Infome Microbiologia

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO, TCNICAS DE SIEMBRA,
MORFOLOGA BACTERIANA CLASES Y MTODOS DE COLORACIN

Karolain Cortes1 Mateo Fandio1, Laura Gmez1, Carolayn Moreno1
Profesor Alfredo Lpez Molinello
Practica Microbiologa de alimentos
Despus, la siembra de los microorganismos se

hizo por tres mtodos: masiva, aislamiento y
agotamiento. Tomando con el asa una porcin
de bacteria y esparcindola en el agar. Las seis
cajas de Petri se mantuvieron por ms de 48
horas con tres bacterias
(Staphylococcus
aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli) en
una incubadora a una temperatura de 37C.
Cada una de ellas con dos tipos de siembra, se
encontraron los siguientes resultados:
RESULTADOS
Fig. 1. Cultivos principales

Las bacterias que usaron para los cultivos son:
Staphylococcus aureus, Bacillus cereus,
Escherichia coli como se muestra en la figura 1.
Estas se prepararon en un medio de agar
nutritivo, indicando que se deben disolver 28 g
por cada litro de agua; la preparacin que se
necesita es de 25 ml para cada caja de Petri (6
cajas = 150 ml), realizando los clculos:
BACILIUS CEREUS
28 g agar 1000 mlH 2 O
Fig. 2. Cultivos de Bacillus Cereus por

mtodos de agotamiento (lado izquierdo) y
masivo (lado derecho)
x 150 mlH 2 O
x=
150mlH 2 O28 g agar

=4,2 g agar
1000 ml H 2O
Los cultivos que muestra la Fig. 2, la siembra

de Bacillus Cereus, se determin que en el
cultivo por mtodo masivo se presentaron
varias colonias color beige pero no en todos los
espacios de la caja como muestra en el cultivo
de agotamiento, esto se debe a un mal
planteamiento experimental, ya que no se
esparci correctamente la bacteria por toda la
caja de Petri.
Finalmente se obtuvo la mezcla del agar y el

agua haciendo una homogenizacin. Despus se
dispuso en autoclave para la esterilizacin a
121C a 15 libras de presin en un tiempo
estimado de una hora.
1 Universidad de La Salle. Facultad de ingeniera. Programa ingeniera de alimentos.

1
Mateo Fandio, Laura Gmez, Karolain Cortes, Carolayn Moreno
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
El patgeno trabajado presenta las siguientes
caractersticas; forma irregular, con bordes
ondulados, una elevacin crateriforme y
superficie cremosa. En el cultivo masivo
crecieron de forma correcta, proporcionando
forma de nubes, esto se da por la ejecucin
correcta de los procedimientos.
Fig. 4. Cultivos de Staphylococcus aureus por
mtodos de agotamiento (lado izquierdo) y
masivo (lado derecho)
ESCHERICHIA COLI
Los cultivos de que se muestran en la figura 4

(Staphylococcus aureus) con dos mtodos de
siembra, se presentaron varios errores
experimentales, en el mtodo de agotamiento no
hubo ningn indicio de siembra, quedo vaca la
caja de Petri; el mtodo masivo presento
crecimiento, pero no de la manera esperada,
debido a que su esparcimiento no se dio de la
manera correcta, la esterilizacin incorrecta del
asa no permiti el crecimiento correcto de los
patgenos. La siembra masiva se dio en poca
proporcin y se caracteriza por: forma circular,
con borde entero, una elevacin acuminada, y
superficie cremosa y brillante.
Fig. 3. Cultivo de E. coli por mtodo de

agotamiento (lado izquierdo) y aislamiento
(lado derecho)
La fig. 3, representa los cultivos de E. coli, por
el mtodo de agotamiento se percibe una
pequea mancha continua de color amarillo en
una sola parte de la caja. Fue un procedimiento
mal sembrado ya que, en momento de la
siembra con el asa, no se tom suficiente
cantidad de bacteria. Igualmente sucedi con la
siembra de aislamiento, solo se distinguen
bacterias sembradas en la parte inferior del
cultivo. La E. coli presenta propiedades como:
forma circular y puntiforme, con un borde
entero, elevacin convexa, y superficie lisa.
TINCION DE GRAM
Al realizar este mtodo de coloracin se aplic
cristal violeta donde todas las bacterias se tien
de dicho color, cuando se aplica el lugol el
complejo CV-I se forma dentro de las bacterias
y permanecen del mismo color; cuando se hace
uso del alcohol las bacterias Gram positivas
contraen sus poros y el complejo no puede salir
as que continan con tinte violeta. Por el
contrario, las Gram negativas aumentan su
porosidad y retiran el complejo de su interior.
Finalmente al aplicar la safranina los
microorganismos Gram positivos (+) quedan
violeta o morado y los Gram negativos (-) se
tien de color rojo o rosa.
Las tres bacterias sometidas a esta prueba

Staphylococcus aureus, Bacillus cereus,
Escherichia coli obtuvieron un tinte morado.
color rosa, el cual se ve levemente, adems que

en la comparacin de la informacin terica y la
experimental se respalda los errores que se
pudieron presentar. Adems se puede deducir
que la siembra no fue correcta ya que solo se
present la colonia solo en un punto por el
mtodo de masiva y una mancha continua por
aislamiento. Esto sucedi porque la persona que
lo sembr no tomo lo suficiente de
microorganismo en la colonia ya sembrada,
tambin se descubri que una de las siembras
estaba contaminada por la presencia de puntos
blancos en el interior de la caja aun sin abrir.
Esto se dio ya que al servir el agar el
acercamiento a los mecheros no era el ms
conveniente y los microorganismos del
ambiente contaminaron la caja.
ANLISIS DE RESULTADOS
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Fig. 5. Vista microscpica (100x) de E. coli
Este microorganismo se conoce como una
entero bacteria (tiene muchas especies y
presenta formas distintas), el cristal violeta hace
que presente ese tinte, el lugol no surge ningn
efecto y continua del mismo color, al aplicar el
alcohol se da la extraccin de lpidos de las
paredes celulares y el aumento de la porosidad;
por ultimo como los poros de la clula se
encuentran abiertos al aplicar la safranina las
bacterias toman este colorante (qumica, 2009)
y se tien de rojo, en el caso experimental
presento color morado, su forma es la de un
bacilo (forma de bastn).
Fig. 6.. Vista microscpica (100x) de

Staphylococcus
Este tipo de bacterias presentan color morado
(Gram positivas (+)), puesto que al ejecutar la
tincin el cristal violeta produce un efecto de
tinte, la aplicacin de lugol hace que sigan del
mismo color; cuando se hace uso del alcohol,
las paredes se deshidratan, los poros se cierran
haciendo que el complejo CV-I no pueda salir
de la clula y permanezca el efecto (Reyes A. ,
2011). Finalmente, como los poros estn
A escala macroscpica el color de la bacteria

es morado y no rosa tenue como en la teora,
esto se pudo presentar por deficiencias en los
procesos de tincin o la no desinfeccin del asa,
por lo que se realiza una hiptesis de que puede
ser Gram positiva (+), pero, al analizarla a nivel
microscpico al 100x como lo muestra la fig. 5,
en el microscopio se garantiza que su tinte es
Mateo Fandio, Laura Gmez, Karolain Cortes, Carolayn Moreno
cerrados al usar la safranina no se produce

ningn efecto y el color de la bacteria sigue
siendo violeta o morado. Dicha bacteria
muestra
formas
crculos
diminutos
(micrococos) como lo muestra la fig. 6, estos a
su vez se renen en varios grupos que forman
una especie de flores o racimo de uva el cual es
un coco, se agrupan irregularmente en racimos
y carecen de esporos (Garcia, s.f.).
Al observarlas se pueden asimilar estructuras

ramosas donde se pueden definir los Bacillus
con mucho detenimiento (ver fig. 6), este tiene
forma de bastn alargado (bacilos), el cual es un
aerobio facultativo, esporulado que consiste
resistencia a condiciones ambientales extremas
tales como calentamiento, as como se hizo
prcticamente a una incubacin de 37C por 48
horas los cuales hacan crecer las debidas
colonias segn la siembra. Son motil debido a
flagelos bacterianos con filamentos en una
terminacin de punta de protenas (Salud,
2011). La siembra por agotamiento no se
ejecut bien, el manejo del asa supone que
debido a las altas temperaturas o a errores por
parte de los manipuladores la bacteria no se
desarroll. Al verlo microscpicamente al 100x
se distingui un bacilo y se pudo afirmar la
teora correctamente y con su tincin
correspondiente (Gram +).
Los Staphylococcus aureus son las bacterias

que crecieron de manera sobresaliente en
comparacin con las otras siembras, despleg
numerosas colonias, no se vio afectada por
contaminacin; se puede concluir que este
patgeno no exige requerimientos exigentes
para su desarrollo. Presenta forma de bacilo
pero, tericamente es un coco; por ello se puede
decir que es un error humano ya que se vio de
forma incorrecta ante el microscopio al 100x.
Para las tres bacterias al hacer uso del

microscopio cuando se someta en el objetivo
40x no se vea diferenciacin de colonias y no
se perciban detalles especficos de los
microrganismos. Cuando se visualiz en 100x
las caractersticas y se pudo hacer
reconocimiento de cada bacteria.
Bacillus cereus
REFERENCIAS
Garcia, H. (s.f.). Academia. Obtenido de
http://www.academia.edu/8089964/RE
CUENTO_DE_Staphylococcus_aureus
_I
qumica, D. d. (2009). Universidad tecnologica
nacional.
Obtenido
de
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/
catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/
practico4.pdf
Ramirez, A. R. (Junio de 2011). Universidad de
Veracruz.
Obtenido
de
Fig. 7. Vista microscpica (100x) de Bacillus

Cereus
Este tipo de microorganismos tienen un tinte
morado, o sea que son Gram positivas (+)
debido a los efectos dados por la tincin como
se
explica
anteriormente,
visto
macroscpicamente y microscpicamente son
de color morado por su capacidad de absorcin.
http://www.uv.mx/personal/sbonilla/file
s/2011/06/escherichia-coli-i.pdf
Reyes, A. (2011). universidad de veracruz.
Obtenido
de
http://www.uv.mx/personal/sbonilla/file
s/2011/06/staphylococcus-aureus.pdf
Salud, I. N. (2011). Ministerio de la Proteccin
Social.
Obtenido
de
http://www.ins.gov.co/lineas-deaccion/investigacion/ueria/Publicacione
s/PERFIL%20BACILLUS
%20CEREUS.pdf

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PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO, TCNICAS DE SIEMBRA,

MORFOLOGA BACTERIANA CLASES Y MTODOS DE COLORACIN

Despus, la siembra de los microorganismos se

Fig. 1. Cultivos principales

28 g agar 1000 mlH 2 O

Fig. 2. Cultivos de Bacillus Cereus por

150mlH 2 O28 g agar

Los cultivos que muestra la Fig. 2, la siembra

Finalmente se obtuvo la mezcla del agar y el

1 Universidad de La Salle. Facultad de ingeniera. Programa ingeniera de alimentos.

Mateo Fandio, Laura Gmez, Karolain Cortes, Carolayn Moreno

Los cultivos de que se muestran en la figura 4

Fig. 3. Cultivo de E. coli por mtodo de

Las tres bacterias sometidas a esta prueba

color rosa, el cual se ve levemente, adems que

Fig. 6.. Vista microscpica (100x) de

A escala macroscpica el color de la bacteria

Mateo Fandio, Laura Gmez, Karolain Cortes, Carolayn Moreno

cerrados al usar la safranina no se produce

Al observarlas se pueden asimilar estructuras

Los Staphylococcus aureus son las bacterias

Para las tres bacterias al hacer uso del

Fig. 7. Vista microscpica (100x) de Bacillus

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