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    Solubilidad y Desnaturalizacion de Proteinas

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    Alejandrina Llaure
    Este documento presenta un protocolo de laboratorio para identificar la resistencia física y química de las proteínas mediante la observación de su solubilidad y desnaturalización con diferentes agentes. Se explica brevemente cómo la sal reduce la solubilidad de las proteínas y cómo métodos físicos y químicos como el calor, pH, ácidos y metales pesados pueden desnaturalizarlas. El procedimiento propone experimentos para desnaturalizar la albúmina con varios reactivos y observar si la leche se coagula con limón o ácido cl

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    Solubilidad y Desnaturalizacion de Proteinas

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    Alejandrina Llaure
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    Este documento presenta un protocolo de laboratorio para identificar la resistencia física y química de las proteínas mediante la observación de su solubilidad y desnaturalización con diferentes agentes. Se explica brevemente cómo la sal reduce la solubilidad de las proteínas y cómo métodos físicos y químicos como el calor, pH, ácidos y metales pesados pueden desnaturalizarlas. El procedimiento propone experimentos para desnaturalizar la albúmina con varios reactivos y observar si la leche se coagula con limón o ácido cl

    Descripción original:

    Desnaturalizacion de proteinas

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    Este documento presenta un protocolo de laboratorio para identificar la resistencia física y química de las proteínas mediante la observación de su solubilidad y desnaturalización con diferentes agentes. Se explica brevemente cómo la sal reduce la solubilidad de las proteínas y cómo métodos físicos y químicos como el calor, pH, ácidos y metales pesados pueden desnaturalizarlas. El procedimiento propone experimentos para desnaturalizar la albúmina con varios reactivos y observar si la leche se coagula con limón o ácido cl

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    GUIA DE LABORATORIOS

    DC-LI-FR-001

    Versión: 00 Fecha: 28-02-2014 Página 1 de 3

    BIOQUIMICA

    SOLUBILIDAD Y DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

    1. OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

    Identificar la resistencia física y química de las proteínas

    Observar la solubilidad y desnaturalización de las proteínas con varios agentes físicos y químicos

    2. MARCO TEORICO

    La solubilidad de la mayoría de las proteínas disminuye frente a elevadas concentraciones de sales. Este efecto,
    llamado desalado (“salting out”), resulta muy útil en la separación de proteínas. Este fenómeno en palabras
    simples se basa en la competencia de las moléculas de solvente por parte del soluto, a medida que agregamos
    una sal al medio líquido que contiene la proteína disuelta, los iones de la sal disuelta van acaparando las aguas
    que se encuentren solvatando la proteína disminuyendo así su solubilidad permitiendo su precipitación. La
    dependencia de la solubilidad respecto a la concentración salina difiere de una a una proteína. Por ejemplo, a
    una concentración de sulfato 0,8 M, el fibrinógeno precipita, mientras que se requiere una concentración 2,4 M
    para precipitar la albúmina sérica. El precipitado por salado también resulta útil para concentrar disoluciones
    diluidas de proteínas.

    Por otro lado, la desnaturalización es la pérdida de la estructura de una proteína, con o sin pérdida de la actividad
    biológica, dependiendo a que nivel de estructura fue la desnaturalización. Para desnaturalizar una proteína
    existen varios métodos, tanto físicos como químicos. En los primeros encontramos el calor, el pH, bajas
    temperaturas. En los segundos podemos mencionar a los ácidos fuertes, urea, detergentes como el SDS (dodecil
    sulfato de sodio), β-mercaptoetanol, ditiothreitol, etc.

    3. MATERIALES Y EQUIPOS

    Nueve tubos de ensayo


    Mechero
    Pinzas para tubo de ensayo
    GUIA DE LABORATORIOS
    DC-LI-FR-001

    Versión: 00 Fecha: 28-02-2014 Página 2 de 3

    Vaso de precipitados
    Rejilla de asbesto

    REACTIVOS

    H2SO4
    HNO3
    NaOH
    Cloruro de Mercurio
    Albúmina
    Nitrato de Plata
    Ácido Pícrico
    Ácido Tricloroacetico

    4 PROCEDIMIENTO

    Desnaturalización de albumina con ácidos y bases fuertes


    Prepara 3 mL de H2SO4 con un 1mL de Albúmina, igualmente hacerlo con los reactivos HNO 3 y el NaOH. (Ácidos
    fuertes y alcalinos). Agitar los tubos y observar si se presenta solubilidad.

    Desnaturalización de albumina con metales pesados


    Preparar 1mL de Cloruro de Mercurio con 2 mL de Albúmina, e igualmente hacerlo con Nitrato de Plata. Agitar
    los tubos de Ensayo con los reactivos y ver si se solubilizan.

    Desnaturalización de albumina con Ácido Pícrico y Tricloroacetico


    En tubos de Ensaye agregar 1 mL de ácido Pícrico con 2 mL de Albúmina. Hacer lo mismo con el Ácido
    Tricloroacetico. Calentarlos a baño maría por 5 min y después dejarlos enfriar por 5 min más y hacer
    observaciones de cada tubo.
    Hacer observaciones.
    GUIA DE LABORATORIOS
    DC-LI-FR-001

    Versión: 00 Fecha: 28-02-2014 Página 3 de 3

    Adición de limón y ácido clorhídrico a la leche.


    Coloca en dos vasos de precipitado un poco de leche. A uno adicionales unas gotas de limón y al otro unas
    cuantas gotas de HCl concentrado. Anota tus observaciones.

    5. PREGUNTAS DE PROFUNDIZACIÓN

    a. ¿Consultar sobre el método de electroforesis de proteínas y qué relación tiene con lo aprendido
    en el laboratorio?
    b. ¿Explique qué tipo de proteínas y bajo qué condiciones de separación pueden mantener su
    actividad biológica?
    c. ¿Qué tipo de proteína contiene la leche, investigue que cambio estructural le sucede a esta
    proteína para que precipite?

    6. BIBLIOGRAFÍA y CIBERGRAFÍA

    GARCÍA, ARCESIO R., Y UBAD L., AQUILINO A. Hacia la Química 2, Primera Edición
    Revisada. Editorial Temis S.A. Santa Fé de Bogotá. 1985.

    ROBERT HORTON. Principles of biochemestry. Cuarta edición. Editorial: Prentence hall. 2006

    7. INFORME

    El informe debe realizarse en formato tipo artículo, de acuerdo a la plantilla DC-LI-FR-002.

    No olvide presentar todos los cálculos realizados.

    Nota: Verifique siempre el estado de agregación de los reactivos y el grado de peligrosidad de los
    mismos para prever las medidas de seguridad adicionales que debe cumplir.

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