIIA y IIIB. IIIA - El tumor mide menos de 5 cms. y existen metstasis en los ganglios de la axila que provocan que se adhieran unos con otros, o a estructuras vecinas. - El tumor mide ms de 5 cms. y existen metstasis en los ganglios de la axila. IIIB - El tumor ha invadido la piel o la pared del trax (msculos o costillas). - Existen metstasis en los ganglios que se encuentran detrs del esternn. - Estadio IV: El cncer se ha extendido lejos de la mama y la axila, comprometiendo otros rganos, frecuentemente los huesos, pulmones, hgado o cerebro. - Cncer de Mama Recurrente Es cuando el tumor vuelve a aparecer despus de haber sido tratado. Esta reaparicin o recurrencia puede ser en la mama, en alguna otra parte de la pared torcica o en cualquier otra zona del cuerpo. Esta condicin si se limita a la mama puede ser tratada con muy buenos resultados, sin que aumente la mortalidad.

El cncer mamario se puede clasificar como: Inicial (in situ): Este comienza en las clulas que revisten los conductos que conectan las glndulas productoras de leche como el pezn. El cncer que se detecta en esta etapa es curable en ms del 95% de los casos.

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Invasivo: El cncer se ha diseminado ms all de los conductos y ha llegado al tejido circundante y ms tarde a los ganglios linfticos contiguos. Metastsico: Este cncer se ha diseminado a otras regiones del organismo, como ganglios linfticos distantes, huesos, pulmones, hgado o cerebro.

Los tipos de cncer de mama se clasifican en: El carcinoma ductal in situ se origina en las clulas de las paredes de los conductos mamarios. Es un cncer muy localizado, que no se ha extendido a otras zonas ni ha producido metstasis. Por este motivo esta enfermedad 'premaligna' puede extirparse fcilmente. La tasa de curacin ronda el 100%. Este tipo de tumor se puede detectar a travs de una mamografa. El carcinoma ductal infiltrante (o invasivo) es el que se inicia en el conducto mamario pero logra atravesarlo y pasa al tejido adiposo de la mama y luego puede extenderse a otras partes del cuerpo. Es el ms frecuente de los carcinomas de mama, se da en el 80% de los casos. El carcinoma lobular in situ se origina en las glndulas mamarias (o lbulos) y, aunque no es un verdadero cncer, aumenta el riesgo de que la mujer pueda desarrollar un ctumor en el futuro. Se suele dar antes de la menopausia. Una vez que es detectado, es importante que la mujer se realice una mamografa de control al ao y varios exmenes clnicos para vigilar el posible desarrollo de cncer. El carcinoma lobular infiltrante (o invasivo) comienza en las glndulas mamarias pero se puede extender y destruir otros tejidos del cuerpo. Entre el 10% y el 15% de los tumores de mama son de este tipo. Este carcinoma es ms difcil de detectar a travs de una mamografa. El carcinoma inflamatorio es un cncer poco comn, tan slo representa un

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Laboratorio de Tcnicas Citolgicas 1% del total de los tumores cancerosos de la mama. Es agresivo y de rpido crecimiento. Hace enrojecer la piel del seno y aumentar su temperatura. La apariencia de la piel se vuelve gruesa y ahuecada, como la de una naranja, y pueden aparecer arrugas y protuberancias. Estos sntomas se deben al bloqueo que producen las clulas cancerosas sobre los vasos linfticos.

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