La Importancia Pericial Del Estudio
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La Importancia Pericial Del Estudio
Volumen Volume
60
Nmero Number
Septiembre-Octubre September-October
2003
Artculo:
La importancia pericial del estudio comparativo histomorfolgico del hueso humano y de otros gneros
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Investigacin
Vol. LX, No. 5 Septiembre-Octubre 2003 pp 173-186
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La importancia pericial del estudio comparativo histomorfolgico del hueso humano y de otros gneros
Saturnino Aparecido Ramalho,* Eduardo Daruge, Belkys Valentina De La Cruz, Mnica Aparecida Francesquini, Svio D.R. Pereira, Luz Francesquini Jnior, Eduardo Daruge Jnior,|| Glacia M.B. Ambrosano, Cla M. RizzattiBarbosa, **
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Resumen
Es un hecho notable que la identificacin de huesos o fragmentos de stos, contribuye sobremanera en el esclarecimiento de problemas judiciales. Cuando no se dispone del esqueleto completo o de huesos ntegros, el anlisis de caractersticas histomorfolgicas seas se torna un factor decisivo en la elucidacin de ciertos casos de identificacin. El propsito del presente estudio fue ampliar o buscar nuevas posibilidades en la identificacin de fragmentos seos de seres humanos y de otros 19 mamferos. As, analizamos los sistemas de Havers, los canales de Havers, los osteocitos y los canalculos de los osteocitos, del hombre, anta, aracamb, buey, cabra, perro monts, perro, capivara, carnero, cateto, caballo, conejo, cutia, gato, mono-clavo, jaguar, puerco espn, cerdo, oso hormiguero y venado. Fueron r e a l i z a dos cortes histolgicos por desgaste del tejido seo de cada mamfero estudiado, en sentido longitudinal y transversal; y analizados con microscopio de luz. Los resultados demuestran con claridad y precisin que el anlisis histomorfolgico de las estructuras citadas posibilita la identificacin y diferenciacin de los gneros estudiados o excluyen la posibilidad de que fragmentos seos examinados pertenezcan al gnero Homo sapiens. Palabras clave: Hueso, histologa, forma, identificacin, forense.
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Doctor en Radiologa, rea de Concentracin en Odontologa Legal y Deontologa. Profesor de la Universidad Camilo Castelo BrancoUNICASTELO. Prof. Titular en Odontologa Legal. Maestro(a) en Odontologa Legal y Deontologa. Doctorado en Radiologa, rea de Concentracin en Odontologa Legal y Deontologa. Doctor en Clnicas Odontolgicas Integradas. Coordinador del Curso de Odontologa Legal y Deontologa. Profesora, Doctora en Bioestadstica. Profesora, Doctora en Clnica Odontolgica.
Abstract
It is well known that the identification of the bone or a bone fragment means an extremely valuable contribution when the clarification of juridical issues is being performed. When the complete skeleton or whole bones are not available, the analysis of the osseous histomorphologic characteristics becomes a decisive factor for the elucidation of certain cases of identification. The present study has been conducted aiming at enlarging or searching for new possibilities for identifying osseous fragments of human beings and of some nineteen mammals with characteristics closest to those of the human beings. Thus, the systems and the canals of Havers as well as the osteocytes and the canaliculi of the osteocytes of the human beings, anta, aracamb, ox, goat, grison, dog, capivara, sheep, cateto, horse, rabbit, agouti, cat, capuchin-monkey, puma, hedgehog, pig, tamandu-bandeira (the great anteater), and the veado-cervo (any deer) have been analyzed. The osseous tissue of the mammals have been histologically cut by abrasion in the longitudinal and transversal way and analyzed under light microscopy. The results have clearly and accurately shown that the histomorphologic analysis of the above mentioned structures makes it possible either to identify and differentiate the genders studied or to exclude the possibility that the osseous fragment may belong to the gender Homo sapiens.
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MG Ramalho SA y cols. La importancia pericial del estudio comparativo histomorfolgico del hueso humano y de otros gneros
Introducci n
Al igual que otras ciencias, la odontologa legal se ha perfeccionado en las ltimas dcadas, auxiliando a la sociedad en lo que se refiere a los procesos de identificacin, solucionando graves problemas judiciales y sociales. El perito odonto-legista necesita de conocimientos tcnico-odontolgicos,1 as como del auxilio de otras ciencias como el derecho, antropologa, qumica, fsica, medicina entre otras, para subsidiar en los problemas de inters judicial, tornando fidedignas sus acciones y afirmaciones. Aunque no de manera rutinaria, los peritos se ven en la necesidad de investigar e identificar la naturaleza de restos mineralizados que pueden ser de hueso humano o no, con la finalidad de esclarecer hechos de inters judicial. Cuando una pieza sea se encuentra ntegra, aunque sustradode-m.e.d.i.g.r.a.p.h.i.c aislada, su identificacin se hace posible considerando sus cihpargidemedodabor aspectos morfolgicos y anatmicos, diferenciando los diversos gneros animales. Muchas veces, el material a ser periciado no se encuentra ntegro o se encuentra modificado por agentes fsicos, biolgicos o qumicos, as que para analizarlos se hace necesario una evaluacin histomorfolgica diferencial para cada gnero animal. Las referencias sobre este asunto son extremadamente limitadas, lo que demuestra la necesidad de realizar un estudio ms amplio y profundo sobre el anlisis comparativo histomorfolgico de los tejidos seos humanos y de animales. Arbenz;2 Fvero;3 Frana;4 Calabuig,5 estudiaron caractersticas diferenciales, resaltando de esta forma su importancia en investigaciones periciales. El estudio de Owsley et al.,6 permiti una diferenciacin entre hueso humano y de venado, corroborando directamente con la proposicin de este trabajo. Lo mismo puede decirse de los trabajos de Ramalho & Daruge.7 Algunos trabajos como los de Snow & Luke;8 Sopher,9 relatan identificaciones positivas por medio de caracteres morfolgicos y hallazgos radiogrficos seos. Getty10 relat sobre la arquitectura sea, afirmando que sta puede ser estudiada en cortes histolgicos longitudinales y transversales. Buchner11 resalt la importancia de la identificacin de restos humanos, destacando que a pesar de la existencia de diversos mtodos utilizados para identificacin, todos ellos estn basados en un proceso bsico: la comparacin, dependiendo generalmente de registros hechos anteriormente a la muerte. Autores como Aznar, Goldbach; Hinuber; Carvalho; citados por Arbenz;2 Whittaker & MacDonald;12 Junqueira & Carneiro;13 Hall,14 afirman que por medio del anlisis de los sistemas y canalculos de Havers y por los osteocitos, es posible diferenciar huesos humanos de otras especies.
El presente estudio tiene por objetivo, resaltar la importancia pericial del estudio comparativo histomorfolgico del hueso humano y de otros animales.
Proposici n
El objetivo de este estudio fue ampliar o buscar nuevas posibilidades en la identificacin de fragmentos seos pertenecientes a seres humanos y otros mamferos. Fueron analizadas las caractersticas morfolgicas del tejido seo, como el sistema de Havers, canales de Havers, osteocitos y sus canalculos, con el propsito de identificar evidencias de este tejido en cada mamfero estudiado, pudiendo auxiliar en la identificacin o diferenciacin entre remanentes seos humanos y de otras especies. La importancia pericial de este estudio se verifica :ropfragmentos odarobale FDP cuando, algunas veces, son encontrados mineralizados que pueden ser de tejido seo o dental, en VC ed AS, cidemihparG los casos de grandes tragedias en las que exista una gran cantidad de personas no identificadas, as como en situaciones en que, restos mineralizadosarap presentes para examen, estn carbonizados y calcinados, constituyenacidmoiB arutaretiL do los nicos indicios restantes:cihpargideM para la identificacin de sustradode-m.e.d.i.g.r.a.p.h.i.c una o ms personas o para excluir la posibilidad de tratarse de fragmentos de huesos humanos.
Material y m todos
Para la realizacin del siguiente estudio fueron utilizados, adems de hueso humano, huesos de tres animales de cada especie, investigando un hueso largo (tibia, peron, radio y hmero) de cada uno de los siguientes mamferos (Cuadro 1): Los huesos humanos fueron obtenidos en el Departamento de Morfologa de la Facultad de Odontologa de la Pontificia Universidad Catlica de Campinas, todos de individuos adultos y leucodermas. Los huesos restantes fueron obtenidos de animales adultos muertos, algunos en estado de putrefaccin, otros ya esqueletizados. Luego de la obtencin de estos huesos, fueron lavados en agua corriente e inmersos en solucin de hipoclorito de sodio al 0.5% por 10 minutos para remover partculas de tejido blando adheridas. Posteriormente, fueron lavados en agua corriente removiendo as, vestigios de la solucin. De cada hueso fueron obtenidas dos lminas histolgicas por desgaste, realizndose cortes histolgicos en sentido longitudinal y transversal de cada hueso en la porcin de la difisis del hueso largo, siguiendo la tcnica preconizada por Ramalho & Daruge,7 con algunas adaptaciones que permitieron una mayor nitidez. La primera etapa fue la de corte del hueso, utilizando disco diamantado de 7/8 de pulgada, montado en man-
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Cuadro I. Relacin de los nombres especficos de cada animal utilizado Hombre Anta Aracamb Buey Cabra Perro monts Perro Capivara Carnero Cateto Caballo Conejo Cutia Gato Mono-clavo Jaguar Puerco espn Cerdo Oso hormiguero Venado-Ciervo Homo sapiens Tapirus americanus Grisson vittatus brasilienses Bos taurus Capra hircus Cerdocyon thous Canis familiaris Hydrochoerus hidrochaeris Ovis aries Tayassu tajacu Equus caballus Oryctolagus cuniculus Dasiprocta acuti Felis cattus Cebus apella Felis uncia Chaetomys gray Sus domesticus Myrmecophaga tridactyla Blastocerus dichotomus
seos llenos de aire, eliminando el uso de coloraciones. Por poseer ndice de refraccin diferente al Araldite y del vidrio, estas formaciones se mostraron en negro, obtenindose as gran nitidez. Las lminas fueron observadas a travs de fotomicroscopio Zeiss, modelo MC 80 DX, con filtro verde y objetivas de 10x y 40x y 100x (inmersin) veces, obtenindose fotomicrografas con pelcula en blanco y negro ILFORD-50 ISO, cuyos aumentos fueron aproximadamente 70, 280 y 700 veces. De los 60 huesos analizados pertenecientes a seres humanos y de los 19 animales restantes, fueron obtenidas 120 lminas histolgicas, siendo seleccionados y fotomicrografiados apenas los campos mejores y ms ntidos, obtenindose 3 fotomicrografas de cada corte totalizando 120 fotomicrografas numeradas de 01 al 60.
Resultados
Anlisis e interpretacin de las fotomicrografas Los exmenes histolgicos periciales fueron analizados a partir de las fotomicrografas de los huesos en cortes longitudinales y transversales con aumentos de 70, 280 y 700 veces, para cada corte. Las interpretaciones se encuentran disponibles en el cuadro II.
dril de motor odontolgico con chorros de agua con la finalidad de humedecer el hueso para no ocasionar microfracturas o quemaduras, obtenindose de esta manera, muestras de 1 mm de grosor. Para el desgaste de estas muestras se utiliz lija de esmeril nmeros: 80, 100, 240, 400, 500, 600 y 1200, lijando en ambos lados de las muestras (tambin humedecindolas) para mantener la uniformidad. Se obtuvieron muestras de 10 a 12 micras de grosor que fueron pulidas con piedra de Arkansas y Blanco de Espaa, humedecindolas con agua. Tras cada paso, las muestras eran observadas al microscopio de luz para verificarse la presencia de posibles fallas o fracturas. Las muestras fueron lavadas con agua y detergente (aquil benzeno sulfanato de sodio) al 0.5% por 20 minutos y posteriormente secadas y deshidratadas con alcohol por 30 minutos. Luego de un nuevo secado en estufa a 37C por 24 horas, cada pieza era baada en xilol por diez minutos para aclararlas. De esta forma se dio inicio al montaje de las muestras utilizndose lmina de vidrio, laminilla y resina epoxi con polimercaptanos (Araldite). Cada muestra sea fue colocada sobre una lmina vertindose en ellas una gota de Araldite, cubiertas con una laminilla, presionndolas levemente (para evitar la formacin de burbujas de aire) y llevadas a la estufa a 37 C por 24 horas para la absorcin de Araldite. Destacamos que fue usada Araldite por poseer alta densidad, lo que mantiene las cavidades y canalculos
Discusi n
Una buena parte de la literatura consultada en este trabajo, aborda los caracteres histomorfolgicos de los huesos humanos como el sistema y canales de Havers, los osteocitos y sus canalculos. Entre estos autores estn Dyce et al.,15 Junqueira & Carneiro13 y Stevens et al.,16 cuyas afirmaciones se corroboran con nuestros hallazgos. Trabajos como los de Arbenz (1988) Whittaker & MacDonald,12 Fvero,3 Frana4 y Calabuig5 nos ofrecen subsidios en la histomorfologa de los tejidos seos con finalidad pericial, permitiendo la comparacin con los resultados obtenidos en este trabajo, por presentar metodologas semejantes, confirmando las pesquisas en lo que se refiere a las formas del sistema de Havers, los dimetros de los canales de Havers, forma, distribucin y disposicin de los osteocitos y las caractersticas de distribucin, forma, nmero, cantidad de anastosmosis de los canalculos presentes en los osteocitos. Las tcnicas de preparacin y anlisis microscpico preconizados por Ramalho & Daruge7 fueron seguidos, con excepcin de la utilizacin del Blsamo de Canad, sustituido por Araldite, en el montaje de las lminas, dando ste mayor nitidez.
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Figura 3. Corte longitudinal del hueso del leopardo. Aumento 700 x Figura 6. Corte transversal del hueso del Aracamb. Aumento 700 x
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Figura 10. Corte transversal del hueso del Perro monts. Aumento 700 x
Figura 11. Corte longitudinal del hueso del Oso-hormiguero. Aumento 700 x
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Figura 9. Corte longitudinal del hueso del Perro monts. Aumento 700 x Figura 12. Corte transversal del hueso del Oso-hormiguero. Aumento 700 x
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Figura 13. Corte longitudinal del hueso del Cerdo. Aumento 700 x
Figura 14. Corte transversal del hueso del Cerdo. Aumento 700 x
Figura 17. Corte longitudinal del hueso del Buey. Aumento 700 x
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Figura 15. Corte longitudinal del hueso humano. Aumento 700 x Figura 18. Corte transversal del hueso del Buey. Aumento 700 x
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Figura 22. Corte transversal del hueso del Puerco-espn. Aumento 700 x
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Figura 21. Corte longitudinal del hueso del Puerco-espn. Aumento 700 x Figura 24. Corte longitudinal del hueso de la Cutia. Aumento 700 x
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Figura 27. Corte longitudinal del hueso de Conejo. Aumento 700 x Figura 30. Corte longitudinal del hueso de Perro. Aumento 700 x
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Figura 31. Corte transversal del hueso del Cateto. Aumento 700 x
Figura 34. Corte longitudinal del hueso del Mono. Aumento 700 x
Figura 32. Corte longitudinal del hueso del Cateto. Aumento 700 x
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Figura 33. Corte transversal del hueso del Mono. Aumento 700 x Figura 36. Corte longitudinal del hueso de Caballo. Aumento 700 x
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Cuadro II. Resumen de los anlisis e interpretaciones de los caracteres histomorfolgicos Sistema de Havers Hombre Distribucin homognea Formas elpticas Dimetros amplios Canales de Havers Dimetros amplios Poco numerosos Osteocitos Distribucin regular Gran cantidad Formas fusiformes Dispuestos en camadas En gran nmero en las lamelas Canalculos Numerosos Largos Rectilneos Finos Regulares Muchas anastomosis No numerosos Pequeos Cortos Sinuosos
Anta
Distribucin irregular Pequea cantidad Formas fusiformes Dispuestos en camadas En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin irregular Pequea cantidad Formas fusiformes Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin irregular Pequea cantidad Formas ovaladas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin irregular Pequea cantidad Formas elpticas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribuicin irregular Gran cantidad Formas ovaladas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin irregular Gran cantidad Dispuestos en camadas y alineados Formas ovaladas Distribucin irregular Gran cantidad Formas arredondadas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas
Aracambe
Buey
Cabra
Perro monts
Perro
Capivara
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Osteocitos Distribuicin regular Gran cantidad Formas elpticas Dispuestos linearmente en camadas En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin irregular Pequea cantidad Formas ovaladas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin irregular Pequea cantidad Formas espinosas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas
Canalculos No numerosos Cortos Finos Irregulares Aspectos arborescentes Pocas anastomosis Finos Sinuosos Ramificados Pocas anastomosis
Cateto
Dimetros pequeos
Caballo
No numerosos Cortos Irregulares Ramificados Sinuosos Finos Pocas anastomosis No numerosos Finos Poco ramificados Pocas anastomosis
Conejo
Dimetros pequeos
Distribucin regular Gran cantidad Formas espinosas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin regular Cantidad mayor que en el hombre Formas espinosas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin regular Pequea cantidad Formas ovaladas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin semejante al hombre Gran cantidad Formas espinosas Dispuestos en camada superpuestas En pequeos nmeros en las lamelas
Cutia
Gato
Dimetros pequeos
Mono-clavo
Dimetros amplios
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Osteocitos Distribucin irregular Pequea cantidad Gruesos Formas fusiformes Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribuicin regular Gran cantidad Formas ovaladas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin regular Gran cantidad Formas ovaladas Dispuestos irregularmente En pequeos nmeros en las lamelas Distribucin irregular Pequea cantidad Formas fusiformes Dispuestos irregularmente En gran nmero en las lamelas Distribucin irregular Pequea cantidad Formas ovaladas Dispuestos en lneas circulares En pequeos nmeros en las lamelas
Puerco espn
Cerdo
No numerosos Cortos Ramificados Irradiados Muchas anastomosis No numerosos Gruesos Rectilneos No irradiados Pocas anastomosis No numerosos Finos Cortos Irradiados
Oso hormiguero
Dimetros pequeos
VenadoCiervo
Dimetros pequeos
Owsley et al.6 relatan un caso pericial en la diferenciacin de los fragmentos seos humanos y de venado utilizando las mismas consideraciones utilizadas en este trabajo, o sea, las caractersticas histomorfolgicas del tejido seo. En el presente estudio, a travs de la microscopia de luz, identificamos las caractersticas histomorfolgicas de los sistemas de Havers, de los canales de Havers, de los osteocitos y de sus canalculos en los huesos humanos y de otros 19 gneros. De esta manera fue posible establecer un patrn de las diferencias seas histomorfolgicas de cada gnero, y entre stos y el gnero humano. Los resultados obtenidos son de extrema vala para la identificacin y diferenciacin de los gneros estudiados y de stos con el hombre, pudiendo ser utilizados en los institutos y servicios de antropologa, por utilizar tcnicas sencillas, de fcil ejecucin, exigiendo equipamientos bsicos y de bajo costo, como lo es el microscopio de luz.
Conclusi n
Por medio del estudio histomorfolgico del tejido seo del hombre y de los dems gneros se concluye que: 1. La distribucin de los sistemas de Havers en la matriz sea es un aspecto que lleva a la diferenciacin de los gneros estudiados. 2. Caractersticas de los sistemas de Havers, que slo en el hombre presenta forma elptica, permite identificarlo con precisin dentro de los dems gneros analizados. 3. El dimetro de los sistemas de Havers en el hombre es amplio y contrasta as, con la mayora de los animales, siendo un importante diferencial. 4. El anlisis de los dimetros de los canales de Havers evidencian caractersticas que auxilian en la diferenciacin o identificacin del gnero, as como la cantidad de canales de Havers por campo fotomicrografiados.
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5. Por la distribucin de los osteocitos en la matriz sea podemos afirmar que existen caractersticas propias de cada gnero, la cantidad de osteocitos en la matriz sea se presenta en gran cantidad en el hombre y en pequea cantidad en los animales, factor altamente relevante en las identificaciones. 6. Las formas de los osteocitos proporcionan caracteres propios y singulares a cada gnero y la disposicin de los osteocitos en la matriz sea, de forma superpuesta y en camadas (recordando el epitelio) en el hombre, se le distingue de los dems gneros analizados. 7. El anlisis de la distribucin, forma, nmero y anastomosis de los canalculos presentes en los osteocitos, posibilita la identificacin y diferenciacin del hueso de los gneros estudiados. 8. Verificamos en este estudio que, si no conseguimos identificar el animal al que pertenece un hueso o fragmento seo sometido a examen pericial, es perfectamente posible excluir la posibilidad de que este material pertenezca a la especie Homo sapiens, cruzando caractersticas histomorfolgicas de las estructuras estudiadas.
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Lecturas complementarias
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