Informe de Observacion de Bacterias

UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONA
FACULTAD DE INGENIERIA Y CIENCIAS AMBIENTALES
INGENIERIA AGROFORESTAL - ACUICOLA
ICTIOPATOLOGA
Practica 5.
METODOS DE OBSERVACION DE LOS MICROORGANISMOS. TECNICAS DE
OBSERVACION EN SECO. PREPARACION DE UN FROTIS. COLORACION. FORMAS.
AGRUPACIONES Y ESTRUCTURA BACTERIANAS.
M.Sc. Blga: Acui. Nadhia M. Herrera Castillo.

ESTUDIANTE:
ALIAGA LOPE Rue A.

ESQUIVEL SAJAMI, Dalia.
CAMPOS CELESTINO, Vilma.
CASTAAHUI, Wendi.
YARINACOCHA PER
2016
I.
INTRODUCCION:
Los microorganismos, concretamente las bacterias, pueden observarse directamente

al microscopio de campo claro. Sin embargo, debido al bajo contraste entre las clulas
y su entorno, estos procedimientos se utilizan en ocasiones muy limitadas, como por
ejemplo para la observacin de la movilidad bacteriana.
Los microscopios de contraste de fases, interferencia diferencial (DIC o la microscopa
de Nomarski) y campo oscuro permiten aumentar el contraste, emplendose para la
observacin de vainas, filamentos u otras estructuras bacterianas. La tincin es un
mtodo sencillo para incrementar el contraste entre la clula y su entorno y por lo tanto
contribuye a mejorar la imagen observada. (Wach, I.2008)
Las tcnicas de tincin con diversos colorantes facilitan la observacin al aumentar
notablemente el contraste. En Microbiologa todas las tinciones se realizan a partir de
suspensiones de microorganismos extendidas en un portaobjetos (frotis), secadas y
fijadas. La fijacin, procedimiento que permite preservar estructuras celulares, se
puede llevar a cabo con diferentes tratamientos: fijacin por calor o fijacin qumica.
La fijacin por calor es la ms utilizada para la observacin de bacterias. La fijacin
qumica con agentes como etanol, folmaldehido y cido actico entre otros muchos, se
utiliza para preservar las estructuras celulares. Se pueden utilizar dos tipos de
procedimientos, la tincin positiva es la ms frecuente, en ella un colorante se une a
ciertas estructuras microbianas. Todos los colorantes utilizados en microbiologa tienen
en comn la presencia de grupos cromforos, grupos con dobles enlaces conjugados
que son los responsables del color mediante la unin a estructuras celulares por
enlaces inicos, covalentes o hidrfobos, los que establecen enlaces inicos son los
ms frecuentes. Entre los colorantes que se unen por enlaces covalentes destaca el
reactivo de Schiff, utilizado para la tincin de DNA, donde el colorante se une a la
desoxi-ribosa. Por otra parte, en la tincin negativa se utilizan compuestos que no
penetran en las clulas sino que impregnan el medio circundante. Los
microorganismos aparecen refringentes sobre un fondo negro. (Marechal, P. 2008)
II.
OBJETIVOS:
Realizar un frotis bacteriano, su fijacin y posterior colcoracion.
Realizar y diferenciar los tipos de coloraciones simple, compuestos o diferencial
(Gram) y especial.
Observar y diferenciar la morfologa individual y de agrupacin bacteriana.
Utilizar y familiarizarse con el correcto empleo de aceite de inmersin en
observacin al mximo aumento.
III.
MATERIALES Y METODOS:
III.1.
Material biolgico:
Suspensiones bacterianas de bacilus sp. Escherichia coli, staphyloccus spp.

Vibrio sp. Aeromonas sp, psudomonas sp.
III.2.
III.3.
Material de laboratorio:
Microscopio.
Laminas porta objetos.
Asa bacteriolgica.
Mechero de alcohol.
Colorantes: azul de metileno, (cristal de violeta, solucin de lugol, alcohol,
acetona, safranina).
METODOS:
III.3.1. Mtodos de descripcin:

Este mtodo consisti en describir cada caracterstica e identificar el tipo de bacterias
observadas en el microscopio de la muestra de siembra.
III.4.
PROCEDIMIENTO:
1. la prctica se realiz en el laboratorio de bio-qumica, lo cual contaban con equipos

que podemos trabajar.
2. As mismo se procedi a extraer las muestras sembradas de la estufa, lo cual ya
haban crecido las bacterias, para la observacin respectiva.
Imagen 1. Muestra de en la estufa.
Imagen 2. M. listo para la observacin.
3. Seguidamente
preparacin de
utilizando los
laboratorio.
extraccin de la
al porta objeto.
se procedi a la
la muestra
materiales de
(pinza para la
bacteria), colocando
Imagen 3. Calentando la pinza al rojo vivo.

Para la extraccin de la bacteria.
Imagen 4. Extraccin de la bacteria.
Imagen 5. Colocando la bacteria al porta objeto.
4. Seguidamente de procedi a realizar la coloracin de la muestra del porta objeto

con el reactivo (cristal de violeta), una gota por muestra, y extenderla por toda la
muestra la coloracin. Para que sea homognea. Y dejarlo por un minuto al aire
libre.
eImangs6.Ctrioldv 7Uaecviol.Ptr1
eImang8.Ardoutl
aDemosjpr1ilb.
Dejar reposar durante un tiempo de dos minutos con el reactivo
(lugol). Despus pasar a enjuagar.
eImang9.Aruodtc
extnadporlbj.Yv
conagudemit.
Imagen 10. Agregar safranina una gota;

dejar reposar por 2. Pasar a lavar con
agua.
despus de la agregacin de los reactivos para la coloracin Gram, pasar a

flamear en el mechero de alcohol. Para despus observar en el
microscopio.
IV.
RESULTADOS:
IV.1.
Los resultados obtenidos de la prctica de observacin de estructuras

bacterianas.
Imagen. Observacin de la bacteria en el microscopio en aumento de 40 X

Nombre de la bacteria: escherichia coli-bacilo gram negativo.
Morfologa: bacilos bordes rectos; Bacilos fusiformes; bacilos curvos.
La tincin de Gramm (coloracin) es un tipo de coloracin usado en microbiologa
para ver las bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Christian Gramm desarroll
esta tcnica y por ello su nombre (1884). Se ocupa para poder hacer referencia a
morfologa celular bacteriana. Se considera la bacteria Gramm postiva que se ven de
color violeta, y la bacteria Gramm negativa se visualiza de color rosa.
El cristal violeta penetra en todas las clulas bacterianas (tanto Gram positivas como
Gram negativas). El lugol est formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de
potasio) disuelto en agua destilada, el cual est presente para solubilizar el yodo. El I2
entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal
violeta.
Estructura de la pared celular de las bacterias grampositivas.
La gruesa pared celular de las bacterias grampositivas est constituida principalmente

por peptidoglicano. Se cree que sta gruesa capa de peptidoglicano es la
determinante de que estas bacterias retengan el cristal violeta de la coloracin de
Gram. (Prescott, 1999).
Estructura de la pared celular de las bacterias gramnegativas.
Si observamos la pared de las bacterias gramnegativas al microscopio electrnico
podemos observar tres zonas: la membrana plasmtica, el espacio periplsmico que
incluye una fina capa de peptigolicano y la membrana externa. Esta ltima, exclusiva
de las bacterias gramnegativas, es una bicapa lipdica que difiere de otras
membranas por su capa externa, que est constituida por una molcula anfiptica: el
lipopolisacrido (LPS) o endotoxina. (Schaechter M, 1993)
V.
DISCUSION:
(Downes FP, 2001), menciona que la mayora de las bacterias psicrfilas son Gramnegativas y se encuentran en ambientes donde la temperatura est siempre por
debajo de 15 a 20C, mientras que las psicrotrofas crecen en ambientes donde la
temperatura flucta. La mayora de los psicrfilos hallados en alimentos son especies
de Aeromonas, Alcaligenes, Flavobacterium, Pseudomonas, Serratia y Vibrio.
Madigan MT et al. 2004. Los Gram positivos son especies de Bacillus, Clostridium y
Micrococcus. An cuando pueden crecer a 0C, lo hacen lentamente y a menudo
tardan varias semanas para formar las colonias. Entre las bacterias escherichia colibacilo Gram negativo que producen deterioro en los alimentos se destacan: sepsis y
shock trmico l bacteria mas frecuente y algunas cepas de Bacillus cereus crecen
lentamente a temperaturas inferiores a 5C (2). En los pescados y mariscos con 1 a
4% de sal se encuentran especies halotolerantes de Bacilos, Acinetobacter,
Photobacterium, Pseudomonas, Shewanella, Vibrio, y las carnes curadas con 1 a 7%
de sal contienen bacterias Gram-positivas, por ejemplo bacterias lcticas,
Enterococcus y Micrococcus. La mayora de las bacterias implicadas en el deterioro
con 5 a 20% de sal son especies de Bacillaceae y Micrococcaceae. Asi mismo la
prctica se menciona la bacteria encontrada en pes fresco, de la siembra; escherichia
coli-bacilo gram negativo.
(ICMSF. 1998). Algunos serotipos de Escherichia coli son patgenos, por ejemplo E.
coli O157:H7. Yersinia enterocoltica provoca una fiebre entrica y las especies de
Shigella son responsables de la disentera bacilar.
VI.
CONCLUSION:
Se realiz el frotis bacteriano, y su fijacin y posterior coloracin de la muestra
de bacterias.
Se realiz la diferencias y los tipos de coloraciones simple, compuestos o
diferencial (Gram) y especial.
Se observ y diferenciar la morfologa individual y de agrupacin bacteriana.
Se utiliz y familiarizo con el correcto empleo de aceite de inmersin en
observacin al mximo aumento.
VII.
REFERENCIAS BILBLIOGRAFICAS:
Cao-Hoang, L.; Marechal, P.-A.; Le-Thanh, M.; Gervais, P.y Wach, I.. 2008.
Fluorescent probes to evaluate the physiological state and activity of microbial
biocatalysts: A guide for prokaryotic and eukaryotic investigation. Biotecnology
Journal, 3: 890-903.
ICMSF. 1998. Microorganisms in food. Vol 6: Microbial Ecology of Food
Commodities. Blackie Academic & Professional, London, p 131.
Downes FP, Ito K, eds. 2001. Compendium of methods for the microbiological
examination of foods. 4 ed. APHA, Washington, p. 159, 167, 187, 357.
Madigan MT et al. 2004. Brock - Biology of Microorganisms. 10 ed. Pearson Prentice Hall, p 812.

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Los microorganismos, concretamente las bacterias, pueden observarse directamente

Suspensiones bacterianas de bacilus sp. Escherichia coli, staphyloccus spp.

III.3.1. Mtodos de descripcin:

1. la prctica se realiz en el laboratorio de bio-qumica, lo cual contaban con equipos

Imagen 1. Muestra de en la estufa.

Imagen 2. M. listo para la observacin.

Imagen 3. Calentando la pinza al rojo vivo.

Imagen 4. Extraccin de la bacteria.

Imagen 5. Colocando la bacteria al porta objeto.

4. Seguidamente de procedi a realizar la coloracin de la muestra del porta objeto

Dejar reposar durante un tiempo de dos minutos con el reactivo

(lugol). Despus pasar a enjuagar.

Imagen 10. Agregar safranina una gota;

despus de la agregacin de los reactivos para la coloracin Gram, pasar a

Los resultados obtenidos de la prctica de observacin de estructuras

Imagen. Observacin de la bacteria en el microscopio en aumento de 40 X

Estructura de la pared celular de las bacterias grampositivas.

La gruesa pared celular de las bacterias grampositivas est constituida principalmente

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