MINISTERIO DE SALUD PÚBLICA

HOSPITAL GENERAL DOCENTE DE CALDERÓN

“HEMATOLOGÍA MANUAL”
PROCESO: APOYO Y DIAGNÓSTICO TERAPÉUTICO
SUBPROCESO: LABORATORIO CLINICO

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

(f) (f) (f)

Nombre: Nombre: Nombre:

Cargo: Cargo: Cargo:

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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

1. OBJETIVO:
Establecer un procedimiento adecuado para la estandarización de los pasos a seguir en la realización de
las Biometrías Hemáticas de los pacientes de consulta externa, hospitalización y emergencia del
Hospital General Docente de Calderón.

2. ALCANCE:
Este procedimiento cubre la realización, revisión, validación y reporte, de las pruebas hematológicas que
se realizan dentro de la cartera de servicios de Laboratorio Clínico del Hospital General Docente de
Calderón

3. RESPONSABLES:
Responsable de la Supervisión: Líder del Laboratorio, Responsable de Calidad
Responsable de la Aplicación: Al personal de Laboratorio clínico (Bioquímicos, Bio-analistas,
Licenciados en Laboratorio Clínico, Tecnólogos Médicos) que cubren el área de Hematología del
HGDC.
Responsable del Monitoreo del Indicador: Responsable de calidad del laboratorio

4. DEFINICIONES:

N/A

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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

5. DESCRIPCIÓN:
5.1 DIAGRAMA DEL PROCEDIMIENTO
PRE-ANALITICA

MUESTRA ACEPTADA
SI NO
RECHAZADO

LISTA DE TRABAJO

MINDRAY 6800

MODO AL-WB
MODO OV

INGRESO CODIGO MANUAL CARGA RACK

RESULTADOS DENTRO DE VALOR DE REFERENCIA Y

SI CONFIRMADOS NO
CONFIRMACION
MANUAL
VALIDACION ENTERPRISE

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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

5.2 DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

La biometría hemática, también denominada hemograma es un examen de laboratorio que examina las
células que componen la sangre, ofrece una información general de la sangre y sus componentes, puede
mostrar alteraciones o enfermedades hematológicas (propias de la sangre) o bien una alteración
indirecta o reflejo de una enfermedad de algún otro órgano (no hematológicas).

5.2.1 DETERMINACION DE HEMATOCRITO

5.2.1.1Propósito del examen: El hematocrito se utiliza para detectar, diagnosticar o monitorizar una
serie de trastornos y enfermedades que repercuten sobre la proporción que los eritrocitos representan
respecto al volumen sanguíneo.

5.2.1.2 Muestra primaria: sangre total con EDTA.

5.2.1.3Equipos y reactivos:
- Micro-centrífuga
- Capilares con heparina
- Plastilina
- Regleta para medir hematocrito

5.2.1.4 Procedimiento:

1.-Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados . Debe llenarse aproximadamente 70-80% del
capilar, sin dejar burbujas de aire.

2.- Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina.

3.- Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la micro-centrifuga, con el extremo ocluido
adherido al reborde externo de la plataforma.

4.- Centrifugar por 3 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm

5.- Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total de plasma y
eritrocitos o por medio de la regleta.
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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

6.- Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de
eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea horizontal correspondiente al cero.

7.- Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada quede al nivel del tope del plasma.

8.- El tubo debe de encontrarse completamente en posición vertical.

9.- La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción del volumen de
estos.

5.2.1.5 Interferencia y limitaciones del método:

Muestras coaguladas o en cantidad insuficiente

5.2.1.5 Valores de referencia método manual:

Hombres 40% - 50%

Mujeres 38% - 44%
Niños (5 años) 38% - 44%
Lactantes (3 meses) 37% - 42%
Recién nacidos 50% - 60%

5.2.2 CONTAJE DE GLOBULOS BLANCOS

5.2.2.1. Propósito del examen: La prueba de conteo de glóbulos blancos (GB) mide dos cosas:

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1.- El número total de glóbulos blancos (leucocitos) y la cuenta diferencial. La cuenta diferencial mide
los porcentajes de cada tipo de leucocito. Los glóbulos blancos están compuestos de granulocitos
(neutrófilos, eosinófilos y basófilos) y no granulocitos (linfocitos y monocitos).

2.- Los glóbulos blancos (GB) son un componente principal del sistema inmunológico del cuerpo.

El conteo de glóbulos blancos puede indicar en enfermedades infecciosas e inflamatorias, leucemia,

linfoma y trastornos de la médula ósea.

La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que permite evidenciar los leucocitos, manteniéndolos
visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados.

El recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se expresa por mm3 (milímetro cúbico)

5.2.2.2 Muestra primaria: sangre total con EDTA

5.2.2.3 Equipos y Materiales

- Microscopio.
- Hemocitómetro (Cámara de Neubauer) que consta de los siguientes elementos:

o Una lámina portaobjeto gruesa, en el centro se hallan dos superficies cuadriculadas iguales
separadas del resto de la lámina por surcos y dos barras transversales algo más elevadas.
o Una laminilla cubreobjetos ópticamente plana, que, al colocarse sobre las barras elevadas de
la lámina forma una cámara entre el cubreobjetos y la superficie cuadriculada.

La altura entre el cubreobjetos y la lámina portaobjetos es de 0,1 mm. Cada cuadrícula mide 3 mm de
lado y se divide en 9 cuadrados grandes. Cada uno de los cuales mide 1 mm2 de superficie, que se
subdivide a su vez en 16 cuadrados medianos. El cuadrado grande central se divide en 25 cuadrados
pequeños y cada uno de ellos en 16 cuadrados. Cada cuadrado pequeño mide 0,2 mm de lado (0,04 mm2
de superficie), y cada cuadrado mide 0,05 mm de lado (0,0025 mm2 de superficie).

- Pipeta de glóbulos blancos (De Thomas) o pipeta automática (de 0 a 100 mL). Presenta cerca del
extremo superior una marca de 11, inmediatamente continúa una dilatación (bulbo) que contiene una
perla que funciona como mezcladora, luego sigue el extremo más largo de la pipeta (tallo) que está
dividida en 10 partes, con 2 marcas: 1 (parte final del bulbo) y 0,5 (a la mitad del tallo). Se le acopla
a su extremo superior 1 tubo de goma y una bombilla para aspirar.
- Diluyente de glóbulos blancos
- Solución de Turk al 1%.
- Piano

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5.2.2.4 Procedimiento:

- Una vez obtenida la sangre con anticoagulante se procede a aspirar la sangre con la pipeta de
glóbulos blancos hasta la marca de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente.
- Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta la marca de 11 (no
debe haber burbujas).
- Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un rotador automático por 2 ó 3
minutos.
- Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.
- Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequeña de esta
solución en la cámara.
- Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
- Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.
- Cuando se usa la pipeta automática, se toma 20 mL (0,02 mL) de sangre total con anticoagulante o
sangre capilar con anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 mL de solución de Turk
(aquí tenemos una dilución 1:20).

La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como está indicado en la figura. Además de los
leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes, se deben contar todos los leucocitos que se
encuentren adheridos en la línea horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los
leucocitos, adheridos a la línea horizontal inferior y vertical interior

5.2.2.4.1 Resultados:

Nº de leucocitos x mm3 = leucocitos contados en 4 campos

altura x dilución x área

Reemplazando = leucocitos contados en 4 campos

1/10 x 1/20 x 4

= leucocitos contados en 4 campos

4/200

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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

= X/1 = Nº leucocitos contados x 50

4/200

5.2.2.5 Interferencia y limitaciones del método.

Muestra coagulada o cantidad insuficiente

5.2.2.6 Valores de referencia:

Adultos 4000 - 10000 leucocitos / mm3

Niños 4000 – 12000 leucocitos /mm3
Recién nacidos: 10000 – 20000 /mm3

5.2.2.7 Corrección de valores para restar eritrocitos nucleados:

Los eritroblastos no se destruyen (lisis) en el líquido de dilución, por lo tanto pueden observarse al
realizar el recuento leucocitario y confundirse con los leucocitos, de tal manera que se debe emplear la
siguiente fórmula:

Cálculo: La concentración del número de normoblastos (por litro) es:

Número de eritroblastos contados x concentración o número de leucocitos 100 + Nº eritroblastos

contados

Ejemplo: Si se cuentan 50 eritroblastos y la concentración del número de leucocitos es 16000/mm3 .

En unidades tradicionales las concentraciones de eritroblastos y leucocitos se expresan por milímetro

cúbico.
En tales unidades el cálculo correspondiente al ejemplo que se ha dado sería:

50 x 16 000 = 5300 / mm3

100 + 50

Recuento corregido de glóbulos blancos o leucocitos = 16 000 - 5300 = 10 700 / mm3

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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

5.2.3 FROTIS SANGUÍNEO EN SANGRE PERIFERICA

5.2.3.1 Propósito del examen:

Observación detallada de todos los elementos de la sangre con el fin de evaluar la condición
hematológica del paciente.

Se debe considerar lo siguiente:

Calidad del frotis Debe abarcar 80% de la lámina con cabeza, cuerpo y cola. Extensiones gruesas
dificultan la visualización e identificación celular, mientras que las delgadas originan una distribución
anormal de los elementos.

Eritrocitos: Se estudia su tamaño, forma, color y si existen inclusiones o elementos extraños adelante
(microcitos, macrocitos, hipocromía, poiquilocitocis, anisocitosis, esferocitos, eliptocitos, ovalocitos,
etomatocitos, células diana, drepanocitos, esquistocitos, policromatofilia, eritrobastos, etc).

Leucocitos: Observar la madurez de los leucocitos y distinguir neutrofilia, neutropenia, linfocitos

atípicos, granulaciones tóxicas, vacuolizaciones, etc.

Plaquetas: Estudiar tanto cualitativa como cuantitativamente, debiendo observarse de 3 a 10 plaquetas

aproximadamente por 100 glóbulos rojos o varias plaquetas y grupos ocasionales por campo. Visto con
objetivo de inmersión, no debe existir menos de una plaqueta por campo.

5.2.3.2 Muestra requerida: Frotis de sangre periférica coloreado con Wrigth.

5.2.3.3 Materiales y equipo:

- Microscopio con objetivo de 40x y 100 x

- Aceite de inmersión.

5.2.3.4 Valores de referencia

- Eritrocitos normocrómicos
- Leucocitos maduros sin presencia de anormalidades
- Plaquetas distribución y tamaño normal

5.2.3.5 Investigación de Hemoparásitos

Consiste en el examen microscópico del frotis sanguíneo para demostrar la presencia de hemoparásitos,
Se lo puede hacer en frotis o en gota gruesa.

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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

La gota gruesa se la realiza de la siguiente manera:

 Utilizando los ángulos de la placa extensora se esparce rápidamente y se extiende uniformemente
hasta formar una gota gruesa de 1cm de diámetro.
 La sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente con 3 a 6 movimientos. De
preferencia realizar el homogenizado en una sola dirección, en forma concéntrica (de adentro
hacia afuera o viceversa)

5.2.4 FÓRMULA LEUCOCITARIA

5.2.4.1 Propósito del examen

La fórmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las distintas clases de leucocitos
normales y anormales en la sangre. A partir de los porcentajes puede incluso calcularse el número real de
cada clase de leucocitos por mm3 de sangre (valor absoluto), conociéndose el total de leucocitos.

Por ejemplo: Si se tiene 60% de neutrófilos segmentados y el recuento total de leucocitos total es de 20
000, entonces la cifra absoluta de neutrófilos segmentados sería: 60/100 x 20 000 = 12 000 (valor
absoluto)

5.2.4.2 Muestra requerida: Frotis coloreado con Wrigth.

5.2.4.3 Materiales y equipos

- Microscopio con lente 40 x y 100 x

- Aceite de inmersión
- Piano (contador)

5.2.4.4 Procedimiento

5.2.4.4.1 Realización y tinción del frotis sanguíneo

La práctica del frotis sanguíneo, también llamado extendido, es de gran importancia en hematología ya
que el diagnóstico de muchas enfermedades hematológicas puede realizarse con sólo observar las
características morfológicas de las células sanguíneas, de manera que éste no debe ser excesivamente
grueso ni excesivamente fino.

Todas las láminas por usar, sobre todo nuevas, deben ser limpiadas con algodón y alcohol al 70% para
eliminar la grasa que viene adherida.

5.2.4.4.1.1 Materiales :
- Alcohol al 70%.
- Algodón
- Portaobjetos de vidrios limpios y desgrasados (25 x 75 mm).
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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

- Una vez extraída la sangre con cualquiera de las metodologías, se coloca una pequeña gota de
sangre (5mL) (aprox. 3 mm de diámetro) sobre un portaobjeto a 2 cm aproximadamente de uno de
los extremos.

- Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del primer portaobjeto (en la que
se encuentra la gota de sangre) formando un ángulo de 45º.

- Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro en sentido longitudinal,

hasta que la gota de sangre quede bien extendida sobre la superficie del primer portaobjeto. El grosor
del frotis sanguíneo puede variar según sea el ángulo que formen entre sí ambos portaobjetos. Así, si
es superior a 45º, la extensión obtenida será gruesa y corta, si es inferior a 45º será larga y fina. El
secado del frotis es a temperatura ambiente y en posición horizontal.

5.2.4.4.2 Tinción con colorante Wright:

El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar las
variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamaño de los eritrocitos, su contenido de
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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

hemoglobina y sus propiedades de coloración. La información obtenida de un frotis de sangre periférica

depende en gran parte de la calidad del extendido y la coloración.

5.2.4.4.2.1Materiales

- Colorante de Wright
- Frasco gotero.
- Solución amortiguadora (agua)

- Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 5 y 10 minutos.

- Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el colorante de Wright, dejándolo por
espacio de 4 minutos.
- Posteriormente se añade solución amortiguadora en partes iguales hasta obtener un brillo metálico,
dejando 3 minutos adicionales.
- Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
- Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento, se revisa la calidad de la coloración, la
cantidad aproximada de glóbulos blancos y se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se coloca una
gota de aceite de inmersión y se enfoca a un aumento de 100x La forma de los glóbulos rojos se
examinará detenidamente observando además del color (cantidad de hemoglobina), presencia de
plaquetas, su agrupación y distribución.

- Si es favorable se examina con el objetivo de inmersión. La parte ideal para visualizar células para la
fórmula leucocitaria es en la parte final del cuerpo y comienzos de la cola, recorriendo la lámina de
izquierda a derecha o de arriba hacia abajo hasta contar 100 leucocitos incluidos los agranulocitos y
granulocitos.

- Aquí no se incluyen los elementos inmaduros de sangre roja.

- A medida que se va contando, se va anotando el número de cada una de las clases de glóbulos
blancos observados.

- Se determina luego los porcentajes de cada uno de ellos para luego comparar con los porcentajes
normales.

5.2.4.4.3 Valores de referencia:

LEUCOCITOS NIÑOS (1 A 8 AÑOS) % ADULTOS %

NEUTROFILOS 20 – 40 60 – 70
SEGMENTADOS
CAYADOS 0–4 2–6
LINFOCITOS 40 – 60 15 – 40
EOSINOFILOS 1-5 1–4
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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

BASOFILOS 0–1 0–1

MONOCITOS 2-8 2–8

5.2.5 VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN

5.2.5.1 Propósito del examen:

La velocidad de sedimentación mide la velocidad de sedimentación de los glóbulos rojos en el plasma.

La velocidad de sedimentación es un examen hematológico que no está incluido en el desarrollo de un

hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran sensibilidad, pues resulta normal
en las enfermedades funcionales, así como en los procesos inactivos o estrictamente locales.

El método de Wintrobe al igual que el método de Westerngreen, este método mide la tendencia de los
eritrocitos a la sedimentación al colocar sangre anticoagulada en un tubo pequeño. Se lee la columna de
plasma al cabo de una hora de reposo.

5.2.5.2 Procedimiento:

El tubo debe ser llenado, colocado de manera vertical y encender el cronómetro con el tiempo de 1
hora

5.2.5.3 Resultados:

Medir los milímetros descendidos de glóbulos rojos mediante la columna de plasma por encima del
paquete globular

5.2.5.4 Valores de referencia : 0 - 20 mm/hora

5.2.6 CONTAJE DE PLAQUETAS (METODO INDIRECTO)

5.2.6.1 Propósito del examen:

Evaluar el número de plaquetas presentes en la sangre a través de la observación de un frotis coloreado.

5.2.6.2 Muestra requerida: Frotis teñido con Wrigth

5.2.6.3 Materiales y equipos

- Microscopio con lente de 40x y 100 x

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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

- Aceite de inmersión

5.2.6.4 Procedimiento

- Colocar la placa coloreada sobre la platina del microscopio

- Observar con el objetivo de 40 x
- Colocar aceite de inmersión
- Observar con el objetivo de 100 x
- Contar las plaquetas en 10 campos situados entre el cuerpo y la cola del frotis (los campos deben
tener aproximadamente 100 globulos rojos)
- Calcular el número de plaquetas de la siguiente forma:
o Número de plaquetas observadas x número de glóbulos rojos x 1000 ó
o Promedio de plaquetas en 10 campos por 20000

5.2.6.5 Valores de referencia: 150000 a 450000 plaquetas x mm3

5.2.7 RETICULOCITOS

5.2.7.1 Propósito del examen:

Los reticulocitos contienen gránulos pequeños que se pueden teñir con azul de cresil brillante. Este
colorante se aplica a una extención de sangre y a continuación se observa con el microscopio cierto
número de eritrocitos. Con este examen se calcula el número de reticulocitos por litro de sangre, o la
proporción de glóbulos rojos que integran los reticulocitos.

5.2.7.2. Muestra requerida: Sangre total con EDTA

5.2.7.3 Materiales y equipos

- Porta objetos
- Tubo de ensayo pequeño
- Papel filtro
- Pipetas pasteur
- Piano
- Solución de azul cresil brillante
- Microscopio

5.2.7.4 Procedimiento

- Depositar en un tubo de ensayo 2 gotas de la solución de azul de cresil brillante

- Con una pipeta pasteur aspire la muestra de sangre
- En el tubo que contiene las gotas de azul de creil brillante deposite 2 gotas de sangre
- Mezclar sacudiendo suavemente el tubo
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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

- Dejar reposar 15 minutos

- Tome el tubo y agítelo de nuevo con suavidad
- Aspire una gota de la mezcla
- Deposite esta gota en un portaobjetos y realice una extención
- Examine el frotis con el objetivo 100 x. Observe la porción cercana al extremo de la extención, en
que los eritrocitos suelen estar muy bien separados.
- Los eritrocitos se tiñen de un color azul pálido
- Los reticulocitos son glóbulos rojos en cuyo interior se observan pequeños gránulos que se tiñen de
color violeta obscuro, y forman una red (retículo).
- Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo 100 x, cuente cuidadosamente la cantidad total
de glóbulos rojos y el número total de reticulocitos que hay entre ellos.
- En el sistema tradicional la cantidad de reticulocitos se indica mediante un porcentaje, así si se han
observado 500 eritrocitos en la extención sanguínea y n de ellos son reticulocitos, el porcentaje
correspondiente se calculará multiplicando n x o,2. Ejemplo de 500 eritrocitos estudiados, 25 son
reticulocitos; en consencuencia el porcentaje de reticulocitos será 25 x 0,2= 5%.

5.2.7.5 Valores de referencia

Recien nacidos 2.0 a 6.0 %

Niños y adultos 0.5 a 2.5 %

6.0 VALORES DE PANICO

Los siguientes valores de pánico deben ser reportados inmediatamente al servicio de origen y ser
reportados en el Registro de Valores Críticos que se encuentran en la carpeta compartida del laboratorio
clínico

PARAMETRO VALOR DE PANICO

GLOBULOS BLANCOS Menor a 2,0 10^3ul
Mayor a 37.0 10^3ul
HEMATOCRITO Menor a 20%
Mayor a 60%
En RN mayor a 65%
HEMOGLOBINA Menor a 7 g/dl
Mayor a 20 g/dl
En RN mayor a 24g/dl
PLAQUETAS Menor a 4.0 10^3ul
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PROCEDIMIENTO CÓDIGO:

Mayor a 1000.0 10^3 ul

6.0 INDICADORES

N/A

7.0 REFERENCIAS:

OPS, Manual de Técnicas básicas para un laboratorio de salud,

8.0 DISTRIBUCIÓN

Al personal técnico de laboratorio, área de hematología

9.0 CONTROL DE CAMBIOS

FECHA DESCRIPCIÓN DEL SECCIÓN QUE VERSIÓN

CAMBIO CAMBIA
N/A Emisión inicial 1

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