CENTRÍFUGA

Descripción del Equipo

Las centrífugas son equipos médicos utilizados en los laboratorios, clínicas y otros, para la
separación de solutos de sus solventes. Por ejemplo, en la rama de laboratorio clínico, para el
análisis de sangre, por lo general es necesario separar el plasma de los otros componentes para
poder ser analizado. (1)

Existen varios tipos básicos: centrífugas de separación de sueros o plasma de baja

velocidad. (Macro centrífuga, entre 2,000 y 6,000 R.P.M. aproximadamente),
centrífugas para micro hematocritos (Micro centrífuga entre 10,000 y 18,000
R.P.M. aprox.) y las ultracentrífugas (de 20,000 hasta 75,000 R.P.M.) para la
separación de proteínas. También pueden ser catalogadas basándose en otras características,
como: grandes, medianas y pequeñas; o de piso, de mesa, refrigeradas, etc. De acuerdo a su rotor
(araña) y a sus tubos porta muestras también pueden ser catalogadas, pues existen diversas formas
y tamaños. (1)

Teoría de la Sedimentación

Las partículas en disolución pueden sufrir alteración espacial, es decir, pueden cambiar de
posición con el tiempo. Esto puede ser debido a procesos de difusión (en un gradiente de
concentración, las partículas tienden a ir de la zona de mayor concentración a la de menor
concentración) o bien a procesos de sedimentación. En un proceso de sedimentación la velocidad
a la cual sedimentan las partículas en una suspensión, no sólo depende de su naturaleza, depende
también de la naturaleza del medio en el cual están suspendidas, así como, de la fuerza aplicada
a las partículas. Intuitivamente, uno especularía que las partículas más grandes sedimentarán más
rápido que las más pequeñas. Un factor que afecta la sedimentación de las partículas es la
viscosidad del medio. (2)

Fuerza Centrífuga Relativa

La fuerza centrífuga (RCF) es dependiente de la velocidad de rotación (N) en r.p.m. y la distancia

de la partícula (r) al centro de rotación. Cuando la distancia es expresada en cm tenemos que:
RCF = 1.18 x r x (r.p.m / 1000)2 ó RCF = 1.18 x r x (N)2 (2)

Coeficiente de Sedimentación Estándar

En una centrifugación, el valor del coeficiente de sedimentación no depende sólo de la velocidad

o tipo de rotor, depende también del tamaño y densidad de la partícula, así como, de la densidad
y viscosidad del medio utilizado para la centrifugación. Para determinar la constante de
sedimentación no es necesario realizar la centrifugación con agua como medio, los datos de la
centrifugación pueden obtenerse con otro medio cuya densidad y viscosidad sean conocidas. (2)

El coeficiente de sedimentación de las macromoléculas depende de toda una serie de factores,

puesto que las moléculas tienen una forma que depende de la composición del disolvente, muchas
de ellas pueden estar eléctricamente cargadas, son muy grandes comparadas con las moléculas
del disolvente y se deforman a medida que se mueven. Estos efectos se manifiestan en la
dependencia que se presenta respecto a la concentración, la velocidad de centrifugación y la fuerza
iónica del disolvente. (2)

Sedimentación Dependiente de la Velocidad

La sedimentación dependiente de la velocidad se refiere a dos fenómenos independientes: la

agregación de las moléculas, dependiente de la velocidad, que se produce a grandes
concentraciones, y la reducción real de s a elevadas velocidades. En ninguno de los dos casos se
comprende completamente el fenómeno, pero gracias a los trabajos de Bruno Zimm y sus
colaboradores, se tiene una idea de cuáles pueden ser las causas. (2)

La agregación dependiente de la velocidad se refiere a la pérdida aparente de material de la

disolución, que disminuye la concentración efectiva de la macromolécula (aumentando el s
aparente). La explicación que normalmente se da de este fenómeno es que, a elevadas velocidades,
las moléculas dejan atrás de sí una estela que aumenta la velocidad de la molécula que está
justamente detrás de ella. El resultado es la formación de agregados moleculares que tienen
valores de s muy elevados y que forman rápidamente un sedimento en el fondo del tubo de la
centrífuga. Este proceso continuo hasta que la concentración es demasiado baja para que se
produzcan agregados. (2)

CENTRÍFUGAS

Los experimentos de centrifugación requieren aparatos que funcionan a velocidades exactamente

conocidas con pequeñas variaciones y sin fluctuaciones de temperatura. Existen varios criterios
para clasificar las centrífugas, uno de ellos es por la máximo velocidad a la que operan, así
tenemos (2)

MININICENTRÍFUGA

Está centrífuga pueden lograr velocidades de giro de 10000 rpm, se usan en el campo de la
biología molecular, se utilizan micro tubos para su proceso. (3)

Centrífuga Microhematocrito
Es la determinación del porcentaje volumétrico de eritrocitos en sangre. Para conseguirlo, la
sangre se centrifuga en tubos capilares para hematocrito hasta que se alcanza la densidad máxima
de compactación celular. Después de la centrifugación se efectúa la lectura del valor de
hematocrito mediante un disco especial de evaluación. (3)

Centrífuga de pie

Centrifugadoras pie son dispositivos de gran volumen que son adecuados para el procesamiento
de grandes cantidades de muestras, así como para el uso de grandes recipientes de muestras. (3)

Centrífugas de Baja Velocidad

Estas centrífugas son capaces de centrifugar hasta 6 litros de muestra a la vez, mantienen la
muestra fría por un flujo de aire que pasa a través del fondo de la centrifuga. Estas máquinas son
utilizadas rutinariamente para procesos iniciales de muestras biológicas; puede ser utilizadas para
separar células, y con mayores velocidades, separar organelos, así como núcleo y cloroplastos
que también pueden ser separados por gradientes de densidad. (2)

Centrífugas de Alta Velocidad

Estas centrífugas, usualmente con máximas velocidades de 18 000 – 25 000 r.p.m., son máquinas
que pueden generar cerca de 60 000 g, son muy baratas comparadas con las ultracentrífugas. Estas
centrífugas tienen sistema de refrigeración y algunos tipos tienen también sistema de vacío, sin
embargo, las maquinas que cuentan con sistema de vacío son más caras, pero tienen la ventaja
que controlan con mayor exactitud la temperatura. (2)

Al igual que las centrífugas de baja velocidad las centrífugas de alta velocidad son muy utilizadas
para el fraccionamiento subcelular. La ventaja de los rotores verticales ha facilitado el uso de
centrífugas de alta velocidad para las separaciones por gradiente. (2)

Ultracentrífugas

La fuerza generada por las ultracentrífugas puede ser significativamente mayor de los 600,000 g,
los cuales son suficientes para separar proteínas pequeñas. (2)

Las ultracentrífugas son subdivididas en dos tipos: analíticas y preparativas. La ultracentrífuga

analítica a menudo es confundida con la ultracentrífuga preparativa. Sin embargo, los
experimentos con la analítica son diferentes en varios aspectos. El más importante es que cuenta
con un sistema óptico, por lo que, la muestra es visualizada en tiempo real durante la
sedimentación, permitiendo la determinación exacta de parámetros hidrodinámicos y
termodinámicos. Además, el propósito del experimento es para caracterizar las propiedades
claves de la muestra o para purificar la muestra para un uso posterior (2).

Centrífuga Tubular

Las centrifugas tubulares (CT) consisten básicamente de un tubo vertical esbelto que gira a altas
velocidades por la acción de un motor eléctrico, o una turbina de aire o vapor. Este tipo de
centrífuga es una de los más eficientes y sencillos, capaz de separar partículas hasta de 0.1 mm.
Las CT pueden contar con un sistema de enfriamiento por lo que son empleadas en el manejo de
caldos con enzimas o proteínas. (2)

Durante la operación de la CT la suspensión es alimentada por la parte inferior y los sólidos

sedimentan en la pared del tubo. El líquido claro se recolecta por rebosamiento en la parte
superior. Conforme se forma el precipitado el área de flujo se reduce y el tiempo de residencia
del líquido disminuye. Esto se traduce en un aumento gradual del contenido de sólidos en el
sobrenadante que puede ser determinado por mediciones de turbidez. (2)

Un modelo típico de laboratorio consta de un tubo de 4.5 cm de diámetro por 25 cm de longitud,

el cual puede girar a una velocidad de hasta 50 000 r.p.m., desarrollando campos de hasta 62 000
g, con una capacidad de hasta 100 l/h. En la siguiente imagen se muestra una centrífuga tubular.
(2)

Centrifugas de Cámara Múltiple

Las centrífugas de cámara múltiple fueron creadas para incrementar la capacidad de manejo de
sólidos de las centrífugas tubulares. Estas centrífugas consisten en una serie de tazones
concéntricos con deflectores que provocan un flujo en serie de la suspensión. Su operación
permite la clasificación de las partículas conforme pasan de una cámara a otra. El líquido claro se
obtiene por rebosamiento en la última cámara. Este arreglo genera un mayor tiempo de residencia
del líquido, en relación al de la centrífuga tubular, así como mayor capacidad de manejo de
sólidos. (2)

El diámetro de los equipos de cámara múltiple varía de 335 a 615 mm, con velocidades de rotación
entre 5 000 y 8 400 r.p.m., produciendo campos entre 5 000 y 9 000 g, respectivamente. La
capacidad de manejo de sólidos varía entre 2.5 y 60 litros dependiendo del material y del número
de cámaras. La descarga de sólidos y el mantenimiento de estos equipos es más difícil que el de
las centrífugas tubulares, ya que la centrífuga tiene que ser desarmada para sacar los sólidos. (2)

Centrífugas

Decantadoras o de Tornillo
Las centrífugas decantadoras se caracterizan por un tazón horizontal con una sección cilíndrica y
una sección cónica, con una relación de longitud a diámetro entre 1.5 - 3.5. el tazón contiene un
tornillo transportador que gira en la misma dirección, pero a una velocidad ligeramente superior
o inferior que el tazón (entre 5 – 100 r.p.m.) de diferencia. Las velocidades de rotación son de 1
600 a 6 000 r.p.m. por lo que los campos centrífugos son menores que los de los otros equipos.
(2)

En las centrífugas decantadoras la suspensión es introducida a través de perforaciones por un tubo

axial concéntrico a la flecha del tornillo, al final de la sección cónica o de compresión de sólidos.
Los sólidos que se depositan en la pared son transportados y descargados continuamente por el
extremo cónico de la centrífuga, donde escurren antes de salir. El líquido claro se obtiene por
rebosamiento en el extremo opuesto a través de orificios de descarga que fijan el nivel del líquido
en la centrifuga. (2)

Centrífuga de Discos

La centrífuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se montan un conjunto de discos en
forma de conos truncados, uno sobre otro. El rotor de la centrifuga provoca el giro tanto de los
discos como del tazón de la centrifuga. Los discos constan de bordes internos que permiten
mantener pequeñas separaciones entre ellos, del orden de 0.5 a 2.0 mm. El ángulo que forman los
conos con la vertical varía entre 35 y 500 dependiendo de la aplicación particular. Entre la pila de
discos y el tazón existe un espacio que permite la acumulación de sólidos. (2)

Durante la operación de la centrifuga de discos la suspensión es alimentada continuamente en el

fondo del tazón a través de la parte central de la flecha, y fluye hacia arriba entre las placas hacia
la salida en la parte central superior del equipo. Debido a la fuerza centrífuga, los sólidos se
depositan en la cara interna de los discos, resbalando hacia la cámara colectora debido al ángulo
de los discos. (2)

TIPOS DE CENTRIFUGACIÓN

El objetivo de la centrifugación es la separación de partículas especificas en una solución. El

término partícula involucra sustancias disueltas y partículas de tamaño microscópico y
macroscópico que se encuentran suspendidas en un fluido que usualmente es agua. En biología
las partículas suelen ser células, organelos subcelulares o moléculas grandes; en química,
usualmente son solutos macromoleculares disueltos. Existen tres tipos principales de
centrifugación: Centrifugación diferencial, centrifugación zonal y centrifugación al equilibrio. (2)

Según la velocidad:

Centrifugación a baja velocidad----Menos de 10000 rpm (4)

Centrifugación a alta velocidad----Entre 10000 y 20000 rpm (4)

Ultracentrifugación----------------Más de 20000 rpm (4)

Según el propósito:

1. Centrifugación analítica

Objetivo: medir las propiedades físicas de las partículas que sedimentan, tales como su
coeficiente de sedimentación o su masa molecular. Especialmente en la variante ultra
centrifugación analítica. (4)

Las moléculas se observan mediante un sistema óptico durante la centrifugación. Los

tubos de centrífuga deben ser de cuarzo para dejar pasar la luz visible y ultravioleta.
Rotor basculante, observación en vertical. (4)

2. Centrifugación preparativa

De uso más común. Objetivo: aislar partículas, células o moléculas para su análisis o
utilización posterior. En general, se emplea mayor cantidad de muestra que en la
analítica. (4)

Según la forma en la que se centrifuga:

1. Centrifugación diferencial

(También llamada de frontera móvil). El tubo se llena con muestra y se centrifuga. El

comportamiento de cada componente de la muestra depende de su forma, tamaño,
densidad y, lógicamente, de las condiciones de centrifugación. Se obtienen sólo 2
fracciones: sedimento y sobrenadante. (4)

2. Centrifugación zonal o de velocidad de sedimentación

La muestra se aplica en una capa delgada sobre el medio de centrifugación, que es un

gradiente de densidad. Bajo la fuerza centrífuga, las partículas sedimentan a través del
gradiente concentrándose en zonas o bandas discretas. Su velocidad de avance (y, por
tanto, el mecanismo de la separación) depende de su tamaño, forma y densidad; todos
estos parámetros se combinan en el coeficiente de sedimentación,que se mide en
unidades svedberg (1 S = 10−13 segundos). (4)
Centrifugación Diferencial o Pelleting

En este método, el tubo de la centrífuga es llenado inicialmente con una mezcla uniforme de la
solución de la muestra, a través de la centrifugación se obtiene una separación de dos fracciones:
Un pellet (sedimento) que contiene la partícula sedimentada y un sobrenadante con la fracción no
sedimentada de la solución. Un particular componente puede terminar en el sobrenadante o en el
pellet, o podría estar distribuido en ambas fracciones, dependiendo de su tamaño y/o de las
condiciones de centrifugación. (2)

El pellet es una mezcla de todos los componentes sedimentados y esta contaminado con cualquier
partícula no sedimentada que estuviera en el fondo de el tubo. Las dos fracciones son recuperadas
por decantación de la solución sobrenadante del pellet. El sobrenadante puede ser Re centrifugado
a altas velocidades para obtener una mayor purificación con la formación de nuevo pellet y
sobrenadante. El pellet puede ser Re suspendido en un pequeño volumen y Re centrifugado
dependiendo de lo que se desee separar. (2)

Otro método de separación es por gradiente de densidad, un método que es más complicado que
la centrifugación diferencial, pero tiene algunas ventajas: el método de gradiente de densidad
permite la completa separación de algunos o todos los componentes de la mezcla y también
permite que se puedan realizar mediciones analíticas. (2)

Hay dos métodos básicos de centrifugación por gradiente de densidad: La centrifugación zonal
y la centrifugación isopícnica o al equilibrio. (2)

Centrifugación Zonal

Cuando se coloca una pequeña cantidad de la disolución con las moléculas que se quieren
caracterizar sobre la superficie de un gradiente de densidad previamente formado a lo largo de un
tubo de centrifugación, en la superficie siempre hay una densidad menor que la existente en la
parte superior de el gradiente y cuando se centrifuga el tubo las moléculas de la capa superior
sedimentan a través de el gradiente. (2)

Si todas ellas tienen el mismo coeficiente de sedimentación sedimentarán en una estrecha franja,
sin embargo, si hay moléculas con distintos coeficientes de sedimentación, se separaran unas de
otras a medida que se produzca la centrifugación y finalmente los diferentes componentes se
resolverán en una serie de zonas o bandas, de ahí el nombre de centrifugación zonal. (2)

Una vez completada la centrifugación, se fracciona el contenido del tubo generalmente por
recolección de las gotas cuando se hace un orificio en el fondo del tubo y el goteo es lo
suficientemente lento para no producir turbulencias. Cada gota representa una lámina del tubo y
una fracción está representada por una o varias gotas. (2)
Centrifugación al Equilibrio

En la separación isopícnica las partículas son separadas en base a su densidad, el tamaño solo
afecta la velocidad con la que las partículas alcanzan su posición isopícnica. Estas separaciones
se llevan a cabo en un gradiente de densidad en el que las partículas se mueven hasta el punto en
el que su densidad es la misma que el medio. (2)

La técnica de centrifugación al equilibrio fue desarrollada por Matthew Meselson, Franklin Stahl
y Jerome Vinograd. En esta técnica la densidad del disolvente es casi la misma que la de la
molécula que se está estudiando. Esta técnica requiere un tercer componente (normalmente una
sal de cesio), de bajo peso molecular y elevada densidad. Cuando se centrifuga la disolución, las
sal se redistribuye y alcanza un equilibrio, formando, un gradiente de concentración que es menos
denso en la parte superior y más denso en el fondo del tubo obteniéndose como resultado un
gradiente de densidad. (2)

Las macromoléculas también sedimentan, pero el material en la parte superior del tubo se mueve
centrífugamente a través del gradiente, mientras que el mismo material en la parte baja del tubo
se mueve centrípetamente. Este movimiento continua hasta que las macromoléculas forman una
banda en una posición determinada del gradiente de concentración, posición en la que la densidad
de la macromolécula iguala a la de la disolución. La anchura de la banda está determinada por el
equilibrio entre la fuerza centrífuga (que tiende a estrechar la banda), la difusión (que tiende a
ensancharla) y el gradiente de densidad (un gradiente más pronunciado dará una banda más
estrecha). (2)

Como se mencionó anteriormente, la muestra se mezcla con la solución del gradiente y conforme
se lleva a cabo la centrifugación se genera el gradiente (gradiente autogenerado) a la vez que se
separan las partículas de la muestra. Sin embargo, la muestra puede ser colocada en la superficie
de un gradiente preformado de igual forma que en la centrifugación zonal. (2)
http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=837

http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Centrifugacion.pdf

http://laboratorio-clinico-612.blogspot.com/2012/06/centrifuga.html

https://prezi.com/dqzpexzzbyzw/tipos-de-centrifugas/