ESTERILIZACION Y DESINFECCION

no aprendes lo que te ensean

sino lo que quieres aprender, pero...

RAFAEL VIGNOLI
INTRODUCCION

Los procesos de esterilizacin y/o desinfeccin son

diariamente llevados a cabo, no solamente en el
laboratorio, donde son fundamentales para evitar la Comencemos por definir algunos trminos que
contaminacin de medios, cultivos, placas etc., sino utilizaremos:
tambin en otros mbitos tales como los hospitales,
donde fallas en estos procedimientos aumentan la ESTERILIZACION: es el proceso mediante el cual se
morbimortalidad de los pacientes. alcanza la muerte de todas las formas de vida
microbianas, incluyendo bacterias y sus formas
Pensemos lo que sucede en los quirfanos donde se esporuladas altamente resistentes, hongos y sus esporos,
deben desinfectar pisos, paredes y techos, esterilizar y virus. Se entiende por muerte, la prdida irreversible de
instrumental quirrgico e indumentaria del personal, y la capacidad reproductiva del microorganismo.
descontaminar el aire del ambiente. (deberan estar incluidos dentro de esta definicin la
O en contraposicin, lo que sucedera si materiales como eliminacin de estructuras como los priones?)
catteres, agujas, jeringas, empleados en maniobras
mdicas diarias (extraccin de sangre, vas venosas, Se trata de un trmino absoluto, donde un objeto est
punciones lumbares, toracocentesis, etc.) fueran estril o no lo est, sin rangos intermedios.
utilizados aunque fueran con niveles mnimos de
contaminacin. DESINFECCION: en este proceso se eliminan los
Un ejemplo cotidiano donde debe prevalecer el mismo agentes patgenos reconocidos, pero no necesariamente
concepto de esterilidad es en la utilizacin de agujas para todas las formas de vida microbianas.
la realizacin de tatuajes (conoce alguna enfermedad
infecciosa que pueda trasmitirse de esta forma?). Es un trmino relativo, donde existen diversos niveles de
desinfeccin, desde una esterilizacin qumica, a una
El estudiante de medicina en este momento, debe mnima reduccin del nmero de microorganismos
rpidamente familiarizarse e interiorizarse con ciertos contaminantes. Estos procedimientos se aplican
procesos de desinfeccin y antisepsia como, por Ej.: la nicamente a objetos inanimados.
cutnea, previa a la administracin de un inyectable o
durante la cura de una herida, la desinfeccin de un ANTISEPSIA: es el proceso que por su baja toxicidad,
termmetro clnico o el lavado de manos. se utiliza para la destruccin de microorganismos
presentes sobre la superficie cutneo-mucosa. Este
Parece imprescindible entonces, que el estudiante que se trmino tampoco implica la destruccin de todas las
apresta a ingresar a la clnica en breve y que en este formas de vida.
momento ya est en contacto con distintas poblaciones
bacterianas, debe saber manejar en forma fluida la Existen agentes como los alcoholes que son antispticos
informacin que le permita discernir cundo es necesario y desinfectantes a la vez.
desinfectar o esterilizar, y llevar a cabo el proceso
correspondiente en forma satisfactoria con el Dado que el tema que se est abordando es: mtodos
conocimiento de los fundamentos de lo realizado. para controlar o destruir distintas poblaciones
bacterianas; es necesario saber previamente la cintica de
dicha destruccin, es decir de que modo muere una

1
poblacin, y que parmetros inciden sobre este efecto.
En estos casos existe un tiempo inicial de muerte muy
lento que luego se acelera para volver a decaer al final.

Este factor es tan crtico, que se sabe que

CINETICA DE DESTRUCCION DE LAS concentraciones mnimas de casi cualquier desinfectante
POBLACIONES BACTERIANAS no solo no elimina los microorganismos sino que
permiten su desarrollo.
Cuando una poblacin bacteriana es expuesta a un 2. Tiempo de exposicin:
agente letal fsico o qumico, se produce una progresiva
reduccin del nmero de sobrevivientes, de modo que la Dada una concentracin de desinfectante, existe un
curva que representa el nmero de sobrevivientes en tiempo mnimo de accin que hay que respetar para
funcin del tiempo, tiene forma exponencial decreciente conseguir el efecto buscado. Para dar una idea grfica de
(Fig. 1A). esto, en la Fig. 3 se representa el porcentaje de reduccin
de la flora bacteriana residente en piel de brazos y manos
Si graficamos la curva en una escala semilogartmica, en funcin del tiempo, para diferentes antisp-ticos de
obtenemos una recta como la de la Fig. 1B. En la misma, uso ms o menos comn.
la pendiente (negativa) representa la velocidad de muerte
de la poblacin. Resulta claro que cuanto mayor sea el 3. Ph:
valor absoluto de la pendiente, los microorganismos
morirn ms rpido. Entre otras cosas determina el grado de ionizacin del
agente, siendo en general la forma no disociada la que
Este comportamiento debe tenerse presente siempre, ms atraviesa mejor las paredes del microorganismo.
an en las tcnicas de esterilizacin, donde el tiempo de
exposicin al agente es fundamental para alcanzar el
objetivo buscado.
El efecto letal de un agente (por Ej.: el fenol) cambia en
relacin a las distintas cepas, incluso dentro de una 4. Temperatura:
misma especie bacteriana.
El aumento de la temperatura aumenta el poder
Existen adems un conjunto de condiciones bactericida del agente, siempre que no lo desnaturalice.
fundamentalmente ambientales que afectan la cintica de As para temperaturas bajas, por lo general, por cada
destruccin. 10C de incremento de esta, la tasa de mortalidad se
Dentro de estos se encuentran: duplica.

1) concentracin del agente 5. Presencia de materiales extraos:

2) tiempo de exposicin
3) pH del medio La presencia de materia orgnica, por ej. mucus, pus,
4) temperatura sangre, heces, etc. influyen negativamente en la actividad
5) presencia de materiales extraos de muchos desinfectantes, incluso llegando a
6) resistencia propia del microorganismo inactivarlos.
7) nmero inicial de la poblacin
Por lo general forman cubiertas que impiden el contacto
1. Concentracin del agente: microorganismo-desinfectante, o se combinan con el
agente formando compuestos inertes o menos activos,
Si bien este aspecto vara segn el desinfectante y el etc. Por esto es esencial un buen lavado de la superficie,
microorganismo, existe una relacin inversamente antes de intentar un proceso de desinfeccin o
proporcional entre concentracin y tiempo de esterilizacin.
exposicin. A mayores concentraciones de desinfectante,
menor es el tiempo de exposicin para conseguir el Adems el lavado y arrastre tambin disminuye la
mismo efecto. Tambin se modifica la cintica de poblacin de microorganismos sobre la cual acta el
muerte, como lo muestra el cambio de forma en la curva agente contribuyendo a una ms rpida destruccin
de sobrevivientes-tiempo, que se transforma muchas
veces de exponencial a altas concentraciones (Fig. 1A) 6. Resistencia innata de los microorganismos:
en sigmoide para concentraciones intermedias (Fig. 2).
2
La eficacia de cada agente depende tambin de las
propiedades caractersticas de cada microorganismo Cuando los estudiantes arriban al hospital, ya sea durante
contra el cual se lo est aplicando. el pasaje por las clnicas, o las guardias; su avidez por
tocar, palpar y tactar, unido en ocasiones a la mala
As el tipo de pared, la presencia de esporos, la fase de distribucin de las canillas o lo inapropiado de los
desarrollo, etc., modifican la resistencia. jabones y en el peor de los casos a la falta de ejemplo del
mdico responsable del servicio, se les ofrece a los
Dentro de las formas vegetativas, es el gnero microorganismos uno de los ms efectivos y trgicos
Micobacterium el ms resistente. Luego dentro de los "vectores": nuestras manos.
Gram (+) se destacan Staphyilococcus y Enterococcus.
Dentro de los Gram(-) Pseudomona, Klebsiella, De esta forma estos microconquistadores de mil batallas
Enterobacter, y Serratia son los ms resistentes. (que muchas veces han adquirido resistencia tanto a
Son estos microorganismos (cocos Gram (+) y bacilos desinfectantes como a antibiticos), pueden llegar por
Gram (-), los ms frecuentes causantes de epidemias intermedio del estudiante, a otros pacientes, que en
intrahospitalarias debido en primer lugar a no practicar general presentan distinto grado de inmunocompromiso
el lavado de manos tantas veces como sea necesario y y nivel mas alto de exposicin.
en segundo lugar (por lejos) a la mala utilizacin de
desinfectantes y antispticos. Esto provoca que muchas infecciones oportunistas (por
Ej.: las causadas por P.aeruginosa) den origen a
7) nmero inicial de la poblacin verdaderas epidemias a nivel intrahospitalario.
Finalmente el nmero de la poblacin bacteriana inicial
es importante, porque a mayor nmero de Existe una medida sencilla, rpida y barata para evitar
microorganismos, mayor deber ser la concentracin del esta diseminacin de microorganismos:
agente y su tiempo de exposicin al mismo. EL LAVADO DE MANOS. Para fundamentar la
efectividad de tan simple medida, recordaremos algunos
En este punto al igual que en la remocin de materiales conceptos de flora normal.
extraos, toma fundamental relevancia el lavado de
manos, donde por arrastre se consigue una disminucin Existen dos tipos de flora: la flora residente, compuesta
importante de la flora normal transitoria, mejorando as por microorganismos adaptados a cada nicho ecolgico
las condiciones de utilizacin del agente a utilizar. en particular, capaz de unirse a los receptores cutneo-
mucosos de la zona, instalarse y multiplicarse en los
A continuacin iremos viendo progresivamente, el mismos, permaneciendo all por largo tiempo y
lavado de manos, y la utilizacin de antispticos, desarrollando una relacin de comensalismo o
desinfectantes, hasta llegar finalmente a la esterilizacin, mutualismo con el husped. No es sobre esta que acta
primero qumica y luego qumica y fsica. fundamentalmente el lavado de manos rutinario, ni es la
gran responsable de colonizaciones cruzadas dentro del
LAS "CRUZADAS" BACTERIANAS hospital.
La flora transitoria, incluye microorganismos que llegan
Como se recordar, las bacterias tienen un "aparato adheridos a deshechos orgnicos, que se depositan sobre
locomotor" constituido fundamentalmente por flagelos, la superficie cutneo-mucosa pero no estn
que les permiten movilizarse en medios lquidos pero no necesariamente adaptados a las condiciones ambientales
a travs de superficies slidas o vas areas. zonales, no se unen a los receptores, ni son capaces de
sobrevivir en el lugar en forma prolongada.
Por lo tanto para que estos microorganismos "vidos de
colonizacin y conquista" puedan trasladarse de un lugar Estos son los principales causantes de dichas infecciones
(o una persona) a otro(a) necesitan de un vehculo, de un intrahospitalarias y el blanco fundamental del lavado de
transportador, de un "vector mecnico". Algunas veces manos, que por el arrastre del agua y la accin del jabn
(pero no la mayora) las gotitas de pflugge cumplen con reduce eficientemente esta flora.
este cometido.
Pero no todos los procedimientos requieren las mismas
Sin embargo, a nivel mundial los hospitales exigencias con respecto a las tcnicas de lavado.
universitarios presentan un ndice de morbi-mortalidad
superior (sobre todo causado por infecciones As para un contacto rutinario como tomar la presin,
intrahospitalarias) que los hospitales no universitarios auscultar, etc. basta con un lavado vigoroso durante 10"
(ver Captulo Infecciones Intrahospitalarias). con agua y jabn. En otros casos deber agregarse el uso
3
 de algn antisptico, como ser:
CLASIFICACION DE LOS DESINFECTANTES
1. antes de realizar procedimientos invasivos (aunque
se utilicen guantes estriles); Para este ordenamiento no nos basaremos en su
2. antes y despus del contacto con heridas quirrgicas composicin qumica sino en dos criterios diferentes:
o traumticas;
3. antes del contacto con pacientes especialmente 1. el rango de actividad y efectividad sobre los
susceptibles (por Ej.: inmunodeprimidos y recin microorganismos (nivel de desinfectante);
nacidos);
4. luego de entrar en contacto con una fuente 2. segn su mecanismo de accin.
contaminada, como puede ser un paciente infectado
o sus secreciones; Trataremos de jerarquizar el primer punto, ya que en la
5. antes y despus del contacto con un paciente de prctica es el criterio fundamental para escoger un
CTI; desinfectante.
6. antes de cualquier procedimiento quirrgico.

TECNICA DEL LAVADO DE MANOS

1. Remocin de alhajas (anillos, pulseras, etc.). 5. Enjuague abundante con agua corriente (tener
precaucin con los restos de jabn, que de
2. Lavado vigoroso con agua y jabn durante 10" quedar pueden inactivar los antispticos).
y enjuagado con agua corriente. Para un 6. Aplicacin de un antisptico (los ms utilizados
contacto rutinario basta con estos dos pasos. son: alcohol al 70%, iodforos, alcohol iodado
Tras secarse con papel, se cierra la canilla con al 0.5% y Clorohexidina al 4%)
el mismo.
Corresponde ahora ingresar en el estudio de las
Para un procedimiento invasio-quirrgico, se agrega propiedades de los antispticos y desinfectantes mas
adems: comnmente utilizados.

3. Cepillado de uas (reservorio importante de

microorganismos). AGENTES ANTIMICROBIANOS QUIMICOS
(DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS)
4. Cepillado de piel de manos y antebrazos (se
remueve as la flora transitoria y parte de la INTRODUCCION: los desinfectantes (que los
residente). separamos de los antispticos por no utilizarse en piel y
mucosas), tambin se diferencian de los ATBs.

Antibiticos Desinfectantes y Antispticos

1) Pueden aplicarse sobre piel, mucosa y el medio interno 1) No pueden utilizarse en el medio interno y los desinfectantes
ni siquiera sobre piel o mucosas
2) Tienden a ser selectivos para las clulas procariotas no 2) No poseen selectividad, actuando sobre clulas procariotas
actuando sobre eucariotas y eucariotas, razn por la cual no pueden usarse sobre el
medio interno.
3) Actan sobre microorganismos en multiplicacin activa ya 3) Actan sobre microorganismos en cualquier estado
que interfieren con algn paso metablico. metablico (en multiplicacin o no).

4) Se necesitan pequeas cantidades para obtener el efecto 4) Se necesitan mayores concentraciones que los ATBs para
deseado. conseguir el efecto.
5) Actan especficamente sobre bacterias y no sobre hongos 5)Son txicos para muchos tipos e micro- organismos, por ej.:
virus u otros microorganismos hongos, virus, etc.

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1. NIVEL DE LOS DESINFECTANTES:

Estos son clasificados en tres niveles (alto, mediano y

bajo), segn la intencidad de su actividad sobre bacterias
y esporos, virus (lipdicos y no lipdicos), hongos y sus
esporos, etc.

A. Desinfectantes de alto nivel:

Se caracterizan por actuar inclusive sobre los esporos

bacterianos (forma ms resistentes dentro de los
microorganismos), produciendo una esterilizacin
qumica si el tiempo de accin es el adecuado.

Se utilizan sobre instrumentos mdicos o quirrgicos

termosensibles.

Son rpidamente efectivos sobre bacterias no Son aquellos que actuando durante un tiempo razonable,
esporuladas. Por lo general el nmero de esporos en el no destruyen esporos, ni Micobacterium, ni virus no
material a desinfectar es insignificante, por lo que la lipdicos por Ej.:
esterilizacin es rpida.
Dentro de este grupo se encuentran: I. Compuestos de Amonio cuaternario
II. Compuestos mercuriales
I. Oxido de Etileno
II. Formaldehdo al 8% en alcohol 70% En la prctica estos compuestos se utilizan para la
III. Glutaraldehdo al 2% limpieza domstica mientras que estn prcticamente en
IV. Perxido de Hidrgeno desuso en los hospitales y laboratorios debido al empleo
de tcticas ms agresivas para la desinfeccin.
Todos estos son desinfectantes estrictos, no pudindose
usar como antispticos. La seleccin del agente o el procedimiento a utilizar
depende en gran parte de las caractersticas del objeto, y
B. Desinfectantes de mediano nivel: de la probabilidad que tiene ste de producir una
infeccin si es utilizado estando contaminado.
Si bien no destruyen esporos, si lo hacen con grmenes Se clasifican as en elementos crtico, semicrtico y no
tipo: M.tuberculosis, hongos y virus no lipdicos. crtico.

Algunos agentes son: El nivel y tipo de desinfeccin que deber lograrse, va a

depender de la categora a la que pertenezca el objeto, su
I. Compuestos clorados (por ej.: hipoclorito de naturaleza y su forma de uso.
sodio)
II. Compuestos iodados (iodforos y alcohol iodado)
Elementos CRITICOS:
III. Compuestos fenlicos
IV. Alcoholes Son los que se introducen directamente en el cuerpo, la
V. Clorohexidina sangre, o cualquier rea del organismo que suele ser
estril; por Ej.: catteres, agujas hipodrmicas, equipos
La mayora de estos son utilizados como desinfectantes de hemodilisis, etc.
y antispticos.
Evidentemente existe un altsimo riesgo de producir una
C. Desinfectantes de bajo nivel: infeccin si estos objetos se encuentran contaminados en
el momento de su uso.
5
El tratamiento para estos elementos deber ser No obstante, algunos desinfectantes comparten ms de
esterilizacin, en lo posible por mtodos trmicos, uno de estos mecanismos.
radiaciones, o de lo contrario con un desinfectante de PRINCIPALES AGENTES QUIMICOS
alto nivel, por Ej.: xido de etileno, glutaraldehdo, cido
peractico, etc., como sucede con los materiales DESINFECTANTES DE ALTO NIVEL:
descartables.
Por su mecanismo de accin, todos los que veremos aqu
Elementos SEMI CRITICOS: actan modificando en forma irreversible grupos
funcionales de protenas y/o cidos nucleicos. Entre otros
Estn en contacto con las mucosas intactas (que efectos, esto provoca inhibicin enzimtica, lo que lleva
normalmente estn colonizadas por la flora normal) pero a la muerte celular. Los agentes que predominan en este
no la atraviesan. Encontramos en este grupo: grupo son los Alquilantes (Oxido de etileno,
termmetros (de uso rectal y oral), fibroscopios, tubos formaldehdo, glutaraldehdo).
endotraqueales, broncoscopios, etc.
Estos producen la alquilacin de protenas que
Tambin la esterilizacin es lo ms aconsejable, pero se contengan hidrgenos lbiles, los que se encuentran en
acepta una desinfeccin con agentes de alto o mediano los grupos: carboxilo, hidroxilo, sulfhidrilo, amino y
nivel, siempre posterior a un cuidadoso lavado con agua fenol de dichas protenas)
y detergente.
OXIDO DE ETILENO (ETO GAS):
Elementos NO CRITICOS:
Este gas acta adems de lo dicho, a nivel de los cidos
Se encuentran en contacto con la piel sana pero no con nucleicos, produciendo mutaciones tanto en bacterias
las mucosas. En condiciones normales poseen poca como en tejidos humanos.
posibilidad de producir infecciones. Sin embargo,
pueden funcionar como "vectores mecnicos" que Se utiliza ampliamente para la esterilizacin de
transfieren grmenes de un paciente a otro, lo que instrumentos termolbiles como ser: tubuladuras de
favorece la aparicin de infecciones cruzadas, mas polietileno (catteres, sondas), equipos electrnicos
graves en el caso de pacientes inmunodeprimidos. medico-quirrgicos, materiales biolgicos, drogas, etc.

Estetoscopios, mscaras faciales y humidificadores, entre El equipo de esterilizacin, si bien es similar al autoclave
otros, son los objetos que se agrupan aqu. que funciona por gravedad, es ms complejo y de
manejo dificultoso. Es necesario controlar ciertos
Se considera suficiente el lavado con agua y detergente, parmetros para asegurar un buen resultado. Estos son:
seguido de la aplicacin de un desinfectante de mediano
nivel. a. Composicin del gas: se debe usar mezclas con
fren o CO2 (12% xido de etileno-88% fren
o CO2) ya que puro es altamente inflamable.
Teniendo ya una visin global de los agentes qumicos,
podemos comenzar a describirlos, asociados a su: b. Grado de humedad (entre 40 y 80%).

c. Temperatura (de 52 a 58C).

d. Tiempo de exposicin (entre 3 y 6 hs).

2. MECANISMO DE ACCION: Cada ciclo de esterilizacin debe ser sometido a

controles biolgicos con esporos de B.subtilis.
La mayora de los desinfectantes se los agrupa en tres
categoras: PRINCIPALES DESVENTAJAS: Es altamente
txico, mutagnico y carcinognico para los tejidos;
A. los que lesionan la membrana celular; irrita los ojos y las mucosas.
B. los inactivadores irreversibles de
protenas; Por lo tanto, una vez finalizado el ciclo de esterilizacin,
C. los que lesionan los cidos nucleicos. el gas debe evacuarse del equipo y eliminar por arrastre
6
con aire filtrado los residuos que puedan haber quedado. medico-quirrgicos, lentes de contacto de plstico
blando, etc.
GLUTARALDEHIDO:
Otra forma de utilizacin es en combinacin con cido
Se utiliza a temperatura ambiente en solucin al 2%. peractico para esterilizar maquinarias (por Ej.: equipos
de pasteurizacin).
Es esporicida para tiempos de accin de 6 a 10 hs. El perxido de hidrgeno en solucin al 30% y luego
vaporizado, se utiliza para esterilizar superficies (por Ej.:
Es el desinfectante ms utilizado en la esterilizacin de cabinas de seguridad)
equipos de endoscopa y de tratamiento respiratorio ya
que no corroe metales y gomas, ni deteriora lentes. DESINFECTANTES DE MEDIANO NIVEL:

DESVENTAJAS: Es txico para piel, mucosas y ojos; Se destacan los que actan a nivel de protenas y cidos
tambin desprende vapores txicos para el aparato nucleicos (agentes oxidantes) y los que actan a nivel de
respiratorio. la membrana citoplsmica; dentro de estos se encuentran
compuestos fenlicos y los alcoholes.
FORMALDEHIDO (FORMOL):
AGENTES OXIDANTES:
Se utiliza en forma gaseosa o lquida. En su estado
gaseoso se usa para desinfectar ambientes, muebles y Mecanismo de accin: oxidan los grupos sulfhidrilos
artculos termolbiles. En estado lquido (formalina), se (SH) a disulfuro (SS), lo que inactiva las enzimas que los
obtiene comercialmente en solucin al 37%, y se utiliza poseen. Ya hablamos del perxido de hidrgeno, aqu
para conservar tejidos frescos y, para inactivar virus en la hablaremos de los halgenos.
preparacin de vacunas, ya que interfiere poco en la
actividad antignica microbiana. HALOGENOS:
Dentro de estos elementos se encuentran el iodo y el
DESVENTAJAS: produce vapores altamente irritantes, cloro.
txicos y carcinognicos, adems de tener escaso poder
de penetracin. COMPUESTOS CLORADOS:

Por todo esto no se utiliza en el laboratorio como un Son los desinfectantes de mediano nivel ms
desinfectante comn. econmicos, efectivos e inocuos para el hombre.

Utilizado en concentraciones elevadas (37%) tiene Pueden presentarse como cloro puro, combinado con una
accin esporicida; para la preparacin de vacunas se sulfonamida (Cloramida T) o en sus formas ms
utiliza formalina al 0.2 o 0.4%. utilizadas: Hipoclorito de sodio (en solucin acuosa) o
de calcio (en tabletas).
Adems de los agentes alquilantes, dentro de este grupo
se encuentra el perxido de hidrgeno, que es un agente El principio activo de todos es el mismo: la liberacin de
oxidante. cloro molecular, que en presencia de agua se combina
con esta para formar cido hipocloroso, el cual es un
PEROXIDO DE HIDROGENO: fuerte agente oxidante a pH neutro o cido.

Adems de su mecanismo de accin como agente CL2 + H2O --- HCLO + CL- + H-
oxidante (ver ms adelante) este compuesto produce la
formacin de radicales libres hidroxilos, que contribuyen Si bien es de mediano nivel, el hipoclorito tiene una
a desestabilizar las molculas celulares. dbil accin esporicida. Adems es tuberculicida,
bactericida para todas las formas vegetativas, destruye
Utilizado en solucin al 3% es de escasa y breve los virus envueltos (por Ej.: HIV) e incluso algunos
actividad como antisptico, ya que es rpidamente desnudos (HBV).
inactivado por las enzimas catalasa, tanto de los
microorganismos como las tisulares. La estabilidad de estos productos depende entre otras
cosas de:
En soluciones estabilizadas al 10% acta como
desinfectante de alto nivel. Se utiliza sobre dispositivos 1. el pH: si bien acta mejor a pH neutro o cido,
7
 es ms estable a Ph 8;
2. la presencia de materia orgnica: es uno de los Algunas equivalencias tiles son:
desinfectantes de mediano nivel que se inactiva
ms drsticamente ante la presencia de 1 cucharada de sopa = 25 ml
sustancias como pus, sangre, heces, etc. 1 cucharadita de te = 5 ml
3. la exposicin a la luz. Las diluciones acuosas 1 gota = 0.05 ml
se degradan ms rpidamente que las
soluciones concentradas. Por lo tanto, para Precauciones
conservar productos clorados, es necesario a) las diluciones en agua tibia actan ms rpida e
mantenerlos en recipientes opacos, sin materia intensamente que en agua fra, pero se degradan
orgnica, lo ms puro posible y a pH 8. pronto.
b) no es recomendable combinar estas soluciones con
Aun con todas estas precauciones, los productos as detergentes, los cuales pueden inactivarlas (sobre
preparados deben renovarse al menos una vez al mes. todo los catinicos). No obstante, es aconsejable
limpiar previamente con un detergente las superfi-
La concentracin de cloro activo se mide en partes por cies a desinfectar, para eliminar restos orgnicos.
milln (PPM) o gramos por litro (gr/l) de modo que
1000 PPM=1 gr/l o lo que es lo mismo 1PPM = 1 mg/l. COMPUESTOS DE IODO:

Las formas comerciales ms comunes tienen En medicina se los utiliza en soluciones, tinturas o
concentraciones de 40.000 PPM (Agua jane, Sello rojo, iodforos, como desinfectantes pero sobre todo como
etc.) o 5.000 PPM (Electrn). antispticos.

Segn la cantidad de cloro activo y el uso que le vamos a Usos: preparacin pre operatoria, antisepsia quirrgica
dar, es la dilucin que debemos hacer, por Ej: de manos, as como tambin de piel previo a:
desinfeccin de: inyecciones. parto, transfusio-nes, extraccin de sangre,
etc. Como desinfectante se utiliza so-bre termmetros
1. Chatas, violines, o heridas muy sucias 5.000 clnicos, ampollas de dosis mltiples, sobre su-perficies,
PPM etc.
2. Bocales c/pipetas contaminadas 2.500
PPM Tanto las tinturas (2% de iodo + 2.4% de ioduro de
3. Mamaderas o heridas en general 1.000 sodio en solu-cin acuosa y alcohol) como las soluciones
PPM fuertes (5% de iodo + 10% de ioduro de potasio en
4. Frutas, verduras, vajilla, ropa blanca 250 solucin alcohlica) son inestables en presencia de
PPM materia orgnica y calor, manchan la ropa, tien piel y
5. Potabilizacin del agua 2 PPM mucosas, desencadenan reacciones alrgicas y tienen mal
olor; adems su uso prolongado corroe metales y altera
Para hacer la dilucin de una solucin concentrada de plsticos.
hipoclorito de sodio utilizamos la ecuacin V1 * C1 =
V2 * C2 Por todo esto se prefiere la utilizacin de iodforos que
son me-nos txicos e irritantes.
Ej: se necesita preparar 1 lt. de solucin de hipoclorito
de sodio que contenga 2.500 PPM de cloro activo para Iodforos:
preparar un bocal.
Esta forma de desinfectantes esta constituida
C1= 50.000 PPM funcionalmente por tres componentes: un transportador o
V1= x portador de iodo, el iodo disponible y el iodo libre.
C2= 2.500 PPM
V2= 1.000 ml Transportador (carrier): es un solubilizante que acta
como reser-vorio de iodo. Generalmente se utilizan para
Entonces tenemos: 40.000 PPM * V1 = 2.500 PPM * esto detergentes, de modo de limpiar la piel a la vez de
1.000 PPM liberar el halgeno. Tambin se utilizan otro tipo de
despejando V1 = 2.500 PPM * 1.000 ml / 40.000 = agentes activos de superficie, como com-puestos de
62,5 ml Se deben tomar 50 ml de solucin concentrada amonio cuaternarios, polyvinylpyrrolidona (povidona),
y agregarle agua has-ta completar 1 lt. etc.
8
Iodo disponible: es el iodo en solucin, generalmente al COMPUESTOS FENOLICOS:
1%. Con-forma el reservorio de complejos de iodo, el
que liberado en pe-queas cantidades asegura una Agregan a la accin ya descrita, la activacin en forma
concentracin constante de iodo li-bre. irreversi-ble de las oxidasas y deshidrogenasas que se
encuentran unidas a la membrana.
No es el iodo que acta en la destruccin de los
microorganismos. El fenol (cido carblico) como tal, ya no es utilizado
ms que como patrn para comparar otros
Iodo libre: es el activo, el de accin microbicida, se desinfectantes. Esto es debido a su alta toxicidad,
cuantifica en PPM y es el que le da el nivel de potencia a carcinogenicidad y su poder corrosivo.
este desinfectan-tante. As los iodoforos son capaces de
destruir bacterias (in-cluida M.tuberculosis), hongos y La sustitucin de uno de los hidrgenos del ncleo
virus desnudos, no as los no lipdicos (por Ej: Polio y fenlico por grupos funcionales tales como alquilo,
Rotavirus). difenilo, fenil y cloro, disminuye notablemente los
efectos adversos y aumenta la actividad antibacteriana de
Si bien tienen cierta actividad esporicida, el tiempo de estos compuestos.
exposi-cin debe ser demasiado largo para darle esta
utilidad. La unin de estos fenoles modificados a jabones
aumentan an ms su accin, a la vez que los
Ventajas: (sobre otros compuestos iodados) mayor hidrosolubilizan.
poder de penetra-cin, mayor tiempo de accin, menor
produccin de reacciones ad-versas debido a la baja Dentro de las sustituciones ms utilizadas se encuentran
concentracin de iodo disponible (1%). los al-quilo fenoles (cresoles) y los compuestos
difenlicos (hexacloro-fenol).
Precauciones: dado que el iodo libre es muy difcil de
medir, cuando sea necesario preparar un iodforo a partir Los compuestos fenlicos utilizados en las
de un compuesto concentrado, se deber seguir las concentraciones adecua-das y con el tiempo suficiente
instrucciones del fabricante es-trictamente, ya que si son: bactericidas, virucidas y fun-gicidas; por Ej: el HIV
producimos diluciones mayores o menores a las es inactivado por una solucin fenlica al 0.5%, mientras
estipuladas, estaremos disminuyendo la cantidad de iodo que se necesita una solucin al 2% para inactivar hongos.
libre. Por lo general la concentracin utilizada oscila entre 2 y
5%.
Alcohol iodado (iodo 0.5% en alcohol etlico al 70%):
posee un buen nivel antisptico, se utiliza para CRESOLES:
preparacin quirrgica de piel, sitios de puncin,
desinfeccin de superficies. Se los divide en tres grupos: orto meta y paracresol,
aunque suele utilizarse una mezcla de los tres
Reduce efectivamente la flora cutnea en un minuto. denominada tricresol.

AGENTES QUE LESIONAN LA MEMBRANA Derivados de la destilacin del alquitrn de hulla son
CITOPLASMICA: mezclados con jabn y se comercializan por Ej.: como
Creolina.
Hablaremos aqu de los compuestos fenlicos y los
alcoholes, que se integran a los desinfectantes de Esta se utiliza para desinfeccin ambiental por Ej.:
mediano nivel. paredes, pi-sos, etc.

Mecanismo de accin: a nivel general, estos compuestos HEXACLOROFENOL:

producen un desordenamiento estructural de la
membrana citoplsmica, que in-terfiere con su Es un derivado halogenado con gran accin bactericida,
funcionamiento normal. fundamen-talmente sobre bacterias Gram (+), sobre todo
estrepto y estafilo-cocos.
Esto provoca la prdida de pequeos metabolitos del
medio intrace-lular y dificulta tanto el transporte activo Posee accin persistente, hasta el punto que su mxima
como el metabolismo energtico. accin bac-tericida se manifiesta luego de varios das de
9
uso consecutivo. Para esto deben ponerse los objetos en inmersin en un
recipiente tapado.
ALCOHOLES (ALCOHOL ETILICO):
Para preparar las diluciones (por Ej.: de alcohol 70%) a
Se utilizan como desinfectantes y como antisptico. partir de alcohol rectificado (95%), podemos utilizar la
frmula: C1*V1=C2*V2 de igual manera que para el
Mecanismo de accin: producen precipitacin y hipoclorito de sodio. As para preparar 100 ml de alcohol
desnaturalizacin de protenas, tambin lesionan la 70% tenemos:
membrana citoplsmica. La precipi-tacin y
desnaturalizacin de protenas depende de la presencia 95% * V1 = 70% * 100ml despejando V1 tenemos:
de: 1) agua y 2) materia orgnica. V1 = 70% * 100ml/ 95% = 73.6ml

1. El alcohol etlico rectificado (95%) provoca A esta cantidad se le agrega agua destilada hasta
gran deshidrata-cin en los microorganismos, completar los 100ml.
de manera que impide su penetra-cin en los
mismos. Por lo tanto, las concentraciones ms CLOROHEXIDINA:
efectivas son las que oscilan entre el 60 y 80%
en agua des-tilada, siendo la preparacin mas Se encuentra dentro de los antispticos ms utilizados a
efectiva al 70%. nivel hospitalario.
Concentraciones por debajo del 50% no causan
ningn efecto. Se trata de un compuesto fuertemente bsico, que en este
estado es insoluble en agua y poco soluble en la mayora
2. La materia orgnica inactiva los alcoholes, por de los solventes orgnicos. Para solubilizarla se preparan
lo que se re-comienda limpiar la superficie distintas sales (la ms utilizada es el gluconato), donde se
antes de desinfectar con al-cohol. obtiene una concentracin de clorohexidina de hasta el
20%.
Las lesiones en la membrana citoplsmica se deben a Las preparaciones ms utilizadas contienen entre un 0.5
que el al-cohol penetra en la regin hidrocarbonada, y 4% de producto.
desorganizando la es-tructura lipdica.
Su pH ptimo de accin se encuentra entre 5.5 y 7.
El alcohol 70% es rpidamente bactericida sobre las
formas vegeta-tivas bacterianas tanto Gram (+) como A pH 5 y 6 acta fundamentalmente sobre Gram (-),
Gram (-), es tuberculicida, fungicida y viricida, mientras que a pH mayores acta tambin sobre Gram
incluyendo a Citomegalovirus (CMV), HIV, y HBV. No (+).
acta sobre esporos.
Como el estudiante recordar, la flora normal de la piel
Principales caractersticas: est constituida fundamentalmente por microorganismos
Gram (+), por lo tanto a pH neutro, la clorohexidina se
a. No tiene buena penetracin sobre materia transforma en un excelente antisptico cutneo.
orgnica.
b. No esteriliza desinfecta. Su espectro es bastante amplio, abarcando bacterias
c. Se utiliza fundamentalmente para desinfectar Gram (+) y Gram (-), hongos y levaduras, es
materiales semi crticos y no crticos (por Ej: bacteriosttico (detienen el crecimiento pero no mata)
termmetros clnicos, pinzas, limpieza de para M.tuberculosis, ms no tiene actividad sobre
mesadas, etc.) y antisepsia de piel. esporos.

A nivel de piel se utiliza para antisepsia de manos, Mecanismo de accin: Su accin se debera a su unin a
previo a in-yecciones, punciones venosas, etc. grupos negativamente cargados de las molculas
celulares. Esto producira precipitacin de protenas y
Los alcoholes se evaporan rpidamente, sin dejar cidos nucleicos, inactivacin enzimtica y prdida
residuos sobre las superficies tratadas. Esto es ventajoso irreversible del contenido citoplsmico.
cuando se aplica sobre la piel ya que no mancha ni deja La clorohexidina no presenta absorcin cutnea
mal olor, pero es inconveniente cuando se aplica a significativa, por lo que prcticamente no tiene efectos
objetos inanimados, ya que no se consiguen largos adversos por esta va. Ocasionalmente produce
perodos de contacto entre el desinfectante y el objeto. sensibilizacin cutnea a nivel genital, las soluciones
10
concentradas pueden producir hematurias cuando son
utilizadas para lavado vesical; tambin ototoxicidad y
causar irritacin de las conjuntivas y otros tejidos DESINFECTANTES DE BAJO NIVEL: Se
sensibles. encuentran aqu los compuestos de amonio cuaternarios
y los compuestos mercuriales.
PRINCIPALES CARACTERISTICAS:
Este tipo de agentes no deben usarse como antispticos,
a. Acta en forma mas lenta que los alcoholes ni para desinfectar elementos semicrticos; tampoco
pero su efecto persiste ms tiempo. deben utilizarse dentro de recipientes (por Ej.: vocales)
b. Tiene efecto acumulativo. para desinfectar por inmersin, puesto que muchos
c. Buena accin sobre bacterias Gram (+), Gram microorganismos (por Ej.: Pseudomona) son capaces de
(-) y virus. multiplicarse en estas condiciones; han habido incluso
d. Baja toxicidad e irritabilidad. epidemias intrahospitalarias a partir del mal manejo de
e. Sus diluciones mantienen mas que los iodforos estos desinfectantes.
la actividad bactericida.
f. Al 4% es ideal para el lavado quirrgico de
manos y preparacin pre-quirrgica de piel.

Esto ltimo se debe a:

a. acta rpidamente, reduciendo la flora

transitoria en un 99% en 15" y la residente en
un 99.9% en 30" (se recomiendan lavados de
2';

b. si bien tiene efecto inmediato con una sola

aplicacin, presenta efecto acumulativo con el
uso regular. De manera que va aumentando su
accin bactericida de un lavado de manos a
otro;

c. tiene accin persistente: tanto las manos del

cirujano como la piel que circunda la cisura
debe mantenerse libre de grmenes durante la
intervencin.
El sobrecrecimiento de la flora normal en
ambas partes es un hecho frecuente, por su gran
afinidad por la piel (a la cual se adhiere) la
clorohexidina evita esto, manteniendo por
varias horas su accin.

Las preparaciones ms utilizadas son:

A. Jabn quirrgico: constituido por gluconato

de clorohexidina al 4% y se utiliza en: lavado
quirrgico de manos, preparacin quirrgica de
piel, antisepsia general de piel, lavado y
antisepsia de heridas, preparacin de piel para
procedimientos invasivos, etc.

B. Solucin alcohlica: constituida por gluconato

de clorohexidina al 0.5% en alcohol etlico al
70%, se utiliza en: antisepsia general de piel,
preparacin de piel para procedimientos
invasivos, etc.
11
 FIG 4: Trayectoria ondulante de un fotn. Lo
comprendido dentro de la llave, corresponde a
su longitud de onda

FIG 1: Representacin del nmero de

sobrevivientes de una poblacin bacteriana en

FIG:2 Representacin del comportamiento sigmoide

de la cintica de destruccin para concentraciones
intermedias de desinfectantes

Fig. 5: Estructura de dos molculas de

pirimidina (timina-timina) adyacentes de la
misma cadena.
A. Organizacin normal; B. organizacin luego
de exposicin a rayos UV donde se puede ver el
ciclo
butano que se forma entre los carbonos 5 y 6
de ambas molculas.

FIG3: Representacin del nmero de sobrevivientes

de la flora normal de manos y antebrazos en funcin
del tiempo, para diferentes antispticos de uso
comn. 12
 COMPUESTOS DE AMONIO CUATERNARIO:
(Ej.: cloruro de benzalconio, Rocal, Zephiran, Tritn Los procedimientos fsicos se dividen en energticos y
k12, etc.) son agentes catinicos y actan a nivel de la mecnicos. Dentro de los primeros se encuentran: el
membrana celular (agentes activos de superficie). Los calor y las radiaciones, dentro de los segundos, la
agentes activos filtracin.
de superficie son anfipticos (estn constituidos por un
sector hidrofbico y uno hidroflico). En este caso el A. DESTRUCCION DE MICROORGANISMOS
residuo hidrofbico se encuentra balanceado por el MEDIANTE CALOR:
residuo hi-droflico positivamente cargado que La energa trmica es la forma mas efectiva de
constituye el ncleo de amonio cuaternario. esterilizacin.
Esta puede utilizarse como calor hmedo o seco.
Al ponerse en contacto con la superficie bacteriana, el
grupo catinico se asocia a los grupos fosfato de los I. CALOR HUMEDO:
fosfolpidos de membrana, liberando al residuo
hidrofbico, que entra en la regin hidrfoba de la Mecanismo de Accin: Al igual que los procesos de
membrana. Esto altera la semipermeabilidad de la desinfeccin, la esterilizacin trmica destruye a los
membrana y provoca la salida de compuestos microorganismos en forma gradual; es por esto que no
fosforilados. hay un nico mecanismo de accin, sino ms bien la
suma de distintos eventos complejos que se van
Una vez ocurrido esto, el agente entra en la clula y sucediendo a medida que aumenta la temperatura.
desnaturaliza las protenas.
As, aunque el efecto final de la esterilizacin por calor
Poseen un rango de accin que abarca fundamentalmente hmedo a 121C es la desnaturalizacin y coagulacin
a bacterias Gram (+). de las protenas, son importantes otros mecanismos de
destruccin, que justifican la utilizacin de calor hmedo
Las principales aplicaciones se dan para la desinfeccin a temperaturas inferiores, como veremos ms adelante.
de tems no crticos y desinfeccin ambiental domstica.
El primer efecto letal sera la produccin de rupturas de
2. COMPUESTOS MERCURIALES: (Mertiolate, cadena nica en el ADN que provocaran la muerte
Mercuriocromo, Metafen, etc.). Son bacteriostticos, celular por activacin o liberacin de enzimas con
necesitando grandes concentraciones para alcanzar actividad de endonucleasas.
efectos bactericidas.
El punto crtico aqu, para la supervivencia de la clula
Inhiben la actividad enzimtica por unin del mercurio sera su capacidad para reparar la lesin, funcin que
con los grupos sulfhidrilo de las mismas. depende del estado gentico y fisiolgico de la bacteria.

Estas sustancias estn fuera de uso debido a: A medida que aumenta la temperatura se agregara la
prdida de la integridad funcional de la membrana
a. Aumento por parte de los microorganismos de citoplsmica, lo que producira interferencias en el
la resistencia al mercurio. intercambio con el medio externo, los procesos
b. Poseen efectos txicos sobre tejidos y respiratorios y la sntesis proteica.
corrosivos sobre metales.
c. Son poco activos al pH de los lquidos Por ltimo, las temperaturas ms elevadas activaran
corporales. ribonucleasas que degradando el ARNr producen la
d. Se inactivan drsticamente con la presencia de prdida de viabilidad de las clulas expuestas.
materia orgnica.
Las temperaturas a la cual puede usarse el calor hmedo
Corresponde hablar finalmente de las: son:
TECNICAS DE ESTERILIZACION Por debajo de 100C --- Pasteurizacin
A 100C --- Ebullicin y Tindalizacin
Para esto contamos con procedimientos fsicos o Por encima de 100C --- Autoclavado
qumicos.
Pasteurizacin: se utiliza para la destruccin de
Estos ltimos ya han sido vistos al considerar los grmenes patgenos, con resistencia trmica similar o
desinfectantes de alto nivel. inferior a M.tuberculosis, Brucella y Salmonella.
13
 como una resistencia elctrica o se le suministra aparte,
Este no es un mtodo de esterilizacin sino de desde abajo, generalmente mediante gas.
desinfeccin, donde no se destruyen ni esporos ni virus
no lipdicos (por Ej.: HAV). Dentro del recipiente externo se coloca agua destilada, la
cual al llegar al punto de ebullicin producir el vapor
Existen dos mtodos de pasteurizacin: o se calienta a que al entrar en contacto con los microorganismos,
65C durante 30' o a 72C durante 15". Luego ambas se actuar como agente esterilizante.
enfran rpidamente a 10C.
Los materiales se cargan dentro del recipiente interno
Esta tcnica se utiliza fundamentalmente en la que al no tener tapa permite una fluida entrada de vapor,
descontaminacin de la leche. pero evita el contacto de estos con el agua.

Ebullicin: consiste en mantener un objeto o sustancia El aire es mal conductor del calor, lo que impide llegar a
en un bao a 100C durante 30'. Aplicado as destruye la las 2 temperaturas necesarias, por lo que una vez cargado
mayora de las formas vegetativas bacterianas, hongos y y cerrado el autoclave debe purgarse. Esto se consigue
virus lipdicos (por Ej.: Herpesvirus y HIV). En cambio dejando la llave de escape abierta hasta que el vapor, por
no es efectivo para la destruccin de esporos y virus no arrastre, elimine el aire contenido en el equipo. Se cierra
envueltos. la llave, se deja que la presin llegue a una atmsfera
relativa (15 lbs.) y luego se cuenta el tiempo.

La repeticin de este proceso durante tres das Terminado el ciclo, se apaga la fuente de calor y se deja
consecutivos, constituye la Tindalizacin. Su descender la temperatura. No debe abrirse la tapa
fundamento terico est dado por la destruccin de las hasta que la presin del sistema se iguale a la
formas vegetetivas durante los perodos de ebullicin, atmosfrica !!!.
permitiendo que los esporos germinen durante el reposo
volvindose susceptibles al prximo calentamiento. Tampoco se debe provocar una liberacin brusca del
Tampoco aqu se esteriliza. vapor (por Ej.: abriendo la llave de escape) ya que si hay
lquidos dentro del autoclave, alcanzarn rpidamente
Autoclavado: utiliza vapor de agua a 121C durante 15'o estado de ebullicin y se derramarn, debido a que
20'. Esta temperatura se logra si se obtiene una presin disminuye la presin pero no la temperatura.
de una atmsfera relativa (dos atmsferas absolutas), ya
que el aumento de la presin provoca aumentos 2. AUTOCLAVES QUE OPERAN POR
proporcionales en el punto de ebullicin del agua. Es el GRAVEDAD: son equipos elctricos, automticos o
mecanismo de destruccin microbiana ms efectivo, y manuales. El vapor se produce dentro de una doble pared
bien utilizado asegura esterilizacin. El equipo que se y se libera desde la parte superior del autoclave, de
utiliza es el autoclave, del cual existen distintos tipos, manera de desplazar por gravedad el aire hacia abajo, y
como ser: promover su escape por una llave de salida inferior.

1. Vertical de manejo manual. Como precaucin debe introducirse el vapor lentamente

para que no se caliente el aire al salir.
2. Que opera por gravedad.
Luego del purgado, las etapas son iguales a las del
3. De esterilizacin rpida. autoclave vertical.

1. AUTOCLAVE VERTICAL DE MANEJO 3. EQUIPOS DE ESTERILIZACION RAPIDA: son

MANUAL: consta de dos recipientes cilndricos, uno automticos y consiguen un ciclo de esterilizacin en 20'.
externo con tapa de cierre hermtico que se asegura por
mltiples tornillos y uno interno donde se pone el Si bien en sus partes fundamentales son similares a los
material a esterilizar. anteriores, su funcionamiento es diferente. Poseen una
bomba de vaco que extrae rpidamente el aire del
El recipiente externo contiene adems, una vlvula de equipo.
seguridad, un manmetro o termmetro y una llave de
salida o escape. De este modo se reduce la presin; cuando esta llega a
15 o 20 mmHg, se libera el vapor, que en estas
La fuente de calor puede venir incluida en el equipo, condiciones se distribuye en forma homognea por todo
14
el espacio en breves minutos. temperatura que en el autoclave, debindose mantener un
objeto a 160C durante 2hs. El motivo de estos
En estos autoclaves, se puede reducir el tiempo de incrementos estaran dados porque la ausencia de agua
esterilizacin a 3' ya que se puede llevar la presin a 3 disminuira el nmero de grupos polares de las cadenas
Atm. absolutas (134C). peptdicas, lo que dara mayor estabilidad a las
molculas bacterianas, por lo que se requerira mayor
La descompresin se logra permitiendo el ingreso de aire energa para abrirlas.
filtrado y precalentado. Algunos equipos permiten
adems el secado final mediante vaco y reentrada de HORNO PASTEUR O POUPINELL: consiste en un
aire caliente. recinto metlico de doble pared con aislante entre ambas
Mediante el autoclavado se pueden esterilizar una gran (para evitar la prdida de calor) y una puerta.
variedad de objetos y lquidos, siempre que no
contengan por Ej.: antibiticos que pueden perder La fuente de calor suele ser elctrica y est incorporada.
actividad, protenas que coagulen, azcares que se Posee un ventilador que facilita la circulacin del aire
caramelicen, etc. As se esterilizan guantes, telas, caliente, para homogeneizar la temperatura.
algodn, papel, lquidos, filtros, algunos plsticos y
gomas, etc. Un termmetro (con alcance mnimo de 200C) visible
desde afuera, registra la temperatura del interior del
Los lquidos a esterilizar deben estar fraccionados en recinto.
frascos cerrados pero con la tapa de rosca floja, de modo Por calor seco se pueden esterilizar: materiales de
que pueda salir el aire y entrar el vapor. inyectables, vidrios, instrumentos quirrgicos y objetos
metlicos, as como aceites, vaselinas y polvos, que
Aquellos materiales que no se encuentren dentro de como ya se ha dicho son impermeables al vapor.
algn recipiente que los proteja de la recontaminacin al
sacarlos del autoclave, debern ser envueltos con una Precauciones:
doble capa de papel, de manera de formar pequeos
paquetes; entre estos objetos se encuentran: guantes, ! Colocar paquetes pequeos y espaciados, para
ropa, placas de Petri, pipetas, tubos de ensayo, etc. no interferir con la difusin del calor.

Se debe de tener cuidado de no sobrecargar el autoclave, ! La recarga del horno debe hacerse cuando este
de manera tal que los paquetes y frascos impidan el flujo se encuentre fro, de lo contrario su interior
libre del vapor. alcanzar la temperatura antes que el material a
esterilizar, por lo que se medir mal el tiempo.
No se deben esterilizar por este mtodo equipos que
resulten corrodos por el agua como instrumentos Controles de esterilizacin: Existen tres tipos: fsicos
metlicos. Tampoco polvos o aceites ya que son
impermeables al vapor. qumicos

II. CALOR SECO: biolgicos

Mecanismo de accin: Es diferente al del calor hmedo. Controles fsicos: estn relacionados al operario que
El calor seco (o desecacin en general) provoca realiza el procedimiento y la vigilancia de ciertos
desnaturalizacin de protenas, lesiones por oxidacin y parmetros como: presin, tiempo, temperatura, etc.
efectos txicos por niveles elevados de electrolitos.
Controles qumicos: consiste en tiras de papel con una
La accin letal es el resultado del calor trasmitido desde sustancia que cambia de color al ser expuesto a la
el material con el cual los microorganismos estn en temperatura correspondiente. La ventaja de este mtodo,
contacto, y no desde el aire caliente que los rodea. es la rapidez con que se sabe el resultado, ya que es
inmediato. La gran desventaja es que dice poco sobre el
Existen tres formas principales de esterilizacin por calor tiempo de exposicin, por lo que no asegura un
seco: flambeado, incineracin y mediante la utilizacin procedimiento correcto.
del horno Pasteur. Hablaremos solamente de esta Estos controles deben utilizarse en todos los ciclos de
ltima. esterilizacin

Para ello se necesita alcanzar mayor tiempo y Controles biolgicos: consisten en exponer esporos
15
bacterianos al ciclo de esterilizacin y luego verificar su
viabilidad.
Son los ms seguros. Dentro de una ampolla se encuentra
un medio de cultivo apropiado para el desarrollo de las
bacterias en estudio. Por fuera de esta, un tubo plstico,
contiene una cinta de papel marcador de pH,
impregnado con esporos de bacterias capaces de resistir
temperaturas cercanas a los procesos realizados.

Se utilizan esporos de Bacillus estearothermophilus en

el autoclave y de B.subtilis en la poupinell.

Este sistema se coloca dentro del paquete menos

accesible ya sea para el calor o el vapor. Finalizado el
ciclo de esterilizacin, se rompe la ampolla (por presin
manual
PRINCIPALES CARACTERISTICAS DE LOS METODOS DE ESTERILIZACION POR AUTOCLAVADO Y
POUPINELL

AUTOCLAVE POUPINELL

Temp. requerida 121C 160C

Tiempo 15-20' 2 hs.

Coagulacin y desnaturalizacin de protenas. Desnat. proteica, lesiones por oxidacin y

Mec. de accin toxicidad por producir aumento de
electrolitos.

Modo de accin Por difusin de vapor de agua. Calentamiento por contigidad.

Materiales Vidrios, medios de cultivo, gomas, telas, algodn, Vidrios, instrumentos metlicos, polvos,
guantes, algunos plsticos, etc.. aceites y vaselinas, etc..
esterilizables
Materiales Medios con ciertos ATBs, azcares o protenas; Gomas; plsticos; instrumentos
no esterilizables polvos; vaselinas y aceites; metales oxidables; .termosensibles; medios con ATBs,
instrumentos mdicos termosensibles como azcares y protenas; guantes; algodn;
broncoscopio, etc. papeles.

sobre el tubo) , esto pone en contacto el medio con los esporos) y se incuba en un bao (a 60C para Bacillus
estearothermophilus y a 37C para B.subtilis) durante ms de 48hs. Si existen microorganismos viables, su metabolismo
provocar un cambio de pH que har virar el
color del marcador, revelando el fallo del procedimiento, por lo que deber volverse a esterilizar todo.
Este tipo de controles debe realizarse peridicamente, o cuando se dude de la efectividad del procedimiento.

B. ESTERILIZACION POR RADIACIONES

Con este fin pueden utilizarse tanto las radiaciones ultravioletas (UV) como las ionizantes y rayos infrarrojos.

Como el estudiante recordar, con respecto a la naturaleza de la luz se acepta una combinacin entre la teora cuntica y la
electromagntica. Es decir, que existe una partcula indivisible (denominada cuanto) constituida por un fotn que se
desplaza a travs del espacio describiendo una trayectoria ondulatoria ( fig.4).

16
La energa de un fotn es inversamente proporcional a la longitud de onda de la radiacin, sabiendo que longitud de onda
es la distancia que existe entre dos puntos correspondientes de la trayectoria ondulante (Fig. 4). Parte de esta energa es
absorbida por los sistemas biolgicos cuando estos son expuestos a las radiaciones. La fraccin de energa absorbida es
directamente proporcional a la

intensidad de la radiacin, al tiempo de exposicin a la misma y a un coeficiente de absorcin que es caracterstico de cada
material.

Veremos qu sucede a nivel molecular cuando las radiaciones interactan con la materia.

Cuando la radiacin incidente tiene energa suficiente puede elevar el nivel energtico de los electrones, hasta el punto de
arrancarlos de su orbital (producindose ionizaciones).

Si la energa es menor, los electrones aumentan su nivel de energa pero slo temporalmente, volviendo a su estado inicial
luego de un perodo de tiempo.

Este estado elevado de energa se denomina estado excitado. La molcula excitada podr transferir ese exceso de energa a
otras, en forma de energa vibratoria (producindose calor); o disiparla en forma de radiacin electromagntica.

Debido a la relativamente baja cantidad de energa que son capaces de transmitir los rayos UV, slo afectan a los electrones
de los tomos perifricos de las molculas, producindose solo estados de excitacin.

Las radiaciones ionizantes son las que pueden extraer electrones de sus orbitales.

Los rayos infrarrojos slo pueden provocar energa vibratoria, por lo que slo generan calor.

Hablaremos a continuacin solamente de las radiaciones UV ya que son las ms utilizadas en nuestros laboratorios.

No obstante, el estudiante debe saber que las radiaciones ionizantes son cada vez ms utilizadas en los laboratorios como
tcnicas de esterilizacin de rutina, ya que los adelantos tecnolgicos han simplificado estos equipos y su manipulacin. Se
utilizan para la esterilizacin de materiales descartables como jeringas, agujas, materiales para vas, etc.

RADIACIONES UV:

Mecanismo de accin: el principal mecanismo del efecto letal de la luz UV sobre las bacterias, se atribuye a su absorcin
por el ADN y el resultante dao de este. As provocan la formacin de uniones covalentes entre los residuos de pirimidina
adyacentes pertenecientes a la misma cadena, lo que provoca la formacin de dmeros de pirimidina de tipo ciclobutano
(Fig. 5).

Esto produce distorsiones en la forma del DNA e interfiere en el apareamiento normal de las bases.

El resultado final es la inhibicin de la sntesis de ADN y secundario a esto, inhibicin del crecimiento y la respiracin.

APLICACIONES: estas radiaciones pueden producirse artificialmente con lmparas de vapor de mercurio.

Son igualmente efectivas para Gram (+) y Gram(-).

Su principal uso es para esterilizar el aire y superficies, ya que no penetran en slidos y lo hacen pobremente en lquidos.

C. ESTERILIZACION POR METODOS MECANICOS:

FILTRACION
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Es el mtodo usado en el laboratorio para esterilizar lquidos termolbiles.

Existen distintos tipos de filtros: de asbesto-celulosa, de vidrio, de cermica y de steres de celulosa o membranas. Las
membranas estn compuestas por steres de celulosa biolgicamente inertes. Los poros varan desde 0.025m a 25m de
dimetro, siendo los de 0.22m los ms utilizados ya que son lo suficientemente pequeos para detener a todas las
bacterias. Con este mtodo se esterilizan: azcares, urea, sueros, antibiticos, etc.

Los filtros de membrana tambin se utilizan en Microbiologa para otros propsitos. Dado que son inertes, proporcionan un
buen medio para recoger microorganismos, por ejemplo para cultivar bacterias que se encuentran en bajas concentraciones
en un gran volumen de lquido. El mecanismo de accin es bastante simple: detienen todas las partculas que posean un
tamao mayor que los poros. En realidad los "poros" quedan formados por los espacios que resultan de la superposisin de
las fibras de las distintas capas que forman la membrana. As, algunas partculas de menor tamao son retenidas por otros
mecanismos como las fuerzas de Van der Waals o por suma de partculas retenidas previamente, etc. por lo cual "el
tamao del poro" es un valor virtual definido por el tamao de la partcula retenida, ms que por un dimetro real y
medible.

ALGUNAS RECOMENDACIONES AL FINAL DEL CAPITULO

I. El mecanismo de esterilizacin ms efectivo es el AUTOCLAVADO, siempre que sea posible, este debe ser el
procedimiento a elegir.

II. La etapa de purgado debe hacerse a temperaturas moderadas, ya que a altas temperaturas el vapor comienza a salir
sin arrastrar al aire, lo que nos lleva a cerrar la llave de escape antes de tiempo.

III. Los materiales que vienen esterilizados de origen y que son de un nico uso NUNCA DEBERAN SER
REESTERILIZADOS NI REUSADOS.

IV. En caso de tener que manejar material contaminado como ser instrumental y ropa luego de un acto quirrgico, este
debe ser manejado con guantes y pasado por un proceso de autoclavado previo a la limpieza de restos orgnicos
(con el fin de eliminar todos los microorganismos, salvo los que puedan estar protegidos por elementos como
sangre, secreciones, restos necrticos, etc.), luego si, esterilizarlos definitivamente.

Ciclo Decontaminacin-Limpieza-Esterilizacin

V. Cuando se use un antisptico debern tenerse algunas precauciones:

# lavar la regin previamente para eliminar restos orgnicos;

# retirar con abundante agua cualquier residuo de jabn;
# secar la superficie, ya que se pueden provocar diluciones excesivas del producto (fundamentalmente en
el caso de los iodforos y alcoholes) disminuyendo su actividad;
# dejarlo actuar un tiempo apropiado, se recomiendan 2' antes de realizar cualquier procedimiento.

VI. Con respecto al uso de jabones: estos debern quedar en lugares secos ya que de estar sumergidos en agua, pueden
transformarse en un reservorio de grmenes (sobre todo Gram (-).
Las jaboneras debern lavarse con frecuencia y los recipientes para jabn lquido debern removerse
aproximadamente cada 15 das, tirando el contenido que les quede, limpindolos y agregndoles soluciones
nuevas.
VII. Por ltimo pero no menos importante, la salud de los pacientes y del personal en cualquier servicio mdico
depender en gran parte de la medida en que todos los integrantes del grupo de salud, incluyendo los estudiantes, trabajen
siempre medularmente con el criterio de asepsia.

Actividades Prcticas:

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PRACTICO N1

El estudiante realizar en el autoclave la esterilizacin del material suministrado. Para esto contar con un equipo que
esquemticamente es as:

Fig. 6: Autoclave

Procedimiento:

1. Poner 2.5 lts. de agua destilada en el autoclave.

2. Disponer el material a esterilizar sobre una plataforma evitando amontonamiento. Los frascos deben estar con la
tapa floja y las cajas metlicas con la tapa entreabierta.

3. Cerrar y atornillar la tapa del autoclave.

4. Verificar que la llave de salida se encuentre abierta.

5. Encender la fuente trmica para hervir el agua dentro del autoclave.

6. Purgar hasta 5' despus que se vea salir por la llave de escape solo vapor.

7. Cerrar la llave.

8. Controlar el aparato de registro que puede ser un manmetro calibrado en grs./cm2 o lbs/sq.in (libras por pulgada
cuadrada), o un termmetro en C o F. Cuando el aparato registre 1.054 grs./cm2, 15 lbs/sq.in, 121C o 249.8F, se
empezar a contar el tiempo.

9. Mantener el registro constante durante 15-20 minutos.

10. Apagar la fuente trmica y dejar enfriar sin abrir.

11. Cuando la temperatura o presin haya descendido, abrir la llave de escape de vapor.

12. Abrir el autoclave.

Los materiales salen hmedos por el contacto con el vapor. Aquellos que estn envueltos en papel debern secarse en la
estufa, ya que el papel mojado es muy fcil de romper y el material se contaminara nuevamente.

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PRACTICO No 2:
Desinfeccin por Hipoclorito de Sodio

Se estudiar el efecto del Hipoclorito de Sodio para la desinfeccin del agua.

Se parte de 10 ml de agua contaminada con una concentracin conocida e importante de E.coli (10 UFC/ml).

Se aplica hipoclorito de sodio segn las recomendaciones (2 PPM), a partir de una solucin madre de 50 PPM.

Luego se realizan cultivos del agua con asa calibrada de 0.05 ml en agar sangre a los 0.5 y 15 minutos de agregado el
desinfectante. Se incuban las placas a 37C durante 24 hs. y se leen los resultados.

PRACTICO No 3:
Lavado y antisepsia de manos

Se realizarn impresiones de los dedos contaminados en placas de agar sangre. A continuacin se proceder a lavar las
manos con jabn y a secarlas con aire caliente o toallas de papel. Se efectuarn nuevas impresiones luego del lavado. Por
ltimo se aplicar un antisptico: alcohol 70 dejndolo actuar por 1' y luego secado; se realizan nuevas impresiones en una
tercera placa y se incuban las tres, discutindose luego de 24 hs. los resultados.

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