VALIDACION DE LIMPIEZA DE UN REACTOR Conceptos tericos y caso de aplicacin Dr.

Sergio Pallotto

Estandarizar los procedimientos de limpieza es un punto importante previo a la validacin del mismo, no solo porque la calidad del producto puede ser afectada por la acumulacin de polvo y por la contaminacin microbiana, si no tambin porque la contaminacin cruzada de un producto a otro podra llevar a serios efectos adversos en los pacientes. Hoy existen instrucciones ms especficas que deben ser seguidas por los fabricantes de productos farmacuticos. La FDA reafirma la necesidad de documentar los procedimientos de limpieza y espera que los laboratorios productores de medicamentos tengan: -Protocolos escritos de validacin -Resultados documentados de los estudios con un reporte final aprobado por el Departamento de Aseguramiento de la Calidad de la empresa. Surgen muchas preguntas al considerar el tema de validacin de limpieza: -Que contaminante posee la mayor amenaza para el producto -Cual es el mximo n ivel aceptable de contaminante -Qu mtodos de muestreo y testeo se requieren

Un procedimiento de limpieza validado proporciona un alto indice de seguridad de su efectividad. Esta comprobacin debe ser DOCUMENTADA. La estructura bsica de documentacin incluye: -PROTOCOLO DE VALIDACION -REPORTES DE VALIDACIN (un mnimo de tres ensayos) -Procedimientos relacionados -Bibliografa correspondiente

Dentro de los elementos esenciales para el proceso de validacin encontramos: El SOP de limpieza a validar especfico para un equipo. Seleccin del WORST CASE. Procedimientos de muestreo. Procedimientos analticos con la apropiada sensibilidad. Criterios de aceptacin.

El procedimiento de limpieza debe proporcionar una lista que debe se chequeada paso a paso mientras se lleva a cabo el procedimiento de limpieza. De esta forma los pasos son realizados en secuencia correcta y deben ser debidamente documentados. Siempre que sea posible se debe usar AGUA A ALTAS TEMPERATURA y PRESION para aumentar la solubilidad del contaminante y ayudar a la remocin de residuos mediante la erosin fsica. EN LA ETAPA FINAL DEL PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA es necesario remover los restos de agentes de limpieza. Se requerir el testeo del CONTAMINANTE y DEL AGENTE DE LIMPIEZA. Se deben considerar las precauciones para evitar la contaminacin microbiana en el diseo de los procesos de limpieza. Realizar el enjuague con agua purificada y los equipos deben ser secados en forma inmediata despus de su limpieza. El procedimiento deber incluir: -Objetivo -Responsabilidades -Descripcin del equipo -Concentracin del agente de limpieza y preparacin -Instrucciones de limpieza, incluyendo armado y desarmado del equipo -Proteccin post-limpieza -Identificacin del status (con fecha de caducidad de la limpieza)

Para la eleccin del WORST CASE debemos considerar la formacin de grupos eligiendo un criterio: Por ejemplo, formar grupos segn: Las caractersticas de formulacin de los productos Por equipo: pensando solamente en un SOP para cada equipo. Por mtodo de limpieza: tantos equipos usan un SOP de limpieza en comn. Segn los medios donde se disuelve el agente de limpieza: medio acuoso orgnico, etc.

La formulacin es importante porque el proceso de limpieza afecta no solo al ingrediente activo si no tambin a los excipientes. Agrupar cremas y ungentos con el mismo activo, en el mismo grupo, no sera correcto por las diferencias grandes en sus solubilidades. Podramos formar grupos con productos con excipientes similares en su formulacin y solubilidad de sus activos . Luego de estos grupos elegir el producto cuyo activo tenga la menor solubilidad y ser ste nuestro representante o worst-case.

En este ejemplo dividimos a los semislidos en tres grupos: Cremas, pomadas y ungentos y empezam os con el worst-case del grupo de ungentos, por ser ste grupo el que tiene menor solubilidad frente a agentes de limpieza en medios acuosos.

Otros elementos esenciales son los mtodos de muestreo: Existen varios mtodos posibles, cada uno con sus ventajas y desventajas. El hisopado lo usaremos para el muestreo de material adherido soluble y no soluble. Con este mtodo entonces vamos a estar muestreando la droga residual, con la ventaja de muestrear un rea definida (25 cm 2 ) y luego conociendo la superficie del reactor relacionaremos la cantidad hallada con la superficie total del equipo. Podemos usarlo en lugares donde el agua de enjuague no es til y podemos elegir los puntos crticos donde pensamos que es ms difcil la eliminacin del producto. Como desventajas encontramos que el hisopo (si no es el adecuado) puede aportar impurezas que provoquen interferencias en el mtodo

analtico elegido, que no podemos muestrear la superficie completa del equipo y que los resultados pueden ser dependientes de la tcnica.

Debemos

estandarizar

los

siguientes

factores

ya

que

afectan

directamente la cantidad muestreada o la cuantificacin analtica N de pasadas. Direccin. Rotacin o no. Caracterstica del hisopo: preferentemente Vstago: polipropileno Unin: libre de adhesivos Cabeza: poliester

El mtodo de ag ua de enjuague involucra el uso de un volmen conocido para enjuagar la superficie del equipo. Este mtodo testea la superficie total y es menos dependiente de la tcnica. Es necesario conocer el volumen de enjuague para luego relacionarlo con el lmite establecido.

Se detectan tanto los residuos solubles como los agentes de limpieza. Sin embargo los resultados se ven afectados por la solubilidad del contaminante y la fuerza fsica del lavado. Una desventaja importante es la imposibilidad de detectar focos del residuo en los cuales el nivel de droga residual es muy alto. Es por eso que este mtodo es preferido para el muestreo de trazas de agentes de limpieza en medios acuosos. Una muestra del volumen de enjuague es tomada y analizada por ejemplo por conductimetra.

Mtodos analticos: La seleccin del mtodo analtico depende del tipo de anlisis que se necesite y de otros factores como costos, facilidad de implementacin y experiencia previa que tengamos. Los principales requerimientos son la sensibilidad y el lmite de deteccin/cuantificacin. Estos requerimientos dependen directamente del criterio de

aceptabilidad. Este criterio nos dar el mximo residuo permitido y esto es fundamental para la eleccin del mtodo. Estos mtodos deben estar validados y el rango elegido en la validacin del mtodo debe abarcar los posibles resultados obtenidos. Si el mtodo de rutina utilizado para la valoracin de productos es el elegido, debe ajustarse y validarse para la deteccin de trazas.

Los mtodos pueden ser especficos o inespecficos. Los mtodos especficos para la cuantificacin de droga residual pueden ser: HPLC TLC ESPECTROFOTOMETRIA ELISA ELECTROFORESIS CAPILAR

TLC tiene la desventaja del tiempo de preparacin y que el punto final no es cuantitativo para la cuantificacin de trazas. ESPECTROFOTOMETRIA no es considerado cuantitativo para este caso. La Cromatografa Liquida de Alta Performance como mtodologa de eleccin para la cuantificacin de droga residual tiene las siguientes ventajas: Especificidad Sensibilidad Cuantitativo

Desventajas: costo y el tiempo de anlisis.

La validacin del mtodo deber cumplir los siguientes ensayos, segn se decida trabajar con fines cuantitativos o con test lmite (pasa o no pasa):

Anlisis Ensayo cuantitativo de impurezas/trazas Exactitud Precisin Especificidad Lmite de deteccin Lmite de cuantificacin Linealidad Rango + + + + + + Test lmite + + -

Los anlisis con fines cuantitativos nos permiten conocer el verdadero estado de la superficie del equipo y ubicar los lugares en los cuales los niveles de droga residual son crticos.

Mtodos posibles para el anlisis del agente de limpieza: TOC Conductividad PH

Carbono Orgnico total : Las desventajas de la deteccin son: la no especificidad el tener que trabajar solo con medios acuosos y el alto costo del equipo.

Pero las ventajas son muchas: El lmite de deteccin es muy bueno Es un mtodo muy rpido Se requiere poco volumen de muestra.

En este ejemplo elegimos trabajar con conductividad ya que el agente de limpieza elegido presenta LINEALIDAD en el rango elegido. Este mtodo no es especfico pero es muy rpido, d un resultado inmediato y es econmico. Es fundamental comprobar la linealidad del agente de limpieza al trabajar en un grfico de conductividad en funcin de la concentracin.

Trazas de detergente
C 140 o n 120 d u 100 c 80 t i 60 v i 40 d a 20 d ( v) 0
-20 0 1 2 3 4 5

Concentracin (ppm)

Se deben tener todos los cuidados al trabajar con conductividad : La presencia de CO2 directamente los valores. en la muestra y la temperatura afectan

LIMITES DE ACEPTACION: Se deben definir lmites de aceptacin que hagan posible obtener un nivel de limpieza aceptable en nuestros equipos de produccin. Estos lmites variarn de producto en producto y se pueden considerar los siguientes criterios segn la FDA .

El primer criterio es en funcin de la dosis teraputica mnima diaria de A en la mxima dosis diaria de B.

Mx residuo permitido de A (mg diarios) / rea hisopada: 0,001 d x U x S D S qu significa esta frmula ? -0,001 es un factor de seguridad y depende exclusivamente de la forma farmacutica del producto. -d es la dosis teraputica mnima diaria del p.a. de A (primer producto elaborado).

Al multiplicar el factor (0,001) por la dosis mnima estoy indicando el 0,1 % de dicha dosis (0,1 % de la potencia mnima con actividad farmacolgica) -D es el mximo nmero de unidades de dosis de B (producto

elaborado en segundo lungar) por da. -U es el tamao del lote de B expresado en nmero de unidades de dosis -s: rea standard hisopada (25 cm ) -S: sumatoria de reas comunes (25 cm )

El segundo criterio indica que no ms de 10 ppm de A es permitida en B. 10 ppm x T x s S -T: tamao final del lote de B (Kg) -s: rea standard hisopada (25 cm ) -S: sum atoria de reas comunes (25 cm )

El tercer criterio indica que no debe haber trazas de residuos visibles al hisopar 25 cm2, eluir y evaporar. Estudios han determinado que en la mayora de los productos los ingredientes activos son visibles en una cantidad de 400 mcg .

Esto significa que si los dos criterios anteriores dan valores superiores a 400 mcg / rea hisopada nuestro lmite ser 400 mcg / rea. Este caso no es frecuente. El valor ms exigente resultante de aplicar los tres criterios se utilizar como lmite de aceptabilidad en la validacin de limpieza.

LIMITES MICROBIOLOGICOS Y AMBIENTALES Recuento aerbico bacteriano total: menor de 2 ufc/cm Recuento total de hongos: menor de 1 ufc/cm Control ambiental: mximo 100 ufc/cm

Por qu es importante la contaminacin microbiolgica? Porque deben existir evidencias de que la limpieza y almacenamiento de rutina del equipo no permiten la proliferacin microbiana. Muestrear: 1. una vez finalizado el procedimiento de limpieza 2. una vez cumplido el plazo de vigencia otorgado a la limpieza (fecha de caducidad)

PROTOCOLO DE VALIDACION: EJEMPLO DE APLICACION El protocolo de validacin debe escribirse y aprobarse previo a la validacin. Este debe incluir los siguientes puntos: Objetivo: ser demostrar que el procedimiento utilizado para la limpieza del reactor es eficaz y capaz de remover residuos qumicos y el agente de limpieza por debajo del lmite de aceptabilidad. Responsabilidad Descripcin del procedimiento de limpieza: adjuntar SOP

correspondiente. Agente de limpieza: Lauril Sulfato de Trietanol amina. Descripcin del equipo, en este caso nos referiremos al mezclador, emulsionador, tapa y recipiente, etc y debemos calcular la superficie del reactor ya que es usada en los clculos de los lmites de aceptabilidad. Por ejemplo: para determinar la superficie podemos considerar al reactor como un cilindro.

Superficie de un cilindro:

98,5 cm

88 cm

76 cm

S:

2 r (h+ r)

S: 2. 49,25 cm (88,0 cm + 49,25 cm) S: 42.471,6 cm 2

Descripcin del ensayo Producto elegido: Se eligi como sustancia a detectar un corticoide presente en un ungento (producto A) por ser ste una forma farmacutica difcil de eliminar y el corticoide una droga altamente activa. El producto B elegido fue un jarabe peditrico, por tener esta forma farmacutica va de administracin oral y alta dosis diaria.

Descripcin del ensayo: Como primer paso se realiza la inspeccin visual: No se deben observar residuos visibles sobre la superficie del equipo despus de que el procedimiento de limpieza se ha completado. Luego se detalla como realizar la determinacin del residuo qumico y la determinacin microbiolgica . Se debe definir la metodologa de muestreo en cada caso, lo ideal es detallar cada mtodo o hacer referencia a un SOP especfico. Por ejemplo el mtodo de Hisopado para determinacin de droga residual, mtodo de agua de enjuague para determinacin del agente de limpieza, etc.

Para la determinacin microbiolgica usaremos placas Rodac o Metodologa de Hisopado, segn sea la superficie plana o no. Se deben seleccionar los puntos crticos a muestrear por ejemplo:

TUBO 1 2 3
4

LUGAR DE MUESTREO Paleta contrarrotante del Reactor Tapa (interior) Reactor Pared Reactor Turbo mixer Sitio de apoyo de tapa Junta de tapa

5 6

El muestreo del agente de limpieza se realizar tomando muestra del enjuague adicional que se practicar con una volumen definido de agua purificada. Ej. 5 litros.

 Anlisis de las muestras El anlisis de droga residual: ser realizado por HPLC y se debe incluir el procedimiento analtico detallado o adjuntar el SOP

correspondiente. Debe figurar: -La metodologa de elusin del Hisopo en la que se incluir un blanco de extrables del Hisopo. Los picos obtenidos en el cromatograma con el blanco no deben coincidir con el pico de inters. Si se obtiene una seal que coincide con el tiempo de retencin del pico de la droga residual, nunca deber restarse el rea obtenida con el blanco al rea obtenida con las muestras ya que la suciedad de los hisopos no es reproducible cuantitativamente.

-Se producen dos errores importantes en la metodologa de muestreo y en la de extraccin de la droga del hisopo. El porcentaje de recuperacin se realiza para poder corregir los resultados por un factor calculado al determinar que cantidad de droga residual real estamos recuperando de la superficie muestreada. Debemos trabajar sobre una superficie de igual material que el reactor por ejemplo acero inoxidable, y sobre un rea de 25 cm2.

Se coloca sobre esa superficie una cantidad exacta de una solucin (de conc.conocida) de la droga buscada y luego se deja evaporar el solvente de la superficie. Se muestrea con el mtodo elegido ( en este caso Hisopado) y se eluye la droga del hisopo con idntica

metodologa que aplicamos en el ensayo de validacin. Luego de calcular la cantidad de droga encontrada la relacionamos con la cantidad real y obtendremos un factor de correccin , el que es usado en la correccin de los resultados. Recuperaciones mayores al 50-60% son ptimas.

Clculos de los lmites de aceptabilidad Del siguiente cuadro se extraen los datos necesarios que se necesitan para el clculo del lmite permitido de droga residual.

Mnima dosis (mg) de activo por da. Posologa mxima por da. Tamao del lote expresado en nro de dosis (aplicaciones). Peso total del lote (Kg). Superficie total del reactor

Ungento 0,5 mg (1 gr) 8 aplicaciones (8 gr) 200.000 200

Jarabe 186 mg (5 ml) 8 aplicaciones (40 ml) 100.000 500

2 42.471,6 cm

Primero criterio: 0,001 x 0,5 mg/da x 100000 x 25 cm2 = 0,0037 mg/25 cm2 8 42471,6 cm2

Segundo criterio: 10 x 500 x 25 cm2 = 2,94 mg/ 25 cm2 42471,6 cm2 Tercer criterio: 0,400 mg/25 cm2 El valor ms exigente para la cantidad de droga residual es 0,0037 mg/ rea hisopada y ser el lmite de aceptabilidad en el ensayo de Validacin de Limpieza. Lmite de aceptabilidad para el agente de limpieza: 10 ppm.

Datos y grficos adjuntos

T UB O

LU G AR D E MU EST R EO

RESULT ADO S OB T EN IDO S

CO R REC CIO N POR FAC T OR DE R EC U PER AC ION 60.8% 0,71 ug/rea

Paleta contrarrotante del Reactor Tapa (interior) Reactor Pared Reactor Turbo mixer Sitio de apoyo de tapa Junta de tapa

0,43 ug/rea hisopada 0,33 ug/rea hisopada 0,44 ug/rea hisopada 0,36 ug/rea hisopada 0,36 ug/rea hisopada 2,13ug/rea hisopada

2 3 4 5 6

0,54 ug/rea 0,72 ug/ rea 0,60 ug/rea 0,60 ug/rea 3,50 ug/rea

Si el ensayo de validacin cumple con el lmite establecido de droga residual y de agente de limpieza, como tambin los valores microbiolgicos y ambientales, lo consideramos aprobado. Un mnimo de tres ensayos ptimos y contnuos darn el aprobado final de la validacin del procedimiento de limpieza.

Procedimientos relacionados Limpieza del equipo Muestreo Determinacin de criterios de aceptabilidad Metodologa por HPLC Muestreo de aire (Ficha tcnica del agente de limpieza)

Bibliografa correspondiente.

Revisin: An cuando la eficacia de un proceso fue demostrada con la validacin, los resultados deberan monitorearse anualmente para realizar tendencias de anlisis. La Revisin de la Validacin debera incluirse en las auditoras internas con el objeto de chequear que los procedimientos de limpieza estn consistentemente implementados. Cualquier desviacin debe llevar a una investigacin.

Si la accin correctiva involucra un error del operador, el proceso no necesita ser revalidado, se reforzar el entrenamiento del personal involucrado.

Si la accin correctiva lleva a modificacin del procedimiento, agente de limpieza, o cambio del equipo se requiere de una nueva validacin.

Conclusiones: La enorme tarea que implica tener todos los procedimientos de limpieza validados, puede ser facilitada por una estrategia que demuestre que tenemos todos nuestros procedimientos bajo control con la validacin de un representante de cada grupo y que estamos trabajando para completar las validaciones restantes. Y principalmente que tenemos un plan que lo acredita.