Cromatografía de Aminoácidos

UNIVERSIDAD NACIONAL
AUTNOMA DE MXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES

ZARAGOZA
LABORATORIO DE BIOQUMICA CELULAR Y DE

LOS TEJIDOS I
Informe:
CROMATOGRAFA DE AMINOCIDOS
27 de Abril, 2016
Objetivos
Aplicar la tcnica de cromatografa para la separacin de una mezcla de
amincidos
Explicar los fundamentos de la separacin en la cromatografa en capa fina
Analizar los factores que modifican la resolucin de sta tcnica
Introduccin.
Los aminocidos son compuestos orgnicos que conforman la unidad fundamental
de las protenas; poseen dos grupos funcionales caractersticos: un grupo amino
NH2 y un grupo carboxlico COOH. Los aminocidos contienen la siguiente
estructura:
Donde el grupo R representa el esqueleto carbonado caracterstico del aminocido

en cuestin y que es el que le distingue de los dems.
Se han propuesto varios mtodos para clasificar a los aminocidos sobre la base
de su grupo R. El ms significativo se funda en la polaridad de los grupos R.
Existen cuatro clases principales: 1) grupos R no polares o hidrfobos, 2) Polares,
pero sin carga, 3) grupos R con carga positiva, y 4) grupos R cargados
negativamente.
Las reacciones orgnicas caractersticas de los aminocidos son las de sus
grupos funcionales, es decir, los grupos carboxilo, los grupos - amino y los
grupos funcionales presentes en las distintas cadenas laterales. El conocimiento
de estas reacciones es til para la identificacin y anlisis de aminocidos en los
hidrolizados de protena, en la identificacin de la secuencia aminocida en las
molculas de protena, la identificacin de los restos aminocidos especficos de
los protenas nativas que se precisan para su funcin biolgica entre otras
funciones. La ninhidrina es una oxidante fuerte que efecta la descarboxilacin
oxidativa de los aminocidos. El amoniaco y la hidriantina as formadas reaccionan
con una segunda molcula de ninhidrina para producir un pigmento purpreo, del
que solamente el tomo de nitrgeno pertenece al aminocido
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en que los componentes que
se han de separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales est en
reposo (fase estacionaria), mientras que la otra (fase mvil) se mueve en direccin
definida. La cromatografa en capa fina se realiza sobre gel de slice adsorbente
como fase estacionaria y un disolvente como eluyente. R f es el factor de retardo o
retraso, que mide la movilidad relativa de cada componente con respecto al
mximo posible, la distancia recorrida por el frente de fase mvil.
Si se sabe que los aminocidos presentan reacciones caractersticas, debido a
sus grupos carboxlico y amino, entonces se podr usar la cromatografa como
tcnica de separacin e identificacin de estos en una muestra problema.
Resultados.
En una placa cromatogrfica de 20 x 20 se colocaron estndares de aminocidos
de Histidina, Metionina, treonina, fanilananina, isoleucina, asparagina, valina,
glicina, cistena y serina. Adems se colocaron dos muestras problema a
identificar.
La cromatoplaca se eluy con una mezcla de butanol: cido actico: agua (4:1:1) y
se revelaron con solucin de ninhidrina al 0.2% en acetona butanol obteniendo los
siguientes resultados:
Cuadro X: se muestran los valores obtenidos del Rf de las muestras aplicados
en una cromatoplaca de gel de slice en el laboratorio, as como tambin las
muestras problemas. Fuente: Alemany, L.M, Font S.S, Practicas de bioqumica,
Alhambra S.A, Barcelona: Espaa , 1983, pg. 212
Rf de muestras de aminocidos Rf de aminocidos en n-butanol:

en el laboratorio cido actico: agua
Histidina 0.073 0.22
Metionina 0.423 0.49
Treonina 0.273 0.45
Fenilananina 0.5 0.55
Isoleucina 0.464 0.62
Asparagina 0.226 ---
Valina 0.427 0.63
Glicina 0.242 0.32
Cisteina 0.0917 0.04
Serina 0.292 0.31
Muestra 0.0741 ---
problema 1 0.222
Muestra 0.271 ----
problema 2 0.403
0.682
Imagen Y: Se muestra la cromatoplaca de gel de slice (20x20 cm) donde se

aplicaron muestras de aminocidos con una mezcla n-butanol: cido actico:
agua cmo eluyente, donde P-1 y P-2 son las muestras que contienen una
mezcla de aminocidos
Anlisis de resultados.
Como puede apreciarse en la imagen Y, la muestra problema 1 (P-1) contiene una
mezcla de histidina ya que estn ubicadas a la misma distancia del punto de
aplicacin, ambas coloraciones son similares, tambin contiene cistena la cual es
difcil de apreciar, adems de stas contiene glicina puesto que la mancha de
referencia de glicina es igual al de la muestra problema, adems de que los RF de
ambas son similares (0.222 y 0.242).
Por otro lado la muestra problema 2 (P-2) contiene serina ya que sus RF son
similares (0.271 y 0.292) aunque es difcil de apreciar la coloracin de esta es
similar al de la referencia de serina, se observa tambin contenido de valina
puesto que esta tiene una apariencia similar a la aplicacin de referencia de valina
pero menos intensa, la isoleucina se hace presente pues esta se nota posicionada
exactamente en el mismo lugar de la mancha de la mezcla problema.
El revelador o reactivo de ninhidrina se utiliz para poder visualizar todas estas
manchas. La ninhidrina , hidrato de tricetohidrindeno, reacciona con los
aminocidos, dando lugar a la formacin de amoniaco y anhdrido carbnico,
reducindose la ninhidrina a hidrindantina; est compuesto reacciona a su vez con
el amoniaco y la ninhidrina para dar un compuesto doble de adicin de intenso
color purpura azulado, la presencia de los aldehdos resultantes de la degradacin
ninhidrinica de los aminocidos modifica , bajo determinadas condiciones , el color
formado1 es por eso que cada mancha es caracterstica y un tanto distinguible una
de otra, puesto que todos los aminocidos tienen una cadena R diferente y por
ende una coloracin diferente.
Imagen T : se muestra la reaccin general entre la ninhidrina y los aminocidos.
FuenteAlemany, L.M, Font S.S, Practicas de bioqumica, Alhambra S.A,
Barcelona: Espaa , 1983, pag 208
Conclusiones
Las reacciones y propiedades fsicas que presentan los aminocidos son de gran
importancia para su separacin e identificacin ya que cada aminocido posee
una estructura nica.
Bibliografa.
1.-Alemany, L.M, Font S.S, Practicas de bioqumica, Alhambra S.A, Barcelona:
Espaa , 1983
2.- Lehninger, A. L. Bioqumica. Las bases moleculares de la estructura y funcin
celular. Omega. 2da edicin. Barcelona: 1981

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