Universidad Nacional de San Agustn

Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias

Escuela Profesional y Acadmica de Biologa

Cultivo Masivo de Microalgas en Biorreactores Verticales

Tesis presentada por la bachiller:

GHERALDINE ABEGAIL YNGA

HUAMN

Para optar el Ttulo Profesional de

BILOGO

AREQUIPA PER
2011
 Universidad Nacional de San Agustn
Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias
Escuela Profesional y Acadmica de Biologa

Cultivo Masivo de Microalgas en Biorreactores Verticales

Tesis presentada por la bachiller:

GHERALDINE ABEGAIL YNGA

HUAMN

Para optar el Ttulo Profesional de

BILOGO
 DEDICATORIA

Con un profundo cario y respeto:

A mis padres Bartolom y Andrea,

los que dedicaron su tiempo y
esfuerzo en nuestra superacin
personal y desarrollo profesional.

A mis hermanos Christopher y

Andrs.

A Andrew, Olenka y Kasandra.

AGRADECIMIENTO

Al Proyecto IMARPE-EEP-FINCyT DETEMINACIN DE LA BIOMASA

MICROALGAL POTENCIALMENTE ACUMULADORA DE LPIDOS
PARA LA OBTENCION DE COMBUSTIBLE, contrato N025-FINCyT-
PIBAP-2007, por el financiamiento parcial de la tesis.

Al Instituto del Mar del Per, IMARPE, por permitirme el uso de los
laboratorios, material y equipos durante la ejecucin de la tesis.

A la Msc. Carla Aguilar Samanamud por la oportunidad de iniciar a realizarme

profesionalmente, por sus concejos y su apoyo en el desarrollo de la tesis.

Al mi asesor Blg. Cesar Ranilla Falcn por la paciencia y compresin.

A mis amigos Sheyla, Iliana, Claudia, Cecil, Alberto, Leenin, y a todos aquellos
que me brindaron su apoyo y nimos para la conclusin del presente trabajo de
investigacin.

i
 INDICE

ABREVIATURAS...vi

LISTA DE FIGURAS Y TABLAS.....vii

RESUMEN....1

ABSTRAC.2

INTRODUCCIN.....3

OBJETIVOS......5

CAPTULO I: CONSIDERACIONES TEORICAS

1.1.- Microalgas...6

1.2- Formas de Cultivos microalgal.......6

1.2.1.-Dentro de la forma de cultivo se puede encontrar...7

1.2.1.1.- Por su naturaleza: Los cultivos se pueden clasificar en......7

1.2.1.1.1.-Cultivo intensivo....7

1.2.1.1.2.-Cultivo extensivo..7

1.2.1.2.-Por la forma de cosechar los cultivos se pueden clasificar en..7

1.2.1.2.1.-Cultivos continuos....7

1.2.1.2.2.-Cultivos semi-continuos....7

1.2.1.2.3.-Cultivos batch....7

1.2.1.3.- Por la pureza del cultivo, stos se puede clasificar en.7

1.2.1.3.1.-Cultivos axnicos..7

1.2.1.3.2.-Cultivos monoespecficos (unialgales).....7

1.2.2.- Tipos de biorreactores.....7

1.3.- Consideraciones generales durante el cultivo de microalgas..8

1.3.1.-Radiacin..8

ii
 1.3.2.- Tiempo de retencin....9

1.3.3.- Turbulencia.........9

1.3.4.- Oxgeno disuelto y pH......10

1.3.5.- Carbono.....10

1.4.- Importancia del cultivo microalgal.......11

CAPTULO II: MATERIAL Y MTODOS

2.1.- LUGAR Y FECHA DE EJECUCIN..12

2.2.- MUESTRA DE ESTUDIO.......12

2.3.- DESCRIPCION Y CLASIFICACION TAXONOMICA

DE LA ESPECIE......13

2.3.1.- Clasificacin taxonmica..13

2.3.2.- Caractersticas morfolgicas de la cepa proveniente de virrila.....14

2.3.3.- Caractersticas bioqumicas y composicin de pigmentos....14

2.3.4.- Condiciones de cultivo......14

2.4.- Mtodos.15

2.4.1.- Realizacin del cultivo en biorreactores...15

2.4.1.1- Sellado de bolsas..15

2.4.1.2- Siembra....15

2.4.1.3- Cosecha....16

2.4.2.- Conteo celular...17

2.4.3.- Toma de parmetros fsicos en el invernadero......18

2.4.3.1.- Temperatura....18

2.4.3.2.- Flujo lumnico.19

2.4.4.- Toma de parmetros fisicoqumicos al cultivo.....19

iii
 2.4.5.- Obtencin de biomasa algal..19

2.4.5.1.- Obtencin de la biomasa hmeda....19

2.4.5.2.- Obtencin de biomasa seca......20

2.4.6.- Anlisis de los datos..21

2.4.6.1.- Parmetros fsico- qumicos.....21

2.4.6.2- Relacin productividad.....21

2.4.6.3.- Anlisis estadsticos.....21

CAPTULO III: RESULTADOS

3.1.- Evaluacin de los parmetros fsico-qumicos

ambientales y de cultivo durante el periodo de experimentacin......22

3.1.1.-Influencia Trmica Ambiental sobre el Desarrollo de los Cultivos...24

3.1.2.-Impacto lumnico ambiental sobre el desarrollo de los cultivos:...26

3.1.3.-Impacto del pH sobre el desarrollo de los cultivos:......28

3.1.4.-Impacto Trmico sobre el desarrollo de los cultivos:............29

3.2.-PRODUCTIVIDAD.......31

3.2.1.- Concentracin celular....31

3.2.2- Productividad por Litro......32

3.2.3-Productividad por Biorreactor (PB)....34

3.2.4- Productividad por lnea de cultivo (PLC)..35

3.2.5-Productividad por rea (PA)....37

ENSAMBLE Y ACONDICIONAMIENTO DE BIORREACTORES EN EL INVERNADERO...39

DISCUSIONES...41

CONCLUSIONES...44

RECOMENDACIONES.....45

iv
BIBLIOGRAFA.46

ANEXOS.49

v
 ABREVIATURAS

BG: Banco de germoplasma

BH: Biomasa hmeda

BS: Biomasa seca

Con. Cel: Concentracin celular

C: Grados centgrados

g. B-1: Gramos por biorreactor

g. L-1: Gramos por litro

g. LC-1: Gramos por lnea de cultivo

g. m-2: Gramos por metro cuadrado

LCM: Laboratorio de cultivo de microalgas

m2: Metros cuadrados

T: Temperatura

PA: Productividad por rea

PB: Productividad por biorreactor

PLC: Productividad por lnea de cultivo

PV: Productividad volumtrica

seg.: Segundo

T. Amb: Temperatura ambiente

T. Cul.: Temperatura de cultivo

: Micras

vi
 LISTA DE FIGURAS Y TABLAS

Fig. 1: Cepa IMP-LBA-009, Nannocloropsis spp. x 100x

Fig. 2: reas de desarrollo de trabajo de investigacin

Fig. 3: Flujo de siembra en cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero.

Fig. 4: Flujo de cosecha en cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero.

Fig. 5: Obtencin de biomasa hmeda y seca.

Fig. 6: Ensamblaje y acondicionamiento de biorreactores.

Fig.7: Cmara de Neubauer

Fig. 8: Ubicacin de puntos de toma datos de temperatura de la sala del invernadero.

Fig. 9: Ubicacin de puntos de toma datos de intensidad lumnica.

Fig.10: Variacin de la Temperatura ambiental en cultivo masivo de biorreactores al

interior del invernadero.

Fig.11: Impacto de Temperatura mnima ambiental en cultivo masivo de biorreactores

al interior del invernadero.

Fig.12: Impacto de Temperatura mxima ambiental en cultivo masivo de biorreactores

al interior del invernadero.

Fig.13: Variacin de intensidad lumnica en cultivo masivo de biorreactores al interior

del invernadero.

Fig.14: Impacto de intensidad lumnica a las 8:00 am. en cultivo masivo de

biorreactores al interior del invernadero.

Fig.15: Impacto de intensidad lumnica a las 12:00 m. en cultivo masivo de

biorreactores al interior del invernadero.

Fig.16: Impacto de intensidad lumnica a las 16:00 pm. en cultivo masivo de

biorreactores al interior del invernadero.

Fig.17: Impacto del pH en cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero.

Fig.18: Impacto trmico a las 8:00 am. en cultivo masivo de biorreactores al interior
del invernadero.

Fig.19: Impacto trmico a las 12:00 m. en cultivo masivo de biorreactores al interior

del invernadero.

vii
Fig.20: Impacto trmico a las 16:00 pm. en cultivo masivo de biorreactores al interior
del invernadero.

Fig.21: Variacin de la concentracin celular en cultivo masivo de biorreactores al

interior del invernadero.

Fig.22: Concentracin celular de cultivo en biorreactores al interior del invernadero.

Fig.23: Productividad en funcin a la biomasa hmeda por litro de cultivo, en

biorreactores al interior del invernadero.

Fig.24: Productividad en funcin a la biomasa seca por litro de cultivo, en

biorreactores al interior del invernadero.

Fig.25: Productividad por biorreactor en funcin a la biomasa hmeda obtenida del

cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

Fig.26: Productividad por biorreactor en funcin a la biomasa seca obtenida del

cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

Fig.27: Productividad por lnea de cultivo en funcin a la biomasa hmeda obtenida

del cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

Fig.28: Productividad por lnea de cultivo en funcin a la biomasa seca obtenida del
cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

Fig.29: Productividad por rea de cultivo en funcin a la biomasa hmeda obtenida del
cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

Fig.30: Productividad por rea de cultivo en funcin a la biomasa seca obtenida del
cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

Tabla N1: Comparacin de factores fsico-qumicos al interior del invernadero y de

los biorreactores, durante el cultivo masivo de microalgas

viii
 RESUMEN

El cultivo masivo de microalgas en biorreactores presenta una alta tasa de productividad

frente a los cultivos abiertos, esta ventaja, aunada a determinados factores ambientales,
se relaciona directamente con la cantidad y calidad de biomasa algal obtenida como
producto final en el proceso de cultivo. El presente trabajo centr sus investigaciones en
la evaluacin de los parmetros fsicos del ambiente (temperatura e intensidad
lumnica), as como, fsico-qumicos (temperatura, pH y CO2) en la capacidad de carga
de los cultivos.

La investigacin se desarroll en el invernadero del rea de Biotecnologa Acutica, del

Instituto del Mar del Per, dentro del marco del Proyecto IMARPE-EEP-FINCyT,
denominado Determinacin de la Biomasa Microalgal potencialmente acumuladora
de lpidos para la obtencin de combustibles, segn contrato N025-FINCYT-PIBAP-
2007.

Los cultivos se realizaron empleando la cepa IMP-LBA-009, correspondiente a la

microalga Nannochloropsis spp., con un flujo de produccin semi-continuo por 48
horas, en un periodo de 6 meses, entre julio a diciembre, Bajo condiciones de
iluminacin (22,003.93 Lux.m-2.seg-1 10640.94), temperatura ambiental (31.7C2.8),
temperatura de cultivo (25.7C1.2), CO2 (0.2 g.L-1) y pH (8.36 0.18); los resultados
mostraron que la produccin de biomasa hmeda fue 0.48g.L-1, equivalente a 0.13 g.L-1
de biomasa seca, durante los meses de octubre y noviembre, con una razn de
conversin BS/BH del 28%. El impacto lumino-trmico, al interior del invernadero,
favoreci el incremento progresivo de la concentracin celular del cultivo en
biorreactores, por ende, la produccin de biomasa hmeda y seca, durante el periodo de
trabajo. El pH no sigui el mismo patrn.

Palabra Clave: Biorreactor, biomasa, productividad, microalga y Nannochloropsis spp.

1
 ABSTRAC

The microalgae mass culture in bioreactors has a high productivity rate compared to
open culture; this advantage, coupled with certain environmental factors, this is directly
related to the quantity and quality of algal biomass as a final product obtained in the
cultivation process. The present study focused his research on the assessment for
environmental physical parameters (temperature and light intensity), as well as
physical-chemical (temperature, pH and CO2) processes in the capacity of crops.

The research was developed in the greenhouse of the Department of Aquatic

Biotechnology, Institute del Mar del Peru, and the collaboration within EEP-FINCyT
IMARPE, this is called "Determining the potential microalgal biomass accumulation of
lipids for fuel procurement, "according to Contract No. 025-FINCYT-PIBAP-2007.

Cultures were performed using the strain IMP-LBA-009, corresponding to the

microalgae Nannochloropsis spp., with a flow of semi-continuous production for 48h,
in a period of six months from July to December. Lighting conditions (22003.93 Lux.m-
2
.seg-1 10640.94 2.), temperature (31.7 C 2.8), culture temperature (25.7 C
1.2), CO2 (0.2gL-1) and pH (8.36 0.18), the production results showed the wet biomass
was 0.48 g.L-1, equivalent to 0.13 g.L-1 of dry biomass, between the months of October
and November, with a conversion ratio BS / BH 28%. The impact-luminous heat inside
the greenhouse, favored the gradual increase in the concentration cell culture
bioreactors, thus the production of wet and dry biomass during the period of work, the
pH did not follow a same pattern to that.

Key words: Bioreactor, biomass, productivity, microalga and Nannochloropsis spp.

2
 INTRODUCCIN

La biotecnologa es un conjunto de mtodos y tcnicas que emplean clulas, organismos

o parte de estos permitiendo al hombre aprovechar los productos que se pueden obtener
para satisfacer ciertas necesidades en beneficio de una mejor calidad de vida (Torres A.,
2008). Esta materia prima de la cual se obtienen productos para mejorar la calidad de
vida, pueden tener origen vegetal y/o animal.

Por otro lado, la acuicultura significa cultivo en medio acutico de plantas o animales.
Entre los vegetales comnmente cultivados, se encuentran las microalgas, seres
microscpicos que, debido a su metabolismo, sintetizan su propio alimento del medio
donde viven, por ello son considerados fuente primaria de la alimentacin de muchos
organismos en la cadena alimenticia. Aprovechando este beneficio, durante los aos
cincuenta se dio inicio a la biotecnologa algal realizando cultivos en forma masiva para
la obtencin de pigmentos, lpidos, protenas y carbohidratos.

Las microalgas son consideradas los primeros organismos fotosintticos responsables,

en gran medida, de la emisin de oxgeno a la atmsfera terrestre (Venegas J., 2007).
Como todos los vegetales, necesitan para desarrollarse tres componentes esenciales: luz,
anhdrido carbnico y agua (Domnguez J., 2008). A travs de la fotosntesis convierten
energa lumnica en energa qumica, para convertir sustancias inorgnicas en hidratos
de carbono, cidos grasos, protenas y vitaminas. La concentracin de las protenas,
lpidos y carbohidratos pueden modificarse alterando las condiciones fsicas
ambientales tales como; luz, temperatura e intensidad luminosa (Band C., 1999). Si
bien, existen muchas especies distintas, las de nuestro inters son aquellas que, bajo
determinadas condiciones ambientales y qumicas tienen la capacidad para mantener
una alta productividad de biomasa y al mismo tiempo acumular niveles elevados de
compuestos lipdicos.

La utilizacin de cultivos masivos microalgales, ha concentrado el inters cientfico

durante las ltimas dcadas con la finalidad de controlar y optimizar la produccin y
composicin bioqumica de las microalgas cultivadas (Fidalgo J., 1995). Por otro lado,
el desarrollo de la tecnologa de cultivo intensivo de microalgas, en gran medida, ha
sido posible gracias a los nuevos diseos de fotobiorreactores que presentan una serie de
ventajas respecto a los sistemas de cultivo abiertos, los cuales se caracterizan por
presentar baja densidad celular, mayor contaminacin y costosa recuperacin del
producto en medios diluidos, (Contreras et.al., 2003).

Debido a lo antes mencionado, las microalgas pueden representar una alternativa

interesante como materia prima frente a las plantas oleaginosas, ya que son capaces de
crecer en suelos arcillosos o salinos, inadecuados para el crecimiento de otros tipos de
vegetales. Su velocidad de crecimiento es tal, que permiten obtener cosechas repetitivas
a intervalos muy cortos, estas caractersticas hacen de estos microorganismos los ideales
para una produccin de biomasa a corto plazo, (Band C., 1999).

Entre los factores fsicos qumicos considerados en cultivos masivos estn; la aireacin,
necesaria para la homogenizacin de los nutrientes y evitar la sedimentacin de las

3
microalgas; la iluminacin cuya penetracin permite realizar todo los procesos
fisiolgicos y bioqumicos a fin de acumular metabolitos de importancia; la temperatura
que no solo afecta las reacciones celulares, sino, adems en los requerimientos de
nutrientes, la solubilidad de los gases en el agua y la composicin de la biomasa. Otro
factor representa la ingesta de CO2 que contribuye al proceso fotosinttico.

Bajo este contexto, el presente trabajo de investigacin pretende demostrar que, los
biorreactores verticales son eficientes y de alta productividad para cultivos masivos de
microalgas.

4
 OBJETIVOS

GENERAL:

Evaluar la influencia del impacto lumino-trmico y el pH en la produccin masiva

de la microalga Nannochloropsis spp. Cepa IMP-LBA-009, en biorreactores
tubulares verticales al interior de un invernadero.

ESPECIFICOS:

1) Evaluar la influencia de la temperatura y flujo lumnico de la sala del invernadero

sobre la produccin microalgal.

2) Determinar los niveles de pH y temperatura del cultivo masivo de microalgas en

los biorreactores.

3) Establecer la produccin por biorreactor, por lnea de produccin y por rea de

cultivo bajo condiciones del invernadero designado para la investigacin.

4) Obtener la biomasa hmeda y seca (polvo algal) en gramos.

5
 CAPTULO I

CONSIDERACIONES TEORICAS

1.1.- Microalgas

Son llamadas microalgas una gran cantidad de especies que constituyen el

fitoplancton, las mismas que contemplan desde organismos auttrofos hasta
microflagelados y microciliados auxtrofos. Su posicin taxonmica ha sido de gran
polmica entre botnicos y zologos, como ejemplo podemos mencionar el grupo de
los dinoflagelados, conocidos por unos como microalgas y por otros como
protozoarios.

Por el tamao, las algas se pueden clasificar en dos grandes grupos: macroalgas y
microalgas. Estas ltimas son microorganismos con clorofila y otros pigmentos, con
multitud de formas, tamaos y colores (ms de 30.000 especies) que desarrollan
fotosntesis oxignica. Ocupan prcticamente todos los hbitats. Estas caractersticas,
las hace ideales para producirlas como materia prima y/o producto terminado, con
valor agregado, debido a las biomolculas que acumulan durante su desarrollo, entre
estas se pueden citar a las protenas, lpidos, carbohidratos, pigmentos entre otros que
son aprovechados por el hombre para su beneficio.

Los cultivos de microalgas representan una gran ventaja en diversos campos, desde
el cientfico hasta el comercial, las mismas que para Cohen (1986) y Gmez (2007),
se pueden resumir en tres puntos importantes;

a) El cultivo de microalgas es un sistema biolgico eficiente de utilizacin de

energa solar para producir materia orgnica, las mismas que crecen ms rpido
que las plantas terrestres y es posible obtener mayores rendimientos anuales de
biomasa.

b) La composicin bioqumica pueden modificarse fcilmente variando las

condiciones ambientales y/o la composicin del medio de cultivo.

c) Su alto potencial por acumular compuestos bioactivos, tales como; protenas,

lpidos, almidn, glicerol, pigmentos naturales o biopolmeros, bajo ciertas
condiciones, determina que muchas especies sean de gran inters comercial.

1.2- Formas de Cultivos microalgal

La formas de cultivo microalgal dependen de los requerimientos y exigencias de la

calidad de los mismos segn, la etapas en las que se desarrollan.
Como lo mencionan lvarez (1994) y Gonzales (2000), encontramos distintas
formas de cultivo entre las que destacan:

6
1.2.1.-Dentro de la forma de cultivo se puede encontrar:

1.2.1.1.- Por su naturaleza: Los cultivos se pueden clasificar en:

1.2.1.1.1.-Cultivo intensivo: Aqu los factores de crecimiento se mantienen bajo

un sistema controlado, de tal manera que se pueda obtener una mxima
respuesta en la produccin.

1.2.1.1.2.-Cultivo extensivo: En esta clase de cultivo slo se controla las

variables ms accesibles en su manejo, tales como las caractersticas del
medio nutritivo y la densidad del cultivo.

1.2.1.2.-Por la forma de cosechar los cultivos: Se pueden clasificar en:

1.2.1.2.1.-Cultivos continuos: La poblacin algal, las caractersticas qumicas del

medio, la temperatura y finalmente la luz son mantenidas en un valor
constante por perodos prolongados, procurando un flujo sostenido de
requerimientos y de salida del producto.

1.2.1.2.2.-Cultivos semi-continuos: Aqu se cosecha una parte de la produccin y

se renueva el volumen cosechado por medio de un medio nuevo.

1.2.1.2.3.-Cultivos batch: Estos cultivos son intermitentes, se implementan de

una sola vez y son cosechados completamente despus de que la
produccin algal alcance un nivel apropiado, medido en productividad
(cel.ml-1, g.L-1, g.m-2). En el momento de la cosecha el cultivo debe estar
en la fase exponencial.

1.2.1.3.- Por la pureza del cultivo: stos se puede clasificar en:

1.2.1.3.1.-Cultivos axnicos: Son cultivos libres de bacterias y estriles, para

mantener la productividad por un perodo prolongado de tiempo. Estos
cultivos son delicados y de cuidado. Requieren todo el tiempo de material
estril y asepsia.

1.2.1.3.2.-Cultivos monoespecficos (unialgales): Aqu la poblacin de

microalgas est parcialmente contaminada por una pequea carga de
bacterias. Estos cultivos crecen mejor que los anteriores ya que las
bacterias excretan sustancias, como vitaminas, que favorecen el
crecimiento microalgal, sin embargo en altas concentraciones bacterianas
se puede producir una inhibicin del crecimiento celular.

1.2.2.- Tipos de biorreactores

Estos pueden ser; en Sistemas abiertos, donde los cultivos estn expuestos a la
atmsfera en Sistemas cerrados, comnmente denominados fotobiorreactores, en los
que el cultivo no tiene contacto con la atmsfera (Contreras et.al., 2003).

7
 Los biorreactores de tipo abierto son estanques outdoors o raceways (Avalos P., 2004).
La mayora de los sistemas de produccin industrial de biomasa de microalgas
construidos antes de los aos 90 fueron esencialmente sistemas abiertos tipo carrusel,
que permitan alcanzar densidades celulares de hasta 0,7 g.L-1 de biomasa seca.
(Contreras et.al., 2003), las desventajas de este sistema de cultivo son la baja
productividad por unidad de rea y la variable calidad del producto. Adems, no
ofrecen control alguno sobre la temperatura y la intensidad lumnica, presentan una
pobre captacin de CO2 y baja calidad del producto por la presencia de contaminantes,
(Avalos P., 2004).

Una mejora considerable fue el aporte de cubiertas a los mencionados sistemas, debido
a que se cultiva en un ambiente controlado, protegido de la polucin y con
posibilidades de acondicionamiento trmicos. (Eliach et.al., 2004); Los sistemas
cerrados ofrecen un mejor control sobre las variables del proceso productivo,
mejorando la eficiencia de la utilizacin del CO2 y reduciendo la contaminacin.
(Avalos P., 2004). Durante la ltima dcada del siglo pasado se han usado mltiples
diseos de fotobiorreactores para el cultivo de organismos fotoautotrficos
microscpicos como microalgas y cianobacterias. En la primera dcada del presente
siglo, los fotobiorreactores tubulares y de placas planas han recibido, entre otros,
mucha atencin, ya que permiten establecer cultivos de alta densidad celular, 3 o ms
veces en comparacin con los sistemas convencionales de carrusel. (Contreras et.al.,
2003). Los avances en el diseo de estos sistemas han permitido mejorar notablemente
la densidad celular, la productividad y por ende la economa de los cultivos para
distintos fines, as como mantener el cultivo libre de contaminantes.

1.3.- Consideraciones generales durante el cultivo de microalgas:

Los principales factores que se consideran en toda produccin masiva de algas son la
radiacin, el tiempo de retencin, la turbulencia, el oxgeno disuelto, el pH, carbono,
nitrgeno, fsforo e interacciones biticas (Alvares et.al., 1989).

Durante el 2003, los trabajos de Contreras y colaboradores se orientaron a la revisin

de los diferentes aspectos del diseo de fotobiorreactores, tanto aquellos que implican
el aprovechamiento adecuado de la energa luminosa (ciclos luz-oscuridad, trayectoria
de la luz y geometra de fotobiorreactores) como los basados en conceptos fisiolgicos
(fotoinhibicin por oxgeno, cultivos de alta densidad celular, ultra alta densidad
celular, heterotrofa y mixotrofa), con la finalidad de aplicar los diferentes diseos en
la produccin de compuestos de alto valor agregado y su uso potencial en la
biotecnologa ambiental.

1.3.1.- Radiacin

En el diseo de un reactor y en la prctica, un factor que limita el crecimiento

celular es la luz (Ruiz A., 2008). Un aspecto de suma importancia en el cultivo de
organismos fotoautotrficos, en general, es el relacionado con el aprovechamiento
de la energa radiante durante la fotosntesis. Para una mxima productividad, la
saturacin de intensidad de luz debera ser distribuida homogneamente, al interior
de un fotobiorreactor, lo cual en la prctica resulta complicado en un sistema de

8
 cultivo (Ruiz A., 2008). La tasa de fotosntesis celular F (capacidad de captacin de
fotones) depende de la energa luminosa que reciben las clulas. (Contreras et.al.,
2003). Cada especie de microalga a cultivar tiene su propio requerimiento de luz,
de esta manera, a medida de que se incrementa la intensidad de luz tambin
aumenta la productividad, sin embargo, un exceso de esta puede provocar una
fotoinhibicin. (Avalos P., 2004). Resulta difcil independizar los efectos que sobre
el crecimiento masivo de las algas provocan la temperatura y la luz. Se sabe que en
invierno los cultivos al aire libre crecen menos, pero se ignora si se debe a la menor
iluminacin, a la inferior temperatura o a un efecto de ambas. La produccin
masiva de microalgas reduce considerablemente la penetracin de la luz en el
cultivo. Segn datos obtenidos por los autores, para producciones de 30 g.m-2.da-1
(peso seco) las penetraciones de la luz llega entre 7-5 cm. lo cual es comn en los
sistemas de cultivo masivo de microalgas (Alvares et.al., 1989).

1.3.2.- Tiempo de retencin:

El tiempo transcurrido entre cada suministro de medio nuevo es el tiempo de

retencin, si el sistema se halla en equilibrio dinmico. Por ello, no es preciso tener
operando continuamente el sistema de aprovisionamiento de medio de cultivo para
lograr el crecimiento de las microalgas en los cultivos masivos. Sin embargo, como
los nutrientes terminan agotndose, se requiere la renovacin peridica del medio.
Lo ideal es que dicho perodo sea igual al que las algas precisan para consumir
(Alvares et.al., 1989).

1.3.3.- Turbulencia

La aireacin es un factor importante en los niveles masivos, la misma que produce

una oxigenacin del cultivo, contribuyendo a la homogenizacin de los nutrientes;
al movimiento constante de las clulas hacia la superficie luminosa, con lo cual, se
optimiza la fotosntesis; adems de aportar CO2 para el crecimiento celular (Alveal
et.al., 1995).

La agitacin tambin impide la sedimentacin y favorece la produccin para que las

algas no se encuentren siempre en la superficie y, as, eviten la fotoinhibicin,
aprovechndose del efecto optimizador de la radiacin intermitente (Alvares et.al.,
1989). Estos efectos benefician el crecimiento y productividad del cultivo, sin
embargo, el verdadero rol de la agitacin en el aumento de la produccin algal
todava debe ser evaluado.

Por otro lado, se han observado efectos positivos provocados por una intensa
agitacin solo, en cultivos algales que se desarrollan en estanques agitados por
ruedas de paletas lo que favorece una elevada productividad. En biorreactores
cerrados, con utilizacin de bombas, el efecto positivo puede ser enmascarado
debido al dao mecnico que sufren las paredes de las clulas. En biorreactores de
columnas de burbujeo, la provisin de aire sirve para el doble propsito de proveer
turbulencia y remocin del oxgeno. As, es ms difcil evaluar si la influencia
sobre la productividad se debe al grado de turbulencia alcanzado o proviene del
bajo contenido de oxgeno disuelto en el medio. (Eliach et.al., 2004)

9
1.3.4.- Oxgeno disuelto y pH

El oxgeno producido por las algas durante la fotosntesis puede alcanzar una
concentracin tan elevada que inhiba esta, accin conocida como efecto Warburg
(Alvares et.al., 1989), de manera tal, que la produccin del cultivo disminuya y, en
condiciones extremas, puedan incluso causar la muerte de las clulas por dao
oxidativo. En cultivos algales, colocados en exteriores, mantenidos en reactores
planos inclinados, se pueden alcanzar concentraciones de liberacin de O2 de hasta
9,5 mg.L-1 durante las horas de mayor energa radiante, lo que representa 30% ms
que la concentracin de saturacin de O2 normal, (Conteras et.al., 2003).

Otro efecto desfavorable para los cultivos de algas planctnicas es el exceso de luz
y oxgeno sobre ellos, efecto denominado fotooxidacin. Bajo este contexto, el
oxgeno se convierte en un elemento txico para los organismos, quienes se
protegen de distintas maneras. Una de estas protecciones es mediante la accin de
los carotenoides, la enzima dismutasa y otras molculas que se combinan con el
oxgeno en exceso, solo cuando la intensidad lumnica es elevada.

El pH es otro aspecto delicado del cultivo masivo porque la ingestin del carbono
inorgnico por las algas aumenta el pH del medio y desplaza el equilibrio hacia los
carbonatos. Las algas no usan los carbonatos, con lo cual pueden encontrarse
limitadas en su crecimiento por el carbono, (Alvares et.al., 1989).

1.3.5.- Carbono

Las principales fuentes de carbono inorgnico para el cultivo masivo de algas son el
dixido de carbono libre y el bicarbonato. Energticamente, para las algas resulta
ms directo el primero, puesto que ste penetra por difusin en la clula, mientras
que el segundo lo hace por transporte activo, en consecuencia concentraciones
adecuadas de CO2, permiten el incremento de la produccin microalgal
optimizando el proceso (Alvares et.al., 1989).

Por otro lado, los niveles masivos de produccin requieren un aporte de carbn
inorgnico soluble para lograr la estabilizacin del pH, el cual contribuye tambin
ha obtener un rendimiento mximo de los cultivos y debe dosificarse
intermitentemente en estaciones de suministro de CO2 distribuidas a intervalos
equidistantes a lo largo del tiempo. La adicin de bixido de carbono gaseoso
aumenta el carbono inorgnico total disuelto y disminuye el pH, obtenindose as,
una capacidad amortiguadora eficiente y tasas mayores de crecimiento microalgal.
Para una reproduccin celular de 0.8 divisiones por da, se recomienda usualmente
concentraciones de 2,4 mM de carbono inorgnico total disuelto. (Alveal et.al.,
1995).

10
1.4.- Importancia del cultivo microalgal:

La importancia de los cultivos microalgales, desde sus inicios estuvo orientada al

campo alimenticio, por ser base de la cadena trfica. Sin embargo, actualmente,
debido no solo a la acumulacin de sustancias nutritivas, sino a otras que generan
productos con fines diversos para el campo farmacutico, cosmtico, industrial y
recientemente energtico son consideradas una gran alternativa de desarrollo en el
campo de la biotecnologa microalgal.

Por otro lado; cabe resaltar la importancia que se da al cultivo de microalgas como
acumuladores de compuestos bioactivos, entre ellos los lpidos que, en la mayora
de estos microorganismos el contenido sobre pasa el 20%. Siendo stos
qumicamente similares al de vegetales comunes, por lo cual se les considera fuente
potencial de biodisel, (Sheng-Yi C. et.al., 2008; Chisti Y., 2007).

Dentro de las ventajas que nos proporciona el cultivo de microalgas relacionado al

campo energtico, es el corto tiempo de produccin de la biomasa, el espacio
reducido en la cual sta se obtiene y el elevado contenido lipdico que se extrae
para ser transformado a combustible, lo cual representar todo un proceso no
contaminante y no interfiere con los lpidos relacionados al sector nutricional.

Dentro del campo acucola, especies del gnero Nannochloropsis, representan

microorganismos de inters cuando los cultivos son adaptados a situaciones de
estrs, por factores fsico-qumicos del ambiente, lo que ocasiona la acumulacin de
un alto contenido lipdico.

Bajo este escenario, la cepa IMP-LBA-009, correspondiente a Nannochloropsis

spp., fue considerada en esta investigacin, debido a su amplio rango de tolerancia
a la luz y a la temperatura, lo que repercuta en una elevada tasa de reproduccin,
condiciones que, segn bibliografa, a nivel de cultivo masivo favorecen la
acumulacin de compuestos lipdicos. Estas condiciones afianzaron el inters por el
desarrollo de cultivos en biorreactores al interior de un invernadero.

11
 CAPTULO II

MATERIAL Y MTODOS

2.1.- LUGAR Y FECHA DE EJECUCIN

El presente trabajo de investigacin se realiz en el Invernadero del Laboratorio de

Biotecnologa Acutica, de la Direccin de Investigaciones en Acuicultura, Gestin
Costera y Aguas Continentales del IMARPE sede central Callao-Lima, por un
periodo de 6 meses, bajo el marco del proyecto IMARPE-EEP-FINCyT
DETEMINACIN DE LA BIOMASA MICROALGAL POTENCIALMENTE
ACUMULADORA DE LPIDOS PARA LA OBTENCION DE COMBUSTIBLE,
contrato N025-FINCyT-PIBAP-2007.

2.2.- MUESTRA DE ESTUDIO

La muestra biolgica empleada en este trabajo fue la cepa IMP-LBA-009

correspondiente a la microalga Nannochloropsis spp. (Fig. 1) proporcionada por el
Banco de Germoplasma de Organismos Acuticos (BG) (Fig. 2A) y cuyo inculo se
cultiv en el Laboratorio de Cultivo de Microalgas (LCM) (Fig. 2B), el mismo que
se traslad al Invernadero (Fig. 2C) para su cultivo en biorreactores y concentrado en
la Sala de Procesos (Fig. 2D); todas pertenecientes al rea de Biotecnologa Acutica
de la Direccin de Investigaciones en Acuicultura, Gestin Costera y Aguas
Continentales del Instituto del Mar del Per.

Fig. 1: Cepa IMP-LBA-009, Nannocloropsis spp. x 100x

12
 Fig. 2: reas de desarrollo de trabajo de investigacin

Los cultivos iniciales, en el presente caso, considerados como inculos para los
biorreactores ingresaron en concentraciones no menores a 0.12 g.L-1. Se aplic
tcnicas de cultivo semicontnuo en biorreactores verticales que contienen 20 bolsas
plsticas de 30 L., de capacidad cada una, distribuidas en 5 filas y cuatro columnas;
mantenidas en un invernadero con aireacin constante, inyeccin de CO2 durante 7
min., dos veces al da con un flujo de 0.2 g.L-1, adems de la adicin de nutriente
orgnico (Bayfoland) durante el periodo de evaluacin.

2.3.- DESCRIPCION Y CLASIFICACION TAXONOMICA DE LA ESPECIE:

2.3.1.- Clasificacin taxonmica: Basada en Catalogue of Life: 2011 Annual

Checklist

Reino: Chromista
Philum: Ochrophyta
Clase: Eustigmatophyceae
Orden: Eustigmatales
Familia: Monodopsidaceae
Gnero: Nannochloropsis (Hibberd, 1981)
Especie: Nannochloropsis spp

Eustigmatophyceae, es un pequeo grupo de microalgas del phyla Ochrophyta que

incluye especies marinas, de agua dulce y de suelo. Todas son unicelulares, con

13
 clulas cocoides y membranas celulares de polisacridos. Presentan uno o ms
cloroplastos de color verde- amarillo que contiene clorofila a y los pigmentos
accesorios violaxantina y B-caroteno, (Van den Hoek et.al 1995).

El gnero Nannochloropsis contiene especies marinas picofitoplanctonicas, cuyas

dimensiones oscilan entre 2 a 4 um. Por lo general, comprende aproximadamente 6
especies. La clasificacin taxonmica actual fue calificada por Hibberd (1981). Las
especies mayormente conocidas se encuentran en el medio ambiente marino, pero
existen tambin especies de agua dulce y salobre. Todas ellas son pequeas,
inmviles esfricas que no expresan ninguna diferencia en caractersticas
morfolgicas aparentes, pueden ser distinguidas microscpicamente con objetivos
sobre los 1000X de resolucin o mediante microscopa de alta resolucin como la
microscopa electrnica.

La caracterizacin se realiza principalmente por el gen rbcL y anlisis de la

secuencia 18S ADNr. Difieren de otras microalgas ya que carecen de clorofila b y
c. Nannochloropsis es capaz de crear una alta concentracin de una amplia gama de
pigmentos como la astaxantina, zeaxantina y cantaxantina. Las algas tienen una
ultraestructura muy simple y reducida. Tienen un dimetro de unos 2 micrmetros
en promedio.

2.3.2.- Caractersticas morfolgicas de la cepa proveniente de Virrila:

Nannochloropsis spp., presenta clulas unicelulares con flotacin libre, inmvil y

desprovista de flagelo, con una pared celular lisa. Durante el cultivo por ms de 60
das, como en el caso de placas de agar, el color tiende al verde amarillo. La
reproduccin se da por fisin binaria.

2.3.3.- Caractersticas bioqumicas y composicin de pigmentos

Nannochloropsis spp., presenta clorofila a, y el pigmento accesorio principal es la

violaxantina. La prueba con lugol realizada descart la presencia de almidn.
.
2.3.4.- Condiciones de cultivo

Factores fsico qumicos del mantenimiento de la cepa:

Durante el mantenimiento de la cepa en el Banco de Germoplasma, y para

asegurar la viabilidad de las clulas, el cultivo se mantiene a diferentes niveles:
Placas en agar, tubos de 10 ml y matraces de 250 ml. Las que se mantienen bajo
condiciones ambientales de temperaturas de 18 1 C, con intensidades
lumnicas de 2,500 lux.m-2.s-1; 455% de humedad, 8-8.3 de pH y 35 ppm de
salinidad.

14
2.4.- Mtodos

Parte del trabajo consisti en elaborar las mangas de los biorreactores sostenidos
sobre estructura vertical de fierro.

2.4.1.- Realizacin del cultivo en biorreactores

2.4.1.1- Sellado de bolsas: Se cort las mangas con un tamao de 1.8 m de largo,
sellando los extremos inferior y superior de las mismas, las que
posteriormente fueron colocadas en cada uno de las estructuras de los
biorreactores.

2.4.1.2- Siembra: El inculo fue proporcionado por el Laboratorio de Cultivo de

Microalgas (LCM) (Fig. 3A) con un volumen de 1000 L semanales,
transportados en tanques de fibra de vidrio (Fig. 3B), los mismos que fueron
sembrados en los biorreactores con una concentracin del 50% v/v inoculo y
agua de mar filtrada hasta 1 y esterilizada con radiacin UV, (Fig. 3C).
Se procedi a colocar las piedras difusoras en cada una de las mangas para la
aireacin de los cultivos, la misma que fue suministrada mediante una bomba
de captacin de aire del medio ambiente (Blower) de alta presin de 3HP
(Fig. 3D).
Por ltimo, a la manga con agua y aireacin se le adiciona 3 ml de nutriente
foliar (medio orgnico) (Fig. 3E).

La inyeccin de CO2 se realiz dos veces al da segn los tiempos

programados, 7 min en una proporcin de 0.2 g.L-1, (Fig. 3D).

15
 Fig. 3: Flujo de siembra en cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero.

2.4.1.3- Cosecha: Esta se realiz en determinados periodos de tiempo, para el

presente trabajo, cada 48 horas bajo un sistema semi-continuo en una
proporcin de 50% del volumen total del biorreactor, al volumen restante (el
que permanece en la manga) se le mezcla con agua de mar filtrada y
esterilizada para la siguiente siembra, (Fig. 4).

16
 Fig. 4: Flujo de cosecha en cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

2.4.2.- Conteo celular: (Aguilar C., 1995)

La densidad celular se determin mediante el uso de Hematocitometro o cmara de

conteo celular de Neubauer que es un dispositivo, mediante el cual se puede
determinar el nmero de partculas suspendidas en un volumen conocido y de esta
manera saber el nmero en el recipiente original, (Siordia G., 2006).

La cmara de Neubauer es un portaobjetos de conteo para su uso en el microscopio

ptico, con una depresin central en el fondo de la laminilla, en la que se ha
marcado una retcula micromtrica. Es un cuadrado de 3 mm x 3 mm, con una
separacin entre dos lneas consecutivas de 0.25 mm. As pues, el rea sombreada
corresponde a 1 milmetro cuadrado. La depresin central del cubreobjetos est
hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que, cuando se coloca el
cubreobjetos, este dista de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen
comprendido entre la laminilla y el area reticulada es de 0.1milimetro cbico.

El proceso de conteo celular fue el siguiente:

Tomar 1 ml de la muestra del cultivo con la ayuda de una pipeta pasteur y

colocarla en un vial.
Fijar la muestra con lugol concentrado (1 gota) y homogenizarla
Limpiar la cmara de conteo
Colocar una gota de la muestra en la cmara de conteo, tratando de que sta se
extienda uniformemente en toda el rea.
Observar la muestra a travs del microscopio para la realizacin del conteo por
triplicado, dicho conteo se realiza en los cuadrados del centro (Fig.5), luego del
cual se obtiene la media aritmtica de slo 5 cuadrantes y se lleva a la siguiente
frmula:

17
 Fig.5 : Cmara de Neubauer

No clulas por ml = No de clulas de 5 cuadrantes centrales

------------------------------------------------ X 250000
5

Los datos fueron procesados en hojas de clculo Excel.

2.4.3.- Toma de parmetros fsicos en el invernadero:

2.4.3.1.- Temperatura: Se realiz la toma diaria y horaria (8:00 am. 12:00 m. y

16:00 pm) de la temperatura ambiental, con el uso de dos termmetros
ambientales de mxima y mnima ubicados de manera estratgica; uno al
fondo del invernadero y el otro en la parte media (Fig.6). Los datos fueron
procesados en hoja de clculo Excel.

Fig.6: Ubicacin de puntos de toma datos de temperatura de

la sala del invernadero.

18
 2.4.3.2.- Flujo lumnico: La intensidad lumnica fue medida mediante el uso de un
luxmetro marca Control Company; modelo: 3251; con un rango de 500
000 Lux y 5.00 Food Candel Control C tomando los datos en forma
diaria y horaria (8:00 am. 12:00 m. y 16:00 pm), y en tres puntos diferentes
del invernadero. (Fig.7). Los datos fueron procesados en hoja de clculo
Excel

Fig.7: Ubicacin de puntos de toma datos de

intensidad lumnica

2.4.4.- Toma de parmetros fisicoqumicos al cultivo:

Los datos de temperatura y pH fueron tomados diariamente y en forma horaria

(8:00 am, 12:00 m y 16:00 pm) mediante el uso de un multiparametro WFW multi
350i/SET, previa calibracin de los sensores y su posterior colocacin dentro de
cada una de las mangas seleccionadas. Los datos fueron registrados en un cuaderno.
Una vez concluido la toma de datos se procedi a limpiar los electrodos con agua
destilada y secadas muy suavemente con un pao y guardados en cada uno de sus
protectores.

La inyeccin de CO2 de realiz en forma diaria durante 7 minutos y dos veces al

da (8:00 y 14.00 Hrs.)

2.4.5.- Obtencin de biomasa algal

2.4.5.1.- Obtencin de la biomasa hmeda:

Una vez que los cultivos han llegado al tiempo de cosecha, estos fueron
colocados en tanques de fibra de vidrio de 300 litros (Fig. 8A), para ser
dirigidos hacia la centrifuga de limpieza manual Wetsfalia separator modelo
MTC3 (Fig. 8B) a travs de una bomba de succin. El cultivo pasa a travs
de la centrifuga que tiene como principio la separacin de la parte slida de

19
 la lquida, la primera es concentrada en el colector y el agua es expulsada a
travs del conducto de desage (Fig.8C).
La biomasa hmeda se recupera del colector con ayuda de una esptula de
plstico y es colocada en bandejas de acero inoxidable expandindola de tal
manera que se obtenga una capa fina y se lleve al proceso de liofilizacin
(Fig. 8D).

Extendida la biomasa en la bandeja se toma el peso en una balanza analtica,

se cubre con un plstico de polietileno para posteriormente llevar a
congelamiento a -14 C por 24 horas.

2.4.5.2.- Obtencin de biomasa seca:

La obtencin de biomasa seca se realiz con la ayuda del liofilizador marca

LABCONCO, modelo STOPPERING TRAY DRYER/FREEZONE (Fig.
8E), el cual, mediante un proceso de sublimacin de la parte lquida tiene
como producto final biomasa seca. Luego de haber previamente congelado
la biomasa hmeda fue colocada en cada compartimiento del equipo a una
temperatura de -15 C por 5 horas, luego se subi la temperatura a -5 C por
15 horas y posteriormente se llev la temperatura a 10 C por 5 horas,
transcurrido dicho tiempo se extrajo la biomasa seca con ayuda de una
esptula y se homogeniz con la ayuda de un mortero, se pes en una
balanza analtica, para posteriormente colocarla en una bolsa plstica
hermticamente cerrada y puesta en un desecador, (Fig. 8F).

Fig. 8: Obtencin de biomasa hmeda y seca.

20
2.4.6.- Anlisis de los datos

2.4.6.1.- Parmetros fsico- qumicos

Se evalu con los datos obtenidos de parmetros fsico-qumicos (T, pH,

Intensidad lumnica), los mismos que fueron procesados en hojas de clculo
Excel.

2.4.6.2- Relacin productividad:

Se tom en cuenta los parmetros comnmente utilizados para evaluar la

productividad en los fotobioreactores. El primero es la concentracin
celular, productividad volumtrica (PV), que es la productividad por unidad
de volumen del reactor. Productividad por lnea de cultivo y productividad
por rea.

2.4.6.3.- Anlisis estadsticos:

Se utilizaron pruebas estadsticas paramtricas, para ello previamente se

evalu la normalidad de los datos mediante la prueba de Kolmogorov -
Smirnov, correlacin de Pearson y se consider un nivel de significancia de
0,05; se utiliz los programas estadsticos MINITAB 15 y EXCEL 2007.

Adems se emple el Anlisis de varianza y test de diferencia significativa

(Test de Tuckey) para observar la variacin entre meses, utilizando el
programa estadstico SYSTAT 12. Se analizaron los datos obtenidos
mensualmente durante los meses julio a diciembre 2009.

21
 CAPTULO III

RESULTADOS

3.1.- Evaluacin de los parmetros fsico-qumicos ambientales y de cultivo durante el

periodo de experimentacin
De acuerdo a los resultados obtenidos en la presente investigacin el impacto
lumino-trmico, (p=0.02) al interior del invernadero, reflej un incremento sobre la
concentracin celular del cultivo en biorreactores, en consecuencia estas condiciones
contribuyeron a la produccin de biomasa hmeda y seca, la misma que presenta un
incremento progresivo entre los meses de agosto a noviembre. Por el contrario, el pH
no sigue un patrn similar al de los otros factores (p>0.05).

22
 FACTORES FSICO-QUMICOS
CON (N cel.ml-1x
T AMB (C) LUZ (Lux.m-2.s-1) pH T CUL (C) BH (g.L-1) BS (g.L-1)
MESES 107)
PROM DE PROM DE PROM DE PROM DE PROM DE PROM DE PROM DE

JUL 25.43 1.79 12788.10 8611.58 8.46 0.01 22.50 0.66 1.34 0.55 0.20 0.04 0.06 0.01
AGO 25.43 2.68 14808.47 9740.18 8.35 0.00 22.29 1.23 1.32 0.15 0.26 0.05 0.08 0.02
SET 28.90 2.55 15612.70 7073.23 8.33 0.29 23.70 0.55 1.39 0.20 0.35 0.04 0.10 0.01
OCT 30.80 2.61 22520.56 12934.32 8.50 0.07 25.16 0.90 1.64 0.51 0.44 0.11 0.13 0.03
NOV 32.54 3.05 21487.30 8347.56 8.22 0.30 26.24 1.53 2.36 1.45 0.52 0.33 0.13 0.07
DIC 33.92 2.61 19878.89 7745.71 8.21 0.02 25.24 0.25 2.27 0.66 0.34 0.09 0.08 0.01
Tabla N1: Comparacin de factores fsico-qumicos al interior del invernadero y de los biorreactores, durante el cultivo masivo de microalgas

23
3.1.1.-Influencia Trmica Ambiental sobre el Desarrollo de los Cultivos

La temperatura ambiental durante el semestre de evaluacin, tuvo tres periodos bien

marcados; el primero donde las temperaturas promedio alcanzan los 25C1.75; la
segunda etapa con temperaturas variables que se encuentran entre los 25 y 30C y
la tercera donde las temperaturas estn por encima de los 30C (Fig.9).

40.00
b b
35.00 ab
T AMBIENTE (C)

ab
30.00 a
a
25.00

20.00

15.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC
PERIODO EXPERIMENTO
Fig. 9: Variacin de la temperatura ambiental en cultivo masivo de biorreactores al
interior del invernadero

La temperatura ambiental promedio durante el periodo de trabajo (julio

diciembre) fue de 302.5C, con un promedio mnimo de 252.5C y uno mximo
de 362.6C, Figs. 10 y 11 respectivamente.

24
TO MINIMA AMBIENTAL (OC) 40.00

35.00

30.00
PROM
25.00 MAX
MIN
20.00

15.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.10: Impacto de temperatura mnima ambiental en cultivo masivo de biorreactores al
interior del invernadero

45.00
TO MAXIMA AMBIENTAL (OC)

40.00

35.00
PROM
30.00 MAX
MIN
25.00

20.00

15.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.11: Impacto de temperatura mxima ambiental en cultivo masivo de biorreactores al
interior del invernadero.

25
 Las temperaturas promedio mnimas y mximas, registradas al interior del
invernadero durante el periodo de evaluacin mostraron valores que oscilaron
entre 20 a 40C, respectivamente. Esta condicin, en el tiempo favoreci la
productividad de biomasa algal, alcanzando sus ms altos niveles entre
octubre a noviembre, con temperaturas mayores a 24C y menores a 39C.

3.1.2.-Impacto lumnico ambiental sobre el desarrollo de los cultivos:

Otro de los factores considerados para el desarrollo de esta investigacin fue la

intensidad lumnica, la misma que se registr tres veces al dia, dentro de la sala del
inverdadero, mostrando diferencias significativas (p0.000) a lo largo del periodo
de experimento observandose que durante el primer periodo la iluminacin no
sobrepasa los 16,000 lux, en el segundo periodo con iluminaciones que sobrepasan
los 20,000 lux para luego disminuir al final del periodo de evaluacin. (Fig.12)

24000 b
b
INT. LUMINICA (Lux.m-2.seg-1)

22000
ab
20000

18000
a
16000 a

14000 a

12000

10000
JUL AGO SET OCT NOV DIC
PERIODO EXPERIMENTO
Fig.12: Variacin de intensidad lumnica en cultivo masivo de biorreactores al
interior del invernadero

La intensidad lumnica promedio durante el periodo de trabajo (julio diciembre)

fue de 17,8009,000 lux.m-2.seg-1, con un promedio mnimo de 6,0832,200 lux.m-
2
.seg-1, y uno mximo de 39,0008,028.85 lux.m-2.seg-1, (Figs.13-15)

26
 70000.00

60000.00
INT. LUMINICA 8:00 am

50000.00
(Lux/m2/seg)

40000.00
PROM
30000.00
MAX
20000.00 MIN

10000.00

0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.13: Impacto de intensidad lumnica a las 8:00 am. en cultivo masivo de
biorreactores al interior del invernadero

90000.00
80000.00
70000.00
INT. LUMINICA 12:00 m

60000.00
(Lux/m2/seg)

50000.00
40000.00 PROM
MAX
30000.00
MIN
20000.00
10000.00
0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.14: Impacto de intensidad lumnica a las 12:00 m. en cultivo masivo de
biorreactores al interior del invernadero

Durante el periodo de investigacin, los datos de iluminacin natural mostraron que

las mayores intensidades lumnicas se registraron durante el medioda siendo los

27
 ms bajos durante la tarde. Es importante mencionar que la presente investigacin
se desarroll durante la estacin de invierno primavera, durante un periodo de ao
normal.

45000.00
40000.00
INT. LUMINICA 16:00 pm

35000.00
30000.00
(Lux/m2/seg)

25000.00
20000.00 PROM
MAX
15000.00
MIN
10000.00
5000.00
0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.15: Impacto de intensidad lumnica a las 16:00 pm. en cultivo masivo de
biorreactores al interior del invernadero

La intensidad lumnica promedio mnima y mxima, registrada durante el periodo

de evaluacin, mostr valores que oscilaron entre 2000 y 55,000 lux.m-2.seg-1,
respectivamente. Del mismo modo que para el factor trmico, la mayor
productividad de biomasa algal, se dio durante los meses de octubre a noviembre,
con iluminaciones mayores a 5000 y menores a 76,000 lux.m-2.seg-1.

3.1.3.-Impacto del pH sobre el desarrollo de los cultivos:

No existe una relacin significativa entre el pH y la concentracin celular (p>0.05).

El pH promedio registrado durante la investigacin fue de 8.340.12 observndose
que el promedio mximo fue de 9.9 0.7 y el mnimo de 7.20.8 (Fig.16)

28
 11.50

10.00

8.50
Ph

PROM
7.00 MAX
MIN

5.50

4.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.16: Impacto del pH en cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

Durante los meses de mayor productividad se registraron los valores ms elevados

de pH, el rango en este bimestre se registr entre 6.5 a 10.7 para mnimas y
mximas respectivamente.

3.1.4.-Impacto Trmico sobre el desarrollo de los cultivos:

La temperatura promedio registrada en los cultivos fue de 24.241.88 C,

alcanzando un promedio mximo de 28.551.7C y mnimo de 21.371.13C,
(Figs.17-19).

39.00
TO DE CULTIVO 8:00 am (OC)

36.00
33.00
30.00
27.00 PROM

24.00 MAX

MIN
21.00
18.00
15.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO DE EXPERIMENTO
Fig. 17: Impacto trmico a las 8:00 am. en cultivo masivo de biorreactores al interior del
invernadero

29
 TO CULTIVO 12:00 m (OC) 39.00
36.00
33.00
30.00
PROM
27.00
MAX
24.00
MIN
21.00
18.00
15.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO DE EXPERIMENTO
Fig.18: Impacto trmico a las 12:00 m. en cultivo masivo de biorreactores al interior del
invernadero

Durante el periodo de investigacin, los datos de temperatura de cultivo mostraron

que las mayores temperaturas (37C) se registraron durante la tarde y los ms bajos
(19C) durante la maana. Es importante mencionar que la diferencia de
temperatura entre el ambiente externo y el cultivo propiamente dicho fue de 6C.
Por otro lado los valores trmicos aumentaron hacia el final de la investigacin,
entre los meses de octubre y noviembre.

39.00
36.00
TO CULTIVO 16:00 pm (OC)

33.00
30.00
27.00
PROM
24.00 MAX

21.00 MIN

18.00
15.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO DE EXPERIMENTO

Fig.19: Impacto trmico a las 16:00 pm. en cultivo masivo de biorreactores al interior del
invernadero.

30
 La temperatura promedio mnima y mxima, registrada durante el periodo de
evaluacin, mostr valores que oscilaron entre 20 y 31 C, respectivamente. La
mayor productividad de biomasa algal, se dio durante los meses de octubre a
noviembre, con temperaturas mayores a 22 y menores a 31 C.

3.2.-Productividad:

La productividad est determinada por la concentracion celular y biomasa (hmeda

o seca) obtenida por unidad de volumen. De esta manera se determin la
concentracin celular, productividad por litro, por biorreactor, por lnea de cultivo y
por rea de cultivo; obteniendo los siguiente resultados.

3.2.1.- Concentracin celular:

Con respecto a la concentracin celular observamos que durante el primer periodo

la concentracin celular se mantuvo con un promedio de 13500,000 cel.ml-1, el
segundo periodo el promedio fue de 17600,000 cel.ml-1 , y durante el ltimo
periodo alcanzamos los valores ms altos cuyo promedio fue de 26300,000 cel.ml-
1
, (Fig.20).

3.50
CON. CELULAR (N cel/mlv x10 7 )

b
3.00

b
2.50

2.00 ab

1.50 a a a

1.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO

Fig.20: Variacin de la concentracin celular en cultivo masivo de biorreactores al

interior del invernadero

31
 El promedio de la concentracin celular alcanzada fue de 17200,000 5900,00
cel.ml-1 con un mximo de 28600,00 12000,000 cel.ml-1 (Fig.21).

6.00
CON. CELULAR (N cel/ml x 107)

5.00

4.00

3.00 PROM
MAX
2.00 MIN

1.00

0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC
PERIODO EXPERIMENTO
Fig.21: Concentracin celular de cultivo, en biorreactores al interior del invernadero

3.2.2- Productividad por Litro:

El promedio de la productividad en funcin a la biomasa hmeda (BH) durante la

investigacin fue de 0.350.11 g.L-1, habiendo alcanzando un promedio mximo de
0.540.3 g.L-1y un mnimo de 0.230.1 g.L-1. (Fig.22).

En relacin a la biomasa seca, la productividad promedio fue de 0.10.03 g.L-1,

alcanzando un promedio mximo de 0.130.04 g.L-1 y un mnimo de 0.080.02
g.L-1. (Fig.23).

La mayor productividad de BH observada fue durante el mes de noviembre con un

valor de 1.06 g.L-1, esto equivale a 0.22 g.L-1 de BS, con una concentracin celular
promedio de 23600,000 15000,000 cel.ml-1 (2.4x107 cel.ml-1).

Relacionando ambos resultados, se determin que la razn BH/BS fue del 28 %

durante todo el periodo de la investigacin.

32
 1.20

1.00

0.80
BH (g/L)

0.60
PROM

0.40 MAX
MIN

0.20

0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.22: Productividad en funcin a la biomasa hmeda por litro de cultivo, en
biorreactores al interior del invernadero

0.25

0.20

0.15
BS (g/L)

PROM
0.10 MAX
MIN
0.05

0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.23: Productividad en funcin a la biomasa seca por litro de cultivo, en biorreactores al
interior del invernadero

33
 3.2.3-Productividad por Biorreactor (PB):

La sala del invernadero cuenta con 26 biorreactores de 600 L cada uno. El

promedio de la productividad en los biorreactores en funcin a la BH obtenida fue
de 211.4165.84 g/B, con promedios mximos y mnimos de 324.44 173 y
138.8143.08 g/B., respectivamente, (Fig.24).

En relacin a la BS el valor promedio obtenido fue de 57.3815.34 g/B, con

promedios mximos y mnimos de 80.8429.4 y 37.78 9.84 g/B., respectivamente,
(Fig.25).

700.00

600.00
BH X BIORREACTOR (g)

500.00

400.00

300.00 PROM
MAX
200.00 MIN

100.00

0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.24: Productividad por biorreactor en funcin a la biomasa hmeda obtenida del
cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

34
 140.00

120.00
BS X BIORREACTOR (g)

100.00

80.00
PROM
60.00
MAX
40.00 MIN

20.00

0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.25: Productividad por biorreactor en funcin a la biomasa seca obtenida del cultivo
masivo de biorreactores al interior del invernadero

De acuerdo a los resultados obtenidos, por cada 3,900L de cultivo microalgal se

obtena 633 gr de BH y 130 gr de BS. En trminos comparativos, a nivel de
biomasa por biorreactor, estos resultados, permiten obtener una razn BS/BH del
25%, durante el mes de mayor productividad.

3.2.4- Productividad por lnea de cultivo (PLC):

Dentro de la sala del invernadero se cont con 4 lneas de cultivo (LC) dos de ellas
de 7 biorreactores y dos de 6. De esta manera el volumen de cosecha por lnea de
cultivo estuvo entre los 2,100 y 1,800 L. El promedio de productividad de BH
obtenida fue 1,374.16427.99 g/LC., alcanzando un promedio mximo de
2,108.871125.92 g/LC y un mnimo de 902.26208.05 g/LC (Fig.26).

La BS promedio obtenida fue de 37399.7, con promedios mximos y mnimos de

525.45191.11 y 245.5464 g/LC respectivamente, (Fig.27).

35
 4500.00
4000.00
3500.00
3000.00
BH X LC (g)

2500.00
2000.00
PROM
1500.00 MAX
1000.00 MIN
500.00
0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.26: Productividad por lnea de cultivo en funcin a la biomasa hmeda obtenida del
cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

900.00
800.00
700.00
600.00
BS X LC (g)

500.00
PROM
400.00
MAX
300.00
MIN
200.00
100.00
0.00
JUL AGO SET OCT NOV DIC
PERIODO EXPERIMENTO
Fig.27: Productividad por lnea de cultivo en funcin a la biomasa seca obtenida del
cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

36
 3.2.5-Productividad por rea (PA):

El rea del invernadero cuenta con un espacio de 120 m2, dentro de la cual la
productividad de BH alcanz un promedio de 45.8114.27g.m-2. Con promedios
mximos y mnimos de 70.3034.26 y 30,088.52 g.m-2., respectivamente,
(Fig.28).

La conversin a BS de lo antes descrito representa en promedio 12.433.32 g.m-2,

alcanzando promedios mximos y mnimos de 17.515.82 y 8.181.95 g.m-2
respectivamente, (Fig.29). Esto representa el 28% de conversin de BH a BS.

160,00
140,00
120,00
BH X AREA (g)

100,00
80,00 PROM

60,00 MAX
MIN
40,00
20,00
0,00
JUL AGO SET OCT NOV DIC
PERIODO EXPERIMENTO
Fig.28: Productividad por rea de cultivo en funcin a la biomasa hmeda obtenida del
cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

37
 30,00

25,00
BS X AREA (g)

20,00

15,00
PROM
MAX
10,00
MIN

5,00

0,00
JUL AGO SET OCT NOV DIC

PERIODO EXPERIMENTO
Fig.29: Productividad por rea de cultivo en funcin a la biomasa seca obtenida del
cultivo masivo de biorreactores al interior del invernadero

38
ENSAMBLE Y ACONDICIONAMIENTO DE BIORREACTORES EN EL INVERNADERO

Como parte del desarrollo de la presente investigacin, se dise y elabor la estructura

de 26 biorreactores.
Cada biorreactor estuvo conformado por una estructura metlica de forma rectangular
de 1.8m de alto x1.2m de ancho y 1m de fondo, en cuya parte superior se distribuyen 5
soportes paralelos de donde cuelgan 4 bolsas por soporte, haciendo un total de 20 bolsas
por biorreactor.
Estas bolsas fueron transparentes de 25 cm de ancho por 2m de longitud, con un espesor
de 10 micras, las mismas que fueron selladas en los extremos, con una abertura en la
parte superior, por donde ingresaban los inculos, agua, nutrientes, CO2 y aire, as
como, la realizacin de la toma de parmetros fsico-qumicos, (Fig. 30).
El acondicionamiento de cada biorreactor estuvo enfocada a la prueba de resistencia de
la bolsa frente a la presin de la columna de agua, la presin de los gases ingresantes
(aire del medio ambiente, CO2), as como, la velocidad del caudal de ingreso del agua
de mar.

Fig.30: Ensamblaje y acondicionamiento de biorreactores

El volumen por biorreactor fue de 600L, distribuido en 30L por bolsa. La prueba de
resistividad de las mangas se midi por el tiempo de soporte de lquido frente a las
condiciones medioambientales al interior del invernadero (luz y temperatura), por un
periodo de 24 horas.

39
La eficiencia de los biorreactores estuvo determinada por los tiempos de siembra y
cosecha, as como, la capacidad de carga de los mismos. Los resultados determinaron
que se ocupaba 18.400.08 minutos en la siembra y 22.470.12 minutos en la cosecha,
con una capacidad de carga promedio de 0.082 g.L-1 (+/- 0.54) por un periodo de 5 das
de cultivo.

40
 DISCUSIONES

Un fotobiorreactor es un sistema que nos permite realizar el cultivo de organismos

auttrofos, los mismos que realizan una conversin biolgica y no tiene contacto directo
con el medio ambiente o es mnimo.

Dentro de los criterios ms importantes para el diseo de un biorreactor, ciertos autores

(Barra et.al., 2010), consideran que son; el radio, superficie, volumen, la orientacin e
inclinacin de los mismos, la mezcla, la descarga de gases, los sistemas de limpieza y
de regulacin de temperatura, la transparencia y durabilidad del material de
construccin. Mientras que para otros (Contreras et.al., 2003), solo es importante la
energa radiante durante la fotosntesis, donde la tasa de fotosntesis celular depende de
la energa luminosa que reciben las clulas. La presente investigacin considera algunos
aspectos descritos por los autores, pero adems, se consider la orientacin de las
bolsas, la descarga de gases, la transparencia y durabilidad del material de construccin,
teniendo en cuenta; la iluminacin y el efecto trmico al interior del invernadero.

La temperatura y la luz son factores que inciden directamente sobre el crecimiento

masivo de microalgas y, por lo tanto, difcil de independizar uno de otro (lvarez et.al.,
1989). Otro agente importante a considerar durante el cultivo es la energa radiante
necesaria para la fotosntesis (Contreras et.al., 2003), la misma que puede llegar a
niveles que causan inhibicin de los fotosistemas celulares, deteriorando el cultivo y
causando, incluso, un dao irreversible; Esta fotoinhibicin est en relacin al tipo de
especie que se expone frente a la radiacin fotosintticamente activa, as como de su
estado fisiolgico. De acuerdo a los estudios realizados por Contreras y colaboradores
(2003), la radiacin promedio que pueden soportar ciertas microalgas en cultivo esta en
torno a los l00 mE.m-1.seg-1.

Durante el desarrollo del presente trabajo de investigacin, la mayor productividad de

biomasa algal con la cepa IMP-LBA-009 (Nannocholopsis spp), se dio entre los meses
de octubre a noviembre, con rangos de iluminaciones > 5000 y < 76,000 lux.m-2.seg-1.,
y temperaturas ambientales > 24C y < 39C. Trabajos similares registr Hernndez y
colaboradores (1996), donde en cultivos de Nannochloropsis gardinata y Tetraselmis
tetrathele, las intensidades lumnicas registradas fueron de 2 000 a 12 000 lux.m-2.seg-1
y las temperaturas entre 25 y 40 C.

Por otro lado, en periodos de tiempos ms largos (julio a diciembre), la intensidad

lumnica promedio registrada durante el cultivo de Nannocloropsis spp., fue de 17,
849.339075.43 lux.m-2.seg-1 con un mnimo de 2000 lux.m-2.seg-1 y un mximo de
55,000 lux.m-2.seg-1, y la temperatura promedio vari entre 20 a 40C. Mientras que,
cepas del gnero Spirulina reportan que las mayores producciones se dan en intervalos
ms pequeos, entre 30 000 a 50 000 lux.m-2.seg-1 y entre 35-40 C de temperatura
(Eliach et.al., 2004).

El pH es otro factor delicado del cultivo masivo porque la ingestin del carbono
inorgnico, por las algas, aumenta el pH del medio y desplaza el equilibrio hacia los
carbonatos (Alvarez et.al., 1989); Adems, la solubilidad del dixido de carbono y de

41
los minerales en los cultivos influye directa o indirectamente en su metabolismo
(Moronta et.al., 2006).

La mayor productividad de biomasa algal alcanzada durante la presente investigacin,

se registr cuando los valores de pH fueron mximos (10.7). Productividades elevadas
en cultivos con Thalassiosira pseudonana presentaron una variacin de pH entre 8.87
0.36 a 8.89 0.34 (con fotoperiodo) y de 8.85 0.29 a 8.88 0.35 (con luz continua).

La temperatura de cultivo ptima para la mayora de la microalgas est entre los 20 y 30

C (Cristi Y., 2008), temperaturas fuera de este rango podra matar o daar a las clulas.
Estudios registrados con Thalassiosira pseudonana, lo hace a 22 C (Lpez et.al., 2009)
y Artrospira platensis entre 25.1 y 26.24 C (Barra et.al 2010). Sin embargo, cultivos
con Nannochloropsis gaditana crece excelentemente a temperaturas entre 30.2 y 34.8
C (Mantecn et.al 2007). Este comportamiento y registro de temperatura de cultivo
esta dentro del rango de los cultivos con la cepa Nannochloropsis spp., la misma que
registr temperaturas ptimas entre 22 a 36C, sin que estas se daen o mueran.

Por otro lado, al interior de los cultivos, la temperatura no solo afecta las reacciones
celulares, sino tambin los requerimientos nutricionales y la composicin de la biomasa,
as como, la solubilidad de los gases en el agua (Moronta et.al., 2006). En la presente
investigacin los valores de temperatura registrados en el cultivo variaron en un rango
de 20 a 31 C, sin alterar la morfologa celular, la calidad de los nutrientes, ni el aspecto
de la biomasa.

La produccin de biomasa microalgal se viene desarrollando desde los aos 40, bajo los
diseos de produccin: los sistemas abiertos o carrusel y los biorreactores, los mismos
que presentan ventajas y desventajas unos frente a los otros. Barra y colaboradores
(2010) consideran tres parmetros comnmente utilizados para evaluar la productividad
en los fotobioreactores. El primero es la productividad volumtrica (PV), que es la
productividad por unidad de volumen del reactor (expresada como g.L-1.d-1); la segunda
es la productividad por rea (PA), que es la productividad por unidad de suelo ocupado
por el reactor (expresada como g.m-2.d-1) y la tercera es la productividad del rea
iluminada (PSI), que es la productividad por unidad de rea de reactor iluminada
(expresada como g.m-2.d-1). En esta investigacin se consideraron solo dos: a)
Productividad por volumen del reactor y b) Productividad por rea, agregando a estas,
concentracin celular y la productividad por lnea de cultivo.

Los estudios de productividad volumtrica en Arthrospira platensis registran valores de

0.13 g.L-1 BS (Barra et.al., 2010) y 1.49 0.11 mg.L-1 (Rosales et.al. 2008). Con
especies como Chaetoceros calcitrans y Dunaliella tertiolecta la biomasa alcanz
valores de 0.46 g.L-1 para ambas y de 0.58 g.L-1 para Phaeodactylum tricornutum
(Fidalgo J., 1995). Con la cepa trabajada en esta investigacin se alcanz valores de
0.13 g.L-1 BS, en el periodo de productividad ptima.

En el caso de la productividad por rea de cultivo, en la presente investigacin, se

registr un promedio 5.971.6 g.m-2, mientras que Barra y colaboradores (2010)
registraron valores de 5.5 g.m-2.d-1 para el cultivo de Artrospira platensis. Cabe resaltar

42
que los resultados obtenidos en este experimento se mantuvieron durante 48 horas en
cultivo mientras que los anteriores fueron cultivos de hasta 30 das.

Una de las estrategias para evitar fotoinhibicin celular es mantener elevadas

densidades celulares sin que la velocidad de crecimiento disminuya (Contreras et.al.,
2003). Otras estrategias de aclimatacin son; a) cambiar la tasa de eficiencia
fotosinttica, b) la intensidad de la luz al inicio de la fotoinhibicin y c) la tasa de
respiracin en la oscuridad (Grobbelaar J., 2008).

43
 CONCLUSIONES

1. La influencia trmica y flujo lumnico de la sala del invernadero sobre la

produccin microalgal durante el cultivo fue directamente proporcional.

2. En los cultivos propiamente dichos los valores de pH promedio estuvieron entre 8 y

10.6; mientras que la temperatura promedio oscil entre los 22 y 30 C.

3. La productividad promedio en funcin a la biomasa hmeda obtenida fue: 211.41 g.

por biorreactor, 1374.16 g. por lnea de cultivo, 45.81 g.m-2, lo que expresados en
biomasa seca fue: 57.38 g. por biorreactor, 373 g. por lnea de cultivo y 12.43 g.m-
2
.

4. Se obtuvo la biomasa seca y hmeda con un promedio de 0.13 y 0.48 g.L-1

respectivamente con una razn del 28% de conversin.

44
 RECOMENDACIONES

Realizar cultivos en forma estacional para evaluar comportamiento celular frente

a parmetros fsico-qumicos como; pH, temperatura, oxgeno, salinidad,
iluminacin y CO2.

Cultivar diferentes cepas para observar las diferencias entre ellas durante la
etapa de cultivo.

Realizar la automatizacin del sistema de cultivo para as obtener mayores

productividades.

45
 BIBLIOGRAFA

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48
 ANEXOS

ANEXO 1: Medio f/2 de Guillard y Ryther 1962, Guillard 1975

Componentes Frmula (g.l-1 d H2O)

Nutrientes mayores (R1)

- Nitrato de sodio NaNO3 75

- Fosfato de sodio monobsico NaH2PO 4H2O 5

Metales trazas (R2)

- Cloruro frrico FeCl3 3.15

- Secuestrante Na2FeEDTA 4.36
- Sulfato cprico CuSO4.5H2O 9.8
- Sulfato de Zinc ZnSO4.7H2O 22
- Cloruro de cobalto CoCl2.6H2O 10
- Cloruro manganoso MnCl2.4H2O 180
- Molibdato de sodio Na2MoO4.2H2O 6.3

Vitaminas

- Biotina (vit. H) C10H16N2O3S 50ug

- Cianocobalamina (vit. B12) C63H88CoN14P 50ug
- Tiamina clorhdrica (vit. B1) C12H17ClN4OS 10mg

ANEXO 2: Composicin qumica de nutriente foliar Bayfolan

COMPOSICION QUIMICA DE BAYFOLAN

Elemento Concentracin Concentracin
Nombre qumico
qumico (%m/m) (%m/v)

Nitrgeno total N 8,9 11

Nitrato nitrgeno NO3 N (N) 4,0 4,9
Amonio nitrgeno NH4 N (N) 4,9 6,1
Fosfato soluble en agua P2O5 6,4 8
Potasio soluble en agua K2O 4.8 6
Boro soluble en agua como borato B
B 0.0082 0.01
0,0082 0,01
Cobre soluble en agua como quelato con
Cu 0,0066 0.008
EDTA
Hierro soluble en agua como quelato con
Fe 0.0154 0.019
EDTA
Manganeso soluble en agua como quelato
Mn 0.013 0.016
con EDTA
Molibdeno soluble en agua como
Mo 0,008 0.0009
molibdato
Zinc soluble en agua como quelato con
Zn 0.0049 0.006
EDTA
Azufre S 0,5 0,7 S 0.5 0.7
Cloro Cl 0,4 0,5 Cl 0.4 0.5

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