EL MICROSCOPIO

El microscopio es un instrumento que permite la observación de objetos

imperceptibles al ojo humano debido a que aumenta el tamaño de su imagen. El
fundamento del microscopio se basa en que las imágenes, al pasar por un
conjunto de elementos ópticos son ampliadas y se observan con mayor detalle y
claridad. En el laboratorio de hematología, el microscopio se utiliza para la
observación de células sanguíneas: estudio de la morfología y características
celulares, además de ser útil para realizar los recuentos celulares.

Los microscopios que se utilizan en el laboratorio de hematología pueden

variar dependiendo del estudio que se quiere realizar, así tenemos que entre los
más usados están: El microscopio óptico compuesto, el microscopio de campo
oscuro, el microscopio de contraste de fases, el microscopio de fluorescencia y el
microscopio electrónico. Sin embargo en este capítulo haremos referencia solo al
microscopio óptico compuesto por ser el más utilizado en las prácticas de
hematología.

MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO:

Un microscopio compuesto es un microscopio óptico que tiene más de un

lente, que crean una imagen directa y aumentada del objeto. El aumento suele ser
entre 40 y 200 veces más que el tamaño real.

Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar

objetos transparentes, o cortados en láminas tan finas que se transparentan. Se
emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y organismos no visibles
a simple vista. El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:

El sistema mecánico constituido por una serie de piezas en las que van
instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque.
El sistema óptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal
manera que producen el aumento de las imágenes que se observan a través
de ellas.
El sistema de iluminación comprende las partes del microscopio que reflejan,
transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la
observación a través del microscopio.
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE

PARTES DEL MICROSCOPIO Y SUS FUNCIONES:

Ópticas:

o Condensador (8)
o Objetivos (3)
o Ocular (1)
o Diafragma (6)
o Fuente de luz (7)

Mecánicas:

o Base:
o Brazo:
o Platina (9):
o Revólver (2):
o Sistema Tornillos
macrométrico y
micrométrico (4 y 5)
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE

PARTE MECÁNICA:

Pie: Es el apoyo principal del microscopio. La platina, junto con el

condensador y la base, están apoyados sobre el pie.
Cuello o brazo: Es el soporte que sirve de sujeción para:
-Tubo óptico: Conecta los oculares al lente del objetivo, en esta
parte se forma la imagen intermedia.
-La platina: Placa horizontal donde se sostienen las
preparaciones que se van a observar. Tiene un sistema que la hace móvil
en sentido transversal (a lo largo del portaobjetos), y longitudinal (a lo ancho
del portaobjetos), para poder observar cualquier parte de la preparación.
Este desplazamiento de la platina es controlado por dos tornillos que están
colocados lateralmente por debajo de ella en el lado derecho. En la zona
posterior y lateral de la platina están situadas unas regletas que determinan
las coordenadas del campo observado, con ambas coordenadas se puede
establecer la posición de una imagen observada sobre la preparación.

Lateralmente en el brazo del microscopio, existe un sistema para alejar o

acercar la muestra, colocada sobre la platina, al objetivo de observación; es
un sistema que regula la distancia entre el lente frontal del objetivo y la
preparación que se debe examinar, de tal manera que los objetos se
puedan observar enfocados. En el microscopio existen dos tornillos de
enfoque:
- Macrométrico: De avance rápido. Mueve la platina hacia arriba y/o hacia
abajo, acercando rápidamente la preparación al objetivo, y posteriormente
permite, a grandes desplazamientos, realizar el enfoque.
- Micrométrico: De avance lento de ajuste fino. Por medio de pequeños
desplazamientos de la platina, permite enfocar con precisión en planos de
poco grosor, además permite pasar del plano enfocado a planos superiores
o inferiores para poder observar distintas zonas superpuestas.

Portaobjetivo tambor (revólver): Sostiene los objetivos y permite la

rotación fácil de un lente objetivo a otro.

PARTE ÓPTICA:

- Los oculares: Son lentes con un grado de amplificación de 5X, 10X y 15

x (aunque por lo general el más utilizado es de 10x), estos lentes
magnifican la imagen intermedia formada por el lente objetivo en el tubo
óptico y también limitan el área de visibilidad. Los oculares no deben
intercambiarse con los de otro modelo. Los microscopios más utilizados
poseen dos oculares (binoculares), que están situados sobre una superficie
deslizante que permite ajustar la distancia interpupilar para cada
observador. En cada ocular existe un anillo que hace rotar el ocular hacia la
derecha y la izquierda para ajustar el enfoque independiente para cada ojo

- El control interpupilar: Se utiliza para ajustar la separación lateral de los

oculares para cada individuo. Cuando se ajusta de manera adecuada, el
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE

usuario debe poder enfocar ambos ojos con comodidad en la muestra y

visualizar una imagen nítida.

- Los lentes objetivos: Por lo general los microscopios tienen de tres a

cuatro lentes objetivos, situados sobre una pieza mecánica llamada carro o
revólver, cada uno con un poder de aumento específico, en el cilindro de
cada lente está grabado el poder de amplificación y la apertura numérica
(AN), desde el punto de vista funcional, cuanto mayor es la AN, superior
será la resolución. (Capacidad de distinguir entre los detalles finos de los
objetos situados cerca).

Los tres objetivos más utilizados en el laboratorio de hematología son 10x

0,25 (poder bajo), 40x 0,65 (poder fuerte seco), y 100x 1,25 (este objetivo
precisa el uso de un medio de refracción de luz para aumentar la
luminosidad que le entra, para este fin se utiliza aceite de inmersión, tales
como el aceite de cedro o aceites sintéticos). El objetivo de inmersión no
puede utilizarse en seco y viceversa, los objetivos diseñados en seco no
pueden ser utilizados con aceite de inmersión, ya que no se observa ni
enfoca bien.

- El condensador: presenta varios lentes reunidos en una sola unidad,

pueden estar montados de forma permanente o ser ajustable en sentido
vertical con un mecanismo de cremallera, su función es captar, organizar y
dirigir la luz a través de la muestra. Posee un tornillo de elevación y
descenso del condensador que se utiliza para aumentar o disminuir la
concentración de luz emitida por una lámpara de iluminación. En
preparaciones poco teñidas o en fresco, es recomendable descender el
condensador, esto hace que haya poca luz y las imágenes se vean mejor
contrastadas.

En preparaciones muy teñidas, es recomendable elevar el condensador,

esto hace que haya mucha luz para atravesarlas y que se puedan observar
mejor. Adherido al condensador se encuentra el diafragma o iris, que
contiene varias hojas que controlan el ángulo y la cantidad de luz enviada a
través de la muestra. El diafragma se utiliza para dar más o menos
contraste a los objetos observados:

En preparaciones poco teñidas o en fresco, la posición del diafragma debe

ser bastante cerrada, esto hace que haya poca luz y las imágenes se vean
mejor contrastadas.

En preparaciones muy teñidas, la posición del diafragma debe ser bastante

abierta, esto hace que haya mucha luz para atravesarlas y que se puedan
observar mejor.
Siempre se empieza la observación con el diafragma abierto, y se va
cerrando poco a poco hasta obtener imágenes mas contrastadas.
Algunos microscopios están provistos de un sistema de portafiltros. Los
filtros seleccionan el espectro del color de la luz incidente sobre la
preparación, resaltando unas tonalidades u otras dependiendo de las
estructuras teñidas que queremos evidenciar.
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE

PROCEDIMIENTO OPERATIVO DEL MICROSCÓPIO ÓPTICO:

La técnica para una correcta observación al microscopio óptico será la

siguiente:

1- Antes de manipular el microscopio, familiarizarse donde y con las

diversas partes que lo forman, ya que se localizan en diferentes zonas
según el modelo.
2- Encender la luz y regularla a una intensidad media para evitar que se
desgaste y se queme el bombillo rápidamente.
3- Sobre la platina, que debe estar situada sobre la posición mas inferior,
se coloca la preparación (teniendo cuidado de no ponerla al revés; la
muestra debe estar colocada siempre sobre la cara superior del
portaobjetos)
4- Procurar que la zona a observar quede en el centro del orificio de la
platina (eje óptico) sobre la luz que proviene del condensador y el
diafragma.
5- Regular el condensador y el diafragma en una posición adecuada que
permita ver mejor la preparación.
6- Asegurarse de que el objetivo de menor aumento está en el extremo
inferior del tubo, en el revólver.
7- Siempre empezar la visualización con el objetivo de menor aumento y
después ir pasando a los superiores.
8- Mirando por fuera del ocular, lateralmente, hacer ascender la platina,
con el tornillo macrométrico, de modo que quede a poca distancia entre
el objetivo y la preparación. Normalmente entre los objetivos de poca
ampliación el aparato posee un tope de subida de la platina para cada
uno de ellos. En el objetivo de inmersión el acercamiento se realiza
suavemente hasta que contacta con el aceite. El objetivo nunca debe
tocar la preparación.
9-Mirando por el ocular, accionar el tornillo macrométrico de modo que la
distancia de separación entre el objetivo y la muestra vaya aumentando
y, progresivamente, se vea por los oculares la imagen de la muestra
enfocada.
10- Afinar con el micrométrico hasta conseguir la máxima nitidez.
11- A partir de aquí se irá pasando de un objetivo a otro de mayor
aumento, siempre teniendo especial cuidado de no tocar la lente frontal
del objetivo con la preparación.
12- Cuando se emplea el objetivo de inmersión se debe colocar una
pequeña gota de aceite sobre la muestra, y, hacer ascender la platina
hasta que el objetivo contacte con el aceite, pero no con la preparación.
La observación se hará siempre que haya contacto del objetivo con el
aceite de inmersión, pues en caso contrario no se podrá visualizar nada.
13- Cuando se gira el revólver de un objetivo a otro se debe rotar de
forma que los objetivos de 10x y 40x nunca entren en contacto con el
aceite de inmersión.
14- Para una buena y correcta visualización es importante que los
oculares estén ajustados. Se realiza una vez enfocada la preparación:
primero cerrar el ojo derecho y ajustar el enfoque con el anillo ocular del
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE

ojo izquierdo; después se realiza el ajuste del enfoque de igual manera

para el ojo derecho; luego terminar ajustando el espacio interpupilar de
manera que solo se observe un solo campo. El uso de lentes no es
necesario para la visión por el microscopio, ya que enfocara el
instrumento de forma exclusiva para el usuario.
15- Durante la visualización es necesario ajustar continuamente la
intensidad de la luz en el condensador y en el diafragma, de manera que
en cada momento tengamos una situación óptima de observación, sobre
todo si se cambia de un objetivo a otro.
15- Afinar el enfoque constantemente con el micrométrico para visualizar
varios planos de la muestra.
16- Al terminar, hacer descender totalmente la platina hasta quedar en la
posición más inferior y luego retirar el portaobjetos.
17- Si se ha utilizado el objetivo de inmersión, limpiarlo con una solución
de alcohol- éter al 50%
18- Apagar la fuente de luz y desconectar
19- colocar el forro de protección.

PRECAUCIONES Y CONSERVACIÓN DEL MICROSCOPIO:

- Vigilar que las preparaciones estén bien secas antes de colocarlas en

el microscopio.
- Nunca tocar los lentes con los dedos, se limpian con papel de celulosa
y un poco de alcohol si es necesario.
- Al final de su utilización, procurar que quede limpio y seco; colocar en
la parte inferior del tubo el objetivo de menor aumento.
- Cuando no se utilice cubrirlo con el forro.
- Cualquier líquido que caiga sobre el debe limpiarse enseguida antes de
que se seque.
- Los oculares y los objetivos se deben limpiar con un papel especial
para lentes y con un poco de alcohol cuando es necesario si están muy
sucios, y secar después.
- El aceite de inmersión se debe retirar del lente del objetivo de 100x
inmediatamente después de ser utilizado.
- Debe estar en una mesa con una superficie plana libre de vibraciones.
- Debe estar en un lugar limpio y seco ya que la humedad tiende a
empañar los lentes y corroer las superficies metálicas.
- Siempre que se deba mover el microscopio se tiene que sujetar con las
dos manos firmemente por el brazo y por debajo de la platina para evitar
daños al equipo.
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS DE SANGRE

LOCALIZACIÓN Y CORRECCIÓN DE FALLAS BÁSICAS:

La mayoría de los problemas comunes se relaciona con la

incapacidad para enfocar, la siguiente lista de control puede ayudarle a
identificar el problema:
- Oculares:
- ¿Están limpios?
- ¿Están encajados con firmeza?
- Objetivo:
- ¿Está atornillado con firmeza?
- ¿El objetivo seco esta exento de aceite?
- Condensador:
- ¿Está ajustado a la altura apropiada?
- ¿Esta exento de aceite?
- Portaobjetos:
- ¿El lado derecho está situado hacia arriba?
- Cubreobjeto:
- ¿Está colocado del lado correcto sobre el
extendido?
- ¿Hay un solo cubreobjeto sobre el portaobjeto?
- ¿Tiene medio de montaje (aceite) entre cubreobjeto
y portaobjeto?
- Bombillo:
- ¿Es necesario cambiarlo?
- ¿El cable de conexión a la electricidad esta bien
conectado al microscopio, en su parte posterior?
- ¿El botón que regula la entrada de luz está abierto?

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1.- Rodak, B. (2005). Hematología Fundamentos y Aplicaciones Clínicas (2a

edición). Buenos Aires, Argentina: Médica Panamericana.

2.- Serrano, Josefa M. (2.005). Fundamentos y Técnicas de Análisis

Hematológicos y citológicos. Editorial Masson S.A