MEDIOS DE USO COMN EN EL LABORATORIO

AGAR SANGRE El agar sangre es una combinacin de un agar base (agar nutritivo) con fuente proteica (digeridos trpticos, digeridos proteicos de soja) el cual tiene un agregado de 5 % de sangre ovina, (tambin puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar) con una pequea cantidad de hidratos de carbono naturales y cloruro sdico. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa tambin para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos (que es un factor de virulencia). Observando los halos hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemlisis que posee: Alfa: halos verdosos Beta: halos incoloros Gamma: inexistencia de halos.

La produccin de hemolisinas por las bacterias depende de muchos factores ambientales como pH o atmsfera de incubacin. La aportacin de caseina y peptonas de soja al agar de Tripticasa-soja hace el medio en muy nutritivo por el suministro de nitrgeno orgnico, particularmente aminocidos y pptidos de cadena ms larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el cultivo de una gran varedad de grmenes aerobios y anaerobios que crecen rpidamente, as como los del gnero Candida. Tambn permite el crecimiento de algunos grmenes exigentes como estreptococos, pneumococos, Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella. Las muestras que puedan contener Brucella o Neisseria deben incubarse en atmsfera enriquecida en CO2. Si se aade al medio el 0,5% de telurito potsico es muy til para el cultivo y aislamiento selectivo de Corynebacterium diphteriae, Candida albicans, Listeria y estreptococos. AGAR CHOCOLATE El agar chocolate es una combinacin de sangre calentada y adicionada al medio base, conteniendo hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable, no contiene factor V. Es un medio destinado para el aislamiento de Neisserias (gonococosymeningococos), Haemofilus y otros microorganismos existentes; incluso puede convertirse en unos de

los medios ms enriquecidos si le aadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre, segn las casas comerciales (Polvitex, Isovitalex, etc). El agar chocolate con Polyvitex, peromite el cultivo de la mayor parte d elos grmenes encontrados en la patologa humana o veterinaria. La siembra de lquidos cefalorraqudeos, pus, resiembra de hemocultivos, etc. se vuelve favorable en este medio ya que contiene el factor aadido. AGAR MAC CONKEY
El Agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial recomendado para el cultivo y aislamiento de microorganismos Gram negativos a partir de muestras clnicas, de alimentos, agua, productos lcteos y productos farmacuticos. En este medio se aislan y diferencian bacilos entricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa. El Agar MacConkey en su frmula original fue utilizado para diferenciar cepas de Salmonella typhosa de otros miembros del grupo coliforme. La frmula fue modificada para mejorar el crecimiento de cepas de Salmonella y Shigella y con ello tambin se mejoraron las reacciones diferenciales entre los microorganismos patgenos entricos y el grupo coliforme. El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram positivos. Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el cual es debido a una cada en el pH por la fermentacin de la Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa (como las de S. typhi, S. paratyphi y S. disentery) permanecen incoloras. sta contiene: Digerido Pancretico de Gelatina 17.0 Sales Biliares 1.5 Digerido Pptico de Tejido Animal 1.5 Cloruro de Sodio 5.0 Digerido Pancretico de Casena 1.5 Cristal Violeta 0.001 Lactosa 10.0 Agar Bacteriolgico 13.5 Rojo Neutro 0.03 pH 7.1 0.2

AGAR SCHAEDLER Este medio reductor est particularmente adaptado al cultivo de los grmenes anaerobios.

La presencia de factores de crecimiento tales como el extracto de levadura, la hemina y la vitamina K3, as como la adicin de la sangre de cordero, permiten el crecimiento de especies exigentes. Debido al elevado contenido en glucosa de este medio, la intensidad de la hemlisis de los estreptococos puede disminuir. Sembrar lo ms rpidamente posible la muestra a su llegada al laboratorio. Las muestras deben ser transportadas en un medio que garantice la anaerobiosis (Portagerm tubo o frasco). Despus de sembrar, colocar inmediatamente las placas en la jarra de anaerobiosis o bien en sistema individual. AGAR DE CZAPEK Es un medio especializado para estudios de hongos. Se utiliza de forma muy especial para estimular las caractersticas diferenciales de Aspergillus spp, lo que facilita su identificacin, y para estimular la filamentacin de Sporothrix schenckii. AGAR DE HEKTOEN Este es un medio ideal para el aislamiento selectivo de Salmonella y Shigella spp., a partir de heces y alimentos. Este contiene sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompaante, y 2 sistemas indicadores: (i) azul de bromotimol y fucsina cida como indicadores de la fermentacin de carbohidratos, y (ii) el citrato de hierro como un indicador de la formacin de SH2 a partir del tiosulfato. El desarrollo de Shigella spp., es adecuado debido a que la inhibicin de estos microorganismos por las sales biliares est disminuida por la adicin de cantidades elevadas de peptona y carbohidratos. El medio de cultivo, permite una buena diferenciacin de las colonias e inhibe el desarrollo de algunos coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa, facilitando as la identificacin de Salmonella y Shigella a partir de la muestra. AGAR CETRIMIDA Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa a partir de diversas muestras. La cetrimida (Bromuro de cetiltrimetilamonio) inhibe el crecimiento de las bacterias debido a su accin como un compuesto cuaternario de amonio. La base de Agar Cetrimida promueve la produccin de piocianina y fluoresceina que se observan con luz ultravioleta en los cultivos de Pseudomonas aeruginosa, lo que puede considerarse como prueba presuntiva para su identificacin. Posteriormente se puede realizar la prueba de oxidasa.

AGAR SALMONELLA- SHIGELLA (SS) Altamente selectivo que se utiliza para el aislamiento de Salmonella y de alguna especies de Shigella. Se dise para diferenciar fermentadores de lactosa de los que no la fermentan, proporcionando buena inhibicin de coliformes sin restringir el crecimiento de otros BGN patgenos. Salmonella y Shigella (y otros no fermentadores de lactosa) producen colonias transparentes, translcidas, mientras los pocos fermentadores de lactosa que se desarrollan dan colonias mucosas, rojizas. AGAR LEGIONELLA GVPC El agar Legionella GVPC ha sido especialmente desarrollado para el aislamiento a partir de muestras respiratorias de la mayora de las especies de Legionella, sobretodo de aqullas responsables de infecciones: Legionella pneumophila, especie ms frecuentemente involucrada (fiebre de Pontiac) y tambin L.bozemanii, L. longbeachae, L. dumoffii, L. jordanis, L. gormanii, L. anisa y L. micdadei. El carbn activado absorbe cualquier sustancia txica en el extracto de levadura y estimula el crecimiento de Legionella. El tampn ACES estabiliza el pH del medio en 6.9 para un ptimo crecimiento. Las colonias caractersticas de Legionella son azul-grisceas, pero pueden llegar a carecer de color o ser blancas encultivos envejecidos. Tienen el borde regular rosceo y, cuando se observa bajo microscopa, tienen aspecto cristalino. El medio GVPC proporciona una excelente inhibicin del crecimiento de las bacterias Grampositivas, de la mayora de las bacterias Gram-negativas, levaduras y hongos, mediante la combinacin optimizada de tres antibiticos. AGAR THAYER MARTIN El medio de Thayer Martin es utilizado principalmente para el aislamiento y desarrollo de especies de Neisseria El Medio de Thayer Martin es preparado a partir de la Base de Agar GC adicionada de Hemoglobina , de la mezcla de antibiticos VCNT ( Vancomicina, Colistina, Nistatina, Trimetoprim) y de Enriquecimiento GC. En 1970 Martin y Lester modificaron la frmula original de Thayer y Martin incrementando la concentracin de glucosa y substituyendo la mezcla original de antibiticos por el VCNT.

AGAR KANA-VANCO Se utiliza para el aislamiento rpido de Bacteroides sp. Contiene 75 g/ml de Kanamicina, que inhibe a la mayora de los bacilos aerobios, facultativos y anaerobios excepto Bacteroides, y 7,5 g/ml de Vancomicina, que inhibe a la mayora de los microorganismos 12grampositivos. Contiene tambin sangre "lacada" de conejo que permite la pigmentacin precoz de los Bacteroides sp pigmentados. Muchas cepas de B. assaccharolyticus y B. gingivalis no crecern en este medio debido a su sensibilidad a la Vancomicina. Las levaduras y otros microorganismos resistentes a la Kanamicina pueden crecer en este medio, en consecuencia, debe realizarse una tincin Gram y confirmar la tolerancia al aire de todos los organismos aislados. AGAR BBE (BACTEROIDES BILIS ESCULINA) El medio BBE es un medio selectivo para el aislamiento e identificacin presuntiva de bacterias del grupo Bacteroides fragilis. Fue presentado en 1978 por Livingston y sus colaboradores. La mayor parte de las infecciones humanas producidas por bacterias anaerobias son debidas a grmenes pertenecientes al grupo Bacteroides fragilis (B. fragilis, B. thetaiotaomicron, B. ovatus, B. distasonis y B. vulgatus). Es importante una rpida deteccin e identificacin de estos microorganismos ya que se ha observado un incremento de la resistencia a antibiticos mayor que en otros grupos de anaerobios. El agar BBE permite una inhibicin selectiva de microorganismos anaerobios facultativos y de la mayor parte de los anaerobios Gram negativos debido a que contiene amikacina y oxgall. La diferenciacin del grupo Bacteroides fragilis se basa en la hidrlisis de la esculina con produccin de esculetina y dextrosa. La esculetina reacciona con la sal de hiero presente en el medio (citrato frrico amnico) produciendo una coloracin marrn oscuro-negro rodeando a las colonias de de las cepas del grupo Bacteroides fragilis. Contiene Amikacina que inhibe el desarrollo de los microorganismos aerobios, Bilis que inhibe a la mayora de anaerobios excepto los del grupo B. fragilis y otras pocas especies, y Esculina que es til para la deteccin de este grupo de microorganismos ya que por lo general son Esculina positivos. Tambin pueden crecer en este medio: Fusobacterium mortiferum, Klebsiella pneumoniae, Enterococcus sp, levaduras y algunos otros microorganismos. AGAR LOWENSTEIN-JENSEN Es esta una base para la preparacin de varios medios destinados al aislamiento, cultivo y diferenciacin de micobacterias. Los nutrientes de este medio basal, ms los aportados por el agregado de la mezcla de huevos, constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias. El verde de malaquita inhibe a gran parte de la flora acompaante. Con el agregado de glicerina

se estimula el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de M. bovis es inhibido. Agregando un 5% de NaCl, se pueden seleccionar micobacterias tolerantes a la sal, como es el caso de M. smegmatis. AGAR BIGGY El Agar Biggy (por sus siglas en ingls Bismuth-Glucose-Glycine-Yeast) es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de especies de Candida. Tambin es conocido como Agar de Nickerson. El Agar Biggy es una modificacin de la frmula desarrollada por Nickerson quin realiz estudios sobre la reduccin de sulfito por especies de Candida. La diferenciacin est basada en la morfologa colonial y la pigmentacin tpica que se presenta en este medio. La reduccin del sulfito de bismuto se manifiesta en una pigmentacin de la colonia que en ocasiones difunde en el medio. En este medio el extracto de levadura proporciona vitaminas y aminocidos. La glicina es utilizada para estimular el crecimiento. La dextrosa es la fuente de carbono. El indicador sulfito de bismuto acta tambin como un inhibidor del desarrollo bacteriano. El agar es adicionado como agente solidificante

LIQUIDOS

CALDO TIOGLICOLATO Es el caldo de enriquecimiento ms utilizado en Microbiologa. Contiene 0,075 % de Agar para evitar que las corrientes de conveccin transporten el oxgeno de la superficie a toda la masa del caldo. El cido tiogliclico acta como agente reductor, disminuyendo aun ms el potencial de xido-reduccin del medio. Con el agregado de muchos factores nutrientes (Casena, extractos de Levadura y Carne, citaminas, etc.), el medio permite el desarrollo de la mayor parte de las bacterias patgenas. Hay distintas frmulas modificadas en las que se han incluido otros componentes: un indicador de xido-reduccin (Resazurina), Glucosa, Vitamina K1 y Hemina.

CALDO INFUSION CEREBRO CORAZON El medio de Infusin Cerebro Corazn es utilizado para el cultivo de microorganismos fastidiosos como estreptococos,neumococos y meningococos. Este medio tambin es conocido como BHI por sus siglas en ingls. El medio de Infusin Cerebro Corazn es una modificacin de las formulaciones desarrolladas por Rosenow y Hayden en lasque se adicion infusin de cerebro de ternera y difosfato de sodio.El medio de Infusin Cerebro Corazn est especificado en varios procedimientos estndares para la industria alimenticia y elanlisis de aguas. Tambin es recomendado por la NCCLS para preparar el inculo para las pruebas de susceptibilidadantimicrobiana. En este medio la infusin de carne de corazn y de cerebro de ternera as como la peptona proveen la fuente de carbono,nitrgeno sulfuro y vitaminas. La dextrosa acta como fuente de energa. El cloruro de sodio mantiene el balance osmticodel medio. El fosfato disdico acta como buffer. CALDO LACTOSADO El Caldo Lactosado es utilizado para el cultivo de Salmonella y organismos coliformes en agua, productos lcteos, alimentos y productos farmacuticos. El Caldo Lactosado frecuentemente es utilizado como un medio de pre-enriquecimiento en la bsqueda de Salmonella en alimentos y derivados lcteos. En alimentos deshidratados o procesados puedenencontrarse salmonellas daadas y en bajo nmero; adicionalmente, la presencia de otras bacterias o componentes de los alimentos puede enmascarar el crecimiento y recuperacin de las mismas. El preenriquecimiento en un medio no selectivo como el Caldo Lactosado, permite reparar el dao celular y diluir las sustancias txicas e inhibidoras proporcionando factores nutricionales especialmente para el desarrollo de Salmonella. El Caldo Lactosado est incluido en varios procedimientos de los Mtodos Estndar para elanlisis de alimentos, lcteos y otros materiales. En este medio el extracto de carne y la peptona proporcionan la fuente de carbono y nitrgeno. La lactosa es el carbohidrato fermentable. CALDO ROJO DE FENOL Y SACAROSA El Caldo Rojo de Fenol y Sacarosa es utilizado para la diferenciacin de cultivos puros, en base a su capacidad para fermentar la sacarosa. La capacidad de las bacterias de fermentar carbohidratos es utilizada como un criterio para su identificacin. El medio provee los requerimientos nutricionales para el crecimiento de los microorganismos y contiene Rojo de Fenol como indicador de pH. Este indicador fue utilizado por Vera obtenindose resultados altamente confiables. La peptona provee la fuente de nitrgeno para el buen desarrollo de los microorganismos, el Cloruro de Sodio mantiene el balance osmtico del medio y el Rojo de Fenol acta como indicador, virando de color rojo-naranja a amarillo en presencia del cido producido por la fermentacin del azcar.

La presencia de un color amarillo indica la una reaccin positiva para la fermentacin de la Sacarosa. La presencia de una o ms burbujas en la campana de Durham indica una reaccin positiva para la produccin de gas. CALDO SOYA TRIPTICASEINA El Caldo Soya Tripticasena es un medio utilizado para cultivar una amplia variedad de microorganismos. Formulado de acuerdo con la frmula especificada en la Farmacopea XXIII USP y al Cdigo de Regulacin Federal 21CF para pruebas de esterilidad de productos farmacuticos y biolgicos . El Caldo de Soya Tripticasena provee un excelente soporte de crecimiento para una amplia variedad de microorganismos. Este medio es recomendado para el cultivo de Bruecellas y bajo condiciones de anaerobiosis, para el cultivo de Clostridios. Garrison y Hedgecook lo recomiendan para el cultivo de H. capsulatum. Adicionado de 6.5% de Cloruro de Sodio puede ser utilizado para el crecimiento selectivo de estreptococos del grupo D. Este medio es recomendado por la Farmacopea para procedimientos de pruebas de esterilidad en productos biolgicos y farmacuticos. En este medio las peptonas proveen la fuente de nitrgeno . La Dextrosa provee la fuente de carbohidratos. El Cloruro de Sodio tiene su funcin en el balance osmtico. El Fosfato Dipotsico acta como buffer.