APUNTES DE MIROBIOLOGIA.

MOD 2 SUB 3

TEMA 2: LIMPIEZA, DESINFECCIÓN, ESTERILIZACIÓN Y ANTISEPSIA.

DEFINICIONES
1. Esterilización: Proceso que destruye toda forma de vida microbiana. Un objeto
estéril (en sentido microbiológico) está libre de microorganismos vivos.
2. Desinfección: La destrucción, inactivación o remoción de aquellos microorganismos
que pueden causar infección u ocasionar otros efectos indeseables; la desinfección
no implica necesariamente esterilización.
3. Desinfectante: Agente usualmente químico, que mata las formas en crecimiento de
los microorganismos, pero no necesariamente las esporas. El término se refiere a
sustancias utilizadas sobre objetos inanimados.
4. Antiséptico: Sustancia que impide el crecimiento o la acción de los microorganismos,
ya sea destruyéndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se aplica sobre
superficies corporales.
5. Sanitarizante: Agente que reduce la población microbiana a niveles seguros, según
los requerimientos de salud pública. Se aplica en objetos inanimados de uso diario,
por ejemplo utensilios y equipos para manipular alimentos, vasos, platos y otros
objetos de uso similar.
6. Germicida: Agente que mata a los microorganismos, pero no necesariamente a sus
esporas.
7. Bactericida: Agente que mata a las bacterias.
8. Bacteriostático: Agente que inhibe el crecimiento de las bacterias, mientras
permanece en contacto con ellas.
9. Fungicida: Agente que mata a los hongos.
10. Fungistático: Agente que inhibe el crecimiento de los hongos, mientras permanece
en contacto con ellos.
11. Virucida: Agente que destruye los virus.
CRITERIOS DE VIABILIDAD PARA EVALUAR LA EFICACIA DE UN AGENTE
El término muerte, desde el punto de vista microbiológico, se define como la pérdida
irreversible de la capacidad de reproducirse, así microorganismos viables son aquellos
capaces de multiplicarse, y microorganismos muertos son aquellos que no pueden
hacerlo. La determinación de la muerte de los microorganismos requiere de técnicas de
laboratorio que revelen si el microorganismo crece cuando se inocula en medios de
cultivo líquido o sólidos adecuados. Dependiendo del agente usado, las células no
viables pueden o no mostrar cambios en propiedades tales como: morfología, coloración,
motilidad y actividades enzimáticas, por esto los criterios microscópicos o bioquímicos
indirectos no se pueden considerar como una manera definitiva de evaluar una acción
germicida, a menos que se alternen con pruebas directas de la viabilidad de los
gérmenes, como serían la producción de turbidez en medios líquidos o la formación de
colonias en medios de cultivo sólidos.

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FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE DESTRUCCIÓN DE LOS

MICROORGANISMOS
1. Temperatura: Las temperaturas elevadas tienen efectos dañinos sobre los
microorganismos y se debe tener en cuenta que cuando, además de la temperatura,
también se utiliza un agente antimicrobiano, los incrementos en la temperatura
aceleran la destrucción de los microorganismos. Por ejemplo, la muerte de una
suspensión bacteriana por fenol es mucho más rápida a 42ºC que a 30ºC.
2. Tipo de microorganismos: Las especies de microorganismos difieren en su
susceptibilidad a los agentes físicos y químicos. En las especies formadoras de
esporas, las células vegetativas son mucho más susceptibles que las formas
esporuladas.
3. Estado fisiológico de las células: El estado fisiológico de los microorganismos
puede influenciar la susceptibilidad a un agente antimicrobiano. Las células jóvenes,
metabólicamente activas, son más fácil mente destruidas que las células viejas
cuando el agente actúa interfiriendo con el metabolismo. Los cambios que ocurren en
la membrana por el envejecimiento, que afectan las características de permeabilidad,
pueden ser responsables de las diferencias en resistencia.
4. Ambiente. Las propiedades físicas y químicas del medio o sustancia donde se
encuentran los microorganismos, también tienen una profunda influencia sobre la
eficacia de la destrucción microbiana, por ejemplo, el calor es mucho más eficaz en
materiales ácidos que en materiales alcalinos. La consistencia del material influye
notablemente en la penetración del agente. La presencia de material orgánico puede
reducir significativamente la eficacia de un agente químico, ya sea inactivándolo o
protegiendo de él a los microorganismos. Los microorganismos normalmente se
encuentran en el ambiente y en muchos casos, su presencia puede favorecer la
transmisión de enfermedades o la contaminación de los productos. Por este motivo,
en las instituciones de salud, donde se manipulan y/o preparan alimentos, en las
industrias de alimentos, medicamentos y cosméticos, se deben aplicar
procedimientos que permitan controlar la presencia de estos microorganismos en el
ambiente, equipos y materiales, con el propósito de evitar la transmisión de
microorganismos patógenos y la contaminación de los productos por
microorganismos que posteriormente pueden producir su deterioro o afectar la salud
de la persona que lo utiliza.
LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN
Limpieza: La limpieza se define como el proceso de remover, a través de medios
mecánicos y/o físicos, el polvo, la grasa y otros contaminantes de las superficies,
equipos, materiales, personal, etc. Este proceso, junto con un adecuado proceso de
desinfección, es indispensable para controlar la presencia de los microorganismos en el
ambiente. Para realizar una limpieza adecuada se deben considerar el tipo de acción
del agente utilizado (remoción mecánica, disolución o detergente), las condiciones

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requeridas para aplicar la solución limpiadora y el tiempo de contacto necesario para que
ésta ejerza su efecto.
Las soluciones limpiadoras generalmente contienen agentes alcalinos o ácidos, con o
sin detergentes, por ejemplo, agentes tensoactivos no iónicos. Éstas deben ser
compatibles con la superficie que va a ser limpiada, tener buena capacidad de
humectación y emulsificación y ser capaces de remover el tipo de sucio presente sin
dejar ningún tipo de residuo.
Para cada área se debe establecer la frecuencia de limpieza requerida de acuerdo al
volumen de trabajo, personal y material que se utiliza. También se debe establecer el
momento más apropiado para realizar el proceso, y seguir un procedimiento cuya
eficacia haya sido determinada previamente.
Desinfección: De acuerdo a su definición, la desinfección se emplea cuando se tratan
los instrumentos de uso médico, utensilios, lencería, paredes y pisos de las habitaciones
de los enfermos, etc., con el propósito de evitar una posible infección. Para realizar este
proceso se usan agentes químicos (desinfectantes) o procesos físicos como el calor.
El término sanitarización usualmente se refiere al proceso empleado para reducir el
contenido de microorganismos viables remanentes en una superficie limpia. En la
industria se emplea este término cuando se tratan, con agentes químicos o físicos, las
áreas de producción y los equipos empleados en la elaboración de productos, con el
propósito de reducir el contenido microbiano hasta niveles insignificantes.
CARACTERÍSTICAS DE UN DESINFECTANTE IDEAL
1. Actividad antimicrobiana: Debe ser capaz de matar a los microorganismos. A baja
concentración debe tener un amplio espectro de actividad antimicrobiana.
2. Solubilidad: Debe ser soluble en agua u otros solventes, en la proporción necesaria,
para su uso efectivo.
3. Estabilidad: Durante el almacenamiento los cambios en sus propiedades deben ser
mínimos y no deben causar una pérdida significativa de su acción germicida.
4. No debe ser tóxico para el hombre ni los animales.
5. Homogeneidad: La preparación debe ser uniforme en composición, de manera que
los ingredientes activos estén presentes en cada aplicación.
6. No se debe combinar con materiales orgánicos extraños.
7. Debe ser tóxico para los microorganismos a la temperatura ambiente, para que al
usar el agente no sea necesario elevar la temperatura más allá de la que se encuentra
normalmente en el lugar donde se va a utilizar.
8. Capacidad para penetrar: Esto no es necesario si se requiere sólo una acción
superficial.
9. No debe ser corrosivo, ni teñir el material que se trate.
10. Capacidad desodorante: Desodorizar mientras desinfecta es una propiedad
deseable. Idealmente el desinfectante debe ser inodoro o tener un olor agradable.

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11. Capacidad detergente: Un desinfectante que sea a la vez detergente cumple 2

objetivos: limpieza y desinfección: la acción limpiadora mejora la efectividad del
desinfectante.
12. Disponibilidad: Debe estar disponible en grandes cantidades a un precio razonable.
13. Actuar en un tiempo relativamente corto.
CARACTERÍSTICAS DE UN ANTISEPTICO IDEAL: Debe tener las mismas
características de un desinfectante, excepto la capacidad de penetrar.
PRINCIPALES GRUPOS DE AGENTES QUÍMICOS UTILIZADOS COMO
ANTISÉPTICOS,
DESINFECTANTES, Y/O PRESERVATIVOS
1. Compuestos fenólicos: Activos contra bacterias vegetativas pero inactivos contra
esporas. Son fungicidas y también virucidas. Actúan por desnaturalización de las
proteínas y dañan las membranas celulares. El. Fenol, cresol, hexaclorofeno, etc.
USO: Desinfectantes, los menos irritantes se usan como antisépticos.
Preservativos: Fenol al 0,5% , Cresol al 0,3%
Limitaciones: Irritantes y corrosivos.
2. Alcoholes: Desnaturalizan las proteínas, actúan también disolviendo los lípidos por
lo que pueden dañar las membranas celulares. Activos contra bacterias vegetativas
pero no sobre esporas. Ej.: Alcohol etílico, alcohol isopropílico.
USO: Antiséptico de la piel, desinfectantes. Se usan en solución al 70-80% en agua.
Preservativos: Clorobutanol al 0,5% , Alcohol bencílico al 2%
3. Halógenos
3a. Yodo: Altamente efectivo como agente bactericida y es el único que es efectivo
contra todos los tipos de bacterias.También posee cierta actividad esporocida. Es un
agente oxidante débil, su acción antimicrobiana parece ser debida a la combinación del
yodo molecular con proteínas celulares.
USOS: Se usa como antiséptico en solución hidroalcohólica al 2% (tintura de yodo).
También se usa en forma de yodóforos, que son mezclas de yodo con agentes
tensoactivos que liberan el yodo cuando se diluyen en agua.
Limitaciones: Irritante para las mucosas.
3b. Cloro y compuestos clorados: Mata a la mayoría de las células vegetativas,
algunos virus y hongos. Actúa por oxidación de los componentes celulares.
USOS: Desinfección de agua. Las soluciones de hipoclorito se usan para desinfectar
objetos y superficies.

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Limitaciones:Inactivado por materia orgánica, irritante a los tejidos y corrosivo para los
metales.
4. Metales pesados: Inactivan enzimas uniéndose a ciertos grupos de las proteínas
particularmente grupos – SH.
Ej.: mercuriales: Bicloruro de mercurio, mercurocromo y merthiolate.
Compuesto de plata: nitrato, lactato y picrato de plata.
Compuestos de cobre: sulfato cúprico.
USOS
Cloruro mercúrico como antiséptico en ungüentos.
Mercurocromo: Antiséptico.
Nitrato o acetato de fenilmercurio como preservativo al 0,02%.
Merthiolate: Antiséptico. Preservativo al 0,01%.
Nitrato de plata: Unas pocas gotas de una solución al 1% en los ojos de los recién
nacidos previene la conjuntivitis del recién nacido (ophtalmia neonatorum), una
infección gonocóccica de los ojos.
Limitaciones: Algunos son irritantes y tóxicos, su efectividad es reducida por la presencia
de materia orgánica.
5. Compuestos cuaternarios de amonio: Son agentes desinfectantes por su acción
detergente, rompen la membrana citoplasmática debido a que disuelven las capas
lipídicas, además desnaturalizan las proteínas. Ej. Cetrimida, cloruro de benzalconio,
etc.
USOS: Limpieza y antisépsis de la piel y de las heridas. Desinfección de
instrumentos y sanitarización de ambientes.
Preservativos: Ej. Cloruro de benzalconio al 0,01%
Limitaciones: No son esporocidas y su efecto puede ser neutralizado por otros
compuestos.
Cuando se va a llevar a cabo un proceso de desinfección o sanitarización, es necesario
que toda la superficie a tratar se encuentre bien limpia, de lo contrario, la presencia de
materia orgánica e inorgánica puede inactivar el efecto de la sustancia química utilizada.
Generalmente la solución desinfectante o sanitarizante se puede aplicar utilizando
paños, cubriendo la superficie con la solución, por nebulización o por inmersión.
Es importante tener en cuenta que cuando se manipulan materiales impregnados con
sustancias posiblemente contaminadas (heces, sangre, orina, etc.), es necesario realizar
un proceso de desinfección antes de su limpieza, para ello se debe agregar directamente
el desinfectante sobre el material. En estos casos es necesario emplear una cantidad
abundante del producto, para evitar que éste sea inactivado por la presencia de la
materia orgánica presente.

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Cuando se usan los agentes químicos en los procesos de sanitarización es necesario

que se establezca un programa de rotación de los mismos, ya que el uso de un solo tipo
de agente en forma continua, puede provocar la selección de cepas resistentes de ciertos
microorganismos.
El calor es un agente físico que se puede utilizar en los procesos de desinfección y
sanitarización, sin embargo, a pesar de que este procedimiento tiene la ventaja que no
deja residuos y no permite la selección de cepas resistentes, tiene como principal
inconvenientes que puede deteriorar ciertos materiales.
En resumen es importante resaltar que todos los procedimientos de limpieza y
desinfección deben:
 Ser realizados por un personal adecuadamente entrenado quien debe seguir
exactamente las instrucciones escritas que incluyan las instrucciones para la
preparación de las soluciones, tiempo de tratamiento necesario para lograr el efecto
deseado, agentes detergentes, desinfectantes y/o sanitarizantes a emplear.
 Ser realizados con una frecuencia determinada por el tipo de actividades que se
llevan a cabo en cada área. Deben existir cronogramas de limpieza y desinfección.
 Los equipos y materiales utilizados para la limpieza deben ser seleccionados y
mantenidos cuidadosamente, y éstos no deben transferirse de un área a otra.
 Evaluar la efectividad de los procesos de limpieza y desinfección mediante la
evaluación microbiológica de las superficies tratadas.
Para ello se emplean métodos microbiológicos que permiten determinar la presencia de
microorganismos viables en las superficies. Entre los métodos más utilizados están las
placas de contacto (RODAC) y el método del hisopo.

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MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN
AGENTES FÍSICOS
1. Calor
a. Calor húmedo: Destruye a los microorganismos por coagulación de las proteínas. La
presencia de agua facilita el proceso de destrucción de los microorganismos.
A1. Vapor a presión (autoclave): El calor en forma de vapor saturado a presión
proporciona temperaturas mayores que la de ebullición. La esterilización en autoclave
emplea vapor saturado a 15 lbs. de presión cuya temperatura es de 121ºC, por 15
minutos contados a partir del momento en que el material alcance los 121ºC.
USOS: Esterilización de material contaminado, medios de cultivo y líquidos
termoestables.
Limitaciones: No es efectivo en medios impermeables al agua, ni en materiales sensibles
al calor o a la humedad.
Existen otros métodos que utilizan el calor húmedo, que aunque no permiten la
eliminación total de los microorganismos viables, se usan para controlar los
microorganismos presentes en un material o una preparación.
Entre ellos están:
A2. Tindalización: Es un método de esterilización fraccionada, consiste en calentar el
material a la temperatura seleccionada (entre 60º y 100ºC) por períodos aproximados de
30 minutos a 1 hora, por 3 días consecutivos con períodos de incubación intermedios,
las formas vegetativas se destruyen por el calentamiento y las esporas germinan durante
el período de incubación intermedio y son eliminadas en el siguiente calentamiento.
USO: Esterilización de materiales lábiles a más de 100ºC pero estables a temperaturas
entre 60 y 100ºC.
Limitaciones: Proceso muy largo (3 días). Puede que no se logre la esterilización.
A3. Agua hirviente: Consiste en poner el contacto el material con agua hirviendo por un
periodo no menor a 10 minutos. Se usa para la destrucción de microorganismos
patógenos no formadores de esporas en ropas, platos, etc. También se puede emplear
en el control de microorganismos presentes en el agua de consumo.
A4. Pasteurización: utilizado en la eliminación de microorganismos patógenos en
productos lácteos, vinos, cerveza y jugos.
b. Calor seco: Deshidrata las células y destruye los microorganismos por oxidación de
sus constituyentes.
b.1. Aire caliente: La esterilización se realiza en hornos, usualmente a 160-170ºC por
un período de 2 a 4 horas.
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USOS: Esterilización de materiales termoestables impermeables o que son dañados por

la humedad y por lo tanto no pueden esterilizarse en autoclave.
Ej. grasas, vidrios, metales, polvos, etc.
Limitaciones: Destruye materiales que no soportan temperaturas elevadas por largos
períodos.
b.2. Incineración
USOS: Destrucción de animales de laboratorio y otros materiales infectados a ser
desechados. Esterilización del asa de platino y el filamento en el laboratorio.
Limitaciones: Contaminación ambiental.
2. Radiaciones
a. No ionizantes
a.1 Radiación ultravioleta: Los ácidos nucleicos y las proteínas absorben la radiación
ultravioleta, esa absorción causa modificaciones químicas, entre ellas, la formación de
dímeros de timina los cuales ocasionan lecturas erróneas del código genético,
produciendo mutaciones que impiden funciones vitales de los microorganismos, por lo
tanto, éstos mueren. La longitud de onda más efectiva para matar los microorganismos
es 253,7 nm.
USOS: Desinfección de superficies y de aire.
Limitaciones:Escaso poder de penetración, sus efectos pueden ser revertidos, puede
causar quemaduras en la piel y en los ojos.
a.2. Luz visible: Aunque no se puede considerar como un agente esterilizante, la luz
visible, de suficiente intensidad, puede causar daño celular y muerte. Hay dos
mecanismos por los cuales la luz visible mata a las células, uno de ellos requiere de
oxígeno molecular y ambos requieren de la presencia en la célula de
fotosensibilizadores, los cuales son sustancias que absorben luz. Cuando esas
sustancias absorben luz son activadas y llevadas a un nivel de mayor energía, en algunos
casos retornan al estado normal emitiendo luz, pero también puede ocurrir que le
transfieran la energía a otro componente celular, esta transferenia de energía ocasiona
el daño en las células.
b. Radiaciones ionizantes: Estas incluyen los rayos _ (alfa), ß (beta), _ (gamma), X y
protones y neutrones de alta energía. Al absorber estas radiaciones, el agua y otras
sustancias se ionizan, creándose radicales libres los cuales ocasionan diferentes tipos
de daño en las células.
USOS: La principal aplicación industrial es para la esterilización de materiales quirúrgicos
y otros equipos médicos sensibles al calor y para la preservación de ciertos productos
alimenticios.
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Limitaciones: Son muy costosas, requieren un riguroso control e instalaciones especiales

para su uso.
AGENTES MECÁNICOS
1. Filtración: Consiste en el paso de un líquido o un gas a través de un material que
tiene poros de tamaño lo suficientemente pequeño para retener a los microorganismos.
Existen filtros de superficie y filtros de profundidad.
USOS: Esterilización de líquidos termolábiles, tales como soluciones de enzimas,
toxinas, extractos de células y algunos azúcares en solución. Desinfección de aire.
Limitaciones: El material debe estar relativamente libre de material particulado
suspendido.
2. Ondas sónicas y ultrasónicas: Desnaturalizan las proteínas y desintegran las
bacterias.
USOS: Son efectivas en la descontaminación de instrumentos delicados.
AGENTES QUÍMICOS:
1. Gaseosos
1a. Óxido de etileno: Mata a las células porque actúa como un agente alquilante.
Destruye rápidamente células vegetativas y esporas.
USO: Esterilización de materiales termosensibles, instrumentos y equipos de gran
tamaño. Limitaciones: Inflamable, potencialmente explosivo en forma pura.
1b. Formaldehido: Agente alquilante, se combina con grupos NH2, COOH y SH en los
ácidos nucleicos y proteínas.
USOS: Esterilización de instrumentos.
Limitaciones: Poca penetración, corrosivo, y tiene tendencia a polimerizar como una
delgada película blanca sobre la superficie de los objetos tratados.
2. No gaseosos
2a. Glutaraldehido: Cuando se usa al 2% en soluciones alcalinas, actúa como agente
esterilizante por sus propiedades alquilantes.
USOS: Esterilización de instrumentos.
Limitaciones: La solución alcalina es inestable.

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CONTROL DEL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN

Todos los procesos de esterilización se deben controlar para poder asegurar que han
sido efectivos. Para ello se pueden utilizar indicadores físicos, químicos y/o biológicos,
los cuales deben ser colocados en cada carga de esterilización. Su selección debe
hacerse de acuerdo al método empleado.
Como ejemplos de estos indicadores podemos citar:
Físicos: medidores de presión, termómetros, termógrafos.
Químicos: cintas adhesivas impregnadas con sustancias químicas que cambian de color
después de haber sido sometidas a un tratamiento térmico.
Biológicos: preparaciones de esporas de microorganismos altamente resistentes al
proceso de esterilización que se quiere controlar.
CINÉTICA DE ESTERILIZACIÓN
Carga microbiana (bioburden): La cantidad de microorganismos contenidos en un
material antes de ser sometido a un proceso de esterilización.
Tiempo de reducción decimal: Tiempo (en minutos) necesario para reducir 10 veces
el número de microorganismos de una población dada.
Tiempo térmico letal: Tiempo (en minutos) necesario para destruir por completo una
población dada de microorganismos a una determinada temperatura y bajo condiciones
específicas.
CURVA DE SOBREVIVENCIA
Si una población de microorganismos se expone a un agente letal, la proporción de
supervivientes en cualquier tiempo, se puede graficar contra el tiempo de exposición para
dar una curva de sobrevivencia. Esta es a menudo una función exponencial o de primer
orden, ya que se obtiene una línea recta, cuando se grafica el logaritmo de la proporción
de sobrevivientes contra el tiempo de exposición expresado en unidades aritméticas.
ACTIVIDADES
1. Realizar cuadro comparativo de LIMPIEZA, DESINFECCIÓN, ESTERILIZACIÓN Y
ANTISEPSIA
2. Realizar cuadro comparativo de desinfectante, sanitarizante, antiséptico, germicida,
bactericida, fungicida, virucida, bacteriostático, fungistático (incluir ejemplos).
3. Elabora cuadro sinóptico de métodos de esterilización, que incluya equipo utilizado y
tiempo de exposición.
4. Señalar la importancia del control de la eficacia de un proceso de limpieza y
desinfección.
5. Explicar la cinética de destrucción de los microorganismos a través de un proceso de
esterilización.
6. Clasificar los métodos de esterilización, de acuerdo con el agente empleado.
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7. ¿Por qué considera Ud. que es importante la rotación de agentes desinfectantes o

sanitarizantes?.
8. Investigue en qué consiste la “esterilización en frío”
9. Entre diferentes productos comerciales empleados como agentes desinfectantes o
antisépticos, seleccione 5 y de acuerdo al principio activo que contengan, señale cuál es su
mecanismo de acción.
10. En la lista que se presenta a continuación seleccione para cada material el método y las
condiciones de esterilización más adecuadas.
ESTERILIZAR MÉTODO CONDICIONES
Vidriería
Tapones de goma
Material quirúrgico
Medios de cultivo
Soluciones termolábiles
Parafina
Cultivos a descartar
Asa y filamento
Animales contaminados
Láminas o portaobjetos contaminadas

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