Producción de Bioetanol Por Saccharomyces Cerevisiae
Producción de Bioetanol Por Saccharomyces Cerevisiae
Producción de Bioetanol Por Saccharomyces Cerevisiae
2. MATERIALES Y MTODOS
2.1. Materia prima y caracterizacin qumica
CFM se obtuvo de los lugares agroindustrias en el Noreste de Brasil. Caracterizacin
qumica se realiz mediante hidrlisis cida cuantitativa con 5 ml de 72% (w / w) de
cido sulfrico durante 1 h y despus de la hidrlisis cuantitativa con cido sulfrico
4% (aadiendo agua hasta 148.67 g) a 121 C durante 1 h. Antes del anlisis por
HPLC, el residuo slido del proceso posterior a la hidrlisis fue recuperado por
filtracin y considerado como Klason lignina. Azcares monosacridos y cido actico
contenidos en los hidrolizados fueron determinados por HPLC con el fin de estimar el
contenido de muestras de celulosa y hemicelulosa [15]. Composicin de LCM se
determin de acuerdo a los protocolos de laboratorio de la Nacional de Energa
Renovable [17]. Contenido de ceniza residual se estima a partir de 2 g de la muestra
mantuvo a 550 C durante 5 h y se pesa para medir la ceniza residual contenida [18].
La humedad se estim a partir de una muestra de 2 g mantenido a 105 C durante 24 h
y se pes para calcular el residual contenido [17].
2.2. Proceso de pretratamiento
2.2.1. Preparacin de la materia prima antes del tratamiento previo
La CFM se lav para la eliminacin de residuos no lignocelulsico. Despus de cinco
lavados con agua a 70 C, el material se seca en un horno con circulacin de aire a 40
C durante 24 h. Despus de este procedimiento, el CFM se moli en un tamao de
partcula de 48 malla (0,3 mm), con el propsito de normalizar la granulometra del
CFM [15].
2.2.2. Pretratamiento hidrotrmico catalizada con sodio hidrxido de (HPCSH)
La CFM, hidrxido sdico y agua se mezclaron con el fin de obtener una proporcin de
10: 1 lquido / slido, se muestran las condiciones de HPCSH en la Tabla 1. Estos
experimentos se llevaron a cabo en 50 ml de volumen total acero inoxidable Cilindros
reactores. El reactor se cerr y montado verticalmente y luego sumergido en un bao
de aceite abierto Julabo abierto a un termostato de circulacin(Julabo, Alemania) con
control de temperatura PID, previamente calentada a la temperatura de reaccin
deseada (Tabla 1).
En el final del tiempo de reaccin deseado (Tabla 1), el reactor se retirado del bao de
aceite y se enfri por inmersin en un agua helada bao durante 5 min. El slido y
lquido (licor) se separaron a travs de filtracin a vaco, tanto estando caracterizado
como se ha mencionado en el Secciones 2.3 y 2.4. Los experimentos se realizaron por
duplicado.
2.2.3. Diseo experimental y anlisis estadstico
Con el fin de relacionar la variable dependiente de celulosa (celulosa,%) y la
temperatura de las variables independientes (X1, C) tiempo (X2, min) y la
concentracin de hidrxido de sodio (X3,%) en CFM previamente tratado, con la
posible nmero mnimo de experimentos, un material compuesto central 23 diseo
experimental (CCD) para los tres factores que permitieron la construccin de un
polinomio de segundo orden en las variables independientes y la identificacin de
significacin estadstica en la cual se utiliz variables. El modelo matemtico
(Ecuacin (1)) correspondiente al diseo experimental es:
Dnde:
Dnde,
dnde,
dnde:
dnde:
reportados por Kim y Han [10] y Rawat et al. [9] en paja de arroz y madera de lamo
tratan previamente por HPCSH, respectivamente.
3.1.3. El anlisis de difraccin de rayos X
El anlisis de difraccin de rayos X para la determinacin de ndice de cristalinidad se
llevaron a cabo en CFM sin tratar y tratado previamente con el objetivo
entre 91,6 y 293,5 mg / g de peso seco LCM, valores que estn dentro del rango de
los resultados presentados en este trabajo.
es
el
comn para
lignina
del
este
obtuvieron a
tratamiento
precipitaron
Precipitacin cida
mtodo
ms
la recuperacin de
licor negro [12]. En
contexto,
licores
partir
del
previo de CFM se
mediante la adicin
de cido, lo
que resulta en
valores de entre 8,54 y 19,32 g / L de la lignina, con un rendimiento de recuperacin
de lignina de 91,1% (en relacin con la lignina total presente en el licor). En
comparacin, Eges et al. ? [11] llev a cabo la recuperacin de la lignina de los
residuos de maz (contiene 17,18% de Klason lignina) pretratados por HPCSH (160? C
y 75 min, relacin slido / lquido de 1:20 y deber la solubilizacin del mcm de
39.75%) que resulta en 2,5 g / l de lignina. Estos resultados demuestran la eficacia del
mtodo para recuperacin de lignina utilizada en este trabajo.
3.2.4. FTIR de la lignina obtenida por precipitacin
Los anlisis se llevaron a cabo por espectroscopia infrarroja con el propsito de
obtener informacin de los grupos qumicos presentes en la lignina [30]. Los espectros
de FTIR en la regin entre 500 y 4000 cm-1 de lignina estndar y se recupera la
lignina de licor de CFM pretratada por HPCSH (2,5% (v) de hidrxido v / sodio a 180 C
por 30 min) se muestran en la Fig. 4. Los espectros estn dominadas por una amplia
banda en 3396e3381 CM1 debido a grupos OH fenlicos y alifticos, seguido de
bandas para CH estiramiento en grupos metilo y metileno (CM1 2962e2874), las
bandas a 1604, 1516 y 1495 cm-1 asignados a esqueltico aromtico vibraciones,
1454 cm1 asignados a deformaciones y CH aromtico vibraciones de anillo, 1440 cm1 asignados a las vibraciones del esqueleto aromticos, 1331 CM-1 asignados a
siringil anillo de la respiracin con CO estiramiento, 1284 CM-1 asignados a guayacil
anillo de la respiracin con CO estiramiento y 1039 cm-1 asignados a tipo CH guayacil
aromtico y CH deformacin de alcohol primario. Adems de estos, hay bandas
observados en 1201, 1070, 753, 667 y 570 cm-1. La ausencia de un pico a 1739 cm-1
se asigna a CO estiramiento de no conjugada cetona, carbonilo y grupos ster, lo que
indica la presencia de hidroxicinamatos, tales como p-cumarato y ferulato [31]. No se
observaron los picos en la longitud de onda de 1170e1164 CM-1 en los espectros de
ligninas. De acuerdo con Tan et al. [32], la ausencia de este pico indica la ausencia de
azufre en la lignina y se convierte una caracterstica importante, porque el azufre en la
lignina es un contaminante e interfiere con su uso.
3.2.5. El anlisis termogravimtrico (TGA) de la lignina obtenida por precipitacin
La estabilidad trmica de la lignina recuperada de licor de CFM pretratada por PhCH
(2.5% (p / v) de hidrxido de sodio v en 180C durante 30 min) fue investigado por TGA
y se muestra en la Fig. 4B. La lignina perfiles de degradacin de la muestra de la
lignina estndar y el muestra de la lignina recuperada de licor de CFM pretratada por
PhCH fueron similares. El peso residual a 600C de la lignina recuperada era 55,68%,
mientras que la de la lignina estndar fue 56,71%. En general, el comportamiento de
descomposicin trmica de las muestras de lignina puede ser dividido en tres etapas.
La primera etapa (25e150? C) implica la deshidratacin de la lignina por el agua
absorbida en lignina. La lignina muestra contena una cierta cantidad de agua unida
cuya evaporacin producido a temperaturas superiores a 100? C, lo que indica la
fuerte interaccin entre las molculas de agua y el hidroxilo grupos en muestras de
lignina. La siguiente etapa, se produjo hasta 350C, implica la fragmentacin de los
vnculos internos entre la lignina unidades. Los principales productos en esta etapa
fueron coque, cido orgnico y compuestos fenlicos junto con productos de gas [33].
En el ltimo etapa (ms de 350 C), la degradacin de la lignina piroltica, la
descomposicin y la condensacin de los anillos aromticos se produjo [34].
3.3. La susceptibilidad a la hidrlisis enzimtica
Las conversiones de CFM pretratadas por HPCSH (2,5% (v / v) de sodio hidrxido a
180? C durante 30 min) en glucosa fue 90,72% a las 96 h de EH, siendo 88,90% a las
72 horas y 85,35% a las 48 h de EH (Fig. 5A). Estos resultados demuestran la
accesibilidad de CFM a la ataque enzimtico. En comparacin, para el CFM pretratada
por autohidrlisis (200 C durante 50 min) la conversin de la glucosa por EH en 96 h
fue de 84.10% [15]. La conversin menor del CFM previamente tratada por
autohidrlisis de la glucosa puede haber sido influenciado por la mayor contenido de
lignina en el CFM (29,80% de la lignina), en comparacin con el CFM pretratada por
HPCSH (11,72% de la lignina) [15]. La EH de madera de lamo tratado por HPCSH
(2,8% (w / w) hidrxido de sodio a 94 C durante 1 h) dio lugar a una conversin en
glucosa a las 48 h del 41,5% [9]. La conversin en glucosa durante la EH de
Eucalyptus grandis pretratada por explosin de vapor catalizada por hidrxido de sodio
(7% (W / w) de hidrxido de sodio a 210? C durante 9 min) fue 65,55% en 72 h [7]. La
EH de paja de arroz despus de HPCSH (5% (w / w) hidrxido de sodio a 80 C
durante 1 h) dio lugar a una conversin en glucosa de 78,7% en 72 h [10].
En cuanto a la tasa mxima de hidrlisis inicial (de la productividad glucosa) (dG / dt),
que se produce en las primeras 12 h (la pendiente de la glucosa concentracin frente
al tiempo) se muestra en la Fig. 5B, la velocidad de hidrlisis inicial de CFM era 1,27
etanol
por
S.
mobilis, los perfiles
un patrn similar para
consumo rpido de
produccin
de S. cerevisiae y
10,96 g / L, siendo
complet despus
Tabla
5).
El
corresponde a una
mientras
para
S.
85.31% y 84,56%,
productividad
Los
tres
fermentacin
en la estrategia SSF.
cerevisiae, P. stipitis y Z.
cinticos que tiene
la glucosa, con un
glucosa durante las primeras 24 h. La
correspondiente de etanol en SSF
Z. mobilis eran 10,91 g / L y
el proceso de SSF
de 48 h (Fig. 6 y
rendimiento de etanol para P. stipitis era 87.44%, lo que
productividad volumtrica de etanol de 0,23 g / (L h) en 48 h,
cerevisiae y Z. Mobilis el rendimiento de etanol fueron
respectivamente. Los mobilis S. cerevisiae y Z. presentan
volumtrica de etanol de 0,30 g / (L h) a las 36 h (Tabla 5).
microorganismos han demostrado ser adecuado para la
azcares a etanol
En
un
trabajo
hidrxido
como materia prima e inform de un rendimiento de etanol de 85%.
Gonalves et
al.
[15]
inform de la
produccin de etanol S.
cerevisiae, P. stipitis
y Z. mobilis en SSF utilizando
CFM
autohdralizada,
produccin
de etanol con una concentracin de
7,44 g / L,
8,47 g / L y 7,30 g / L y el rendimiento de
etanol
de
86,90%,
84,19%
y
85,26%,
respectivamente. Estos resultados estn de
acuerdo con los
reportados en este trabajo.
La
estrategia
de glucosa durante
(Fig. 6AeC). El
cerevisiae, P. stipitis
mobilis eran 11,65 g / L,
g / L y 11,64 g / L,