INTRODUCCIÓN

En la naturaleza existen organismos que tienen un tamaño muy pequeño, no visibles a

simple vista, y por esto se les ha denominado microorganismos. Para poder estudiarlos,

el hombre ha desarrollado herramientas ópticas, como los microscopios y estéreo-

microscopios, que cumplen la función de magnificar imágenes y aumentar la capacidad

de visión del ojo humano, para percibir detalles minúsculos que a simple vista no se

pueden identificar. El microscopio óptico (también llamado de luz o de campo claro)

consta básicamente de tres partes: una parte óptica (compuesto por un sistema combinado

de lentes), una parte mecánica y una fuente de luz (sistema de iluminación). Entre los

modelos más comunes de microscopios se destacan el microscopio de luz (óptico) y el

microscopio de electrones (o electrónico). El microscopio óptico recibe este nombre

porque permite el paso de luz no alterada a través de una serie de lentes que magnifican

la muestra, mientras que el microscopio electrónico utiliza un haz de electrones los cuales

se encargan de amplificar la imagen. Entre los microscopios ópticos se ubican: campo

claro, campo oscuro, ultravioleta, fluorescencia y contraste de fase. Entre los

microscopios electrónicos se encuentran: electrónico de transmisión y electrónico de

barrido. (JAVERIANA, 2017)

HISTORIA DEL MICROSCOPIO

Las fuentes procedentes de civilizaciones antiguas como asiria, la clásica o árabe, nos

hablan ya del poder amplificador de las lentes bioconvexas y de la utilización de técnicas

de ampliación de imagen. El termino microscopio deriva etimológicamente del griego

mikros (pequeños) y skoopeo (observar) y fue acuñado por Jean Faber en 1624. Sin

embargo, el impulsador más significativo fue del microscopio fue el holandés Antón Van

LEEUWENHOEK (1632- 1723). Anatomista y fisiólogo, Leeuwenhoek construyó su

propio microscopio con lentes convexas que el mismo pulía. Entre sus aportaciones más
importantes está la de ser uno de los primeros en estudiar la composición de la sangre y

en observar y dibujar protozoos; en 1676 descubrió las bacterias.

DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO

En este punto vamos a describir las partes de un miscroscopio atendiendo a las

clasificaciones que tradicionalmente se han realizado, clasificaciones que distinguen

dentro del microscopio una parte mecánica y una parte óptica. Es una clasificación

bastante general ya que no incluimos en ella la gran cantidad de accesorios y suplementos

que se pueden añadir a acoplar a unos microscopios.

TIPOS DE MICROSCOPIOS

Los microscopios de luz transmitida

Sirven para contemplar preparados transparentes y muy finos. Cuanto más fino sea el

preparado, con más precisión podrá observarlo. Sin embargo, puede usar los microscopios

de luz transmitida para ver la superficie de muestras de cuerpos opacos, como por

ejemplo, granulados o sedimentos. En tales casos, el preparado se observa como un juego

de luz y sombras. En este tipo de microscopios el rayo de luz suele proyectarse desde

abajo, atravesando el preparado, cuando este sea transparente. Si desea contemplar bien

los preparados especiales que se depositan sobre la platina, es mejor que use un

microscopio invertido. En este tipo de microscopios la iluminación es de arriba hacia

abajo. La microscopía invertida se usa con frecuencia en la hidrogeología, hidrobiología

y la medicina. Como el tipo de construcción conlleva que la distancia entre el objeto y el

objetivo sea bastante grande, esto hace posible la contemplación de preparados más

gruesos.

Microscopio de luz reflejada (microscopio óptico)

En este tipo de microscopio se ilumina el preparado desde la parte superior a través del

objetivo o lateralmente. La luz reflejada en el preparado es captada por el objetivo.

Gracias a esta técnica es posible usar preparados opacos o espesos. Los microscopios de

luz reflejada se usan con frecuencia en la microscopía de fluorescencia o en la

mineralogía.

Microscopio estereoscópico (microscopio óptico)

Los microscopios estereoscópicos son básicamente microscopios de luz reflejada. El

preparado se suele iluminar desde la parte superior o inferior. La mayoría de los

microscopios estereoscópicos permiten iluminar también desde la parte inferior. Los

microscopios estereoscópicos se diferencian de otros microscopios en que disponen de

dos entradas de luz separadas, que están ordenados en un ángulo determinado. Cada

entrada de luz integra su propio objetivo y ocular. Algunos microscopios estereoscópicos

integran una lente de aumento integrada delante del objetivo.

Microscopio de fluorescencia (microscopio óptico)

Aquí se suele excitar desde un colorante fluorescente en la muestra mediante una luz con

una determinada longitud de onda desde el exterior. El colorante fluorescente emite la

luz. Esa luz tiene una longitud de onda más larga que la luz excitada (Soke’sShift). En la

trayectoria del rayo se puede separar mediante filtros ópticos la luz fluorescente de la luz

excitada, y reenviarla al ocular o la cámara. El límite de resolución de un microscopio de

fluorescencia puede estar muy por debajo de un microscopio óptico convencional, lo que

permite contemplar con precisión las estructuras de una célula o los procesos de células

vivas.

Microscopio confocal

Este tipo de microscopía es una forma particular de la microscopía óptica o fluorescente.

En este caso se escanea secciones ópticas muy finas y se compone una imagen

tridimensional. Como cada sección es una imagen muy nítida, se consigue una imagen

3D muy bien enfocada.

Microscopio STED (Stimulates Emmision Depletion) (Microscopio de fluorescencia)

Este tipo de microscopía es un método más reciente aún de la microscopía de

fluorescencia, con la que se puede eludir el límite de resolución definido por Abbe. La

ventaja es que en comparación con un microscopio óptico convencional, el límite de

reproducción es muy superior, lo que permite enfocar con mucha nitidez detalles de

estructuras. Con el microscopio STED consigue una resolución mejor que con un

microscopio láser convencional. En octubre de 2014, el investigador Stefan Hell fue

galardonado con el premio Nobel de la química por sus trabajos de investigación con el

microscopio STED.

Microscopio electrónico

Dicho de forma muy sencilla, la microscopía electrónica usa haz de electrones en vez de

luz. Como ya se sabe, estos tienen una longitud de onda mucho más corta que la luz

visible, por lo que se consigue una resolución más alta en el rango de las estructuras

atómicas. Existe una amplia variedad de electrones. Aquí indicamos sólo los tipos más

comunes.

COMPONENTES MECANICOS DEL MICROSCOPIO

- El estativo o soporte .- esta formado por un pie pesado que sostiene un brazo

inclinado del cual salen tanto la platina como el tubo del microoscopio.

- La platina.- es la pieza sobre la que se colocan las diferentes preparaciones que

deseamos observar. La forma de la platina es variada y puede ser tanto fija como

móvil. prácticamente, todos los microscopios profesionales actuales poseen un

carro móvil graduado, que hace posible el movimiento y la localización precisa de

áreas de interés en la preparación.

- El tubo lleva, en la parte inferior, el revolver con los objetivos, y en la parte

superior, los auriculares.

- El revolver es una pieza que lleva varios objetivos intercambiables y permite

adaptar estos al tubo del microscopio.

- Los mandos de enfoque manejan el enfoque bien sea por el movimiento vertical

de la platina o del tubo, según el tipo de microscopio. Habitualmente se colocan a

ambos lados del estativo. Para una mayor precisión en el enfoque es necesario un

mando micrométrico para ajuste eje.

- Actualmente los microscopios profesionales llevan estos mandos graduados, así

como control de tensión o pre enfoque rápido.

isión de iluminar los objetos por medio de luz transmitida.

- La lámpara es la fuente luminosa que puede tener una cara plana y otra cóncava,

los expertos sugieren usar la parte plana para objetivos de poco aumento y fuentes

de luz directa, y la parte cóncava para objetivos con gran aumento y fuentes de luz

indirecta.

- El condensador, una de las partes más importantes en microscopía, consta de un

sistema de lentes de gran abertura sujetos a una montura, colocados entre la platina

y la lámpara, puede subirse y bajarse a voluntad y tiene la finalidad de concentrar

los rayos de luz para dirigirlos hacia la preparación. El correcto uso de este

dispositivo es clave para asegurar la adecuada observación de los especímenes.

- El diafragma se encuentra unido al condensador y regula la cantidad de rayos

luminosos que inciden sobre la preparación. El sistema óptico se compone de

oculares y objetivos, es decir, está constituido por diferentes lentes que se

encargan de corregir las aberraciones de la luz y de desviar correctamente los

rayos luminosos para lograr una imagen amplificada.

- El ocular se encuentra montado en la parte superior del tubo del microscopio, por

medio de esta lente se observa la imagen amplificada (10X).

- Los objetivos son los elementos más importantes del microscopio, de ellos

depende la mayor o menor magnificación con que se pueda observar, son

planoconvexas de foco muy corto. Mientras mayor sea el aumento más pequeño

es el diámetro de la lente. Existen varios tipos de objetivos, y cada uno cumple

una función en la visualización.

Figura 1: Partes del microscopio óptico. Fuente: Uso de microscopios. Hugo Díez, Ofelia Díez.

USOS DEL MICROSCOPIOS

Antes de usar el microscopio:

 Verifique que los lentes oculares y objetivos estén limpios. Nunca toque los lentes

con los dedos. Si tiene que limpiar un lente, use papel de arroz.

 Desenrolle el cable y conecte el microscopio, prenda la lámpara y ajuste la

intensidad de luz a un nivel cómodo.

 Ajuste la distancia inter-ocular para adaptar la distancia entre los lentes oculares

a la distancia entre sus ojos; mueva lateralmente la base de los lentes oculares

hasta que vea claramente una sola imagen con los dos ojos.

 Coloque el objetivo de menor aumento (4x) sobre la muestra y baje la platina

completamente con el tornillo macrométrico.

 Coloque la preparación problema (o espécimen) sobre la platina. Observación a

través del microscopio (enfoque).

 Comience la observación con el objetivo de 4x o 10x.

 Tome el diafragma y déjelo casi cerrado (con poca luz).

 Suba la muestra problema (espécimen) que se encuentra en la platina con ayuda

del tornillo micrométrico y acérquelo al máximo del lente del objetivo. Esto debe

hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo

de incrustar el objetivo en la preparación.

 Separe lentamente el objetivo de la preparación con el tornillo macrométrico

mientras va mirando a través del lente ocular; cuando observe nitidez en la

muestra, gire el tornillo micrométrico hasta obtener un enfoque fino (la muestra

problema está enfocada).

 Al pasar al siguiente objetivo (sea 10X o 40X, depende donde inició su

observación), la imagen ya debe estar enfocada y solo basta con mover un poco

el tornillo micrométrico, para obtener una visión más fina. Si al cambiar de lente

objetivo se desenfoca la imagen, es recomendado volver al objetivo anterior y

repetir de nuevo el paso anterior.

 A medida que se va aumentando el poder de magnificación, la cantidad de luz que

entra debe regularse con el diafragma. Si se utiliza un objetivo de baja

magnificación como 4x o 10x el diafragma debe ir casi cerrad), si se usa el

 objetivo de 40x debe ir en la mitad y si se usa máxima magnificación, es decir

100x, debe ir totalmente abierto (máximo de luz).

 Para enfocar en 100x, es necesario el uso del aceite de inmersión.