Manual de Prácticas

UNIVERSIDAD LIBRE SECCIONAL BARRANQUILLA
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA DE SUELOS
Microoragnismos del suelo
M.Sc; BEATRIZ CECILIA BARRAZA AMADOR

INTRODUCCIN
Las prcticas de laboratorio comprenden una serie de experiencias que los alumnos realizarn
con el asesoramiento del docente. El propsito del trabajo experimenta de la prctica de
Microbiologa de Suelos es desarrollar los conceptos aprendidos en la introduccin terica del
tema y en la lectura de libros y revistas especializadas.
Muchos de los resultados que obtiene el alumno en el experimento eran esperados antes de
empezar, pero lograr conocer las manipulaciones necesarias para obtener estos resultados.
Debemos recordar que los microorganismos empleados estn vivos, por lo tanto hay ciertas
reglas que se deben observar estrictamente. La mayora de los microorganismos son
inofensivos, no obstante algunos son patgenos, por esa razn usted aprender tcnicas
aplicables al manejo de microorganismos para asegurar su seguridad personal en el laboratorio.
En este manual se ncluyen las siguientes prcticas de laboratorio:

-Determinacin de e las propiedades fsicas uy qumicas del suelo
-Observacin in situ d elos microrganismos del suelo
-Determinacin del efecto rizosfrico
-Aisalmiento de Microorganismos fijadores de nitrgeno de vida libre (Azotobacter)
-Aislamiento de Microorganismos solubilizadores de fosfato inorgnico
-Aislamiento de Actinomicetos ( Streptomyces)
2 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

Manual de prcticas Biologa Celular
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIN......................................................................................................................... 2
ELABORACIN DEL INFORME DE LABORATORIO..................................................................5
SEGURIDAD PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO..........................................................7
1. OBJETIVOS....................................................................................................................... 7
2. RECOMENDACIONES REFERIDAS AL LABORATORIO.................................................7
3. MATERIAL Y EQUIPOS.....................................................................................................7
4. ASISTENCIA Y PREPARACIN DE LA PRCTICA..........................................................7
5. ELEMENTOS DE PROTECCIN PERSONAL..................................................................7
6. MANIPULACIN DE PRODUCTOS QUMICOS Y MATERIAL DE LABORATORIO.........7
PRCTICA 1. TITULO..................................................................................................................9
1. OBJETIVO......................................................................................................................... 9
2. FUNDAMENTO TERICO................................................................................................9
Subtitulo 1............................................................................................................................. 9
Subtitulo 2............................................................................................................................. 9
3. MATERIALES Y REACTIVOS............................................................................................9
4. PROCEDIMIENTO.............................................................................................................9
Subtitulo 1............................................................................................................................. 9
Subtitulo 2............................................................................................................................. 9
5. ESTRATEGIAS DE EVALUACIN..................................................................................10
6. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS...............................................................................11
7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.................................................................................11
1. OBJETIVO....................................................................................................................... 14
2. FUNDAMENTO TERICO..............................................................................................14
Subtitulo 1........................................................................................................................... 14
Subtitulo 2........................................................................................................................... 14
Subtitulo 3........................................................................................................................... 14
3. MATERIALES Y REACTIVOS..........................................................................................14
4. PROCEDIMIENTO........................................................................................................... 14
Subtitulo 1........................................................................................................................... 14
Subtitulo 2........................................................................................................................... 14
8. ESTRATEGIAS DE EVALUACIN..................................................................................15
9. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS..............................................................................15
10. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.............................................................................15
GLOSARIO................................................................................................................................. 16
ANEXOS.................................................................................................................................... 17

ELABORACIN DEL INFORME DE LABORATORIO
Pautas para la elaboracin de informe de laboratorio cuando aplique.
El informe del laboratorio consiste en un trabajo desarrollado por el estudiante, con el fin de
presentar el anlisis de los resultados obtenidos en la prctica, informe que est constituido de
las siguientes partes:
Ttulo de la Prctica
Nombre de la prctica desarrollada
Autores
Nombre de los integrantes del grupo de trabajo
Palabras Claves
Son las palabras ms importantes de la prctica, se nombran separndolas por comas, no se

definen.
Introduccin
Es un breve escrito sobre la importancia e impacto del tema de la prctica. La informacin debe
ser relevante y no debe ser una copia de un libro o de internet.
Marco Terico
Se realiza un resumen en mapa conceptual del componente terico de la prctica o tema con su
respectivo soporte bibliogrfico. ste debe llevarse elaborado para la ejecucin de cada
prctica.
Materiales y Mtodos
Se toma como gua la metodologa a seguir en cada prctica, se realiza un flujograma del
desarrollo de la misma. Debe llevarse analizado para el da de la prctica.
Resultados

Se presentan los resultados obtenidos en la prctica, haciendo un anlisis y relacin de las
observaciones con el tema central.
Discusin
Se har una reflexin sobre los resultados obtenidos, y su importancia en los diversos campos
de aplicacin.
Glosario
Define las palabras desconocidas para el estudiante con su respectivo soporte bibliogrfico.
Bibliografa
Referencia todas las fuentes bibliogrficas consultadas. Deben referenciarse de forma

coherente con las enunciadas en el marco terico.
Ejemplo:
Referencia fsica
Brown T.L. LeMay H.E y Bursten B.E. Bioqumica la Ciencia Central. Sptima edicin.
Editorial Pearson-Prentice Hall. Mxico. 2003.
Sitio Web:
http://www.cellbio.com. Visitado julio 1 de 2009.

SEGURIDAD PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO
1. OBJETIVOS
2. Conocer las normas de bioseguridad en el laboratorio de Microbiologa de Suelos
3. Conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio.
4. Conocer la metodologa de trabajo del laboratorio.
5. Familiarizarse con el equipamiento moderno conque cuenta laboratorio.
6. Conocer las medidas a tomar en caso de emergencia.
7. Conocer las leyes relacionadas con la seguridad biolgica.
8. Respetar y hacer cumplir todo lo anteriormente mencionado
2. RECOMENDACIONES REFERIDAS AL LABORATORIO
Todos los estudiantes deben usar bata blanca manga larga durante la parte
prctica para proteger su ropa de posibles contaminaciones.
En el laboratorio est prohibido comer, beber, fumar y tomar mate.
Disponga en su mesa de trabajo de un recipiente para colocar el material
contaminado o sucio. Los cultivos de descarte o las pipetas deben colocarse en
dicho recipiente para luego ser esterilizados. No lave el material utilizado en los
trabajos prcticos, previamente deben ser esterilizados.
Las superficies de trabajo deben limpiarse y descontaminarse con
desinfectantes antes y al final del trabajo.
Trabajar en la zona estril generada por mecheros de gas o cmara de flujo

laminar.

Asegrese que todas las canillas y llaves de gas, as como todos los aparatos
elctricos en su mesada estn apagados antes de abandonar el laboratorio.
Lvese las manos despus de cada trabajo.
El cultivo con que trabaja puede ser patgeno, manjelo como si lo fuera.
Al recibir el cultivo no lo destape, debe seguir ciertos procedimientos para
proceder a destaparlo
Cualquier accidente personal o con los cultivos comunqueselo al personal de la

ctedra.
Antes de guardar el microscopio asegrese que las lentes estn limpias de aceite
de inmersin.
Realice las tcnicas microbiolgicas con movimientos pausados, poco amplios y
sin brusquedad. Evite hablar. Tenga siempre el mechero encendido en lugar
prximo.
Lleve siempre el ansa al rojo sobre la llama del mechero, antes y despus de
cada operacin que realice con ella.
No deposite los tapones de algodn o de plstico sobre la mesada, evite
contaminaciones con los cultivos de trabajo.
Los tubos de cultivo sembrados o no, siempre deben colocarse sobre las
gradillas, nunca obre la mesada.
Anote en los tubos o cajas, en los cuales ha realizado la experiencia, una
identificacin de su comisin y el nmero de diluciones si se requiere.
Se deber elaborar un informe de resultados por comisin para cada Trabajo
prctico.
Requiera la presencia de un docente para que lo asesore correctamente toda vez
que tenga dudas sobre la realizacin de una tcnica

3. MATERIAL Y EQUIPOS
Refrigerador (2 a 4C y congelador)
Cabina de flujo laminar, para asegurar la esterilidad en la zona de trabajo
Autoclave, para esterilizar el material y los medios de cultivo
Estufas de incubacin para microorganismos mesfilos y termfilos
Homogeneizador de muestras elctrico, con agitadores magnticos, se usan en la
preparacin de medios de cultivo, soluciones, etc.
Bao Mara, para descongelar reactivos, mantener fundido el agar, realizar
incubaciones
Balanzas de diferente precisin (0,1-0,001g), analtica y digitales
Ph-metros, tiles en la preparacin de medios de cultivo
Microscopios para observar la morfologa bacteriana. ptico con aumentos de 1000x
Cuenta colonias para recuento de colonias
4. ASISTENCIA Y PREPARACIN DE LA PRCTICA

4.1. Lea cuidadosamente el texto de cada prctica antes de realizar la experiencia.
4.2. Siga los pasos establecidos en cada gua de laboratorio
4.3. Llegue puntual a cada de seccin de laboratorio.Dos fallas de asistencia sin la

respectiva excusa por parte de Bienestra Universitario implican la prdida del
componente prctico de la materia
5. ELEMENTOS DE PROTECCIN PERSONAL

5.1 Todo estudiante debe ingresar al laboratorio con bata blanca manga larga y
zapatos cerrados.
5.2. Utilizar elementos de proteccin como guantes, tapabocas, gorros; cuando la
prctica lo amerite
6. MANIPULACIN DE PRODUCTOS QUMICOS Y MATERIAL DE

LABORATORIO
1 6.1. Racionalice el uso de los reactivos, debido a que ellos son costosos.
16.2. Perctese de la limpieza del material que va a utilizar en la prctica. Vigile que est
limpio.
16.3. Tenga mucha precaucin con reactivos custicos y/ o corrosivos. Solicite ayuda al
docente, s tiene dudas en la manipulacin de los mismos.

Propiedades del suelo
PR CTIC No. 1 DETERMINCION DE

LS PROPIEDDES FISICS Y QUIMICS
DEL SUELO

PR CTIC 1. DETERMINCION DE LS
PROPIEDDES FISICS Y QUIMICS DEL
SUELO
1. OBJETIVO
Manejar las tcnicas de estudio fsico-qumico del suelo, como son la determinacin de su
porosidad, permeabilidad, capilaridad, capacidad de retencin de agua y pH
2. FUNDAMENTO TERICO
Como se ha explicado, el suelo es una mezcla de materiales slidos, lquidos (agua) y

gaseosos (aire). La adecuada relacin entre estos componentes determina la capacidad de
hacer crecer las plantas y la disponibilidad de suficientes nutrientes para ellas. La proporcin de
los componentes determina una serie de propiedades que se conocen como propiedades
fsicas o mecnicas del suelo: textura, estructura, consistencia, densidad, aireacin,
temperaturaycolor.
1. La textura depende de la proporcin de partculas minerales de diverso tamao presentes en

el suelo. Las partculas minerales se clasifican por tamao en cuatro grupos:
Fragmentos rocosos: dimetro superior a 2 mm, y son piedras, grava y cascajo.
Arena: dimetro entre 0,05 a 2 mm. Puede ser gruesa, fina y muy fina. Los granos de arena
son speros al tacto y no forman agregados estables, porque conservan su individualidad.
Limo: dimetro entre 0,002 y 0,5 mm. Al tacto es como la harina o el talco, y tiene alta
capacidad de retencin de agua.

La estructura es la forma en que las partculas del suelo se renen para formar agregados. De
acuerdo a esta caracterstica se distinguen suelos de estructura esferoidal (agregados
redondeados), laminar (agregados en lminas), prismtica (en forma de prisma), blocosa (en
bloques), y granular (en granos).
La consistencia se refiere a la resistencia para la deformacin o ruptura. Segn la resistencia el

suelo puede ser suelto, suave, duro, muy duro, etc. Esta caracterstica tiene relacin con la
labranza del suelo y los instrumentos a usarse. A mayor dureza ser mayor la energa (animal,
humana o de maquinaria) a usarse para la labranza.
La densidad se refiere al peso por volumen del suelo, y est en relacin a la porosidad. Un
suelo muy poroso ser menos denso; un suelo poco poroso ser ms denso. A mayor contenido
de materia orgnica, ms poroso y menos denso ser el suelo.
La aireacin se refiere al contenido de aire del suelo y es importante para el abastecimiento de

oxgeno, nitrgeno y dixido de carbono en el suelo. La aireacin es crtica en los suelos
anegados. Se mejora con la labranza, la rotacin de cultivos, el drenaje, y la incorporacin de
materia orgnica.
La temperatura del suelo es importante porque determina la distribucin de las plantas e influye
en los procesos biticos y qumicos. Cada planta tiene sus requerimientos especiales. Encima de
los 5 C es posible la germinacin.
El color del suelo depende de sus componentes y puede usarse como una medida indirecta de
ciertas propiedades. El color vara con el contenido de humedad. El color rojo indica contenido de
xidos de fierro y manganeso; el amarillo indica xidos de fierro hidratado; el blanco y el gris
indican presencia de cuarzo, yeso y caoln; y el negro y marrn indican materia orgnica. Cuanto
ms negro es un suelo, ms productivo ser, por los beneficios de la materia orgnica.
3. MATERIALES Y REACTIVOS
Bandejas numeradas para colocar las muestras

Tamiz de 2 mm de luz

Martillo o rodillo para disgregar los terrones
Probeta graduada de 500 cc
250c.c de agua
250c.c de muestra de suelo.
Balanza
Beaker
Embudo de vidrio
Papel filtro
Estufa de desecacin con regulacin de temperatura hasta 105 C
Desecadores
Cpsulas de porcelana
Placa de vidrio deslustrado
Esptula mecnica
Vaso de precipitado de 100cc
Agua destilada
4. PROCEDIMIENTO
PREPARACIN DE LA MUESTRA EN EL LABORATORIO
La muestra natural de un suelo, cuando llega al laboratorio, debe ser acondicionada como fase
previa para realizar los distintos anlisis. Las muestras:
1. Se extienden para secarse
2. Se separan mediante un tamiz los posibles elementos gruesos
3. Se prepara la muestra para los distintos anlisis qumicos y fsicos
Colocar la muestra en una bandeja y disgregar a mano, si es posible, los terrones

existentes

Mantener las bandejas hasta que se equilibre la humedad con la del laboratorio. Durante
la desecacin disgregar a mano los terrones existentes. El desprendimiento de polvo es
un indicio de haber logrado este equilibrio.
Pesar la muestra con una aproximacin de 1 g.
Disgregar mecnicamente los terrones mediante un martillo o molino
Tamizar la totalidad de la muestra por un tamiz de 2mm de luz
Recoger la porcin que haya pasado por el tamiz en un recipiente. Esta fraccin se
denomina tierra fina seca al aira (TFSA)
Efectuar un nuevo tamizado con la fraccin que no pas por el tamiz en una pileta y con
ayuda de agua, hasta observar que los elemento gruesos quedan limpios.
Secar los elementos gruesos en estufa, dejar que se enfren al aire y pasarlos con
aproximacin del gramo
CALCULOS
Porcentaje de elementos gruesos = X 100
P-P
Tierra fina seca al aire = X 100
Donde:
P= peso en gramos de los elementos gruesos
P = peso en gramos de la muestra
4.1 DETERMINACION DE LA POROSIDAD DEL SUELO. (VOLUMEN TOTAL DE POROS

La suma de los volmenes de los espacios libres del suelo constituye el volumen de sus poros, y
se representa en porcentaje. El principio de este mtodo consiste en que determinado volumen de
suelo se mezcla con un volumen igual de agua, y como resultado no se obtiene la suma de los
volmenes, sino un valor un poco menor. La diferencia entre la suma de los volmenes de agua y
suelo medidos, y el volumen obtenido al mezclarlos corresponde al valor del volumen de los
poros y se expresa en porcentaje.
Los suelos de textura gruesa a pesar de poseer grandes poros, presentan baja porosidad, en
tanto que los de textura fina presentan un mayor porcentaje de porosidad que los anteriores. As
la porosidad de la arena comprende un 40%, arcilla 53% y la turba 84%
PROCEDIMIENTO
1. En una probeta graduada de 500cc agregar 250c.c de agua y 250 cc de muestra de suelo.
2. Agitar el contenido de la probeta y anotar el volumen final de la mezcla.
CALCULOS
La porosidad se obtiene por la frmula:
A+B-C
X= ------------------ x 100%
A
Donde: A: volumen de la muestra de suelo
B: volumen de agua
C: volumen final de la mezcla de agua y suelo
4.2 DETERMINACIN DEL PODER RETENTIVO DEL AGUA DE UN SUELO

El poder retentivo de un suelo es la cantidad de agua que puede retener ste despus de
perder el agua de gravitacin

PROCEDIMIENTO:
1. Pesar un embudo de vidrio con un pequeo embudito de papel filtro adherido a este (P1)
2. Poner suelo sobre el embudo y pesar de nuevo el conjunto (P2)
3. Adicionar agua con cuidado, empapar bien la tierra con el agua y dejar escurrir. Secar el
extremo inferior del embudo y pesar el conjunto (P3)
CALCULOS
P2 - P1 = Peso del suelo
P3 - P2 = Peso del agua retenida
P3 - P2
% poder retentivo = x 100
P2 - P1
4.3 DETERMINACION DE LA HUMEDAD DEL SUELO
INTRODUCCIN
Mediante la determinacin de la humedad del suelo conoceremos el agua absorbida por el

suelo a expensas de la humedad atmosfrica. Corresponde al agua higroscpica que se
encuentra formando una delgada pelcula alrededor de las partculas del suelo, est
enrgicamente retenida por sta, y no es absorbible por la races delas plantas. El agua
higroscpica se elimina calentando la muestra en estufa a 105 C
PROCEDIMIENTO:
1. Colocar una 25 g de suelo en una cpsula de porcelana previamente tarada
2. Pesar y secar, sin tapar hasta peso constante en una estufa a 105 C.
3. Poner a enfriar el recipiente tapado en un desecador y pesar de nuevo
CALCULOS
Calcular el contenido en humedad expresado en porcentaje
P-P
% humedad = X 100
P
Donde:
P = peso en gramos de la muestra de suelo

P = peso en gramos de la muestra de suelo seco
4.4. DETERMINACIN DE LA ESTABILIDAD ESTRUCTURAL DEL SUELO
INTRODUCCIN
La estabilidad estructural es la resistencia que un suelo opone a ser destruido por la accin del
agua.
TEST DE EMERSON
El test se basa en la destruccin de los agregados del suelo por accin del aguay la siguiente
dispersin de los coloides provocando un aumento del volumen de este.
La estabilidad de los agregados de un suelo en la solucin del mismo depende entre otros
factores, de la concentracin salina
PROCEDIMIENTO
Se utilizan dos probetas, una con 40cc de agua destilada y otra con 40 cc de solucin
salina
Se adiciona 15 g de suelo a cada una
Se agitan los dos recipientes
Se dejan reposar por 30 minutos
Se compara el volumen de sedimentacin del suelo con agua destilada frente al mismo
volumen de suelo en solucin salina
H = volumen final del suelo con agua destilada

H = volumen final del suelo con solucin salina
En los suelos con estructura estable H =H
A mayor inestabilidad de la estructura ms difiere H de H
4.5 DETERMINACION CUALITATIVA DE LA TEXTURA DE UN SUELO
INTRODUCCIN
El procedimiento est basado en las propiedades de la arena, limo y arcilla, manipulando el

suelo en su punto de adherencia.
PROCEDIMIENTO
Sobre una polaca de vidrio deslustrado se humedece una porcin de suelo, hasta alcanzar el
punto de adherencia, trabajndola primero por compresin y rodamiento para formar filamentos.

La clase de textura de un suelo se define con arreglo a la tabla que aparece a continuacin
Caractersticas Arenoso Areno-limoso Limoso Arcilloso

Pueden formarse fcilmente filamentos de No Si Si Si
3mm de dimetro
En caso afirmativo, pueden enrollarse - No No Si
estos filamentos en anillos sin
resquebrajarse ni romperse cuando el
filamento tiene una longitud de 10cm
Pueden formarse fcilmente filamentos de - No Si S
1 mm de dimetro(eliminando la arena
gruesa a simple vista)

4.6 DETERMINACION DEL pH DEL SUELO.
La reaccin del suelo pH se define como la concentracin de iones hidronios (H 3O) en la
solucin de suelo.
La acidez del suelo tiene su origen en la gran acumulacin en este de iones hidronio como
consecuencia de una prdida progresiva bases tales como calcio (Ca), magnesio (Mg) y potasio
(K). Por el contrario, la alcalinidad de los suelos se presenta cuando existe abundancia de
elementos como calcio, potasio, magnesio y sodio.
En relacin al pH del suelo son posibles tres condiciones: Acidez-Neutralidad-Alcalinidad.
PROCEDIMIENTO

El pH de los suelos se puede medir utilizando diferentes mtodos: Mtodos Calorimtricos y
Mtodos Potenciomtricos.
1.4.1. Mtodo calorimtrico.

Los mtodos calorimtricos se basan en la utilizacin de colorantes indicadores de pH que
cambian de color con una disminucin o aumento de pH.
Entre estos se encuentran las tirillas indicadoras:
1. Se sumergen las tirillas indicadoras en la solucin de suelo a examinar
2. Se compara el cambio de color con un patrn de colores contenido en el estuche.
1.4.2. Mtodo potenciomtrico.

El mtodo potenciomtrico se basa en la determinacin de la concentracin de iones hidronio
(H30+) de la solucin de suelo mediante un instrumento denominado potencimetro.
Entonces, el valor indicado en el potencimetro ser el valor del pH del suelo.
CLASIFICACION DE LOS SUELOS SEGUN EL pH
pH CLASIFICACION
<4.O Extremadamente cido
4.0-4.9 Fuertemente cido
5.0-5.9 Medianamente cido
6.0-6.9 Ligeramente cido
7.0 Neutro
7.1-8.0 Ligeramente alcalino
8.1-9.0 Moderadamente alcalino
9.1-10 Fuertemente alcalino
> 10.1 Extremadamente alcalino
5. ESTRATEGIAS DE EVALUACIN
Presente un informe de los resultados obtenidos en cada experiencia

6. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
Qu caractersticas fsico-qumicas presentan los suelos del departamento del Atlntico?
7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Nelson Castillo (1988 ) Una introduccin al estudio del suelo y de los fertilizantes. Ed
Amrica Caracas
2. Ma. Desamparados Soriano., Vicente Pons (2004) Practicas de edafologa y

climatologa. Alfaomega. Universidad Politcnica d e Palencia
SITIOS WEB RECOMENDADOS
IMGENES TOMADAS DE
http://208-4stephanie.blogspot.com/2011/01/propiedades-fisicas-del-suelo-muestra.html
http://textura1.tripod.com/

Microorganismos del suelo
PRCTICA No. 2. OBSERVACION IN SITU

DE MICROORGANISMOS DEL SUELO

PR CTIC No. 2. OBSERVCION IN SITU
DE MICROORGNISMOS DEL SUELO
1. OBJETIVO
Conocer las tcnicas bsicas para el enriquecimiento y la observacin in situ de la microflora
edfica
Los microorganismos son los componentes ms importantes del suelo. Constituyen su parte
viva y son los responsables de la dinmica de transformacin y desarrollo. La diversidad de
microorganismos que se encuentran en una fraccin de suelo cumple funciones determinantes
en la transformacin de los componentes orgnicos e inorgnicos que se le incorporan. Esto
permite comprender su importancia en la nutricin de las plantas al efectuar procesos de
transformacin hasta elementos que pueden ser asimilados por sus races. La humificacin de
la materia orgnica es un proceso netamente microbiolgico.
La microflora del suelo est compuesta por bacterias, actinomicetos, hongos, algas, virus y
protozoarios. Entre las funciones ms importantes que cumplen asociadamente en los procesos
de transformacin estn:
Suministro directo de nutrientes (Fijacin de nitrgeno).
Transformacin de compuestos orgnicos que la planta no puede tomar a formas
inorgnicas que si pueden ser asimiladas (Mineralizacin). Ejemplo: Protena hasta
aminocidos y a nitratos.
Solubilizacin de compuestos inorgnicos para facilitar la absorcin por las plantas.
Ejemplo. Fosfato triclcico a Fosfato monoclcico.
Cambios qumicos en compuestos inorgnicos debido a procesos de oxidacin y
reduccin. Ejemplo. Oxidacin del azufre mineral a sulfato. Oxidacin del nitrgeno
amoniacal a nitrato.
Aumento del desarrollo radicular en la planta que mejora la asimilacin de nutrientes, la
capacidad de campo y el desarrollo.
Reacciones antagnicas, parasitismo y control de fitopatgenos.
Mejoramiento de las propiedades fsicas del suelo.
La mayor actividad de los microorganismos se realiza desde la superficie del suelo hasta unos
20 centmetros de profundidad. Las colonias de microorganismos permanecen adheridas a las
partculas de arcilla y humus (fraccin coloidal) y a las races de las plantas que les suministran
sustancias orgnicas que les sirven de alimento y estimulan su reproduccin. Estas
exudaciones dependen del buen estado nutricional de la planta y as favorecen el crecimiento
de los microorganismos que son importantes para ella. Su actividad y su desarrollo estn
asociados a la disponibilidad de los substratos a transformar. La colonizacin de algunos grupos
microbianos sobre las fracciones orgnicas e inorgnicas dependen de la funcin que s este
cumpliendo en la transformacin (degradacin de carbohidratos o de protenas, amonificacin,
nitrificacin, oxidacin, reduccin, mineralizacin, solubilizacin). Por lo tanto, mientras algunos
microorganismos actan sobre un substrato, otros se desarrollan en los productos de la
transformacin. Cuando terminan su funcin sobre la degradacin del sustrato, los grupos
microbianos que estaban actuando principalmente disminuyen al mximo, se reproducen o
entran en latencia y se incrementa la poblacin de otros que cumplirn funciones de
transformacin en los productos del metabolismo del grupo microbiano anterior. Cada proceso
qumico desencadenado por un microorganismo es una etapa en la descomposicin de un
material orgnico o inorgnico. Una mayor cantidad de microorganismos en el suelo permite
una mejor actividad metablica y enzimtica para obtener plantas bien nutridas con buena
capacidad para producir.
Portaobjetos limpios
Capilares
Cinta adhesiva
Pala
Asas
Colorantes para Gram, azul de metileno y safranina
Parafina (vela)
Una papa
Sacabocados
Frascos de vidrio
Muestras de suelo
Alcohol
Mecheros

4. PROCEDIMIENTO
Observacin de Microorganismos del Suelo por la Tcnica del Portaobjeto Enterrado

(Cholodny Rossy)
1. Escoja un par de portaobjetos limpio y desengrasado, nalos y envulvalos con cinta

adhesiva por sus extremos.
2. Escoja un suelo protegido de actividad humana o animal. Entierre a profundidades de 5, 15 y

30 cm varios pares de lminas. Marque el sitio deje enterrada las lminas por espacio de 2,4, y
6 semanas.
3. Transcurrido el tiempo, retire cuidadosamente las lminas y lave la superficie expuesta

retirando las partculas ms gruesas del suelo. Las partculas mas finas deben permanecer
sobre la superficie del portaobjeto.
4. Observe los preparados al microscopio en fresco y con colorantes.
5. Realice dibujos de las diferentes morfologas observadas
Tcnica de Enriquecimiento del Suelo para el Aislamiento y la Observacin de Bacterias

Amilolticas como Clostridium sp
En el suelo habitan una gran variedad de bacterias capaces de degradar diferentes sustratos
como el almidn. Una de las tcnicas utilizadas en la Microbiologa del suelo es la de
enriquecimiento; la cual consiste en proporcionar un sustrato de degradacin que favorezca el
crecimiento de microorganismos capaces de degradarlo, para luego aislarlos y cultivarlos.

1. Tome una papa y con ayuda de un sacabocados, realice un orificio de 1 cm de dimetro y con
una profundidad que abarque la mitad de la papa. Corte unos 3mm en la base y coloque sobre
papel absorbente junto al mechero.
2. Introduzca en el orificio aproximadamente 0,5 g de suelo y tape con el cilindro de papa

retirado al principio.
3. Selle con parafina lquida y coloque la papa dentro de un frasco de boca ancha. Agregue
agua hasta cubrir la papa, tape el frasco. Incubar a temperatura ambiente por 2-3 das
4 Transcurrido el tiempo, tomar muestras del interior del orificio y se realiza tincin de Gram
para su observacin microscpica.
5. Realice otro montaje con la coloracin de Shaeffer fulton para observar esporas.
Presente un informe de los resultados obtenidos en la prctica
6.1 Qu son las bacterias amilolticas?
6.2 Qu importancia tienen en el suelo?
1. BURBANO, Hernn. El suelo: una visin sobre sus componentes
bioorgnicos. Ed. Investigaciones Universidad de Nario. Pasto Colombia, 1989.
2. SILVIA, David. Principles and aplication of Soil Microbiology. Ed. Prentice Hall,
USA, 1999.
3. CASTILLO, Nelson. Una introduccin al estudio del suelo y de los fertilizantes.

Ed Americana. Caracas Venezuela, 1987
4. Ronald Ferrera- Cerrato. Microbiologa Agrcola. E. Trillas. Mxico 2007

IMGENES TOMADAS DE
http://www.madrimasd.org/blogs/universo/2008/11/02/105611

Efecto rizosfrico
PR CTIC No. 3. DETERMINCION DEL

EFECTO RIZOSFERICO

PR CTIC No. 3. DETERMINCION DEL
EFECTO RIZOSFERICO
1. OBJETIVO
Conocer algunos de los mtodos ms utilizados en el estudio de la microbiologa del suelo y
evaluar el efecto de la rizsfera sobre las poblaciones microbianas.
La rizosfera es una parte del suelo inmediata a las races donde tiene lugar una
interaccin dinmica con los microorganismos. Las caractersticas qumicas y biolgicas
de la rizosfera se manifiestan en una porcin de apenas 1 mm de espesor a partir de
las races. En un sentido ms amplio, la rizosfera se puede considerar como la porcin
de suelo en la que estn las races de las plantas, ya que es una zona donde se dan
toda una serie de relaciones fsicas y qumicas que afectan a la estructura del suelo y a
los organismos que viven en l, proporcionndole diferentes propiedades. La porcin
apical de crecimiento representa una prdida considerable de material que incluyen el
polisacrido mucigel secretado por la cofia de la raz, por las clulas epidrmicas y
corticales, y los exudados radiculares de la clulas de pared fina expansoras que
preceden al pice.
Se pueden destacar dos caractersticas de la rizosfera:
Presencia de numerosos organismos en mayor densidad que en el suelo normal,

como pueden ser bacterias, hongos y microfauna (por ejemplo nematodos, caros,
insectos) como consecuencia de la liberacin de productos vegetales al suelo.
Es el lugar de destino de los carbohidratos producidos por la fotosntesis, los

cuales luego son exudados por las races paras proveer de energa a los
microorganismos, quienes en retribucin protegen a las races de organismos
patgenos y adems solubilizan minerales hacindolos ms asimilables. Se estima que
al menos un tercio de los fotosintatos son exudados para este propsito.
La rizosfera provee un complejo y dinmico microambiente, donde bacterias y hongos,
en asociacin con las races, forman comunidades nicas con un considerable potencial
para la detoxificacin de compuestos orgnicos nocivos.

- muestras de suelo rizosfrico
- muestras de suelo sin races( no rizosfrico)
- Erlenmeyer de 250 mL con 90 mL de ADE(agua destilada esteril) y tapn de goma
- tubos de ensayo con 9 mL de slucin salina o agua peptonada
- pipetas estriles de 1 mL
- cajas de Petri con medio de cultivo estril (agar nutritivo, agar plate count o medio Waskman)
4. PROCEDIMIENTO
Toma de las Muestras
Suelo rizosfrico
Escoja un suelo de bosque, agrcola o de jardn. Seleccione una plantica saludable

desentirrela con cuidado, extrayendo todo el sistema radicular sin maltratar las races.
Coloque las races en bolsas plsticas y transprtelas en el menor tiempo posible al laboratorio
Suelo no-rizosfrico
En el mismo terreno tome una muestra de suelo cercano a la planta, pero que no tenga
influencia del sistema radicular. Coloque las muestras en bolsas plsticas y transprtelas en el
menor tiempo posible al laboratorio
Procesamiento de las Muestras en el Laboratorio
Suelo rizosfrico
Tome las races agtelas vigorosamente sobre una superficie limpia y estril para desprender la
mayor cantidad posible de suelo rizsferico. Tome 10 gramos y suspndalo en 90 ml de agua.
Agtelo vigorosamente y prepare 6 diluciones a partir de ella en los tubos con 9 ml de solucin
salina o agua peptonada. Extender el inculo en toda la superficie con esptula de vidrio e
incubar invertidas a 28 C. por 3-5 das
Suelo no-rizosfrico
- Con suelo no-rizosfrico (S) tamizado con tamiz de 2mm pesar 10 g y efectuar diluciones con
agua destilada estril (1 a 6). Sembrar las cajas con las dos ltimas. Extender. Incubar
invertidas a 28 C. por 3-5 dias
-Luego de la incubacin contar el N de colonias desarrolladas, calcular segn la dilucin

empleada el nmero de UFC por gramo de suelo rizferico (R) y el nmero de UFC por gramo
de suelo no rizferico (S). Calcular el cociente R/S.
Interprete los resultados y explique los resultados de acuerdo al valor obtenido de R/S igual a
1; mayor que 1 menor que 1
Qu importancia tiene el efecto rizosfrico en los cultivos de plantas?
Explique la relacin R/S

USA, 1999.

IMGENES TOMADAS DE
http://cneyoysiarifisiolvegetal.blogspot.com/2012/01/fijacion-biologica-de-nutrientes.html
http://www.biotecnologia-rizosfera-ceu.com/galeria/gf16.html

Azotobacter
PR CTIC No. 4. ISLMIENTO DE

MICRORGNISMOS FIJDORES DE
NITROGENO DE VID LIBRE
(AZOTOBACTER)
MICRORGNISMOS FIJDORES DE
NITROGENO DE VID LIBRE
(AZOTOBACTER)
1. OBJETIVO
Aislar y reconocer las caractersticas de las bacterias de vida libre fijadoras de nitrgeno
atmosfrico del gnero Azotobacter
La familia Azotobacteriaceae comprende a las bacterias del gnero Azotobacter, las cuales son
Eubacterias Gram-negativas que tienen una pared celular compleja que consiste de una
membrana externa y una capa interna de peptidoglicano que contiene cido murmico y
murena..Se reproducen por fisin binaria, viven en suelos y en aguas frescas, son clulas
ovoides y grandes de 1.5 a 2.0 m de dimetro. Son pleomrficas, variando su morfologa
desde bacilos hasta clulas en forma de cocos. Se les observa como clulas individuales, como
pares o formando agregados irregulares, y algunas veces formando cadenas de tamao
variable. Algunas especies como A. vinelandii y A. chrocoocum sufren un proceso de
diferenciacin para formar quistes resistentes a la desecacin. Se mueven por flagelos
pertricos, son aerobios, pero pueden crecer en concentraciones de oxgeno bajas. Algunas
cepas producen pigmentos solubles o insolubles en agua.
Son quimioorganotrficas, utilizan azcares, alcoholes y sales inorgnicas para crecer. Son
fijadores de nitrgeno; en vida libre fijan al menos 10 mg de N2 por gramo de carbohidrato
(glucosa) consumido. Requieren molibdeno para fijar nitrgeno que puede ser parcialmente
reemplazado por vanadio. Utilizan nitrato y sales de amonio y ciertos aminocidos como fuentes
de nitrgeno. Son catalasa positivos. El rango de pH en el que crecen en presencia de
nitrgeno combinado es 4.8-8.5 el pH ptimo para crecer cuando fijan nitrgeno es 7.0-7.5.
Muestras de suelo de buena calidad
Cajas de petri con medio selectivo Ashby
pinzas
Portaobjetos
Cubreobjetos
Reactivos de Gram
4. PROCEDIMIENTO
Aislamiento primario
Tnica de siembra de granos de suelo sobre el medio selectivo
Deposite con la ayuda de una pinza o un asa lo mas regularmente posible 20 granos de suelo
separados a una distancia aproximada de 1 cm unos de otros, sobre la superficie del agar.
Incubar a 28C por 7 das hasta observar a alrededor de los grnulos colonias traslcidas y
mucilaginosas las cuales suelen oscurecerse al final del cultivo y aparecen a los dos das de
incubacin.
Son comunes en suelos neutros y alcalinos.
Aisalmiento primario de Azotobacter

Aislamiento secundario
Repique por agotamiento algunas de las colonias del crecimiento primario en otra caja con
medio selectivo. Incube a 28C por 7 das
5 ESTRATEGIAS DE EVALUACIN
Cuente la cantidad de granos de suelo que tienen crecimiento( granos positivos)
Describa la morfologa de las colonias.
Realice tincin de Gram a partir de las colonias alrededor de los grnulos positivos.
Determine el porcentaje de recuperacin de bacterias diazotrofas aerobias asimbiticas
para cada cultivo, utilizando la frmula:
% de recuperacin =No de grnulos positivos/ total de grnulos

sembradosx100
Consulte las caractersticas propias del gnero Azotobacter que permiten su
reconocimiento en el laboratorio.
Qu importancia ha tenido el uso de inoculantes microbianos a base de Azotobacter
para la agricultura?
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
USA, 1999.

IMGENES TOMADAS DE
http://inst.bact.wisc.edu/inst/index.php?module=book&func=displayarticle&art_id=274
http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Azotobacter

Solubilizacio n de fosfato en agar Pikosvkaya

MICRORGNISMOS SOLUBILIZDORES
DE FOSFTO INORGNICO

MICRORGNISMOS SOLUBILIZDORES
DE FOSFTO INORGNICO

1. OBJETIVO
Obtener diferentes microorganismos solubilizadores de fosfatos a partir de muestras de suelo y

races de plantas
El fsforo es el elemento ms escaso en los suelos tropicales del mundo y de

Colombia. Es uno de los elementos que las plantas requieren en cantidades
relativamente grandes. Este macronutriente, es esencial en la planta porque forma
parte de los fosfatos portadores de energa (ATP-ADP), fosfolpidos, cidos nucleicos y
varias coenzimas esenciales (CURTIS 1999; ROJAS. 1985). Las plantas absorben la
mayora del fsforo como ion dihidrogeno-fosfato H2PO42- y pequeas cantidades
como ion hidrogenofosfato HPO42. Sin embargo, una gran parte de este elemento en el
suelo, aproximadamente 95-99% esta presente en la forma de fosfato insoluble, las
cuales no pueden ser utilizadas por las plantas (Bear, 1969; Kucey, 1983).
La vida del suelo, es sin lugar a dudas muy activa en todos los suelos agrcolas, aunque existen
diferencias segn la constitucin y conformacin de los suelos, y especialmente en aquellos
cultivados donde se puede verificar una actividad de biomasa microbiana muy intensa a nivel de
rizsfera.
Esta gran actividad biolgica se traduce entre otras en una serie de inmovilizaciones y
liberaciones de productos metablicos y nutrientes como el fsforo que es responsabilidad casi
excluyente de diferentes grupos microbianos. Entre los que a nivel de suelo pero
particularmente a nivel de rizosfera han desarrollado mecanismos para la solubilizacin del
fsforo edfico encontramos a los Hongos, Actinomicetes y Bacterias.
Entre los hongos, los representantes ms importantes son Penicillium, Aspergillus, Fusarium y
Sclerotium que si bien son solubilizadores de fsforo son ms conocidos como agentes
patgenos de diferentes semillas y cultivos.
El segundo grupo microbiano con gran capacidad solubilizadora del fsforo es el de los
Actinomicetes, siendo uno de los representantes ms importantes los Streptomicetes, muy
conocidos por su capacidad de generar o producir antibiticos.
El tercer grupo microbiano solubilizador de fsforo es el de las Bacterias existiendo una gran
cantidad de gneros capaces de solubilizar fsforo entre otros los Bacillus, Flavobacterium,
Micrococcus y Pseudomonas, siendo este ltimo Gnero uno de los ms relevantes desde el
punto de vista de la solubilizacin del nutriente.
Las Pseudomonas son bacterias pertenecientes a la clase SCHIZOMYCETES, orden
Pseudomonales cuyos representantes ms importantes desde el punto de vista de la
solubilizacin del fsforo son: Pseudomonas putida y Pseudomonas fluorescens.
Esta ltima especie ha demostrado tener una altsima capacidad de solubilizacin del
fsforo tal como queda demostrado en numerosos trabajos donde se refleja su
capacidad solubilizadora sobre el fosfato triclcico insoluble.
Portaobjetos limpios
Pala
Asas
Colorantes para Gram, azul de metileno y safranina
Muestras de suelo
Alcohol
Mecheros
Cajas petri
Medio SRS
4. PROCEDIMIENTO
Tome muestras de suelo de buena calidad o compost maduro, pase la muestra
Por tamices de diferentes tamaos de poro hasta obtener partculas de suelo uniformes, del
menor tamao posible conservando su estructura y agregacin. Transfiera los grnulos
seleccionados a una caja petri seca y estril, con unas pinzas estriles, tome los grnulos de
suelo y dispngalos de 5,7 o 9 sobre las cajas con medio de cultivo SRS. Tambin puede tomar
segmentos de raicillas de plantas exigentes en fsforo como maz, trigo o caa de azcar.
Incube a 30C y observe peridicamente hasta evidenciar colonias de hongos o bacterias
alrededor de los grnulos o de las raicillas. La actividad solubilizadora se evidencia por la
aparicin de un halo transparente alrededor de las colonias en el medio SRS, acompaado de
cambio en el medio que originalmente es de color prpura. Selecciones las colonias con mayor
expresin de la actividad solubilizadora, purifquelas sobre nuevas cajas de medio de cultivo
selectivo SRS. Una vez obtenido los cultivos puros de los microorganismos aislado proceda a la
identificacin taxonmica de los mismos
Presente un informe d elaboratorio con los resultados obtenidos
1. Consulte y elabore una sntesis de los mecanismos bioqumicos que presentan hongos y
bacterias para llevar a cabo la solubilizacin de fosfatos
2. Consulte las fuentes de fosfato inorgnico y orgnico sobre las cuales actan los
microorganismos solubilizadores para liberar el ion ortofosfato.
USA, 1999.


IMGENES TOMADAS DE

Colonias de Actinomicetos

CTINOMICETOS (STREPTOMYCES)

CTINOMICETOS (STREPTOMYCES)
1. OBJETIVO
Aislar y reconocer las caractersticas distintivas de los principales grupos de Actinomycetes

El grupo taxonmico de los actinomycetes est caracterizado por ser bacterias grampositivas
que presentan formacin de un propio micelio permanente y la generacin de esporas
unicelulares. Dentro de estos de estos encontramos los siguientes grupos:
Actinomyces
Arthrobacter
Corynebacterium
Frankia
Micrococcus
Micromonospora
Mycobacterium
Nocardia
Propionibacterium
Streptomyces
Los Streptomyces son ubicuos principalmente de suelos. Estas bacterias estn
presentes en suelos alcalinos o neutrales causando el olor a tierra hmeda o recin
arada debido a que producen unos metabolitos secundario denominados geosminas.
Son estrictamente aerbicos, tiene requerimientos nutricionales simples, son verstiles y
su cultivo en laboratorio es fcil. Pueden formar exoenzimas los cuales secretan al
utilizar el almidn, celulosa, hemicelulosa, quitina o agar. Otra caracterstica importante
de estos microorganismos es la produccin de antibiticos, lo cual tiene mucha
importancia en el campo industrial en el rea farmacolgica.
Muestras de suelo
Harina de soya
Carbonato de calcio
Cajas de petri
Medio selectivo: Agar casena almidn o agar nutritivo
Agar Muller- Hinton
Coloracin de Gram
Cepas test: Psudomonas, Staphilococcus, Bacillus etc
Portaobjetos

4. PROCEDIMIENTO
Enriquecimiento del suelo
Con el objetivo de preparar el suelo para un aislamiento exitoso de los actinomicetos, se hace
necesario enriquecer la muestra de suelo con 0,5g de carbonato de calcio y 1g de harina de
soya la cual es utilizada por los microorganismos como fuente de nitrgeno por su contenido
proteico. Se mezclan estos componentes con el suelo y se dejan incubando a temperatura
ambiente por una semana.
Aislamiento
1. De la muestra de suelo enriquecido previamente, tomar una porcin y espolvorearla en 4

cajas de petri.
2. Agregar 20 ml de medio selectivo en cada caja de petri.
3. Dejar solidificar y finalmente llevar a incubar durante una semana a temperatura ambiente y
en la oscuridad.
4. Observar colonias mucoides , detectar el olor caracterstico a suelo hmedo producido por
las geosminas y realizar coloracin de Gram
5. Repicar para obtener cultivos puros.
Determinacin de la capacidad de producir antibiticos mediante la prueba de

susceptibilidad de Kirby. Bauer
Bauer, Kirby, Sherris y Tuck recomendaron el Agar de Mueller Hinton para llevar a cabo las
pruebas desusceptibilidad a antibiticos, utilizando un solo disco impregnado con una alta
concentracin de un antimicrobiano. El Agar Mueller Hinton cumple con los requerimientos de la
Organizacin Mundial de la Salud y est especificado en la FDA. Este medio es el seleccionado
por la NCCLS (National Commitee forClinical Laboratory Standards) para realizar las pruebas
de susceptibilidad, por su alta reproducibilidad, su bajo contenido de substancias inhibidoras y
el crecimiento satisfactorio que presentan la mayora de los patgenos no fastidiosos. Con este
medio se han llevado a cabo una gran cantidad de estudios sobre susceptibilidad
antimicrobiana.

En este medio la infusin de carne y la peptona de casena proveen la fuente de nitrgeno,
vitaminas, carbn y aminocidos. El almidn es agregado para absorber cualquier metabolito
txico y el agar es adicionado como agente solidificante.
Para realizar la prueba de susceptibilidad de Kirby- Bauer, se siembran en forma masiva los
microorganismos test en el agar Mueller- Hinton con ayuda de un aplicador impregnado con el
cultivo del microorganismo test. Luego toma bloques de agar con colonias de Streptomyces y se
colocan encima de la superficie del agar Mueller- Hinton dionde previamente sembr el
microorganismo test. Se incuban las cajas a 37C por 24 horas.
La produccin de antibitico por parte de los Streptomyces se evidencia por la aparicin de
halos de inhibicin alrededor de los bloquecitos de agar
Presente un informe d elaboratorio con los resultados obtenidos
1. Cules son las caractersticas macroscpicas y microscpicas de las colonias de
Streptomyces?
2. Cul es la importancia de los actinomicetes en el suelo y respecto a esto cual es su
inters industrial?
3. Realice un diagrama de flujo para la identificacin de especies de de Streptomyces
USA, 1999.


IMGENES TOMADAS DE
http://cienciamerica2007.blogspot.com/2007/08/bacterias-de-fondos-marinos-sorprenden.html
GLOSARIO
Arcilla: Partculas del suelo con un dimetro inferior a <0.002 mm.
Arena: partculas del suelo con un dimetro comprendido entre 0.05 y 2. mm.
Capilaridad: movimiento de ascenso del agua a travs del perfil del suelo.
Permeabilidad: movimiento de descenso del agua a travs del perfil del suelo.
Poros: espacios que quedan entre partcula y partcula del suelo.
Porosidad: volumen total de poros.
Potencimetro: instrumento para determinar la concentracin de iones hidronio.
Suelo: Material mineral de la superficie de la corteza terrestre que sirve de medio natural para
el crecimiento de las plantas; el cual se ha formado por accin del clima y la actividad de los
seres vivos.
ANEXOS
AGAR CASEINA ALMIDON PARA EL AISLAMIENTO DE ACTINOMYCETES
COMPOSICION DEL MEDIO g/ L

Caseina 0.4
Almidn 1
Nitrato de potasio 0.5
Monohidrgeno fosfato dipotsico 0.2
Sulfato de magnesio 0.1
Carbonato de calcio 0.1

Agar 10
Agregar algn antimictico para inhibir el crecimiento de hongos

pH 6.5
COMPOSICIN DEL MEDIO SRS
Componentes Cantidad (gr/L)

(NH4)2SO4 0,5
KCl 0,2
MgSO4 0,3
MnSO4 0,004
FeSO4 0,002
NaCl 0,2
Glucosa 10
Extracto de levadura 0,5
Prpura de bromocresol 0,1
*Ca3(PSO4)2 5
Agar 15
Esterilizar a 121C por 30 minutos

Ph: 7
*El fosfato se esteriliza en forma independiente y se adiciona a los otros componentes antes de
servir
COMPOSICION DEL MEDIO ASHBY g/ L
Composicin del medio ASHBY

(Para aislamiento y cuantificacin de Azotobacter)
Manitol ----------------------- (20 g/L) Sacarosa -------------------- 40,0 g/L

K2HPO4 ---------------------- 0, 2 g
Mg SO4.7H2O --------------- 0, 2 g
NaCl ------------------------- 0, 2 g

K2SO4 ----------------------- 0, 1 g
Ca CO3 ---------------------- 5, 0 g
Agar ------------------------- 15,0 g
Agua destilada ------------ 1.0 litro

pH --------------------------- 7
Esterilizacin: 20 minutos a 121 oC


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UNIVERSIDAD LIBRE SECCIONAL BARRANQUILLA

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE

Microoragnismos del suelo

M.Sc; BEATRIZ CECILIA BARRAZA AMADOR

En este manual se ncluyen las siguientes prcticas de laboratorio:

2 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

ELABORACIN DEL INFORME DE LABORATORIO..................................................................5

SEGURIDAD PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO..........................................................7

2. RECOMENDACIONES REFERIDAS AL LABORATORIO.................................................7

4. ASISTENCIA Y PREPARACIN DE LA PRCTICA..........................................................7

5. ELEMENTOS DE PROTECCIN PERSONAL..................................................................7

6. MANIPULACIN DE PRODUCTOS QUMICOS Y MATERIAL DE LABORATORIO.........7

10. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.............................................................................15

4 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

Pautas para la elaboracin de informe de laboratorio cuando aplique.

Nombre de la prctica desarrollada

Nombre de los integrantes del grupo de trabajo

Son las palabras ms importantes de la prctica, se nombran separndolas por comas, no se

5 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

Referencia todas las fuentes bibliogrficas consultadas. Deben referenciarse de forma

http://www.cellbio.com. Visitado julio 1 de 2009.

6 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

4. Conocer la metodologa de trabajo del laboratorio.

5. Familiarizarse con el equipamiento moderno conque cuenta laboratorio.

6. Conocer las medidas a tomar en caso de emergencia.

7. Conocer las leyes relacionadas con la seguridad biolgica.

8. Respetar y hacer cumplir todo lo anteriormente mencionado

2. RECOMENDACIONES REFERIDAS AL LABORATORIO

Trabajar en la zona estril generada por mecheros de gas o cmara de flujo

7 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

Cualquier accidente personal o con los cultivos comunqueselo al personal de la

8 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

4. ASISTENCIA Y PREPARACIN DE LA PRCTICA

4.2. Siga los pasos establecidos en cada gua de laboratorio

4.3. Llegue puntual a cada de seccin de laboratorio.Dos fallas de asistencia sin la

5. ELEMENTOS DE PROTECCIN PERSONAL

6. MANIPULACIN DE PRODUCTOS QUMICOS Y MATERIAL DE

9 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

PR CTIC No. 1 DETERMINCION DE

10 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

Como se ha explicado, el suelo es una mezcla de materiales slidos, lquidos (agua) y

1. La textura depende de la proporcin de partculas minerales de diverso tamao presentes en

Fragmentos rocosos: dimetro superior a 2 mm, y son piedras, grava y cascajo.

11 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

La consistencia se refiere a la resistencia para la deformacin o ruptura. Segn la resistencia el

La aireacin se refiere al contenido de aire del suelo y es importante para el abastecimiento de

Bandejas numeradas para colocar las muestras

12 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

PREPARACIN DE LA MUESTRA EN EL LABORATORIO

1. Se extienden para secarse

2. Se separan mediante un tamiz los posibles elementos gruesos

3. Se prepara la muestra para los distintos anlisis qumicos y fsicos

Colocar la muestra en una bandeja y disgregar a mano, si es posible, los terrones

13 Universidad Libre Seccional Barranquilla - Programa de Microbiologa

Porcentaje de elementos gruesos = X 100

Tierra fina seca al aire = X 100

P= peso en gramos de los elementos gruesos

P = peso en gramos de la muestra

4.1 DETERMINACION DE LA POROSIDAD DEL SUELO. (VOLUMEN TOTAL DE POROS