Extraccion de Pigmentos Vegetales

PRACTICA DE LABORATORIO QUIMICA
INDUSTRIAL II PROFESOR: NANCY

FUKUDA KAGAMI
LUIS ANGEL MERMA SAUE
ULTAD DE INGENIERIA INDUSTRIAL Y SISTEM
UNIVERSID
AD
NACIONAL
DE
INGENIERIA
EXTRACCION DE PIGMENTOS VEGETALES

OBJETIVOS
Extraer y separar diferentes pigmentos vegetales

Escoger el material adecuado para extraer clorofilas
Aplicar experimentalmente la extraccin por solventes
Empacar y desarrollar una columna de fraccionamiento
Indicar los diferentes pigmentos fotosintticos en la columna de acuerdo a su
polaridad
FUNDAMENTO TEORICO
La clorofila es un pigmento de las plantas, que les proporciona su color verde y que
absorbe la luz necesaria para la fotosntesis. La clorofila absorbe principalmente luz
violeta roja y azul y refleja luz verde. La abundancia de clorofila en hojas y su
ocasional presencia en otros tejidos vegetales es la causa de que esas partes de las
plantas aparezcan verdes, pero en algunas hojas la clorofila es enmascarada por
otros pigmentos. La extraccin y reconocimiento de estos pigmentos es interesante
para es estudio y conocimiento de sus propiedades.
Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son molculas
qumicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez. El
color de un pigmento depende de la absorcin selectiva de ciertas longitudes de
onda de la luz y de la reflexin de otras. Constituyen el sustrato fisicoqumico donde
se asienta el proceso fotosinttico. Hay diversas clases de pigmentos:
Principales:
Clorofilas (a, b, c, d y bacterioclorofilas) de coloracin verde.
Accesorios:
Carotenoides (carotenos y xantofilas) de coloracin amarilla y roja.
Ficobilinas de coloracin azul y roja presentes en las algas verdeazuladas, que
comprenden el filo de los Cianofitos. La Clorofila, es el pigmento que da el color
verde a los vegetales y que se encarga de absorber la luz necesaria para realizar la
fotosntesis, proceso que posibilita la sntesis de sustancias orgnicas a partir de las
inorgnicas (CO2, H2O y sales minerales), mediante la transformacin de la energa
luminosa en energa qumica. La clorofila absorbe sobre todo la luz roja, violeta y
azul, y refleja la verde. Generalmente la abundancia de clorofila en las hojas y su
presencia ocasional en otros tejidos vegetales, como los tallos, tien de verde estas
partes de las plantas.
En ocasiones, la presencia de clorofila no es tan patente al descomponerse y ocupar
su lugar otros pigmentos de origen isoprnico tambin presentes en los plastos
como son los carotenos (alfa, beta y gamma) y las Xantofilas.
Las algas verdeazuladas contienen la misma clase de clorofila que las plantas
superiores, pero la ausencia de cloroplastos hace que se distribuya por toda la
clula. Con frecuencia otros pigmentos como la ficobilina (presente tambin en los
rodfitos) enmascaran la clorofila y confieren a estas a las clulas, un color azulado

o rojizo. Su funcin es captar la luz y transferirla a la clorofila. Las clorofilas
presentan una estructura molecular de gran tamao de tipo porfirinico, estando
formada en su mayor parte por carbono e hidrgeno; constituyendo un anillo
tetrapirrolico ocupado en el centro por un nico tomo de magnesio, rodeado por un
grupo de tomos que contienen nitrgeno. Del anillo parte una larga cadena de 20
tomos de carbono, denominada fitol que constituye el punto de anclaje de la
molcula de clorofila a la membrana interna del cloroplasto, el orgnulo celular
donde tiene lugar la fotosntesis. Cuando la molcula de clorofila absorbe un fotn,
sus electrones se excitan elevndose a un nivel de energa superior. Esto es el
punto de partida en el cloroplasto de una secuencia compleja de reacciones
qumicas que dan lugar al almacenamiento de energa en forma de enlaces
qumicos. Los diversos tipos de clorofilas existentes, se diferencian en pequeos
detalles de su estructura molecular y que absorben longitudes de onda luminosas
algo distintas. Por cromatografa se pueden separar cuatro clorofilas distintas:
La clorofila A constituye de manera aproximada el 75% de toda la clorofila de las
plantas verdes, estando presente tambin en las algas verdeazuladas y en clulas
fotosintticas ms complejas.
La clorofila B es un pigmento accesorio presente en vegetales y otras clulas
fotosintticas complejas; absorbe luz de una longitud de onda diferente y transfiere
la energa a la clorofila A, que se encarga de transformarla en energa qumica.
Las clorofilas C y la D son propias de algas y bacterias. Las clorofilas actan como
catalizadores, es decir, como sustancias que aceleran o facilitan las reacciones
qumicas, pero que no se agotan en las mismas. Entre los carotenoides hay tambin
muchos catalizadores e intervienen como pigmentos accesorios en la fotosntesis,
transfieren a la clorofila la energa de la luz que absorben para su conversin en
energa qumica.
PIGMENTOS VEGETALES
Los colores que presentan los vegetales son debidos a unos compuestos qumicos
llamados pigmentos. El color que presenta un determinado rgano vegetal depende
generalmente del predominio de uno u otro pigmento o la combinacin de ellos.
Adems, algunos de los pigmentos que condicionan el color estn estrechamente
ligados a las actividades fisiolgicas del propio vegetal. El color verde en los
vegetales es debido a la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados
llamados clorofila a y clorofila b. Se encuentran prcticamente en todas las plantas
con semilla, helechos, musgos y algas. Tambin, aunque aparentemente falten en
algunas hojas de color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras sustancias
colorantes de estas, puede comprobarse incluso all la presencia de las clorofilas,
que estaban enmascaradas por los dems pigmentos. Asociados con las clorofilas,
existen tambin en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y amarilloanaranjados que son los xantofilas y carotenos.
PIGMENTOS FOTOSINTTICOS
Entre todos los caracteres ms externos de los vegetales, el ms notable y

caracterstico es probablemente el color. El color no es nicamente un carcter
llamativo de la vegetacin, sino que, adems, algunos de los pigmentos que lo
condicionan estn estrechamente ligados a las actividades fisiolgicas del propio
vegetal. Por consiguiente, el estudio de cmo las plantas viven y se desarrollan
requieren el previo conocimiento de los pigmentos vegetales.
Qu son los pigmentos?

Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los matices y combinaciones de
colores del espectro, existe un predominio general de los colores primarios: verde,
amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los vegetales por determinados
compuestos qumicos definidos, llamados pigmentos. El color particular que
presenta un determinado rgano vegetal depende generalmente del predominio de
uno u otro o la combinacin de ellos. Se debe tener claro que cuando un vegetal
presenta un color blanco, es debido a la falta de tales pigmentos. La luz solar que
incide sobre ellas no es absorbida selectivamente como ocurre en las partes
coloreadas, sino que es transmitida o reflejada prcticamente sin sufrir
modificacin.
Las Clorofilas.
El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a la
presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados clorofila a y
clorofila b. Se encuentran prcticamente en todas las plantas con semilla, helechos,
musgos y algas. Pueden formarse en las races, tallos, hojas y frutos a condicin de
que estos rganos estn situados por encima del suelo y queden expuestos a la luz.
Tambin, aunque aparentemente falten en algunas hojas de color rojo o amarillo,
cuando se extraen las otras sustancias colorantes de estas, puede comprobarse
incluso all la presencia de las clorofilas, que estaban enmascaradas por los dems
pigmentos.
Dnde estn los pigmentos?
Estos pigmentos se encuentran en el interior de las clulas vegetales
especficamente en una organela llamada cloroplasto. Los cloroplastos son
simplemente plstidos que contienen pigmentos cloroflicos. Los compuestos
cloroflicos estn ligados qumicamente con las estructuras internas del cloroplasto
(membrana tilacoides) y se hallan retenidos en estado coloidal. Asociados con las
clorofilas, existen tambin en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y
amarillo-anaranjados que son las xantofilas y carotenides.
Cmo se dividen los solventes?
Los pigmentos cloroflicos son insolubles en el solvente universal llamado agua. Pero
s son solubles (afinidad qumica) en solventes orgnicos como por ejemplo alcohol
etlico y acetona. A los solventes que extraen simultneamente todos los pigmentos
de la hoja se los suele llamar extractantes. Existen otros solventes que presentan
afinidad por algunos pigmentos y se los llama separadores, como por ejemplo el
tetracloruro de carbono y el ter de petrleo.
MATERIALES Y EQUIPOS
2 vasos de precipitado de 250 ml

1 vaso de precipitado de 150mL
1 probeta de 100ml
2 botes
1 embudo de separacin
1 matraz
1 pipeta de 1ml, 5ml y 10ml
1 pipeta
Papel filtro
1 mechero
1 luna de vidrio
1 embudo de filtracin
1 hielo
Hojas de espinaca
Parrilla elctrica
Balanza
Columna cromotografica
REACTIVOS QUMICOS:
metanol 90%
ter di etlico 10%
metanol 70%
ter di etlico 30%
ter di etlico
ter de petrleo
NaCl solucin acuosa saturada
KOH en metanol al 30%
NaCl al 10%
azcar glass (como absorbente)
N-propanol en ter de petrleo al 0.5%
A.- EXTRACCIN
Tomar dos hojas verdes y tiernas de espinacas
1. Separar los pecolos y venas grandes de las hojas y picarlas
2. Colocarlas en un vaso de precipitado de 250ml con 50ml de agua hirviendo por
dos minutos
3. Pasar el vaso a un bao helado y enfriar, descartar el agua 10
4. Extraer los pigmentos de las hojas con 50ml de una mezcla de metanol 90% y
ter di etlico 10%. Calentar un poco en bao mara (5 min)
5. Repetir la extraccin con 50ml de metanol al 70% y ter di etlico 30%. Calentar
durante 5 min. (Las hojas quedan incoloras)
6. Cambiar los extractos obtenidos de los pasos 5 y 6 en un embudo de separacin
7. Aadir 50ml de ter de petrleo
8. Aadir 50ml de solucin acuosa saturada de NaCl y agitar
9. Dejar separar las capas
10. Descartar la capa inferior
11. Lavar la capa superior con dos porciones de 50ml de agua destilada
12. Verter la capa verde por la parte superior del embudo, a un matraz de base
redonda
13. Evaporar a sequedad a menos de 40C
B.- PREPARACIN DE LA COLUMNA
1. Colocar un tapn de lana de vidrio o algodn en el extremo de la columna
2. Empacar cuidadosamente el azcar glass, aadiendo esta con un embudo,
cuidando de no forzar el empaque. La columna debe quedar de 20cm
aproximadamente.
C.- CORRIMIENTO DE LA MUESTRA
1. La muestra se suspende con 0.5 ml de ter de petrleo
2. Usando la solucin suave. Introducir cuidadosamente la solucin de la muestra en
la columna con una pipeta, y permitir que se forme una estrecha zona inicial
3. La muestra que se adhiere a la parte superior e inferior del tubo, se puede lavar
con un poco de ter de petrleo. No dejar secar
4. Desarrollar con N-propanol al 0.5% en ter de petrleo
5. Se puede acelerar el desarrollo aplicando una succin de 0.5 atm. Un flujo de 1
ml/ min, da buena separacin.
CUESTIONARIO
1. Indique otras aplicaciones de cromo
2. Por qu en la extraccin de pigmentos de las hojas se usa el metanol en
mayor cantidad?
3. En la repeticin del proceso de extraccin a que se debe que las hojas
pierdan su color?

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rodfitos) enmascaran la clorofila y confieren a estas a las clulas, un color azulado

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